Orientador : Yong Kun Park / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-14T20:17:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Martens_IngridSchmidt-Hebbel_M.pdf: 3389327 bytes, checksum: b6e2e3c056665225978b1de2c44046a5 (MD5) Previous issue date: 1986 / Resumo: Oitocentas e sessenta e três linhagens de fungos foram isoladas do solo de plantações de cana de açúcar, assim como de varas de cana deterioradas, e testadas quanto ã atividade dedextranase. Nesta seleção, foi encontrada uma linhagem de Penicillium sp que produz alta atividade de dextranase quando cultivada em meio líquido contendo dextrana como única fonte de carbono. Estudaram-se as condições ótimas de produção de dextrana se, quanto à fonte de carbono, de nitrogênio, concentração de dextrana no meio e temperatura de incubação. A dextranase foi produzida em fermentação submersa em meio contendo dextrana, farinha de soja desengordurada, extrato de leveduras, KH2P04 e MgS04.7H20 em pH 6,0 a 30ºC. A enzima bruta foi purificada através de cromatografia em coluna de DEAE-celulose e de CM-celulose. A caracterização da enzima mostrou que a temperatura ótima da dextranase é de 50ºC, e o ph ótimo de 4,2. A enzima se mantém estável a 40ºC durante 7 horas. O pH de estabilidade se encontra na faixa de pH 4,2 a 5,0. A dextranase de Penicillium sp é fortemente inibida por íons Ag+, Mn2+, F2+ e Hg2+. Na hidrólise da dextrana a enzima .libera, isomaltose e isomaltotriose como produtos principais. Na aplicação da dextranase de Penicillium sp na hidrólise da dextrana em caldo de cana e em açúcar cristal, a mesma apresentou resultados satisfatórios / Abstract: Eight hundred and sixty three strains of fungi were isolated from cane sugar fields and deteriorated cane sugar and examined for production of dextranase. It was found a strain of Penieillium sp which has produced highest activity of dextranase when the strain was cultivated in liquid medium which contained dextran as toe sole carbon source. The optimal condition for dextranase production by the fungus was studied and found that dextranase was produced in submerged culture in medium containing dextran, 5g; defatted soy flour, 10g; yeast extract. 5g; KH2P04, 5g and MgS04.7H20, 2,5g in 1 liter, pH 6,0 at 30ºC. The crude enzyme was purified by DEAE-cellulose and CH cellulose column chromatograpoy. The enzyme was most active at pH 4,2, and the temperature optimum was near 50ºC. The dextianase was stable over a pH range from 4,2 - 5,0 at 40ºC for 7 hours. The enzyme was strongly inhibited by Ag+, Mn2+, Fe2+ and Hg2+ ions. The main hydrolysis products of dextran were glucose, isomaltose and isomaltotriose. The application of Penieillium sp dextranase in removing dextran from raw cane sugar juice and raw sugar showed satisfactory results / Mestrado / Mestre em Ciência de Alimentos

Orientador : Ivanhoe Rodrigues Baracho / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-15T10:29:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Castaneda_LuziaAurelia_M.pdf: 3479659 bytes, checksum: 1715e329338d6286087d4749e8894952 (MD5) Previous issue date: 1989 / Resumo: Três mutantes auxotróficos de A.nidulans foram cruzados entre si obtendo-se três diplóides. Do diplóide MSE // pro A1; paba A6; y A1 foram obtidos, por haploidização nove setores. As linhagens haplóides foram crescidas em MC e MM suplementado. Os diplóides foram cultivados em MM e os segregantes cresceram em MM suplementado. A composição lipídica dos organismos estudados foi determinada por cromatografia gasosa, utilizando-se para isso um cromatográfico CG modelo 37 ¿ D de ionização de chama. As identificações foram baseadas no tempo de retenção e a relativa porcentagem dos ácidos graxos foram determinadas pelas áreas dos picos dos cromatogramas. As principais diferenças encontradas relacionadas com as influências do meio podem ser observadas em relação ao ácido mirístico que nas linhagens bi A1; meth G1 e MSE apenas aparece em MC. Já o palmitoleico só ocorre em MM suplementado nas linhagens MSE e bi A1; meth G1 enquanto que o ácido insaturação do margárico só aparece nos haplóides crescidos em MC. O ácido eicosapolienóico também só se encontra nos haplóides pro A1; paba A6; y A1 e bi A1; meth G1 em MC e no diplóide MSE // bi A1, meth G1. Alguns ácidos se mantiveram Constant em todas as linhagens estudadas independentes do meio de cultura, são eles: Palmítico, oleico e linoleico o que pode ser uma indicação de uma influência genética na composição lipídica de A.nidulans. Uma interpretação genética da produção dos ácidos mirístico e margárico é sugerida / Abstract: Three auxotrophics mutants of A.nidulans were crossed among themselves as result we obtained three diploids. From the diploid MSE // pro A1; paba A6; y A1 were obtained nine sectors by haploidization. The haploids strains were cultivated in a complete medium and in a minimum supplemented medium. The diploids were grown in a minimum and the segregates grew in a minimum supplemented medium. The lipid composition of the studied organisms was determined by gaseous chromatography. The instrument used was a CG mod 37-D cromatographer with ionization flame. The identifications were based on the retention time and relative percentage of grease acids was determined by the peak areas on the chromatograms. The differences found related to the medium can be observed in relation to miristic acid in the bi A1; meth G1 and MSE strains in complete medium. The palmitoleic occurs in the minimum supplement medium in the MSE and bi A1; meth G1. The insaturated acid of margaric only occurs in the haploids grown in complete medium. The C 20:2 acid occurs only in the pro A1; paba A6; y A1 and bi A1, meth G1 haploids in complet medium and in diploid MSE // bi A1; meth G1. Some acids remained constant in all strains studied independently from the medium. They are palmitoleic, linoleic and linolenic wich may indicate a genetic influence on the lipids composition of A.nidulans. A genetic interpretation of production of acids miristic and margaric is suggested. / Mestrado / Genetica / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador : Yong K. Park / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-16T18:09:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Urieta_AlbertoBurgos_M.pdf: 15163466 bytes, checksum: 90fabf5600058404b4902edc17958c24 (MD5) Previous issue date: 1974 / Resumo: O resumo poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: The abstract is available with the full electronic document / Mestrado / Mestre em Ciência e Tecnologia de Alimentos

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2013. / Submitted by Luiza Silva Almeida (luizaalmeida@bce.unb.br) on 2013-07-30T20:40:00Z No. of bitstreams: 1 2013_NatáliaBittencourtdeOliveiraAngarten.pdf: 1786920 bytes, checksum: 4895f96f48674689b91b34c8b3e3bc58 (MD5) / Approved for entry into archive by Leandro Silva Borges(leandroborges@bce.unb.br) on 2013-08-01T20:32:09Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_NatáliaBittencourtdeOliveiraAngarten.pdf: 1786920 bytes, checksum: 4895f96f48674689b91b34c8b3e3bc58 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-08-01T20:32:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_NatáliaBittencourtdeOliveiraAngarten.pdf: 1786920 bytes, checksum: 4895f96f48674689b91b34c8b3e3bc58 (MD5) / A limitação de recursos fósseis e o contínuo crescimento econômico tem aumentado a demanda por fontes alternativas para a produção de biocombustíveis e compostos químicos. A conversão da biomassa vegetal apresenta grande potencial para esse fim, já que representa a maior fonte renovável do planeta. O fungo termofílico Humicola grisea var. thermoidea (Hgvt) é conhecido por produzir uma ampla variedade de enzimas hidrolíticas termoestáveis. Dentre as hidrolases produzidas por esse organismo estão as celulases, xilanases, glicoamilases e trealases. Tais enzimas possuem grande potencial biotecnológico para a conversão de resíduos agroindustriais em produtos de maior valor agregado tais como ração animal, adubo, biocombustíveis, além de extração de óleos vegetais, processamento têxtil, branqueamento e reciclagem de papéis. A caracterização e a compreensão dos mecanismos regulatórios dos genes que codificam enzimas hidrolíticas são de grande importância para o aprimoramento de estratégias de produção dessas enzimas. Diante disso, o presente trabalho teve como objetivo a análise estrutural das regiões 5´ não codificadoras a montante dos genes de endoglicanase 1 (egl1), endoglicanase 4 (egl4) e celobiohidrolase 1.1 (cbh1.1) de Hgvt. As regiões 5´UP foram amplificadas a partir de DNA genômico de Hgvt e clonadas no vetor pGOX, contendo marca de resistência à higromicina B e o cassete de expressão do gene de glicose oxidase (goxA) de Aspergillus niger como repórter visando a posterior caracterização funcional em sistema heterólogo de Aspergillus nidulans. As regiões promotoras de egl1 e egl4 foram inicialmente analisadas in silico quanto à presença de sítios de ligação para os fatores transcricionais PacC, regulador da expressão gênica em resposta ao pH, e CreA, mediador da repressão transcricional por glicose. A fim de se avaliar a interação desses fatores com os promotores foram sintetizadas sondas contendo sítios de ligação para CreA e para PacC. Os domínios de ligação de PacC e CreA foram produzidos em Escherichia coli como proteínas de fusão à glutationa-S-transferase (GST). As proteínas recombinantes e as sondas foram empregadas em ensaios de retardo de mobilidade eletroforética (EMSA). Foi observada a formação de complexos específicos entre DNA e proteína em dois sítios para PacC e em dois sítios para CreA presentes na região promotora de egl1, o que aponta para a participação desses fatores na regulação do gene. Com relação ao gene egl4, não foi observada a interação entre o fator transcricional PacC e a região promotora do gene. Entretanto, houve formação de complexos entre CreA e os sítios presentes na região 5’UP de egl4. Apesar de reconhecerem os sítios consenso na região desse gene, nenhuma das interações mostrou ser específica. Tais dados sugerem que a regulação da expressão de egl4 obedeça a mecanismos distintos aos dos demais genes de celulase de Hgvt estudados até o momento. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Fossil fuels limited supply and the continuous economic growth have shifted the demand for renewable sources for the production of biofuels and other biomaterials. Plant biomass conversion depicts an interesting potential to this goal, since it represents the most abundant and renewable energy source on the planet. The thermophilic fungus Humicola grisea var. thermoidea (Hgvt) is well known for its capability to generate thermostable hydrolytic enzymes, such as cellulases, xylanases, glucoamylases and trehalases. These enzymes have great biotechnological potential to convert bio-based feedstocks into products with a higher added value, for instance: animal feed, fertilizers, biofuels and also for the extraction of vegetable oils, textiles processing (biopolishing and biostoning) and paper recycling. Comprehension and characterization of the regulatory mechanisms of hydrolytic enzyme-encoding genes are of great importance to the optimization of these enzymes production. Therefore, the present work aimed the analysis of the 5’ upstream regions of the Hgvt endoglucanase 1 (egl1), endoglucanase 4 (egl4) and cellobiohydrolase 1.1 (cbh 1.1) genes. These regions were obtained from Hgvt genomic DNA and cloned into the pGOX vector. This cloning vector contains a hygromycin selection marker and an Aspergillus niger glucose oxidase (goxA) expression cassette for posterior functional characterization in the Aspergillus nidulans heterologous system expression. egl1 and egl4 genes promoters were analyzed in silico for the presence of binding sites for the pH-responsive transcriptional factor PacC and for the catabolite repressor transcriptional factor CreA. In order to assess the interaction of these factors with the gene promoters, DNA probes containing CreA or PacC binding sites were utilized. PacC and CreA DNA binding domains were produced in Escherichia coli as a glutathione-S-transferase (GST) fusion protein. The recombinant proteins and DNA probes interaction was investigated by electrophoretic mobility shift assay (EMSA). DNA/protein specific interactions were observed between two PacC and two CreA binding sites situated on egl1 promoter region indicating that this gene expression is regulated by pH and by carbon source. Regarding the egl4 promoter, no interaction was detected with PacC. On the other hand, CreA/DNA complexes were detected for the egl4 5’ upstream region but none of these interactions showed to be specific thus suggesting that this gene is subject to an alternative regulatory mechanism.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ceilândia, Programa de Pós-Graduação em Ciências e Tecnologias em Saúde, 2014. / Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2015-03-09T17:23:42Z No. of bitstreams: 1 2014_TaynáCristinadosSantos_Parcial.pdf: 1534538 bytes, checksum: f7c389f5eed641be4941edcc4bfa3c82 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2015-03-13T20:11:55Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_TaynáCristinadosSantos_Parcial.pdf: 1534538 bytes, checksum: f7c389f5eed641be4941edcc4bfa3c82 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-13T20:11:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_TaynáCristinadosSantos_Parcial.pdf: 1534538 bytes, checksum: f7c389f5eed641be4941edcc4bfa3c82 (MD5) / O fungo basidiomiceto Cryptococcus neoformans se trata de um patógeno oportunista, que geralmente acomete pacientes imunodeprimidos ou imunossuprimidos, causando a criptocococose. Esta doença é cosmopolita e pode ser fatal se não tratada. Os genes velvet VEA e VELC codificam uma família de proteínas conservadas em ascomicetos e basidiomicietos, tais proteínas foram descobertas em meados de 1960 em Aspergillus nidulans, onde foi descoberto o primeiro gene velvet, VEA. Os fenótipos apresentados por mutantes de VEA são os mais diversos nos fungos filamentosos nos quais esse gene foi estudado, sendo que os principais observados foram defeitos na parede celular e no desenvolvimento sexual, redução da produção de micotoxinas e da virulência. Assim, VEA é um fator transcricional conservado que regula diferentes respostas aos estímulos ambientais. Mais recentemente, foi descoberto o gene VELC e o mesmo foi recentemente caracterizado em Aspergillus nidulans, A. fumigatus e Fusarium oxysporum. Os fenótipos resultantes da deleção de VELC são sutis e indicam que o mesmo é um regulador positivo do desenvolvimento sexual. A análise in silico de VEA e VELC de C. neoformans revela que esses genes são conservados. Foi realizada a construção dos cassetes de deleção para cada um dos genes, que foram transformados separadamente em células haploides de KN99a/α por meio de biobalística para a obtenção dos mutantes veAΔ e velCΔ de C. neoformans. Os genes foram reconstituídos para a confirmação do fenótipo observado. Não foram observadas diferenças de veAαΔ e velCαΔ sobre os fatores de virulência clássicos de C. neoformans quando comparados com a cepa selvagem (KN99α), porém os mutantes veAΔ apresentaram o fenótipo de hiperfilamentação quando submetidos ao acasalamento e insensibilidade à luz branca nas mesmas condições. Entretanto, os mutantes velCΔ não apresentaram alteração no acasalamento, exceto, uma leve insensibilidade à luz branca nesta condição. A fim de verificar as interações entre as proteínas velvets de C. neoformans, experimentos de duplo-híbrido estão sendo conduzidos em Saccharomyces cerevisiae a fim de verificar as interações entre os velvets de C. neoformans. Os resultados obtidos indicam que VEA e VELC agem como reguladores negativos do desenvolvimento sexual em C. neoformans não afetando os principais fatores de virulência deste patógeno. Os dados deste trabalho são o início para o esclarecimento dos papéis de VEA e VELC na biologia de C. neoformans. ________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The basidiomycete fungus Cryptococcus neoformans is an opportunistic organism which commonly infects immunocompromised patients causing cryptococcosis. This is a comospolite disease and can be fatal if untreated. VEA and VELC genes codifies the conserved family of velvet proteins and this family is conserved in ascomycetes and basidiomycetes, such proteins were characterized in the mid 1960’s in Aspergillus nidulans, when VEA was discovered. VEA null mutants phenotypes display defects in sexual development and decreased production of mycotoxins in the filamentous fungi in which this gene was studied. VEA null mutants show cell wall defects and reduced virulence, indicating that VEA is a conserved transcriptional factor that regulates many responses to environmental cues. More recently, VELC was characterized in Aspergillus nidulans, A. fumigatus and Fusarium oxysporum. The phenotypes of the VELC null mutants are subtle and indicate that this gene is a positive regulator of sexual development. In silico analysis shows that both genes are conserved in C. neoformans. Deletion cassettes were constructed for each gene and separately transformed in KN99a/α haploid yeasts to obtain veAΔ and velCΔ strains. Then, the strains were complemented with the wild-type gene to confirm the phenotype. No differences were found in veAαΔ and velCαΔ on classical virulence factors of C. neoformans when compared to the wild-type strain (KN99α), but the veAΔ mutants showed hiperfilamentation when mating was performed in the dark and insensibility to white light when crossed. However, velCΔ crosses showed a slight insensitivity to white light. In order to identify the interactions among the velvets of C. neoformans, yeast two-hybrid assays are being conducted in Saccharomyces cerevisiae due to verify the protein-protein interactions between C. neeoformans velvet proteins. The results indicate that VEA and VELC act as negative regulators of sexual development in C. neoformans not affecting the main virulence traits of this pathogen. Data from this work are beginning to clarify the roles of VEA and VELC on the biology of C. neoformans.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2006. / Submitted by wesley oliveira leite (leite.wesley@yahoo.com.br) on 2009-11-21T11:39:00Z No. of bitstreams: 1 Telma Alves Garcia.PDF: 1041199 bytes, checksum: f43838dc7fc3e11fe66d87f8ec48892f (MD5) / Approved for entry into archive by Joanita Pereira(joanita) on 2009-11-23T19:40:27Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Telma Alves Garcia.PDF: 1041199 bytes, checksum: f43838dc7fc3e11fe66d87f8ec48892f (MD5) / Made available in DSpace on 2009-11-23T19:40:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Telma Alves Garcia.PDF: 1041199 bytes, checksum: f43838dc7fc3e11fe66d87f8ec48892f (MD5) Previous issue date: 2006 / O fungo Pycnoporus sanguineus foi eficiente na descoloração de alguns corantes empregados na indústria farmacêutica. Os resultados obtidos indicam que o P. sanguineus e principalmente as lacases produzidas por este fungo apresentam grande potencial para aplicações biotecnológicas. Para a produção de lacase (EC 1.10.3.2, p-difenol:dioxigênio oxidoredutase) o fungo foi cultivado em meio contendo 2,5- xilidina e cobre como indutores. Duas isoformas da enzima (Lac 1 e Lac 2) foram identificadas e separadas através de cromatografia de interação hidrofóbica. As enzimas Lac 1 e Lac 2 apresentaram uma massa molecular de 79,7 kDa e 68,1 kDa, respectivamente. As duas isoformas apresentaram características bioquímicas diferentes. A enzima Lac 1, contendo menor atividade especifica, foi parcialmente purificada. Usando seringaldazina como substrato a enzima apresentou um pH ótimo de 4,8, temperatura ótima de 25-30 °C e Km de 10,3 μmol.L-1. A enzima mostrou baixa estabilidade à temperatura de 50 °C, mantendo apenas 10% da atividade após 5 horas de incubação. A enzima Lac 2, contendo maior atividade especifica, foi purificada com um rendimento final de 13,9 %. Usando seringaldazina como substrato a enzima apresentou um pH ótimo de 4,2, temperatura ótima de 50 °C e Km de 8,3 μmol.L-1. A enzima mostrou alta estabilidade a temperatura de 50 °C, mantendo 100 % da atividade após 5 horas de incubação. Ambas as enzimas foram inibidas por azida sódica e fluoreto de sódio. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Fungus Pycnoporus sanguineus was efficient in the discoloration of some dyes used in the pharmaceutical industry. Ours results indicated that the P. sanguineus and mainly laccases produced by this fungus presents great potential for biotechnological applications. For the production of laccase (EC 1.10.3.2, p-diphenol:dioxigen oxidoreductase) this fungus was cultivated in medium containing 2,5- xylidine and copper as inducer. Two isoforms of the enzyme (Lac 1 and Lac 2) had been identified and separated through chromatography on hydrophobic interaction. The enzymes Lac 1 and Lac 2 had presented a molecular mass of 68.1 kDa and 79.7 kDa, respectively. The two isoforms presented different biochemical characteristics. The enzyme Lac 1, with lower specific activity, was partially purified. Using syringaldazine as substrate the enzyme showed pH optima of 4.8, temperature optima of 25-30 °C and Km of 10.3 μmol.L-1. The enzyme showed low stability at temperature of 50 °C, keeping only 10% of the activity, after 5 hours of incubation. The enzyme Lac 2, with higher specific activity, was purified with a final yield of 13.9 %. Using syringaldazine as substrate the enzyme presented one pH optima of 4.2, temperature optima of 50 °C and Km of 8.3 μmol.L-1. The enzyme showed high stability at temperature of 50 °C, keeping 100% of the activity even after 5 hours of incubation. Both enzymes were inhibited by sodium azide and sodium fluoride.

Submitted by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-04-20T18:31:48Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO Melyna Chaves Leite.pdf: 1697174 bytes, checksum: 6f7bcace46236ca853b000bd01b6072b (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-20T18:31:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO Melyna Chaves Leite.pdf: 1697174 bytes, checksum: 6f7bcace46236ca853b000bd01b6072b (MD5) Previous issue date: 2016-02-24 / CNPQ / As infecções fúngicas invasivas causadas por leveduras representam causa frequente de óbito, especialmente em pacientes de Unidades de Terapia Intensiva. Apesar de Candida albicans ser a mais comum, espécies emergentes de Candida, tem surgido como importante causa de infecções graves, além de se mostrarem resistentes aos tratamentos. Dentre as mais importantes causas desta infecção, destaca-se a formação de biofilme. O biofilme, conjunto de microrganismos envolvidos numa matriz polimérica extracelular de carboidratos, proteínas e ácidos nucleicos, pode se aderir a tecido vivo e superfície inerte como os dispositivos médicos. Deste modo, conduz importantes repercussões clínicas, uma vez que vem sendo verificado aumento da resistência à terapia antifúngica e da habilidade das células em resistir às defesas do sistema imune. Assim, o objetivo da pesquisa foi avaliar leveduras emergentes quanto à formação de biofilme analisando arquitetura e resposta antifúngica. Foram analisadas 15 leveduras emergentes provenientes de amostras clínicas e estocadas na Micoteca URM, Universidade Federal de Pernambuco, Brasil. As culturas foram autenticadas por características morfofisiológicas e proteômica/MALDI-TOF MS. A avaliação do biofilme foi por redução do XTT (quantitativo) e então, selecionados quanto a maior capacidade de formação. A arquitetura foi avaliada em discos de cateteres, analisados em 24 e 48 horas por microscopia de varredura. Foram realizados tratamento anti-biofilme com anfotericina B e fluconazol seguindo o protocolo do M27-A3 baseado em testes de sensibilidade com células planctônicas. As leveduras testadas formaram biofilme, destacando-se o isolado clínico de C. ciferri do qual, não há relatos quanto a este potencial de virulência. Na sensibilidade antifúngica, houve mudança no perfil entre células planctônicas e as agregadas, as quais se mostram mais resistente. Diante do alto potencial de virulência verificado nos isolados, é necessário a busca por novas substâncias como futura alternativa terapêutica de candidíase invasiva. / Invasive fungal infections caused by yeast are a frequent cause of death, especially in patients of Intensive Care Units. Although Candida albicans is the most common, emerging species of Candida, it has emerged as a major cause of serious infections, in addition to being resistant to treatments. Among the most important causes of this infection is the biofilm formation. Biofilm, a collection of microorganisms involved in an extracellular polymeric matrix of carbohydrates, proteins and nucleic acids, can adhere to living tissue and inert surfaces such as medical devices. Thus, it has important clinical repercussions, since it has been verified increased resistance to antifungal therapy and the ability of cells to resist immune system defenses. Thus, the objective of the research was to evaluate emerging yeasts regarding biofilm formation analyzing architecture and antifungal response. Fifteen emerging yeasts from clinical samples and stored at the URM Micoteca, Federal University of Pernambuco, Brazil, were analyzed. The cultures were authenticated by morphological and proteomic characteristics / MALDI-TOF MS. The evaluation of the biofilm was by reduction of the XTT (quantitative) and then, selected for the greater capacity of formation. The architecture was evaluated in catheter discs, analyzed in 24 and 48 hours by scanning microscopy. Antibiofilm treatment with amphotericin B and fluconazole following the M27-A3 protocol based on sensitivity tests with planktonic cells was performed. The yeasts tested formed a biofilm, with a clinical isolate of C. ciferri, of which there are no reports of this virulence potential. In the antifungal sensitivity, there was a change in the profile between planktonic cells and aggregates, which are more resistant. In view of the high potential of virulence in isolates, it is necessary to search for new substances as a future therapeutic alternative for invasive candidiasis.

Submitted by Fernanda Rodrigues de Lima (fernanda.rlima@ufpe.br) on 2018-07-10T20:36:36Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇAO Raul Felipe Neves Cavalcanti.pdf: 1548541 bytes, checksum: 024a6f0bffa916b91acd8f312ed413b2 (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-07-12T21:44:29Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇAO Raul Felipe Neves Cavalcanti.pdf: 1548541 bytes, checksum: 024a6f0bffa916b91acd8f312ed413b2 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-12T21:44:29Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇAO Raul Felipe Neves Cavalcanti.pdf: 1548541 bytes, checksum: 024a6f0bffa916b91acd8f312ed413b2 (MD5) Previous issue date: 2015-02-27 / CNPQ / Os fungos filamentosos são micro-organismos capazes de biodegradar hidrocarbonetos policíclicos aromáticos por possuírem um versátil sistema enzimático. Essas enzimas são responsáveis pela quebra de moléculas complexas como a lignina e hidrocarbonetos policíclicos aromáticos-HPAs como o antraceno. Os primeiros passos da biodegradação de HPAs ocorrem fora da célula fúngica, ou seja, as enzimas e os metabólitos que auxiliam nesse processo- como os biosurfactantes- são excretados ao meio externo. O presente trabalho teve como objetivo estudar a degradação do antraceno e as características dos secretomas dos fungos que apresentaram os maiores percentuais de degradação. Dos 20 fungos utilizados, foram selecionados os que apresentaram os menores tempos de degradação do antraceno, indicados pela viragem do indicador redox 2,6-diclorofenol-indofenol da coloração azul para incolor. A seguir, foram realizados os testes de degradação em caldo Büshnell Haas, utilizando Cunninghamella elegans e Aspergillus terreus. Perante os resultados de degradação obtidos por cromatografia gasosa, foi demonstrado que a C. elegans SIS41 não degradou o antraceno e o A. terreus, capaz de biodegradar 3,0% do HPA presente no meio suplementado com traços de sais e que, para tal, não há produção de biosurfactantes. O material metabolizado e secretado pelo fungo durante 10 e 20 dias, não mostrou toxicidade para a germinação das sementes e desenvolvimento de plântulas de Phaseolus vulgaris, apresentando porcentagem de germinação de 100%; e 70,79% de crescimento radicular, resultando num índice final de germinação igual a 79,63. As atividades enzimáticas do complexo lignolítico foram de 1012 U/L para a MnP, 184 U/L para a LiP e 207,5 U/L para a lacase. A prospecção das proteínas presentes no meio de cultura foi realizada através de solução metanólica de acetato de amônio, sendo obtido o material proteico, porém, metabólitos no secretoma influenciaram negativamente na focalização isoelétrica dos peptídeos, não sendo possível a análise de géis SDS-2D-PAGE. Na espectrometria de massas, foram sequenciadas 36 proteínas, sendo 7 identificadas pela plataforma do Mascot. As proteínas com significância estatística apresentaram desde funções catalíticas à de reconhecimento genética dos fungos. / Filamentous fungi are microorganisms able to degrade polycyclic aromatic hydrocarbons by having a versatile enzyme system. These enzyme systems are responsible for the breakdown of complex molecules such as lignin and PAHs (Polycyclic aromatic hydrocarbons) such as anthracene. The first step of biodegradation of PAHs occurs outside of the fungal cell, ie: enzymes and metabolites act in this process-like biosurfactantes- that are secreted to the external medium. This study aimed to determine the anthracene degradation and characteristics of secretomes of fungi that showed the best performance in degradation process, and the probable phytoxicity of the produced biomaterials. A total of 20 fungi were used, and the isolates that showed the lowest levels of anthracene degradation times were selected for further analyses. The efficiency of anthracene degradation was determined by the turn of the redox indicator 2,6-dichlorophenol-indophenol blue color to colorless method. The degradation tests were performed in Bushnell-Haas broth using Cunninghamella elegans and Aspergillus terreus, and the decreases in anthracene concentration were quantified by gas chromatography (GC). C. elegans SIS41 did not degrade anthracene. In contrast, A. terreus was able to biodegrade 3.0% PAH present in the medium supplemented with salts, but not producing biosurfactants. The materials metabolized and secreted by the fungus for 20 days did not show toxicity to the seed germination and development of Phaseolus vulgaris, showing percentage of 100% germination; and 70.79% of root growth, resulting in a final germination rate of 79.63. The enzymatic activity of the lignolitic complex were 1012 U.L-1 to MnP, 184 U.L-1 to LiP and 207.5 U.L-1 for the laccase. The prospection of proteins present in the medium carried out through the methanolic solution of ammonium acetate , resulting in precipitated protein extract. Metabolites in secretome influenced negatively the isoelectric focusing process of the peptides, turning not possible to obtain 2D-SDS-PAGE gels with enough quality for analyses of differential expression. However, using 1D PAGE analysis, 36 proteins were analyzed by mass spectrometry, and seven of them were identified by Mascot platform. The identified proteins were related to catalytic functions from the genetic recognition of fungi.

Orientadores: Angelica Zaninelli Schreiber, Anibal E. Vercesi / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-04T00:29:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cavalheiro_RenataAlves_M.pdf: 4268889 bytes, checksum: 5376f92a4294a0902998a087e75a9a41 (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: Nos últimos 15 anos, as infecções sistêmicas por patógenos fiíngicos oportunistas vêm aumentando assustadoramente. Entretanto, as alternativas terapêuticas continuam restritas. Em busca de novos alvos para alternativas terapêuticas, este trabalho busca conhecer melhor o metabolismo de algumas leveduras. Assim, foram estabelecidas curvas de crescimento para Candida albicans ATCC 90028, Candida krusei ATCC 6258, Cândida parapsilosis ATCC 22019 e Cryptococcus neoformans ATCC 90112, e determinados os tempos para início da fase exponencial, metabolicamente mais ativa. Para os estudos, necessita-se de células permeáveis a íons, assim, avaliou-se a produção de esferoplastos, com a determinação dos tempos de contato com a enzima específica para cada espécie. Avaliando mitocôndrias in situ e isoladas de C. albicans ATCC 90028, testes bioquímicos apontaram a presença de uma proteína desacopladora, confirmada por munodetecção. Foi também possível sugerir a presença desta proteína em Candida krusei ATCC 6258. Pode-se relatar a presença de vacúolo ácido nas células de Candida albicans ATCC 90028 e sugerir sua presença nas células de Candida krusei ATCC 6258. A cepa de C. albicans ATCC 90028 também possui um P-type W ATPase sensível a ortovanadato e insensível a bafilomicina e não possui trocador ea2+j W, por sua vez, C. krusei possui um P-type W ATPase insensível a bafilomicina, sensível a ortovanadato e um trocador Ca2+1'Ir. Características como uma cadeia alternativa para a transferência de elétrons, de oxidase alternativa e proteínas desacopladoras, são potencias alvos para estudos de alternativas terapêuticas para tratamento de infecções por estes agentes. Maior aprofundamento dos estudos aqui iniciados, poderão trazer grandes contn"buições para um melhor conhecimento do metabolismo destes agentes infecciosos / Abstract: In the last 15 years, opportunistic systemic fungal are increasing. However, the therapeutical alternatives are still restricted. In search of new targets for therapeutical drugs, this work proposes to understand better the metabolism of some yeasts. Growth curves of Candida albicans ATCC 90028, Candida krusei ATCC 6258, Candida parapsilosis ATCC 22019 and Cryptococcus neoformans ATCC 90112 was performed and the middle of the exponential phase of growth was determinated. For metabolic studies, is necessary to obtain permeable cells, withouth cell wa11. In order to have spheroplasts, the time of contact with the specific enzyme for each specie was evaluated. Biochemical tests, evaluating in situ and isolated C. albicans ATCC 90028 mitochondria showed the existence of an uncoupling protein, confumed by imunodetection. It was also possible to suggest the presence of this protein in Candida krusei ATCC 6258. Also can be related an acid vacuole in Candida albicans ATCC 90028 and suggest its presence in C. krusei ATCC 6258 cells. C.albicans ATCC 90028 strain also possess a P-type W ATPase sensible to orthovanadate and insensible to bafilomycin and does not have an Ca2+ Ilr exchanger, in turn, C. krusei A TCC 6258 possess a P-type W ATPase insensible to bafilomicin, sensible to ortovanadate and a ea2+1lr exchanger. Characteristics as an alterna tive chain to electrons transference, alternative oxidase and uncoupling proteins are potential targets to alternative therapeutic studies for treatment of infections caused by these agents. More studies in addition to these initiated here, will be of great contnoution for a better knowledge of these infectious agents / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestre em Ciências Médicas

Submitted by Pedro Barros (pedro.silvabarros@ufpe.br) on 2018-09-25T21:43:54Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Diogo Henrique Galiza Lopes.pdf: 1289949 bytes, checksum: f0396477efeb3542630552c6f39221ac (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-09-28T18:08:06Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Diogo Henrique Galiza Lopes.pdf: 1289949 bytes, checksum: f0396477efeb3542630552c6f39221ac (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-28T18:08:06Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Diogo Henrique Galiza Lopes.pdf: 1289949 bytes, checksum: f0396477efeb3542630552c6f39221ac (MD5) Previous issue date: 2016-02-24 / CAPES / Micro-organismos endofíticos são definidos como aqueles que vivem no interior dos tecidos das plantas sem causar danos aparente ao hospedeiro. Os fungos endofíticos são importantes fontes de novos produtos naturais com atividade biológica. A planta herbácea Symphytum officinale L. (Boraginaceae), conhecida como confrei, tem sido utilizada em diferentes formas terapêuticas. O objetivo desse estudo foi de avaliar o potencial antimicrobiano e a produção de L-asparaginase por fungos endofíticos do confrei (S. officinale L.). O material vegetal foi coletado no Centro de Educação e Formação em Medicina Popular (CEFOMP), Paulista-PE, e processada no Departamento de Micologia. A identificação dos endofíticos foi realizada por taxonomia clássica e os isolados que mostraram melhor desempenho nos testes antimicrobiano e enzimático foram identificados utilizando ferramentas da Biologia Molecular. Os micro-organismos utilizados na atividade antimicrobiana foram Enterobacter aerogenes (UFPEDA 348), Mycobacterium smegmatis (UFPEDA 71), Staphylococcus aureus (UFPEDA 02), Candida albicans (URM 7095), C. luzitaniae (URM 2101) e C. parapsilosis (URM 5789), e executados através da técnica de bloco de gelose. Quanto à produção da enzima, inicialmente foi verificado sua produção em meio líquido e posteriormente caracterizadas parcialmente. Foram isolados 117 endofíticos de 105 fragmentos e 11 gêneros identificados, além de muitos serem agrupados como Mycelia sterilia. Os isolados de Penicillium apresentaram os melhores resultados frente aos testes e teve sua identificação morfológica autenticada por meio do sequenciamento do DNA. Na atividade antimicrobiana, o isolado P. citrinum R4.5 obteve o maior halo de inibição frente as bactérias S. aureus e E. aureogenes (1,3 cm). O isolado P. citrinum F2.12 obteve maior resultado na produção da enzima (0,175 U/ml) e foi selecionado para posterior avaliação de efeito e estabilidade ao pH e a temperatura. A atividade mais elevada da L-asparaginase foi observada em solução tampão Tris-HCl pH 8,6 (0,0116 U/mL) e obteve mais de 50% da sua atividade quando incubada por 30 min e 46,91% quando incubada a 1h. Apresentou a atividade máxima a 40 °C (0,092 U/ml) e foi estável por 1h, mantendo-se entre 10-13,5% de sua atividade. Já no tempo de 30 min a enzima não mostrou estabilidade. Endofíticos da S. officinale são produtores de metabólitos bioativos de potencial uso medicinal, e são indicados para futuros estudos. / Endophytic microorganisms are defined as those who live inside plant tissues without causing apparent damage to the host. The endophytic fungi are important sources of new natural products with biological activity. The Symphytum officinale herbaceous L. (Boraginaceae), known as comfrey, has been used in various therapeutic methods. The aim of this study was to evaluate the antimicrobial potential and the production of L-asparaginase by endophytic fungi from comfrey (S. officinale L.). The plant material was collected in the Center for Education and Training in Popular Medicine (CEFOMP), Paulista-PE and processed in the Department of Mycology. The identification of endophyte was performed by classical taxonomy and isolates that showed improved performance in the enzymatic and the antimicrobial tests were identified using molecular biology tools. The micro-organisms used in antimicrobial activity were Enterobacter aerogenes (UFPEDA 348), Mycobacterium smegmatis (UFPEDA 71), Staphylococcus aureus (UFPEDA 02), Candida albicans (URM 7095), C. luzitaniae (URM 2101) and C. parapsilosis (URM 5789), and run through agarose block technique. Regarding the production of the enzyme, was initially verified their production in a liquid medium and subsequently partially characterized. 117 endophytic 105 fragments and 11 genera identified were isolated, and many are grouped as Mycelia sterilia. The Penicillium isolates showed the best results in view of tests and had a certified morphological identification through DNA sequencing. The antimicrobial activity, the isolated P. citrinum R4.5 had the highest inhibition zone front bacteria S. aureus and E. aureogenes (1.3 cm). The isolated P. citrinum F2.12 obtained result in higher production of enzyme (0.175 U / ml) and was selected for further evaluation of effects and stability to pH and temperature. The highest activity of L-asparaginase was observed in solution pH 8.6 Tris-HCl buffer (0.0116 U / ml) and obtained more than 50% of its activity when incubated for 30 min and 46.91% when incubated with 1h. Showed the maximum activity at 40 ° C (0.092 U / ml) and was stable for 1h, keeping between 10 to 13.5% of its activity. In the 30-min showed the enzyme stability. Endophytic S. officinale are producers of bioactive metabolites of potential medical use and are suitable for future studies.