Les macrophages sont fonctionnellement polarisés en macrophages inflammatoires et microbicides (M1) ou immunorégulateurs (M2). Que les monocytes circulants soient polarisables n’est pas démontré. Nous avons étudié la signature transcriptionnelle par microarray et RT-PCR en temps réel de monocytes humains stimulés par l’IFN-γ, un inducteur des macrophages M1 et l’IL-4, un inducteur des macrophages M2. Leur profil de réponse précoce est dépendent de l’agoniste alors que la réponse tardive des monocytes est similaire qu’ils soient stimulés par l’IFN-γ ou l’IL-4. Cette approche dynamique de la réponse monocytaire permet probablement une étude bien plus pertinente des patients atteints d’une fièvre Q que le modèle de polarisation macrophagique. Par ailleurs, la prévalence de la fièvre Q est plus importante chez l’homme que chez la femme. Comme il a été montré que des gènes associés au cycle circadien sont modulés chez les souris infectées par Coxiella burnetii, la bactérie responsable de la fièvre Q, nous avons étudié ces gènes au cours de la fièvre Q. C’est ainsi que le gène Per2 est fortement exprimé chez les hommes atteints d’une fièvre Q aiguë. Ces résultats suggèrent donc que la modulation de gènes circadiens est associée à une maladie infectieuse chez l’homme. L’expression des gènes LNX1 and LNX2, qui codent deux enzymes impliquées dans le catabolisme des protéines, est accrue dans l’endocardite de la fièvre Q mais pas dans la fièvre Q aiguë. / Macrophages are functionally polarized into inflammatory and microbicidal (M1) and immunoregulatory (M2) cells. If circulating monocytes may be polarized is not known. We determined the transcriptional signatures of human monocytes stimulated with IFN-γ and IL-4, known to induce the polarization of macrophages into M1 and M2 cells, respectively, using microarrays and real-time RT-PCR. We found that monocytes exhibited an early pattern of activation specific to IFN-γ or IL-4 and a late pattern of activation common to both agonists. The selected biomarkers of early and late responses were tested in patients with Q fever. We showed that the kinetic model of monocyte activation enables a dynamic approach for the evaluation of patients with acute Q fever or Q fever endocarditis. On the other hand, it is known that the prevalence of Q fever is related to sex and is higher in men than in women. Based on previous studies on an experimental model of infection by Coxiella burnetii, the agent of Q fever, we hypothesized that circadian genes are differently modulated in men and women with Q fever. We showed that the expression of the Per2 gene was significantly increased in males with acute Q fever compared with healthy volunteers but did not differ in females with Q fever and healthy females. These results suggest that that the modulation of circadian genes is associated with a human infectious disease. We also found that the expression of LNX1 and LNX2 genes that encode two enzymes involved in protein degradation is increased in Q fever endocarditis but not in acute Q fever.

ContexteSi l’efficacité de la stratégie de prise en charge du paludisme au niveau communautaire n’est pas remise en cause à Madagascar, la mise en place de la nouvelle politique nationale incluant le remplacement de la chloroquine par la combinaison artésunate plus amodiaquine et l’introduction des tests de diagnostic rapide (TDR) dans la prise en charge des fièvres chez les enfants de moins de cinq ans suscite plusieurs inquiétudes. ObjectifsLe principal objectif de notre travail a été d’évaluer la stratégie de prise en charge des fièvres chez les enfants de moins de 5 ans au niveau communautaire. Pour évaluer la stratégie de prise en charge,trois objectifs spécifiques ont été abordés, à savoir, (i) l’étude de l’efficacité thérapeutique de la combinaison fixe « artesunate-amodiaquine » dans la prise en charge des fièvres chez les enfants de moins de 5 ans au niveau communautaire, (ii) l’évaluation des performances des tests de diagnostic rapide utilisés au niveau communautaire et (iii) la description de la situation épidémiologie du paludisme au niveau communautaire et l’évaluation de l’impact des stratégies de lutte actuellement mises en œuvre.MéthodologiesDeux études longitudinales ont été mises en place. La première étude (objectifs 1 & 2) a été conduite de février 2008 à février 2010 (24 mois) chez les enfants de moins de 5 ans en zone de transmission stable (district de Manakara) et en zone de transmission instable (district de Moramanga). La deuxième (objectif 3) s’est déroulée entre février 2009 et mars 2011 en zone de transmission stable (district de Manakara). Résultats & ConclusionObjectif 1 : les données obtenues lors de notre étude, nous permettent d’affirmer l’excellente efficacité thérapeutique de la combinaison fixe « artesunate-amodiaquine ». Nous avons observé que le taux de guérison clinique global était de 98,4% au bout de 28 jours et 97,9% au bout de 42 jours. La compliance au traitement a été estimée à 83,4%. Aucun effet indésirable grave n'a été observé. : Objectif 2 : Cette étude a permis de confirmer que les performances diagnostiques des agents de santé communautaire utilisant les TDR en termes de sensibilité, spécificité, VPP et VPN étaient supérieures à 85%, que la concordance entre les résultats de la microscopie et des TDRs, estimée par la valeur Kappa était excellente (83%) et que les TDR étaient stable même conservés au niveau communautaire. L’introduction des TDR au niveau communautaire semble être une stratégie efficace pour améliorer la prise en charge des malades fébriles, pour réduire la surconsommation d’antipaludiques (et donc le coût des traitements inutilement utilisés) et pour réduire la pression de sélection exercée par cette surconsommation. Objectif 3 : Nous avons pu démontrer que les mesures de prévention et de traitement prises au niveau communautaire étaient efficaces avec la mesure objective de la réduction de la prévalence du paludisme. Nous avons également mis en évidence une variation importante de la prévalence du paludisme inter-villages dans une même commune de quelques kilomètres carrés, suggérant des interventions ciblées en fonction des risques liés à la situation géographique, agricole, et climatique. Ce travail a permis de proposer une première approche méthodologique qu’il serait souhaitable d’étendre pour collecter les données de prévalence et d’incidence dans les autres communes, et préciser ainsi les besoins ciblés en TDR et ACTs à Madagascar. / Context:One should think back of the effectiveness of malaria case management strategy at the community level Otherwise, questions will remain unanswered on the setting up of the new national Policy including the replacement of the chloroquine with combination artesunate and amodiaque and the introduction of rapid diagnostic test (RDT) for fever case management among children under five.Objective:The principal goal of our essay is to assess fever case management strategy among children under five years old at the community level. To proceed to the assessment, three specific objectives were tackled: (i) Therapeutic effectiveness of the fixed combination (artesunate-amodiaque) in fever case management among children under five at the community level. ii)the assessment of RDT performances used at the community level and iii) description of malaria epidemiological situation at the community level and the assessment of the impact of the fight against malaria strategies implementedMethodology: Two long depth studies were applied. The first study (Objective 1 and 2) was conducted in February 2008 to February 2010 (24 months) among children under five years old in stable transmission area (Manakara district) and in changeable transmission area (Moramanga district). The second study (objective 3) was held in February 2009 and March 2011 in stable transmission area (Manakara).Outputs and Conclusion:Objective 1: Data collected during our study enabled us to confirm the excellent therapeutically effectiveness of the fixed combination “artesunate-amodiaque”. We have noticed that the global clinical recovery rate is 98.4% after 28 days and 97.9% after 42 days of treatment. Compliance with the treatment was estimated at 83.4%. Not any adverse effect was noticed.Objective 2: This study enabled us to confirm the diagnostic performances of community health workers using RDT in terms of sensitiveness, specification. VPP and VPN were more 85% than the reliability between microscopic results and the RDTs estimated by the kappa value was excellent (83%) and RDTs were stable even kept at the community level. The introduction of RDT at the community level seems to be an effective strategy to improve sick people case management, to reduce overconsumption of products anti-malaria (and so reduce the cost of treatments used uselessly) and to reduce the selection pressure from this overconsumption.Objective 3: We could prove that prevention and treatment measures at the community level were effective with the objective measure of reducing malaria rate. We could bring to evidence an important variation of malaria rate between villages of one same commune from few kilometers of distance, suggesting targeted interventions depending on the risks linked to the geographic, agricultural and climate situations. This work enabled us to suggest a first methodological approach that is better to extend to collect prevalence data and in adverse circumstances in other communes and to mention the RDT targeted needs and ACTs in Madagascar.

Les recommandations pour la prise en charge des accès fébriles ne sont pas particulières au Cabinda ni à l’Angola. L’emploi des tests de diagnostic rapides (TDR) et/ou de la microscopie est la règle et permet de porter le diagnostic d’accès palustre. Nos observations dans des structures de santé montrent que ces examens sont très peu pris en compte. Lorsqu’un TDR est négatif, un examen de goutte épaisse sanguine est souvent demandé. Cette goutte épaisse peut dans un quart des cas être déclarée positive avec une très faible parasitémie et le diagnostic d’accès palustre retenu. Les examens microscopiques sont perçus comme plus fiables que les TDR. La plupart des enfants et des adultes fébriles reçoivent un traitement antipaludique quels que soient les résultats des examens. Ce traitement est le plus souvent une association thérapeutique à base d’artémisinine. Le choix d’utiliser la voie parentérale en traitant par la quinine ou les dérivés injectables de l’artémisinine n’est pas réservé aux cas les plus graves.Ces antipaludiques sont disponibles dans les pharmacies privées ainsi que dans le secteur informel en dehors de toute prescription. Des dérivés d’Artemesia en monothérapie y sont également accessibles.L’amélioration de la formation du personnel de santé ainsi que de leurs conditions de travail apparaissent être les mesures les plus pertinentes pour modifier la situation. Le développement d’un centre de référence, en permettant une connaissance actualisée du paludisme, est également nécessaire. Par ailleurs, la prévention de la transmission par l’usage des moustiquaires imprégnées d’insecticides de longue durée doit être développée. / The recommendations for the management of febrile attacks are similar in Angola as in other neighboring countries. The use of rapid diagnostic tests (RDTs) and / or microscopy is the rule and allows the diagnosis of access to malaria.Our observations in health facilities in Cabinda Province show that these exams are very little taken into account. When a RDT is negative, a thick blood test is often required. This thick drop can in a quarter of the cases be declared positive with a very low parasitaemia and the diagnosis of malaria access retained. Microscopic examinations are perceived as more reliable than RDTs.Most children and febrile adults receive antimalarial treatment regardless of test results. This treatment is most often a combination therapy based artemisinin. The choice to use the parenteral route by treating with quinine or derivatives of artemisinin is not reserved for the most serious cases.These antimalarials are available in private pharmacies as well as in the informal sector outside any prescription. Artemesia derivatives in monotherapy are also available.Improving the training of health personnel and their working conditions appear to be the most relevant measures to change the situation. The development of a referral center, by providing up-to-date knowledge of malaria, is also needed. In addition, the prevention of transmission through the use of long-lasting insecticidal nets must be developed.

L'épizootie de fièvre aphteuse de 2001 telle qu'elle s'est déroulée en Grande-Bretagne a montré les limites de certains des systèmes de surveillance, d'intervention, d'anticipation et d'aide à la décision actuellement en place. Parallèlement, l'assouplissement des modalités d'utilisation de la vaccination a enrichi la palette des outils utilisables par le gestionnaire de risque. Une réévaluation pour la France a semblé ainsi opportune. Pour cela, le projet de recherche s'est proposé tout d'abord d'étudier l'organisation des différentes filières d'animaux de rente en France. L'analyse du réseau d'élevages français par la méthode d'analyse des réseaux sociaux a permis de caractériser les relations entre établissements et d'estimer une vulnérabilité structurale constante face à la diffusion de maladies apportées essentiellement par le réseau d'échanges bovins.Dans une deuxième partie, la diffusion de la maladie dans ce réseau d'élevages a été étudiée en s'appuyant sur des simulations générées par un modèle spécifiquement construit. L'efficacité et les coûts de différentes stratégies de lutte envisageables (combinaisons d'abattage sanitaire, abattage préventif et vaccination) ont été ensuite comparés. Les résultats obtenus ont montré l'absence d'une stratégie unique optimale à la fois sur le plan épidémiologique et économique et la nécessité de s'adapter au contexte local. En effet, la nature de la stratégie optimale varie selon la région concernée et l'acteur considéré. Ces travaux ont permis de créer un outil de réflexion pour aider à la décision, mais également un outil d'entraînement et de formation collective pour se préparer à une telle gestion de crise.

Avec plus de 20% de morts annuels dus aux maladies infectieuses, celles-ci restent un sujet majeur de santé publique. Des maladies d’origine virale (ré)émergent suite aux changements environnementaux, climatiques et sociétaux : le virus Ebola, la Dengue ou, plus récemment, le virus Zika. Dans ce contexte, il est donc aujourd’hui crucial de développer des vaccins efficaces et sûrs contre les infections virales émergentes. Ce projet de thèse vise à mettre en place une nouvelle stratégie de production de vaccins vivants atténués ciblant les virus à ARN en travaillant sur le virus de la fièvre jaune (genre Flavivirus). Après une analyse génomique qui a permis d’approfondir une technique de modification des virus appelée « ré-encodage », des mutants de la fièvre jaune ont été produits puis caractérisés in vitro et in vivo. En parallèle, un modèle rongeur de la fièvre jaune a été développé et a permis de tester in vivo à la fois l’innocuité et l’efficacité vaccinale des virus ré-encodés. / Despite recent considerable improvements, infectious diseases remain a major issue for public health, with an estimated 20% of annual deaths caused by infections. Among them, viral diseases (re)emerge following environmental, climatic and societal changes: Ebola, Dengue and Zika viruses have recently been the object of special attention. The development of safe and efficient vaccines against emerging viruses is a major challenge for global public health. This thesis work is in line with this issue. Using the yellow fever virus (YFV, genus Flavivirus) as a model, we tried to define new strategies for the design of live-attenuated vaccines for viral infections prevention. After a genomic analysis that allowed to go further into a procedure for virus modification named “re-encoding”, we generated and characterised both in vitro and in vivo mutant strains of YFV. In parallel, a rodent model was set up to test in vivo both the safety and the protective efficiency of the re-encoded viruses.

Le virus de la fièvre hémorragique de Crimée-Congo (VFHCC) est un virus transmis par des tiques, appartenant au genre Nairovirus de la famille des Bunyaviridae. Il est réparti sur plus d’une trentaine de pays de plusieurs continents : Europe, Asie et Afrique ; avec une mortalité moyenne estimée de 30%. Le VFHCC peut causer à l’homme une maladie hémorragique très sévère et parmi divers symptômes, il peut induire une inflammation aigüe et des lésions hépatiques. Les phagocytes mononucléaires, les hépatocytes et les cellules endothéliales ont été décrits comme étant des cellules cibles lors d’études cliniques et post-mortem ainsi que lors d’études en modèle murin. Nous avons analysé, lors d’étude in vitro, la réponse cellulaire de cellules présentatrices de l’antigène (CPAs) et d’hépatocytes humains. Afin de mieux comprendre la pathogenèse du VFHCC, nous avons comparé la réponse de ces cellules avec celle du virus Dugbe (DUGV), un nairovirus génétiquement le plus proche de VFHCC considéré comme faiblement pathogénique. Finalement, afin améliorer la détection de DUGV in vitro et lors d’études épidémiologiques de terrain, nous avons développé un test moléculaire en temps réel pour détecter et quantifier DUGV.Nous avons observé que le VFHCC induisait une réponse inflammatoire chez les CPAs, en revanche, DUGV induisait une réponse plus forte, ce qui suggère que VFHCC induirait une inhibition sélective de certains médiateurs de la réponse pro-inflammatoire. Lors de l’infection in vitro des hépatocytes par le VFHCC, nous avons observé que le virus induisait du stress du RE, l’activation de l’IL-8 un médiateur pro-inflammatoire, et la modulation des deux voies pro-apoptotiques. Quand nous avons comparé cette réponse à celle induite par DUGV nous avons trouvé que la différence majeure était l’absence d’apoptose. Ces différences pourraient, en partie, expliquer le rôle du foie dans la pathogenèse induite par le VFHCC. / Crimean-Congo hemorrhagic fever virus (CCHFV) is a widely distributed tick-borne member of the Nairovirus genus (Bunyaviridae) inducing an average mortality rate of 30% in humans. CCHFV induces a severe hemorrhagic disease in infected patients that includes, among other bleeding symptoms, acute inflammation and liver lesions. The mononuclear phagocytes, the hepatocytes and the endothelial cells were described to be the main target cells in both human clinical studies and animal model in vivo studies.We analysed the in vitro cellular response of host antigen presenting cells (APC) and hepatocytes. Then, to better elucidate the pathogenesis of CCHFV, we compared the response of these cells after infection with Dugbe virus (DUGV), a mild pathogenic virus genetically close to CCHFV. In order to improve DUGV detection in vitro and in field studies, we also developed a molecular real-time quantitative tool to detect and quantify DUGV.We found that CCHFV induced an inflammatory response in both APCs tested; however DUGV induced a higher cytokine/chemokine response in these target cells than CCHFV. Our results suggest that CCHFV was able to selectively inhibit the activation of some inflammatory mediators in the in vitro infection and that CCHFV/DUGV cellular response differences could be relevant in pathogenesis. On the other hand, when we in vitro infected hepatocytes with CCHFV, we observed that it was able to induce ER-stress, activate IL-8 secretion and modulate both mitochondrial and death receptor pathways of apoptosis. When we compared this cellular response with that induced by DUGV, we found that the most striking difference was the absence of apoptosis. These differences could, in part, explain the role of the liver in the pathogenesis induced by CCHFV.

La fièvre de la Vallée du Rift (FVR) est une zoonose émergente provoquée par un virus. La FVR affecte principalement le bétail. Chez l'Homme, la maladie peut évoluer sous deux formes mortelles: une fièvre hémorragique et une encéphalite. Malgré l'importance du fonds génétique dans l'issue de la FVR, l'identité des gènes responsables reste inconnue. Nous avons étudié les facteurs génétiques qui déterminent la sensibilité de la lignée de souris MBT/Pas et la résistance de la lignée BALB/c à la FVR. Nous avons identifié trois QTLs sur les chromosomes 2, 5 et 11, nommés, respectivement, Rvfs1, Rvfs3 et Rvfs2. Une infection des lignées congéniques correspondantes, C.MBT Rvfs1, -2 et -3, a confirmé le rôle de la région Rvfs2 dans la sensibilité à la FVR. Une analyse pathophysiologique a montré que les souris C.MBT Rvfs2 et BALB/c développent précocement une hépatite. Les souris C.MBT Rvfs2 meurent de cette hépatite aiguë. En revanche, les souris BALB/c régénèrent leur foie, ce qui leur permet de mieux tolérer l'atteinte du foie. La majorité des souris BALB/c sont décédées plus tard d'une encéphalite. Ces observations montrent que les modèles étudiés reproduisent chacune des deux formes de la maladie observées chez l'Homme. Nous avons produit des lignées sous-congéniques pour la région Rvfs2 et avons testé leur sensibilité à la FVR. Les résultats ont été croisés avec une analyse des variants de structure et de régulation présents dans l'intervalle. Cette stratégie a permis d'identifier 3 gènes candidats : Rnf213, Cd7 et Fasn. La fonction du gène Fasn suggère qu'il puisse jouer un rôle lors de la régénération du foie et ainsi être le facteur génétique que nous recherchons. / Rift Valley fever (RVF) is an emerging zoonosis caused by an arbovirus. The disease affects mainly livestock, but it can have a severe impact on human health. In humans, RVF may progress into fatal outcomes due to acute hepatitis or encephalitis. Despite the influence of the host genetic background on the outcome of the disease, the identity of causative genes remains unknown. We studied the genetic factors determining the susceptibility of MBT/Pas and the resistance of BALB/c mouse strains to RVF. We identified 3 QTLs linked to survival on chromosomes 2, 5 and 11 and named them, respectively, Rvfs1, Rvfs3 and Rvfs2. The infection of the corresponding congenic strains, C.MBT Rvfs1, 2 and 3, confirmed the role of Rvfs2 on the susceptibility to RVF. A pathophysiological investigation showed that both C.MBT Rvfs2 and BALB/c mice exhibit early onset severe hepatitis. However, while C.MBT Rvfs2 died rapidly from liver failure, BALB/c mice tolerated the liver disease and regenerated the hepatic tissue. These mice eventually died at a later stage from encephalitis. These observations indicate that each of the studied mouse models recapitulates one form of the human disease. We generated subcongenic strains harboring the Rvfs2 region and tested their susceptibility to RVF. The results were combined with high-throughput analyses of the structural and regulatory variants found in the region. Our combined approach allowed the identification of three candidate genes: Rnf213, Cd7 and Fasn. The function of the Fasn gene suggests that it could play a role in the mechanism of liver regeneration and, thus, Fasn is our best candidate gene to account for the susceptibility phenotype.

La fièvre est l’une des principales raisons des consultations hospitalières en Afrique Sub-saharienne. Le paludisme est la cause la plus souvent suspectée, posant ainsi un grand problème: la prescription abusive des anti-paludiques aux sujets fébriles dont le test de diagnostic est négatif pour le paludisme.Vue que les principales causes virales de fièvre sont sporadiques et les patients fébriles sont souvent diagnostiqués négatifs au paludisme au Gabon, l’objectif prioritaire de ces travaux a donc été d’évaluer la présence des bactéries dans le sang des sujets fébriles et afébriles via les outils de biologie moléculaire. La flore bactérienne intestinale a aussi été évaluée à partir des échantillons de selles grâce à la méthode de culturomics.Au total, 1.363 échantillons d’ADN dont 1.203 appartenant aux sujets fébriles ont été analysés. Rickettsia felis a été la bactérie la plus détectée chez 50 patients fébriles suivie de Staphylococcus aureus (26), Streptococcus pneumoniae (12), Salmonella spp (11), Tropheryma whipplei (1) et Streptococcus pyogenes (1). Borrelia spp a été détectée chez 2 sujets afébriles. Le Plasmodium, Mansonella perstans, Loa loa et Mansonella sp "DEUX" ont été aussi détectés. L’évaluation de la flore bactérienne intestinale chez les sujets Gabonais a montré qu’elle était riche en Firmicutes suivie des Bacteroidetes, Actinobacteries et de Proteobacteries. On note aussi la découverte de nouvelles bactéries: Gabonia massiliensis, Gabonibacter massiliensis, Kallipyga gabonensis, Intestinimonas gabonensis et Bacillus massiliogabonensis.Ces travaux apportent beaucoup de ressources dans la lutte contre la fièvre au Gabon. / Fever is one of the main reasons of hospital consultations in Sub-Saharan Africa. Malaria is the most frequently suspected cause, posing a big problem: the wrong prescription of anti-malarial drugs to febrile patients without malaria.In a context of the sporadic existence of the major viral causes of fever added to the fact that febrile patients are often diagnosed negative for malaria, this work aimed to assess, especially, the presence of bacteria in the blood samples from febrile and afebrile Gabonese people using molecular tools. The intestinal bacterial flora was also evaluated from stool samples using culturomics method.A total of 1,363 DNA extracts including 1,203 from febrile patients were analyzed. Rickettsia felis was the most frequently detected bacterium in 50 febrile patients followed by Staphylococcus aureus (26), Streptococcus pneumoniae (12), Salmonella spp (11), Tropheryma whipplei (1) and Streptococcus pyogenes (1). Borrelia spp was detected in 2 afebrile cases. Plasmodium, Mansonella perstans, Loa loa and Mansonella sp "DEUX" were also detected. The evaluation of the gut bacterial flora from Gabonese people showed that Firmicutes were abundant followed by Bacteroidetes, Actinobacteria and Proteobacteria. New bacteria were discovered: Gabonia massiliensis, Gabonibacter massiliensis, Kallipyga gabonensis, Intestinimonas gabonensis and Bacillus massiliogabonensis.This work gives data enhancing the fight against the fever in Gabon.

La fièvre Q se traduit par de graves conséquences obstétricales chez la femme enceinte. La voie principale de la contamination humaine par Coxiella burnetii, l’agent de la fièvre Q, est constituée des aérosols provenant des placentas d’animaux infectés. La nature des cellules placentaires cibles de C. burnetii reste totalement inconnue. J’ai montré que C. burnetii infecte les trophoblastes des lignées BeWo et JEG et que les bactéries se répliquent fortement dans les cellules BeWo et survivent dans les cellules JEG. Une analyse par microarray montre que C. burnetii induit une réponse inflammatoire dans les cellules BeWo qui lui est spécifique. Ces résultats suggèrent que les trophoblastes pourraient constituer une niche pour C. burnetii. Les macrophages placentaires pourraient également servir de réservoir pour C. burnetii. J’ai montré que les macrophages placentaires CD14+ sont des macrophages qui présentent des caractéristiques phénotypiques, transcriptionnelles et fonctionnelles différentes de celles des monocytes circulants et des macrophages dérivés de monocytes. Ils forment en outre des cellules géantes multinucléées qui pourraient réguler l’activité cytolytique des macrophages dans le contexte placentaire puisque les macrophages placentaires CD14+ ne sont ni de type M1 ni de type M2. / In pregnant women Q fever presents obstetrical complications. The principal way of human contamination by Coxiella burnetii, the agent of Q fever, is due to aerosols from placentas of infected animals. The nature of placenta cells that are targeted by C. burnetii remains unknown. I showed that C. burnetii infects BeWo and JEG trophoblastic cells and that organisms intensively replicated in BeWo cells and survived in JEG cells. A microarray analysis showed that C. burnetii induced a specific inflammatory response in BeWo cells. These results suggest that trophoblasts may serve as a reservoir for C. burnetii. Placenta macrophages placentaires may also targeted by C. burnetii. I showed that placenta CD14+ macrophages were characterized by phenotypic, transcriptional and functional properties different from those of circulating monocytes and monocyte-derived macrophages. In addition, placenta CD14+ macrophages differentiate into multinucleated giant cells that may regulate the cytolytic activity of macrophages in the placenta context since placenta CD14+ macrophages were not polarized in M1 or M2 macrophages. While M1/M2 polarization of macrophages is well established, that of monocytes remains an important question. We activated monocytes with canonical agonists of M1 and M2 profiles in macrophages using microarrays. The early response, 6 hours, of monocytes corresponded to a type M1/M2 response but the delayed response, 18 hours, did not correspond to the M1/M2 dichotomy, demonstrating a new level of heterogeneity of myeloid cells.

Les granulomes signent une réponse immune efficace dans de nombreuses maladies infectieuses. C’est le cas de la fièvre Q où ils sont présents dans la forme aiguë de la maladie spontanément résolutive mais où ils sont absents dans sa forme chronique. J’ai mis au point une méthode permettant d’étudier la formation in vitro des granulomes à partir de cellules mononucléées du sang périphérique incubées en présence de billes de Sepharose recouvertes d’extraits de C. burnetii, l’agent de la fièvre Q. Ces granulomes apparaissent en quelques jours avant de disparaître au bout d’une vingtaine de jours. Ils sont composés essentiellement de macrophages et de lymphocytes et, à un moindre degré, de cellules épithélioïdes, de cellules géantes multinucléées et de cellules dendritiques. La méthode d’obtention in vitro des granulomes a permis également d’étudier les premiers stades de leur formation grâce à la mise au point d’une technique en live imaging d’observation en lumière transmise des cellules. J’ai montré que les monocytes, les premières cellules à migrer vers les billes et à entièrement les recouvrir, initient le recrutement des lymphocytes. J’ai également montré que le défaut de formation des granulomes observés chez des patients atteints d’une fièvre Q chronique pourrait être lié à un défaut de migration de leurs monocytes circulants. / Granulomas indicate effective immune response in a large number of infectious diseases. The primo-infection by Coxiella burnetii, the agent of Q fever, is spontaneously resolutive and is characterized by the presence of granulomas, whereas granulomas are absent in the chronic form of the disease. I developed a new method to study in vitro the formation of granulomas using peripheral blood mononuclear cells incubated in the presence of Sepharose beads coated with C. burnetii extracts. Granulomas appeared in few days before disappearing at day 20. They were essentially composed of macrophages and lymphocytes and, in a lesser extent, of epithelioid cells, multinucleated giant cells and dendritic cells. The method to obtain in vitro granulomas allowed the study of the first events of granuloma formation in live imaging microscopy. Monocytes migrated toward Sepharose beads and entirely covered these beads, and initiated the recruitment of lymphocytes. Finally, mononuclear cells from patients with Q fever were unable to generate granulomas due to defective migration of monocytes. We hypothesize that defective migration of monocytes may be responsible for the defective formation of granulomas in Q fever.