Orientadores: Renato Giuseppe Giovanni Terzi, Ilma Aparecida Paschoal / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-12T22:30:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Moreira_MarcosMello_D.pdf: 18313915 bytes, checksum: db1efb99a56b2256d14393f2e951147a (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: Métodos para confirmar o diagnóstico de tromboembolismo pulmonar (TEP) são relativamente invasivos, de alto custo e nem sempre disponíveis. Justifica-se a busca de métodos mais acessíveis, de baixo custo, minimamente invasivos e que possam ser realizados à beira do leito. Foi objetivo deste estudo estabelecer um protocolo de triagem diagnóstica de TEP, minimamente invasivo e de baixo custo, usando para isto a capnografia volumétrica (CV) e o Oímero-O (DO) (ELISA Rápido), para pacientes internados em diferentes unidades de um hospital terciário, atentanto para as possíveis limitações deste protocolo. Foi realizado um estudo prospectivo e observacional com 92 pacientes. Um estudo prévio de CV em 114 voluntários estabeleceu o padrão de normalidade para as variáveis analisadas. No grupo TEP, a CV foi associada à gasometria arterial para cálculo das variáveis do espaço morto e à dosagem do DO. O padrão-ouro para diagnóstico de TEP foi dado pela cintilografia de inalação/perfusão e/ou, tomografia computadorizada helicoidal e/ou, arteriografia pulmonar. Isoladamente, a variável capnográfica que apresentou melhor sensibilidade e especificidade foi a fração tardia do espaço morto alveolar (tO/ate) (91% e 98%, respectivamente). Obteve-se um resultado falso-negativo para o DO e, para a tO/ate, um falso-positivo e três falso-negativos. Quando a tO/ate ,foi associada ao DO, conseguiu-se 100% sensibilidade e 17% de especificidade. Uma outra variável capnográfica importante, por sugerir função pulmonar prévia anormal, e por esta razão, sinalizar uma possível limitação da tO/ate, foi o slope da fase III do capnograma. Por meio dos dados da CV de ambos os grupos (controle e doentes), estabeleceu-se um protocolo que ajuda a direcionar a equipe multiprofissionál quando da suspeita clínica de TEP. / Abstract :Background: Tests used to confirm a diagnosis of pulmonary embolism (PE) are relatively invasive, costly and not always available. Minimally invasive methods that are more accessible, less expensive and easily applied should be sought. Objective: To establish a low-cost, minimally invasive, PE diagnostic protocol in hospitalized patients, using capnographic variables and ELlSA D-dimer (DD) to rule out PE. Methods: A prospective observational study was conducted in 92 patients with suspected PE. The values of reference group for volumetric capnography (VCap) were used in order to compare with patterns of patients with PE. The patients were submitted to arterial blood gas analysis (to calculate the dead space variables) and had the DD values determined. The diagnosis was confirmed through ventilation/perfusion scintigraphy, spiral computed tomography, pulmonary arteriogram, or combinations of the three. Results: The capnographic variable that presented the greatest sensitivity and specificity (91 % and 98%, respectively) was the late dead space fraction (fDlate). Our findings include one false-negative DD result, as well as three false-positive and eight false-negative fDlate results. The combination of the fDlate and DD testing presented 100% sensitivity and 17% specificity. Another important capnographic variable, the phase 111 slope, indicated a possible limitation of VCap, since it interferes with the calculation of fDlate. Conclusion: The protocol established could guide multiprofessional teams in the management of clinical suspicion of PE. We were able to determine that the phase 111 slope might interfere with the calculation of fDlate, especially in patients with a history of abnormal lung function. Throught VCap variables (control group and sickness); was possible establishes a protocol that guide the multiprofissional team in cases of PE. / Doutorado / Pesquisa Experimental / Doutor em Cirurgia

Orientador: Alexandre Leite Rodrigues de Oliveira / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-23T08:37:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cartarozzi_LucianaPolitti_M.pdf: 5081962 bytes, checksum: 794c493e497a269465a5b035175dfbcb (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: A regeneração nervosa periférica é um processo complexo dependente do rearranjo e ativação das células de Schwann. O estímulo das células de Schwann pode ser alcançado através do enxerto de células tronco exógenas. Com o intuito de entender a importância do enxerto de células tronco mesenquimais (MSC) no processo regenerativo periférico, utilizamos o modelo de tubulização do nervo isquiático. As próteses tubulares foram preparadas a partir de membranas de poli-caprolactona (PCL) e preenchidas com selante de fibrina (FG), utilizado, neste caso, como substrato para as MSC. A técnica de tubulização foi feita em ratas fêmeas Lewis adultas, divididas em 4 grupos (n = 5 por grupo): normal, PCL (tubo vazio); FG (tubo preenchido com selante de fibrina) e FG+MSC (tubo preenchido com selante de fibrina e enxertado com MSC). Sessenta dias após lesão, os nervos regenerados foram processados para imunoistoquímica e microscopia de luz. A presença de MSC GFP-positivas foi detectada nos nervos dos animais que receberam enxerto de MSC, indicando que a sobrevivência, a longo prazo, das células tronco no tecido. A regeneração axonal, analisada por imunoistoquímica, revelou expressão de elementos básicos do nervo periférico, ou seja, componentes dos axônios e da lâmina basal tiveram a expressão equivalente em todos os grupos experimentais. A organização axonal foi observada através da marcação anti-neurofilamento. A presença das células de Schwann foi analisada através da marcação anti-S100 e o anticorpo anti-colágeno IV foi utilizado para detecção da lâmina basal. A imunomarcação anti-p75NTR, o receptor de baixa afinidade para neurotrofinas, foi utilizada para investigar a reatividade das células de Schwann. A marcação basal deste, em nervos não lesionados, foi aumentada pelo processo regenerativo, sendo estatisticamente maior no grupo FG+MSC (77% em relação ao nervo contralateral; p<0.001). Além disso, houve colocalização de MSC GFP-positivas e imunomarcação anti-BDNF, evidenciando uma possível via de atuação das células sobre o comportamento das células de Schwann. A partir da análise das secções semi-finas dos nervos pudemos avaliar que a área dos nervos regenerados no interior das próteses tubulares foi estatisticamente igual nos diferentes grupos experimentais. Quando quantificamos o número de axônios mielinizados por uma área fixa, o grupo FG+MSC apresentou maior densidade de axônios em relação ao grupo controle (25%, p<0,05). Da mesma maneira, quando analisamos os parâmetros morfométricos nos diferentes grupos experimentais, o grupo FG+MSC apresentou uma tendência a apresentar axônios de maior calibre e bainha de mielina mais espessa, em relação aos demais grupos, sendo que, a EBM, no intervalo de 1,46 a 2,25?m, foi significantemente maior em relação aos grupos PCL e FG (p<0,05). Como consequência, os animais do grupo FG+MSC mostraram recuperação motora significativamente maior na sétima e oitava semana de análise do índice funcional do nervo fibular. Os achados deste estudo mostram que as MSC enxertadas conjuntamente com selante de fibrina influenciam positivamente o processo regenerativo, modulando a reatividade das células de Schwann / Abstract: Peripheral nerve regeneration is a complex process that is dependent on the rearrangement and activation of Schwann Cells (SC). Such stimulation of SCs may be achieved by the use of exogenous stem cells. In order to better understand the importance of mesenchymal stem cell (MSC) grafting in the peripheral regeneration process we have used the model of sciatic nerve tubulization. Tubular prostheses were prepared from polycaprolactone (PCL) membranes and filled with fibrin sealant (FS), which was used as a substrate for the MSC. The technique of tubulization was applied in adult Lewis female rats that were divided into four groups (n = 5 per group): normal, PCL (empty tube), FS (tube filled with fibrin sealant) and FS + MSC (tube filled with fibrin sealant and grafted with MSC). Sixty days after injury, the regenerated nerves were processed for imunohistochemistry and observed under fluorescence microscopy. The presence of GFP positive stem cells was detected in the nerves of the animals that received MSC grafts, indicating the long term survival of such cells. The axonal regeneration process was studied by immunohistochemistry and revealed the presence of the basic elements of the peripheral nerve, namely axons and basal lamina components that were equivalent in all experimental groups. The axonal organization was observed with anti-neurofilament immunostaining. The presence of SCs was analyzed with anti-S100 immunostaining and anti-type IV collagen was used to detect the basal lamina. Anti-p75NTR, the low affinity receptor for neurotrophins, was used to investigate the reactivity of the SCs. A basal positive labeling in uninjured nerves was detected, which was upregulated by the regenerative process, being statistically higher in FS + MSC group (77% relative to uninjured nerve; p<0.001). Moreover there was colocalization between GFP-positive MSC and anti-BNDF immunolabeling, showing a possible pathway that these cells induce the reactivity of SCs. From sciatic nerve semi-thin sections we were able to evaluate that the areas of regenerated nerves were statistically the same in the different experimental groups. When we quantified the number of myelinated axons in 50.000?m2, the FG+MSC group showed higher density of axons when compared with PCL group (25%, p<0,05). In the same way, the analysis of morphometric parameters showed that the FG+MSC group have a tendency to present higher caliber axons and ticker myelin sheath when compared with other groups, being that the myelin sheath thickness, in the interval between 1,46 to 2,25?m, was significantly higher in FG+MSC group when compared to PCL and FG (p<0,05). As the functional result of the findings above, the FG+MSC animals showed higher motor function recovery, analyzed by FFI, at seventh and eighth weeks after lesion. The findings herein show that MSC associated with the FS scaffold improve the regeneration process by positively modulating the reactivity of SCs / Mestrado / Biologia Celular / Mestra em Biologia Celular e Estrutural

A durotomia acidental, na cirurgia da coluna lombar, é uma das mais comuns complicações, com uma prevalência de 1 a 17%. As fraturas da coluna também podem apresentar-se com lesão dural, chegando a 19% nas fraturas tipo explosão da coluna torácica ou lombar com lesão associada da lâmina vertebral. Procurou-se avaliar as alterações medulares que ocorreram apos a reparação de lesão dural com pontos do tipo simples, com cola de fibrina e com colágeno bovino, através de análise histológica. Manteve-se um grupo controle, sem reparação. Utilizaram-se 70 ratos da raça Wistar, sendo que 34 foram excluídos por problemas anestésicos ou intra-operatórios. Mantiveram-se nove ratos por grupo. Abordaram-se os segmentos vertebrais T8 e T9, para efetuar a lesão, que foi reparada pelos três diferentes métodos avaliados. Os animais permaneceram confinados por 24 dias, sendo submetidos à eutanásia com a coleta de material para análise histológica. O Serviço de Patologia avaliou e graduou (ausente, discreto, moderado e acentuado) os casos quanto à hiperemia, degeneração medular, necrose e infiltrado celular. De forma geral, as técnicas de reparo apresentaram resultados com maior grau de alteração, principalmente em relação ao infiltrado celular, onde todas as técnicas mostraram resultados bem piores. A sutura apresentou graus mais severos de necrose, hiperemia e infiltrado celular. A membrana de colágeno apresentou resultados com graus mais elevados de alteração em relação à hiperemia, à degeneração da substância nervosa e ao infiltrado celular. A reparação com cola de fibrina apresentou piora em relação ao grau de necrose e de infiltrado celular. A presença de alterações medulares em todos os grupos, até mesmo no grupo controle, levou a cogitar algumas possíveis causas para os resultados: as alterações medulares seriam geradas pela técnica cirúrgica ocorrendo uma lesão iatrogênica medular, mas sem repercussão clinica; os materiais estudados poderiam causar alterações no tecido neural; o simples contato do tecido neural com o meio extra-dural, após a lesão, seria a causa das alterações levando à mesma cascata de alterações que ocorre nas lesões medulares traumáticas. Apesar de todos os grupos apresentarem alterações medulares, ficou evidente que as de maior intensidade ocorreram nos grupos que utilizaram materiais de fechamento dural. Os métodos de reparação dural ainda não são os ideais, mas existe o consenso que a lesão deve ser reparada sempre na forma aguda, a fim de evitar e prevenir complicações e seqüelas. / This study aimed to evaluate spinal cord alterations after dural repair with: simple interrupted suture, collagen membrane or fibrin glue using histopathogical analysis. All activities were performed in the São Paulo University Medical School General Hospital Traumatology and Orthopedic Division. Seventy Wistar rats were used, but 34 were excluded due to anesthetic or surgery problems. Animals were kept isolated for 24 days, then killed and histological samples collected. Pathology Division assessed and graduated hyperemia, spinal cord degeneration, necrosis and cellular infiltration. Repair techniques provided higher alteration, mostly in cellular infiltration. Suture showed more severe necrosis, hyperemia and cellular infiltrates graduations. Collagen membrane provided higher alterations related to hyperemia, nerve degeneration and cellular infiltrates. Fibrin glue reparation had worse results in necrosis and cellular infiltrates graduation.Spine cord alterations in all groups, including control group, made us suppose possible reasons for the results: spine cord changes would be caused by surgical technique as iatrogenic injury, without clinical meaning; studied material would cause alterations in neural tissue; contact of neural tissue with extra dural environment, after injury, leading to the same mechanisms present in spinal cord traumatic injury. Despite all groups showed spinal cord alterations it was clear a higher intensity of injury when dural closing material were used. There is no ideal choice for dural repair material and more research is warranted to find better form of repairing dura mater.

Orientador: Daniela Leal Zandim-Barcelos / Resumo: A fibrina rica em plaquetas e leucócitos (L-PRF) é um derivado plaquetário autógeno capaz de liberar citocinas e fatores de crescimento favoráveis ao reparo tecidual. Por esta razão a L-PRF vem sendo utilizada em diversos procedimentos odontológicos. Uma das aplicabilidades clínicas da L-PRF é em procedimentos de levantamento do seio maxilar, uma técnica já consagrada na odontologia que permite a colocação de implantes dentários em região posterior de maxilas atróficas. Para avaliar a efetividade do uso da L-PRF, dois estudos clínicos independentes foram realizados utilizando a L-PRF em seios maxilares. Um deles teve o propósito de avaliar a influência da L-PRF na regeneração óssea quando associada ao osso mineral bovino desproteinizado (OBD) em procedimentos de elevação do assoalho do seio maxilar, e o outro teve o propósito de avaliar a efetividade da L-PRF no reparo de membranas de Schneider acidentalmente perfuradas durante o procedimento de levantamento do seio maxilar. Para isso, o primeiro trabalho foi um estudo clínico randomizado controlado envolvendo 19 pacientes com edentulismo na região posterior de maxila. De forma aleatória, 24 seios maxilares destes 19 pacientes foram distribuídos entre os grupos teste e controle. O grupo teste abordou 12 seios maxilares que foram enxertados com OBD associado à L-PRF, já o grupo controle abordou outros 12 seios maxilares enxertados apenas com OBD. Após 8 meses de reparo, uma biópsia foi obtida por meio de broca trefina no mesmo... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Platelet and leukocyte-rich fibrin (L-PRF) is an autogenous platelet derivative capable of releasing cytokines and growth factors favorable to tissue repair. For this reason, LPRF has been used in several dental procedures. One of the clinical applicabilities of L-PRF is in maxillary sinus lifting procedures, a technique already established in dentistry that allows the placement of dental implants in the posterior region of atrophic jaws. To assess the effectiveness of using L-PRF, two independent clinical studies were conducted using L-PRF in maxillary sinuses. One of them had the purpose of evaluating the influence of L-PRF in bone regeneration when associated with deproteinized bovine mineral bone (DBB) in maxillary sinus floor elevation procedures, and the other had the purpose of evaluating the effectiveness of L-PRF in the repair of Schneider membranes accidentally perforated during the maxillary sinus lifting procedure. For this, the first study was a randomized controlled clinical study involving 19 patients with edentulism in the posterior region of the maxilla. At random, 24 maxillary sinuses of these 19 patients were distributed between the test and control groups. The test group involved 12 maxillary sinuses that were grafted with DBB associated with L-PRF, whereas the control group addressed 12 other maxillary sinuses grafted only with DBB. After 8 months of repair, a biopsy was obtained using a drill bit on the same axis of insertion of the implants. The biopsie... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

INTRODUÇÃO: O tratamento padrão para lesões de nervo periférico que não podem ser suturados primariamente é a enxertia de nervo autólogo. Esse método, porém, carece de resultados satisfatórios e impõe algumas limitações técnicas e complicações. Várias opções já foram estudadas como alternativas ao enxerto de nervo, porém ainda não há conduto biológico ou sintético disponível para uso clínico que tenha a mesma capacidade regenerativa do enxerto de nervo autólogo. Os avanços em cultura celular e o maior entendimento dos mecanismos moleculares e celulares da regeneração nervosa levaram ao uso de células promotoras de regeneração associado aos condutos na tentativa de melhorar os resultados da reconstrução nervosa. Vários estudos demonstraram que o uso de célulastronco derivadas de tecido adiposo (ADSC) em condutos aloplásticos potencializa a regeneração neural. No entanto, nenhum estudo até hoje comparou a adição de ADSC indiferenciadas em conduto aloplástico ao tratamento padrão com autoenxerto. Esse estudo tem como objetivo avaliar a influência da adição de células-tronco mesenquimais derivadas de tecido adiposo em conduto de fibrina na regeneração de nervo periférico e comparar com enxertia de nervo autógeno em modelo experimental de ratos. MÉTODO: Em um modelo de lesão de nervo ciático (defeito de 10 mm) foram avaliados 30 ratos Wistar divididos em 3 grupos. O defeito de nervo foi reconstruído usando conduto de fibrina (Grupo Conduto, n=10), conduto de fibrina acrescido de ADSC (Grupo ADSC, n=10) e autoenxerto do nervo (Grupo Autoenxerto, n=10). A avaliação funcional dos ratos foi realizada com o teste de marcha (walking track analysis) com 4, 8 e 12 semanas e o índice de função ciática (IFC) foi determinado. Após 12 semanas, o peso do músculo tríceps sural foi avaliado. Segmentos dos nervos regenerados também foram coletados para análises histológicas como densidade axonal e diâmetro médio das fibras. RESULTADOS: O grupo Conduto mostrou recuperação funcional no teste da marcha após a reconstrução do nervo, porém com resultados inferiores aos outros dois grupos. O grupo ADSC mostrou recuperação intermediária e o grupo Autoenxerto obteve os melhores resultados (IFC com 12 semanas de -53,3±.3 vs -44,7±3 vs - 35,6±2, respectivamente, p < 0,001). A relação de peso do músculo tríceps sural no grupo Conduto foi de 41,1±3%, no grupo ADSC de 53,3±4% e no grupo Autoenxerto de 71,0 ± 4% (p < 0,001). Na avaliação histológica, o grupo Conduto mostrou densidade axonal de 39,8±3 axônios/10.995?m2 e diâmetro médio das fibras de 3,9 ± 0?m2, o grupo ADSC densidade axonal de 58,8 ± 3 axônios/10.995um2 e diâmetro médio das fibras de 4,9 ± 1um2 e o grupo Autoenxerto densidade axonal de 67,1±2 axônios/10.995?m2 e diâmetro médio das fibras de 8,9±1um2 (p < 0,001). CONCLUSÃO: A adição de células-tronco mesenquimais derivadas de tecido adiposo (ADSC) em conduto de fibrina na regeneração de nervo periférico, em modelo experimental de ratos, mostrou recuperação funcional e regeneração histológica estatisticamente mais significativa comparada à reconstrução somente com conduto de fibrina, porém ainda aquém dos resultados obtidos com enxertia de nervo autógeno / Introduction: The standard treatment for peripheral nerve injuries that cannot be primarily sutured is nerve autograft. But this method lacks satisfactory results and imposes some technical limitations and complications. Several options have been studied as alternatives to nerve autografting, but there is no biological or synthetic conduit available for clinical use that provides the same regenerative capacity of nerve autograft. Advances in cell culture and understanding of nerve regeneration mechanisms led to the use of regeneration-inducing cells in association with conduits, in an attempt to improve the reconstruction results. Several studies have shown that the use of adipose derived stem cells (ADSC) into conduits enhances neural regeneration. However, there is no study that compared the addition of undifferentiated ADSC in alloplastic conduit to standard treatment with autograft. This study evaluated the influence of the addition of adipose derived stem cell in fibrin conduit for peripheral nerve regeneration in comparison to the nerve autograft, in a rat model. Method: A sciatic nerve injury model (10-mm defect) was performed in 30 Wistar rats, which were divided into 3 groups. Nerve defect was reconstructed using fibrin conduit (Conduit group, n=10), fibrin conduit filled with ADSC (ADSC group, n = 10) and nerve autograft, (Autograft group, n=10). The walking behavior was measured by footprint analysis at 4, 8, and 12 weeks and sciatic function index (SFI) was determined. After 12 weeks, the triceps surae muscle weight was evaluated and histological analysis was performed to evaluate the regenerated nerve and measured axonal density and fibers diameter average. Results: The Conduit group showed less improvement in walking behavior compared to ADSC group and Autograft group (SFI at 12 weeks, - 53.3 ± .3 vs -44.7 ± 3 vs -35.6 ± 2 respectively, p< 0.001). The triceps surae muscle weight ratio of the fibrin conduit group was 41.1± 3%, ADSC group was 53.3 ± 4%, and Autograft group 71.0 ± 4% (p < 0.001). In histological evaluation, the Conduit group showed axonal density of 39.8±3 axons/10995um2 and fiber diameter average of 3.9±0 ?m2, the ADSC group had axonal density of 58.8 ± 3 axons/10995 um2 and fiber diameter average of 4.9±1?m2 and axon density of Autograft group was 67.1±2 axons/10995 um2 and fiber diameter average was 8.9±1?m2 (p < 0.001). Conclusion: The addition of adipose derived stem cells (ADSC) into fibrin conduit used for nerve reconstruction following peripheral nerve injury in the rat model, showed better functional recovery and better histological regeneration compared to reconstruction with fibrin conduit without ADSC. However, the functional recovery in the ADSC group was worse than that in nerve Autograft group and the nerve repair with the ADSC-fibrin conduit has less myelinated fibers when compared to the repair with nerve autograf

A terapia celular representa uma abordagem promissora para o tratamento de cardiopatia isquêmica, porém aspectos-chave dessa estratégia permanecem incertos. Neste trabalho avaliamos a eficiência da retenção cardíaca de células da medula óssea marcadas com tecnécio (99m Tc-CMO) transplantadas, de acordo com o tempo após o infarto (1, 2, 3 e 7 dias) e a via de administração dessas células (intravenosa [IV], intraventricular [IC], intracoronariana [ICO] e intramiocárdica [IM]), em ratos submetidos à isquemia-reperfusão cardíaca [I&R]. Após 24 horas, a retenção cardíaca de 99m Tc-CMO foi maior na via IM comparada com a média alcançada pelas demais (6,79% do total injetado vs. 0,53%). O uso de fibrina como veículo para a injeção de células incrementou a retenção em 2.5 vezes (17,12 vs. 6,84%) na via IM. Curiosamente, quando administradas após 7 dias, a retenção de células na via IM alcançou valores próximos dos observados com da matriz de fibrina injetadas 24 h após a I&R (16,55 vs. 17,12%), enquanto que para as demais vias as mudanças foram insignificantes. Nos animais em que as CMO foram administradas por via intramiocárdica 24 horas após a I&R, com ou sem fibrina, observou-se melhora significante do desempenho cardíaco frente ao estresse farmacológico com fenilefrina quando comparados aos controles. Em conjunto, os dados mostram a biodistribuição das células injetadas após a I&R por 4 diferentes vias e 4 intervalos de tempo pós-lesão e indicam que a via IM é a que produz maior retenção cardíaca. O uso do biopolímero de fibrina aumenta a retenção das células e a eficácia deste efeito sobre a função cardíaca e mortalidade dos animais em longo prazo, além de 30 dias pós I&R, merecerá ser investigada no futuro. / Cell therapy represents a promising approach for ischemic cardiac disease, but key aspects of this strategy remain unclear. We examined the effects of timing and route of administration of bone marrow cells (BMCs) after myocardial ischemia/reperfusion injury (I&R). 99mTc-labeled BMCs were injected by 4 different routes: intravenous (IV), left ventricular cavity (LV), left ventricular cavity with temporal aorta occlusion (LV+) and intramyocardial (IM). The injections were performed 1, 2, 3, or 7 days after infarction. Cardiac retention was higher following the IM route compared to the average values obtained by all other routes (6.79% of the total radioactivity injected vs. 0.53%). Use of a fibrin biopolymer as vehicle during IM injection led to a 2.5-fold increase in cardiac cell accumulation (17.12 vs. 6.84%). Interestingly, the retention of cells administered with culture medium at day 7 post-MI by the IM route was similar to that observed when cells were injected 24 h post-IM using fibrin (16.55 vs 17.12%), whereas no significant changes were observed for the other routes. Cell therapy 24 hs post MI by IM injection, with or without fibrin, resulted in comparable improvement in cardiac function under pharmacological stress compared to control animals. Together, we provide evidence for the biodistribution of 99mTc-labeled BMCs injected post MI by 4 different routes and times post-injury, which shows that the IM rout is the most effective for cardiac cell retention. The use of a fibrin biopolymer further increased cardiac cell retention and its potential long term benefits, beyond 30, on reducing mortality and improving cardiac function deserve to be explored in the future.

Orientador: Rui Seabra Ferreira Júnior / Resumo: Terapias efetivas de lesões na dura-máter representam um enorme desafio à medicina, devido à dificuldade de suturas com êxito e de vedação das meninges, aumentando os índices de mortalidade e morbidade destes pacientes. Biomateriais que possam favorecer a regeneração e impedir o extravasamento de líquido cefalorraquidiano sem produzir efeitos adversos são alvos da indústria farmacêutica. Este estudo avaliou a biocompatibilidade do Biopolimero de Fibrina (BPF) derivado de peçonha de serpente como arcabouço tridimensional para células-tronco mesenquimais (CTMs) em lesões na dura-máter de ratos wistar (Rattus norvegicus). As CTMs foram caracterizadas na quinta passagem por citometria de fluxo (ICAM, CD90, CD34, CD45, CD11b) e diferenciadas em linhagens osteogênica e adipogênica. Foram utilizados 4 grupos (n=20) de ratos Wistar machos adultos. O grupo C (controle) foi submetido à durotomia. Os grupos tratados foram submetidos à durotomia seguido de: Tratamento com Biopolimero de fibrina (BPF); células-tronco mesenquimais (CTMs); e BPF+CTMs, formado pela associação do Biopolimero de fibrina e células-tronco mesenquimais. As CTMs marcadas e associadas ao BPF foram avaliadas por imageamento da fluorescência in vivo. Os animais foram avaliados neurológica e clinicamente quanto à sensibilidade dolorosa, deiscência de pontos, infecção da ferida, consumo de alimento e água e habilidades motoras. Foram realizadas eutanásias dos animais aos 7 e 28 dias após cirurgia e coletado material pa... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Effective therapies to treat dura mater injuries represents a major challenge to medicine due to its lack of sutures with high seal properties upon meninges, increasing the rate of mortality and morbidity among these patients. Biomaterials that promotes regeneration and prevent extravasation of cerebrospinal fluid, without producing adverse effects, are targets of the pharmaceutical industry. The present study aimed to evaluate the biocompatibility of the use on Fibrin Biopolymer (FBP) derived from snake venom as tridimensional scaffold to mesenchymal stem cells (MSC) on rat’s dura mater injury. Mesenchymal stem cells characterization was performed at fifth passage by flow cytometry (ICAM, CD90, CD34, CD45, CD11b) and differentiated into osteogenic and adipogenic lineages. Four groups (n=20) os male Wistar rats were used. Group C (control) animals were submitted to durotomy only. Treatment groups were submitted to durotomy followed by: Fibrin Biopolymer (FBP); mesenchymal stem cells (MSC); and FBP+MSCs, consisting on the association between fibrin biopolymer and mesenchymal stem cells. Marked MSCs associated to FBP were evaluated through in vivo fluorescence imaging. Animals were evaluated neurologically and clinically regarding pain sensitivity, dehiscence of suture, wound infection, feeding e motor capacity parameters. Animals were euthanized at seven and 28 days after surgical procedure, and biological material was collected to histological and proteomic analysis. Protein ... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Made available in DSpace on 2015-08-20T17:09:53Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-02-27. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-20T17:26:11Z : No. of bitstreams: 1 000841557.pdf: 2118184 bytes, checksum: 87c8783d39d5c085ec26e5dfc67c194a (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A reconstrução do tecido ósseo se faz necessária a partir de doenças esqueléticas, másformações congênitas, infecções, trauma e tratamentos cirúrgicos após alguns tipos de câncer. Os biomateriais desempenham um papel fundamental, fornecendo um modelo tridimensional para a formação do novo osso. São utilizados como veículos para a entrega de células tronco mesenquimais (CTMs), e também podem atuar como um microambiente sintético em termos de composição química, estrutura física e com porções biologicamente funcionais. A possibilidade da utilização de um selante de fibrina, cujo fator polimerizador é derivado do veneno de serpente (SFDVS), apresenta vantagens como a não utilização de sangue humano e o controle do tempo de coagulação e degradação do selante, adequandoo à necessidade cirúrgica. O objetivo deste trabalho foi avaliar o uso do SFDVS associado ou não à CTMs na regeneração óssea do fêmur de ratos. Foi estabelecido um defeito crítico de 5mm no fêmur de ratos, que foram tratados com SFDVS ou SFDVS + CTMs. Os animais foram eutanasiados aos 03, 21 e 42 dias após a cirurgia e os fêmures encaminhados para análise radiográfica, histológica e de microscopia eletrônica de varredura (MEV). O procedimento de isolamento, produção e caracterização das CTMs mostrou-se adequado, podendo ser utilizado em estudos posteriores. As CTMs foram positivas para CD90 e ICAM e negativas para MHC de classe II, CD34 e CD11b, confirmando o fenótipo de CTMs. As análises radiográficas demonstraram que, tanto no grupo SFDVS quanto no grupo SFDVS + CTMs houve preenchimento significativo da lesão, após 42 dias de observação, com formação de tecido radiograficamente semelhante ao tecido normal. As imagens de MEV demonstraram que o SFDVS estava presente no local da lesão após 03 dias. No 21º dia, foi possível observar a presença de tecido ósseo esponjoso nos dois grupos de tratamento e no 42º houve... / The need for bone reconstruction can emerges from skeletal disorders congenital malformations, infections, trauma and from surgical tumor resection in some cancer treatments. Biomatrials play a key role providing a three-dimensional structure for new bone formation. They can be used as vehicles for mesenchymal stem cell (MSCs) and also work as a synthetic microenvironment in terms of chemical composition, physical structure and biological function. The possibility to use a fibrin sealant whose polymerizing factor is derived from snake venom (SFDVS) shows advantages related to not using human blood which allows for better clothing time and sealant degradation control, fitting into surgical needs. The objective of this study was to evaluate the use of SFDVS, associated or not with MSCs on rat femur bone regeneration. A 5-mm critical size defect was established on rat femur that were treated either with SFDVS alone or SFDVS + MSCs. Animals were euthanized at 03, 21 and 42 days after surgery and femur were sent to radiographic, histological and scanning electron microscopy (SEM) analyses. Isolation, expansion and characterization of MSCs were appropriate and could be used in future investigations. MSCs were positive for CD90 and ICAM and negative for class II MHC, CD 34 and CD11b, confirming MSC phenotype. Radiograph analyses showed that in either SFDVS or SFDVS + MSCs group there was significant filling of injury site, after 42 days of observation, with bone tissue formation, radiographically similar to normal tissue. SEM demonstrated that SFDVS was fixed inside injury site 03 days after surgery. At the 21st day it was possible to observe presence of cancellous bone in both groups and at 42nd we observed expressive injury filling, although it was higher in SFDVS + MSCs. Histological analyses showed new bone formation in both groups. However, in SFDVS + MSC group occured immature bone formation, in contrast to higher injury site filling. We ...

Orientador: Rui Seabra Ferreira Junior / Coorientador: Patrícia Rodrigues Orsi / Banca: Luis Antonio Justulin Junior / Banca: Antonio de Castro Rodrigues / Resumo: A reconstrução do tecido ósseo se faz necessária a partir de doenças esqueléticas, másformações congênitas, infecções, trauma e tratamentos cirúrgicos após alguns tipos de câncer. Os biomateriais desempenham um papel fundamental, fornecendo um modelo tridimensional para a formação do novo osso. São utilizados como veículos para a entrega de células tronco mesenquimais (CTMs), e também podem atuar como um microambiente sintético em termos de composição química, estrutura física e com porções biologicamente funcionais. A possibilidade da utilização de um selante de fibrina, cujo fator polimerizador é derivado do veneno de serpente (SFDVS), apresenta vantagens como a não utilização de sangue humano e o controle do tempo de coagulação e degradação do selante, adequandoo à necessidade cirúrgica. O objetivo deste trabalho foi avaliar o uso do SFDVS associado ou não à CTMs na regeneração óssea do fêmur de ratos. Foi estabelecido um defeito crítico de 5mm no fêmur de ratos, que foram tratados com SFDVS ou SFDVS + CTMs. Os animais foram eutanasiados aos 03, 21 e 42 dias após a cirurgia e os fêmures encaminhados para análise radiográfica, histológica e de microscopia eletrônica de varredura (MEV). O procedimento de isolamento, produção e caracterização das CTMs mostrou-se adequado, podendo ser utilizado em estudos posteriores. As CTMs foram positivas para CD90 e ICAM e negativas para MHC de classe II, CD34 e CD11b, confirmando o fenótipo de CTMs. As análises radiográficas demonstraram que, tanto no grupo SFDVS quanto no grupo SFDVS + CTMs houve preenchimento significativo da lesão, após 42 dias de observação, com formação de tecido radiograficamente semelhante ao tecido normal. As imagens de MEV demonstraram que o SFDVS estava presente no local da lesão após 03 dias. No 21º dia, foi possível observar a presença de tecido ósseo esponjoso nos dois grupos de tratamento e no 42º houve... / Abstract: The need for bone reconstruction can emerges from skeletal disorders congenital malformations, infections, trauma and from surgical tumor resection in some cancer treatments. Biomatrials play a key role providing a three-dimensional structure for new bone formation. They can be used as vehicles for mesenchymal stem cell (MSCs) and also work as a synthetic microenvironment in terms of chemical composition, physical structure and biological function. The possibility to use a fibrin sealant whose polymerizing factor is derived from snake venom (SFDVS) shows advantages related to not using human blood which allows for better clothing time and sealant degradation control, fitting into surgical needs. The objective of this study was to evaluate the use of SFDVS, associated or not with MSCs on rat femur bone regeneration. A 5-mm critical size defect was established on rat femur that were treated either with SFDVS alone or SFDVS + MSCs. Animals were euthanized at 03, 21 and 42 days after surgery and femur were sent to radiographic, histological and scanning electron microscopy (SEM) analyses. Isolation, expansion and characterization of MSCs were appropriate and could be used in future investigations. MSCs were positive for CD90 and ICAM and negative for class II MHC, CD 34 and CD11b, confirming MSC phenotype. Radiograph analyses showed that in either SFDVS or SFDVS + MSCs group there was significant filling of injury site, after 42 days of observation, with bone tissue formation, radiographically similar to normal tissue. SEM demonstrated that SFDVS was fixed inside injury site 03 days after surgery. At the 21st day it was possible to observe presence of cancellous bone in both groups and at 42nd we observed expressive injury filling, although it was higher in SFDVS + MSCs. Histological analyses showed new bone formation in both groups. However, in SFDVS + MSC group occured immature bone formation, in contrast to higher injury site filling. We ... / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:03Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-03-10Bitstream added on 2014-06-13T19:57:17Z : No. of bitstreams: 1 leite_frm_me_arafo.pdf: 3458261 bytes, checksum: 24ab9b956cd575d2cc355dd7652fbe26 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / A raspagem gera smear layer que contém microrganismos e toxinas, podendo interferir no reparo periodontal. Por esse motivo, diferentes substâncias têm sido empregadas para remover esta camada e expor fibras colágenas da superfície dental. A adesão de elementos sangüíneos a superfícies radiculares desmineralizadas e a estabilização do colágeno pelas fibras colágenas são de extrema importância no sucesso da cirurgia periodontal. O objetivo deste estudo foi avaliar os diferentes padrões de adsorção e adesão de elementos sangüíneos a superfícies radiculares quimicamente condicionadas. Setenta e cinco dentes foram raspados, eqüitativamente divididos em 5 grupos: irrigação com água destilada (controle), aplicação de solução de ácido cítrico a 25%, solução de citrato de sódio a 30%, gel de EDTA a 24% e solução de cloridrato de tetraciclina a 50 mg/mL. Metade da superfície condicionada foi exposta a sangue fresco e preparada para microscopia eletrônica de varredura. As superfícies radiculares raspadas e condicionadas com EDTA e ácido cítrico apresentaram os melhores resultados em relação ao grupo controle. O ácido cítrico também se mostrou mais efetivo na remoção de smear layer e na adesão de elementos sangüíneos do que o cloridrato de tetraciclina e o citrato de sódio. Além disso, a relação entre exposição de fibras colágenas e adesão de elementos sangüíneos foi positiva. Dessa forma, o emprego de EDTA e ácido cítrico sobre a superfície radicular aumentam a adsorção e adesão de células sangüíneas e a estabilização da rede de fibrina. / Root scaling generates a smear layer which contains microorganisms and toxins that could interfere in periodontal healing. For this reason, different substances have been used to remove it and to expose collagen fibers from tooth surface. Blood elements adhesion to demineralized roots and clot stabilization by collagen fibers are extremely important for the success of periodontal surgery. The aim of this study was to evaluate the different patterns of blood elements adsorption and adhesion to root surfaces chemically conditioned. Seventy five teeth were planed and equitably divided into five groups: irrigation with distilled water (control), application of a 25% citric acid solution, 30% sodium citrate solution, 24% EDTA gel and 50 mg/mL tetracycline hydrochloride. Half of the conditioned surface was exposed to fresh blood and prepared for scanning electron microscopy. Planed root surfaces and conditioned with EDTA and citric acid showed better results when compared to control group. Citric acid was more effective on smear layer removal and blood elements adhesion to root surface than tetracycline and sodium citrate. Also, the relationship between collagen fibers exposure and blood elements adhesion was positive. This way, EDTA and citric acid employment on root surface improve blood element adsorption and adhesion to root surface and fibrin network stabilization.