To compare ultrasound-based acoustic structure quantification (ASQ) with established non-invasive techniques for grading and staging fatty liver disease.

La stéatose hépatique non alcoolique (SHNA) est maintenant une des principales causes de cancer du foie. Cependant, les mécanismes physiopathologiques contribuant à son développement ou à la progression de la maladie sont peu connus. Il a été démontré que le niveau d’expression du coactivateur transcriptionnel PGC-1α est inversement proportionnel avec la sévérité de la stéatose hépatique le stress oxydatif et la résistance à l’insuline dans les foies de souris. Chez l’humain, on observe aussi une diminution de PGC-1α dans les foies de patients atteints de SHNA. De plus, il a été démontré que les souris avec une réduction de 50% des niveaux hépatique de PGC-1α mène à une sensibilité à l’insuline et à une tolérance au glucose altérée dans les tissus périphériques. Ces découvertes suggèrent qu’en plus d’être associés au développement de la SHNA, les niveaux hépatiques de PGC-1α altèrent l’expression de facteurs sécrétoires du foie afin d’influencer la régulation métabolique de tout le corps. Nous proposons qu’une réduction de l’expression de PGC-1α dans le foie influence les protéines sécrétées par le foie en situation de stress métabolique, révélant l’importance de PGC-1α dans la réponse adaptative du foie. L’analyse du sécrétome hépatique effectuée par spectrométrie de masse sur le milieu conditionné d’hépatocytes primaires a identifié SERPINA3N, une protéine sécrétée, dont les niveaux corrèlent avec les niveaux hépatiques de PGC-1α et sont influencés par la diète obésogène. Dans ce projet, les niveaux sanguins de cette protéine ont été quantifiés par western blot chez des souris mâles et femelles, sauvages ou hétérozygotes pour PGC-1α dans le foie et nourris avec une diète control ou riche en gras et en fructose. Nos résultats démontrent que les niveaux circulatoires de SERPINA3N augmentent avec la diète et corrèlent avec les niveaux hépatiques de PGC-1α de manière dépendante à la diète et le sexe. De plus, les niveaux sanguins de SERPINA3N diminuent avec la progression de la maladie. L’expression hépatique de SERPINA3N est grandement influencée par les niveaux de PGC-1α, mais indépendamment du facteur transcriptionnel NF-κB. Nous avons montré que les glucocorticoïdes augmentent les niveaux protéiques et circulatoires de SERPINA3N dans les hépatocytes primaires. De plus, cette augmentation par les glucocorticoïdes est influencée par les niveaux de PGC-1α. Ces résultats révèlent une nouvelle interaction entre PGC-1α et le récepteur des glucocorticoïdes sur l’expression hépatique et la sécrétion de SERPINA3N. Pour conclure, l’identification de protéines circulatoires régulées par PGC-1α nous aidera à mieux comprendre comment la perte d’expression de PGC-1α dans le foie affecte le métabolisme de tout le corps dans le contexte de la SHNA. / Non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD) is becoming a serious public health problem and is now one of the leading causes of liver cancer. Although NAFLD is known to be associated with obesity, insulin resistance, metabolic syndrome and type II diabetes, the mechanisms contributing to its development are not fully understood. It is shown that hepatic PGC-1α levels correlate negatively with NAFLD development, oxidative liver damage and hepatic insulin resistance in murine models. In humans, decrease PGC-1α expression in NAFLD and NASH patients. Moreover, liver-specific PGC-1α reduction in mice also disrupts glucose tolerance and insulin sensitivity in muscle and adipose tissue, likely due to altered secretion of hepatic hormones. These findings suggest that in addition to contributing to NAFLD development, the hepatic disruption of PGC-1α alters the liver secretome, thereby influencing the whole-body energy metabolism. We hypothesize that decreased expression of PGC-1α in the liver alters the expression of hepatokines under metabolic challenges, revealing a potential novel role for PGC-1α in the adaptive response of the liver. The hepatocyte-specific secretome was analyzed by mass spectrometry (iTRAQ) in conditioned media from primary hepatocytes. We identified SERPINA3N, a secreted protein whose secreted levels correlated with hepatic PGC-1α levels in a diet-dependent manner. This hepatokine was measured in serum from male, female, wildtype and liver-specific PGC-1α heterozygote mice fed chow or high-fat, high-fructose diet using western blot. SERPINA3N circulating levels increased with the western diet and correlated with hepatic PGC-1α levels in a diet and sex-dependent manner. Its serum levels decreased with the progression of the disease. The hepatic SERPINA3N expression was greatly influenced by PGC-1α levels independently of NF-κB transcription factor. We showed that glucocorticoids increased SERPINA3N protein and secreted levels in primary hepatocytes. This increase was influenced by PGC-1α levels, revealing a novel interaction of PGC-1α and the glucocorticoid receptor on SERPINA3N expression and secretion. In conclusion, this project reveals a novel impact of hepatic PGC-1α levels on the liver secretome during NAFLD development. This work will provide insights on the role of hepatic PGC-1α levels on the regulation of hepatokines and how it influences the whole-body energy homeostasis in a context of NAFLD.

Nonalcoholic fatty liver disease (NAFLD) has become one of the most common hepatic diseases worldwide, making the diagnosis and management of NAFLD an emerging public health issue. Theories associated with NAFLD surmise that inflammation may be the root cause, along with the complex interplay of other chronic conditions such as obesity, metabolic syndrome, diabetes, dyslipidemia, and cardiovascular disease (CVD). It is unknown if other inflammatory conditions such as rheumatoid arthritis (RA), along with the use of methotrexate (MTX), might confer increased risk for NAFLD. Longitudinal data collected from a retrospective cohort of 17,481 adult RA patients in the United States were used to determine the incidence and factors associated with the development of NAFLD using a noninvasive tool (Fibrosis-4 score). Results of the Kaplan Meier analysis showed that 31% of this cohort developed NAFLD, in about 7 years from baseline, with most having mild to moderate disease and only 1.4% with advanced disease. RA patients also had a prevalence of chronic conditions associated with NAFLD, as seen in the general population. In the Cox proportional hazard multivariate analysis, age (middle and elderly), hypertension, CVD, dyslipidemia, metabolic syndrome, exercise, use of MTX, and non-MTX antirheumatic drugs were independent predictors for the development of NAFLD. This research could improve early diagnosis of NAFLD using a novel noninvasive tool. Increase awareness of the prevalence and causes of NALFD inform clinical practice and management of the disease and influence policy about this chronic condition in patients with RA.

Spinal muscular atrophy (SMA) is a devastating recessive neurological disorder thought to be affecting primarily the motor neurons. As such, paralysis, motor weakness and death ensue. While SMA is most commonly seen in infants and children, it can span all ages. Its genetic etiology revolves around the homozygous deletion or mutation of the SMN1 gene, whose product (SMN protein) has critical and ubiquitous roles in mRNA splicing, amongst various other functions in mRNA metabolism. As such, SMN depletion in other non-neuronal cells type is likely to have physiological repercussions, and perhaps modulate the SMA phenotype. Herein, we identify the molecular pathways of atrophy in skeletal and cardiac muscle of two mouse models of SMA and their therapeutic modulation via the histone deacetylase inhibitor trichostatin A. We also identify dramatic changes in immune organs in mouse models of SMA, which could impact susceptibility to infections. Furthermore, we establish the presence of important defects in fatty acid homeostasis in the liver and plasma seen in both mouse models and SMA patients. Finally, we provide the first mild mouse model of SMA that reliably reproduces canonical features of SMA, permitting aging studies. This model presents with a prominent myopathic phenotype prior to motor neuron death, without extra-neuronal involvement during the course of its lifespan. Overall, our work shows multiple potentially clinically relevant defects in extra-neuronal organs, provides ways to abrogate them and provides a framework to study them over the course of aging.

Indiana University-Purdue University Indianapolis (IUPUI) / Non-alcoholic fatty liver disease and metabolic syndrome induced by high nutrient status have increasingly become a global health concern as it cause multiple complications. The mTOR complex is central in regulating anabolic reactions within cells under growth factors or under high nutrients stimulation. Constitutive and persistent activation of mTOR can impair cellular functions. In the first part of this study, we demonstrate a damping oscillation of mTOR activity during a long-term treatment of high fat diet. TFEB translocation and lysosomal enzyme activity also oscillate, but in an opposite direction. TFEB controls the lysosomal activity, autophagic degradation and lipid metabolism. Overexpression of wild type and mutant TFEB could inhibit NAFLD development in mice. In addition, TFEB location in nucleus inversely correlates with NAFLD severity in patients. mTOR activation under hypernutrition status suppresses TFEB translocation, inhibits lysosomal functions and autophagic degradation of lipid droplets. Inhibition of mTOR activity by rapamycin reverse the above phenotypes. Because mTOR activation also requires normal lysosomal function, the inhibition of TFEB by mTOR leads to decreased lysosomal function and mTOR downregulation. This negative feedback may explain the oscillation pattern of mTOR activation in long term high fat diet regimen and is a novel mechanism for inhibition of mTOR. In the second part of study, we report that Bid protein, previously known for its pro-apoptosis function in promoting mitochondrial permeability, plays an unexpected role in regulating fatty acid beta oxidation. Deletion of Bid in mice reprograms the body's response to hyper-nutrition caused by high fat diet, leading to the resistance to the development of obesity, liver steatosis and metabolic syndrome. These mice present a higher oxygen consumption, a lower respiratory quotient, and an increased beta-oxidation rate. Mechanistically, the high fat diet regimen triggers translocation of the full length Bid molecule to mitochondrial membrane. Genetic deletion of Bid also affects the stability of its binding protein, MTCH2 in the mitochondrial membrane. In summary, we describe in this study a mTOR-TFEB-lysosome feedback loop, which can regulate NAFLD development, and a novel Bid-mediated regulatory mechanism in beta-oxidation, which limits energy expenditure and promotes obesity development.

Indiana University-Purdue University Indianapolis (IUPUI) / Non-alcoholic steatohepatitis (NASH), which is characterized by the induction of hepatocellular death and inflammation, is associated with the activation of cellular stress pathways such as the Unfolded Protein Response (UPR), an adaptive response to disruptions in endoplasmic reticulum (ER) homeostasis. Because the role of the UPR in the progression of liver disease is not well understood, we established an in vitro model to evaluate the role of the UPR in NASH and translated results to clarify disease progression in human liver biopsy samples. Treating HepG2 cells and primary human hepatocytes with saturated, but not unsaturated free fatty acids (FFAs), at physiologic concentrations induced hepatotoxicity by inhibiting autophagic flux. Saturated FFA treatment activated the UPR, including the transcription factors CHOP (GADD153/DDIT3) and NF-κB, leading to increased expression and secretion of cytokines such as TNFα and IL-8 that contributed to hepatic cell death and inflammation. Depletion of either CHOP or the RELA subunit of NF-κB in hepatocytes alleviated autophagy and cytokine secretion, resulting in enhanced cell viability and lowered inflammatory responses during exposure to saturated FFAs. We carried out next generation sequencing on cells deleted for either CHOP or RELA and identified IBTKα as a novel UPR member directly regulated by CHOP and NF-κB. In response to saturated FFAs, loss of IBTKα increased cell survival through lowered phagophore formation and reduced cytokine secretion. We also identified binding partners of IBTKα by immunoprecipitation and LC/MS, indicating that that IBTKα is part of a protein complex which functions at ER exit sites to facilitate initiation of autophagy and protein secretion. Furthermore, we discovered that CHOP and RELA coordinately regulate proteasome activity through NRF2 as an adaptive response to an inhibition of autophagic flux following palmitate exposure. To validate our model, we utilized human liver biopsy samples and demonstrated up-regulation of the UPR coincident with accumulation of autophagy markers, as well as secretion of cytokines IL 8 and TNFα in serum of NASH patients. Our study provides a mechanistic understanding of the roles of the UPR and autophagy in regulating saturated FFA induced hepatotoxicity at the cellular level.

Indiana University-Purdue University Indianapolis (IUPUI) / Disturbances in membrane composition and protein folding in the endoplasmic reticulum (ER) trigger the unfolded protein response (UPR). Three UPR sensory proteins, PERK (PEK/EIF2AK3), IRE1, and ATF6 are each activated by ER stress. PERK phosphorylation of the alpha subunit of eIF2 represses global protein synthesis, lowering influx of nascent polypeptides into the stressed ER, coincident with the preferential translation of ATF4 (CREB2). Results from cultured cells demonstrate that ATF4 induces transcriptional expression of genes directed by the PERK arm of the UPR, including genes involved in amino acid metabolism, resistance to oxidative stress, and the proapoptotic transcription factor CHOP (GADD153/DDIT3). In this study, we characterized two ATF4 knockout mouse models and show in liver exposed to ER stress that ATF4 is not required for CHOP expression, but rather ATF6 is a primary inducer. RNA-sequence analysis indicated that ATF4 was responsible for a small portion of the PERK-dependent genes in the UPR. This smaller than expected subset of gene expression lends itself to the relevance of UPR crosstalk, with ATF6, XBP1, and CHOP being capable of upregulating UPR genes in the absence of ATF4. RNA-sequence analysis also revealed a requirement for expression of ATF4 for expression of a comparable number of genes basally, including those involved in oxidative stress response and cholesterol metabolism. Consistent with this pattern of gene expression, loss of ATF4 in our mouse model resulted in enhanced oxidative damage and increased free cholesterol in liver under stress accompanied by lowered cholesterol in sera. Taken together, this study highlights both an expansion of the role of ATF4 in transcriptional regulation of genes involved in metabolism in the basal state and a more specialized role during ER stress. These findings are important for understanding the variances of the UPR signaling between cell culture and in vivo and for a greater understanding of all the roles ATF4 plays within the cell.

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Dynamik histomorphologischer Veränderungen in der Leber von Milchkühen im peripartalen Zeitraum Einleitung Das Lipomobilisationssydrom verursacht bei Milchkühen vielfältige Produktionskrankheiten und hohe ökonomische Verluste. Aus der Humanmedizin ist bekannt, dass chronische Leberverfettungen zu Steatohepatitiden und im Weiteren zu Leberzirrhosen führen können. Ziel der Untersuchung Ziel der Untersuchung war es, Schädigungen des Lebergewebes unter Betrachtung der Dynamik verschiedener Einzelmerkmale (Fett- und Glykogeneinlagerung, Hepatitis, Fibrose) histopathologisch vergleichend darzustellen und dabei auf Parallelen zur nichtalkoholischen Steatohepatitis (NASH) des Menschen zu untersuchen. Weiterhin sollen Einflüsse des Temperatur-Feuchtigkeits-Indexes (THI) auf die Dynamik histomorphologischer Leberveränderungen untersucht werden. Material und Methoden In die Studie wurden 80 Deutsch Holstein Kühe einbezogen. Zwei Gruppen (je n = 20) erhielten (5 oder 10 ml / 100 kg Körpergewicht) Butaphosphan und Cyanocobalamin (BCC) und eine Gruppe (n = 40) ein Placebo. Leberbioptate wurden 14 Tage (d) ante partum (a.p.) sowie 7, 28, 42 d post partum (p.p.) entnommen. Sie wurden mittels vier verschiedener Verfahren (Hämalaun-Eosin, Sudan III, Periodsäure-Schiff-Reaktion und Pikrosiriusrot) aufgearbeitet und auf Fett- und Glykogeneinlagerungen sowie degenerative, entzündliche, fibrotische und proliferative Lebergewebsveränderungen semiquantitativ untersucht. In der statistischen Auswertung wurden Effekte aus den Leberbiopsiezeitpunkten, der Laktationsanzahl, der metaphylaktischen BCC Behandlung, des THIs und der Metabotypen (Massenspektrometrie von Leberproben) ausgewertet. Mittels einer Metabolomanalyse wurden drei verschiedene Metabotypen identifiziert. Ergebnisse Bereits in den ersten Wochen vor der Abkalbung wiesen die Kühe 37 % ggr. bis mgr. Fetteinlagerungen in der Leber auf. Bis zur ersten Woche p.p. konnte ein deutlicher Anstieg des Leberfettgehaltes beobachtet werden (66 % mgr. bis hgr.), der bis einschließlich der sechsten Woche p.p. wieder abfiel (ca. 25 % mgr. bis hgr.). Der Grad der Leberverfettung korrelierte positiv mit dem Anteil an Leberzelldegenerationen und negativ mit den Glykogeneinlagerungen. Trotz hgr. Leberverfettungen kam es zu keinem Zeitpunkt zu einer vollständigen Glykogendepletion in den Leberzellen. Bei 39 % der Tiere wurde während der gesamten Transitperiode eine mgr. bis hgr. lymphozytäre Hepatitis nachgewiesen. Kühe ab der fünften Laktation wiesen signifikant häufiger perisinusoidale Fibrosen auf. In keinem Fall wurden hgr. Fibrosen diagnostiziert. Kühe einer der drei Metabotypengruppen wiesen eine höhere Chance für vermehrte Fettinfiltrationen, geringere Glykogeneinlagerungen und vermehrte degenerative, entzündlich-fibrotische sowie proliferative Leberparenchymveränderungen auf. Die Auswertung der Fütterungsdaten lässt einen Zusammenhang zwischen der Fütterung von Grassilage mit einer verminderten Qualität (hoher Rohascheanteil, erhebliche Schwankungen in Trockensubstanz- und Nährstoffgehalten), dem Lebermetabolom und histomorphologischen Veränderungen der Kühe dieser Metabotypengruppe vermuten. Für die Behandlung mit BCC konnten keine signifikanten Effekte festgestellt werden. Der THI hatte einen positiven Einfluss auf den Grad der Fetteinlagerung und die Zelldegenerationen sowie einen negativen Einfluss auf den Grad der Glykogeneinlagerung. Schlussfolgerungen Während des peripartalen Zeitraums kam es in der Leber von Milchkühen zur Fettakkumulationen und Glykogendepletionen sowie zu Hepatitiden und Leberzelldegenerationen. Letztere sind Hinweise einer Steatohepatitis, ähnlich einer NASH des Menschen. Vor allem bei älteren Kühen waren perisinusoidale Fibrosen nachweisbar, die eine Vorstufe von Leberfibrosen sein können und mit höheren Milchleistungen sowie dem damit verbundenen erhöhten Blutfluss in der Leber zusammenhängen könnten. Die Ergebnisse weisen Zusammenhänge zwischen einem ausgeprägteren Körperkonditionsverlust, vermehrten Fettinfiltrationen, geringeren Glykogeneinlagerungen sowie wechselseitige Beziehungen zwischen degenerativen, entzündlichen, fibrotischen und proliferativen Leberveränderungen auf. Als ein ursächlicher Faktor wird eine verminderte Grassilagequalität vermutet. Durch den THI werden Fett- und Glykogeneinlagerungen sowie Leberzelldegenerationen beeinflusst.:1. Einleitung 2. Literaturübersicht 2.1 Die Funktionen der Leber bei Rindern 2.1.1 Allgemein 2.1.2 „First pass effect“ 2.1.3 Entgiftung 2.1.4 Leber als Stoffwechselorgan 2.1.4.1 Allgemein 2.1.4.2 Aminosäuren- und Proteinstoffwechsel 2.1.4.2.1 Bedeutung 2.1.4.2.2 Proteinsynthese 2.1.4.2.3 Aminosäuresynthese und -abbau 2.1.4.2.4 Harnstoffsynthese 2.1.4.3 Fettstoffwechsel 2.1.4.3.1 Bedeutung 2.1.4.3.2 Cholesterolbiosynthese 2.1.4.3.3 Fettsäuresynthese 2.1.4.3.4 Fettsäureoxidation 2.1.4.3.5 Ketogenese 2.1.4.4 Kohlenhydratstoffwechsel 2.1.4.4.1 Bedeutung 2.1.4.4.2 Gluconeogenese 2.1.4.4.3 Glykogensynthese 2.1.4.4.4 Glykogenolyse 2.1.4.4.5 Glykolyse 2.1.5 Leber als Speicherorgan 2.1.5.1 Allgemein 2.1.5.2 Glykogen 2.1.5.2.1 Allgemein 2.1.5.2.2 Bedeutung 2.1.5.2.3 Einflussfaktoren 2.1.5.3 Fett 2.1.5.3.1 Allgemein 2.1.5.3.2 Bedeutung 2.1.5.3.3 Einflussfaktoren 2.2 Das Lipomobilisationssyndrom der Milchkuh und die nichtalkoholische Leberverfettung des Menschen 2.2.1 Lipomobilisationssyndrom der Milchkuh 2.2.1.1 Allgemein 2.2.1.2 Pathogenese 2.2.1.3 Bedeutung und Epidemiologie 2.2.2 Nichtalkoholische Leberverfettung des Menschen 2.2.2.1 Allgemein 2.2.2.2 Pathogenese 2.2.2.3 Bedeutung und Epidemiologie 2.2.3 Hinweise einer nichtalkoholischen Leberverfettung bei Milchkühen 2.3 Die Lichtmikroskopie zur histologischen Beurteilung von Lebergewebsveränderungen 2.3.1 Besonderheiten 2.3.2 Diagnostische Beurteilung von Lebergewebe 2.3.3 Bisherige histologische Untersuchungen der Leber von Rindern und Forschungsbedarf 2.4 Zusammenfassende Schlussfolgerungen aus dem Literaturstudium und Arbeitshypothesen 3. Material und Methoden 3.1 Studienprotokoll 3.2 Klimadaten 3.3 Entnahme der Leberbioptate 3.4 Aufbereitung der Leberbioptate für die histologische Untersuchung 3.5 Histopathologische Befundung 3.5.1 Durchführung der histopathologischen Untersuchung 3.5.2 Beurteilung der Fetteinlagerung 3.5.3 Beurteilung der Glykogeneinlagerung 3.5.4 Beurteilung der degenerativen, entzündlichen, fibrotischen und proliferativen Veränderungen 3.6 Ergänzende Statistik (Temperatur-Feuchtigkeits-Index) 4. Publikation 5. Weitere Ergebnisse 5.1 Vorkommen von Glykogeneinlagerungen bei gleichzeitiger Leberverfettung 5.2 Dynamik der Fett- und Glykogeneinlagerung im Leberläppchen 5.3 Dynamik der Hepatitis im Untersuchungszeitraum 5.4 Dynamik der Fibrose im Untersuchungszeitraum 5.5 Fallbeschreibungen von Einzeltieren mit entzündlichen, fibrotischen und proliferativen Besonderheiten 5.6 Temperatur-Feuchtigkeits-Index Einflüsse 6. Diskussion 6.1 Der Temperatur-Feuchtigkeits-Index und sein Einfluss auf die Histomorphologie 6.2 Periportale Fettakkumulation und Glykogendepletion 6.3 Periportales Auftreten von Hepatitis und Fibrose 6.4 Einzelfälle mit entzündlichen, fibrotischen und proliferativen Veränderungen im Lebergewebe und deren mögliche Ursachen 6.5 Vergleich zwischen Lipomobilisationssyndrom der Milchkuh und der nichtalkoholischen Steatohepatitis des Menschen 6.5.1 Vorkommen von Leberverfettung 6.5.2 Vorkommen von Hepatitis 6.5.3 Vorkommen von Leberzelldegeneration 6.5.4 Vorkommen von Leberfibrose 6.5.5 Unterscheidung der Ursachen und Folgen einer Leberverfettung bei Mensch und Rind 6.6 Klinische Relevanz der histopathologischen Leberveränderungen 7. Zusammenfassung 8. Summary 9. Literaturverzeichnis 10. Danksagung 11. Anhang 11.1 Übersicht histopathologischer Untersuchungen der Leber von Rindern 11.2 Färbeanleitungen 11.2.1 Hämalaun-Eosin-Färbung 11.2.1.1 Verfahrensschritte 11.2.1.2 Benötigte Reagenzien 11.2.1.3 Ergebnis 11.2.2 Sudan-III-Hämalaun-Färbung 11.2.2.1 Verfahrensschritte 11.2.2.2 Benötigte Reagenzien 11.2.2.3 Ergebnis 11.2.3 Periodsäure-Schiff-Reaktion und Amylase Reaktion 11.2.3.1 Verfahrensschritte 11.2.3.2 Benötigte Reagenzien 11.2.3.3 Ergebnis 11.2.3.4 Amylase-Kontrollreaktion 11.2.3.4.1 Methode 11.2.3.4.2 Ergebnis 11.2.4 Pikrosiriusrot-Färbung 11.2.4.1 Verfahrensschritte 11.2.4.2 Benötigte Reagenzien 11.2.4.3 Ergebnis 11.3 Untersuchungsprotokolle / Dynamic histomorphological changes of the liver parenchyma during the transition period in dairy cows Introduction Lipomobilisation sydrome is associated with multiple production diseases in dairy cows and causes substantial economic losses. In people, chronic hepatic lipidosis can lead to steatohepatitis and subsequently liver cirrhosis. Objectives The main goal of this study was to investigate the histopathological changes in the liver parenchyma in terms of hepatitis, fibrosis and fat and glycogen deposits in dairy cows. Additionally, the histomorphological lesions in dairy cows with lipomobilisation syndrome were compared with those seen in people with non-alcoholic steatohepatitis (NASH). The effects of the temperature-humidity index (THI) on the dynamics of histomorphological hepatic changes were also evaluated. Material and Methods A total of 80 German Holstein cows were divided into three groups: the first group consisted of 20 cows that received 5 ml / 100 kg of butaphosphan and cyanocobalamin (BCC); the second group consisted of 20 cows that received 10 ml / 100 kg of BCC; and the third group consisted of 40 that cows received a placebo. Liver biopsy was carried out 14 days antepartum (a.p.) and 7, 28 and 42 days postpartum (p.p.). The liver tissue was processed routinely and stained with haematoxylin and eosin, sudan III, periodic acid-Schiff and picrosirius red stains. The histological sections were assessed semiquantitatively for fat and glycogen content and for degenerative, inflammatory, fibrotic and proliferative changes. The effects of time of biopsy, lactation number, metaphylactic BCC treatment, THI and metabotype (mass spectrometry of liver tissue) were examined statistically. A metabolom analysis was used to identify three metabotypes. Results Mild to moderate fat infiltration was seen in the liver of 37 % of cows in the last two weeks a.p. The degree of fat infiltration increased considerably from two weeks a.p. until the end of the first week when it was moderate to severe in 66 % of the cows. It then decreased again until the end of the study period when it was moderate to severe in 25 % of the cows. Lipidosis was significantly and positively correlated with the severity of hepatocyte degeneration and negatively correlated with the degree of glycogen deposition. Complete glycogen depletion of hepatocytes was not observed in cows even in the presence of severe hepatic lipidosis. Moderate to severe lymphocytic hepatitis was seen in 39 % of cows throughout the study period, and cows with lactation numbers five or greater had perisinusoidal fibrosis significantly more often than younger cows. Severe fibrosis of the liver did not occur. Cows of one of the three metabotypes had an increased risk of fatty infiltration of the liver, lower glycogen storage and degenerative, inflammatory, fibrotic, and proliferative changes of the liver parenchyma. Based on ration analysis, feeding of poor-quality grass silage (high ash content, fluctuations in dry matter and nutrient content) appeared to be associated with the liver metabolom and histomorphological liver changes. Treatment with BCC had no significant effects on any of the variables measured. The THI had a positive effect on the degree of lipid deposition and hepatocyte degeneration and a negative effect on the degree of glycogen deposition. Conclusion During the transition period, the liver of dairy cows is characterised by fat accumulation and glycogen depletion and histological signs of hepatitis and hepatocyte degeneration. The latter suggests steatohepatitis analogous to NASH in people. Perisinusoidal fibrosis was seen particularly in older cows and may represent an early stage of fibrosis of the liver. It is conceivable that these changes are associated with increased perfusion of the liver in association with increased milk production. There were correlations between pronounced loss of body condition, fatty infiltration of the liver and lower glycogen storage and degenerative, inflammatory, fibrotic, and proliferative changes of the liver parenchyma. These findings suggest that poor-quality grass silage was causative factor. Changes in the THI may also affect fat and glycogen deposition and liver cell degeneration in the liver.:1. Einleitung 2. Literaturübersicht 2.1 Die Funktionen der Leber bei Rindern 2.1.1 Allgemein 2.1.2 „First pass effect“ 2.1.3 Entgiftung 2.1.4 Leber als Stoffwechselorgan 2.1.4.1 Allgemein 2.1.4.2 Aminosäuren- und Proteinstoffwechsel 2.1.4.2.1 Bedeutung 2.1.4.2.2 Proteinsynthese 2.1.4.2.3 Aminosäuresynthese und -abbau 2.1.4.2.4 Harnstoffsynthese 2.1.4.3 Fettstoffwechsel 2.1.4.3.1 Bedeutung 2.1.4.3.2 Cholesterolbiosynthese 2.1.4.3.3 Fettsäuresynthese 2.1.4.3.4 Fettsäureoxidation 2.1.4.3.5 Ketogenese 2.1.4.4 Kohlenhydratstoffwechsel 2.1.4.4.1 Bedeutung 2.1.4.4.2 Gluconeogenese 2.1.4.4.3 Glykogensynthese 2.1.4.4.4 Glykogenolyse 2.1.4.4.5 Glykolyse 2.1.5 Leber als Speicherorgan 2.1.5.1 Allgemein 2.1.5.2 Glykogen 2.1.5.2.1 Allgemein 2.1.5.2.2 Bedeutung 2.1.5.2.3 Einflussfaktoren 2.1.5.3 Fett 2.1.5.3.1 Allgemein 2.1.5.3.2 Bedeutung 2.1.5.3.3 Einflussfaktoren 2.2 Das Lipomobilisationssyndrom der Milchkuh und die nichtalkoholische Leberverfettung des Menschen 2.2.1 Lipomobilisationssyndrom der Milchkuh 2.2.1.1 Allgemein 2.2.1.2 Pathogenese 2.2.1.3 Bedeutung und Epidemiologie 2.2.2 Nichtalkoholische Leberverfettung des Menschen 2.2.2.1 Allgemein 2.2.2.2 Pathogenese 2.2.2.3 Bedeutung und Epidemiologie 2.2.3 Hinweise einer nichtalkoholischen Leberverfettung bei Milchkühen 2.3 Die Lichtmikroskopie zur histologischen Beurteilung von Lebergewebsveränderungen 2.3.1 Besonderheiten 2.3.2 Diagnostische Beurteilung von Lebergewebe 2.3.3 Bisherige histologische Untersuchungen der Leber von Rindern und Forschungsbedarf 2.4 Zusammenfassende Schlussfolgerungen aus dem Literaturstudium und Arbeitshypothesen 3. Material und Methoden 3.1 Studienprotokoll 3.2 Klimadaten 3.3 Entnahme der Leberbioptate 3.4 Aufbereitung der Leberbioptate für die histologische Untersuchung 3.5 Histopathologische Befundung 3.5.1 Durchführung der histopathologischen Untersuchung 3.5.2 Beurteilung der Fetteinlagerung 3.5.3 Beurteilung der Glykogeneinlagerung 3.5.4 Beurteilung der degenerativen, entzündlichen, fibrotischen und proliferativen Veränderungen 3.6 Ergänzende Statistik (Temperatur-Feuchtigkeits-Index) 4. Publikation 5. Weitere Ergebnisse 5.1 Vorkommen von Glykogeneinlagerungen bei gleichzeitiger Leberverfettung 5.2 Dynamik der Fett- und Glykogeneinlagerung im Leberläppchen 5.3 Dynamik der Hepatitis im Untersuchungszeitraum 5.4 Dynamik der Fibrose im Untersuchungszeitraum 5.5 Fallbeschreibungen von Einzeltieren mit entzündlichen, fibrotischen und proliferativen Besonderheiten 5.6 Temperatur-Feuchtigkeits-Index Einflüsse 6. Diskussion 6.1 Der Temperatur-Feuchtigkeits-Index und sein Einfluss auf die Histomorphologie 6.2 Periportale Fettakkumulation und Glykogendepletion 6.3 Periportales Auftreten von Hepatitis und Fibrose 6.4 Einzelfälle mit entzündlichen, fibrotischen und proliferativen Veränderungen im Lebergewebe und deren mögliche Ursachen 6.5 Vergleich zwischen Lipomobilisationssyndrom der Milchkuh und der nichtalkoholischen Steatohepatitis des Menschen 6.5.1 Vorkommen von Leberverfettung 6.5.2 Vorkommen von Hepatitis 6.5.3 Vorkommen von Leberzelldegeneration 6.5.4 Vorkommen von Leberfibrose 6.5.5 Unterscheidung der Ursachen und Folgen einer Leberverfettung bei Mensch und Rind 6.6 Klinische Relevanz der histopathologischen Leberveränderungen 7. Zusammenfassung 8. Summary 9. Literaturverzeichnis 10. Danksagung 11. Anhang 11.1 Übersicht histopathologischer Untersuchungen der Leber von Rindern 11.2 Färbeanleitungen 11.2.1 Hämalaun-Eosin-Färbung 11.2.1.1 Verfahrensschritte 11.2.1.2 Benötigte Reagenzien 11.2.1.3 Ergebnis 11.2.2 Sudan-III-Hämalaun-Färbung 11.2.2.1 Verfahrensschritte 11.2.2.2 Benötigte Reagenzien 11.2.2.3 Ergebnis 11.2.3 Periodsäure-Schiff-Reaktion und Amylase Reaktion 11.2.3.1 Verfahrensschritte 11.2.3.2 Benötigte Reagenzien 11.2.3.3 Ergebnis 11.2.3.4 Amylase-Kontrollreaktion 11.2.3.4.1 Methode 11.2.3.4.2 Ergebnis 11.2.4 Pikrosiriusrot-Färbung 11.2.4.1 Verfahrensschritte 11.2.4.2 Benötigte Reagenzien 11.2.4.3 Ergebnis 11.3 Untersuchungsprotokolle