Le gène B4GALNT2 code l’enzyme β1,4-N-acétylgalactosaminyltransférase II qui contrôle l’expression de l’antigène glucidique de groupe sanguin Sda (GalNAcβ1,4[Neu5Acα2-3]Galβ1-4GlcNAc-R). Cet antigène glucidique est aussi détecté dans les tissus humains, principalement dans le tractus gastro-intestinal. Il est exprimé dans le côlon sain et tend à disparaître dans le côlon cancéreux, alors que l’antigène sLex (Neu5Acα2-3Galβ1-4[Fucα1-3]GlcNAc-R) normalement absent dans le côlon sain apparaît dans les cellules cancéreuses coliques. Cependant les mécanismes moléculaires permettant l’expression de l’antigène tumoral sLex au dépend de l’antigène Sda restent inconnus. Le gène B4GALNT2 gouverne l’expression de différents transcrits résultant de l’utilisation de deux sites d’initiation de la transcription différents localisés à 200 pb l’un de l’autre. L’utilisation alternative de deux premiers exons (E1s et E1L) conduit à la production de deux types de transcrits majoritaires, l’un court, l’autre long. Pour comprendre les mécanismes transcriptionnels qui régulent l’expression du gène B4GALNT2 dans le côlon, nous avons établi le profil d’expression du gène B4GALNT2 dans différentes lignées cellulaires et différents tissus humains par Q-PCR et nous avons entrepris une identification des régions génomiques régulatrices essentielles du gène B4GALNT2. La quantification relative de chaque type de transcrit indique que le transcrit court est le transcrit majoritairement exprimé dans les cellules coliques, dans le côlon et l’estomac dont l’expression diminue fortement dans le côlon cancéreux. Nous avons délimité une région minimale promotrice en transfectant transitoirement des constructions contenant différentes régions génomiques en amont du gène rapporteur de la luciférase, dans différentes lignées cellulaires, coliques saines ou non et gastriques. Des expériences de retard sur gel nous ont permis de mettre en évidence des complexes protéines-acide nucléique. Des sites de fixation potentiels pour des facteurs de transcription ont été déterminés par des analyses bioinformatiques de la région promotrice basale. La mutation de ces sites par mutagénèse dirigée nous a permis de déterminer l’implication de ces facteurs de transcription dans la régulation du gène B4GALNT2. Enfin, la fixation in cellulo de ces facteurs de transcription au niveau de la région promotrice minimale du gène B4GALNT2 a été confirmée par immunoprécipitation de la chromatine. Nos résultats suggèrent que le transcrit court du gène B4GALNT2 humain soit majoritairement exprimé dans le colon sain est régulé par un ensemble de facteurs de transcription tels que Ets-1, DMP1 ou Sp1. / The B4GALNT2 gene encodes the β1,4-N-acetylgalactosaminyltransferase II enzyme that controls expression of the histo blood group antigen Sda (GalNAcβ1,4[Neu5Acα2-3]Galβ1-4GlcNAc-R). This carbohydrate antigen is detected in human tissues primarily in the gastrointestinal tract. It is expressed in healthy colon and tends to disappear in colon cancer, whereas the sLex antigen (Neu5Acα2-3Galβ1-4[Fucα1-3]GlcNAc-R) normally absent in healthy colon appears in colic cancer cells. However, molecular mechanisms underpinning expression of sLex tumor antigen at the expense of Sda antigen remain largely unknown. The B4GALNT2 gene drives the expression of several transcripts with alternative first exon named E1S (Short) and E1L (Long) arising from the use of two different transcriptional start sites located 200 bp apart from each other. To understand the transcriptional mechanisms that govern B4GALNT2 gene expression in colon, we have established the B4GALNT2 transcript expression profile in various cell lines and tissues using Q-PCR and we have undertaken an identification of essential regulatory genomic regions of the B4GALNT2 gene. The relative quantification of each transcript indicated that the short transcript variant of B4GALNT2 is the major transcript expressed in colic cells, and in colon and stomach, and is dramatically reduced in cancer colon. We report on the delineation of a minimal promoter region using transient cell expression of genomic deletion constructs harboring the luciferase reporter gene in healthy colic (or not) and gastriccell lines. Electrophoretic Mobility Shift Assay experiences allowed us to highlight protein-nucleic acid interactions in this minimal promoter region. Transcription factor binding sites were determined by bioinformatics analysis of the minimal promoter region. Mutation of these sites by directed mutagenesis allowed us to determine their implication in the regulation of the B4GALNT2 gene. Finally, in cellulo fixation of these transcription factors to the minimal promoter region of the B4GALNT2 gene was confirmed by chromatin immunoprecipitation. Our data further suggest that the short B4GALNT2 transcript is predominantly expressed in healthy colon and is regulated by a combination of various transcription factors such as Ets-1, DMP1 or Sp1.

Mémoire numérisé par la Direction des bibliothèques de l'Université de Montréal.

Mémoire numérisé par la Direction des bibliothèques de l'Université de Montréal.

Le facteur VIII (FVIII) est une glycoprotéine de la coagulation plasmatique, co-facteur du facteur IX activé (FIXa). Son métabolisme dépend de multiples facteurs limitant ou favorisant sa survie ou sa fonction. L’objectif de ce travail était d’analyser les différents paramètres pouvant influencer le taux de FVIII circulant et sa fonction pro-coagulante. Il a compris 4 volets : 1) Nous avons montré que la rétention intra-cellulaire connue du FVIII était en grande partie liée à son agrégation et sa dégradation par les 2 voies protéasomale et lysosomale. 2) Nous avons analysé les mutations du gène F8 responsables de l’hémophilie A dans une large cohorte de patients. Leur analyse bio-informatique a permis de démontrer leur caractère délétère pour le FVIII. L’influence de ces mutations sur la survenue d’allo-anticorps anti-FVIII a été étudiée et stratifiée, en association avec l’origine ethnique et la recherche d’antécédents familiaux d’nticorps. 3) La recherche des facteurs influençant les taux de FVIII chez les conductrices d’hémophilie A a mis en évidence des déterminants majeurs : l’existence d’une maladie génétique additionnelle responsable d’un déficit en FVIII, le taux de facteur Willebrand et l’inactivation non aléatoire du chromosome X ; et des déterminants secondaires : l’âge, la sévérité de l’hémophilie, le polymorphisme D1241E du gène F8 et 5 nouveaux polymorphismes de la LRP1 localisés dans ses sites de liaison pour le FVIII. 4) Nous avons analysé 8 FVIII recombinant mutés in vitro en alanine dans la région 1808-1818 du FVIII. Les études antérieures n’analysant que la chaîne légère, ont montré que cette région était la plus affine pour le FIXa. Nous démontrons ici que la région 1808-1818 ne paraît pas si essentielle à la fonction du FVIIIcar au sein de la molécule entière, son affinité diminue et ses mutations n’altèrent que très modérément l’activité du FVIII. / The factor VIII (FVIII) is a glucoprotein of the coagulation, being the cofactor of the activated factor IX (FIXa). Its metabolism depends on various limiting factors or enhancing its survey or function. The objective of this research’s work was to analyse different parameters that could influence the plasma FVIII level and its pro-coagulant function. It included 4 parts : 1) We showed that the known intra-cellular retention of FVIII was mainly due to its aggregation and degradation following both proteasomal and lysosomal pathways. 2) We analysed FVIII gene mutations responsible for hemophilia A in a large patients cohort. The bio-informatic analysis demonstrated its deleterious consequence. The influence of these mutations on the anti-FVIII antibodies occurrence was stratified, in association with ethnicity and familial antecedent of inhibitor. 3) The research of factors influencing FVIII levels in hemophilia A carriers showed : i) major determinants such as the presence of an additional genetic disease characterised by a FVIII deficiency, the factor Willebrad’s level and the non-random inactivation of the X chromosome; and ii) minor determinants : age, severity of hemophilia, the polymorphism D1241E of FVIII gene, and 5 new polymorphisms of LRP1 located in its binding site for FVIII.4) We analysed 8 recombinant FVIII with in vitro created mutations in its 1808-1818 region. Previous studies that analysed only the FVIII light chain, have shown that this region constituted the more affine binding site of FVIII for FIXa. We demonstrated here that the 1808-1818 region is not as essential as it was reported because within the entire molecule, its affinity decreases and mutations affecting it do alter mildly the FVIII activity.

Les infections par Plasmodium induisent des changements importants sur la réponse effectrice et la régulation des cellules B. Ces effets se caractérisent par une suppression de la production d'anticorps contre des antigènes hétérologues et par une activation polyclonale non spécifique des cellules B. Nous avons centré notre attention sur le facteur inhibiteur de la migration des macrophages (MlF), une cytokine secrétée de façon constitutive chez plusieurs types cellulaires et intensifiée durant l'infection par Plasmodium. Le MlF inhibe l'apoptose des cellules B «in vitro» et son rôle dans les altérations des cellules B durant la malaria n'a pas encore été évalué. En utilisant des souris BALB/c infectées avec P. chabaudi adami DK avant et suite à un régime d'immunisation avec de la γ-globuline humaine, nous avons observé que l'infection après l'immunisation réduit significativement les titres d'lgG totaux et IgGI anti-γ-globuline humaine. Le possible rôle du MlF a été vérifié en neutralisant des souris BALB/c (immunisées avec de la γ-globuline humaine) avec anti-MIF. Les résultats démontrent une augmentation significative d'lFN-γ; une diminution de cellules B anexine +; mais aucun effet significatif sur la production d'anticorps. Étant donné que le MlF est présent pendants les infections nous avons neutralisé le MlF avant et après l'infection par P. chabaudi DK. L'inhibition dans les titres d'anticorps spécifiques à la γ-globuline induit par l'infection était comparable chez des souris traitées avec l'anti-MlF, ce qui suggère que le MlF n'y participe pas. Malgré les effets suggérés «in vitro» sur des cellules B, nos études ont démontré une diminution de cellules B, PI+ chez des souris infectées et neutralisées. En conclusion, nous pouvons dire que le MlF ne semble pas participer dans l'activation polyclonale non spécifique des cellules B durant la malaria et nous suggérons d'évaluer le temps de vie des anticorps en évaluant l'expression du récepteur néonatale Fc (FcRn) qu'y est impliqué à la régulation, le rôle des cellules T régulatrices ainsi que la modulation de l'expression du complexe CD74-CD44 durant les infections par Plasmodium. ______________________________________________________________________________ MOTS-CLÉS DE L’AUTEUR : Malaria, Cellules B, Réponse d'anticorps, MlF, Activation polyclonale.

Les événements traumatiques (ÉT) peuvent susciter des séquelles psychologiques importantes pour les individus qui en sont victimes, comme un état de stress post-traumatique (ÉSPT). Les policiers représentent une population à risque d'être exposée à des ÉT dans le cadre de leur travail et sont donc susceptibles de développer un ÉSPT. Ce trouble peut amener des répercussions considérables sur le fonctionnement psychosocial, la qualité de vie des individus qui en souffrent, entraîner une interférence marquée au niveau du travail et peut conduire à des coûts sociaux exorbitants. Ainsi, après l'exposition à un ÉT, il importe de pouvoir distinguer les facteurs qui influencent le développement et le maintien de réactions post-traumatiques (facteurs de risque) de ceux qui favorisent un retour plus rapide à une vie normale en prévenant l'apparition de symptômes post-traumatiques ou en atténuant leur intensité (facteurs de protection). L'identification des prédicteurs de l'ÉSPT chez une population policière s'avère primordiale et permettra de développer ultérieurement des stratégies de prévention et d'intervention efficaces. Le chapitre I présente une recension des principaux facteurs prévisionnels pouvant influencer l'ÉSPT dans la population générale et chez les policiers. Le chapitre II comprend un article empirique qui porte sur les facteurs de risque et de protection qui prédisent les réactions post-traumatiques chez une population de policiers. Le chapitre III dévoile les résultats d'un deuxième article empirique qui examine l'impact de l'exposition à un ÉT et l'impact d'un ÉSPT chez les policiers. Finalement, le chapitre IV présente une discussion générale et une analyse critique des résultats obtenus dans les deux articles empiriques tout en exposant des considérations méthodologiques, des pistes de recherche futures et des implications cliniques. ______________________________________________________________________________ MOTS-CLÉS DE L’AUTEUR : État de stress post-traumatique, Prédicteurs, Facteurs de risque, Facteurs de protection, Policiers, Facteurs prévisionnels.

Dissertation--Leiden--Universiteit, 2003. / Résumé en néerlandais. Notes bibliogr.

Thèse de doctorat : Sciences de la vie et de la santé : Paris 12 : 2003. / Titre provenant de l'écran-titre.

Thèse d'exercice : Médecine. Pneumologie : Nantes : 2007. / Bibliogr.

Thèse de doctorat : Biologie Cellulaire et Nutrition : Nancy 1 : 2008. / Titre provenant de l'écran-titre.