INTRODUCTION: Endometriosis is a disease characterized by the presence of extrauterine endometrial implants. Its etiopathogenesis isn’t fully understood, it’s believed that immunological and hormonal factors influence the peritoneal environment, preventing the elimination of refluxed endometrial cells during the menstrual period. In addition, endometriosis has been reported as an inflammatory process and some studies have demonstrated the inflammatory resolutive mediators involvement in endometrial physiology and suggest that they may be involved in the endometriosis progression by anti-inflammatory and antiangeogenic action. OBJECTIVE: To characterize Annexin A1 (ANXA1), FPR2/ALX and cytokines expression in peritoneal endometriosis and to clarify their role in its etiology. METHODS: A laboratory analysis was performed human samples with forty women in reproductive age (22 patients with endometriosis and 18 control women) that had undergone laparoscopic surgery. Peritoneal biopsy e fluid aspirations from endometriosis and control samples were analyzed for the expression of ANXA1, FPR2/ALX and cytokines. ANXA1 and FPR2 / ALX levels were measured by Western blotting and interleukin 1ß (IL-1ß), 4 (IL-4), 6 (IL-6) e 10 (IL-10) were quantified by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). RESULTS: The present study identified the presence in human peritoneal tissue of ANXA1 and FPR2 / ALX both in healthy condition and in women with peritoneal endometriosis, however, was lower in endometriosis samples than in control samples. By quantifying the IL-6 and IL-1β cytokines in the peritoneal fluid by ELISA, this study identified a higher IL-6 concentration in endometriosis group, but no significative difference in IL-1ß levels. In all samples, levels of IL-4 and IL-10 cytokines were below the detection level of the method used. CONCLUSION: These results indicate that the reduction of the inflammatory resolution mediators may be responsible for the inflammatory process perpetuation, maintenance and worsening of endometriosis. / Submitted by Lia Karina Volpato (lia.volpato@unisul.br) on 2018-03-13T15:25:32Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Dissertação Lia Karina Volpato.pdf: 23378759 bytes, checksum: c029f98522ccc30394074d42329f7c3b (MD5) / Approved for entry into archive by Caroline Correa da Cruz (caroline.cruz@unisul.br) on 2018-03-13T18:35:21Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Dissertação Lia Karina Volpato.pdf: 23378759 bytes, checksum: c029f98522ccc30394074d42329f7c3b (MD5) / Made available in DSpace on 2018-03-13T18:35:21Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Dissertação Lia Karina Volpato.pdf: 23378759 bytes, checksum: c029f98522ccc30394074d42329f7c3b (MD5) Previous issue date: 2017 / Endometriose é uma doença caracterizada pela presença de implantes endometriais extrauterinos. Sua etiopatogenia não está totalmente esclarecida, acredita-se que fatores imunológicos e hormonais influenciam o ambiente peritoneal, impedindo a eliminação das células endometriais refluídas durante o período menstrual. Além disso, a endometriose tem sido relacionada como um processo inflamatório e alguns estudos têm demonstrado o envolvimento de mediadores pró-resolutivos da inflamação na fisiologia endometrial e sugerem que possam estar envolvidos na progressão da endometriose por ação anti-inflamatória e antiangeogênica. OBJETIVO: Caracterizar a densidade de anexina A1 (ANXA1), FPR2 / ALX e citocinas na endometriose peritoneal e esclarecer seu papel etiológico. MÉTODOS: Foi realizado um estudo de análise laboratorial com amostras humanas de quarenta mulheres em idade reprodutiva (22 pacientes com endometriose e 18 mulheres controle) submetidas à cirurgia laparoscópica. Foram realizadas biópsia peritoneal e aspiração de fluido peritoneal em amostras de endometriose e de controle, que foram analisadas quanto à densidade de ANXA1, FPR2 / ALX e citocinas. Os níveis de ANXA1 e FPR2 / ALX foram medidos por Western blott e as interleucinas 1ß (IL-1ß), 4 (IL-4), 6 (IL-6) e 10 (IL-10) foram quantificadas por ensaio de imunoabsorção enzimática (ELISA). RESULTADOS: O presente estudo identificou a presença no tecido peritoneal humano de ANXA1 e FPR2 / ALX em condições saudáveis e em mulheres com endometriose peritoneal, no entanto, a densidade foi menor nas amostras de endometriose do que nas amostras de controle. Este estudo identificou uma maior concentração de IL-6 no fluido peritoneal do grupo com endometriose, mas não houve diferença significativa nos níveis de IL-1β. Em todas as amostras, os níveis de citocinas IL- 4 e IL- 10 estiveram abaixo do nível de detecção do método utilizado. CONCLUSÃO: Estes resultados indicam que a redução dos mediadores de resolução inflamatória pode ser responsável pela perpetuação, manutenção e agravamento do processo inflamatório da endometriose.

Fusion inhibitors are a class of antiretroviral drugs used to prevent entry of HIV into host cells. Many of the fusion inhibitors being developed, including the drug enfuvirtide (ENF), are peptides designed to mimic, and thereby competitively inhibit, the viral fusion protein gp41. An exception to this is a class of cyclic, cationic, antimicrobial peptides known as θ-defensins, which are produced by many non-human primates and exhibit broad-spectrum antiviral and antibacterial activity. Currently, the θ-defensin analog RC-101 is being developed as a microbicide to prevent sexual transmission of HIV-1. Understanding potential RC-101 resistance, and how resistance to other fusion inhibitors affects RC-101 susceptibility, is critical for future development. Partial drug resistance due to genetic variability within HIV-1 presents a major hurdle in microbicide development. Drug-resistance mutations, whether naturally occurring or resulting from selection during treatment, often apply to many drugs in a particular class. Combining different drug classes into a single microbicide should provide greater protection against the growing variability observed in HIV. Our work has identified the beneficial effects of combining the fusion inhibitor RC-101 and the RT inhibitor CSIC to prevent transmission of clinically isolated and drug-resistant HIV-1. Several aspects of HIV-1 virulence and pathogenesis are mediated by the envelope protein gp41. Additionally, peptides derived from the gp41 ectodomain have been shown to induce chemotaxis in monocytes and neutrophils. While this chemotactic activity has been characterized, it is not known how these peptides could be produced under biological conditions. Our findings demonstrate that the epithelial serine protease matriptase efficiently cleaves the gp41 HR1 region at conserved residues into a chemotactic peptide. Here, we present evidence that advances our understanding of resistance to peptide entry inhibitors, reveals a potential benefit to combining specific drugs in an antiviral microbicide, and identifies a pathway by which HIV-1 may generate peptides to exploit host immunity. This work thereby facilitates improved methods in countering drug resistance and the development of new antiviral approaches to prevent HIV-1 transmission. Additionally, we have revealed basic mechanistic evidence that shed light on our current understanding of HIV-1 infection. Specifically, our focus on gp41 provides much needed insight into its role in membrane fusion, drug susceptibility, and modification of host responses.

Submitted by NATHÁLIA MACIEL MANIEZZO STUCHI null (nmmbiomedica@hotmail.com) on 2016-07-28T14:13:21Z No. of bitstreams: 1 Tese capa dura.pdf: 5464428 bytes, checksum: f53c801765e2d85e4f507ebaaebe4625 (MD5) / Approved for entry into archive by Felipe Augusto Arakaki (arakaki@reitoria.unesp.br) on 2016-07-28T15:52:03Z (GMT) No. of bitstreams: 1 stuchi_nmm_dr_sjrp.pdf: 5464428 bytes, checksum: f53c801765e2d85e4f507ebaaebe4625 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-28T15:52:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 stuchi_nmm_dr_sjrp.pdf: 5464428 bytes, checksum: f53c801765e2d85e4f507ebaaebe4625 (MD5) Previous issue date: 2016-05-31 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Apesar do declínio da incidência, o câncer gástrico ocupa ainda a terceira posição em causa de morte por câncer no mundo, tendo como principal fator de risco a bactéria Helicobacter pylori. Esta bactéria pode levar a uma inflamação persistente através da produção de citocinas pró-inflamatórias e de espécies reativas de oxigênio e nitrogênio, estimulando a proliferação celular bem como outros processos envolvidos na carcinogênese. Ainda envolvidos nestes processos tem sido observada a participação de microRNAs, que exercem papel importante na regulação pós-transcricional, influenciando processos fisiológicos normais da célula bem como aqueles ligados às doenças, como por exemplo o câncer gástrico. Alguns miRNAs podem atuar como oncogenes, genes supressores de tumor e biomarcadores para diversas patologias, podendo alvejar genes relacionados com inflamação e câncer como o gene ANXA1 (Anexina-A1). A Anexina-A1 é uma proteína anti-inflamatória e com ação anti-proliferativa, que se liga à receptores do tipo formil peptídeo como por exemplo FPR1 e FPR2, ambos sabidamente relacionados com a progressão de doenças como o câncer. Desta forma o presente trabalho teve como objetivos avaliar a expressão da proteína Anexina A1 e seus receptores FPR1 e FPR2, bem como avaliar a expressão do RNAm da ANXA1 e de miRNAs que possam modular a expressão desse gene (hsa-mir-27a, hsa-mir-196a e hsa-mir-222) em adenocarcinoma gástrico e correlacionar estes resultados com os aspectos clínico-patológicos. Foram avaliadas 31 amostras de adenocarcinoma gástrico, assim como as regiões metaplásica ou normal adjacentes ao tumor. A quantificação relativa (RQ) do RNAm da ANXA1 e miRNAs foi realizada por PCR quantitativo em tempo real utilizando ensaio TaqMan, e a expressão proteica da AnxA1, FPR1 e FPR2 por imuno-histoquímica e análise densitométrica. Em relação à expressão gênica relativa foram observados o aumento da expressão da ANXA1 nos tumores (RQ=1,374; p<0,001), assim como do miR-196a que apresentou aumento de expressão tanto no tecido metaplásico (RQ= 4,784; p=0,0016) e tumoral (RQ=16,99; p< 0,001) em relação ao tecido normal. O miR-27a não se apresentou diferencialmente expresso nos diferentes tecidos e houve diminuição da expressão do miR-222 (RQ=0,687; p=0,01) no tecido tumoral em relação ao tecido normal. Apenas o miR-196a e a ANXA1 apresentaram correlação significantemente inversa (r= -0,55; p=0,003), e este miRNA foi o único que apresentou associação com o sexo feminino, devido aumento de expressão em mulheres. Quando se comparou a expressão relativa aos parâmetros clínico-patológicos e tumorais não foram encontradas diferenças significativas. Quanto à expressão proteica o FPR2 não apresentou marcação no tecido normal, metaplásico e tumoral. Contudo a AnxA1 e FPR1 apresentaram imunomarcação positiva amplamente distribuída no tecido tumoral e positivamente correlacionados tanto no epitélio (r=0,87; p<0,0001) como estroma (r=0,62; p=0,004). Portanto, nossos resultados sugerem que a ANXA1 é modulada pelo miR-196a em câncer gástrico, e evidenciam que tanto a AnxA1 como o FPR1 também estão envolvidos no processo de carcinogênese gástrica. Tais achados podem abrir possibilidades para futuros estudos sobre novos alvos terapêuticos já que AnxA1 e FPR1 são possíveis alvos farmacológicos, e as terapias baseadas em microRNAs tem sido amplamente pesquisadas. / Gastric cancer still ranks third in cause of cancer death worldwide, despite the decline in its incidence, being Helicobacter pylori the main risk factor for this disease. This bacterium can lead to persistent inflammation via the production of proinflammatory cytokines and reactive oxygen and nitrogen species, stimulating cell proliferation and other processes involved in carcinogenesis. Still involved in this process, it has been observed the participation of miRNAs, which play an important role in post- transcriptional regulation, influencing normal physiological processes of the cell as well as those linked to diseases such as gastric cancer. Some miRNAs can act as oncogenes, tumor suppressor genes and biomarkers for various diseases, can targetting genes linked to inflammation and cancer such as ANXA1 gene (Annexin A1). Annexin A1 is an anti-inflammatory protein with anti-proliferative action that binds to formyl peptide receptors such as, FPR1 and FPR2, both known to be related to the progression of diseases such as cancer. Thus, the present study aimed to evaluate the expression of Annexin A1, FPR1 and FPR2 receptors, and the expression of mRNA ANXA1 and miRNAs (hsa-mir-27a, hsa-mir-196a and hsa-miR 222) in gastric adenocarcinoma, also correlate these results to the clinicopathological features. 31 adenocarcinoma samples were evaluated, as well as normal or metaplastic region adjacent to the tumor. Relative quantification (RQ) of miRNA and mRNA ANXA1 was evaluated by TaqMan assay and protein expression AnxA1, FPR1 and FPR2 by immunohistochemistry and densitometry analysis. Regarding the relative expression the following results were observed, increased expression in tumors of ANXA1 (RQ = 1.374; p < 0.001) and miR- 196a that showed increased expression it he metaplastic tissue (RQ = 4.784; p = 0.0016) and tumor (RQ = 16.99; p < 0.001) compared to normal tissue. The miR- 27a did not appear differentially expressed in different tissues and there was a decrease of miR -222 expression (RQ = 0.687; p = 0.01) in tumor tissue compared to normal tissue. Only the miR-196a and ANXA1 presented a significant inverse correlation (r = -0.55; p = 0.003), and this miRNA was the only one that showed association to female gender, due to increased expression in women when comparing the relative expression to clinicopathological parameters and tumor features. The FPR2 was not expressed in normal, metaplasic and tumor tissue. However, the AnxA1 and FPR1 were widely distributed positive immunostaining in tumor tissue and positively correlated both in the epithelium (r = 0.87 ; p < 0.0001) and stromal (r = 0.62 ; p = 0.004). Thus, our results suggest that ANXA1 is modulated by miR-196a in gastric cancer, and evidencing that both AnxA1 and FPR1 are also involved in gastric carcinogenesis process. These data open the possibility for future studies on new therapeutic targets since AnxA1 and FPR1 are adjustable pharmacological targets, and microRNAs ` therapies have been widely researched. / FAPESP: 2012/15036-8 / CNPq: 474776/2013-1

Submitted by Pós Imunologia (ppgimicsufba@gmail.com) on 2017-02-13T17:19:32Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Ivonete Queiroz.pdf: 1073414 bytes, checksum: af4071808ba3af365237d21558158bf4 (MD5) / Approved for entry into archive by Delba Rosa (delba@ufba.br) on 2017-06-28T12:19:20Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação Ivonete Queiroz.pdf: 1073414 bytes, checksum: af4071808ba3af365237d21558158bf4 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-28T12:19:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação Ivonete Queiroz.pdf: 1073414 bytes, checksum: af4071808ba3af365237d21558158bf4 (MD5) / CAPES / A hanseníase é uma doença infectocontagiosa crônica, causada pelo Mycobacterium leprae, caracterizada por lesões na pele e ampla apresentação clínica, a qual depende principalmente da resposta imunológica do hospedeiro frente à infecção pelo Mycobacterium leprae. Esta infecção está distribuída mundialmente persistindo como grave problema de saúde pública no Brasil. As incapacidades e deformidades duradouras decorrentes dos quadros reacionais podem ocorrer antes, durante ou após a instituição do tratamento específico. Os episódios reacionais inflamatórios são decorrentes da exacerbação abrupta da resposta imune mediada por célula contra antígenos do M. leprae. O episódio reacional tipo 1 ou reação reversa é uma ocorrência inflamatória aguda que acomete a pele e nervos periféricos, sendo causa comum de incapacidade física. A reação tipo 2 ou eritema nodoso hansênico acomete somente pacientes virchowianos (LL) e borderline-virchowianos (BL) com presença de muitos bacilos e pouca ou nenhuma imunidade celular ao M. leprae. O objetivo principal deste estudo foi avaliar a moléculas MARCO Scavenger, Receptor peptídeo formil 1(FPR1) e Receptor peptídeo N-formil 2 (FPR2) em monócitos de pacientes com hanseníase em associação ao desenvolvimento de reações hansênicas, para alcançar este objetivo células mononucleares do sangue periférico foram obtidas de pacientes com diferentes formas clínicas da hanseníase. A marcação de superfície celular foi realizada por citometria de fluxo e os dados analisados com FlowJo em 35 pacientes com hanseníase, divididos em 19 paucibacilar e 16 multibacilar. Os nossos resultados mostraram que os pacientes com a forma paucibacilar apresentam a frequência de monócitos intermediários aumentada. Não houve diferença estatística na média de intensidade de fluorescência (MFI) de CD80, CD86 e MHC II entre monócitos de pacientes com a forma paucibacilar e multibacilar da hanseníase. No entanto, monócitos intermediários de pacientes com a forma multibacilar apresentaram média de intensidade de fluorescência maior em CD86 e MCHII. Os nossos dados sugerem que o receptor FPR1 pode ter um papel relevante para detecção na amplificação da resposta inflamatória de indivíduos com hanseníase quando comparado com as outras moléculas aplicadas neste estudo. / Leprosy is a chronic infectious disease caused by Mycobacterium leprae, characterized by skin lesions and extensive clinical presentation which depends mainly on the immune front of the host response to infection by Mycobacterium leprae. This infection is distributed worldwide persist as a serious public health problem in Brazil. Disability and lasting deformities resulting from reaction symptoms can occur before, during or after the institution of specific treatment. Reactional inflammatory episodes are due to the abrupt exacerbation of immune cell-mediated response against M. leprae antigens. The episode reaction type 1 or reverse reaction is an acute inflammatory occurrence that affects the skin and peripheral nerves, and common cause of disability. Reaction type 2 or ENL only affects lepromatous patients (LL) and borderline-lepromatous (BL) with the presence of many bacilli and little or no cellular immunity to M. leprae. To assess the association of biomarkers MARCO Scavenger, Formyl peptide receptor (FPR1) and N-formyl peptide receptor 2 (FPR2) in monocytes of patients with leprosy associated with the development of leprosy reactions, mononuclear cells from peripheral blood were obtained from patients with different clinical forms of leprosy. To achieve this goal peripheral blood mononuclear cells were obtained from patients with different clinical forms of leprosy. The cell surface stain was performed by flow cytometry and the data analyzed with FlowJo in 35 patients with leprosy, divided into 19 paucibacillary and 16 multibacillary patients. Our results showed that patients with the paucibacillary form exhibit increased monocyte frequency. There was no statistical difference in the mean fluorescence intensity (MFI) of CD80, CD86 and MHC II between monocytes of paucibacillary and multibacillary leprosy patients. However, intermediate monocytes from patients with the multibacillary form had higher mean fluorescence intensity in CD86 and MCHII. Our data suggest that the FPR1 receptor may play a relevant role in detecting the amplification of the inflammatory response of individuals with leprosy when compared with the other molecules applied in this study.