Orientador: Maria Denise Lopes / Banca: Noeme Sousa Rocha / Banca: Andrigo Barboza Di Nardi / Resumo: Os tumores mamários constituem as neoplasias de maior ocorrência nas cadelas e os hormônios são apontados como um dos principais fatores etiológicos. Foram utilizadas 26 cadelas portadoras de neoplasias mamárias e cinco cadelas sem afecções mamárias para o grupo controle. Através de um questionário respondido pelos proprietários das cadelas, parâmetros como pseudogestação, histórico de prenhez, uso de contraceptivos e tipo de alimentação foram analisados. Foram realizadas dosagens hormonais séricas e teciduais, através da técnica de radioimunoensaio, além da expressão de receptores de estrógeno e progesterona por meio da técnica de q-PCR. Os resultados obtidos demonstraram que há uma maior incidência das neoplasias malignas em relação às benignas na cidade de Botucatu e região. Em relação aos aspectos clínicos, a nuliparidade ou o pequeno número de gestações compreenderam a maioria dos animais com neoplasia mamária. Além disso, o estudo demonstrou um nível de conscientização dos proprietários da região, já que poucos utilizaram meios contraceptivos em seus animais. Em relação à dieta, a maioria dos animais estudados recebia carne bovina e suína. Foi observado que as neoplasias (benignas ou malignas) sintetizam uma quantidade maior de progesterona em relação à glândula mamária normal. Por fim, os três grupos de animais estudados (tumor maligno, benigno e controle) expressaram receptores de estrógeno alfa, beta e progesterona. A quantificação relativa mostrou uma tendência para expressão maior dos receptores no grupo controle e menor no grupo dos animais com neoplasias malignas. Além disso, houve uma expressão maior de ERα em relação ao ERβ e as neoplasias malignas de origem mista apresentaram maiores concentrações dos receptores PR, ERα e ERβ, comparadas às neoplasias de origem epitelial / Abstract: Mammary gland tumors are the neoplasms most common in female dogs and the hormones may be one of the principal etiologic factors. Twenty six female dogs with mammary neoplasias and five female dogs without mammary afeccions for the control group were used. Through questionary answered by female dogs owners, the variables as pseudopregnancy, pregnancy history, contraceptives use and diet were analyzed. It was done serum and tissue hormonal content by the radioimmunoassay technique, besides the estrogen and progesterone receptors expression by q-PCR technique. The results obtained showed higher incidence of malignant tumors in respect to benign tumors at Botucatu city and region. About clinical aspects the nulliparity or a small number of pregnancy are the major of animals with mammary tumors. Besides the study showed that owners have knowledge about the incorrect use of contraceptives in their animals. About the diet the major of animals analyzed received beef or pork. It was observed that tumors (benign or malignant) synthesize major progesterone amount in respect to the normal mammary gland. Finally the three animals groups evaluated (malignat tumor, benign tumor and control) expressed alpha and beta estrogen and progesterone receptors. The relative quantification showed a tendency for a higher expression of receptors from the controle group and smaller in the malignat tumors animal group. Besides there was a major ERα expression in respect to ERβ and the malignat tumors from mixed origin presented higher concentrations of receptors PR, ERα and ERβ, in compared to tumors from epithelial origin / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:23Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-02-29Bitstream added on 2014-06-13T19:20:20Z : No. of bitstreams: 1 andrade_fhe_dr_botfmvz.pdf: 2356107 bytes, checksum: d19c5a3663413870e6a4b3b5625849d2 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Cromatografia Líquida de Alta Eficiência – HPLC foi adaptada para detectar e identificar inseticidas piretróides no tecido adiposo adjacente ao tumor maligno de mama de 10 cadelas, sem predileção por raça e idade. Após a cirurgia, as massas eram examinadas cuidadosamente para lesões neoplásicas malignas. Cinco gramas de tecido adiposo adjacente ao tumor foram colhidos para demonstração de contaminantes ambientais. Os piretróides identificados foram aletrina, cialotrina, cipermetrina, deltametrina e tetrametrina, com nível de contaminação de 40%. A histopatologia demonstrou sete cadelas (70%) como carcinoma complexo, duas (20%) com carcinoma simples e uma (10%) com carcinoma anaplásico. Desses tumores, (80%) apresentaram grau III e (20%) grau I de agressividade. O nível de contaminação foi observado nos tumores mais agressivos. Esta foi à primeira demonstração que se tem conhecimento que o nível de contaminates ambientais pode ser detectado no tecido adiposo de cadela com tumor maligno de mama, pela HPLC. O presente resultado sugere que contaminantes ambientais possam estar envolvidos com o processo de formação ou associação ao risco de desenvolvimento do câncer de mama de cadela, sendo um indicador para auxiliar na monitoração de piretróides. / High Precision Liquid Chromatography – HPLC was adapted to detect and identify pyrethroid insecticides in adipose tissue adjacent to malignant tumor mammary gland tumor in 10 female dogs, without predilection for breed or age. After surgery, the masses were examined carefully for malignant neoplastic lesions. Five grams of adipose tissue adjacent to the tumor were collected for demonstration of environmental contaminants. The pyrethroids identified were allethrin, cyalothrin, cypermethrin, deltamethrin and tetramethrin, with a contamination level of 40%. The histopathology demonstrated seven female dogs (70%) as having complex carcinoma, two (20%) with simple carcinoma and one (10%) with anaplastic carcinoma. Of these tumors, (80%) presented aggressiveness degree III and (20%) degree I. The contamination level was observed in more aggressive tumors. This was the first known demonstration in which the level of environmental contaminants could be detected in adipose tissue of female dogs with malignant mammary tumor, by HPLC. The present result suggests that environmental pollutants can be involved with the formation process or association to the risk of development of female dog's breast cancer, being an indicator to aid in monitoring pyrethroids.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-03-25Bitstream added on 2014-06-13T18:58:51Z : No. of bitstreams: 1 ramos_rs_me_botfmvz.pdf: 462192 bytes, checksum: e311ecfd97004d3a810048058991f99e (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Os tumores mamários constituem as neoplasias de maior ocorrência nas cadelas e os hormônios são apontados como um dos principais fatores etiológicos. Foram utilizadas 26 cadelas portadoras de neoplasias mamárias e cinco cadelas sem afecções mamárias para o grupo controle. Através de um questionário respondido pelos proprietários das cadelas, parâmetros como pseudogestação, histórico de prenhez, uso de contraceptivos e tipo de alimentação foram analisados. Foram realizadas dosagens hormonais séricas e teciduais, através da técnica de radioimunoensaio, além da expressão de receptores de estrógeno e progesterona por meio da técnica de q-PCR. Os resultados obtidos demonstraram que há uma maior incidência das neoplasias malignas em relação às benignas na cidade de Botucatu e região. Em relação aos aspectos clínicos, a nuliparidade ou o pequeno número de gestações compreenderam a maioria dos animais com neoplasia mamária. Além disso, o estudo demonstrou um nível de conscientização dos proprietários da região, já que poucos utilizaram meios contraceptivos em seus animais. Em relação à dieta, a maioria dos animais estudados recebia carne bovina e suína. Foi observado que as neoplasias (benignas ou malignas) sintetizam uma quantidade maior de progesterona em relação à glândula mamária normal. Por fim, os três grupos de animais estudados (tumor maligno, benigno e controle) expressaram receptores de estrógeno alfa, beta e progesterona. A quantificação relativa mostrou uma tendência para expressão maior dos receptores no grupo controle e menor no grupo dos animais com neoplasias malignas. Além disso, houve uma expressão maior de ERα em relação ao ERβ e as neoplasias malignas de origem mista apresentaram maiores concentrações dos receptores PR, ERα e ERβ, comparadas às neoplasias de origem epitelial / Mammary gland tumors are the neoplasms most common in female dogs and the hormones may be one of the principal etiologic factors. Twenty six female dogs with mammary neoplasias and five female dogs without mammary afeccions for the control group were used. Through questionary answered by female dogs owners, the variables as pseudopregnancy, pregnancy history, contraceptives use and diet were analyzed. It was done serum and tissue hormonal content by the radioimmunoassay technique, besides the estrogen and progesterone receptors expression by q-PCR technique. The results obtained showed higher incidence of malignant tumors in respect to benign tumors at Botucatu city and region. About clinical aspects the nulliparity or a small number of pregnancy are the major of animals with mammary tumors. Besides the study showed that owners have knowledge about the incorrect use of contraceptives in their animals. About the diet the major of animals analyzed received beef or pork. It was observed that tumors (benign or malignant) synthesize major progesterone amount in respect to the normal mammary gland. Finally the three animals groups evaluated (malignat tumor, benign tumor and control) expressed alpha and beta estrogen and progesterone receptors. The relative quantification showed a tendency for a higher expression of receptors from the controle group and smaller in the malignat tumors animal group. Besides there was a major ERα expression in respect to ERβ and the malignat tumors from mixed origin presented higher concentrations of receptors PR, ERα and ERβ, in compared to tumors from epithelial origin

Orientador: Fabiana Ferreira de Souza / Resumo: As neoplasias estão se tornando cada vez mais comuns entre os animas domésticos, seja devido a maior expectativa de vida ou pelo avanço dos métodos diagnósticos e tratamentos. As neoplasias mamárias são o tipo mais comum de neoplasias entre as fêmeas caninas. A procura por novos tratamentos e/ou tratamentos específicos para os animais é cada vez mais comum frente à esse quadro. A rapamicina é um fármaco antifúngico com atividade antitumoral, que atua inibindo o complexo mTOR, já testada para o tratamento de neoplasias em diferentes órgãos em humanos, podendo ser uma alternativa no tratamento de neoplasias em cães. Devido ao grande número de repetições que os ensaios com fármacos necessitam, o cultivo celular in vitro é uma alternativa inicial para a descoberta de novos medicamentos eficazes no tratamento dessa espécie, além de também se tornar um ensaio pré-clínico. O objetivo desse estudo foi avaliar o efeito da rapamicina em células de tumores mamários primários e suas respectivas metástases de cadelas, cultivadas in vitro. Foram utilizados dois tipos histológicos tumores de mama, provenientes do tumor primário e suas respectivas metástases. Após a colheita, as amostras foram classificadas por histopatologia como carcinoma sólido grau III e carcinoma adenoescamoso, como tumores triplo negativos não basal pela imuno-histoquímica e tanto os tumores primários como suas metástases apresentaram expressão positiva para as proteínas PTEN,... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Neoplasms are becoming increasingly common among animals, whether due to longer life expectancy or new diagnostic methods and treatments. Breast neoplasms are the most common type of neoplasm among canine females. The search for new treatments and / or specific treatments for animals is increasingly common in this context. Rapamycin is an antifungal drug with antitumor activity, which acts to inhibit the mTOR comple. It was already tested for the treatment of neoplasms in different organs in humans and may be an alternative in the treatment of neoplasms in dogs. Due to the large number of replicates required by drug assays, in vitro cell culture is an early alternative for the discovery of new drugs that might be effective in treatment of this species, as well as becoming a preclinical assay. The aim of this study was to evaluate the effect of rapamycin on primary and metastatic mammary dog tumor on in vitro cultured cells. Two histological types of neoplastic cells from the primary tumor and their respective metastases were used. After collection, the samples were classified by histopathology as grade III solid carcinoma and adenosquamous carcinoma, as non-basal triple negative tumors by immunohistochemistry, and both the primary tumors and their metastases presented positive expression for PTEN, AKT, mTOR and 4EBP1 proteins in immunofluorescence. A fragment of the tumor tissue was cultured in vitro and the cells were evaluated for cell morphology and phenotype, gene express... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

A avaliação de linfonodos é parte importante do estadiamento das neoplasias mamárias, muito comum em cadelas, podendo auxiliar no estabelecimento do prognóstico e na escolha da melhor conduta terapêutica. Neste trabalho, dentre as várias técnicas de exame que permitem a avaliação de linfonodos, foi utilizada a ultra-sonografia. A avaliação ultra-sonográfica em modo B possibilitou avaliar tamanho, contorno, borda, forma, arquitetura, ecotextura e ecogenicidade do parênquima dos linfonodos e, em modo Doppler, a quantidade e distribuição dos seus vasos internos. Os objetivos deste trabalho foram identificar as características ultra-sonográficas mais importantes utilizadas para classificar os linfonodos em metastáticos e não-metastáticos, estabelecer elementos de confiabilidade do ultra-som como ferramenta para diferenciar linfonodos metastáticos de não-metastáticos e estabelecer procedimentos que permitam ao exame ultra-sonográfico de linfonodos, para essa classificação, ser reprodutível. Foram examinados 63 linfonodos inguinais superficiais de 30 cadelas com tumor em pelo menos uma das mamas inguinais ou abdominais caudais. Após o exame, cada linfonodo foi classificado como metastático ou não-metastático. A impressão diagnóstica do exame ultra-sonográfico foi associada aos resultados do exame histopatológico dos linfonodos obtendo-se uma taxa de concordância de 92,5%, índice de sensibilidade de 94,1%, índice de especificidade de 92%, valor preditivo positivo de 0,8 e valor preditivo negativo de 0,9787. As principais características ultra-sonográficas que classificaram um linfonodo inguinal superficial como metastático foram o contorno irregular, forma arredondada com razão C/E menor que dois, arquitetura desorganizada, ecotextura homogênea ou heterogênea, ecogenicidade alterada, vascularização elevada e de localização periférica. Quanto aos linfonodos não-metastáticos, as principais características ultra-sonográficas identificadas foram contorno regular, forma ovalada com razão C/E maior que dois, arquitetura preservada, ecotextura preservada, ecogenicidade normal, vascularização discreta a pequena e de localização hilar. O exame ultra-sonográfico dos linfonodos regionais constitui importante ferramenta na detecção de metástase e sugere-se incluí-lo como rotina do estadiamento de neoplasias mamárias em cadelas. / The evaluation of lymph nodes is an important part of the staging in case of mammary tumors, which are very common in female dogs. It can help in establishing a prognosis and chosing the best therapeutic procedures. In this study we used ultrasonography to assess lymph nodes within a variety of imaging techniques. B mode ultrasonography was used to provide information on size, edge, nodal borders, shape, architecture, echotexture and echogenivity of lymph nodes and Doppler ultrasonography to evaluate the quantity and distribution of the intranodal vessels. The objectives of this work were to identify which features in an ultrasound image can be associated to the metastatic or non-metastatic character of a lymph node; to establish the accuracy of the ultrasound as a tool to differentiate between metastatic and non-metastatic behavior and to establish procedures that permit the reproducibility of the results. Sixty three lymph nodes in thirty female dogs with mammary tumors were examined. We chose female dogs that had involvement of at least one of the inguinal or caudal abdominal mammary glands. Ultrasound imaging and histopathological exams were performed for each lymph node. Based on its ultrasound imaging, each lymph node was classified as metastatic or non-metastatic. When the ultrasound diagnostic was matched to the results of the histopathologic exam it was found that the classification of the lymph nodes using ultrasound imaging was correct in 92.5% of the cases, with sensibility of 94.1%, specificity of 92%, positive predictive value of 0.8 and negative predictive value of 0.9787. The main features in an ultrasound image associated with a metastatic superficial inguinal lymph node were irregular edge, round shape with long to short axis ratio lower than 2, loss of internal structure, homogeneous or heterogeneous echotexture, alteration of the echogenicity and high and peripheral vascularity. Relating to non metastatic lymph nodes, the main ultrasonographic characteristics were regular edge, oval shape with long to short axis ratio higher than 2, maintenance of internal structure, normal echo genetics and low hilar vascularity. The ultrasound imaging of regional lymph nodes is an important tool to detect metastasis and it is suggested that it becomes a regular procedure in the staging of canine mammary tumors.

O objetivo do presente estudo foi o de empregar um método analítico para a quantificação do tramadol no plasma de cadelas submetidas a ovário-salpingo-histerectomia, avaliar as concentrações plasmáticas e o efeito analgésico do tramadol nestes animais. Inicialmente, foram realizadas as cirurgias de ovário-salpingo-histerectomia e posterior avaliação da dor em 12 cadelas divididas em dois grupos de 6 animais, as quais receberam em dose única 2 mg/kg de tramadol, por via intravenosa ou intramuscular, com a administração em duplo cego. Posteriormente, realizou-se a implantação e padronização do método para detecção e quantificação do tramadol em plasma de cães. Para tal, utilizou-se a cromatografia líquida de alta performance para a determinação da concentração de tramadol, sendo necessária a adaptação e validação deste método para as condições do nosso laboratório. A validação da metodologia compreendeu o estudo da linearidade, a construção da curva de calibração, a determinação da precisão e recuperação do tramadol. De acordo com os resultados obtidos, o método foi considerado adequado, pois apresentou linearidade de resposta dentro da faixa desejável. Após a validação da metodologia iniciaram as avaliações das concentrações plasmáticas de tramadol no plasma das cadelas e foram calculados os parâmetros farmacocinéticos. Os resultados obtidos mostraram, que as variações das concentrações de tramadol foram significantemente afetadas pelas vias de administração. O grupo que recebeu tramadol por via intravenosa apresentou área sob a curva do tempo zero até o infinito (ASC0 → ∞) superior ao grupo tratado por via intramuscular, indicando que o tramadol administrado por via intravenosa possibilita maior biodisponibilidade deste fármaco no organismo animal. Em relação ao efeito analgésico observou-se que a administração de 2 mg/kg de tramadol, por via intravenosa, promoveu analgesia com duração entre 1,50 a 2,00 h em 67% dos animais (4 cadelas), enquanto a via intramuscular promoveu analgesia por até 6 h em 67% dos animais. No presente estudo foram observadas amplas variações nas concentrações plasmáticas de tramadol, no momento que foi observada a presença de dor; a concentração plasmática do tramadol variou cerca de 300 a 600 ng/ml em 71,0% dos animais. Portanto, a cromatografia liquida de alta performance com detector ultra violeta mostrou-se adequada para avaliar as concentrações plasmáticas do tramadol de cadelas submetidas a ovário-salpingo-histerectomia e a via de administração exerce grande influência sobre o efeito analgésico do tramadol, sendo que a administração por via intramuscular promoveu analgesia com duração maior do que àquela produzida pela via intravenosa / The aim of this study was to use an analytic method to tramadol quantification in the plasma of female dogs submitted to ovaryhisterectomy, evaluate the plasmatic concentrations and its analgesic effect on these animals. First of all, there were made the ovaryhisterectomy surgeries and posterior pain evaluation in 12 female dogs divided in 2 groups of 6 animals, wich received 2 mg/kg of tramadol in a single dose, by intravenous or intramuscular route, with the in double blind administration. Then, it was implantation and standardization of the method to detect and quantify tramadol in dog′s plasma. For that, it was utilized the high performance liquid chromatography to determine tramadol′s concentration, being necessary the adaptation and validation of this method to our laboratorie′s conditions. The method′s validation considered the linearity study, the construction of calibration′s curve, the accuracy′s determination and the recovery of tramadol. According to the results, the method was considered suitable, because it presented linearity response in the desirable range. After the validation of the methodology, the evaluation of tramadol′s plasmatic concentrations in the female dogs started and were calculated the pharmacokinetics parameters. The results showed that the variation of tramadol′s concentrations was significantly affected by administration routes. The group that received tramadol by intravenous route presented area under curve the time zero until infinity (AUC0→ ∞) superior to the group treated by intramuscular route, showing that the tramadol administrated by intravenous route can have more biodisponibility of this drug in the animal′s body. Regarding the analgesic effect it was observed that the administration of 2 mg/kg of tramadol, by intravenous route, promoted analgesia with length between 1.50 to 2.00 h in 67% of the animals (4 female dogs), while the intramuscular route promoted analgesia until 6 h in 67% of the animals. In this study it was observed wide variations in the tramadol′s plasmatic concentrations. In the moment that the pain′s presence was viewed, tramadol′s plasmatic concentration varied around 300 to 600 ng/ml in 71.0% of the animals. For this reason, the high performance liquid chromatography with ultra violet detector presented suitable to evaluate tramadol′s plasmatic concentrations in female dogs submitted to ovaryhisterectomy and the administration route makes big influence on tramadol′s analgesic effect moreover, the administration by intramuscular route promoted analgesia with length bigger than the other one produced by intravenous route

O objetivo do presente estudo foi o de empregar um método analítico para a quantificação do tramadol no plasma de cadelas submetidas a ovário-salpingo-histerectomia, avaliar as concentrações plasmáticas e o efeito analgésico do tramadol nestes animais. Inicialmente, foram realizadas as cirurgias de ovário-salpingo-histerectomia e posterior avaliação da dor em 12 cadelas divididas em dois grupos de 6 animais, as quais receberam em dose única 2 mg/kg de tramadol, por via intravenosa ou intramuscular, com a administração em duplo cego. Posteriormente, realizou-se a implantação e padronização do método para detecção e quantificação do tramadol em plasma de cães. Para tal, utilizou-se a cromatografia líquida de alta performance para a determinação da concentração de tramadol, sendo necessária a adaptação e validação deste método para as condições do nosso laboratório. A validação da metodologia compreendeu o estudo da linearidade, a construção da curva de calibração, a determinação da precisão e recuperação do tramadol. De acordo com os resultados obtidos, o método foi considerado adequado, pois apresentou linearidade de resposta dentro da faixa desejável. Após a validação da metodologia iniciaram as avaliações das concentrações plasmáticas de tramadol no plasma das cadelas e foram calculados os parâmetros farmacocinéticos. Os resultados obtidos mostraram, que as variações das concentrações de tramadol foram significantemente afetadas pelas vias de administração. O grupo que recebeu tramadol por via intravenosa apresentou área sob a curva do tempo zero até o infinito (ASC0 → ∞) superior ao grupo tratado por via intramuscular, indicando que o tramadol administrado por via intravenosa possibilita maior biodisponibilidade deste fármaco no organismo animal. Em relação ao efeito analgésico observou-se que a administração de 2 mg/kg de tramadol, por via intravenosa, promoveu analgesia com duração entre 1,50 a 2,00 h em 67% dos animais (4 cadelas), enquanto a via intramuscular promoveu analgesia por até 6 h em 67% dos animais. No presente estudo foram observadas amplas variações nas concentrações plasmáticas de tramadol, no momento que foi observada a presença de dor; a concentração plasmática do tramadol variou cerca de 300 a 600 ng/ml em 71,0% dos animais. Portanto, a cromatografia liquida de alta performance com detector ultra violeta mostrou-se adequada para avaliar as concentrações plasmáticas do tramadol de cadelas submetidas a ovário-salpingo-histerectomia e a via de administração exerce grande influência sobre o efeito analgésico do tramadol, sendo que a administração por via intramuscular promoveu analgesia com duração maior do que àquela produzida pela via intravenosa / The aim of this study was to use an analytic method to tramadol quantification in the plasma of female dogs submitted to ovaryhisterectomy, evaluate the plasmatic concentrations and its analgesic effect on these animals. First of all, there were made the ovaryhisterectomy surgeries and posterior pain evaluation in 12 female dogs divided in 2 groups of 6 animals, wich received 2 mg/kg of tramadol in a single dose, by intravenous or intramuscular route, with the in double blind administration. Then, it was implantation and standardization of the method to detect and quantify tramadol in dog′s plasma. For that, it was utilized the high performance liquid chromatography to determine tramadol′s concentration, being necessary the adaptation and validation of this method to our laboratorie′s conditions. The method′s validation considered the linearity study, the construction of calibration′s curve, the accuracy′s determination and the recovery of tramadol. According to the results, the method was considered suitable, because it presented linearity response in the desirable range. After the validation of the methodology, the evaluation of tramadol′s plasmatic concentrations in the female dogs started and were calculated the pharmacokinetics parameters. The results showed that the variation of tramadol′s concentrations was significantly affected by administration routes. The group that received tramadol by intravenous route presented area under curve the time zero until infinity (AUC0→ ∞) superior to the group treated by intramuscular route, showing that the tramadol administrated by intravenous route can have more biodisponibility of this drug in the animal′s body. Regarding the analgesic effect it was observed that the administration of 2 mg/kg of tramadol, by intravenous route, promoted analgesia with length between 1.50 to 2.00 h in 67% of the animals (4 female dogs), while the intramuscular route promoted analgesia until 6 h in 67% of the animals. In this study it was observed wide variations in the tramadol′s plasmatic concentrations. In the moment that the pain′s presence was viewed, tramadol′s plasmatic concentration varied around 300 to 600 ng/ml in 71.0% of the animals. For this reason, the high performance liquid chromatography with ultra violet detector presented suitable to evaluate tramadol′s plasmatic concentrations in female dogs submitted to ovaryhisterectomy and the administration route makes big influence on tramadol′s analgesic effect moreover, the administration by intramuscular route promoted analgesia with length bigger than the other one produced by intravenous route

Orientador: Noeme Souza Rocha / Banca: Michiko Sakate / Banca: Carla Adriene da Silva Franchi / Banca: Ana Lúcia Abreu Silva / Banca: Márcia Bersane Araújo de Medeiros / Resumo: Cromatografia Líquida de Alta Eficiência - HPLC foi adaptada para detectar e identificar inseticidas piretróides no tecido adiposo adjacente ao tumor maligno de mama de 10 cadelas, sem predileção por raça e idade. Após a cirurgia, as massas eram examinadas cuidadosamente para lesões neoplásicas malignas. Cinco gramas de tecido adiposo adjacente ao tumor foram colhidos para demonstração de contaminantes ambientais. Os piretróides identificados foram aletrina, cialotrina, cipermetrina, deltametrina e tetrametrina, com nível de contaminação de 40%. A histopatologia demonstrou sete cadelas (70%) como carcinoma complexo, duas (20%) com carcinoma simples e uma (10%) com carcinoma anaplásico. Desses tumores, (80%) apresentaram grau III e (20%) grau I de agressividade. O nível de contaminação foi observado nos tumores mais agressivos. Esta foi à primeira demonstração que se tem conhecimento que o nível de contaminates ambientais pode ser detectado no tecido adiposo de cadela com tumor maligno de mama, pela HPLC. O presente resultado sugere que contaminantes ambientais possam estar envolvidos com o processo de formação ou associação ao risco de desenvolvimento do câncer de mama de cadela, sendo um indicador para auxiliar na monitoração de piretróides. / Abstract: High Precision Liquid Chromatography - HPLC was adapted to detect and identify pyrethroid insecticides in adipose tissue adjacent to malignant tumor mammary gland tumor in 10 female dogs, without predilection for breed or age. After surgery, the masses were examined carefully for malignant neoplastic lesions. Five grams of adipose tissue adjacent to the tumor were collected for demonstration of environmental contaminants. The pyrethroids identified were allethrin, cyalothrin, cypermethrin, deltamethrin and tetramethrin, with a contamination level of 40%. The histopathology demonstrated seven female dogs (70%) as having complex carcinoma, two (20%) with simple carcinoma and one (10%) with anaplastic carcinoma. Of these tumors, (80%) presented aggressiveness degree III and (20%) degree I. The contamination level was observed in more aggressive tumors. This was the first known demonstration in which the level of environmental contaminants could be detected in adipose tissue of female dogs with malignant mammary tumor, by HPLC. The present result suggests that environmental pollutants can be involved with the formation process or association to the risk of development of female dog's breast cancer, being an indicator to aid in monitoring pyrethroids. / Doutor

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-08-12T13:34:01Z No. of bitstreams: 1 Cleyton Charles.pdf: 151151 bytes, checksum: 0991e7b76727fc161d5e8b39c0e7b255 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-12T13:34:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cleyton Charles.pdf: 151151 bytes, checksum: 0991e7b76727fc161d5e8b39c0e7b255 (MD5) Previous issue date: 2008-02-28 / To evaluate the profile of blood fibrinogen, serum C-reactive protein (CRP) and leukogram, besides checking the possible correlations loved these indicators laboratory in bitches clinically healthy and without pyometra, two groups were formed, one without pyometra (n = 15) and another with pyometra (n = 30). Collection of blood was obtained by venous puncture to obtain serum, plasma and whole blood, which are used in determining the variables. The quantitative PCR was determined by ultra-sensitive turbidimetric method. It was observed that the total number of leukocytes, metamyelocytes, band cells, segmented neutrophils, lymphocytes, and monocytes, in addition to fibrinogen and CRP were higher for the group of animals with pyometra, while the values of eosinophils were lower for the same group. High positive correlation was observed between CRP and fibrinogen and the latter with parameters of leukogram. It can be concludedthat leukocytes analysis of fibrinogen and C-reactive protein may be recommended as coadjutants examination in the diagnosis of the inflammatory process of bitches with pyometra. Judging by the ease and practicality of holding these different tests, it is recommended the fibrinogen followed by PCR for the clinical diagnosis of this condition. / Com o objetivo de avaliar o perfil sanguíneo do fibrinogênio, da proteína C reativa (PCR) e do leucograma, além verificar as possíveis correlações entre estes indicadores clínicos em cadelas clinicamente sadias e com piometra, foram constituídos dois grupos, sendo um sem piometra (n= 15) e outro com piometra (n=30). Coleta de sangue foi obtida por venopunção, para obtenção de soro, plasma e sangue total, sendo estes utilizados na determinação das variáveis. A PCR quantitativa foi determinada pelo método ultra-sensível turbidimétrico. Observou-se que o número total de leucócitos, metamielócitos, bastonetes, neutrófilos segmentados, linfócitos e monócitos, além do fibrinogênio e PCR foram maiores para o grupo de animais com piometra, enquanto que os valores de eosinófilos foram menores para este mesmo grupo. Alta correlação positiva foi observada entre o fibrinogênio e PCR e este último com parâmetros do leucograma. Pode-se concluir que análises leucométrica, do fibrinogênio e proteína C reativa podem ser recomendadas como exames coadjuvantes no diagnóstico do processo inflamatório de cadelas com piometra. Julgando-se pela facilidade e praticidade da realização destes diferentes testes, recomenda-se o fibrinogênio seguido da PCR para o diagnóstico desta condição clínica.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-10-18T17:21:44Z No. of bitstreams: 1 Maria Juliana C D S Teixeira.pdf: 3669007 bytes, checksum: 05acdce0c853db1f30e76e43a1a72023 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-18T17:21:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Maria Juliana C D S Teixeira.pdf: 3669007 bytes, checksum: 05acdce0c853db1f30e76e43a1a72023 (MD5) Previous issue date: 2007-02-14 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The major incidence and the high level of mortality associated to the huge diversity of the cancer phenotypic require numerous strategies for its diagnosis. In this research, the aim was to evaluate the mutation relation in the gene Tp53 with the breast cancer in female dogs, through the immunohistochemistry expression of the protein p53 and of the gene polymorphism in the breast tissues. In the Experiment 1, was studied the immunohistochemistry expression of the protein p53 in relationship to the morphologic aspects of healthy mammary tissues, to classification and grade of tumors and to the ipsilateral inguinal lymph-nodes tissue, metastatic or not. For this purpose 19 breasts from healthy female dogs were used (Group 1- control), 29 samples of breasts with clinical diagnosis of tumor (Group 2), 29 contralateral breasts (Group 3) and 29 lymphnodes (Group 4). The material was analyzed by conventional techniques of microscopy (staining HE) for tissue’s characterization and by immunohistochemistry (estreptavidina-biotina peroxidase method) to evaluate the expression of the protein p53 in the cellular compartment. The contralateral breasts and the lymph-nodes that showed metastasis were also marked, as well as the tissues that still showed normality. There weren´t statistical differences between the staining intensity and the number of cells stained with malignity grade. In the Experiment 2 the aim was to detect mutations in sequences of the exon 8 of the gene Tp53 through the PCR-RFLP technique with specific restriction enzymes to associate with band patterns obtained to the breast tumor type or normal tissues in female dogs. Were used 19 healthy female dogs (control) and 50 female dogs submitted to the tumor exerese from wich samples of tumor tissue and of healthy contralateral mammary glands were obtained. The DNA extraction was done through the fenol-cloroformic method and the PCR-RFLP technique was used for amplifiation and digestion of the exon 8 of the Tp53 with 6 restriction endonucleases, SmaI, DdeI, Rsa, AvaI, BsobI e AluI. The amplified DNA showed only one side of 200 pb in the agarose gel (0,8%). The PCR product showed on average 94% of homology with the known sequence of the gene (GeneBank –AAB42022.1). Among the 6 chosen enzymes, only 4 showed polymorphism (AluI, BsobI, DdeI e SmaI) in the tumor sequence of the exon 8 as to the numbers of pairs of the base (pb) or the quantity of cleavages. The band patterns of each enzyme showed polymorphism among the different groups, but not inside each group (normal female dogs, tumor mammary glands and contralateral breasts). There was´nt any difference among the breast tissues with tumor and the opposite laterals of the same animal, for the enzymes AluI, BsoBI e SmaI, reinforcing the idea that the tissues that didn´t showed visible alterations were already changed at the molecular level and therefore were potentially capable of developing tumors over the time. It is concluded that the gene Tp53 is strongly involved in the breast cancer etiology, and it could be used as a parameter to analyse these tumors´ behavior. The analysis of the protein p53 expression associated to the genetic markers that identify the mutations in the gene sequence could propitiate the early diagnosis of this pathology, allowing the treatment in time of avoiding metastasis and risks of the animal´s survival. / A incidência e o nível de mortalidade associada a diversidade dos fenótipos de câncer requerem estratégias para seu diagnóstico. Neste trabalho, objetivou-se avaliar a relação das mutações no gene Tp53 com o câncer de mama em cadelas, através da expressão imunoistoquímica da proteína p53 e do polimorfismo do gene nos tecidos mamários. No Experimento 1 foi verificada a expressão imunoistoquímica da proteína p53 associando-a ao aspecto morfológico de tecido glandular mamário sadio, a classificação e gradação dos tumores mamários e ao tecido linfonodal inguinal ipsilateral, (com ou sem metástase). Para isso foram utilizadas 19 mamas normais (Grupo 1 - controle), 29 amostras de mamas com diagnóstico clínico de tumor (Grupo 2), 29 mamas contra laterais (Grupo 3) e 29 linfonodos (Grupo 4). O material foi analisado por técnicas convencionais de microscopia (coloração HE) para caracterização dos tecidos e por imunoistoquímica (método da estreptavidina-biotina peroxidase) para avaliar a expressão da proteína p53 nos compartimentos celulares. As mamas do Grupo 2, pela análise histopatológica, apresentaram 65,52% de tumores malignos e 13,79% de tumores benignos. Foram observadas metástases em 6,9% das mamas contra laterais (Grupo 3) e em 31,03% dos linfonodos (Grupo 4). A marcação imunoistoquímica, para expressão de p53, não foi observada em tecidos de animais normais, mas foi evidente tanto em células de tumores malignos quanto benignos localizando-se no núcleo, no citoplasma ou em ambos compartimentos celulares. As mamas contra laterais e os linfonodos que apresentaram metástase também foram marcados, bem como tecidos que ainda apresentavam padrão de normalidade. Não houve diferenças estatísticas entre a intensidade da marcação e do número de células marcadas com o grau de malignidade. No Experimento 2, o objetivo foi detectar mutações em seqüências do exon 8 do gene Tp53 através da técnica PCR-RFLP com enzimas específicas de restrição para associar o padrão de bandas obtidas ao tipo de tumor de mama ou tecido de glândula mamária normal de cadelas. Foram utilizadas 19 cadelas sadias (controle) e 50 cadelas submetidas à retirada de tumor das quais foram obtidas amostras dos tecidos tumorais e de glândulas mamárias sadias contra laterais. A extração de DNA foi realizada pela técnica de fenol-clorofórmio e a PCR-RFLP foi utilizada para amplificação e digestão do exon 8 do Tp53 com 6 endonucleases de restrição, SmaI, DdeI, Rsa, AvaI, BsobI e AluI. O DNA amplificado apresentou uma única banda de 200 pb no gel de agarose 0,8%. O produto de PCR apresentou em média 94% de homologia com a seqüência conhecida do gene (GeneBank –AAB42022.1). Das 6 enzimas selecionadas, apenas 4 apresentaram polimorfismo (AluI, BsobI, DdeI e SmaI) na seqüência do exón 8 do tumor quanto ao número dos pares de base nucleotídeos (pb) ou quantidade de clivagens. O padrão das bandas de cada enzima apresentou polimorfismo entre os grupos diferentes, mas não dentro do seu grupo (cadelas normais, glândulas mamárias com tumor e mama contra lateral ao tumor). Não houve diferença entre os tecidos de mamas com tumor e as contra laterais do mesmo animal, para as enzimas AluI, BsoBI e SmaI, reforçando a idéia de que os tecidos que ainda não apresentam alteração visível, já se encontram alterados no nível molecular e portanto são potencialmente capazes de desenvolver tumores ao longo do tempo.Conclui-se que o gene Tp53 está fortemente envolvido na etiologia das neoplasias de mamas em cadelas, podendo ser utilizado como parâmetro para analisar o comportamento destes tumores. A análise da expressão da proteína p53 associada a marcadores genéticos que identificam mutações na seqüência do gene, pode propiciar o marcadores genéticos que identificam mutações na seqüência do gene, pode propiciar o diagnóstico precoce da patologia, permitindo o tratamento em tempo de evitar metástases.