Orientador: Frederico Ozanam Papa / Banca: Fernanda da Cruz Landim Alvarenga / Banca: Julio Cesar Ferraz Jacob / Resumo: A colheita de espermatozóides da cauda do epidídimo e sua criopreservação representam um grande avanço biotecnológico na equinocultura, e pode ser a última chance de preservação do material genético de garanhões após sua morte inesperada ou lesões que impossibilitem a cobertura ou colheita de sêmen. Os objetivos dessa pesquisa foram comparar a efetividade de dois diluidores utilizados para a recuperação dos espermatozóides epididimários em relação aos índices de congelabilidade determinados laboratorialmente (Experimento I) e as taxas de concepção proporcionadas por cada metodologia ao utilizar baixa dose inseminante (Experimento II). No Experimento I foram utilizados 58 testículos, o ducto epididimário de um testículo de cada garanhão foi lavado com o diluidor sem pentoxifilina-Botu-Sêmen®1 (Controle) e o ducto epididimário do testículo contralateral, com o diluidor contendo 7,18 mM de pentoxifilina-Botu-Turbo®2 (PTX). No Experimento II, foi utilizado um "pool de espermatozóides" dos testículos de dois garanhões. As amostras foram congeladas e direcionadas às inseminações artificiais em diferentes doses inseminantes, formando os seguintes grupos: 800x106 espermatozóides recuperados com o diluidor sem pentoxifilina (800 Controle), 100x106 espermatozóides recuperados com diluidor sem pentoxifilina (100 Controle) e 100x106 espermatozóides recuperados com o diluidor com pentoxifilina (100 PTX). O índice de concepção para as éguas inseminadas nos grupos 800 Controle, 100 Controle e 100 PTX foi de 68% (11/16), 31,25% (5/16) e 50% (8/16), respectivamente. Frente aos resultados obtidos, conclui-se inseminações artificiais com apenas 100x106 espermatozóides colhidos com o meio diluidor contendo pentoxifilina garantem índices aceitáveis de concepção e maximiza o uso de espermatozóides epididimários congelados / Abstract: The recovery of spermatozoa from epididymal cauda and its cryopreservation represents a great technological advance, since it is the last possibility to preserve genetic material from dead or deceased valuable males. The aims of this study were to compare the effectiveness of two extenders used for recovery of epididymal sperm in relation to its freezability (Experiment I) and conception rates provided by each methodology using a low insemination dose (Experiment II). In Experiment I, 58 testis were used, epididymal cauda of each stallion were separated and flushed with a skim milk-extender either without (Botu-Sêmen®; Control Group) or with 7,18 mM of pentoxifylline (Botu-Turbo®; PTX Group) and then frozen. In Experiment II, a "pool" of epididymal sperm from 2 stallions was used. The samples were frozen and artificial insemination was performed using different insemination doses, comprising the following groups: 800x106 sperm recovered without PTX (800 Control); 100x106 sperm recovered without PTX (100 Control) and 100x106 sperm recovered with PTX (100 PTX). The conception rates were 68% (11/16), 31.25% (5/16) e 50% (8/16) for 800 Control, 100 Control and 100 PTX group, respectively. Based in these results, it was possible to conclude that artificial inseminations with 100x106 sperm recovered with PTX guarantee acceptable conception rates and maximize the use of frozen equine epididymal sperm / Mestre

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:44Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013Bitstream added on 2014-08-13T18:00:48Z : No. of bitstreams: 1 000753355_20151216.pdf: 1415600 bytes, checksum: 54b033a2fd58f46d8099989bc9d184a2 (MD5) Bitstreams deleted on 2015-12-18T13:57:54Z: 000753355_20151216.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2015-12-18T13:58:34Z : No. of bitstreams: 1 000753355.pdf: 2526582 bytes, checksum: bdcccbcc43d606f2f47250af771db012 (MD5) / A bupropiona é um antidepressivo amplamente utilizado no tratamento da cessação tabágica que atua inibindo a recaptura neuronal de dopamina (DA) e noradrenalina (NE) com pouco efeito na recaptação da serotonina. Estudos prévios demonstraram que o tratamento com sibutramina, um bloqueador da recaptura de NE que age aumentado disponibilidade desta monoamina na fenda sináptica, influenciou a qualidade espermática diminuindo a fertilidade de ratos machos submetidos ao tratamento com este fármaco. A bupropiona possui ação sobre algumas funções sexuais como a ejaculação e a excitação, no entanto, não são encontradas na literatura informações sobre a influência desta droga na qualidade espermática de humanos ou de modelos animais. Nesse contexto, o presente trabalho tem como objetivo investigar os efeitos da administração de bupropiona sobre o comportamento sexual, parâmetros espermáticos e fertilidade de ratos machos e sobre a reatividade farmacológica do ducto epididimário isolado. Para tanto, 27 ratos machos (90 dias) foram aleatoriamente alocados em três grupos experimentais que receberam 15 mg/kg de bupropiona (BPP15, n=9), 30 mg/kg de bupropion (BPP30, n=9) e água destilada (veiculo, VEH, n=9) via oral durante 30 dias consecutivos. Ao final do tratamento os animais foram eutanaziados e tiveram seus órgãos reprodutores (testículos, epidídimos, próstata, vesícula seminal cheia e vazia) pesados. Os níveis séricos de testosterona, hormônio luteinizante e hormônio folículo estimulante foram determinados por radioimunoensaio e os testículos e epidídimos direitos foram coletados e processados para contagem espermática, determinação da produção diária de espermatozoides e determinação do tempo de transito espermático pela cabeça/corpo e cauda epididimária. Além disso, os espermatozoides da cauda do epidídimo direito foram utilizados para análise da motilidade e morfologia espermática. Em uma ... / Bupropion is a dopamine and norepinephrine reuptake inhibitor with lower effect on the serotonine reuptake widely used as smoking cessation and antidepressant drug. Previously studies showed that the treatment with the norepinephrine uptake blocker sibutramine, that acts increasing the level of this monoamine at the synaptic cleft impaired the sperm quality and fertility of the animals treated with this drug. Bupropion influences some sexual functions as ejaculation and arousal however, to our knowledge, there is no study investigating the effects of bupropion on human or animals model sperm quality. In this context, the present study investigated the effects of bupropion on sexual behavior, sperm parameters and fertility of male rats as well as its influence on epididymal duct contraction in vitro. For this, 27 male rats (90 days) were randomly allocated into three experimental groups that received 15 mg/kg of bupropion (BPP15, n=9), 30 mg/kg of bupropion (BPP30) and distillate water (vehicle, VEH, n=9) orally during 30 days. At the end of the treatment the animals were killed and his reproductive organs (testis, epididymis, prostate, full and empty seminal vesicle) were weighted. The levels of testosterone, luteinizing hormone and follicle stimulating hormone serum were determinate by radioimmunoassay and the right testis and epididymis were collected and processed to sperm count, daily sperm production and determination of sperm transit time trough epididymis. Furthermore, spermatozoa collected by the right epididymal cauda were used to analysis of sperm motility and morphology. In a second stage of this study 30 animals (n=10/experimental group), allocated and treated as describe previously, were used to analysis of male sexual behavior and fertility after natural matting. At the least stage of the study 18 animals (n=6/experimental group) were used to evaluating the effects of the treatment with ...

Made available in DSpace on 2016-08-29T14:10:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_2474_.pdf: 830865 bytes, checksum: bc60596eff607a77fc4b0a9357d6193d (MD5) Previous issue date: 2009-05-28 / Os papéis sociais e afetivos desempenhados pelos integrantes da família são temas que têm sido discutidos nas diversas áreas das ciências humanas, inclusive na Psicologia. Porém parece existir uma tendência a dar enfoque nos aspectos da maternidade, da paternidade, ou até mesmo em outras dinâmicas internas, ao passo que o papel estruturador que o filho apresenta na família parece ser pouco aprofundado. Nesse sentido, o presente estudo buscou compreender, por meio do estudo da vivência da fecundidade no ambiente familiar durante o século XX, o papel que o filho apresentou e vem apresentando nas famílias brasileiras. Procurou-se também estudar as práticas de criação de filhos vigentes no século XX; relacionar a fecundidade às questões de gênero e de conjugalidade; verificar as práticas de controle de natalidade e de planejamento familiar assumidas no decorrer do século XX, o uso e aceitação delas; buscando, assim, entender em que posição os filhos se encontram na organização familiar. Para tanto, foi feito um estudo intergeracional, comparando três gerações de seis famílias diferentes, totalizando dezoito participantes. Houve distinção de gênero para que comparações nesse sentido fossem realizadas. Assim, foram convidados a participarem desta pesquisa, três trios de mulheres filhas, mães e avós e três trios de homens filhos, pais e avôs, sendo estas tríades constituídas por pessoas de uma mesma família. O instrumento utilizado na coleta de dados foi uma entrevista individual semi-padronizada para que os dados fossem coletados em profundidade. Foram construídas narrativas individuais a partir das unidades de significado que interessavam ao estudo diagnosticadas no discurso dos participantes. A análise dos dados foi feita de forma qualitativa com base nestas narrativas e buscando fazer comparações entre as gerações, para que se chegasse ao entendimento da experiência e dos significados vivenciados pela família brasileira quanto à fecundidade ao longo do século XX. Os resultados mostraram que o filho permanece como essencial à constituição familiar, mesmo que isto se dê de formas diferentes nas diversas gerações. O modelo de família nuclear ainda é o tomado como referência e a família tem grande valor social. Porém, verificaram-se mudanças expressivas nas práticas de criação de filhos, nas relações de gênero e conjugalidade, no uso da contracepção e no planejamento familiar. Todos estes elementos foram estudados em relação à história do século XX, o que permitiu a confirmação de que as práticas familiares afetam e são afetadas pelas circunstâncias sociais em que estão inseridas.

Submitted by MARCOS HENRIQUE COLOMBO PEREIRA null (marcoshpereira@hotmail.com) on 2016-01-22T17:38:21Z No. of bitstreams: 1 Tese final com ficha.pdf: 458776 bytes, checksum: f3a256e391692425ab75175c2b86546a (MD5) / Approved for entry into archive by Juliano Benedito Ferreira (julianoferreira@reitoria.unesp.br) on 2016-01-25T16:21:26Z (GMT) No. of bitstreams: 1 pereira_mhc_dr_botu.pdf: 458776 bytes, checksum: f3a256e391692425ab75175c2b86546a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-01-25T16:21:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 pereira_mhc_dr_botu.pdf: 458776 bytes, checksum: f3a256e391692425ab75175c2b86546a (MD5) Previous issue date: 2016-01-21 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Study 01- Our hypothesis was that fertility could be increased in a timed AI (TAI) protocol based on estradiol (E2) and progesterone (P4) by combining GnRH with E2-benzoate at the start of the protocol to increase circulating P4 concentration during preovulatory follicle development and by using two prostaglandin (PGF) treatments at the end to decrease circulating P4 concentration near TAI. Lactating Holstein cows (n = 1,808) were randomly assigned during the cool or hot seasons of the year to receive TAI (d0) following one of three treatments: I. Control: CIDR + 2 mg of E2-benzoate on d -11, PGF on d -4, CIDR withdrawal + 1.0 mg of E2-cypionate on d -2, and TAI on d 0; II. 2PGF: Identical to Control protocol with addition of a second PGF treatment on d -2; III. GnRH: Identical to 2PGF protocol with addition of 100 μg GnRH treatment on d -11. Pregnancy diagnoses were performed d32 and d60 after TAI. The GnRH protocol increased percentage of cows with CL (Control = 56.9%; 2PGF = 55.8%; GnRH = 70.5%) and circulating P4 concentration at PGF (Control = 3.28 ± 0.22; 2PGF = 3.35 ± 0.22; GnRH = 3.70 ± 0.21 ng/mL), compared to Control and 2PGF protocols. The positive effects of GnRH treatment on P/AI were only detected during the cool season (GnRH = 50.9%; 2PGF = 44.2%; Control = 41.0%) and not during the hot season. In addition, the effect of GnRH was only observed in cows with low circulating P4 concentration (<3ng/mL) at the start of the protocol and not in cows that began the protocol with high P4. Further, there was an interaction for presence of CL at PGF with follicle diameter such that cows with a CL at PGF had greater P/AI if they ovulated larger rather than smaller follicles near TAI.Season had major effects on many reproductive measures with cool season greater than hot season in percentage of cows with CL at PGF (62.9 vs. 56.2%), ovulatory follicle diameter (15.7 vs. 14.8 mm), expression of estrus (86.7 vs. 79.9%), ovulation following the protocol (89.7 vs. 84.3%), and pregnancies per AI (P/AI; 45.4 vs. 21.4%). Thus, fertility to TAI can be improved by inducing ovulation at the 27 beginning of an E2/P4-based protocol using GnRH treatment, particularly during the cool season of the year and in cows with low P4 at the start of the protocol. Study 02- We hypothesized that the 2 CIDR protocol would have similar results on circulating P4 concentration at PGF, ovulation to ECP, P/AI, and pregnancy losses. Lactating Holstein cows (n = 1,638) were randomly assigned to receive TAI (d0) following one of two treatments: (I. GnRH treatment) CIDR+ 2 mg of E2-benzoate + 100 μg GnRH on d -11, PGF on d -4, CIDR withdrawal + 1.0 mg of E2-cypionate + PGF on d -2, and TAI on d 0; (II. 2CIDR treatment) Two CIDR + 2mg of E2-benzoate on d -11, one CIDR withdraw + PGF on d -4, second CIDR withdrawal + 1.0 mg of E2-cypionate + PGF on d -2, and TAI on d 0. Pregnancy diagnoses were performed d32 and d60 after TAI. There was no effect of treatments (P > 0.10) on fertility regardless of cow temperature, BCS, parity, milk yield and presence or absence of a CL on d -11 or d -4. Some physiological measurements associated with greater fertility were reduced in cows with elevated temperature (≥ 39.1ºC) as percentage of cows with CL at PGF decreased 5.4%, ovulatory follicle diameter decreased 0.51 mm, expression of estrus decreased 4.7%, and ovulation to the ECP decreased 2.5% compared to cows with reduced temperature (< 39.0ºC), with result in 13.4% decrease (P < 0.01) in P/AI and tended to increase (P = 0.09) the pregnancy loss between 32 and 60d. There were more (P < 0.01 ) cows with a CL at PGF in the GnRH (< 39.0ºC = 78.1% [314/402]; ≥ 39.1ºC = 70.9% [256/361]) protocol than in 2CIDR protocol (< 39.0ºC = 58.8% [244/415]; ≥ 39.1ºC = 54.6% [190/348], however, circulating P4 concentration was greater (P = 0.05) at the time of PGF treatment (d -4) for cows treated 2CIDR (< 39.0ºC = 4.34 ± 0.13; ≥ 39.1ºC = 4.17 ± 0.14 ng/mL) than GnRH (< 39.0ºC = 4.12 ± 0.14; ≥ 39.1ºC = 3.84 ± 0.14 ng/mL), independent of cow temperature. The result of this study shows that the protocols have similar results on circulating P4 concentration at PGF, ovulation to ECP and P/AI. / FAPESP: 2012/19059-2

Made available in DSpace on 2014-11-10T11:09:39Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-04-04Bitstream added on 2014-11-10T11:58:06Z : No. of bitstreams: 1 000785503_20150404.pdf: 497224 bytes, checksum: a459a5b949a60edee526c57ea3fc8d80 (MD5) Bitstreams deleted on 2015-04-13T18:26:26Z: 000785503_20150404.pdf,Bitstream added on 2015-04-13T18:27:06Z : No. of bitstreams: 1 000785503.pdf: 1639502 bytes, checksum: 2fca464d3fcaa51a719adf9dfb1cd8d2 (MD5) / Interferons (IFNs) são pequenas proteínas conhecidas por suas atividades antiproliferativa e imunorregulatória e por seu envolvimento crucial na ação antiviral celular. Os IFNs do tipo I incluem os IFN-α, β e ω e são utilizados terapeuticamente no tratamento de diversos tipos de cânceres e hepatites B e C. Sabe-se que dentre os efeitos adversos causados pelo IFN-α estão as disfunções endócrinas. Pouco se sabe sobre os efeitos dos IFNs na reprodução. Assim, o presente estudo objetivou investigar, em ratos adultos, os efeitos da exposição subcrônica a diferentes doses de IFN-α sobre parâmetros reprodutivos masculinos. No experimento 1, ratos Wistar adultos (90 dias/350-470g) foram distribuídos em três grupos experimentais (n=10), sendo um controle, cujos animais receberam o veículo, e dois tratados, subcutaneamente, com as doses de 5x104 unidades/Kg e 10x104 unidades/Kg, diluídas em salina. Após 30 dias de tratamento os animais foram pesados e eutanasiados para coleta dos órgãos do sistema genital. Testículo e epidídimo direitos, próstata ventral e glândula seminal (sem a glândula coaguladora) de cada animal foram retirados e pesados. Testículos e epidídimos direitos foram utilizados para determinação do número de células germinativas e os epidídimos esquerdos para a coleta de espermatozoides para avaliação da motilidade e morfologia espermática e para serem usados nas inseminações artificiais intrauterinas. Os níveis séricos de testosterona também foram mensurados. No experimento 2, outro lote de animais, seguindo o mesmo design experimental, foi utilizado para a coleta dos testículos e epidídimos esquerdos para avaliações histopatológica e morfométrica. Os pesos corpóreos e dos órgãos reprodutores foram semelhantes entre os grupos, bem como a produção espermática diária, tempo de trânsito espermático através do epidídimo, motilidade e morfologia ... / Interferons (IFNs) are small proteins known their antiproliferative and immunoregulatory activities and their crucial involvement in the cellular antiviral. Type I IFNs include the IFN-α, β e ω and are used therapeutically in the treatment of several kinds of cancers and hepatitis B and C. Endocrine dysfunction is among the adverse side effects of IFN-α. Little is know about the effects of IFNs on reproduction. Therefore, the present study aimed to investigated, in adult rats, the effects of subchronic exposure to different doses of IFN-α on male reproductive parameters. In the experiment 1, adult male Wistar rats (90 days/350-470g) were distributed in three experimental groups (n=10), one control, which received the vehicle, and two treated, subcutaneously, with 5x104 units/Kg e 10x104 units/Kg of IFN-α, diluted in saline. After 30 days of treatment the animals were weighed and euthanized for collection of reproductive organs. Right testis and epididymis, ventral prostate and seminal gland (without coagulating gland) of each animal were removed and weighed. Right testis and epididymis were used for the determination of sperm number and left epididymis for collection of sperm to evaluate of sperm motility and morphology and for intrauterine artificial insemination. The serum testosterone levels were also measured. In the experiment 2, another lot of animals, following the same experimental design, were used for collection of left testis and epididymis for to histopathological and morphometric evaluation. The body and reproductive organ weights were unchanged, as well as the daily sperm production, sperm transit time through the epididymis, sperm motility and morphology and fertility potential of animals. The histopathological and morphometric evaluation did not reveal injuries related to treatment. Thus, our results show that subchronic exposure to IFN-α did not interfere with levels of serum testosterone ...

Orientador: Wilma De Grava Kempinas / Resumo: A betametasona é o corticosteroide de escolha para o amadurecimento pulmonar fetal diminuindo a incidência de síndrome de angústia respiratória e mortalidade neonatal. Estudos realizados em parceria com o nosso laboratório demonstraram que a exposição pré-natal a este fármaco promoveu alterações nas concentrações de testosterona e parâmetros espermáticos da prole masculina de ratos. Recentemente, efeitos sobre o eixo hipotalâmico-hipofisário-adrenal foram observados por gerações. Assim, o objetivo do presente trabalho foi avaliar os efeitos nos parâmetros reprodutivos da prole feminina e masculina de ratos, provocados pela exposição in utero à betametasona. Para tanto, ratas Wistar prenhes foram alocadas em grupo controle (n=11) e tratado (n=13) com 0,1mg/kg de betametasona, via intramuscular, nos dias gestacionais 12, 13, 18 e 19. No experimento 1, foram avaliados: no dia pós-natal (DPN) 1 o peso inicial e a distância ano-genital da prole feminina, a partir do DPN 30, a instalação da puberdade, e a partir do DPN 70, a ciclicidade estral. No DPN 85, procedeu-se a eutanásia de uma fêmea em estro, e foram coletados uma alíquota de sangue para a determinação das concentrações hormonais e os órgãos reprodutores para pesagem. Ovário e útero foram fixados para análise histológica e morfométrica. No DPN 90 foi realizado comportamento sexual seguido de teste de fertilidade e no DPN 95 um segmento uterino de uma fêmea em estro por ninhada foi utilizado para a reatividade farmacológica... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Doutor

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:14Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-11-19Bitstream added on 2014-06-13T20:38:40Z : No. of bitstreams: 1 guasti_pn_me_botfmvz.pdf: 2206876 bytes, checksum: 80444b4bd8d4d68f6bed119ca1696223 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A colheita de espermatozóides da cauda do epidídimo e sua criopreservação representam um grande avanço biotecnológico na equinocultura, e pode ser a última chance de preservação do material genético de garanhões após sua morte inesperada ou lesões que impossibilitem a cobertura ou colheita de sêmen. Os objetivos dessa pesquisa foram comparar a efetividade de dois diluidores utilizados para a recuperação dos espermatozóides epididimários em relação aos índices de congelabilidade determinados laboratorialmente (Experimento I) e as taxas de concepção proporcionadas por cada metodologia ao utilizar baixa dose inseminante (Experimento II). No Experimento I foram utilizados 58 testículos, o ducto epididimário de um testículo de cada garanhão foi lavado com o diluidor sem pentoxifilina–Botu-Sêmen®1 (Controle) e o ducto epididimário do testículo contralateral, com o diluidor contendo 7,18 mM de pentoxifilina–Botu-Turbo®2 (PTX). No Experimento II, foi utilizado um “pool de espermatozóides” dos testículos de dois garanhões. As amostras foram congeladas e direcionadas às inseminações artificiais em diferentes doses inseminantes, formando os seguintes grupos: 800x106 espermatozóides recuperados com o diluidor sem pentoxifilina (800 Controle), 100x106 espermatozóides recuperados com diluidor sem pentoxifilina (100 Controle) e 100x106 espermatozóides recuperados com o diluidor com pentoxifilina (100 PTX). O índice de concepção para as éguas inseminadas nos grupos 800 Controle, 100 Controle e 100 PTX foi de 68% (11/16), 31,25% (5/16) e 50% (8/16), respectivamente. Frente aos resultados obtidos, conclui-se inseminações artificiais com apenas 100x106 espermatozóides colhidos com o meio diluidor contendo pentoxifilina garantem índices aceitáveis de concepção e maximiza o uso de espermatozóides epididimários congelados / The recovery of spermatozoa from epididymal cauda and its cryopreservation represents a great technological advance, since it is the last possibility to preserve genetic material from dead or deceased valuable males. The aims of this study were to compare the effectiveness of two extenders used for recovery of epididymal sperm in relation to its freezability (Experiment I) and conception rates provided by each methodology using a low insemination dose (Experiment II). In Experiment I, 58 testis were used, epididymal cauda of each stallion were separated and flushed with a skim milk-extender either without (Botu-Sêmen®; Control Group) or with 7,18 mM of pentoxifylline (Botu-Turbo®; PTX Group) and then frozen. In Experiment II, a “pool” of epididymal sperm from 2 stallions was used. The samples were frozen and artificial insemination was performed using different insemination doses, comprising the following groups: 800x106 sperm recovered without PTX (800 Control); 100x106 sperm recovered without PTX (100 Control) and 100x106 sperm recovered with PTX (100 PTX). The conception rates were 68% (11/16), 31.25% (5/16) e 50% (8/16) for 800 Control, 100 Control and 100 PTX group, respectively. Based in these results, it was possible to conclude that artificial inseminations with 100x106 sperm recovered with PTX guarantee acceptable conception rates and maximize the use of frozen equine epididymal sperm

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-02-22Bitstream added on 2014-06-13T18:48:33Z : No. of bitstreams: 1 monteiro_ga_me_botfmvz.pdf: 8347367 bytes, checksum: 82c2cef3b1dcf4f8284dbffecca4034d (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A recuperação de espermatozóides da cauda do epidídimo e sua criopreservação pode ser a última chance para recuperação do material genético quando ocorre morte súbita ou lesão grave em garanhões de alto valor genético. Sendo assim, o objetivo do experimento I foi comparar os parâmetros espermáticos dos espermatozóides da cauda do epidídimo recuperados imediatamente após orquiectomia e em diferentes momentos após armazenamento a 5°C e a temperatura ambiente. Já o experimento II, teve o objetivo de comparar os parâmetros espermáticos e fertilidade dos espermatozóides do ejaculado e do epidídimo recuperados logo depois da orquiectomia e após armazenamento por 24 horas a 5°C. No experimento I, 48 garanhões foram submetidos à orquiectomia bilateral, sendo que em oito a colheita dos espermatozóides do epidídimo foi realizada imediatamente após orquiectomia (grupo controle). Nos outros 40 garanhões, um epidídimo foi armazenado a temperatura ambiente e o contralateral armazenado a 5°C por 6, 12, 18, 24 e 30 horas, de acordo com o grupo. No experimento II, dois ejaculados de oito garanhões foram colhidos com vagina artificial e congelados (grupo EJ-0h). Uma semana após, os garanhões foram submetidos à orquiectomia bilateral, sendo que os espermatozóides de um epidídimo foram congelados imediatamente após orquiectomia (grupo EP-0h) e o epidídimo contralateral foi previamente armazenado por 24 horas a 5°C (EP-24h). O teste de fertilidade demonstrou que o grupo EP-0h (92,3%; n=13) tendem a ser maior que os grupos EJ-0h (61,5%; n=13) e EP-24h (61,5%; n=13). Conclui-se que o armazenamento dos testículos-epidídimos a 5°C proporcionou melhor preservação espermática e que, independente da temperatura, a motilidade progressiva é o parâmetro espermático mais sensível ao tempo de armazenamento. / Cauda epididymis sperm recovery and cryopreservation may be the last chance to obtain genetical material when sudden death or serious injury occur in valuable stallions. Thus, the aim of experiment I was to compare sperm parameters of epididymal sperm recovered immediately after orchiectomy and at different moments after storage at 5°C and at room temperature. Experiment II aimed to compare sperm parameters and fertility of ejaculated sperm and epididymal sperm recovered immediately after orchiectomy and after storage for 24h at 5°C. In experiment I, 48 stallions were submitted to bilateral orchiectomy, in eight of those the sperm collection were done immediately after orchiectomy (control group). In the other 40 stallions, one epididymis was stored at room temperature and the other was stored at 5°C for 6, 12, 18, 24 and 30 hours accorded to groups. In experiment II, two ejaculated from eight stallions were obtained with artificial vagina and cryopreserved (group EJ-0h). One week later, the stallions were submitted to bilateral orchiectomy, and the sperm of one epididymal were frozen immediately after orchiectomy (group EP-0h) and the contralateral epididymal was previously storage for 24h at 5°C (EP-24h). Fertility test showed that group EP-0h (92,3%; n=13) tended to be higher than groups EJ-0h (61,5%; n=13) and EP-24h (61,5%; n=13). These results allowed concluding that storage of the testis-epididymis complex at 5°C is more efficient in preserving sperm parameters than room temperature storage and that progressive motility is the parameter that is more affected by storage period, regardless of the temperature.

Orientador: Wilma De Gravas Kempinas / Banca: Raquel Fantin Domeniconi / Banca: Estela Saao Cerri / Resumo: Interferons (IFNs) são pequenas proteínas conhecidas por suas atividades antiproliferativa e imunorregulatória e por seu envolvimento crucial na ação antiviral celular. Os IFNs do tipo I incluem os IFN-α, β e ω e são utilizados terapeuticamente no tratamento de diversos tipos de cânceres e hepatites B e C. Sabe-se que dentre os efeitos adversos causados pelo IFN-α estão as disfunções endócrinas. Pouco se sabe sobre os efeitos dos IFNs na reprodução. Assim, o presente estudo objetivou investigar, em ratos adultos, os efeitos da exposição subcrônica a diferentes doses de IFN-α sobre parâmetros reprodutivos masculinos. No experimento 1, ratos Wistar adultos (90 dias/350-470g) foram distribuídos em três grupos experimentais (n=10), sendo um controle, cujos animais receberam o veículo, e dois tratados, subcutaneamente, com as doses de 5x104 unidades/Kg e 10x104 unidades/Kg, diluídas em salina. Após 30 dias de tratamento os animais foram pesados e eutanasiados para coleta dos órgãos do sistema genital. Testículo e epidídimo direitos, próstata ventral e glândula seminal (sem a glândula coaguladora) de cada animal foram retirados e pesados. Testículos e epidídimos direitos foram utilizados para determinação do número de células germinativas e os epidídimos esquerdos para a coleta de espermatozoides para avaliação da motilidade e morfologia espermática e para serem usados nas inseminações artificiais intrauterinas. Os níveis séricos de testosterona também foram mensurados. No experimento 2, outro lote de animais, seguindo o mesmo design experimental, foi utilizado para a coleta dos testículos e epidídimos esquerdos para avaliações histopatológica e morfométrica. Os pesos corpóreos e dos órgãos reprodutores foram semelhantes entre os grupos, bem como a produção espermática diária, tempo de trânsito espermático através do epidídimo, motilidade e morfologia ... / Abstract: Interferons (IFNs) are small proteins known their antiproliferative and immunoregulatory activities and their crucial involvement in the cellular antiviral. Type I IFNs include the IFN-α, β e ω and are used therapeutically in the treatment of several kinds of cancers and hepatitis B and C. Endocrine dysfunction is among the adverse side effects of IFN-α. Little is know about the effects of IFNs on reproduction. Therefore, the present study aimed to investigated, in adult rats, the effects of subchronic exposure to different doses of IFN-α on male reproductive parameters. In the experiment 1, adult male Wistar rats (90 days/350-470g) were distributed in three experimental groups (n=10), one control, which received the vehicle, and two treated, subcutaneously, with 5x104 units/Kg e 10x104 units/Kg of IFN-α, diluted in saline. After 30 days of treatment the animals were weighed and euthanized for collection of reproductive organs. Right testis and epididymis, ventral prostate and seminal gland (without coagulating gland) of each animal were removed and weighed. Right testis and epididymis were used for the determination of sperm number and left epididymis for collection of sperm to evaluate of sperm motility and morphology and for intrauterine artificial insemination. The serum testosterone levels were also measured. In the experiment 2, another lot of animals, following the same experimental design, were used for collection of left testis and epididymis for to histopathological and morphometric evaluation. The body and reproductive organ weights were unchanged, as well as the daily sperm production, sperm transit time through the epididymis, sperm motility and morphology and fertility potential of animals. The histopathological and morphometric evaluation did not reveal injuries related to treatment. Thus, our results show that subchronic exposure to IFN-α did not interfere with levels of serum testosterone ... / Mestre

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2015-05-26T15:12:55Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Leandro, Danilo de Carvalho. Doutorado Acadêmico em Biologia.pdf: 5056189 bytes, checksum: 0f4442baabaf84edda19f8013a0c4012 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-05-26T15:12:55Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Leandro, Danilo de Carvalho. Doutorado Acadêmico em Biologia.pdf: 5056189 bytes, checksum: 0f4442baabaf84edda19f8013a0c4012 (MD5) Previous issue date: 2015-03-27 / FACEPE / O mosquito Aedes aegypti, devido à sua importância na transmissão do vírus dengue, vem sendo estudado para compreensão de aspectos relacionados à competência vetorial. Os ovários, importante órgão envolvido na reprodução do vetor e implicado na transmissão viral transovariana, tem sido negligenciados nas análises de infecção viral. Diante disso, o presente trabalho analisou diversos aspectos da transmissão transovariana, como a cinética de infecção dos ovários pelo vírus Dengue, as taxas de transmissão transovariana na primeira geração filial (F1), a influência viral na fertilidade e fecundidade vetorial, os aspectos citopatológicos e ultraestruturais provocados pelo vírus no tecido ovariano, bem como a expressão diferencial de genes de resposta imune e pró-apoptóticos em ovários de A. aegypti. Experimentos de infecção artificial com vírus Dengue sorotipo 2 (DENV-2) foram conduzidos em laboratório, utilizando a população de A. aegypti proveniente de campo (Petrolina). Para as análises de cinética de infecção ovariana ao 7º, 14º, 21º e 28º dia após a infecção (dpi), dois grupos experimentais foram analisados: grupo alimentação única (AU) e grupo múltiplas alimentações (MA). Investigações das taxas de transmissão viral transovariana foram conduzidas a partir da detecção viral em mosquitos machos e fêmeas, oriundos de ovos de insetos que receberam alimentação sanguínea infectada. Experimentos de fertilidade e fecundidade foram conduzidos em fêmeas que realizaram o repasto sanguíneo infectado, e posteriormente foram individualizadas para coleta de ovos. Ovários foram coletados ao 14º dpi e submetidos a processamento e análise histopatológica e ultraestutural. Análises da expressão diferencial dos genes Relish-1 (via Toll), Hop (Via JAK-STAT), Argonaute 2 (mecanismo de RNA de interferência), e dos genes envolvidos na via apoptótica Caspase 16, AeDronc, Ae IAP1, foram conduzidas em ovários de fêmeas do grupo infectado positivas para o DENV-2, no grupo infectado negativo para o DENV-2, no grupo controle, e posteriormente comparadas pelo método ΔΔCt. A positividade para o DENV-2 no tecido ovariano foi registrada ao 14º, 21º e 28º dpi nos dois grupos (AU e MA). A quantificação viral das amostras positivas para DENV-2 apresentou resultados muito similares, com exceção do 28º dpi do grupo MA. A transmissão transovariana na F1 foi registrada apenas em machos ao 14° e 21º dia após a emergência, com 13,3% e 20% de positividade, respectivamente. Nenhuma diferença significativa foi observada nos padrões reprodutivos (fecundidade e fertilidade) nas fêmeas infectadas. Nas análises histopatológicas, observou-se uma invaginação do epitélio folicular dos oócitos do grupo infectado. Nenhuma alteração a nível ultraestrutural foi observada. A expressão de todos os genes avaliados foi maior nos ovários do grupo infectado positivo para o DENV-2, quando comparado a ovários do grupo infectado negativo e controle. A infecção ovariana e a transmissão transovariana ocorrem a níveis muito reduzidos, porém, quando o vírus está presente no tecido ovariano, os títulos virais são muito similares a outros órgãos relatados na literatura. A expressão de genes envolvidos na resposta imune do hospedeiro ao vírus justifica a baixa infectividade, uma vez que se observa no ovário do grupo infectado, a expressão aumentada de todos os genes avaliados. Diante disso, concluímos que a transmissão transovariana é um evento raro e que não causa alterações importantes na biologia reprodutiva do vetor, porém, não deve ser negligenciada, uma vez que é a principal forma da permanência viral nas populações de mosquitos. / The mosquito Aedes aegypti, due to its importance in the transmission of the dengue virus, has been studied for the comprehension of aspects related to vector competence. The ovaries, important organ involved in the reproduction of the vector and implied in the viral transovarian transmission, have been neglected in the analysis of viral infection. Accordingly, the present study analyzed several aspects of the transovarian transmission as the kinetics of the ovaries infection by the dengue virus, the taxes of the transovarian transmission in the first filial generation (F1), the viral influence in the vector fertility and fecundity, the cytopathological and ultrastructural aspects motivated by the virus in the ovarian tissue, as well as the differential expression of the genes of immune response and pro-apoptotic in A. aegypti ovaries. Experiments of the artificial infection with the Dengue virus serotype 2 (DENV-2) were performed in laboratory by A. aegypti population derived from the field (Petrolina). For the analysis of the kinetics of ovarian infection to the 7th, 14th, 21st and 28th day post the infection (dpi), two experimental groups were analyzed: unique alimentation group (UA) and multiple alimentations group (MA). Investigations of the taxes of transovarian transmission were conducted starting from the viral detection in male and female mosquitoes coming from the eggs of insects which received infected blood alimentation. Fertility and fecundity experiments were directed in females which reached the infected blood repast and subsequently were individualized for the eggs collection. Ovaries have been collected to the 14th dpi and submitted to the process and histopathology and ultra-structural analysis. Analysis of differential gene process Relish-1 (Toll pathway), Hop (JAK-STAT pathway), Argonaute 2 (mechanism of the RNA interference), and of the genes involved in the via apoptotic Caspase 16, AeDronc, Ae IAP1 were conducted to the ovaries of females in the infected group positive for DENV-2 in the group infected negative for the DENV-2 and in the control group and afterwards compared by the method ΔΔCt. The positivity for the DENV-2 in the ovarian tissue was registered to the 14th, 21st and 28th dpi in the two groups (UA and MA).The viral quantification of the positive samples for DENV-2 presented similar results, with the exception of 28th dpi from the group MA. The transovarian transmission in the F1 was registered only in males in their 14th and 21st after the emergency, with 13,3% and 20% of positivity respectively. No significant difference was observed in the reproductive standards (fertility and fecundity) in the infected females. In the histopathology analysis, it was observed an invagination of the follicular epithelium of the oocytes of the infected group. No alteration to the level ultrastructural was observed. The expression of all evaluated genes was bigger in the ovaries from the infected group positive for the DENV-2, when compared to the ovaries of the infected group negative and control. The ovarian infection and the transovarian transmission happen in vey reduced levels, but if the virus is present in the ovarian tissue, the viral titles are very similar to the other organs related to the literature. The expression of the genes involved in the immune response of the host to the virus justifies the low infectivity, once it was observed in the ovary of the group infected, the expanded expression of all evaluated genes. Faced with this, we may conclude that the transovarian transmission is a rare event and that cannot cause important alterations in the vector reproductive biology, but it should not be neglected, once it is the main way of the viral permanence in the mosquitoes’ populations.