Orientador: Antonio Olavo Cardoso Jorge / Banca: Juliana Campos Junqueira / Banca: Graziella Nuernberg Back Brito / Banca: Martha Simões Ribeiro / Banca: Célia Regina Gonçalves e Silva / Resumo: Os micro-organismos estão se tornando cada vez mais resistentes aos antimicrobianos e cepas de Candida albicans resistentes aos antifúngicos tem sido isoladas, assim, torna-se importante e necessário a realização de pesquisas que avaliem os efeitos de novos métodos terapêuticos, como a inativação fotodinâmica antimicrobiana (aPDI). Assim, o objetivo deste estudo foi verificar os efeitos da inativação fotodinâmica sobre biofilmes de Candida albicans, avaliando seus efeitos sobre a expressão dos genes TEC1 (fator de transcrição), HWP1 (proteína de parede celular das hifas), EFG1 (regulador transcricional relacionado com a morfogênese), BCR1 (regulador da formação de biofilme e da parede celular), CPH1 (regulador transcricional envolvido na morfogênese) e ALS3 (adesina) de C. albicans. Foram avaliadas 30 amostras isoladas de pacientes portadores de HIV e 30 amostras de pacientes com estomatite protética, quanto a produção de biofilme, peso seco e filamentação. Destas, foram selecionadas as amostras mais virulentas de cada grupo que apresentaram melhor capacidade de formação de biofilme e filamentação. Assim, foi utilizada uma amostra clínica de C. albicans isolada de paciente portador de HIV, uma amostra clínica de C. albicans isolada de paciente com estomatite protética e uma cepa padrão ATCC 18804. A quantificação da expressão dos genes foi relacionada à produção desses genes nas amostras clínicas e na cepa de referência utilizando-se ensaio de PCR em tempo real. Para a aPDI, ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Micro-organisms are becoming increasingly resistant to antimicrobial agents and Candida albicans resistant strains to antifungal has been isolated, so it is important and necessary to carry out studies that evaluates the effects of new therapeutic methods, such as antimicrobial photodynamic inactivation (aPDI). The objective of this study was verify the effects of aPDI on C. albicans biofilms, evaluating its effects on genes expression: TEC1 (transcription factor), HWP1 (cell wall protein hyphae), EFG1 (transcriptional regulator related to morphogenesis), BCR1 (regulator of biofilm formation and cell wall), CPH1 (transcriptional regulator involved in morphogenesis) and ALS3 (adhesin) of C. albicans. Were evaluated 30 samples isolated from patients with HIV and 30 samples from patients with denture stomatitis, as the production of biofilm, dry weight and filamentation. Of these, the most virulent strains of each group that presented better biofilm formation capacity and filamentation were selected. Therefore, were used a clinical sample of C. albicans isolated from HIV positive patient, a clinical sample of C. albicans isolated from patient with denture stomatitis and a standard strain ATCC 18804. The quantification of gene expression was related to the production of these genes in clinical samples and in the reference strain using PCR assay in real time. For aPDI, were used the photosensitizer methylene blue at 300 uM and erythrosine at 400 uM, sensitized with low power laser... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Ana Cláudia Pavarina / Abstract: Este estudo avaliou longitudinalmente a expressão de genes de virulência de isolados clínicos de Candida albicans de pacientes com candidose oral tratados com Terapia Fotodinâmica Antimicrobiana (aPDT) ou Nistatina (NIS). Inicialmente, a especificidade de primers da literatura e novos primers desenhados para os genes de virulência de C. albicans ALS1, CAP1, CAT1, EFG1, HWP1, LIP3, PLB1, SAP1, SAP4, SOD1, SOD5 e ACT1 (gene de controle) foi avaliada através de análises in silico e in vitro. Para a análise in silico, foi realizada uma busca no Pubmed por artigos com sequências de primers que avaliaram a expressão gênica de C. albicans. Em seguida, a homologia dos primers foi analisada (BLAST e ClustalW2) assim como a presença de estruturas secundárias (Mfold). Novos primers foram desenhados (Beacon Designer™) a partir de sequências obtidas do "Candida Genome Database". Os primers foram sintetizados e testados in vitro pela técnica de PCR utilizando um painel de DNA genômico de diferentes espécies de Candida, com seus produtos visualizados em gel de agarose. Reações de qPCR foram realizadas para determinar a concentração ótima e a eficiência dos primers. Para a análise da expressão gênica, os pacientes foram submetidos à aPDT [6 sessões com aplicações do fotossensibilizador Photoditazine™ (200 mg/mL) no palato e na prótese por 20 minutos com posterior aplicação de luz LED (660 nm - 50 J/cm²)] ou submetidos ao tratamento convencional [bochechos de um minuto com 1 mL da solução de ... (Complete abstract click electronic access below) / Resumo: This study evaluated longitudinally the expression of Candida albicans virulence genes on clinical isolates from patients with oral candidiasis treated with Antimicrobial Photodynamic Therapy (aPDT) or Nystatin (NIS). First, specificity of primers from the literature and newly designed primers for C. albicans virulence genes ALS1, CAP1, CAT1, EFG1, HWP1, LIP3, PLB1, SAP1, SAP4, SOD1, SOD5 and ACT1 (control gene) was evaluated through in silico and in vitro analyzes. For in silico analysis, a Pubmed search was performed for studies with primer sequences that evaluated gene expression of C. albicans. Then, the homology of these primers was checked (BLAST and ClustalW2) as well as the presence of secondary structures (Mfold). New primers were designed (Beacon Designer ™) from sequences obtained from the "Candida Genome Database". The primers were synthesized and tested in vitro by PCR using a panel of genomic DNA from different Candida species, with their products visualized on agarose gel. qPCR reactions were performed to determine primers' optimal concentration and efficiency. For gene expression analysis, patients were submitted to aPDT (6 sessions with applications of Photoditazine™ photosensitizer (200 mg/mL) on the palate and dentures for 20 minutes with subsequent application of LED (660 nm - 50 J / cm² )] or conventional treatment [1 minute mouthwash with 1 mL of Nystatin solution (100.000 UI/ mL) four times a day for 15 days]. Microbiological cultures were taken at the ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Mestre

Orientador: Maria de Lourdes Ribeiro de Souza da Cunha / Resumo: Indivíduos colonizados podem contribuir para disseminação de Staphylococcus aureus, que se destaca por sua patogenicidade e alta frequência, capaz de produzir doenças tanto em indivíduos sadios quanto em imunocomprometidos, sendo esse risco aumentado na imunodeficiência humana (HIV/aids). Esse estudo teve como objetivos determinar a relação clonal de MRSA (Staphylococcus aureus Resistente à Meticilina) e MSSA (Staphylococcus aureus Sensível à Meticilina) entre as cepas isoladas de pessoas vivendo com HIV/aids (PVHA) e seus contactantes domiciliares, e os fatores de virulência que podem contribuir para o carreamento desses micro-organismos. S. aureus foram isolados da nasofaringe e orofaringe de 368 PVHA do Serviço de Ambulatórios Especializados de Infectologia “Domingos Alves Meira” (SAE/DAM) do complexo da Faculdade de Medicina de Botucatu (FMB) e Fundação para o Desenvolvimento Médico Hospitalar (FAMESP), sendo 112 residentes em Botucatu e 256 provenientes de cidades da região. A técnica de PCR (Reação em Cadeia da Polimerase) foi utilizada para detecção do gene mecA, genes das enterotoxinas (sea, seb, e sec-1), esfoliatinas A e B (eta e etb), toxina 1 da síndrome do choque tóxico (tst), leucocidina Panton–Valentine (lukS-PV e lukF-PV), hemolisinas alfa e delta (hla and hld) e biofilme (icaA e icaD) e para tipagem do SCCmec. Para a tipagem molecular foi utilizado a técnica de Pulsed Field Gel Electrophoresis (PFGE), Multilocus Sequence Typing (MLST) e spa Typing. Os pacient... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Colonized individuals may contribute to the dissemination of Staphylococcus aureus, which stands out for its pathogenicity and high frequency, capable of producing diseases in both healthy and immunocompromised individuals, with an increased risk of human immunodeficiency (HIV/AIDS). This study aimed to determine the clonal relationship between MRSA (Methicillin Resistant Staphylococcus aureus) and MSSA (Methicillin-Sensitive Staphylococcus aureus) between strains isolated from people living with HIV/aids (PLHA) and their home contacts, and virulence factors which may contribute to the transport of these microorganisms. S. aureus were isolated from the nasopharynx and oropharynx of 368 PLHA from the Specialized Outpatient Services “Domingos Alves Meira” (SAE/DAM) of the Botucatu Medical School (FMB) and Hospital Medical Development Foundation (FAMESP), of which 112 were residents in Botucatu and 256 from cities in the region. The PCR (Polymerase Chain Reaction) technique was used to detect the mecA gene, enterotoxin genes (sea, seb, and sec-1), esfoliatins A and B (eta and etb), toxic shock syndrome toxin 1 (tst), Panton-Valentine leukocidin (lukS-PV and lukF-PV), alpha and delta hemolysins (hla and hld) and biofilm (icaA and icaD) and for typing SCCmec. For molecular typing were used techniques of the Pulsed Field Gel Electrophoresis (PFGE), Multilocus Sequence Typing (MLST) and spa Typing. The patients residing in Botucatu were invited to more two collections with the inclu... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:46:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 984593 bytes, checksum: e93d968884fde8f1904c5210804ac0a3 (MD5) Previous issue date: 2011-04-29 / Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais / The toxins produced by Actinobacillus pleuropneumoniae (App) are recognized as major virulence factors found in this pathogen. Apx toxin I has strong hemolytic and cytotoxic activity, and this toxin has a high cytotoxic activity against pulmonary macrophages and neutrophils in swine. This exotoxin is produced by different serotypes, including the serotypes 1, 5, 9, 10, 11 and 14, which are involved with the most severe reported clinical cases. In general, these toxins are encoded by operons consisting of four genes: C, A, B and D, where the gene A encoding the structural proteins. The molecular basis of evolution and genetic diversity among the serotypes of App are not well understood. One of the possible explanations for this can be unavailability of DNA sequences of this bacteria in public databases. Thus, this study aimed to sequence the gene apxIA and assess the genetic diversity of this gene in isolates of the App with reference sequences available in GenBank (NCBI). In this study, we analyzed 42 isolates of serotype App 5A and 5B. The sequences of these isolates were compared with other sequences available in GenBank databases using the program MUSCLE 3.8.31 and polymorphisms of the nucleotide and amino acid sequences were analyzed. The nucleotide substitution model used was F81 + I + G, estimated from the set of sequences aligned using the program jModeltest 0.1.1. The results showed the presence of differences in the ApxI sequences that allowed group the 41 Brazilian isolates in 14 haplotypes (groups of sequences with 100% identity). Brazilian isolates were grouped into two groups (1 and 2), being distinguished by mutations in the amino acid residues 2 and 3 of protein ApxI. These results indicate the existence of a genetic diversity among isolates of App and can assist in the development of more efficient vaccine candidates. / As toxinas produzidas por Actinobacillus pleuropneumoniae (App) são, reconhecidas como os principais fatores de virulência encontrados neste patógeno. A toxina Apx I apresenta forte atividade hemolítica e citotóxica sendo considerada a exotoxina que apresenta maior atividade citotóxica contra macrófagos pulmonares e neutrófilos em suínos. Essa exotoxina é produzida por diferentes sorotipos de App, 1, 5, 9, 10, 11 e 14, sendo estes envolvidos com a maioria dos casos clínicos graves reportados. Em geral, essas toxinas são codificadas por operons constituídos por quatro genes: C, A, B e D, onde o gene A codifica a proteína estrutural. As bases moleculares da evolução e a diversidade genética existente entre os sorotipos de App ainda não estão bem compreendidas. Uma das possiveis explicações para esse fato pode ser pela reduzida disponibilidade de seqüências gênicas dessa bactéria em bancos de dados públicos. Neste sentido, este trabalho teve como objetivo sequenciar o gene apxIA e avaliar a diversidade genética desse gene de isolados brasileiros de App com as sequências de referência disponiveis no banco de dados Genbank (NCBI). Neste trabalho, foram analisados 42 isolados brasileiros de App sorotipo 5A e 5B. As sequências destes isolados foram comparadas a outras seqüências disponíveis nos bancos de dados GenBank utilizando o programa MUSCLE 3.8.31 e os polimorfismos das sequências de nucleotídeos e aminoácidos foram analisados. O modelo de substituição de nucleotídeos empregado foi o F81+I+G, estimado a partir do conjunto de sequências alinhadas utilizando o programa jModeltest 0.1.1 . Os resultados evidenciaram a presença de polimorfismos nas seqüências brasileiras que permitiram agrupar os 41 isolados, em 14 haplótipos (grupos de sequências com 100% de identidade) diferentes. Os isolados brasileiros foram agrupados em dois grupos (1 e 2), sendo distinguidos por mutações nos resíduos de aminoácidos 2 e 3 da proteína ApxI. Esses resultados indicam a existência de uma diversidade gênica entre os isolados brasileiros de App e auxiliarão no desenvolvimento de candidatos vacinais mais eficientes.

Submitted by ANA LUIZA DO ROSÁRIO PALMA null (ana.luiza.rp@hotmail.com) on 2017-01-11T17:41:58Z No. of bitstreams: 1 Ana Luiza do Rosário Palma, Biopatologia Bucal.pdf: 3299481 bytes, checksum: 9eb1d5e0b50827ce3d17e38baa851362 (MD5) / Approved for entry into archive by LUIZA DE MENEZES ROMANETTO (luizamenezes@reitoria.unesp.br) on 2017-01-12T16:46:23Z (GMT) No. of bitstreams: 1 palma_alr_me_sjc.pdf: 3299481 bytes, checksum: 9eb1d5e0b50827ce3d17e38baa851362 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-12T16:46:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 palma_alr_me_sjc.pdf: 3299481 bytes, checksum: 9eb1d5e0b50827ce3d17e38baa851362 (MD5) Previous issue date: 2016-12-16 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O objetivo foi avaliar as interações entre Candida albicans (ATCC 18804) com Streptococcus mitis (49456) e Streptococcus sanguinis (10556) in vitro e in vivo avaliando-se a possível influência destas associações, na expressão de genes, na filamentação e formação de biofilme de Candida albicans. A formação de biofilme, foi realizado mono e multiespécie em placa de 96 poços por 48 h à 37 ºC com 5% CO2. Os biofilmes foram desagregados e diluídos para semeadura em ágar e após incubação as UFC/mL foram contadas. A filamentação de C. albicans, in vitro foi realizada em placas de 24 poços e in vivo em Galleria mellonella, com análise histológica e contagem de UFC/mL. A avaliação da expressão gênica de ALS1, ALS3, BRC1, CPH1, EFG1 e HWP1, foi realizada por PCR em tempo real utilizando o gene normalizador ACT1. Os resultados da UFC/mL (p < 0.05), demonstrou que o biofilme de C. albicans monoespécie apresentou maior crescimento, quando comparado com o biofilme associado com S. mitis (p = 0,001) ou com S. sanguinis (p = 0,001). A filamentação in vitro demonstrou que a interação com S. mitis inibiu a filamentação de C. albicans (p = 0,0006), entretanto, a interação com S. sanguinis não inibiu (p = 0,1554). Os genes ALS1, ALS3 e HWP1 foram super expressos na interação com S. mitis. A interação com S. sanguinis, promoveu super expressão dos genes ALS3 e HWP1. Os genes BRC1, CPH1 e EFG1 foram super expressos na interação com S. mitis e sub expressos, na interação com S. sanguinis. Não houve diferença estatística nos estudos in vivo de filamentação e UFC/mL. Conclui-se que in vitro, S. mitis e S. sanguinis foram capazes de inibir a formação de biofilme de C. albicans. Assim como a interação com S. mitis inibiu a sua filamentação. A interação com S. mitis parece aumentar o fator de virulência de C. albicans, quanto a expressão dos genes de aderência ALS1, ALS3 e HWP1, bem como na associação com S. sanguinis (ALS3 e HWP1). Os genes de formação de biofilme, BRC1, CPH1 e EFG1, na interação com S. mitis promoveu aumento do fator de virulência. / The objective was to evaluate the interactions between Candida albicans (ATCC 18804) with Streptococcus mitis (49456) and Streptococcus sanguinis (10556) in vitro and in vivo evaluating the possible influence of these associations, in the expression of genes, in the filamentation and biofilm formation of Candida albicans. Biofilm formation was performed mono- and multispecies in 96-well plate for 48 h at 37 ºC with 5% CO2. Biofilms sonicated and diluted for sowing on agar and after incubation the colonies counted to obtain the colony forming units (CFU/mL). The filamentation in vitro was performed in 24-well plate and in vivo Galleria mellonella, with histological and CFU/mL. The evaluation of gene expression ALS1, ALS3, BRC1, CPH1, EFG1 and HWP1 was performed by real-time PCR using the normalizing gene ACT1. The results of CFU/ml (p<0.05), found that C. albicans biofilm monoespécie showed increased growth, as compared to the biofilm associated with S. mitis (p = 0.001) and S. sanguinis (p = 0.001). The filamentation in vitro demonstrated that the interaction with S. mitis inhibited C. albicans filamentation (p = 0.0006), interaction with S. sanguinis could not (p = 0.1554). The ALS1, ALS3, HWP1 gene, were superexpressed in S. mitis interaction. Interaction with S. sanguinis, promoted overexpression of ALS3 and HWP1 genes. The BRC1 genes, CPH1 and EFG1 were super expressed in interaction with S. mitis and sub expressed when there was interaction with S. sanguinis. There was no statistical difference in the in vivo studies of filamentation and CFU/mL. It follows that in vitro, S. mitis and S. sanguinis were able to inhibit the formation of C. albicans biofilms. Like the interaction with S. mitis inhibited its filamentation. The interaction with S. mitis appears to increase the virulence factors of C. albicans. ALS1, ALS3, HWP1 as the expression of adhesion genes, and as well as in association with S. sanguinis (ALS3 and HWP1). Biofilm formation genes, BRC1, CPH1 and EFG1 in interaction with S. mitis promoted increased virulence factor.

Submitted by THAISY MILANELLI CANHIZARES null (thaisymilanelli@yahoo.com.br) on 2017-08-24T01:15:33Z No. of bitstreams: 1 DEFESA final.pdf: 700718 bytes, checksum: 9c3cbfade3105f6f93da40a95c86b3c6 (MD5) / Approved for entry into archive by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com) on 2017-08-25T14:14:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 canhizares_tm_me_bot.pdf: 700718 bytes, checksum: 9c3cbfade3105f6f93da40a95c86b3c6 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-25T14:14:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 canhizares_tm_me_bot.pdf: 700718 bytes, checksum: 9c3cbfade3105f6f93da40a95c86b3c6 (MD5) Previous issue date: 2017-08-04 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Retocolite Ulcerativa (RU) é um tipo de patologia que acomete o cólon intestinal, se apresentando na forma de lesões superficiais de gravidade variável. Não possui causa definida, mas sabe-se que é influenciada por fatores genéticos e ambientais, na qual, esse último, inclui um desequilíbrio na composição de espécies da microbiota intestinal. Escherichia coli (E. coli), uma das bactérias que se encontra aumentada nesses pacientes, tem sido foco de estudos de caracterização, com o objetivo de esclarecer sua participação na etiologia ou complicação dos sintomas da doença. Esse trabalho adotou essa abordagem para a caracterização de uma coleção de E. coli isoladas de portadores de RU atendidos no Hospital das Clínicas da Universidade Estadual Paulista Júlio de Mesquita Filho (HC/UNESP) de Botucatu, com base em sua capacidade de produção de biofilme, sorotipagem e filotipagem. Juntamente a esses testes, foi realizada uma revisão bibliográfica sobre a possível relação da E. coli com a RU. O objeto de estudo dos testes foi uma coleção de E. coli composta por 68 isolados bacterianos de 34 portadores de RU e 44 de 22 indivíduos controle (CO). A tipagem bacteriana teve como foco genes que identificam os sorogrupos O25 e O83 e determinação de filogrupos da coleção de referência de E. coli (EcoR – A, B1, B2 e D). Os resultados obtidos foram: 1) predomínio de E. coli dos filogrupos B2 e A nos grupos CO (54,5% x 26,5%, p=0,01) e de portadores de RU (32,4% x 9,1%, p=0,04) respectivamente, 2) no grupo portador de RU, 8,8% e 11,8% dos indivíduos apresentaram os sorogrupos O25 e O83, respectivamente e, entre os CO, a prevalência de ambos os sorogrupos foi de 4,5% e, 3) isolados produtores de biofilme forte (Fo), moderado (Mo) e fraco (Fra) foram encontrados em 45,5%, 22,7% e 27,3% dos CO, respectivamente. Em portadores de RU, a prevalência foi de 32,4%, 8,8% e 14,7%, respectivamente. A divergência nos dados de filotipagem em relação à literatura denota o caráter de extensa variabilidade observada nas populações naturais de E. coli e que dificulta sua vinculação com a causa da RU. A ausência de diferença na prevalência de isolados produtores de biofilme entre os grupos sugere que tal propriedade não pode ser vinculada a um eventual potencial de E. coli em provocar ou complicar os sintomas da RU. A análise bibliográfica mostrou resultados divergentes sobre a relação da E. coli na RU, possivelmente devido às variações no método de colheita, características teciduais e método de quantificação das culturas, sendo necessário mais pesquisas sobre o tema para sua maior clareza. / Ulcerative colitis (UC) is a type of pathology that affects the intestinal colon, presenting as superficial lesions of different severity. It has no defined cause, but it is known to be influenced by genetic and environmental factors, which includes an imbalance in the composition of species of the intestinal microbiota. Escherichia coli (E. coli), one of the bacteria that is increased in these patients, has been the focus of characterization studies, to clarify its participation in the etiology or complication of the disease’s symptoms. Following a line of research already consolidated in our laboratory, this work adopted this approach for the characterization of a collection of E. coli isolated from UC patients treated at the HC / UNESP of Botucatu, based on its biofilm production capacity, serotyping and filotyping. Also, a literature review was performed on the possible relationship between E. coli and UC. The study’s object of these tests was a collection of E. coli composed of 68 bacterial isolates from 34 UC carriers and 44 from 22 control individuals (CO). Bacterial typing focused on genes that identify the O25 and O83 serogroups and determination of phylogroups from the E. coli reference collection (EcoR - A, B1, B2 and D). The results obtained were: 1) Predominance of E. coli of the phylogenetic groups B2 and A in the CO groups (54.5% x 26.5%, p = 0.01) and in the UC group (32.4% x 9, 1, p = 0.04), respectively. 2) In the UC group, 8.8% and 11.8% of the individuals had serogroups O25 and O83, respectively, and among CO, the prevalence of both serogroups was 4,5% and, 3) Isolated producers of strong (St), moderate (Mo) and weak (We) biofilms were found in 45,5%, 22,7% e 27,3% of the CO, respectively. In UC patients, the prevalence was 32.4%, 8.8% and 14.7%, respectively. The divergence in the data of phylotyping in relation to the literature denotes the character of extensive variability observed in the natural populations of E. coli and that makes it difficult to be linked to the cause of the UC. The absence of a difference in the prevalence of biofilm isolates among the groups suggests that such property can’t be linked to an eventual potential of E. coli to cause or complicate UC symptoms. The literature analysis showed divergent results on the relationship of E. coli and UC, possibly due to variations in the collection method, tissue characteristics and quantification method of the cultures, being necessary more researches on the subject for its greater clarity.

Orientador: Ricardo Antonio Polanczyk / Banca: Luís Garrigós Leite / Banca: Arlindo Leal Boiça Júnior / Resumo: A susceptibilidade de Bemisia tabaci biótipo B (Genn.) (Hemiptera: Aleyrodidae) aos isolados de Beauveria bassiana (IBCB18, IBCB35, IBCB66 e JAB07), Lecanicillium muscarium (LCMAP3790) e Metarhizium rileyi (NOM1950) foi avaliada em testes de patogenicidade e virulência. A concentração discriminatória de 108 conídios/ mL-1 foi utilizada para bioensaios com ovos e ninfas de terceiro ínstar utilizando folhas de feijão como substrato. Para cada tratamento foram utilizados 60 ovos e 60 ninfas, distribuídos em três repetições. A testemunha consistiu de água destilada esterilizada + Tween® 80 (0,05%). Para estimar a virulência dos isolados, foram realizados bioensaios de estimativa da concentração letal (CL50). As suspensões dos isolados (1,0 × 103, 1,0 × 104, 1,0 × 105, 1,0 × 106, 1,0 × 107 e 1,0 × 108 conídios/mL-1 ) foram pulverizadas sobre ovos e ninfas de terceiro ínstar e avaliou-se o número de ovos e ninfas com mortalidade confirmada pelo fungo. Todos os isolados testados foram patogênicos para ovos e ninfas de B. tabaci. A mortalidade de ninfas e de ovos variou de 63,3 a 100,0 e 32,1 a 95,0%, respectivamente. Os isolados JAB07 e IBCB18 de B. bassiana e o LCMAP3790 de L. muscarium foram os melhores para o controle de ninfas e ovos de B. tabaci, sendo que o isolado JAB07 foi o mais virulento para ninfas e ovos, com CL50 estimada de 0,006 e 0,012 x 103 conídios/mL-1 para ovos e ninfas de terceiro ínstar, respectivamente, sendo este o isolado mais indicado para futuros teste... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The susceptibility of Bemisia tabaci biotype B (Genn.) (Hemiptera: Aleyrodidae) to isolates of Beauveria bassiana (IBCB18, IBCB35, IBCB66 and JAB07) Lecanicillium muscarium (LCMAP3790) and Metarhizium rileyi (NOM1950) was evaluated using pathogenicity and virulence tests. The 1,0 × 108 conidia/mL-1 discriminatory concentration was used for bioassays with 60 eggs and 3rd instar nymphs in bean leaves as a substrate. For each treatment was used 60 eggs and nynphs distribued in three replicates. The control treatment consisted of distilled water + Tween 80 (0.05%). To estimate the virulence of strains, lethal concentration (LC50) bioassays were performed. Isolates suspensions (1,0 × 103, 1.0×104, 1.0×105, 1.0×106, 1.0×107 and 1.0×108 conidia/ml-1 ) were sprayed on eggs and 3rd instar nymphs and the number of eggs and nymphs with mortality confirmed by the fungus was evaluated. All isolates tested were pathogenic for B. tabaci eggs and nymphs. The mortality rate of nymphs and eggs ranged from 63.3 to 100.0 and 32.1 to 95.0%, respectively. JAB07 and IBCB18 from B. bassiana and LCMAP3790 L. muscarium isolated were the best for the control of B. tabaci nymphs and eggs, JAB07 was the isolate most virulent for nymphs and eggs, with LC50 estimated 0.006 and 0.012 x 103 conidia/mL-1 estimated for eggs and 3rd instar nymphs, respectively, this being isolated most suitable for future field trials for control of B. tabaci. / Mestre

Orientador: Denise Madalena Palomari Spolidorio / Banca: Telma Blanca Lombardi Bedran / Banca: Alessandra Nara de Souza Rastelli / Resumo: A utilização de óleos essenciais tem sido amplamente difundida no tratamento de doenças infecciosas que acometem a cavidade oral por serem eficazes contra patógenos presentes em biofilme. Dentre estes produtos de origem natural, destaca-se o Terpinen-4-ol um biocida membrana-ativo, com amplo espectro de ação contra bactérias gram-positivas, gram-negativas e bactérias multi-resistentes. Neste estudo, investigou-se o efeito antimicrobiano do Terpinen-4-ol sobre culturas planctônicas e biofilmes de Streptococcus mutans (S. mutans) e a expressão gênica de glucano de ligação de proteína A (gbpA) envolvido na adesão em biofilme. A atividade antimicrobiana do Terpinen-4-ol (0.059 % a 0.95 %) foi avaliada pelo teste de microdiluição em caldo com a determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM) e Concentração Bactericida Mínima (CBM) para o microrganismo na forma planctônica. O biofilme formado em placa de cultura celular foi tratado com diferentes concentrações de Terpinen-4-ol e o metabolismo celular do biofilme resultante foi avaliado por meio de ensaio de hidróxido de 2,3-bis (2-metoxi-4-nitro-5-sulfo-fenil) -2H-tetrazólio-5-caboxanilide (XTT). A análise do biofilme formado sobre blocos de esmalte e dentina tratados com Terpinen-4-ol (0.24 % e 0.95 %) e Clorexidina (CHX 0.12 %) durante 60 segundos foi realizada por meio de ensaio de XTT e razão espectral (verde/vermelho) das imagens obtidas por Microscopia Confocal de Varredura a Laser (MCVL). A expressão gênica de gbpA foi... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The use of essential oils has been widespread in the treatment of infectious diseases that affect the oral cavity to be effective against pathogens in biofilms. Among these natural products, there is the Terpinen-4-ol a biocide membrane-active, with broad spectrum of action against gram-positive bacteria, gram-negative and multi-resistant bacteria. In this study, we investigated the antimicrobial effect of Terpinen-4-ol on planktonic and biofilm cultures of Streptococcus mutans (S. mutans) and gene expression gbpA (glucan binding protein A) involved in the adhesion of biofilm. The antimicrobial activity of Terpinen-4-ol (0.059 % to 0.95 %) was assessed by the broth microdilution test for the determination of MIC and MBC for the microorganism in planktonic form. The biofilm formed in cell culture plate were treated with different concentrations of Terpinen-4-ol and cell metabolism resulting plaque was assessed using the hidróxido de 2,3-bis (2-metoxi-4-nitro-5-sulfo-fenil) -2H-tetrazólio-5-caboxanilide (XTT). The analysis of the biofilm formed on enamel blocks and dentin treated with Terpinen-4-ol (0.24 % and 0.95 %) and chlorhexidine (CHX 0.12 %) for 60 seconds was performed by XTT assay and spectral Ratio (Green/Red) of images obtained by microscopy Laser Scanning Confocal (CLSM). The gbpA gene expression was investigated by quantitative RT-PCR after S. mutans have been exposed to Terpinen-4-ol and CHX for 15 and 30 minutes. The data were normally distributed and therefore p... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Lívia Nordi Dovigo / Banca: Ewerton Garcia de Oliveira Mima / Banca: Clovis Wesley Oliveira de Souza / Resumo: Este estudo teve por finalidade: I. estabelecer um protocolo reprodutível utilizando a metodologia dos halos de precipitação em meio Ágar para avaliação da produção de fosfolipase e proteinase pela espécie Candida albicans (C. albicans); II. analisar a expressão dos fatores de virulência de Ca após inativação fotodinâmica (IF) mediada pela curcumina (CUR). No primeiro estudo utilizou-se 30 isolados clínicos e uma cepa de referência de C. albicans para obtenção de suspensões celulares (108ufc/mL) que foram plaqueadas nos meios específicos. Três variáveis independentes (nº de replicatas, cor de fundo e instrumento de leitura) originaram oito protocolos de leitura. A reprodutibilidade intra e interexaminadores da medida de produção de enzima (Pz) foi avaliada por meio do Coeficiente de Correlação Intraclasse (CCI). A enzima proteinase apresentou dois protocolos com ―Boa‖ reprodutibilidade intraexaminador (CCI ≥ 0,71) para todos os examinadores e o protocolo que utilizou leituras em triplicata sobre as fotografias contra luz natural atribuiu maior reprodutibilidade interexaminador para os valores de Pz-proteinase. Três protocolos com ‗Boa' concordância intraexaminador de Pz-fosfolipase foram selecionados para a análise interexaminador. Tanto as leituras em paquímetro como as realizadas em computador, em triplicata, mostraram reprodutibilidade ‗Muito Boa'. No estudo II, a concentração de CUR a 0,1µM foi utilizada associada a iluminação LED para promover dose subletal de IF. O grupo tratamento (C+L+) teve suas células fotossensibilizadas com CUR e iluminadas. O grupo controle positivo consistiu de amostras que receberam apenas CUR (C+L-), e o controle negativo não recebeu nem CUR nem luz (C-L-). A capacidade de adesão foi avaliada por meio das unidades formadoras de colônias (ufc/mL) e do método XTT. A formação de biofilme foi analisada ...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: This study aimed to: I. to establish a reproducible protocol using the agar-Based methodology to evaluate the production of the phospholipase and proteinase by the species Candida albicans (C. albicans); II. to analyze the expression of virulence factors after photodynamic inactivation (PDI) mediated by curcumin (CUR). In the first study 30 clinical isolates and a reference strain of the C. albicans were used to obtain cell suspensions (108CFU/mL) that were plated in specific media. Three independent variables (number of replicates, background color and reading instrument) originated eight reading protocols. The intra- and inter-examiner reproducibilityof the enzyme production measure (Pz) was assessed using the intraclass correlation coefficient (ICC). The enzyme proteinase presented two protocols with "good" intra-rater reproducibility (ICC≥0.71) and the readings in triplicate against natural light showed the highest inter-examiner reproducibility for Pz-proteinase values. Three protocols with 'Good' intra-rater agreement for Pz-phospholipase were selected for interexaminer analysis. Caliper and computer readings, performed in triplicate, showed 'Very Good' reproducibility. In Study II, CUR at 0,1μM was used with LED light to promote sublethal dose of the PDI. The treatment group (C+L+) had its cells photosensitized with CUR and illuminated. The control group consisted of the samples that received only CUR (C+L-), and another which received neither CUR or light (C-L-). The adhesion ability was evaluated by means of CFU/mL and the XTT method. Biofilm formation was analyzed by means of CFU/mL, XTT and Crystal Violet (CV). The ability to secrete degradative enzymes was evaluated by the agarbased method and a colorimetric method. The results CFU/mL, XTT, CV were evaluated using a one-way multivariate analysis of the variance (MANOVA) and when statistically significant effects were detected, One... (Complete abstract electronic access below) / Mestre

Orientador: José Paes de Almeida Nogueira Pinto / Banca: Márcio Garcia Ribeiro / Banca: Vera Lúcia Mores Rall / Resumo: A carne bovina pode ser um importante veículo de vários patógenos para os humanos, com destaque à Escherichia coli produtora de Shiga-toxina (STEC), associada com diarreia em animais e humanos. Neste estudo, investigou-se em bovinos abatidos no estado de São Paulo, a prevalência dos diferentes patótipos de E. coli diarreiogênica e o perfil de virulência dos isolados de STEC. De um total de 431 animais, STEC foi identificada em 116 (26,9%) amostras de fezes, das quais 111 (25,8%) STEC eae- e 5 (1,2%) STEC eae+. O patótipo EPEC foi detectado em 20 (4,6%) amostras de fezes dos animais testados. Os demais patótipos de E. coli diarreiogênica não foram identificados. Dos 95 isolados de STEC analisados quanto ao perfil de virulência, todos albergavam stx2, enquanto que 28 (29,5%) continham stx1. Os genes iha e saa, que codificam adesinas, foram encontrados em 93,7% (89/95) e 66,3% (63/95), respectivamente. O gene espP, que codifica uma protease que auxilia na colonização intestinal, foi detectado em 61,1% (58/95) e a hemolisina ehxA em 54,7% (52/95). Também foram identificados em menores frequências os genes subAB, nleE e nleB. STEC está amplamente disseminada nos rebanhos bovinos de São Paulo, carreando genes comumente isolados de patógenos humanos, o que reforça a importância da inspeção e fiscalização nos abatedouros / Abstract: Beef can be an important vehicle for various pathogens to humans, especially Shiga toxin-producing Escherichia coli (STEC), associated to human and animal diarrhea. In this study, the prevalence of different pathotypes of diarrheagenic E. coli, and virulence profiles of STEC were investigated among feces of cattle slaughtered in São Paulo state, southeast of Brazil. From a total of 431 animals, STEC was identified from 116 (26,9%) samples, being 111 (25,8%) STEC eae- and 5 (1,1%) STEC eae+. EPEC pathotype was detected among 20 (4,6%) of animals. The other pathotypes of diarrheagenic E. coli were not identified. Of the 95 STEC isolates assessed for virulence profile, all harbored stx2, while 28 (29,5%) contained stx1. Iha and saa, genes encoding adhesins, were found at 93,7% (89/95) and 66,3% (63/95), respectively. EspP, gene which encoding a protease related with intestinal colonization, was detected in 61,1% (58/95) and ehxA hemolysin was present in 54,7% (52/95). SubAB, nleE and nleB genes were also detected in lower rates. STEC is widespread in cattle herds of São Paulo, containing commonly isolated genes from human pathogens, which reinforces the importance of inspection and surveillance in the slaughterhouses / Mestre