Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:22Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-07-31Bitstream added on 2014-06-13T20:56:21Z : No. of bitstreams: 1 machado_acr_me_jabo.pdf: 286825 bytes, checksum: f2ef2df876cf8ed795033e0d4e37d7da (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A busca por meios de cultura alternativos e métodos de produção, são aspectos importantes para viabilizar a utilização de fungos entomopatogênicos em larga escala. O presente trabalho avaliou, em ensaios distintos, a produção dos isolados JAB 02 e JAB 45 de Lecanicillium lecanii em meios líquidos obtidos de resíduos e subprodutos agroindustriais (água do cozimento de arroz e da prensa da mandioca, vinhaça, leite de levedura e melaço de cana-de-açúcar, soro de queijo e milhocina), e em misturas de substratos sólidos obtidos de diferentes grãos e derivados (trigo grosso e farelos de trigo e de soja com lentilha, painço, sorgo, trigo em grão, quirela de milho). A determinação dos meios mais eficientes para produção dos isolados foi baseada na avaliação da produção de conídios e de biomassa nos meios líquidos e a produção e viabilidade de conídios obtidos nos meios sólidos. Para ambos os isolados, a produção em meios líquidos favoreceu a formação de biomassa micelial, obtendo¬se os maiores valores nos meios a base de água da prensa da mandioca, soro de queijo, milhocina@ e melaço de cana-de-açúcar. Os meios sólidos que proporcionaram melhores resultados para o isolado JAB 02 foram obtidos da mistura de trigo grosso e de farelo de trigo com lentilha e com sorgo. Para JAB 45, obtiveram-se as maiores produções de conídios usando a mistura de trigo grosso com lentilha, e de farelo de trigo com painço, lentilha e trigo em grão, destacando¬se a última no qual a produção foi de 1,05 x 108 con g substrato-1. Os meios líquidos e sólidos que proporcionaram os melhores resultados foram, posteriormente, combinados em um sistema bifásico de cultivo Neste ensaio foram avaliadas a esporulação e viabilidade de conídios e o rendimento do processo. O método de cultivo não influenciou... / The search for alternative media and production methods are important aspects for the large scale use feasibility of entomopathogenic fungi. The present work evaluated the production of the isolates JAB 02 and JAB 45 of Lecanicillium lecanii, in liquid media obtained from agroindustrial residuais and byproducts (water of cooked rice and cassava bran, sugarcane vinasse, years cream, sugar cane molasses, cheese whey and milhocina@) and in combination with solid substracts obtained from different grains and its derivates (ground wheat and wheat and soybean bran's with lentil, Italian millet sorghum, wheat grain, cracked corn). The most favorable media were combined in a two-phase system, where the fungus was initially cultivated in a liquid medium and then the micelial mass was transferred to a solid medium. The determination of the most efficient production media for the isolates was based, in the liquid media, on the evaluation of conidia and biomass production, and, in the solid media, on conidia production and viability. For both isolates, the production in liquid media favored large quantity of micelial biomass, emphasizing the media based on water from cassava bran, cheese whey, milhocina@ and sugar cane moi asses. The solid media that proportionated better results, for JAB 02, were obtained from the mixture of ground wheat and wheat barn with lentil and sorghum. For JAB 45, the biggest production of conidia were obtained by the mixture of ground wheat with lentil and wheat bran combined with Italian millet, lentil and wheat grain and with lentil, emphasizing the last one with the production of 1,05 x 108 con 9 substracr1. The liquid and solid media that proportionated better results were afterwards combined in a two-phase system. In this system the conidia sporulation and viability and process income were evaluated. For JAB 02 the cultivation method did not influence the conidia... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:22Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-07-10Bitstream added on 2014-06-13T19:14:44Z : No. of bitstreams: 1 botelho_aaa_me_jabo.pdf: 299640 bytes, checksum: e82d7c36c6135c74da78cba583a23175 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / No manejo integrado da cana-de-açúcar são utilizados fungos entomopatogênicos para o controle de insetos e também diversos agroquímicos visando aumento de produtividade. Porém, vários destes agroquímicos podem interferir na sobrevivência de Beauveria bassiana e Metarhizium anisopliae. Portanto, o objetivo deste trabalho foi avaliar a toxicidade dos agroquímicos mais utilizados no manejo da cana-de-açúcar para B. bassiana e M. anisopliae em experimentos feitos com a utilização em meio de cultura e de solo. Nos ensaios com meio de cultura, os fungos foram inoculados em meio de batata, dextrose e ágar (BDA) contendo diversos inseticidas (4), herbicidas (7) e maturadores (3). Avaliou-se o crescimento, a esporulação e a viabilidade, e com base nesses parâmetros fez-se a classificação toxicológica dos agroquímicos. Para verificar se o efeito encontrado em meio de cultura se mantém no ambiente do solo, foram usados os agroquímicos que apresentaram maior toxicidade no ensaio com meio de cultura. Nesta etapa os fungos foram inoculados nos solos argiloso e arenoso esterilizados, contendo os agroquímicos nas doses recomendadas pelos fabricantes, observando-se as seguintes formas de aplicação: T1 - inoculação do fungo no solo 1 hora antes da aplicação do agroquímico; T2 - inoculação do fungo no solo 1 hora após a aplicação do agroquímico; T3 - inoculação do fungo no solo 48 horas após a aplicação do agroquímico. Avaliou-se a sobrevivência dos fungos por um período de sete dias através das unidades formadoras de colônias (UFC) em placas de Petri. Nos ensaios com meios de cultura, os inseticidas à base de Fipronil (Regente®) e Thiametoxan (Actara®) foram compatíveis com os fungos, mas Aldicarbe (Temik®) foi considerado tóxico. A maior parte dos herbicidas avaliados foram classificados como tóxicos aos entomopatógenos, mas aqueles formulados com Imazapir... / In the management of sugarcane are used entomopathogenic fungi to control insects; and various agrochemicals aimed at increasing productivity. However, several of these agrochemicals may interfere with survival of Beauveria bassiana and Metarhizium anisopliae. Therefore, this research had the objective to evaluate the toxicity of agrochemicals used in handling of sugarcane to B. bassiana and M. anisopliae in experiments in culture medium and soil. In tests in culture medium, the fungi were inoculated on potato dextrose agar (PDA) containing various insecticides (4), herbicides (7) and ripeners (3). It were evaluated the growth, sporulation and viability, and based on these parameters became the toxicological classification of agrochemicals. To examine whether the effect found in the culture medium remains in the soil environment, were used agrochemicals that showed higher toxicity in culture medium assays. At this stage the fungi were inoculated in clay and sandy soils sterilized, containing the chemicals in the recommended dosages, observing the following application forms: T1 - inoculation of the fungi in soil 1 hour before to herbicide application, T2 - inoculation fungi in the soil 1 hour after herbicide application, T3 - inoculation of the fungi in the soil 48 hours after herbicide application. It was evaluated the survival of the fungi for a period of seven days through the colony forming units (CFU) in Petri dishes. Insecticides based on Fipronil (Regente®) and Thiamethoxan (Actara®) are compatible with the fungi, but Aldicarbe (Temik®) proved to be toxic. Most of the herbicides evaluated were classified as toxic to entomopathogenic fungi, but those made with Imazapir (Contain®), Glyphosate (Glifosato®) and Metribuzin (Sencor®) were considered compatible. Among the ripeners only Glyphosate (Round up®) showed compatibility with B. bassiana and M. anisopliae... (Complete abstract click electronic access below)

A macieira é depreciada por muitos insetos, principalmente pela lagarta-enroladeira-da-macieira Bonagota salubricola (Lepidoptera: Tortricidae). Até o momento seu controle nos pomares comerciais é feito quase exclusivamente com inseticidas químicos. Alternativamente, este trabalho teve por objetivo verificar a mortalidade in vitro de larvas de segundo instar de B. salubricola frente a ação de isolados dos fungos Nomuraea, Beauveria e Metarhizium. Cada grupo foi tratado com suspensões de 2x105 a 2x109 con/mL, exceto para o grupo controle, tratado com solução Tween-80 0,1%. Também avaliou-se a sobrevivência pupal, expressão de proteases e a compatibilidade com inseticidas químicos. Uma das linhagens de Beauveria e as três de Metarhizium foram patogênicas a B. salubricola, sendo que os níveis de virulência aumentaram em função da concentração de conídios. A linhagem E6 de M. anisopliae destacou-se por proporcionar um controle de até 88% com TL50 de 1,66 dias; a maior virulência relacionou-se positivamente com o aumento da produção enzimática, sendo esta linhagem também compatível com tebufenozide. Esses resultados evidenciam o potencial dos fungos entomopatogênicos no controle de B. salubricola, visando sua aplicação principalmente nos pomares MIP. / Submitted by Marcelo Teixeira (mvteixeira@ucs.br) on 2014-05-22T18:08:57Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao Fransoe Alan Anhalt.pdf: 344663 bytes, checksum: 694ff008e7b7d673abebeb21f63ebf44 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-05-22T18:08:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Fransoe Alan Anhalt.pdf: 344663 bytes, checksum: 694ff008e7b7d673abebeb21f63ebf44 (MD5) / The apple tree is deprecated by many insects, especially by leaf-roller-apple Bonagota salubricola (Lepidoptera: Tortricidae). Its control in commercial orchards is done almost exclusively with chemical insecticides. Alternatively, this work aimed at the evaluation of the in vitro susceptibility of larvae of the second ínstar of Bonagota salubricola to isolates of Nomuraea, Beauveria and Metarhizium fungus. Each group was treated with suspensions ranged of 2x105 con/mL a 2x109 con/mL, except for the control group, treated with solution Tween-80 0.1%. Also was evaluated the pupal survival, expression of proteases and compatibility with chemical insecticides. One strain of Beauveria and three strain of Metarhizium were pathogenic to B. salubricola, and the levels of virulence increased depending of conidia concentration. The strain E6 of M. anisopliae stood out for marking a control up to 88% with LT50 of 1.66 days, the largest virulence related positively to the increased production enzyme, and this strain was also compatible with tebufenozide. Those results demonstrate the potential of entomopathogenic fungi in control of B. salubricola, principally on the orchards IPM.

Nomuraea rileyi é um entomofungo que infecta principalmente lepidópteros representantes da superfamília Noctuoidea, que inclui pragas-chave de diversas culturas de grande importância econômica. No entanto, a susceptibilidade das espécies a este agente é variável, mesmo entre representantes da mesma família e até de mesmo gênero. Um dos fatores responsáveis por esta susceptibilidade diferenciada pode ser a composição lipídica da cutícula larval. O objetivo deste estudo foi avaliar a estrutura e composição cuticular de larvas de lepidópteros e sua relação com a susceptibilidade a N. rileyi. Foram utilizadas as espécies Anticarsia gemmatalis, Mythimna sequax, Rachiplusia nu e Spodoptera cosmioides e duas linhagens do fungo (CH87551 e UB93150). Larvas de segundo instar foram obtidas a partir da criação massal no Laboratório de Controle de Pragas da Universidade de Caxias do Sul e submetidas a suspensões de 107, 108 e 109 conídios/mL por 24 horas e após, transferidas para recipientes de 200mL contendo dietas artificiais específicas. Os bioensaios foram mantidos em condições controladas e avaliados diariamente por 14 dias. Para análise da composição lipídica cuticular, exúvias oriundas da metamorfose larval-pupal foram submetidas à extração com hexano e posteriormente à diclorometano-metanol. Para obtenção das exúvias de M. sequax, as larvas foram alimentadas com Lolium multiflorum. Os extratos obtidos foram analisados por cromatografia de camada delgada e seus componentes separados por cromatografia em coluna aberta, cujas frações resultantes foram analisadas por cromatografia gasosa acoplada a detector de massas (GCMS). Imagens de microscopia eletrônica de varredura (MEV) foram obtidas de larvas de segundo ínstar de cada espécie, submetidas uma suspensão de 108 conídios/mL e analisadas 24, 48 e 72 horas após a exposição ao patógeno. Os resultados demonstraram que as espécies avaliadas foram diferentemente afetadas por N. rileyi e, mesmo pelas diferentes linhagens avaliadas. A CL50 (log dose) obtida com as linhagens CH e UB foi de 6,73 e 7,97 para A. gemmatalis e 8,26 e 9,16 para R. nu respectivamente. S. cosmioides foi susceptível apenas à linhagem UB, porém a taxa de mortalidade foi de apenas 11,5% na maior concentração e M. sequax não foi susceptível a nenhuma das linhagens avaliadas. A composição lipídica cuticular apresentou diferenças quali-quantitativas entre as larvas. Os principais componentes identificados em A gemmatalis, M. sequax e R nu foram hidrocarbonetos, respondendo por 72,3, 74,5 e 83,6% respectivamente, com menor diversidade de compostos para M. sequax. Ácidos graxos lineares e ramificados (C14 a C20) foram identificados, com diferentes composições em cada uma das espécies. Identificou-se um aldeído e um álcool graxo em A. gemmatalis e outro aldeído graxo em R. nu. Em S. cosmioides, o componente majoritário identificado foi vitamina E, com mais de 70%. Nas imagens de MEV foi possível observar conídios de N. rileyi aderidos à superfície cuticular das quatro espécies avaliadas, especialmente na região abdominal e nos pseudopodes, mesmo depois de 48 horas após contato, sobretudo em S. cosmioides e M. sequax, espécies nas quais muitos dos conídios visualizados apresentaram tubo germinativo crescendo paralelamente à superfície. As espécies que se mostraram mais susceptíveis nestes bioensaios foram as que apresentaram, além de grandes quantidades de alcanos, as maiores diversidades destes compostos. As espécies menos susceptíveis apresentaram pouca quantidade e/ou variedade de alcanos ou ainda algum composto antioxidante, como no caso da vitamina E. Os resultados obtidos sugerem que, além das diferenças na composição lipídica e na estrutura cuticular das larvas, a variabilidade de N. rileyi pode estar relacionada à susceptibilidade diferenciada observada nas espécies, no entanto o potencial de uso deste agente como ferramenta no manejo integrado de pragas é considerável e precisa ser mais bem compreendido e explorado. / Submitted by Marcelo Teixeira (mvteixeira@ucs.br) on 2014-06-17T13:31:41Z No. of bitstreams: 1 Tese Edegar Fronza.pdf: 3725314 bytes, checksum: 32cc4a3977412216d6e2f6670f9ae4b1 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-06-17T13:31:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese Edegar Fronza.pdf: 3725314 bytes, checksum: 32cc4a3977412216d6e2f6670f9ae4b1 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Nomuraea rileyi is an entomofungus that mainly infects lepidopteran representatives of the Noctuoidea superfamily, which includes key-pests of various crops of large economic importance. Nevertheless, the susceptibility of species in relation to this agent is variable, even among representatives of the same family or genus. One of the factors responsible for this differentiated susceptibility might be the lipid composition of the larval cuticle. The aim of this study was to assess the cuticular structure and composition of lepidopteran larvae and their relationship with the susceptibility to N. rileyi fungi. The species Anticarsia gemmatalis, Mythimna sequax, Rachiplusia nu and Spodoptera cosmioides and two strains of the fungus (CH87551 and UB93150) were used. Second instar larvae were obtained from the mass creation of the Pest Control Laboratory at the University of Caxias do Sul and subjected to suspensions of 107, 108 and 109 conidia/mL for 24 hours and subsequently transferred to 200mL containers containing specific artificial diets. The bioassays were maintained in controlled conditions and assessed daily for 14 days. In order to perform an analysis of the cuticular lipid composition, exuviae derived from the larval-pupal metamorphosis were subjected to extraction with hexane and with dichloromethane-methanol afterwards. For obtaining the M. sequax exuviae, the larvae were fed with Lolium multiflorum. The obtained extracts were analyzed by means of slender layer chromatography and their components were separated using open column chromatography components, whose resulting fractions were analyzed through gas chromatography attached to mass detector (GCMS). Images of scanning electron microscopy (SEM) were obtained from second instar larvae of each species, subjected to a suspension of 108 conidia/mL and analyzed 24, 48 and 72 hours after exposure to the pathogen. The results showed that the assessed species were differently affected by N. rileyi fungi or even by different assessed strains. The LC50 (log dose) obtained with the CH and UB strains was 6,73 and 7,97 for A. gemmatalis and 8,26 and 9,16 for R. nu respectively. S. cosmioides was susceptible only to the UB strain, but the mortality was limited to 11.5% in the highest concentration and M. sequax was not susceptible to any of the assessed strains. The cuticular lipid composition showed qualitative and quantitative differences between the larvae. The main components identified in A. gemmatalis, M. sequax and R. nu were hydrocarbons, accounting for 72,3, 74,5 and 83,6% respectively, with lower diversity of compounds for M. sequax. Linear and branched fatty acids (C14 to C20) have been identified, with different compositions in each one of the species. It was found an aldehyde and a fatty alcohol in A. gemmatalis and other fatty aldehyde in R. nu. In S. cosmioides, the major identified component was vitamin E, with more than 70%. In the SEM images, it was possible to observe conidia of N. rileyi attached to the cuticular surface of the four assessed species, especially in the abdominal region and in pseudopods, even after 48 hours of contact, mainly in S. cosmioides and M. sequax, species in which many observed conidia showed germ tube growing in tandem with the surface. The species that were more likely in these bioassays were the ones that presented, in addition to large amounts of alkanes, the greatest diversities of these compounds. The less susceptible species showed little quantity and/or variety of alkanes or even some antioxidant compound, as in the case of the vitamin E. The obtained results suggest that, besides differences in the lipid composition and cuticular structure of the larvae, the variability of N. rileyi might be related to the differentiated susceptibility observed in species, however, the potential usage of this agent as a tool for holding an integrated pest management is sizeable and needs to be better understood and explored.

Orientador: Antonio Batista Filho / Resumo: Com o objetivo de avaliar a patogenicidade e a virulência de fungos entomopatogênicos ao gorgulho aquático do arroz irrigado, Oryzophagus oryzae, foram testados 24 isolados de Metarhizium anisopliae e 2 de Beauveria bassiana. Os bioensaios foram realizados em condições controladas (26+1°C e 12 horas de fotofase). Nos testes para determinar a concentração adequada, a espécie M. anisopliae, isolado E9, apresentou maior patogenicidade quando comparado aos isolados de B. bassiana. A mortalidade confirmada, provocada pelo M. anisopliae, teve início no 4º dia, aumentando em seguida até estabilizar-se no 8º dia. Para a seleção dos isolados de M. anisopliae, adultos dos insetos foram inoculados com 1 mL de suspensão fúngica a 5x108 conídios/mL (1,6x104 conídios/mm2). Todos os isolados foram patogênicos ao inseto, sendo que a mortalidade variou entre 9,3 e 85,3 %. Os isolados de M. anisopliae mais patogênicos foram CB-103, CB-104, CB-233, E9 e CB-10. No teste de produção, os isolados CB-104, CB-233 e CB-103 foram superiores ao padrão E9, apresentando-se promissores para a utilização no controle de Oryzophagus oryzae. / Abstract: Strains of Metarhizium anisopliae and Beauveria bassiana were evaluated concerning their pathogenicity and virulence for control of the rice water weevil, Oryzophagus oryzae. Bioassay conditions were 26+1ºC and 12 h. light. M. anisopliae (E9 strain) was been more pathogenic than two Beauveria bassiana strains (CB-66 and CB-74). For Metarhizium anisopliae (E9 strain), the mean mortality started at 4th day, increasing soon after until stabilize at 8 th day. A screening of M. anisopliae isolates was done inoculating adults of the insect with 1 mL of spore suspension containing 5x108 conídia/mL (1.6x104 conídia/mm2). All isolates were pathogenic to the insect, causing mortality between 9.3 and 85.3%. The most pathogenic isolates were CB-103, CB-104, CB-233, E9 and CB-10. These 6 isolates were evaluated concerning their spore production on cooked rice. The isolates CB-104, CB-233 and CB-103 afforded the highests spores production, significantly higher compared to E9, showing potential to be used for Oryzophagus oryzae control. / Mestre

Dentre 45 isolados de Hyphomycetes testados, oito de Beauveria bassiana e quatro de Metarhizium anisopliae causaram em Tetranychus urticae, mortalidades superiores a 80 e 90%, respectivamente, cinco dias após a inoculação na concentração de 5x10 7 conídios/mL. Hirsutella sp. atingiu 73% de mortalidade na concentração de 1,7x10 7 conídios/mL. Entre 80 a 100% dos cadáveres de ácaros colonizados pelos isolados de B. bassiana e M. anisopliae apresentavam, internamente, cristais de cálcio. Conídio aéreo, blastósporo e célula de levedura de cinco isolados B. bassiana foram patogênicos a esta praga. Diferenças significativas (P ³ 0,05) para CL50 e coeficiente angular entre os isolados e entre as estruturas infectivas foram observadas. Os valores da CL50 variaram de 4,95x10 6 a 8,21x10 7 estruturas infectivas/mL. Não houve diferença significativa entre as estruturas infectivas para os dois parâmetros avaliados, contudo, houve diferenças significativas para a CL50 entre as estruturas infectivas em um mesmo isolado de B. bassiana. Três formulações de fungicidas, 24 de inseticidas e/ou acaricidas foram compatíveis com B. bassiana, sendo formulados com as seguintes moléculas: propamocarb hidrocloreto, enxofre, abamectin, acefato, acetamiprid, betacyflutrin, bifentrina, ciromazina, deltametrina, diafentiuron, diflubenzuron, dimetoato, fenpropatrina, fenpyroximate, fenvalerate, imidacloprid, metamidofós, propargite, tebufenozide e triclorfon. Houve grande variação na toxicidade dos produtos dentro de cada grupo químico e produtos formulados com a mesma molécula química. B. bassiana foi eficiente no controle de T. urticae em crisântemo (Dendranthema grandiflora) cultivado em estufa, quando pulverizado na concentração de 2x10 8 conídios/mL. O controle microbiano foi superior ao proporcionado pelo controle químico utilizado na propriedade agrícola. Efetuando-se quatro pulverizações do fungo em um período de 14 dias, a densidade reduziu de 1,8 para 0,1 ácaro/folha. Na cultura do morango (Fragaria spp.) a eficiência de B. bassiana foi inferior ao crisântemo, com densidade média de ácaros ao longo de 21 dias de avaliação para as concentrações 1x10 8 e 5x10 7 conídios/mL de 13 ácaros/folíolo, contra 43 ácaros/folíolo nas parcelas não tratadas. As variedades de morango Campinas e Princesa Isabel foram as que apresentaram as menores densidades do ácaro, contudo, não houve evidência de que estas variedades interferiram na eficiência de controle da praga por B. bassiana. Assim, M. anisopliae, B. bassiana e Hirsutella sp. foram os fungos mais promissores para serem formulados como micoacaricidas para o controle de T. urticae. / Among 45 isolates of hyphomycetes tested against Tetranychus urticae, 8 Beauveria bassiana and 4 Metarhizium anisopliae isolates caused mortality > 80 and 90%, respectively, 5 days after inoculation with 5x10 7 conidia/mL. Hirsutella sp. caused 73% mortality at a concentration of 1.7x10 7 conidia/mL. Eighty to 100% of cadavers infected by B. bassiana or M. anisopliae isolates had calcium crystals inside their bodies. Conidia, blastospores and yeastlike cells of five B. bassiana isolates were pathogenic against this pest. Significant differences (P ³ 0.05) were observed among the LC50's and slopes of dose-mortality lines for the different isolates and infective structures. LC50 values ranged from 4.95x10 6 to 8.21x10 7 cells/mL. There were no significant differences among the infective structures in the two tested variables. However, there were significant differences among the LC50's with different infective structures within the same B. bassiana isolate. Three fungicide formulations and 24 insecticides and/or mitecides were compatible with B. bassiana including those with the following active ingredients: propamocarb hydrochloride, sulphur, abamectin, acephate,acetamiprid, betacyfluthrin, bifenthrin, cyromazine, deltamethrin, diafentiuron, diflubenzuron, dimethoate, fenpropathrin, fenpyroximate, fenvalerate, imidacloprid, methamidophos, propargite, tebufenozide and trichlorfon. There was large variability in the toxicity of products withing a chemical group and products containing the same active ingredient. B. bassiana was an efficient T. urticae mite control in chrysanthemum (Dendranthema grandiflora), when applied at a concentration of 2x10 8 conidia/mL. Microbial control was better than that provided by chemical pesticides normally used in the greenhouses. With four fungal sprays within 14 days, the mite density was reduced from 1.8 to 0.1 mite/leaf. In strawberry (Fragaria sp.), T. urticae control was lower than in chrysanthemum, with mean density of mites for 21 days after application of 1x10 8 or 5x10 7 conidia/mL at 13 mites/leaflet, compared to 43 mites/leaflet in control plots. The strawberry varieties 'Campinas' and 'Princesa Isabel' had the lowest mite densities, however, these varieties did not affect the efficacy of mite control by B. bassiana. Thus, M. anisopliae, B. bassiana and Hirsutella sp. were the most promissing fungi to be formulated as mycomiticides for T. urticae control.

Avaliou-se a patogenicidade de 50 isolados de 8 espécies de fungos entomopatogênicos e o produto comercial Boverilâ, formulado com isolado ESALQ-447 de B. bassiana para ninfas de 2 e 3 ínstar de Orthezia praelonga. Em outro experimento avalio-se a produção do isolado selecionado em dois sistemas de produção. Nos ensaios de seleção foram usados tubetes de citros infestados pela cochonilha. O patógeno foi inoculado pulverizando-se 5mL de suspensão conidial por muda, na concentração de 1 x 108 conídios/mL, utilizando-se um pulverizador com pressão constante de 0,5 libras/segundo. As mudas foram mantidas em estufas B.O.D. (25±0,5°C, 70±10% UR e 12 horas de fotofase). Dos isolados testados, 30 foram patogênicos para cochonilha causando mortalidade corrigida que variaram de 1,0 % a 46,6%, sendo que os melhores resultados foram obtidos com os isolados ESALQ-972 e ESALQ-1300 de V. lecanii que proporcionaram 46,6 % e 40,5%, respectivamente, após 12 dias da aplicação. Para os testes de produção foram utilizados dois métodos. O método da bandeja no qual se utilizou o arroz pré-cozido, esterilizado e inoculado com fungo em bandejas de plástico, com ciclo de produção de 15 dias. No outro método, utilizou-se de uma caixa plástica, contendo uma lâmina d’água no fundo do recipiente e um sistema de aeração constante para fornecer pressão positiva e manter o ambiente com umidade acima de 90 %. O isolado testado foi o ESALQ-972, e os métodos da bandeja e da caixa proporcionaram produção de 1,8 x 109 e 1,0 x 109 conídios/grama de arroz, respectivamente. / The pathogenicity was evaluated for 50 isolates of 8 species of entomopathogenic fungi and the commercial product Boverilâ, composed by the isolate ESALQ-447 of B. bassiana for nymphs of 2 and 3 instar of Orthezia praelonga. In another experiment the production of the isolated was selected in two production systems. In the selection tests, seedlings of citrus infested by the scale were used. The pathogen was inoculated pulverizing 5 ml of conidial suspension by seedlings, with a concentration of 1 x 108 conidia/ml, using a pulverizer with constant pressure of 0.5 lbs/second. The seedlings were kept in B.O.D. (25±0,5°C, 70±10% UR and 12 hours of photophase). From the isolates tested, 30 were pathogenic to the scale causing corrected mortality that varied from 1.0% to 46.6%, while the best results were obtained with the isolates ESALQ-972 and ESALQ-1300 of V. lecanii which generated 46.6% e 40.5%, respectively, after 12 days of aplication. For the production tests two methods were utilized. The tray method, which used the pre-cocked rice, sterilized and inoculated with fungus in plastic trays, with a production cicle of 15 days. In the other method, a plastic box was used, containing a water blade in the bottom and a constant ventilation system to provide positive pressure and keep the environment with humidity above 90%. The isolate tested was the ESALQ-972, resulting that the tray and the plastic box methods produced 1.88 x 109 and 1.0 x 109 conidia/gram of rice, respectively.

Este trabalho teve o objetivo de avaliar, em condições de laboratório, a influência da temperatura e do tempo de exposição na viabilidade e virulência dos fungos Beauveria bassiana e Metarhizium anisopliae em suspensões preparadas com produtos à base de Conídios puros, Arroz+fungo e nas formulações Pó molhável e Suspensão concentrada em óleo emulsionável. Inicialmente foi necessário o desenvolvimento de um método eficiente e econômico para avaliação da viabilidade, especialmente para produtos formulados em óleo emulsionável misturados em água (suspensão de aplicação). Durante o desenvolvimento do método de avaliação foram definidos parâmetros e condições adequadas para cada formulação, como o meio de cultura, e também a influência de antibióticos e fungistáticos. O protocolo estabelecido baseiase resumidamente no plaqueamento de 150 µL de uma suspensão contendo entre 0,7 e 1×106 conídios/mL em placas tipo Rodac® com 5 mL de meio de cultura Batata-Dextrose-Ágar + 5 mg/L de Pentabiótico® e 10 µL/L de Derosal® (Carbendazim), efetuando-se posteriormente a contagem dos conídios germinados. Este método foi comparado com outra técnica de viabilidade direta (VD) e com as técnicas de Unidade Formadoras de Colônia (UFC) e viabilidade por fluorescência, confrontando-se a precisão obtida pelo coeficiente de variação (CV) das análises de cada método. Os resultados demonstraram que além da facilidade de execução, o método desenvolvido apresentou maior precisão que as demais técnicas (com CV até 7 vezes menor em relação à VD, e até 32 vezes menor que UFC). Foi constatado que a técnica de UFC não é adequada para avaliações de produtos formulados, visto que em relação à quantificação inicial subestimou a concentração viável na maioria das formas dos fungos testadas, sendo que nos produtos em óleo emulsionável estes valores foram 54% menores para B. bassiana, e 73% menores para M. anisopliae. A técnica para avaliação da viabilidade da suspensão preparada com produtos formulados em óleo se mostrou eficaz, após a retirada do óleo da suspensão e outras adaptações. Suspensões de produtos e formulações a base de B. bassiana e M. anisopliae foram mantidas a 26°C, 36°C e 46°C por 1h, 4h e 6h e os efeito destes tratamentos foram medidos na viabilidade e virulência dos fungos contra lagartas de Diatraea saccharalis. Verificou-se que quanto maior o tempo de exposição e maior a temperatura, maior é a influência negativa nos parâmetros dos fungos. Entretanto, a formulação em óleo emulsionável foi a que apresentou melhor proteção aos efeitos detrimentais da temperatura. Mesmo após 6h de exposição a temperatura de 36°C a viabilidade se manteve acima dos 85% para ambos os fungos avaliados. Esta formulação também apresentou os melhores resultados de mortalidade dos insetos, e mesmo após 4h de exposição a 46°C atingiu 39% e 50% de eficiência para B. bassiana e M. anisopliae, respectivamente, sendo recomendável para o controle de D. saccharalis. O protocolo para avaliação da viabilidade de conídios de fungos entomopatogênicos proposto constitui-se como uma ferramenta importante para estudos da influência de fatores bióticos e abióticos durante o período de pré-aplicação na eficiência de micoinseticidas. / This study aimed to evaluate, under laboratory conditions, the influence of temperature and exposure time on the viability and virulence of Beauveria bassiana and Metarhizium anisopliae in suspensions prepared with pure conidia, rice plus fungus and in formulations of wettable powder and concentrated suspension in emulsifiable oil. Initially, an efficient and economical methodology was developed to evaluate conidia viability for each formulation, especially for products formulated in emulsifiable oil mixed in water (suspension of application). During the development of the methodology, the influence of culture media, antibiotics and fungistatics and appropriate conditions were defined for each formulation. Briefly, the established protocol was based on plating 150 L of suspensions containing between 0.7 and 1×106 conidia/mL on a plate type Rodac® with 5 ml of Potato Dextrose Agar culture medium plus 5 mg/L pentabiotic® and 10mg/L and 10 µL/L Derosal® (Carbendazim) and the subsequent counting of germinated conidia. This method was compared to a direct counting (DC) technique, the technique of colony-forming unit (CFU) and viability through fluorescence. The precision of each methodology was measured by their coefficient of variability (CV). Besides its easiness of execution, the new developed methodology was the most precise of all methods (with CV up to 7 times lower compared to the DC, and up to 32 times lower than the UFC). Our results showed that the technique of UFC is not appropriate for evaluation of formulated products, as compared to the conidial quantification by hemacytometer, this technique underestimated the viable concentration in most forms of fungi tested, and for the products in emulsifiable oil these values were 54% lower for B. bassiana, and up to 73% lower for M. anisopliae. The technique for assessing the viability of the suspension prepared with products formulated in emulsifiable oil was effective, after the removal of oil from the suspension and others adaptations. The effect of temperature and period of time on conidia viability of B. bassiana and M. anisopliae-based products and formulations and their virulence against larvae of Diatraea saccharalis was measured at 26°C, 36°C and 46°C for 1h, 4h and 6h. The longer the time of heat exposure and the higher the temperature, the greater the negative influence on vital parameters of the fungi. However, the emulsifiable oil formulation was the least affected by the detrimental effects of heat for both fungi. Even after 6 hours of exposure to temperature of 36°C, the viability remained above 85% for both species evaluated. This formulation also showed the best results of insect mortality, and even after 4h of exposure to 46°C the efficiency was 39% (for B. bassiana) and 50% (for M. anisopliae), and therefore can be useful for control of D. saccharalis. The proposed protocol of evaluation of entomopathogenic fungi viability is a valuable tool for studies of biotic and abiotic factors effect on efficiency of micoinsecticides during the pre-application period.

Uma das principais espécies de ácaro praga é o ácaro rajado, Tetranychus urticae. Um dos inimigos naturais mais importantes deste ácaro é o patógeno Neozygites floridana. Para viabilizar o uso deste patógeno através de liberações inoculativas, ainda são necessárias informações básicas para subsidiar o desenvolvimento de uma metodologia de produção em escala e para liberações do fungo em campo. Para tanto, foi determinado em laboratório, a exigência de umidade e temperatura para a esporulação do fungo, colocando-se ácaros mumificados em folhas de feijão-de-porco. A 80 e 85% de umidade, em nenhuma das temperaturas (13, 17, 21 e 25°C) ocorreu esporulação. O fungo esporulou pouco a 90% UR em todas as temperaturas. As melhores condições para formação de capiloconídios foram a 95% e 100% UR a 21°C e 25°C. Ácaros mumificados foram colocados para esporular em feijão-de-porco em telados em diferentes épocas do ano e a temperatura e umidade monitorada. Notou-se que acima de 13°C o fungo conseguiu produzir um número considerável de conídios primários (>130) mesmo a 90% UR. Entretanto, nesta UR somente a 25°C a produção de capiloconídios foi significativa (>389). Determinou-se o efeito da exposição de duas intensidades luminosas (2.960 Lux e 15.392 Lux), três fotoperíodos (24h de luz, 12:12h(L:E) e 24h de escuro) e duas temperaturas (18°C e 23°C), na produção de conídios primários e de capiloconídios de isolados da Noruega e do Brasil. Ácaros mumificados foram expostos aos diferentes tratamentos em BOD. Não foram encontradas diferenças entre os dois isolados nas duas temperaturas testadas. Os resultados para o fotoperíodo de 12:12h(L:E) foram similares aos encontrados para 24h de escuro. A inibição da luz na formação de capiloconídios foi maior no isolado Norueguês. Baixa intensidade de luz por 24h teve efeito moderado na esporulação dos dois isolados, mas inibiu fortemente a formação de capiloconídios no isolado Norueguês. Foram realizados estudos para avaliar o efeito de agrotóxicos utilizados na produção de morango no Brasil e na Noruega sobre a esporulação e produção de capiloconídios de N. floridana em laboratório. Os resultados revelaram que Tebuconazol, Fenpropatrina na concentração recomendada e Abamectina na metade da concentração recomendada, foram os menos agressivos a N. floridana. Foram também realizadas tentativas de produção em escala deste fungo. Através de inoculações experimentais em telado foi possível induzir epizootias em populações de T. urticae em plantas de feijão de porco em vasos nos telados. Liberações de quatro ácaros mumificados por vaso foi a forma mais prática de inoculação. Maiores quantidades de ácaros mumificados foram produzidos quando as condições climáticas foram caracterizadas por alta UR e 20°C, sendo que durante o inverno a produção não foi eficiente. O uso de lâmpadas e ventiladores durante o período noturno ao final da epizootia, foi eficiente em inibir a esporulação e garantir a qualidade dos ácaros mumificados para o armazenamento. Embora tenha sido possível produzir um grande número de ácaros mumificados, vários estudos ainda são necessários para desenvolver uma metodologia de produção em escala para que seja economicamente viável a sua utilização em campo. / One of the main pest mite species is the Twospotted Spider Mite, Tetranychus urticae. The most important natural enemy of this mite is the pathogen Neozygites floridana. To enabling the use of this pathogen through inoculative releases, basic information is still needed to support the large scale methodology development for fungus production and release in the field. It was determined in the laboratory, the humidity and temperature requirements for fungus sporulation, by placing mummified mites on Jack-bean leaves. There was no sporulation at any of the temperatures tested (13, 17, 21 and 25°C) at 80% and 85% RH. The fungus had low sporulation at 90% RH at all temperatures. The best conditions for the capilloconidia development were 95% and 100%RH at 21°C and 25°C. Mummified mites were placed to sporulate in Jack-bean plants inside screenhouses at different times of year and temperature and humidity were monitored. It was noted that above 13°C the fungus can produce a considerable number of primary conidia (> 130) even at 90%RH. However, only at 90%RH and 25°C the capilloconidia production is significant (> 389). It was determined the effect of exposure of two light intensities (2.960 Lux and 15.392 Lux), three photoperiods (24h of light, 12:12h(L:D) and 24h of darkness) and two temperatures (18°C and 23°C), on the production of primary conidia and capilloconidia of N. floridana isolates from Norway and Brazil. Fungus-killed cadavers by each of the isolates were exposed to different treatments in BOD. No differences were found between the two isolates in the two temperatures tested. The results for the 12:12h(L:D) were similar to those found for 24h of darkness. Light inhibition of capilloconidia formation was greater on Norwegian isolate. Low light intensity for 24h had a mild effect on sporulation of the two isolates, but strongly inhibited the formation of capilloconidia of the Norwegian isolate. Studies were carried out to evaluate the effect of pesticides used in production of strawberries in both countries on sporulation and capilloconidia production of N. floridana in the laboratory. The results showed that Tebuconazole and Fenpropatrin in the recommended concentration and Abamectin in half of the recommended concentration were the less aggressive to N. floridana. Attempts to scale production of this fungus were also made. Through experimental inoculations it was possible to induce epizootics of the fungus in T. urticae populations on Jack-beans, planted in pots in screenhouses. The most convenient way for inoculation of the fungus was to release four mummified mites per pot. Larger quantities of mummified mites by N. floridana were produced when climatic conditions were characterized by high RH and 20°C, during the winter production was inefficient. The use of light and fans at night during the end of the epizootic phase, was effective in inhibiting the sporulation of the fungus and ensure the quality of mummified mites for storage. Although it was possible to produce a large number of mummified mites, several studies are still needed to develop an economically viable methodology for large scale production for field use.

Submitted by Natalia de Souza Gonçalves (natalia.goncalves@ufpe.br) on 2015-05-08T13:54:03Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Tese -Rosineide da Silva Lopes.pdf: 4920575 bytes, checksum: a0e8dab8cc071cbe13e83260ec708550 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-05-08T13:54:03Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Tese -Rosineide da Silva Lopes.pdf: 4920575 bytes, checksum: a0e8dab8cc071cbe13e83260ec708550 (MD5) Previous issue date: 2013-07-31 / FACEPE / A utilização de inseticidas químicos no controle de insetos-praga causa danos ao meio ambiente devido à contaminação do solo, água (lençois freáticos, rios e lagoas), fauna, flora e o próprio homem. Assim, o uso de fungos entomopatogênicos e extratos vegetais são considerados métodos eficientes e seguros, com baixo impacto ambiental. A cochonilha-do-carmim (Dactylopius opuntiae) parasita os cladódios da palma forrageira (Opuntia ficus-indica) causando perdas na produção do vegetal. Nasutitermes corniger é uma espécie de cupim arborícola considerada praga nas áreas urbanas, causando muitos prejuízos econômicos. Em função disso, o trabalho teve por objetivo avaliar a ação de três espécies de Isaria, dos extratos de folhas e vagens de Libidibia ferrea var. ferrea (= Caesalpinia ferrea var. ferrea) e da folha de Agave sisalana sobre D. opuntiae e N. corniger; o efeito dos inseticidas Clorpirifós, Acetamiprid, Thiamethoxan e Lambacyhalothrin sobre a D. opuntiae,. bem como a ação sinergética dos extratos e dos inseticidas sobre o crescimento micelial, esporulação e germinação dos conídios dos fungos. Neste estudo foram realizados bioensaios usando suspensões de 1x108 conídios/mL de linhagens de Isaria farinosa, I. javanica e I. fumosorosea. Foram testados extratos aquoso e metanólico de folhas (EAFLf e EMFLf) e vagens (EAVLf, e EMVLf) de L. ferrea var. ferrea e extratos aquoso e hidroetílico de A. sisalana (EAAs e EHEAs), nas concentrações de 10 mg/mL, 25 mg/mL, 50 mg/mL, 100 mg/mL e 200 mg/mL, bem como os inseticidas nas concentrações mínima, média e máxima recomendadas pelos fabricantes dos produtos. Os resultados demonstraram que os fungos não foram patogênicos sobre ninfas e fêmeas adultas de D. opuntiae, mas afetaram significativamente N. corniger tendo sido observado que a linhagem I. farinosa ESALQ1355 foi a mais eficiente, causando a morte de 95% dos operários (CL50 6,66x104conídios/mL) e 85% dos soldados (CL50 6,81x104conídios/mL) após o 4º dia da aplicação dos tratamentos. Atividade inseticida sobre ambas as espécies de insetos foi obtida com extratos vegetais. Para D. opuntiae o EAFLf foi mais eficiente sobre as fêmeas adultas causando a morte de 97% (CL50 4,60 mg/mL), enquanto o EMVLf promoveu a mortalidade de 82% das ninfas. Adicionalmente, para N. corniger o EAFLf foi o que apresentou maior atividade termicita, causando a morte de 100% dos operários (CL50 6,10 mg/mL) e dos soldados (CL50 14,10mg/mL) após três dias do tratamento. Todos os inseticidas comerciais testados foram eficientes sobre a cochonilha-do-carmim. Os resultados com o Clorpirifós demonstraram ser esse inseticida o mais efetivo, por induzir a morte de 90% dos insetos na concentração mínima. Além do mais, foi observado que os extratos e os inseticidas Acetamiprid e Thiamethoxan foram compatíveis com os fungos, por não haver inibido o crescimento, esporulação e germinação das linhagens fúngicas. A associação entre os extratos e as três linhagens mais eficientes demonstrou que I. farinosa ESALQ1355 foi a mais efetiva no controle dos operários. Por outro lado, a associação dos extratos com todos os inseticidas demonstrou eficiência sobre ninfas e fêmeas adultas da cochonilha, sendo o maior percentual de mortalidade (90%) obtido pela associação de extratos com o inseticida Clorpirifós. Os resultados demonstram o potencial dos extratos de L. ferrea var. ferrea e de A. sisalana no controle de D. opuntiae e N. corniger, bem como das três espécies de Isaria, em especial de I. farinosa ESALQ1355, no controle do cupim. Portanto, esses agentes entomopatogênicos representam uma alternativa viável para o controle e o manejo integrado de D. opuntiae e N. corniger em plantações de palma e em áreas urbanas, respectivamente, no Nordeste brasileiro.