A hiperplasia adrenal congênita (HAC) é um grupo de doenças hereditárias causadas por uma deficiência em uma das enzimas necessárias para a síntese de cortisol no cortex adrenal. Mais de 95% de todos os casos de HAC são devidos a 21-Hidroxilase (21-OHD). Existem 3 formas principais, duas com manifestações clínicas no período neonatal, a forma mais grave perdedora de sal (HAC-PS) e a forma virilizante simples (HAC-VS). Além da perda salina, o excesso de andrógenos leva à virilização de recém nascidas femininas. As formas neonatais são chamadas de clássicas, atividade enzimática da 21-OH bastante reduzida, de < 2% na HAC-PS e de 2-10% na HAC-VS. A forma parcial de início tardio é chamada de HAC não clássica (HAC-NC) e a principal manifestação na infância é a adrenarca precoce. Nesta forma a atividade da 21-OH é de 20-60%. Os programas de triagem para HAC visam, principalmente, ao diagnóstico precoce da forma clássica perdedora de sal, mais grave e potencialmente letal. No Brasil, a triagem pública é realizada no Estado de Goiás desde 1997 e em Santa Catarina desde 2001. No Rio Grande do Sul (RS) foi implantada em maio de 2014 na fase IV do Programa Nacional de Triagem Neonatal. A inclusão da HAC trouxe consigo muitos desafios e a exigência de um fluxo de triagem e diagnóstico bem estruturados. O diagnóstico precoce é crucial para prevenir o óbito de lactentes por insuficiência adrenal. Dosa-se, em papelfiltro, a 17OH progesterona (17-OHP). Elevações podem ocorrer em recém-nascidos sem HAC (falso-positivos), devido a situações de estresse perinatal e por prematuridade. Após avaliação dos dados do primeiro ano de triagem para HAC neste estudo, a mediana da idade da coleta nos casos diagnosticados foi de 8 dias (4.25-15.75). Dos 8 casos diagnosticados de maio de 2014 a abril de 2015, 6 casos com forma perdedora de sal (incluindo 1 caso de óbito por coleta tardia do TP aos 38 dias de vida). A incidência encontrada em nosso meio no primeiro ano foi de 1:13.551 casos. Com a estratégia do uso de pontos de corte estratificados pelo peso de nascimento18, o índice total de resultados positivos em nosso meio foi de 0,5% da amostra avaliada (“n” total de 514 bebês), sendo mais frequente em recém nascidos com menos de 2000g de peso ao nascer. Além da confirmação clínica e laboratorial, o genótipo é importante, além de confirmar, para estabelecer gravidade da doença e também para ratificar o diagnostico dos falsos positivos na ausência de uma mutação do gene CYP21A2. Um dos casos confirmados de HAC-PS foi associado a múltiplas malformações e craniossinostose severa, suscitando a hipótese de um a associação com defeito de FGFR2. A correlação genótipo- fenótipo na avaliação dos casos em dois anos da triagem alcançou um alto nível de concordância de 87%. Diagnosticada, portanto, de forma assertiva a HAC forma clássica, instituise a terapia glicocorticóide para as formas virilizante simples e acrescenta-se mineralocorticóide para as formas perdedoras de sal. A triagem neonatal é um importante programa de saúde populacional e visa ao diagnóstico precoce de uma patologia com potencial risco à vida pela perda de sal, além de permitir adequada atribuição de sexo nas meninas com virilização genital e à saúde da criança. Estabelecer os fluxos adequados de triagem e manejo, além de ampliar o conhecimento sobre a HAC, com o reconhecimento dos desfechos e tratamentos adequados é essencial para minimizar as possíveis complicações nesta população de maior vulnerabilidade. / Congenital adrenal hyperplasia (CAH) is a group of inherited diseases caused by a deficiency in one of the enzymes required for the cortisol synthesis by the adrenal cortex. More than 95% of all CAH cases are due to 21-hydroxylase (21-OHD). There are 3 forms, two with neonatal clinical manifestation: salt-wasting CAH (SW-CAH\) and the simple virilizing form (HAC-VS). In addition to salt loss, androgens excess lead to the virilization of female newborn. Neonatal forms are defined as classical CAH. The 21-OHD enzymatic activity in SWCAH is less than <2% and in the SV-CAH 2-10%. A late-onset form, with partial enzymatic defect (20-60%) is called non-classical HAC (NC-CAH) and the main manifestation in childhood is early adrenarche. In Brazil, public health screening has been conducted in the State of Goiás since 1997 and in te Sate of Santa Catarina since 2001. In Rio Grande do Sul (RS) it was implemented in May 2014, in phase IV of the National Neonatal Screening Program. The inclusion of CAH in the local screening program brought many challenges and the need of a well structured screening and diagnosis flowchart. Early diagnosis is crucial to prevent infant death due to adrenal insufficiency. Around de world, the screening programs for CAH main purpose is the early diagnosis of the more severe classical forms, especially SW-CAH. The cortisol precursor 17OH progesterone (17-OHP) is the main disease marker and is measured on filter paper. Elevations may occur in infants without CAH (false positive) due to perinatal stress and prematurity. Of newborns screened in the first year, median age of collection in diagnosed cases was 8 days (4.25-15.75) and 8 patients were diagnosed with CAH (four males, four females). The incidence of CAH in the state was 1:13,551. Six cases were identified as classic salt-was-ting CAH and two were cases of virilizing CAH. The overall rate of positive results was 0.5% (n = 514 infants). The number of false positive results was higher among newborns with birth weight < 2,000 g. In addition to clinical and laboratory confirmation, the genotype is important to confirme 21-OH deficiency, to establish disease severity and also in the absence of a mutation of the CYP21A2 gene to more precise exclude the diagnosis of suspected false positives. One of the confirmed cases of SW-CAH was associated with multiple malformations and severe craniosynostosis, raising the hypothesis of an association with FGFR2 mutation. A high genotype- phenotype correlation of 87% was found in the cases after two years of screening. Once the classic CAH is diagnosed, glucocorticoid therapy is instituted and mineralocorticoid is added for SW-CAH. CAH neonatal screening is an important population health program and aims to the early diagnosis of a pathology with a potential risk due to salt loss crisis. The early detection of cases also allows to adequate sex assignment in girls with genital virilization. Establishing adequate screening flows, proper diagnosis and management, in addition to increase knowledge about the disease, with the appropriate recognition of outcomes and treatments is essential to minimize complications in this population of greater vulnerability.

Introdução. As Repetições Palindrômicas Curtas Agrupadas e Regularmente Interespaçadas (CRISPRs) são DNAs que consistem de repetições de nucleotídeos. Existem 3 tipos: CRISPR1-CAS, CRISPR3-CAS e CRISPR2. Os bacteriófagos são partículas virais que infectam bactérias. Os bacteriófagos SAP6, IME-EF1, BC-611, VD-13 e F4 são encontrados em E. faecalis assim como FL1ABC, FL2AB, FL3AB e FL4A. Objetivo. Identificar e caracterizar as classes de CRISPRs e bacteriófagos de E. faecalis e E. faecium isoaldos de amostras alimentares, clínicas e fezes de animais. Materiais e métodos. Foram usadas DNA de 153 isolados, sendo 98 de E. faecalis e 55 de E. faecium. A técnica de detecção foi a PCR utilizando iniciadores para os genes CRISPR1-Cas, CRISPR2, CRISPR3-cas e bacteriófagos, seguido por electroforese em gel de agarose. Resultados. Para E. faecalis foram detectadas 58 isolados que amplifacaram para o gene CRISPR1-Cas; 87 para CRISPR2 e 13 para CRISPR3-Cas. Para E. faecium foram detectadas 4 isolados positivos para o gene CRISPR1-Cas; 18 para CRISPR2 e 1 para CRISPR3-CAS. O bacteriófago FL2ABfoi detectado em 13 isolados de E. faecalis; o bacteriófago FL3AB em 13 isolados de E. faecalis e o FL4A em 28 isolados de E. faecalis. Conclusão. Neste estudo nos encontramos diferentes proporções e distribuições dos genes CRISPRs em E. faecalis e E. faecium. O bacteriófago FL4A apresentou-se como o mais frequente entre os bacteriófagos avalados. / Introduction. The CRISPR are small portions of DNA consisting of nucleotide repeats. There are three types of CRISPRs recognized: CRISPR-associated genes cas: CRISPR1-CAS and CRISPR3-CAS and a orphan locus lacking cas genes: CRISPR2. Bacteriophages are viral particles that infect bacterial. The bacteriophages SAP6, IME-EF1, BC-611 and F4 are found in E. faecalis as well as FL1ABC, FL2AB, FL3AB, FL4A. Objectivy: To Identify and to characterize CRISPRs genes and bacteriophage genes in E. faecalis and E. faecium isolated from food, clinical and animal fecal samples. Materials and methods. A total of 153 DNA samples were used, 98 from E. faecalis and 55 from E. faecium. The PCR technique using primers was used to detect the genes CRISPR1-Cas, CRISPR2, CRISPR3-cas and bacteriophages, followed the agarose gel electrophoresis. Results. To E. faecalis was detected 58 isolates that amplified the CRISPR1-Cas genes, 87 to CRISPR2 and 13 to CRISPR3-Cas. To E. faecium was detected 4 isolates positive to CRISPR1-Cas gene, 18 to CRISPR2 e 1 to CRISPR3-CAS. The FL2AB bacteriophage was detected in 13 isolates of E. faecalis; the FL3AB bacteriophage in 13 isolates of E. faecalis and the FL4A in 28 isolates of E. faecalis. Conclusion. In this work, we found out different proportions and distributions of CRISPRs genes in E. faecalis e E. faecium. The FL4A bacteriophage showed a high frequency among the bacteriophages tested.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Acredita-se que os primeiros progenitores da hematopoese definitiva surjam da diferenciação do endotélio da aorta dorsal, na altura da região da Aorta-Gônada-Mesonefros (AGM). Com o intuito de estudar esta região e o fenótipo das células do endotélio da aorta dorsal nesta posição topográfica, ovos galados de Gallus gallus domesticus L. foram incubados em chocadeira, classificados em estádios de E16 a E25 e processados histotecnologicamente para obtenção de secções seriadas na altura da região AGM. Estas passaram por coloração por Hematoxilina-Eosina, histoquímica para PAS, PAS-diastase e Alcian Blue pH 1.0 e pH 2.5, histoquímica por lectinas fluoresceinadas e imunofluorescência para moléculas de superfície, citoesqueleto e matriz extracelular. Foi observada hipertrofia endotelial no assoalho da aorta nos estádios observados, o qual se apresentava positivo ao PAS, com ocorrência frequente de vacuolizações basais PAS negativas, e o surgimento ocasional de grupamentos celulares intravasculares. Nestes, as células que se destacavam da membrana basal do endotélio expressavam progressivamente mais material PAS positivo, o qual, no entanto, em nenhum momento pareceu se tratar de glicogênio. Em relação às glicosaminoglicanas, notamos a presença predominante de ácido hialurônico por todo o mesênquima da região e em outras estruturas como periferia da notocorda, tubo neural e mesoderma lateral. Ocorreu co-expressão de fibronectina e &#945;-actina de músculo liso em células circunjacentes à aorta, na face ventral do vaso. GFAP e BMP-4 são expressas entre as células do tubo neural e em sua periferia, assim como na notocorda do embrião. As lectinas Abrus precatorius, Lens culinarise Ricinus communis mostraram-se positivas principalmente na região subedotelial do assoalho da aorta nos estádios observados neste trabalho. Bandeiraea simplicifolia exibiu pouca marcação na aorta dorsal e a Arachis hypogeae foi negativa. Outras estruturas da região AGM também expressaram resíduos de açúcares revelados por estas lectinas, tais como: notocorda, tubo neural, mesênquima, intestino primitivo e saco vitelínico. Estes resultados acrescentam elementos morfológicos e bioquímicos ao conhecimento sobre a região AGM de embriões de galinha e sobre o endotélio, possivelmente hemogênico, da aorta dorsal. / Nowadays it is known that firsts definitive hematopoietic progenitors arise from endothelium differentiation of dorsal aorta, at Aorta-Gonad-Mesonephros (AGM) site. In order to study those events and cells phenotype of dorsal aorta endothelium in this topographical site, fertilized eggs of Gallus gallus domesticus L. were incubated, from E16 to E25 and to be processed by histotechonology to obtain serial sections of the AGM site. After this, they were stained with Hematoxilin-Eosin, histochemistry to PAS, diastase PAS and Alcian Blue pH 1.0 and pH 2.5, to obtain a better overview and characterization from cells, also, histochemistry to fluorescein lectins and immunofluorescense to surface molecules, cytoeskeleton andextracellular matrix were performed. Our results showed endothelial hypertrophy of the aorta floor in the stages analyzed, which shown positive for PAS, with frequent appearance of PAS negatives basal vacuolizations and an occasional intravascular cell clusters arise of. It was also observed that cells which were separated from endothelium basal membrane shown progressively were more PAS positive which however in any time seems to be glycogen. Regard of glycosaminoglycans we noted the main presence of hialuronic acid for all the mesenchymes site and in others structures like notochord periphery, neural tube and lateral mesoderm. It was observed fibronectin and smooth muscle &#945;-actin co-expression on aorta surrounding walls, at vessels ventral face. GFAP and BMP-4 are express between the cells of neural tube and surrounding it, as well as at embryo notochord. The lectins Abrus precatorius, Lens culinaris and Ricinus communis showed mostly positive expression on the sub endothelium site of the dorsal aorta floor at the stages analyzed in this work. Bandeiraea simplicifolia showed low expression on dorsal aorta and in Arachis hypogeae it was negative. Other structures of AGMs site also expressed sugar residues revealed by these lectins like: notochord, neural tube, mesenchyme, primitive gut and yolk sac.

Submitted by Rafael Bispo Paschoalini (rbpaschoalini@gmail.com) on 2016-03-08T04:00:33Z No. of bitstreams: 1 Dissertação de mestrado - Rafael Bispo Paschoalini.pdf: 2764983 bytes, checksum: 576265167e590acb2641a540cda6283a (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-03-09T16:26:52Z (GMT) No. of bitstreams: 1 paschoalini_rb_me_bot.pdf: 2764983 bytes, checksum: 576265167e590acb2641a540cda6283a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-09T16:26:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 paschoalini_rb_me_bot.pdf: 2764983 bytes, checksum: 576265167e590acb2641a540cda6283a (MD5) Previous issue date: 2016-02-26 / O carcinoma de mama é uma doença heterogênea. Pode ser classificado em fenótipos, com diferentes prognósticos, com base na expressão de determinadas proteínas. O fenótipo luminal é o mais frequente, correspondendo a cerca de 70% dos casos, sendo que tratamentos específicos para este fenótipo de carcinoma de mama já estão em estudo, com melhora promissora do prognóstico das pacientes acometidas. Entretanto, ainda não foram definidos critérios citológicos que pudessem predizer este fenótipo no material obtido pela punção aspirativa por agulha fina (PAAF). OBJETIVO: Investigar critérios citológicos individuais presentes na PAAF que possam se associar com o diagnóstico do fenótipo luminal do carcinoma de mama. MÉTODOS: Trata-se de estudo tipo corte-transversal, com componente descritivo e comparativo. As lâminas de PAAF e espécimes de carcinomas de mama invasivos ductais e lobulares, do período de 2000 a 2005, foram selecionados do arquivo do Laboratório de Patologia do Hospital Amaral Carvalho de Jaú/São Paulo, totalizando 297 casos. Dos blocos doadores foram extraídos cilindros de 2mm de diâmetro e depositados nos blocos de parafina receptores, usando Tissue Microarrays (Bencher Instruments®, Silver Spring, Maryland). Nestes cortes, foi feita a pesquisa imunoistoquímica para diferenciação dos fenótipos do carcinoma de mama, segundo a Classificação Molecular. As lâminas obtidas por PAAF, foram revisadas em microscópio de multiobservação (BX50 Olympus®, Japan), por dois médicos patologistas (RMD e FMN), sendo estudados individualmente os cinco critérios citológicos: celularidade, coesão celular, necrose, nucléolo e atipia nuclear. Utilizou-se o teste exato de Fisher para testar a associação entre os critérios citológicos e os fenótipos do carcinoma de mama. RESULTADOS: Dos 297 casos selecionados, 169 foram incluídos, resultando nos seguintes fenótipos - luminal A: 107 (63.3%), luminal B: 39 (23.1%), superexpressão de HER2: 8 (4.7%), e triplo negativo: 15 (8.9%). Os critérios citológicos que se associaram ao fenótipo luminal foram: celularidade baixa ou moderada (40.4%) (OR = 7.12, IC95%: 1.61 - 31.52), nucléolo inconspícuo ou presente (55.5%) (OR = 8.31, IC95%: 2.36 - 29.19) e atipia nuclear discreta ou moderada (44.5%) (OR = 8.42, IC95%: 1.90 - 37.25). Os critérios citológicos associados ao fenótipo luminal A foram: nucléolo inconspícuo ou presente (62.6%) (OR = 2.99, IC95%: 1.39 – 6.41), menor perda de coesão celular (OR = 0.46, IC95%: 0.24 - 0.88), mostrando grupamentos com coesão celular moderada a intensa, e ausência de necrose (40.2%) (OR = 0.32, IC95%: 0.15 – 0.68). CONCLUSÃO: Os critérios citológicos presentes nas lâminas obtidas por PAAF, e que mais se associaram ao fenótipo luminal do carcinoma de mama foram celularidade baixa e moderada, nucléolos inconspícuos ou pequenos e atipia nuclear leve a moderada. Cabe destacar, que para o fenótipo luminal A, os critérios citológicos que mais se associaram foram: nucléolos inconspícuos ou pequenos, coesão celular moderada a intensa e ausência de necrose. A distinção do fenótipo luminal é de relevância clínica, por apresentar melhor prognóstico, relacionado a menor mortalidade e menores taxas de metástase. / Breast carcinoma is a heterogeneous disease. It can be classified into phenotypes based on the expression of certain proteins, with differences in prognosis. The luminal phenotype is the most common, accounting for about 70% of cases. Some specific treatments for this phenotype of breast carcinoma are already being studied, which could improve prognosis of affected patients. However, there is currently no consensus on which cytological criteria could predict the luminal phenotype. OBJECTIVE: To evaluate which cytological criteria in fine-needle aspiration (FNA) biopsy are related with the luminal phenotype of breast carcinoma. METHODS: This was a cross-sectional study with descriptive and comparative component from cases of breast carcinomas, from the Laboratory of Pathology, Hospital Amaral Carvalho de Jaú / São Paulo. FNA biopsy specimens and tissue sections (mastectomy specimens) of invasive ductal and lobular carcinomas of the breast, retrieved from 2000 to 2005, were selected and classified into phenotypes by immunohistochemistry, using tissue microarray technology (Bencher Instruments®, Silver Spring, Maryland): luminal A and B, HER2 overexpression and triple negative. The cytological criteria for all cases were reviewed blindly by two pathologists using a multiobserver microscope (BX50 Olympus®, Japan), according to five cytological criteria: cellularity, cell cohesion, necrosis, nucleoli and nuclear atypia. Exact Fisher test was used to test the association between cytological criteria and phenotypes of breast carcinoma. RESULTS: From 297 selected patients, 169 were included, resulting in the following phenotypes - luminal A: 107 (63.3%), luminal B: 39 (23.1%), HER2 overexpression: 8 (4.7%), and triple negative: 15 (8.9%). The luminal phenotype showed mild or moderate cellularity (40.4%) (OR = 7.12, 95% CI: 1.61 - 31.52), inconspicuous or present nucleoli (55.5%) (OR = 8.31, 95% CI: 2.36 - 29.19) and mild or moderate nuclear atypia (44.5%) (OR = 8.42, 95% CI: 1.90 - 37.25). Inconspicuous or present nucleoli (62.6%) (OR = 2.99, 95% CI: 1.39 - 6.41), less dishesive cells (OR = 0.46, 95% CI: 0.24 - 0.88), showing clusters with moderate to intense cell cohesion (54.2%), and absence of necrosis (40.2%) (OR = 0.32, 95% CI: 0.15 - 0.68) were associated with luminal A phenotype. CONCLUSION: The individual FNA cytological criteria that might indicate the luminal phenotype of breast cancer were mild to moderate cellularity, inconspicuous or little nucleoli and mild to moderate nuclear atypia. Inconspicuous or little nucleoli, moderate to intense cell cohesion and absence of necrosis were associated with luminal A phenotype. The distinction of luminal phenotype of breast carcinoma is clinically relevant, since it has better prognosis, related to lower mortality and lower metastases rate.

A pigmentação humana é uma característica variável e complexa determinada por fatores genéticos e hormonais, exposição à radiação ultravioleta, idade, doenças, entre outros. Alguns polimorfismos em genes de pigmentação têm sido associados com a diversidade fenotípica de cor da pele, cabelo e olhos e em populações homogêneas. A técnica denominada Fenotipagem Forense pelo DNA (FDP) vem beneficiando a ciência forense em vários países e auxiliando investigações criminais por ser capaz de sugerir, com boa precisão, os possíveis fenótipos para as características externamente visíveis (EVCs) em amostras de origem desconhecida. No presente trabalho foram avaliadas as associações entre os SNPs presentes nos genes SLC24A5 (rs1426654; rs16960620; rs2555364), TYR (rs1126809) e ASIP (rs6058017) com cor de pele, cabelo e olhos em indivíduos da população brasileira para apontar o possível uso desses marcadores na prática forense em populações miscigenadas. Os voluntários responderam um questionário no qual fizeram a autodeclaração dessas características e estes dados foram usados para as comparações entre genótipos e fenótipos. Os resultados mostraram que para os SNPs rs2555364 e rs1426654 o alelo ancestral esteve associado com as características cor de pele negra, cabelos castanhos ou pretos e olhos castanhos. Além disso, o alelo ancestral do SNP rs6058017 foi significativamente associado com cor de pele negra e olhos castanhos. Inversamente, os alelos variantes destes SNPs são correlacionados com características de pigmentação clara para as EVCs avaliadas, corroborando os estudos prévios realizados em diferentes populações. Esses resultados mostram que a informação molecular pode ser útil para a inferência de EVCs, e a técnica de FDP é uma importante ferramenta para estudos forenses em amostra brasileira / Human pigmentation is a variable and complex trait determined by genetic and hormonal factors, exposure to ultraviolet radiation, age, diseases, among others. Some polymorphisms in pigmentation genes have been associated with the phenotypic diversity of skin, hair and eyes color in homogeneous populations. Forensic DNA Phenotyping (FDP) is benefiting forensic science in several countries, helping in criminal investigations due to its ability to suggest, with good accuracy, the possible phenotypes for externally visible characteristics (EVCs) in samples of unknown origin. Herein, we evaluated the associations between the SNPs present in the genes SLC24A5 (rs1426654; rs16960620; rs2555364), TYR (rs1126809) and ASIP (rs6058017) with skin, hair and eyes color in individuals of the Brazilian population in order to point out the possible use of these markers in forensic practice in admixed populations. The volunteers answered a questionnaire in which they self reported these characteristics for comparison between genotypes and phenotypes. The results showed that for the SNPs rs2555364 and rs1426654 the ancestral allele was associated with characteristics of black skin color, brown or black hair and brown eyes. In addition, the ancestral allele of the SNP rs6058017 was significantly associated with black skin color and brown eyes. Inversely, the variant alleles of these SNPs are correlated with fair pigmentation characteristics for the evaluated EVCs, corroborating the previous studies performed in different populations. These results show that molecular information may be useful for the inference of EVCs, and the FDP technique is an important tool for forensic studies in a Brazilian sample

Orientador: Rozany Mucha Dufloth / Resumo: O carcinoma de mama é uma doença heterogênea. Pode ser classificado em fenótipos, com diferentes prognósticos, com base na expressão de determinadas proteínas. O fenótipo luminal é o mais frequente, correspondendo a cerca de 70% dos casos, sendo que tratamentos específicos para este fenótipo de carcinoma de mama já estão em estudo, com melhora promissora do prognóstico das pacientes acometidas. Entretanto, ainda não foram definidos critérios citológicos que pudessem predizer este fenótipo no material obtido pela punção aspirativa por agulha fina (PAAF). OBJETIVO: Investigar critérios citológicos individuais presentes na PAAF que possam se associar com o diagnóstico do fenótipo luminal do carcinoma de mama. MÉTODOS: Trata-se de estudo tipo corte-transversal, com componente descritivo e comparativo. As lâminas de PAAF e espécimes de carcinomas de mama invasivos ductais e lobulares, do período de 2000 a 2005, foram selecionados do arquivo do Laboratório de Patologia do Hospital Amaral Carvalho de Jaú/São Paulo, totalizando 297 casos. Dos blocos doadores foram extraídos cilindros de 2mm de diâmetro e depositados nos blocos de parafina receptores, usando Tissue Microarrays (Bencher Instruments®, Silver Spring, Maryland). Nestes cortes, foi feita a pesquisa imunoistoquímica para diferenciação dos fenótipos do carcinoma de mama, segundo a Classificação Molecular. As lâminas obtidas por PAAF, foram revisadas em microscópio de multiobservação (BX50 Olympus®, Japan), por dois médicos p... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Breast carcinoma is a heterogeneous disease. It can be classified into phenotypes based on the expression of certain proteins, with differences in prognosis. The luminal phenotype is the most common, accounting for about 70% of cases. Some specific treatments for this phenotype of breast carcinoma are already being studied, which could improve prognosis of affected patients. However, there is currently no consensus on which cytological criteria could predict the luminal phenotype. OBJECTIVE: To evaluate which cytological criteria in fine-needle aspiration (FNA) biopsy are related with the luminal phenotype of breast carcinoma. METHODS: This was a cross-sectional study with descriptive and comparative component from cases of breast carcinomas, from the Laboratory of Pathology, Hospital Amaral Carvalho de Jaú / São Paulo. FNA biopsy specimens and tissue sections (mastectomy specimens) of invasive ductal and lobular carcinomas of the breast, retrieved from 2000 to 2005, were selected and classified into phenotypes by immunohistochemistry, using tissue microarray technology (Bencher Instruments®, Silver Spring, Maryland): luminal A and B, HER2 overexpression and triple negative. The cytological criteria for all cases were reviewed blindly by two pathologists using a multiobserver microscope (BX50 Olympus®, Japan), according to five cytological criteria: cellularity, cell cohesion, necrosis, nucleoli and nuclear atypia. Exact Fisher test was used to test the association between cy... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Acredita-se que os primeiros progenitores da hematopoese definitiva surjam da diferenciação do endotélio da aorta dorsal, na altura da região da Aorta-Gônada-Mesonefros (AGM). Com o intuito de estudar esta região e o fenótipo das células do endotélio da aorta dorsal nesta posição topográfica, ovos galados de Gallus gallus domesticus L. foram incubados em chocadeira, classificados em estádios de E16 a E25 e processados histotecnologicamente para obtenção de secções seriadas na altura da região AGM. Estas passaram por coloração por Hematoxilina-Eosina, histoquímica para PAS, PAS-diastase e Alcian Blue pH 1.0 e pH 2.5, histoquímica por lectinas fluoresceinadas e imunofluorescência para moléculas de superfície, citoesqueleto e matriz extracelular. Foi observada hipertrofia endotelial no assoalho da aorta nos estádios observados, o qual se apresentava positivo ao PAS, com ocorrência frequente de vacuolizações basais PAS negativas, e o surgimento ocasional de grupamentos celulares intravasculares. Nestes, as células que se destacavam da membrana basal do endotélio expressavam progressivamente mais material PAS positivo, o qual, no entanto, em nenhum momento pareceu se tratar de glicogênio. Em relação às glicosaminoglicanas, notamos a presença predominante de ácido hialurônico por todo o mesênquima da região e em outras estruturas como periferia da notocorda, tubo neural e mesoderma lateral. Ocorreu co-expressão de fibronectina e &#945;-actina de músculo liso em células circunjacentes à aorta, na face ventral do vaso. GFAP e BMP-4 são expressas entre as células do tubo neural e em sua periferia, assim como na notocorda do embrião. As lectinas Abrus precatorius, Lens culinarise Ricinus communis mostraram-se positivas principalmente na região subedotelial do assoalho da aorta nos estádios observados neste trabalho. Bandeiraea simplicifolia exibiu pouca marcação na aorta dorsal e a Arachis hypogeae foi negativa. Outras estruturas da região AGM também expressaram resíduos de açúcares revelados por estas lectinas, tais como: notocorda, tubo neural, mesênquima, intestino primitivo e saco vitelínico. Estes resultados acrescentam elementos morfológicos e bioquímicos ao conhecimento sobre a região AGM de embriões de galinha e sobre o endotélio, possivelmente hemogênico, da aorta dorsal. / Nowadays it is known that firsts definitive hematopoietic progenitors arise from endothelium differentiation of dorsal aorta, at Aorta-Gonad-Mesonephros (AGM) site. In order to study those events and cells phenotype of dorsal aorta endothelium in this topographical site, fertilized eggs of Gallus gallus domesticus L. were incubated, from E16 to E25 and to be processed by histotechonology to obtain serial sections of the AGM site. After this, they were stained with Hematoxilin-Eosin, histochemistry to PAS, diastase PAS and Alcian Blue pH 1.0 and pH 2.5, to obtain a better overview and characterization from cells, also, histochemistry to fluorescein lectins and immunofluorescense to surface molecules, cytoeskeleton andextracellular matrix were performed. Our results showed endothelial hypertrophy of the aorta floor in the stages analyzed, which shown positive for PAS, with frequent appearance of PAS negatives basal vacuolizations and an occasional intravascular cell clusters arise of. It was also observed that cells which were separated from endothelium basal membrane shown progressively were more PAS positive which however in any time seems to be glycogen. Regard of glycosaminoglycans we noted the main presence of hialuronic acid for all the mesenchymes site and in others structures like notochord periphery, neural tube and lateral mesoderm. It was observed fibronectin and smooth muscle &#945;-actin co-expression on aorta surrounding walls, at vessels ventral face. GFAP and BMP-4 are express between the cells of neural tube and surrounding it, as well as at embryo notochord. The lectins Abrus precatorius, Lens culinaris and Ricinus communis showed mostly positive expression on the sub endothelium site of the dorsal aorta floor at the stages analyzed in this work. Bandeiraea simplicifolia showed low expression on dorsal aorta and in Arachis hypogeae it was negative. Other structures of AGMs site also expressed sugar residues revealed by these lectins like: notochord, neural tube, mesenchyme, primitive gut and yolk sac.

A hiperplasia adrenal congênita (HAC) é um grupo de doenças hereditárias causadas por uma deficiência em uma das enzimas necessárias para a síntese de cortisol no cortex adrenal. Mais de 95% de todos os casos de HAC são devidos a 21-Hidroxilase (21-OHD). Existem 3 formas principais, duas com manifestações clínicas no período neonatal, a forma mais grave perdedora de sal (HAC-PS) e a forma virilizante simples (HAC-VS). Além da perda salina, o excesso de andrógenos leva à virilização de recém nascidas femininas. As formas neonatais são chamadas de clássicas, atividade enzimática da 21-OH bastante reduzida, de < 2% na HAC-PS e de 2-10% na HAC-VS. A forma parcial de início tardio é chamada de HAC não clássica (HAC-NC) e a principal manifestação na infância é a adrenarca precoce. Nesta forma a atividade da 21-OH é de 20-60%. Os programas de triagem para HAC visam, principalmente, ao diagnóstico precoce da forma clássica perdedora de sal, mais grave e potencialmente letal. No Brasil, a triagem pública é realizada no Estado de Goiás desde 1997 e em Santa Catarina desde 2001. No Rio Grande do Sul (RS) foi implantada em maio de 2014 na fase IV do Programa Nacional de Triagem Neonatal. A inclusão da HAC trouxe consigo muitos desafios e a exigência de um fluxo de triagem e diagnóstico bem estruturados. O diagnóstico precoce é crucial para prevenir o óbito de lactentes por insuficiência adrenal. Dosa-se, em papelfiltro, a 17OH progesterona (17-OHP). Elevações podem ocorrer em recém-nascidos sem HAC (falso-positivos), devido a situações de estresse perinatal e por prematuridade. Após avaliação dos dados do primeiro ano de triagem para HAC neste estudo, a mediana da idade da coleta nos casos diagnosticados foi de 8 dias (4.25-15.75). Dos 8 casos diagnosticados de maio de 2014 a abril de 2015, 6 casos com forma perdedora de sal (incluindo 1 caso de óbito por coleta tardia do TP aos 38 dias de vida). A incidência encontrada em nosso meio no primeiro ano foi de 1:13.551 casos. Com a estratégia do uso de pontos de corte estratificados pelo peso de nascimento18, o índice total de resultados positivos em nosso meio foi de 0,5% da amostra avaliada (“n” total de 514 bebês), sendo mais frequente em recém nascidos com menos de 2000g de peso ao nascer. Além da confirmação clínica e laboratorial, o genótipo é importante, além de confirmar, para estabelecer gravidade da doença e também para ratificar o diagnostico dos falsos positivos na ausência de uma mutação do gene CYP21A2. Um dos casos confirmados de HAC-PS foi associado a múltiplas malformações e craniossinostose severa, suscitando a hipótese de um a associação com defeito de FGFR2. A correlação genótipo- fenótipo na avaliação dos casos em dois anos da triagem alcançou um alto nível de concordância de 87%. Diagnosticada, portanto, de forma assertiva a HAC forma clássica, instituise a terapia glicocorticóide para as formas virilizante simples e acrescenta-se mineralocorticóide para as formas perdedoras de sal. A triagem neonatal é um importante programa de saúde populacional e visa ao diagnóstico precoce de uma patologia com potencial risco à vida pela perda de sal, além de permitir adequada atribuição de sexo nas meninas com virilização genital e à saúde da criança. Estabelecer os fluxos adequados de triagem e manejo, além de ampliar o conhecimento sobre a HAC, com o reconhecimento dos desfechos e tratamentos adequados é essencial para minimizar as possíveis complicações nesta população de maior vulnerabilidade. / Congenital adrenal hyperplasia (CAH) is a group of inherited diseases caused by a deficiency in one of the enzymes required for the cortisol synthesis by the adrenal cortex. More than 95% of all CAH cases are due to 21-hydroxylase (21-OHD). There are 3 forms, two with neonatal clinical manifestation: salt-wasting CAH (SW-CAH\) and the simple virilizing form (HAC-VS). In addition to salt loss, androgens excess lead to the virilization of female newborn. Neonatal forms are defined as classical CAH. The 21-OHD enzymatic activity in SWCAH is less than <2% and in the SV-CAH 2-10%. A late-onset form, with partial enzymatic defect (20-60%) is called non-classical HAC (NC-CAH) and the main manifestation in childhood is early adrenarche. In Brazil, public health screening has been conducted in the State of Goiás since 1997 and in te Sate of Santa Catarina since 2001. In Rio Grande do Sul (RS) it was implemented in May 2014, in phase IV of the National Neonatal Screening Program. The inclusion of CAH in the local screening program brought many challenges and the need of a well structured screening and diagnosis flowchart. Early diagnosis is crucial to prevent infant death due to adrenal insufficiency. Around de world, the screening programs for CAH main purpose is the early diagnosis of the more severe classical forms, especially SW-CAH. The cortisol precursor 17OH progesterone (17-OHP) is the main disease marker and is measured on filter paper. Elevations may occur in infants without CAH (false positive) due to perinatal stress and prematurity. Of newborns screened in the first year, median age of collection in diagnosed cases was 8 days (4.25-15.75) and 8 patients were diagnosed with CAH (four males, four females). The incidence of CAH in the state was 1:13,551. Six cases were identified as classic salt-was-ting CAH and two were cases of virilizing CAH. The overall rate of positive results was 0.5% (n = 514 infants). The number of false positive results was higher among newborns with birth weight < 2,000 g. In addition to clinical and laboratory confirmation, the genotype is important to confirme 21-OH deficiency, to establish disease severity and also in the absence of a mutation of the CYP21A2 gene to more precise exclude the diagnosis of suspected false positives. One of the confirmed cases of SW-CAH was associated with multiple malformations and severe craniosynostosis, raising the hypothesis of an association with FGFR2 mutation. A high genotype- phenotype correlation of 87% was found in the cases after two years of screening. Once the classic CAH is diagnosed, glucocorticoid therapy is instituted and mineralocorticoid is added for SW-CAH. CAH neonatal screening is an important population health program and aims to the early diagnosis of a pathology with a potential risk due to salt loss crisis. The early detection of cases also allows to adequate sex assignment in girls with genital virilization. Establishing adequate screening flows, proper diagnosis and management, in addition to increase knowledge about the disease, with the appropriate recognition of outcomes and treatments is essential to minimize complications in this population of greater vulnerability.

Introdução. As Repetições Palindrômicas Curtas Agrupadas e Regularmente Interespaçadas (CRISPRs) são DNAs que consistem de repetições de nucleotídeos. Existem 3 tipos: CRISPR1-CAS, CRISPR3-CAS e CRISPR2. Os bacteriófagos são partículas virais que infectam bactérias. Os bacteriófagos SAP6, IME-EF1, BC-611, VD-13 e F4 são encontrados em E. faecalis assim como FL1ABC, FL2AB, FL3AB e FL4A. Objetivo. Identificar e caracterizar as classes de CRISPRs e bacteriófagos de E. faecalis e E. faecium isoaldos de amostras alimentares, clínicas e fezes de animais. Materiais e métodos. Foram usadas DNA de 153 isolados, sendo 98 de E. faecalis e 55 de E. faecium. A técnica de detecção foi a PCR utilizando iniciadores para os genes CRISPR1-Cas, CRISPR2, CRISPR3-cas e bacteriófagos, seguido por electroforese em gel de agarose. Resultados. Para E. faecalis foram detectadas 58 isolados que amplifacaram para o gene CRISPR1-Cas; 87 para CRISPR2 e 13 para CRISPR3-Cas. Para E. faecium foram detectadas 4 isolados positivos para o gene CRISPR1-Cas; 18 para CRISPR2 e 1 para CRISPR3-CAS. O bacteriófago FL2ABfoi detectado em 13 isolados de E. faecalis; o bacteriófago FL3AB em 13 isolados de E. faecalis e o FL4A em 28 isolados de E. faecalis. Conclusão. Neste estudo nos encontramos diferentes proporções e distribuições dos genes CRISPRs em E. faecalis e E. faecium. O bacteriófago FL4A apresentou-se como o mais frequente entre os bacteriófagos avalados. / Introduction. The CRISPR are small portions of DNA consisting of nucleotide repeats. There are three types of CRISPRs recognized: CRISPR-associated genes cas: CRISPR1-CAS and CRISPR3-CAS and a orphan locus lacking cas genes: CRISPR2. Bacteriophages are viral particles that infect bacterial. The bacteriophages SAP6, IME-EF1, BC-611 and F4 are found in E. faecalis as well as FL1ABC, FL2AB, FL3AB, FL4A. Objectivy: To Identify and to characterize CRISPRs genes and bacteriophage genes in E. faecalis and E. faecium isolated from food, clinical and animal fecal samples. Materials and methods. A total of 153 DNA samples were used, 98 from E. faecalis and 55 from E. faecium. The PCR technique using primers was used to detect the genes CRISPR1-Cas, CRISPR2, CRISPR3-cas and bacteriophages, followed the agarose gel electrophoresis. Results. To E. faecalis was detected 58 isolates that amplified the CRISPR1-Cas genes, 87 to CRISPR2 and 13 to CRISPR3-Cas. To E. faecium was detected 4 isolates positive to CRISPR1-Cas gene, 18 to CRISPR2 e 1 to CRISPR3-CAS. The FL2AB bacteriophage was detected in 13 isolates of E. faecalis; the FL3AB bacteriophage in 13 isolates of E. faecalis and the FL4A in 28 isolates of E. faecalis. Conclusion. In this work, we found out different proportions and distributions of CRISPRs genes in E. faecalis e E. faecium. The FL4A bacteriophage showed a high frequency among the bacteriophages tested.

Esta dissertação de mestrado aborda a controvérsia em torno de qual é o nível biológico no qual a seleção natural atua, com ênfase na proposta de Richard Dawkins do gene egoísta e nas questões que surgem em torno da mesma. Examina-se um panorama de questões de filosofia da biologia abordadas a partir do problema dos níveis nos quais a seleção natural atua. Esperamos que ao avaliar o impacto da teoria do gene egoísta na problemática evolutiva, consigamos compreender sua importância. O objetivo deste trabalho é filosófico, delineando as questões e clarificando alguns termos do debate, sem se propor a tomar partido por uma ou outra posição. O primeiro capítulo apresenta as origens históricas do debate, partindo do ponto de vista original de Charles Darwin no qual o indivíduo era a entidade efetivamente selecionada. Em seguida, buscamos entender como novas questões empíricas, em especial a busca de explicações biológicas para o altruísmo, conduziram a propostas de seleção de grupo. No segundo capítulo delineamos como o desenvolvimento da genética possibilitou que um novo nível de seleção fosse proposto: o gene, e acompanhamos a exposição de Dawkins sobre o ponto de vista do gene egoísta, em especial a partir de seus dois livros mais relevantes sobre o tema: O gene egoísta e O fenótipo estendido. O terceiro capítulo examina diversas aproximações filosóficas no contexto de resposta à pergunta: o que é uma unidade de seleção?. Nosso estudo é consistente com a tese de que as forças seletivas atuam simultaneamente em diversos níveis. / This Masters thesis studies the controversy over what is the biological level in which natural selection takes place. Emphasis is given to Richard Dawkins proposal of the selfish gene and to the issues that arise therefrom, which include many questions in the philosophy of biology. We hope that by assessing the impact that the theory of the selfish gene has had on the problems of evolution, one may understand its importance. The aim of this study is philosophical, raising questions and clarifying the terms of the debate, without taking side on one or another position. The first chapter presents the historical origins of the debate, starting with the original view of Charles Darwin that the individual is the entity that is effectively selected. We then set out to understand how new empirical problems, specifically the search for biological explanations for altruism, led to proposals of group selection. In the second chapter, we depict how the development of genetics allowed that a new level of selection be proposed: the gene. We analyze Dawkins exposition of the point of view of the selfish gene, especially in the two most important books on the subject: The selfish gene and The extended phenotype. The third chapter examines several philosophical approaches to the question what is a unit of selection?. Our study is consistent with the thesis that selective forces act simultaneously in different levels.