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Biologia de Ceratobasidium spp. associada à doença queima dos fios no chá (Camellia sinensis L.)Silva, Renato Boreli [UNESP] 22 January 2013 (has links) (PDF)
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silva_rb_me_botfca.pdf: 752709 bytes, checksum: 1c8874b0cf7a904e4abe6060f9ec4cc0 (MD5) / A cultura do chá na região do Vale do Ribeira está localizada ao Sul do Estado de São Paulo, onde se concentra uma grande área de Floresta Mata Atlântica do Brasil. A ‘Queima dos fios’ causada pelo fungo Rhizoctonia binucleada (Ceratobasidium spp.; sin. Pellicularia koleroga) é a principal doença que ataca a cultura. A espécie deste fungo ainda não é totalmente conhecida, bem como as informações sobre sua biologia. Deste modo, o objetivo do presente trabalho foi elucidar aspectos da biologia do fungo, realizando a caracterização citomorfológica, cultural, patogênica e molecular de Rhizoctonia binucleada associada a queima dos fios do chá no Vale do Ribeira - SP. Em uma área de cultivo do chá, rodeado por um fragmento de Floresta Mata Atlântica, realizou-se a coleta de ramos e folhas atacadas pela queima do fio e o isolamento em laboratório, obtendo cinco isolados com características específicas de Rhizoctonia spp. Verificou-se que todos os isolados apresentaram dois núcleos por célula, sendo considerados binucleados. A indução da fase teleomórfica foi realizada, mas não houve sucesso na formação completa das estruturas sexuadas de Ceratobasidium spp., porém, houve escassa formação de himênio e metabasidios por alguns isolados, nos meios de cultura Batata dextrose ágar, Agua ágar, Corn meal ágar e Czapeck dox ágar, sob maior ocorrência na condição de fotoperíodo 12h luz/12h escuro a 24°C. Todos os isolados do chá não apresentaram interação de anastomose de hifas com os isolados padrões de Rhizoctonia binucleada GA-A, GA-Bo, GA-P e GA-Q, não pertencendo a estes grupos. A compatibilidade somática entre os isolados do chá apresentaram a formação de três grupos de compatibilidade somática:... / The tea culture in the Vale do Ribeira is located in south of Sao Paulo State which concentrates the large area of Brazil Atlantic Forest. The ‘Thread blight ' caused by the fungus binucleate Rhizoctonia (Ceratobasidium spp.; Sin. Pellicularia koleroga) is the main disease that attacks the culture. The species of this fungus is not yet fully known, as well as information about its biology. Thus, the aim of this study was to elucidate the fungus biology, by the characterization of cytomorphological, cultural, molecular and pathogenic binucleate Rhizoctonia associated with the tea thread blight in the Ribeira Valley - SP, Brazil. In a area of growing tea, surrounded by a fragment of Atlantic Forest was collect branches and leaves attacked by thread blight and forwarded by laboratory isolation, obtaining five isolates with specific characteristics of Rhizoctonia spp. It was verified that all isolates showed two nuclei per cell being considered binucleate. The teleomorph induction was performed, but there was no success in the complete formation of sexed Ceratobasidium sp structures. However, there was scarce formation of hymenium and metabasidias by some isolates in culture medium Potato dextrose agar, Water agar, Corn meal agar and Czapeck dox agar, under increased occurrence in photoperiod condition 12h light /12h dark at 24 ° C. All isolates of tea showed no interaction of hyphal anastomosis with the standard isolates of binucleate Rhizoctonia GA-A, GA-Bo, GA and GA-P-Q not belonging to these anastomosis groups. The somatic compatibility among isolates of tea showed the formation of three somatic compatibility groups: GCS-1, GCS-2 and GCS-1 among the five isolates showing similarity between the microscopic and macroscopic reactions. The morphological characteristics of the colonies also allowed the... (Complete abstract click electronic access below)
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Influência do receptor Toll-like 2 na defesa do hospedeiro contra o fungo Sporothrix schenckiiNegrini, Thais de Cássia [UNESP] 09 November 2012 (has links) (PDF)
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negrini_tc_dr_arafcf_parcial.pdf: 223071 bytes, checksum: c6fae0658b97152e249d91079e605557 (MD5) Bitstreams deleted on 2014-12-19T18:32:45Z: negrini_tc_dr_arafcf_parcial.pdf,Bitstream added on 2014-12-19T18:33:33Z : No. of bitstreams: 1
000703332.pdf: 3299056 bytes, checksum: 31d93c1a5e3196b17fe661cc1feec647 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / A esporotricose é uma infecção causada pelo fungo dimórfico Sporothrix schenckiii, o qual contamina o hospedeiro através de locais com pequenos traumas, causando lesões cutâneas, subcutâneas que podem se disseminar para outros tecidos. Os mecanismos imunológicos envolvidos na prevenção e controle da esporotricose sugerem que a imunidade mediada por células apresenta um importante papel na proteção do hospedeiro contra S. schenckii. Os receptores Toll-like (TLR), presentes nas células do sistema imune inato, destacam-se pelo seu papel central na ligação de patógenos e iniciação da resposta imune. A ativação desses receptores por padrões moleculares associados à patógenos (PAMPs) induz a fagocitose, a liberação de citocinas e mediadores químicos que atuam no sistema imune eliminando ou favorecendo a infecção. O TLR-2 está envolvido na resposta do hospedeiro contra uma variedade de fungos. Portanto, o objetivo do presente estudo foi avaliar a participação do TLR-2 na resposta imunológica induzida pelo S. schenckii. Foram utilizados camundongos C57BL/6 (WT) e C57BL/6 TLR-2 Knockout (TLR-2-/-) para que se conseguisse verificar, durante um período de 10 semanas de infecção esporotricótica, a influência do TLR-2 na produção das citocinas IL-1β, IL-12 e TNF-α por macrófagos; a estimulação dos macrófagos através da liberação de NO, a participação do TLR-2 na geração dos perfis celulares Th1, Th2 e Th17 e, por fim, a influência desse receptor na produção de IFN-γ, IL-6, IL-10, IL-4, IL-17 e TGF-β. Entre os antígenos do fungo S. schenckii utilizados como estímulo nas culturas celulares, verificou-se que o antígeno lipídico é o mais eficaz na capacidade de estimular a produção dos mediadores... / Sporotrichosis is an infection caused by the dimorphic fungus Sporothrix schenckii, which infects the host through local minor trauma, causing skin and subcutaneous lesions which can spread to other tissues. The immunological mechanisms involved in sporotrichosis prevention and control suggest that cell-mediated immunity plays an important role in protecting the host against S. schenckii. The Toll-like receptors (TLR), found on innate immune system cells, for their central role in pathogen-binding and immune response initiation. The activation of these receptors by pathogen-associated molecular patterns (PAMPs) induces phagocytosis and the release of chemical mediators and cytokines which direct the immune system in favoring or eliminating the infection. TLR-2 is involved in host responses against a variety of fungi. Therefore, the aim of this study was to evaluate the involvement of TLR-2 in the immune response induced by S. schenckii. C57BL/6 mice (WT) and C57BL/6 TLR-2 knockout (TLR-2-/-) were used in order to evaluate, over a period of 10 weeks of sporotrichotic infection, the influence of TLR-2 over macrophages production of the cytokines IL-1β , IL-12 and TNF-α, their stimulation level by NO release, the involvement of TLR-2 in the generation of Th1, Th2 and Th17 cell profiles and, finally, the influence of this receptor in the production of IFN -γ, IL-6, IL-10, IL-4, IL-17 and TGF-β. Among all the S. schenckii antigens used as stimulus in cell cultures, it was found that the lipid antigen is the most effective in regard... (Complete abstract click electronic access below)
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Substâncias antimicrobianas ou citotóxicas em micro-organismos endofíticos foliares / Composés antimicrobiens ou cytotoxiques à partir de micro-organismes endophytes foliairesCasella, Thiago Meirelles 31 July 2014 (has links)
Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Programa De Pós-Graduação Em Ciências Médicas, Université Des Antilles Et de La Guyane, École Doctorale Santé, Environnement Et Sociétés Dans Les Amériques, 2014. / Orientador em co-tutela: Dr. Didier Stien. / Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2015-06-24T17:07:12Z
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2014_ThiagoMeirellesCasella.pdf: 5683604 bytes, checksum: 8180115a6e697860a1f952637c723f3c (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2015-06-26T13:00:26Z (GMT) No. of bitstreams: 1
2014_ThiagoMeirellesCasella.pdf: 5683604 bytes, checksum: 8180115a6e697860a1f952637c723f3c (MD5) / Made available in DSpace on 2015-06-26T13:00:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1
2014_ThiagoMeirellesCasella.pdf: 5683604 bytes, checksum: 8180115a6e697860a1f952637c723f3c (MD5) / Devido à natureza simbiótica dos micro-organismos endofíticos, este estudo teve como objetivo investigar a atividade antibacteriana, antifúngica e citotóxica em metabólitos secundários de extratos de fungos endofíticos foliares de plantas do bioma Amazônia e Cerrado. Neste trabalho de tese foram isolados 147 micro-organismos cultiváveis (130 fungos, 3 bactérias e 14 fungos não-identificados ou desconhecidos) a partir de 28 plantas (4 espécies coletadas no Brasil e 24 na Guiana Francesa). Todos os micro-organismos foram identificados por análise molecular de regiões específicas de DNAr, com uso de técnicas de sequenciamento genômico. Fungos endofíticos da ordem Xylariales foram os de maior frequência de isolamento neste estudo, representados por 25 isolados. Extratos brutos em AcOEt foram produzidos a partir de culturas de cada micro-organismo isolado. Uma proporção relativa significante (23,1%) dos extratos demonstrou atividade em Candida albicans ATCC 10213, enquanto 4% foram ativos em Staphylococcus aureus ATCC 29213. O potencial citotóxico dos extratos foi avaliado para as linhagens celulares humanas KB (carcinoma cervical uterino), MDA-MB-435 (melanoma), e MRC-5 (fibroblastos de pulmão normal), resultando em proporção significante com atividade de inibição da proliferação celular (24,4%, 23,1% e 16,3%, respectivamente). Dezoito metabólitos secundários foram isolados a partir do fracionamento de oito extratos brutos endofíticos. Dezessete destas substâncias já tinham sido descritas anteriormente na literatura: ácido pilifórmico (24) e griseofulvina (25) isoladas de Xylaria cubensis SNB-GCI02; phomopirona A (26), pyrenocina A (27), alterperilenol (28) e novae-zelandina A (29) isoladas de Lewia infectoria SNB-GTC2402; 5-metilmelleina (31) e Dihidrosporothriolida (32) isoladas de Xylaria sp. SNB-GTC2501; mycoleptodiscina A (34) e mycoleptodiscina B (35) isoladas de Mycoleptodiscus sp. SNB-GTC2304; mycoepoxidieno (36) e altiloxina A (37) isoladas de Diaporthe pseudomangiferae SNB-GSS10; acremonisol A (40), semicochliodinol A (41) e cochliodinol (42) isoladas de Chaetomium globosum SNB-GTC2114; colletofragarona A2 (43) isolada de Colletotrichum sp. SNB-GTC0201; flavoglaucina (44) isolada de Eurotium rubrum BBS01. Dentre estas substâncias, a flavoglaucina (44) isolada de E. rubrum BBS01, demonstrou atividade comparável ao controle fluconazol em C. albicans (CIM de 4 μg.mL-1). Esta substância (44) apresentou IC50 >10 μM em células normais MRC-5, tornando-se candidata para estudos posteriores. Neste trabalho foi identificado pela primeira vez a atividade citotóxica da colletofragarona A2 (43), isolada de Colletotrichum sp. SNB-GTC0201. A substância inédita nomeada pyrrocidina C (30) foi isolada a partir de L. infectoria SNB-GTC2402 e identificada através de análises espectroscópicas (Casella et al., 2013). A pyrrocidina C (30) foi ativa em S. aureus ATCC 10213 (CIM de 2 μg.mL-1), e não foi considerada citotóxica para as células normais MRC-5 (IC50 >10 μM), demonstrando seletividade na ação antimicrobiana. Estes resultados demonstram a grande diversidade fúngica endofítica em plantas do bioma Amazônia e Cerrado, e a quimiodiversidade associada aos metabólitos secundários destes micro-organismos. Fungos endofíticos tropicais, como os vistos neste trabalho, podem emergir como uma nova fonte de substâncias antimicrobianas e citotóxicas. ____________________________________________________________________________________ RÉSUMÉ / En raison de la nature symbiotique des micro-organismes endophytes, cette étude visait à étudier l'activité antibactérienne, antifongique et cytotoxique chez les métabolites secondaires des extraits endophytes foliaires de plantes de l'Amazonie brésilienne et du Cerrado. Dans ce travail de thèse 147 micro-organismes cultivables ont été isolés (130 champignons, 3 bactéries e 14 champignons non-identifiés ou inconnus) à partir de 28 plantes (4 espèces collectées au Brésil et 24 en Guyane Française). Tous les micro-organismes furent identifiés par analyse moléculaire des régions spécifiques de l'ADNr en utilisant des techniques de séquençage génomique. Des champignons endophytes de l’ordre des Xylariales furent ceux de plus importante fréquence d’isolation dans cette étude, représentés par 25 isolats. Des extraits bruts à l’AcOEt furent produits à partir de cultures de chaque micro-organisme isolé. Une proportion relative signifiante (23,1%) des extraits démontra une activité sur Candida albicans ATCC 10213, pendant que 4% furent actifs sur Staphylococcus aureus ATCC 29213. Le potentiel cytotoxique des extraits fut évalué pour des lignées cellulaires humaines KB (carcinome cervical utérin), MDA-MB-435 (mélanome), et MRC-5 (fibroblastes de poumon normal), résultant en proportion signifiante avec activité d’inhibition de la prolifération cellulaire (24,4%, 23,1% e 16,3%, respectivement). Dix-huit métabolites secondaires furent isolés et identifiés à partir du fractionnement des extraits bruts de huit endophytes. Dix-sept de ces substances furent déjà décrites précédemment dans la littérature: l’acide piliformique (24) et la griséofulvine (25) isolés à partir de Xylaria cubensis SNB-GCI02; La phomopirone (26), la pyrenocine (27), l’alterpérilenol (28) et la novae-zelandine (29), isolés de Lewia infectoria SNB-GTC2402; 5-métilmelleina (31) et la dihidrosporothrioride (32) isolées à partir de Xylaria sp. SNB-GTC2501; La mycoleptodiscine (34) et la mycoleptodiscine B (35) isolées à partir de Mycoleptodiscus sp. SNB-GTC2304; le mycoepoxidiène (36) et la altiloxina A (37) isolés à partir de Diaporthe pseudomangiferae SNB-GSS10; L’acremonisol (40), le semicochliodinol (41) et le cochliodinol (42) isolés à partir de Chaetomium globosum SNB-GTC2114; la colletofragarone A2 (43) isolée à partir de Colletotrichum sp. SNB-GTC0201; la flavoglaucine (44) isolée à partir de Eurotium rubrum BBS01. Parmi ces substances, la flavoglaucine (44) isolée à partir de E. rubrum BBS01 démontra une activité comparable au contrôle fluconazol en C. albicans (CIM de 4 μg.mL-1). La substance (44) présenta IC50 >10 μM sur cellules normales MRC-5, ce qui en fait un candidat pour des études ultérieures. Dans ce travail, fut identifié pour la première fois l’activité de la colletofragarone A2 (43) isolée à partir de Colletotrichum sp. SNB-GTC0201. La substance inédite nommée pyrrocidine C (30) fut isolée à partir de L. infectoria SNB-GTC2402 et identifiée par des analyses spectroscopiques (Casella et al., 2013). La pyrrocidine C (30) fut active en S. aureus ATCC 10213 (CIM de 2 μg.mL-1) et ne fut pas considérées cytotoxique pour les cellules normales MRC-5 (IC50 >10 μM), démontrant une sélectivité dans l’action antimicrobienne. Ces résultats démontrent la grande diversité des endophytes fongiques chez les plantes de l'Amazonie brésilienne et du Cerrado et la grande chimiodiversité associée aux métabolites secondaires de ces micro-organismes. Des champignons endophytes tropicaux, comme ceux présentés dans cette étude, peuvent apparaître comme une nouvelle source de substances antimicrobiennes et cytotoxiques. ____________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Because of the symbiotic nature of endophytes, this survey aims to investigate the probality of discovering antibacterial, antifungal and cytotoxic activities in secondary metabolites of leaf endophytes isolated from plants of Amazon and Cerrado biomes. In this study, 147 cultivable microorganisms were isolated (130 fungi, 3 bacteria and 14 unidentified or unknown microbes) from 28 plant species (4 species collected in Brazil and 24 in French Guyana). All endophytes were identified by molecular analyses of specific rDNA regions, with genomic sequencing techniques. Fungal endophytes belonging to Xylariales order were the most frequently isolated in this study, represented by 25 isolates. Crude AcOEt extracts were produced from cultures of each isolated endophyte. A significant relative proportion (23,1%) of extracts showed activity in Candida albicans ATCC 10213, while 4% were active in Staphylococcus aureus ATCC 29213. The cytotoxic potencial of the extracts was evaluated for human cell lines KB (uterin cervical carcinome), MDA-MB-435 (melanoma) and MRC-5 (normal lung fibroblasts), and a significant proportion of them showed cellular proliferation inhibition (24,4%, 23,1% e 16,3%, respectively). Eighteen secondary metabolites were isolated by the fractionation of eight endophytic extracts. Seventeen of these substances had already been previously described in the literature: piliformic acid (24) and griseofulvin (25) isolated from Xylaria cubensis SNB-GCI02; phomopiron A (26), pyrenocin A (27), alterperilenol (28) and novae-zelandin A (29) isolated from Lewia infectoria SNB-GTC2402; 5-metilmellein (31) and dihidrosporothriorid (32) isolated from Xylaria sp. SNB-GTC2501; mycoleptodiscin A (34) and mycoleptodiscin B (35) isolated from Mycoleptodiscus sp. SNB-GTC2304; mycoepoxidien (36) and altiloxin A (37) isolated from Diaporthe pseudomangiferae SNB-GSS10; acremonisol A (40), semicochliodinol A (41) and cochliodinol (42) isolated from Chaetomium globosum SNB-GTC2114; colletofragaron A2 (43) isolated from Colletotrichum sp. SNB-GTC0201; flavoglaucin (44) isolated from Eurotium rubrum BBS01. Among these substances, flavoglaucin (44), isolated from E. rubrum BBS01, showed comparable antifungal activity with the positive control fluconazol in C. albicans (MIC of 4 μg.mL-1). Flavoglaucin (44) also showed IC50 >10 μM in normal MRC-5 cells, becoming a good candidate for further studies. In this work, the cytotoxic activity of colletofragaron A2 (43), isolated from Colletotrichum sp. SNB-GTC0201 was described for the first time. The unpublished substance named pyrrocidin C (30) isolated from L. infectoria SNB-GTC2402 was identified by spectroscopic analyses (Casella et al., 2013). The pyrrocidin C (30) was active in S. aureus ATCC 10213 (MIC of 2 μg.mL-1), and was not considered cytotoxic for normal MRC-5 cells (IC50 >10 μM), showing selectivity in antimicrobial activity. These results demonstrate the great endophytic fungal diversity in plants of Amazon and Cerrado biomes, along with the chemodiversity associated to the secondary metabolites of these endophytes. Tropical fungal endophytes, like those seen in this work, may emerge as a new source of antimicrobial and cytotoxic substances.
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Fungos associados às plantas ornamentais tropicais no Distrito FederalCosta, Caroline Rabelo January 2007 (has links)
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, 2007. / Submitted by Fernanda Weschenfelder (nandaweschenfelder@gmail.com) on 2010-01-12T19:01:18Z
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Previous issue date: 2007 / A floricultura tropical têm-se se destacado como uma rentável opção para o agronegócio, em virtude da sua beleza, rusticidade e exoticidade. Existem hoje no Brasil, vários pólos produtores, dentre eles se destaca o Distrito Federal, devido ao seu consumo per capita e condições de cultivo, tais como altitude, localização e demanda. Condições de cultivo associada à falta de informação e condições fitossanitárias inadequadas, limitam a produção, causando danos e prejuízos. Em vista desses fatores, o objetivo deste trabalho foi realizar um levantamento dos sintomas associados à fitopatógenos de origem fúngica das famílias Heliconiaceae, Zingiberaceae, Costaceae, Strelitziaceae e Musaceae. As coletas foram realizadas em dois núcleos produtores, Planaltina e Brazlândia-DF, com técnicas de cultivo diferentes, e as amostras com sintomas levadas para o laboratório de Fitopatologia da Universidade de Brasília para análise. O material coletado foi submetido diretamente ao exame em microspcópio estereoscópico e microscópio ótico, identificando suas estruturas, fotografados e parte do material infestado foi prensado, para secagem. Posteriormente, as amostras foram identificadas, numeradas, rotuladas e depositadas na Coleção Micológica do Herbário da Universidade de Brasília. Vários tipos de sintomas foram encontrados, dentre eles, uma maior freqüência de manchas foliares. Fungos do gênero Bipolaris, foram os patógenos mais frenquentes. O fungo Colletotrichum gloeosporioides, foi identificado causando doença juntamente com sua fase teleomórfica, Glomerella cingulata em folhas de Etlingera elatior e houve em várias amostras uma associação de patógenos numa mesma lesão ou mancha, sendo notado um complexo de doença nas plantas analisadas. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The tropical floricultura has been distinguished as an income-producing option for the agribusiness, in virtue of its beauty, rusticidade and exoticidade. They exist today in producing Brazil, some polar regions, teeth they if it detaches the District Federal, due to its per capita consumption and conditions of culture, such as altitude, localization and demand. Conditions of associated culture healthy plants lack of information and inadequate conditions, limit the production, causing damages and damages. In sight of these factors, the objective of this work was to carry through a survey of the symptoms patogens of plants associates of the fungic origin of the families Heliconiaceae, Zingiberaceae, Costaceae, Strelitziaceae and Musaceae. The collections had been carried through in two producing nuclei, Planaltina and Brazlândia-DF, with different techniques of culture, and has samples with taken symptoms for the laboratory of Fitopatologia of the University of Brasilia for analysis. The collected material was submitted directly to the examination in followed stereoscopic microscope and ótico microscope, identifying its structures, photographed and part of the infested material was pressed, for drying. Later, samples they had been identified, numbered, friction and deposited in the Micológica Collection of the Herbário of the University of Brasilia. Some types of symptoms, had been found, amongst them, a bigger frequency of foliares spots. Fungi of the Bipolaris sort, had been the frequent patogens. Some fungos as Colletotrichum gloeosporioides, were identified causing illness together with its teleomorphic phase, Glomerella cingulata in leves of Etlingera elatior and had in some samples an association of patogens in one same injury or spot, being noticed a complex of illness in the analyzed plants.
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Influência do receptor Toll-like 2 na defesa do hospedeiro contra o fungo Sporothrix schenckii /Negrini, Thais de Cássia. January 2012 (has links)
Orientador: Iracilda Zeppone Carlos / Coorientador: Luis Carlos Spolidorio / Banca: José Francisco Hofling / Banca: Flavia Sammartino Mariano Rodrigues / Banca: Cristiane Duque / Banca: Janaina de Cassia Orlandi Sardi / Resumo: A esporotricose é uma infecção causada pelo fungo dimórfico Sporothrix schenckiii, o qual contamina o hospedeiro através de locais com pequenos traumas, causando lesões cutâneas, subcutâneas que podem se disseminar para outros tecidos. Os mecanismos imunológicos envolvidos na prevenção e controle da esporotricose sugerem que a imunidade mediada por células apresenta um importante papel na proteção do hospedeiro contra S. schenckii. Os receptores Toll-like (TLR), presentes nas células do sistema imune inato, destacam-se pelo seu papel central na ligação de patógenos e iniciação da resposta imune. A ativação desses receptores por padrões moleculares associados à patógenos (PAMPs) induz a fagocitose, a liberação de citocinas e mediadores químicos que atuam no sistema imune eliminando ou favorecendo a infecção. O TLR-2 está envolvido na resposta do hospedeiro contra uma variedade de fungos. Portanto, o objetivo do presente estudo foi avaliar a participação do TLR-2 na resposta imunológica induzida pelo S. schenckii. Foram utilizados camundongos C57BL/6 (WT) e C57BL/6 TLR-2 Knockout (TLR-2-/-) para que se conseguisse verificar, durante um período de 10 semanas de infecção esporotricótica, a influência do TLR-2 na produção das citocinas IL-1β, IL-12 e TNF-α por macrófagos; a estimulação dos macrófagos através da liberação de NO, a participação do TLR-2 na geração dos perfis celulares Th1, Th2 e Th17 e, por fim, a influência desse receptor na produção de IFN-γ, IL-6, IL-10, IL-4, IL-17 e TGF-β. Entre os antígenos do fungo S. schenckii utilizados como estímulo nas culturas celulares, verificou-se que o antígeno lipídico é o mais eficaz na capacidade de estimular a produção dos mediadores... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Sporotrichosis is an infection caused by the dimorphic fungus Sporothrix schenckii, which infects the host through local minor trauma, causing skin and subcutaneous lesions which can spread to other tissues. The immunological mechanisms involved in sporotrichosis prevention and control suggest that cell-mediated immunity plays an important role in protecting the host against S. schenckii. The Toll-like receptors (TLR), found on innate immune system cells, for their central role in pathogen-binding and immune response initiation. The activation of these receptors by pathogen-associated molecular patterns (PAMPs) induces phagocytosis and the release of chemical mediators and cytokines which direct the immune system in favoring or eliminating the infection. TLR-2 is involved in host responses against a variety of fungi. Therefore, the aim of this study was to evaluate the involvement of TLR-2 in the immune response induced by S. schenckii. C57BL/6 mice (WT) and C57BL/6 TLR-2 knockout (TLR-2-/-) were used in order to evaluate, over a period of 10 weeks of sporotrichotic infection, the influence of TLR-2 over macrophages production of the cytokines IL-1β , IL-12 and TNF-α, their stimulation level by NO release, the involvement of TLR-2 in the generation of Th1, Th2 and Th17 cell profiles and, finally, the influence of this receptor in the production of IFN -γ, IL-6, IL-10, IL-4, IL-17 and TGF-β. Among all the S. schenckii antigens used as stimulus in cell cultures, it was found that the lipid antigen is the most effective in regard... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor
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Biologia de Ceratobasidium spp. associada à doença queima dos fios no chá (Camellia sinensis L.) /Silva, Renato Boreli, 1986- January 2013 (has links)
Orientador: Edson Luiz Furtado / Banca: Marco Antonio Basseto / Banca: Ana Carolina Firmino / Resumo: A cultura do chá na região do Vale do Ribeira está localizada ao Sul do Estado de São Paulo, onde se concentra uma grande área de Floresta Mata Atlântica do Brasil. A 'Queima dos fios' causada pelo fungo Rhizoctonia binucleada (Ceratobasidium spp.; sin. Pellicularia koleroga) é a principal doença que ataca a cultura. A espécie deste fungo ainda não é totalmente conhecida, bem como as informações sobre sua biologia. Deste modo, o objetivo do presente trabalho foi elucidar aspectos da biologia do fungo, realizando a caracterização citomorfológica, cultural, patogênica e molecular de Rhizoctonia binucleada associada a queima dos fios do chá no Vale do Ribeira - SP. Em uma área de cultivo do chá, rodeado por um fragmento de Floresta Mata Atlântica, realizou-se a coleta de ramos e folhas atacadas pela queima do fio e o isolamento em laboratório, obtendo cinco isolados com características específicas de Rhizoctonia spp. Verificou-se que todos os isolados apresentaram dois núcleos por célula, sendo considerados binucleados. A indução da fase teleomórfica foi realizada, mas não houve sucesso na formação completa das estruturas sexuadas de Ceratobasidium spp., porém, houve escassa formação de himênio e metabasidios por alguns isolados, nos meios de cultura Batata dextrose ágar, Agua ágar, Corn meal ágar e Czapeck dox ágar, sob maior ocorrência na condição de fotoperíodo 12h luz/12h escuro a 24°C. Todos os isolados do chá não apresentaram interação de anastomose de hifas com os isolados padrões de Rhizoctonia binucleada GA-A, GA-Bo, GA-P e GA-Q, não pertencendo a estes grupos. A compatibilidade somática entre os isolados do chá apresentaram a formação de três grupos de compatibilidade somática: ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The tea culture in the Vale do Ribeira is located in south of Sao Paulo State which concentrates the large area of Brazil Atlantic Forest. The 'Thread blight ' caused by the fungus binucleate Rhizoctonia (Ceratobasidium spp.; Sin. Pellicularia koleroga) is the main disease that attacks the culture. The species of this fungus is not yet fully known, as well as information about its biology. Thus, the aim of this study was to elucidate the fungus biology, by the characterization of cytomorphological, cultural, molecular and pathogenic binucleate Rhizoctonia associated with the tea thread blight in the Ribeira Valley - SP, Brazil. In a area of growing tea, surrounded by a fragment of Atlantic Forest was collect branches and leaves attacked by thread blight and forwarded by laboratory isolation, obtaining five isolates with specific characteristics of Rhizoctonia spp. It was verified that all isolates showed two nuclei per cell being considered binucleate. The teleomorph induction was performed, but there was no success in the complete formation of sexed Ceratobasidium sp structures. However, there was scarce formation of hymenium and metabasidias by some isolates in culture medium Potato dextrose agar, Water agar, Corn meal agar and Czapeck dox agar, under increased occurrence in photoperiod condition 12h light /12h dark at 24 ° C. All isolates of tea showed no interaction of hyphal anastomosis with the standard isolates of binucleate Rhizoctonia GA-A, GA-Bo, GA and GA-P-Q not belonging to these anastomosis groups. The somatic compatibility among isolates of tea showed the formation of three somatic compatibility groups: GCS-1, GCS-2 and GCS-1 among the five isolates showing similarity between the microscopic and macroscopic reactions. The morphological characteristics of the colonies also allowed the... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre
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Fisiologia, patogenicidade, sensibilidade a fungicidas e caracterização molecular de Phytophthora capsici Leonian do pimentão (Capsicum annuum L.)Marque, Janaína Marianno de [UNESP] 03 1900 (has links) (PDF)
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marque_jm_dr_botfca.pdf: 404215 bytes, checksum: f934dbbcca84c44e4bc67cbd5b6af157 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O pimentão (Capsicum annuum) é uma hortaliça de grande consumo no Brasil, e a murchadeira, causada por Phytophthora capsici, é uma das principais doenças da cultura, podendo causar perdas de até 100%. Este trabalho visou a avaliação de diversas características do patógeno: agressividade, nível de resistência dos genótipos de pimentão cultivados no estado de São Paulo, sensibilidade a fungicidas, oxigenação para produção de esporângios e caracterização molecular. A determinação destas variáveis tem importância prática para o produtor, na escolha correta de genótipo de pimentão e estratégia de controle; e, para instituições de pesquisa, na otimização da produção de inóculo para programas de melhoramento. Concluiu-se que a agressividade não depende do grupo de compatibilidade; assim como a sensibilidade a fungicidas e o comportamento em relação à oxigenação. Entre os genótipos escolhidos para o teste de resistência o híbrido Nathalie foi o que apresentou o melhor nível. A idade das plantas influenciou a manifestação da resistência. O balanço O2/CO2 influenciou diretamente na esporulação do patógeno. Em P. capsici marcadores de RAPD não foram consistentes na separação de grupos de compatibilidade. / The sweet pepper (Capsicum annuum) is a vegetable well consumed in Brazil, and the blight, caused by Phytophthora capsici, is the main disease of the culture, and can cause losses up to 100%. This work sought the evaluation of several characteristics of the pathogen: aggressiveness, level of resistance of pepper genotypes cultivated in the state of São Paulo, sensibility to fungicides, aeration for sporangia production and molecular characterization. The determination of these characteristics have practical importance to the grower, for the correct choice of pepper genotype and control strategy; and, to research institutions, for the correct inoculum production in breeding programs. It was concluded that the aggressiveness doesn't depend of the mating type; as well as the sensibility to fungicides and the behaviour in relation to the aeration. Among the genotypes in the resistance test, the hybrid Nathalie was the one that presented the best level. The age of the plants influenced the manifestation of the resistance. The O2/CO2 balance had direst influence on the sporulation of the pathogen. In P. capsici RAPD markers are not consistent in the separation of mating types.
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Purificação e caracterização bioquímica e biofísica de uma xilanase de aspergillus foetidus / Purification and biochemical and biophysical characterization of a xylanase from aspergillus foetidusCunha, Luana Lima da 04 March 2016 (has links)
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas, 2016. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2016-05-04T13:32:53Z
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2016_LuanaLimadaCunha_Parcial.pdf: 1000341 bytes, checksum: 949ad3195fafda051472c5ae2102e68d (MD5) / A casca de soja é um resíduo agroindustrial com elevado teor de holocelulose, sendo uma fonte de carbono economicamente viável para microrganismos produzirem enzimas de xilanases de aplicação industrial. Entre esses microrganismos estão os fungos filamentosos, eficientes produtores de xilanases, enzimas que apresentam diversas aplicações biotecnológicas, incluindo branqueamento do papel, aditivos em rações animais, produção de sucos, pães, entre outras. No presente estudo, uma xilanase (Xyl) do fungo Aspergillus foetidus crescido por 7 dias em casca de soja foi purificada e caracterizada visando o potencial biotecnológico da Xyl e o aproveitamento do resíduo. A curva de indução enzimática do fungo indicou alta atividade de xilanase a partir do segundo dia, mantendo-se constante ao longo de 20 dias. A otimização das condições de cultivo, utilizando a metodologia de superfície resposta, levou a produção máxima de xilanase de 13,98 U/mL. Uma xilanase foi purificada com massa molecular estimada de 14,19 kDa. A Xyl teve sua maior atividade a 50°C e pH 5,0. A meia-vida da Xyl a 30°C e a 50°C foi de 8 dias 16 horas e 7h 36min, respectivamente. A enzima foi ativada por Mg+,Ca2+,Zn2+,K+ e Na+ e inibida por Mn2+, Co2+, Fe2+ e SDS. Os valores de Km e Vmáx encontrados a 50°C foram 26,32 mg/mL e 68,45 U/mL, respectivamente. Os valores dos parâmetros termodinâmicos estimados para a reação da Xyl com o substrato foram ΔG = -17,56 kJmol-1 ΔH = -29,94 kJmol-1, ΔS = -31,47 Jmol-1K-1 e Ea = 33,87 kJmol-1. A hidrólise da xilana por Xyl liberou xilose, xilobiose (maior quantidade) e xilotriose indicando um mecanismo de ação do tipo “exo”. A influência do pH e temperatura sobre as estruturas secundárias e terciárias da Xyl foram analisados por espectroscopia de fluorescência e dicroísmo circular. Os resultados mostraram que as perturbações de pH e temperatura afetam a estabilidade da Xyl, mas não sua estrutura secundária. Os resultados encontrados no trabalho sugerem que a Xyl pertença à família GH11. / Soybean hulls are an agro-industrial residue high in holocelulose which is a source of carbon with economic viability used by microorganisms to produce xylanolytic enzymes with application to industries. The filamentous fungi are an effective microorganism producer of xylanase, enzymes that with many biotechnological uses including paper bleaching, animal feed additives, production of juices, bread, among others. In this study, a xylanase (Xyl) produced by Aspergillus foetidus grown on soybean hulls for 7 days was purified and characterized aiming the biotechnological potential of Xyl and residues utilization. The enzyme induction curve of the fungus indicated high xylanolytic activity from the second day and it remained constant throughout 20 days. The optimization of culture conditions using the response surface methodology led to a maximum xylanase production of 13.98 U/mL. A xylanase was purified with an estimated molecular weight of 14.19 kDa. The enzyme had its highest activity at 50°C and pH 5.0. The Xyl half-life at 30°C and 50°C was 8 days and 6 hours and 7h36min, respectively. The enzyme was activated by Mg+,Ca2+,Zn2+,K+ e Na+ e inhibited by Mn2+, Co2+, Fe2+ e SDS. The enzyme gave a Michaelis-Menten constant (Km) 26.32 mg/mL and maximum reaction (Vmax) 68.45 U/mL. The thermodynamic parameters for the hydrolysis of birch wood xylan were estimated at ΔG = -17.56 kJmol-1 ΔH = -29.94 kJmol-1, ΔS = -31.47 Jmol-1K-1 and Ea = 33,87 kJmol-1. The hydrolysis of xylan by Xyl produced xylose, xylobiose (in a larger amount) and xylotriose indicating an action mechanism of “exo” mode. The influence of pH and temperature on the secondary structure of Xyl were analyzed by fluorescence spectroscopy and circular dichroism. The results showed that pH and temperature disturbances affect only Xyl stability. The results of the current work suggest that Xyl may be classified as GH11 family.
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Produção de celulases por fermentação submersa utilizando micro-organismos prospectados em coleções de culturas nacionais / Cellulases production by submerged fermentation using microrganisms prospected in national collections of culturesFaheina Junior, Genilton da Silva 13 February 2012 (has links)
FAHEINA JUNIOR, G. da S. Produção de celulases por fermentação submersa utilizando micro-organismos prospectados em coleções de culturas nacionais. 2012. 75 f. Dissertação (Mestrado em Engenharia Química) - Centro de Tecnologia, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2012. / Submitted by Marlene Sousa (mmarlene@ufc.br) on 2012-09-12T14:47:09Z
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Previous issue date: 2012-02-13 / The research about alternative sources of fuels has been mainly focused on biomass composed of cellulose, hemicellulose and lignin. The structural carbohydrates contained in the cellulosic matrix represent the substrate that can be used for biofuel production by fermentative processes. The choice of the biomass enzymatic hydrolysis of plants using cellulases, can generate an option less environmental impact compared to other processes of hydrolysis. Studies about microbial new sources, and more accurate analysis of the steps that make up the production of cellulases are essential as a strategy to reduce the costs generated by the use of cellulases in the process of obtaining fermentable sugars. This study aims at the selection of filamentous fungi producers of cellulolytic enzymes, as well as investigating the parameters of cellulase production by submerged fermentation process. In the initial stage were selected micro-organisms by methodology in plates. Was investigated the potential cellulolytic enzyme through the index in a specific medium and were selected strains that reached a diameter of colony growth of 150 mm in Petri dishes in a shorter time of incubation (48 hours). Were selected micro-organisms with the greatest potential enzymatic tests that were then tested in submerged fermentation. The first test consisted in selecting the best microorganisms as producers of FPase in non-baffled flask containing 100 mL of culture medium specific. In the subsequent test were examined the three best strains from the previous step, which were then subjected to submerged fermentation in baffled flasks. The next step was designed to investigate the enzyme production in fermentation with four types of soluble sugars: glucose, lactose, sucrose and xylose. The fungal strain was selected in the previous steps used in the tests in a bioreactor, which analyzed three different strategies of inoculation. The strains Fusarium sp. SAP 09, Lasiodiplodia theobromae CNPAT 040, Trichoderma sp. LCB 79, Trichoderma sp. INPA 666, Trichoderma sp. INPA 1014 and Trichoderma sp. INPA 1218 were selected from the first stage. In the selection stage by submerged fermentation in non-baffled flasks, the best FPase activity was achieved by the strain Trichoderma sp. INPA 666 (48.0 FPU /L) and CMCase by the fungus Lasiodiplodia theobromae CNPAT 040 (350.0 U /L). In comparison with baffled flasks, there was a greater production both FPase and CMCase in Erlenmeyer without baffles, indicating that the shear forces applied to the fungal cultures were potentially harmful for enzyme production. The use of sucrose proved to be the best option among soluble sugars tested, with higher rates of FPase activity (49.9 FPU / L) and CMCase (119.7 U / L). The best strategy for the inoculation was a spore suspension obtained from a solid state fermentation of wheat bran, in the time of 72 hours of fermentation. / As pesquisas acerca de fontes alternativas de combustíveis tem se concentrado principalmente na biomassa composta de celulose, hemicelulose e lignina. Os carboidratos estruturais contidos na matriz celulósica representam o substrato que pode ser utilizado para produção de biocombustíveis por processos fermentativos. A opção pela hidrólise enzimática de biomassa vegetal, utilizando celulases, pode gerar uma opção de menor impacto ambiental frente a outros processos de hidrólise. Estudos sobre novas fontes microbianas e, análises mais acuradas das etapas que compõem a produção de celulases são essenciais como estratégias para diminuir os custos gerados pelo uso de celulases nos processos de obtenção de açúcares fermentescíveis. Portanto, este trabalho tem como objetivo a seleção de fungos filamentosos, produtores de enzimas do complexo celulolítico, assim como a investigação dos parâmetros que envolvem a produção de celulases através do processo de fermentação submersa. Em uma etapa inicial foram selecionados os micro-organismos por metodologia em placas, onde se averiguou o potencial celulolítico através do índice enzimático em meio específico. Foram selecionadas as linhagens que atingiram um diâmetro de crescimento de colônia de 150 mm, em placas de Petri, em menor tempo de incubação (48 horas). Da etapa de seleção inicial, foram escolhidos os micro-organismos com maior potencial enzimático que foram então submetidos aos testes em fermentação submersa. O primeiro teste consistiu em selecionar os micro-organismos como melhores produtores de celulases totais (FPase) em erlenmeyer não aletados contendo 100 mL de meio de cultura específico. O teste subsequente analisou as três melhores linhagens da etapa anterior, que foram então submetidos à fermentação submersa em frascos contendo aletas. A etapa seguinte teve o intuito de investigar a produção enzimática em fermentação com quatro tipos de açúcares solúveis: glicose, lactose, sacarose e xilose. A linhagem fúngica selecionada nas etapas anteriores foi utilizada nos testes em biorreator, onde foram analisados três diferentes estratégias de inoculação. Dentre os fungos analisados na etapa inicial, destacaram-se as linhagens Fusarium sp. SAP 09, Lasiodiplodia theobromae CNPAT 040, Trichoderma sp. LCB 79, Trichoderma, sp. INPA 666, Trichoderma sp. INPA 1014 e Trichoderma sp. INPA 1218. Na etapa de seleção por fermentação submersa em frascos não aletados, a melhor atividade de FPase foi apresentada pela linhagem Trichoderma sp. INPA 666 (48,0 FPU/L) e CMCase pelo fungo Lasiodiplodia theobromae CNPAT 040 (350,0 U/L). Na comparação com erlenmeyers aletados, houve uma maior produção tanto de FPase quanto de CMCase em frascos sem a presença de aletas, apontando que as forças de cisalhamento aplicadas nas culturas fúngicas possivelmente foram deletérias para a produção enzimática. O uso de sacarose mostrou-se ser a melhor opção dentre os açúcares solúveis testados, apresentando os maiores valores de atividade de FPase (49,9 FPU/L) e CMCase (119,7 U/L). A melhor estratégia de inoculação para o biorreator foi uma suspensão de esporos obtidos a partir de uma fermentação semi-sólida de farelo de trigo, no tempo de 72 horas de fermentação.
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Modulação da resposta imune inata de polissacarídeos de basidiomicetos na infecção experimental de Cryptococcus neoformansBasso, Angelina Maria Moreschi 21 February 2017 (has links)
Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2017. / Submitted by Raquel Almeida (raquel.df13@gmail.com) on 2017-05-19T17:03:17Z
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Previous issue date: 2017-05-19 / Os fungos patogênicos oportunistas são responsáveis pela maior parte das infecções fúngicas nos seres humanos. Nos últimos anos, foi observado um aumento considerável na incidência de infecções causadas por esses organismos, principalmente em pacientes imunossuprimidos (portadores de HIV), transplantados ou em tratamento quimioterápico. Atualmente, a medicina está proporcionando um aumento na sobrevida desses pacientes, contudo a taxa de mortalidade continua elevada. A resposta imunitária é essencial para a proteção do hospedeiro durante o curso destas infecções e a ativação imunológica adequada é fundamental para controlar o patógeno. Neste contexto, a utilização de estimuladores de ativação é uma estratégia terapêutica interessante, uma vez que possibilita o controle eficiente destes fungos. Os polissacarídeos são importantes indutores da resposta imune e podem se ligar aos receptores de reconhecimento padrão. Além disso estas moléculas podem ativar a mecanismos da resposta imunológica, como estimular a produção de citocinas pró- inflamatórias e da explosão respiratória, aumentando assim a eficiência da atividade microbicida. Os polissacarídeos são constituintes da parede celular de fungos, leveduras, bactérias e plantas. Os cogumelos são fontes importantes de polissacarídeos que apresentam diversas propriedades biologicamente ativas, principalmente aquele relacionado a atividade imunomodulatória, sendo capazes de modular a ativação da imunidade inata e adaptativa. Assim, estes carboidratos podem ser diferenciados de acordo com as diversas características estruturais. Neste contexto, o objetivo deste trabalho foi selecionar e caracterizar os polissacarídeos provenientes dos cogumelos Ganoderma lucidum e Auricularia auricula, e avaliar sua capacidade imunomodulatória e a resposta imunitária do hospedeiro infectado pelo fungo patogênico Cryptococcus neoformans. Os resultados indicaram que ambas as frações (solúvel e insolúvel) de polissacarídicas extraídas dos cogumelos avaliados demonstraram uma composição monossacarídica similar (majoritariamente glicose na fração insolúvel e galactose na fração solúvel) e da identificação de beta glucanas nas frações solúveis e insolúveis de Auricularia auricula. Adicionalmente, a avaliação das frações dos cogumelos analisados não apresentou citotoxicidade, frações LPS free, uma atividade imunomodulatória em células dendríticas e macrófagos M1 e M2 por análise pela ligação aos receptores Dectina-1, TLR2 e TLR4). Ainda foi observado a secreção de citocinas (TNF-α, IL-1β, IL-10), de óxido nítrico e de espécies reativas de oxigênio. Assim como a modulação da imunidade adaptativa (pelo aumento da expressão de CD80, CD86 e MHCII) utilizando técnicas como ELISA e citometria de fluxo. Todavia, os ensaios in vitro referente à atividade microbicida das frações na infecção fúngica e também assim as análises de genes relacionados à defesa contra o patógeno assim como a avaliação da sobrevida in vivo indicaram que somente polissacarídeos da fração insolúvel de Auricularia auricula demonstraram serem promissores como adjuvantes para potencializar a defesa da imunidade inata referente à infecção por Cryptococcus neoformans. / Opportunistic pathogenic fungi are responsible for the majorist of human infection. In the last years, it was observed an increase in the incidence of infections by these organism, mainly in patients exhibiting immunosuppressed patients (HIV), transplanted or in chemotherapy treatment. Currently, medicine advances are providing to provide an increase in the survival of these patients although the mortality rate is still high. The immune response is essential to protect the host during these infections and the immune adequate activation is critical to pathogen control. In this context, immune cell activation stimulators is a therapeutic strategy promising, since it allows fungi efficient control. The polysaccharides are important immune response inductors and may receptors bind of pattern recognition receptors. Moreover, these molecules can activate various functions pro-inflammatory cytokine production stimulate and respiratory burst, thereby improving microbicide efficient activity. The polysaccharide are constituents of fungi bacteria and plants cell wall. The mushrooms are important sources of polysaccharides showing several active biological properties, mainly innate and adaptive immunomodulatory activity. These carbohydrates can be differentiated according to structural diversity. Then, the objective of this study was to select and to characterize polysaccharides from Ganoderma lucidum and Auricularia auricula mushrooms as well as to evaluate the host immune response infected by fungus pathogen Cryptococcus neoformans. The results showed that both fractions (soluble and insoluble) of polysaccharides obtained from Ganoderma lucidum and Auricularia auricula have similar monosaccharide composition (mainly glucose in insoluble fraction and galactose in soluble fraction) and beta-glucan in Auricularia auricula fractions. In addition, the assessment of insoluble fractions of the species analyzed showed acceptable cytotoxicity; free LPS molecules; immunomodulatory activity in dectin-1, TLR2 and TLR4 and macrophages by receptors ligation. Moreover, it was observed a production of TNF-α, IL-1β, IL- 10 cytokine as well as nitric oxide and species oxygen reactive production. In addition; an adaptive immune modulation with increase of CD80, CD86 and MHCII. Nevertheless, in vitro and in vivo fungal infection assays presented that only fraction insoluble obtained from Auricularia auricula were promising adjuvants in innate immunity defense Cryptococcus neoformans infection.
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