Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2016-06-14T15:37:09Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1034565 bytes, checksum: c504a98dadccf295255bca92bfe49d24 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-14T15:37:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1034565 bytes, checksum: c504a98dadccf295255bca92bfe49d24 (MD5) Previous issue date: 2005-04-28 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Os genes WRKY codificam proteínas de ligação ao DNA que reconhecem a seqüência conservada de nucleotídeos (T)(T)TGAC(C/T) (W box), presente em promotores de genes de defesa relatados em plantas. As proteínas WRKY podem ser divididas em grupos e subgrupos distintos, com base nas características do domínio WRKY de ligação ao DNA altamente conservado entre os membros dessa família e de pequenos domínios adicionais conservados. Esse trabalho objetivou caracterizar, mediante a obtenção da seqüência completa, dois fatores de transcrição WRKY relacionados aos clones de cDNA MG.LE.EB.A3.0208D3 e MG.LE.EB.A3.0209E3 que foram expressos na linhagem resistente NC-EBR-2 de tomateiro (Lycopersicon esculentum Mill.) 36 horas após a inoculação com o fungo Alternaria solani. A triagem efetuada por PCR de uma biblioteca de fosmídeos da linhagem NC- EBR-2, utilizando-se oligonucleotídeos derivados das seqüências dos clones MG.LE.EB.A3.0208D3 e MG.LE.EB.A3.0209E3, resultou na identificação de um clone fosmídeo correspondente a cada clone. Por meio do seqüenciamento shotgun desses clones, foram obtidas duas ORFs (open reading frame, sequência aberta de leitura) denominadas de LeWRKY1 (fator de transcrição WRKY 1 de L. esculentum) com 1.165pb e LeWRKY2 (fator de transcrição WRKY 2 de L. esculentum) com 1.570pb, correspondente aos clones MG.LE.EB.A3.0208D3 e MG.LE.EB.A3.0209E3, respectivamente. A proteína codificada por LeWRKY1, que apresenta similaridade de seqüência com a proteína NtWRKY3 de Nicotiana tabacum, possui em sua seqüência de 328 aminoácidos um domínio WRKY de ligação ao DNA, um motivo dedo de zinco do tipo Cys 2 His 2, um motivo conservado denominado domínio 1 que constitui um sinal de localização nuclear e um domínio conservado que inclui a região C de ligação a calmodulina. Essas características permitem classificar LeWRKY1 no grupo II, subgrupo d, dos fatores de transcrição WRKY. Esta proteína apresenta também um domínio N-terminal de 41 aminoácidos com função ainda desconhecida. Na região promotora de LeWRKY1 foi observada a presença do elemento promotor TATA box a –55pb e duas regiões W box a – 89pb (WA) e a –76pb (WB) do sítio de início da transcrição. Análise de Southern blot revelou que esse gene está presente em mais de uma cópia no genoma do tomateiro. A proteína codificada pelo gene LeWRKY2 apresentou similaridade de seqüência com a proteína tWRKY4 de Nicotiana tabacum e possui uma seqüência de 291 aminoácidos constituída de um domínio WRKY de ligação ao DNA e um motivo dedo de zinco Cys 2 HisCys, sendo classificada como membro do grupo III dos fatores de transcrição WRKY. A análise por meio de Southern blot indicou que o gene LeWRKY2 está presente em única cópia no genoma do tomateiro. A comprovação e a quantificação da contribuição desses genes na resistência do tomateiro a Alternaria solani depende, entretanto, de estudos de expressão e análise funcional. / The WRKY genes codify to DNA binding proteins that recognize the conserved nucleotide sequences (T)(T)TGAC(C/T) (W box) present in promoters of plant defense genes. The WRKY proteins can be divided in distinct groups and subgroups, based on characteristics of the DNA binding WRKY domain and on additional conserved small domains. This work aimed to characterize, by means of sequencing, two WRKY transcription factors related to cDNA clones MG.LE.EB.A3.0208D3 and MG.LE.EB.A3.0209E3 expressed in the resistant tomato lineage NC-EBR-2 36 hours post inoculation with the fungus Alternaria solani. Genomic DNA fragments that contained the genes correspondent to each cDNA clones were identified by PCR screening of NC-EBR-2 fosmid genomic library making use of primers derived from MG.LE.EB.A3.0208D3 and MG.LE.EB.A3.0209E3 sequences. Two ORFs (open reading frame) were obtained by sequencing clones from the shotgun library of these fosmids. They were designated as LeWRKY1 (L. esculentum WRKY transcription factor 1, correspondent to MG.LE.EB.A3.0208D3) and LeWRKY2 (L. esculentum WRKY transcription factor 2, correspondent to MG.LE.EB.A3.0209E3), having 1.165bp and 1.570bp, respectively. The protein codified by LeWRKY1 that is similar to the protein NtWRKY3 of Nicotiana tabacum and has 328 amino acids with one WRKY DNA binding domain, one Cys 2 His 2 zinc finger motif, one conserved nuclear localization signal, and one conserved domain that included the calmodulin binding region C. These characteristics classify LeWRKY1 into group II, subgroup d of WRKY transcription factors. This protein also presents an N-terminal domain that comprises 41 amino acids of unknown function. One TATA box element at –55 bp and two W box regions at –89 bp (WA) and –76 bp (WB) at the transcription start position were observed in promoter region of LeWRKY1. Southern blot analysis indicated that more than one copy of this gene is present in the tomato genome. The protein codified by LeWRKY2 presented sequence similarity to tWRKY4 protein of N. tabacum and has 291 amino acids sequence that consists of WRKY DNA binding protein domain and one Cys 2 HisCys zinc finger motif, being classified as group III member of WRKY transcription factors. Southern blot analysis indicated that of LeWRKY2 is a single copy gene. / Dissertação antiga

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:05Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2001-02-22Bitstream added on 2014-06-13T20:33:46Z : No. of bitstreams: 1 moreira_ae_me_sjrp.pdf: 1607576 bytes, checksum: 6defec23b76aee9fab3792f6dfc9ab01 (MD5) / O presente trabalho descreve a caracterização molecular parcial e a localização subcelular de um isolado brasileiro do vírus do mosaico do feijoeiro do sul dos E.U.A. (southern bean mosaic virus, SBMV, gênero Sobemovirus) encontrado no Estado de São Paulo e aqui intitulado SBMV-BSP. O SBMV-BSP infectou sistemicamente plantas de Phaseolus vulgaris L. 'Rosinha induzindo mosaico, distorção foliar e redução do tamanho da planta. O SBMV-BSP foi purificado à partir de folhas de feijoeiros, cv. Rosinha, infectados produzindo preparações de bom grau de pureza e concentração viral satisfatória (50-70 mg/Kg de folhas infectadas). Por eletroforese em gel desnaturante SDS-PAGE, foi determinada a massa molecular da proteína capsidial com valor estimado em 30 kDa. Um anti-soro para a proteína capsidial foi obtido de galinhas imunizadas com preparações purificadas do vírus (anti-SBMV), sendo este específico e de alto título (1:128.000). Em SDS-PAGE, uma análise comparativa de extratos de planta sadia e infectada evidenciou a presença de uma banda a mais neste último que foi identificada por Western blot utilizando o anti-SBMV como sendo correspondente à proteína capsidial do SBMV-BSP. RNAs de vários tamanhos (4,2 Kb; 3,1 Kb; 2,65 Kb; 2,15 Kb; 1,64 Kb; 1,36 Kb; e 1,0 Kb) foram obtidos do SBMV-BSP purificado, confirmando a heterogeneidade dos RNAs presentes nos virions. Uma sonda molecular não radioativa que reconhece especificamente os RNAs do SBMV-BSP e não reconhece RNAs de planta sadia foi produzida. Através de Northern blot e hibridização com essa sonda todos os fragmentos de RNAs foram detectados também em extratos de plantas infectadas pelo vírus, comprovando pela primeira vez a presença dos RNAs heterogêneos na planta hospedeira. Duas espécies de RNAs de fita dupla foram extraídas a partir de extratos de plantas de feijoeiro infectadas pelo SBMV-BSP,... / The present work describes the partial molecular characterization and the subcellular localization of a Brazilian isolated of Southern bean mosaic virus (SBMV, genus Sobemovirus) found in the São Paulo State and designated SBMV-BSP. The SBMV-BSP infected systemically plants of Phaseolus vulgaris L Rosinha inducing mosaic, leaf distortions and reduction of the size of the plant. The SBMV-BSP was purified from infected bean leaves yielding preparations with a good degree of purity and satisfactory virus concentration (50-70 mg/kh of infected leaves). By denaturing gel electrophoresis (SDS-PAGE), the molecular mass of the coat protein was determined to have an estimated value of 30 kDa. An antiserum for the coat protein was obtained from hens immunized with purified viral preparation (anti-SBMV), having high specificity and title (1:120,000). In SDS-PAGE a comparative analysis of infected and healthy plants showed the presence of an extra band in extracts of infected plants identified by Western blot, using anti-SBMV, as the coat protein of the SBMV-BSP. RNAs of many sizes (4.2 Kb; 3.1 Kb; 2.65 Kb; 2.15 Kb; 1.64 Kb; 1.36 Kb; e 1.0 Kb) were detected in SBMV-BSP purified preparations, confirming the heterogeneity of the RNAs found in virions. A non-radioactive molecular probe was produced which recognizes specifically viral RNAs but does not recognize RNAs from healthy plants. Using Northern blot and hybridization with the specific probe it was shown that the heterogenous RNA fragments were also found in extracts of infected plants providing, for the first time, evidence of their presence in the host plant. Two species of double stranded RNAs (dsRNA) were obtained from extracts of SBMV-BSP infected plants, with sizes of 4.2 Kbp and 1.0 Kbp. In bean leaves, SBMV-BSP particles were seen dispersed in the cytoplasm and sometimes arranged in almost crystalline patterns...(Complete abastract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:26Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2002-07Bitstream added on 2014-06-13T18:43:53Z : No. of bitstreams: 1 peres_nar_dr_botfca.pdf: 1562293 bytes, checksum: 80875212025872cc8702cb8d95533821 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A podridão floral, causada por Colletotrichum acutatum, afeta flores de citros e induz à abscisão de frutos jovens, sendo considerada um sério problema na maioria das áreas úmidas onde se produz citros nas Américas. O controle da doença é feito pela pulverização de fungicidas durante a florada porém, uma das dificuldades é determinar o momento ideal para o controle. Um modelo de previsão foi desenvolvido na Flórida para indicar a necessidade de pulverização, considerando a quantidade de inóculo, chuvas e molhamento foliar. Este modelo foi avaliado durante três anos consecutivos na região de Itapetininga-SP. Verificou-se que mediante a aplicação do modelo obteve-se um bom controle da doença, tendo-se evitado duas pulverizações desnecessárias em comparação com o calendário, em 1999, e uma pulverização, comparado ao esquema do produtor, em 2000 e 2001. Um novo sistema de previsão para controle da podridão floral (PFD-FAD) foi desenvolvido incorporando outros fatores que também influenciam a ocorrência da doença, como o histórico do pomar, a suscetibilidade da variedade, o estágio de desenvolvimento da florada, assim como chuva, molhamento foliar e nível de inóculo, além da data da última... . / Postbloom fruit drop (PFD), caused by Colletotrichum acutatum Simmonds, infects petals of citrus flowers and induces the abscission of fruitlets. The disease can cause serious losses in most humid areas where citrus is produced in the Americas. The disease is controlled by fungicide applications during the bloom but it is difficult to properly time applications. A model was developed in Florida to schedule fungicide applications based on the amount of inoculum and the amount of rainfall and leaf wetness for the last 5 days. This model was evaluated during three consecutive years in Itapetininga-SP, Brazil. Results showed that applications following the model provided good control of the disease and saved two sprays compared to the calendar program in 1999, and one spray compared to the grower’s choice in 2000 and 2001. A new advisory system (PFD-FAD) was developed to be more widely applicable by incorporating risk factors that are inherent in any planting which affected by PFD incidence. The history of the disease in the grove, the varietal susceptibility, the stage of the bloom, as well as the rain, leaf wetness, the amount of inoculum and the last spray date were considered. Field tests in 2001 showed that the system provided good control of the disease with only one fungicide application. Benomyl is considered one of the most effective products for PFD control but despite that C. acutatum is not highly sensitive to benomyl in culture. The mycelial growth and conidial germination is inhibited by 80% at concentration of 1.0 μg/mL, but higher concentrations do not completely inhibit the growth of the fungus. Colletotrichum gloeosporioides, a common saprophyte and causal agent of anthracnose of fruits postharvest, is completely inhibit by 1.0 μg/mL... (Complete abstract, click electronic address below).

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, 2012. / Submitted by Tania Milca Carvalho Malheiros (tania@bce.unb.br) on 2012-05-11T16:14:42Z No. of bitstreams: 1 2012_WilliamRosaOliveiraSoares_Parcial.pdf: 9914177 bytes, checksum: 03281b5c24a571a50d595d3978a5f926 (MD5) / Rejected by Marília Freitas(marilia@bce.unb.br), reason: inserir resumo. on 2012-05-14T16:41:38Z (GMT) / Submitted by Tania Milca Carvalho Malheiros (tania@bce.unb.br) on 2012-05-15T12:55:26Z No. of bitstreams: 1 2012_WilliamRosaOliveiraSoares.pdf_Parcial.pdf: 9938693 bytes, checksum: f4411fea09fdf2a22b5cd4b945dc5cb7 (MD5) / Approved for entry into archive by Marília Freitas(marilia@bce.unb.br) on 2012-05-16T17:44:45Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_WilliamRosaOliveiraSoares.pdf_Parcial.pdf: 9938693 bytes, checksum: f4411fea09fdf2a22b5cd4b945dc5cb7 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-05-16T17:44:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_WilliamRosaOliveiraSoares.pdf_Parcial.pdf: 9938693 bytes, checksum: f4411fea09fdf2a22b5cd4b945dc5cb7 (MD5) / Vinte espécies diferentes pertencentes à família Meliolaceae foram documentadas parasitando membros de treze famílias de plantas hospedeiras, provenientes de diversas regiões do cerrado brasileiro. Desse total, doze são prováveis espécies novas, três são prováveis variedades novas e cinco espécies já conhecidas. Das doze primeiras, nove espécies pertencem ao gênero Meliola, duas ao gênero Appendiculella e uma ao gênero Irenopsis, Já as variedades, pertencem ao gênero Meliola. Além disso, Anemopaegma acutifolium, Merremia contorquens, Sweetia fruticosa, Eriosema congestrum, Albizia polyantha, Sorocea guilleminiana e Psycotria melaneoides, foram, pela primeira vez, relatados como hospedeiras de melioláceos. Além disso, nove das espécies estudadas se constituíram em novos registros para os estados em que foram coletadas. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Twenty different fungal species collected in several areas of the Brazilian Cerrado, belonging in family Meliolaceae and infecting members of thirteen plant families were described, illustrated, and identified. Twelve samples belong probably in new species, three new varieties, and finally five were known species. Among the first group nine are Meliola, three Appendiculella species and one Irenopsis. All varieties detected are Meliola species. The host plants, Anemopaegma acutifolium, Merremia contorquens, Sweetia fruticosa, Eriosema congestrum, Albizia polyantha, Sorocea guilleminiana and Psycotria melaneoides, for the first time listed as hosts of meliolaceous fungi. Also, nine of the species studied are new records for the states where they were collected.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, Programa de Pós-Graduação em Fitopatologia, 2011. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2012-05-24T13:00:43Z No. of bitstreams: 1 2011_MarcileneFernandesAlmeidadosSantos.pdf: 1313434 bytes, checksum: e32db128bd70fade50c2c2690b4d0c61 (MD5) / Approved for entry into archive by Marília Freitas(marilia@bce.unb.br) on 2012-05-24T13:32:02Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_MarcileneFernandesAlmeidadosSantos.pdf: 1313434 bytes, checksum: e32db128bd70fade50c2c2690b4d0c61 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-05-24T13:32:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_MarcileneFernandesAlmeidadosSantos.pdf: 1313434 bytes, checksum: e32db128bd70fade50c2c2690b4d0c61 (MD5) / Meloidogyne incognita é uma das espécies de nematoide das galhas mais polífagas que ocorrem no Brasil e no mundo. Oito representantes de M. incognita incluindo os dois fenótipos enzimáticos (esterase e malato desidrogenase: I1N1, I2N1) e quatro isolados de espécie cripta (Meloidogyne sp.1 - S2N1), representando um tipo citológico (3n = 40-46) e quatro raças fisiológicas foram estudados. Meloidogyne hispanica (H3N1, 2n = 32-36) e dois isolados atípicos de Meloidogyne sp. 2 (S2N3, 3n = 40-44) foram incluídas neste estudo. Todos os isolados foram testados com três marcadores moleculares espécie-específico do tipo SCAR, desenvolvidos para M. incognita. Os pares de primers B06F/R, miF/R e incK14F/R amplificaram três fragmentos espécie-específico de 1,200 bp, 955 bp e 399 bp, respectivamente, para os oito isolados de M. incognita e quatro de Meloidogyne sp. 1, não ocorrendo para os isolados pertencentes a M. hispanica e Meloidogyne sp. 2. A variabilidade genética de todos os isolados de Meloidogyne spp. usados neste estudo foi avaliada por meio dos marcadores RAPD e ISSR. Análises filogenéticas das matrizes resultantes usando (UPGMA, Maximum Parsimony e Bayesian inference) produziram árvores com a mesma topologia geral na relação entre as espécies. Dois grupos monofiléticos foram observados: grupo I, consistindo de isolados de M. hispanica e Meloidogyne sp.2 atípicos e grupo II agrupando-se todos os isolados de M. incognita e Meloidogyne sp.1 (S2N1). Considerando abordagens morfométricas, morfológicas e moleculares, foi possível concluir que os três fenótipos enzimáticos (I1N1, I2N2 e S2N1) caracterizam a espécie M. incognita. Nenhuma correlação foi detectada entre os fenótipos isoenzimáticos, as raças dos isolados e a topologia da árvore. Morfologicamente, os isolados de (S2aN3) diferem de M. incognita e M. hispanica pelas características do estilete das fêmeas. Os resultados deste estudo sugerem que os dois isolados com fenótipo S2aN3 pertencem à espécie ainda não identificada, mas geneticamente relacionada à M. hispanica. ________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Meloidogyne incognita is one of the most polyphagous species of root-knot nematode occurring in Brazil and worldwide. Eight M. incognita representing two enzymatic phenotypes (esterase and malate desydrogenase: I1N1, I2N1) and four cryptic isolates of Meloidogyne sp.1 (S2N1), representing one cytological type (3n=40-46), and four host races were studied. Meloidogyne hispanica (H3N1, 2n=32-36) and two isolates of an atypical Meloidogyne sp.2 (S2N3, 3n= 40-44) were included in this study. All isolates were tested with three species-specific molecular markers, i.e., SCARs, developed for M. incognita. The pairs of primers B06F/R, miF/R and incK14F/R amplified three species-specific fragments of 1,200 bp, 955 bp and 399 bp, respectively, and were observed for the eight isolates of M. incognita and four of Meloidogyne sp.1, and not for those belonging to either M. hispanica or Meloidogyne sp.2. Overall genetic variability of Meloidogyne isolates in this study was evaluated using RAPD and ISSR markers. Phylogenetic analyses of the resulting matrices using UPGMA, Maximum Parsimony and Bayesian inference produced trees with the same general topology with respect the relationships among species. Two strongly supported monophyletic clades were observed: clade I, consisting of M. hispanica isolates and the atypical Meloidogyne sp.2, and clade II, clustering together all M. incognita isolates and Meloidogyne sp.1 (S2N1). Considering morphometrical, morphological and molecular approaches, it was possible to conclude that the three enzymatic phenotypes (I1N1, I2N2 and S2N1) characterized M. incognita. No strict correlation could be detected between either, the isoenzymatic phenotypes or the races of the isolates, and the tree topology. Morphologically, the S2N3 isolates differ from M. incognita and M. hispanica by female stylet features. The results of this study suggested that the two isolates with phenotypes S2aN3 belong to unidentified species closely related to M. hispanica.

Orientador: José Osmar Gaspar / Banca: Addolorata Colariccio / Banca: Gustavo Orlando Bonilla Rodriguez / Resumo: O presente trabalho descreve a caracterização molecular parcial e a localização subcelular de um isolado brasileiro do vírus do mosaico do feijoeiro do sul dos E.U.A. (southern bean mosaic virus, SBMV, gênero Sobemovirus) encontrado no Estado de São Paulo e aqui intitulado SBMV-BSP. O SBMV-BSP infectou sistemicamente plantas de Phaseolus vulgaris L. 'Rosinha" induzindo mosaico, distorção foliar e redução do tamanho da planta. O SBMV-BSP foi purificado à partir de folhas de feijoeiros, cv. Rosinha, infectados produzindo preparações de bom grau de pureza e concentração viral satisfatória (50-70 mg/Kg de folhas infectadas). Por eletroforese em gel desnaturante SDS-PAGE, foi determinada a massa molecular da proteína capsidial com valor estimado em 30 kDa. Um anti-soro para a proteína capsidial foi obtido de galinhas imunizadas com preparações purificadas do vírus (anti-SBMV), sendo este específico e de alto título (1:128.000). Em SDS-PAGE, uma análise comparativa de extratos de planta sadia e infectada evidenciou a presença de uma banda a mais neste último que foi identificada por "Western blot" utilizando o anti-SBMV como sendo correspondente à proteína capsidial do SBMV-BSP. RNAs de vários tamanhos (4,2 Kb; 3,1 Kb; 2,65 Kb; 2,15 Kb; 1,64 Kb; 1,36 Kb; e 1,0 Kb) foram obtidos do SBMV-BSP purificado, confirmando a heterogeneidade dos RNAs presentes nos virions. Uma sonda molecular não radioativa que reconhece especificamente os RNAs do SBMV-BSP e não reconhece RNAs de planta sadia foi produzida. Através de "Northern blot" e hibridização com essa sonda todos os fragmentos de RNAs foram detectados também em extratos de plantas infectadas pelo vírus, comprovando pela primeira vez a presença dos RNAs heterogêneos na planta hospedeira. Duas espécies de RNAs de fita dupla foram extraídas a partir de extratos de plantas de feijoeiro infectadas pelo SBMV-BSP,...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The present work describes the partial molecular characterization and the subcellular localization of a Brazilian isolated of Southern bean mosaic virus (SBMV, genus Sobemovirus) found in the São Paulo State and designated SBMV-BSP. The SBMV-BSP infected systemically plants of Phaseolus vulgaris L "Rosinha" inducing mosaic, leaf distortions and reduction of the size of the plant. The SBMV-BSP was purified from infected bean leaves yielding preparations with a good degree of purity and satisfactory virus concentration (50-70 mg/kh of infected leaves). By denaturing gel electrophoresis (SDS-PAGE), the molecular mass of the coat protein was determined to have an estimated value of 30 kDa. An antiserum for the coat protein was obtained from hens immunized with purified viral preparation (anti-SBMV), having high specificity and title (1:120,000). In SDS-PAGE a comparative analysis of infected and healthy plants showed the presence of an extra band in extracts of infected plants identified by Western blot, using anti-SBMV, as the coat protein of the SBMV-BSP. RNAs of many sizes (4.2 Kb; 3.1 Kb; 2.65 Kb; 2.15 Kb; 1.64 Kb; 1.36 Kb; e 1.0 Kb) were detected in SBMV-BSP purified preparations, confirming the heterogeneity of the RNAs found in virions. A non-radioactive molecular probe was produced which recognizes specifically viral RNAs but does not recognize RNAs from healthy plants. Using Northern blot and hybridization with the specific probe it was shown that the heterogenous RNA fragments were also found in extracts of infected plants providing, for the first time, evidence of their presence in the host plant. Two species of double stranded RNAs (dsRNA) were obtained from extracts of SBMV-BSP infected plants, with sizes of 4.2 Kbp and 1.0 Kbp. In bean leaves, SBMV-BSP particles were seen dispersed in the cytoplasm and sometimes arranged in almost crystalline patterns...(Complete abastract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Nilton Luiz de Souza / Resumo: A podridão floral, causada por Colletotrichum acutatum, afeta flores de citros e induz à abscisão de frutos jovens, sendo considerada um sério problema na maioria das áreas úmidas onde se produz citros nas Américas. O controle da doença é feito pela pulverização de fungicidas durante a florada porém, uma das dificuldades é determinar o momento ideal para o controle. Um modelo de previsão foi desenvolvido na Flórida para indicar a necessidade de pulverização, considerando a quantidade de inóculo, chuvas e molhamento foliar. Este modelo foi avaliado durante três anos consecutivos na região de Itapetininga-SP. Verificou-se que mediante a aplicação do modelo obteve-se um bom controle da doença, tendo-se evitado duas pulverizações desnecessárias em comparação com o calendário, em 1999, e uma pulverização, comparado ao esquema do produtor, em 2000 e 2001. Um novo sistema de previsão para controle da podridão floral (PFD-FAD) foi desenvolvido incorporando outros fatores que também influenciam a ocorrência da doença, como o histórico do pomar, a suscetibilidade da variedade, o estágio de desenvolvimento da florada, assim como chuva, molhamento foliar e nível de inóculo, além da data da última... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo). / Abstract: Postbloom fruit drop (PFD), caused by Colletotrichum acutatum Simmonds, infects petals of citrus flowers and induces the abscission of fruitlets. The disease can cause serious losses in most humid areas where citrus is produced in the Americas. The disease is controlled by fungicide applications during the bloom but it is difficult to properly time applications. A model was developed in Florida to schedule fungicide applications based on the amount of inoculum and the amount of rainfall and leaf wetness for the last 5 days. This model was evaluated during three consecutive years in Itapetininga-SP, Brazil. Results showed that applications following the model provided good control of the disease and saved two sprays compared to the calendar program in 1999, and one spray compared to the grower's choice in 2000 and 2001. A new advisory system (PFD-FAD) was developed to be more widely applicable by incorporating risk factors that are inherent in any planting which affected by PFD incidence. The history of the disease in the grove, the varietal susceptibility, the stage of the bloom, as well as the rain, leaf wetness, the amount of inoculum and the last spray date were considered. Field tests in 2001 showed that the system provided good control of the disease with only one fungicide application. Benomyl is considered one of the most effective products for PFD control but despite that C. acutatum is not highly sensitive to benomyl in culture. The mycelial growth and conidial germination is inhibited by 80% at concentration of 1.0 μg/mL, but higher concentrations do not completely inhibit the growth of the fungus. Colletotrichum gloeosporioides, a common saprophyte and causal agent of anthracnose of fruits postharvest, is completely inhibit by 1.0 μg/mL... (Complete abstract, click electronic address below). / Doutor

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Departamento de Biologia Celular, Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2011. / Submitted by Tania Milca Carvalho Malheiros (tania@bce.unb.br) on 2013-04-24T13:15:00Z No. of bitstreams: 0 / Rejected by Jaqueline Ferreira de Souza(jaquefs.braz@gmail.com), reason: on 2013-04-24T13:18:59Z (GMT) / Submitted by Tania Milca Carvalho Malheiros (tania@bce.unb.br) on 2013-04-24T13:32:17Z No. of bitstreams: 1 2011_MarianaHallwass_Parcial.pdf: 1786257 bytes, checksum: 77d79c88b2c676722e4667d89e92ac9d (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Ferreira de Souza(jaquefs.braz@gmail.com) on 2013-04-24T13:40:11Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_MarianaHallwass_Parcial.pdf: 1786257 bytes, checksum: 77d79c88b2c676722e4667d89e92ac9d (MD5) / Made available in DSpace on 2013-04-24T13:40:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_MarianaHallwass_Parcial.pdf: 1786257 bytes, checksum: 77d79c88b2c676722e4667d89e92ac9d (MD5) / Espécies do gênero Tospovirus têm sido relatadas como agentes causais de doenças em diferentes culturas, no mundo, sendo transmitidos por diferentes espécies de tripes. O Tomato spotted wilt virus (TSWV) é a espécie-tipo do gênero Tospovirus e possui uma ampla gama de hospedeiros quando comparado com outros vírus do gênero. A partícula viral é envelopada e contém três segmentos de RNA designados S, M e L, que codificam duas proteínas não-estruturais (NSM e NSS) e três proteínas estruturais (L, N e o precursor das glicoproteínas GN e GC). A proteína NSM está envolvida no movimento do vírus célula-a-célula, enquanto que a NSS está envolvida na supressão de silenciamento gênico em plantas, demonstrado para o TSWV e para outro tospovírus, o Groundnut bud necrosis virus (GBNV) e também está relacionada com a expressão de sintomas nos tecidos foliares. Visando minimizar os danos causados por tospovírus, principalmente em cultivos de olerícolas, genes de resistência têm sido incorporados em variedades comerciais como o Tsw em pimentão e o Sw-5 em tomate. O entendimento dos processos de interação desses genes de resistência com genes virais constitui estratégia importante na durabilidade e estabilidade da resistência a esses patógenos. Este trabalho teve como objetivo geral estudar a interação entre tospovírus e plantas e foi dividido em três capítulos, sendo que no primeiro capítulo, foram determinadas as sequências completas de nucleotídeos do gene NSS de dois tospovírus relatados no Brasil, Groundnut ring spot virus (GRSV) e do Zucchini lethal chlorosis virus (ZLCV). As sequências foram comparadas com outras sequências NSS de tospovírus, disponíveis no banco de dados, permitindo a construção de árvores filogenéticas. Verificou-se que a NSs do GRSV e do ZLCV apresentou o mesmo tamanho, 1.404 nucleotídeos. A comparação das sequências de aminoácidos de GRSV com ZLCV mostrou uma identidade de 69,6%. Análises filogenéticas foram realizadas com base nas sequências NSS, depositadas no banco de dados, confirmando que as espécies estudadas pertencem ao grupo americano. O segundo capítulo foi dedicado ao estudo da interação entre TSWV e uma cultivar de pimenta resistente à infecção. No Brasil e no mundo, o estudo e o entendimento da morte celular programada (PCD) em células vegetais, induzida por infecções causada por fitopatógenos, ainda é incipiente. Resultados preliminares de ocorrência de PCD foram obtidos, utilizando o patossistema TSWV em Capsicum chinense PI 159236. Com o objetivo de estudar os domínios da proteína do nucleocapsídeo (N) de TSWV, responsável pela indução de reação de hipersensibilidade (RH) em genótipos de pimenta, foram construídas quimeras com troca de fragmentos genômicos do gene N de TSWV e Tomato chlorotic spot virus (TCSV) (responsável por causar infecção sistêmica em alguns genótipos de pimenta), usando como ferramenta o vetor de expressão transiente pGreenII 62-K. Agroinfiltrações com as construções e um controle negativo, que consistiu da bactéria mais o meio de indução, foram realizadas em plantas de C. chinense. Sintomas de necrose foram observados nas folhas com 10 a 12 dias após a infiltração. O sintoma de necrose ocorreu devido à incompatibilidade da interação agrobactéria GV3101/C. chinense, sendo necessário, em uma próxima etapa do trabalho, utilizar outra cepa de Agrobacterium mais adequada a este tipo de avaliação e que não induza, precocemente, o sintoma de necrose foliar. O terceiro capítulo consistiu do aprofundamento dos estudos da interação entre TSW V e um gene de resistência derivado do tomateiro. Interações entre plantas e vírus são complexas e envolvem vários tipos de respostas que podem ou não causar doenças no hospedeiro. A RH é um mecanismo utilizado pelas plantas para impedir a disseminação do patógeno para as células vizinhas. Para identificar o gene do TSWV isolado BR-01, responsável por desencadear uma resposta do tipo RH em plantas de Nicotiana benthamiana transgênica (expressando o gene de resistência derivada do tomateiro: Sw-5b), os genes das proteínas N, NSM e NSS foram clonados, individualmente, no vetor binário pGR107 (pPVX - Potato virus X ) e no vetor de expressão transiente pEAQ-HT Gateway, que também recebeu os genes GN e GC e o precursor da glicoproteína. Plantas de N. benthamiana (Sw-5b) foram agroinfiltradas com as construções obtidas em pGR107 e pEAQ-HT GW. Lesões necróticas do tipo RH foram observadas apenas nas plantas inoculadas com a construção pGR107 + NSM, diferindo dos sintomas causados pelas construções pGR107 + N e pGR107 + NSS. Entretanto, em inoculações realizadas com o vetor pEAQ, não foram observados sintomas do tipo RH nas agroinfiltrações realizadas com a construção pEAQ-HT GW + NSM. Verificou-se que a proteína NSM apresentou-se fragmentada em duas bandas quando detectada por Western blot, podendo ser esta a causa do não aparecimento da resposta do tipo RH com a inoculação dessa construção. Outra hipótese seria a necessidade de translocação da proteína NSM para a indução da RH, fato que poderia ser propiciado pelo vetor PVX, porém não ocorreria com o vetor de expressão pEAQ-HT GW. Visando a elucidação dessas hipóteses os trabalhos serão continuados. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The species type Tomato spotted wilt virus (TSW V) of the genus Tospovirus, has a broad host range if compared with other viruses of the genus. The viral particle is enveloped and contains three ssRNA segments denoted S, M and L, encoding two non-structural proteins (NSM e NSS) and three structural proteins (L, N, and the glycoprotein precursor of GN and GC). The NSM protein is involved in the cell-to-cell movement, whereas NSS acts as silencing suppressor in the affectedplants. This role was demonstrated for both TSWV and Groundnut bud necrosis virus (GBNV). The NSS is also related to the symptoms expression in plants. Strategies to minimizing the damages caused by tospoviruses, mainly in horticultural crops have been implemented based on resistance genes as Tsw in sweet-pepper and Sw-5 in tomato. Understanding the interactions between resistance and viral genes are essential to generate stable and durable resistance to these pathogens. This work had the general aim to study the interaction of tospoviruses and plants and it was divided into three chapters. In the first chapter, the complete nucleotide sequence of NSS gene of two tospoviruses Groundnut ring spot virus (GRSV) and Zucchini lethal chlorosis virus (ZLCV) were determined. The NSs sequence of GRSV and ZLCV was both 1,404 nucleotides-long. Pairwise comparison showed that the NSs amino acid sequence of GRSV shared 69.6% identity with that of ZLCV. The sequences were compared with other NSS sequences of tospovírus available in the database. Phylogenetic analysis based on NSs sequences confirmed that these species cluster in the American clade. The second chapter was devoted to study the interaction between TSWV and a pepper cultivar resistant to the infection. The understanding of programmed cell death (PCD) in plants, induced by pathogens, is still incipient. Previous results about the PCD occurrence were obtained by using the pathosystem TSWV/ Capsicum chinense In order to study the nucleocapsid protein (N) domains of TSW V, responsible to cause a hypersensitive response (HR) in pepper genotypes, chimeras were constructed with genomic fragments of TSWV and Tomato chlorotic spot virus (TCSV) (responsible for causing systemic infection in some sweet pepper genotypes) was cloned into the pGreenII 62-K, a transient expression vector. Agroinfiltration was carried out in C. chinense plants with the pGreenII constructs and the negative control (just the Agrobacterium in the medium). Necrotic symptoms were observed 10 to 12 days after infiltration. The necrosis occurred dueto the interaction incompatibility between Agrobacterium GV 3101 and C. chinense plants. It was concluded that a different Agrobacterium strain that does not induce necrotic symptoms in the leaf must be used to enable this study, in a next step of this work. In the third chapter the interaction between TSW V and the resistance gene Sw-5 from tomato was studied. Interactions between plant and viruses are complex and involve several types of responses that may or may not cause disease to the host. The HR is a mechanism used by plants to prevent the spread of the pathogen to the neighboring cells. In order to identify the TSW V isolate BR-01 gene, responsible for triggering the HR in the transgenic Nicotiana benthamiana plants (Sw-5b), the N, NSM and NSSgenes were cloned individually in frame into the vector pGR107 (pPVX Potato virus X) and into the transient expression vector pEAQ-HT Gateway. The GN, GC and Glycoprotein precursor were cloned to into the pEAQ-HT GW vector. The constructs were agroinfiltrated in the transgenic N. benthamiana (Sw-5). HR-like necrotic lesions were seen only in leaves inoculated with the construct pGR107 + NSM, which differed significantly with symptoms caused by pGR107 + N and pGR107 + NSS. HR-like symptoms were not observed with pEAQ-HT GW + NSM. It was observed that the NSMprotein was not intact since two bands were detected by Western blot, suggesting that this could be the cause of the absence of the HR symptom in the inoculated plants. Another explanation would be the necessity of the NSM protein to move cell-to-cell to induce HR. This movement could be provided by the PVX vector, however does not occur when the pEAQ-HT GW was used. To elucidate these possible hypotheses, these studies will still be continued.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, 2006. / Submitted by Érika Rayanne Carvalho (carvalho.erika@ymail.com) on 2009-10-03T22:44:16Z No. of bitstreams: 1 2006_Caroline Pedroso de Azevedo.pdf: 626033 bytes, checksum: 83b038ad55c08fccfb591027396f0fdb (MD5) / Approved for entry into archive by Tania Milca Carvalho Malheiros(tania@bce.unb.br) on 2009-10-05T16:05:02Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2006_Caroline Pedroso de Azevedo.pdf: 626033 bytes, checksum: 83b038ad55c08fccfb591027396f0fdb (MD5) / Made available in DSpace on 2009-10-05T16:05:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2006_Caroline Pedroso de Azevedo.pdf: 626033 bytes, checksum: 83b038ad55c08fccfb591027396f0fdb (MD5) Previous issue date: 2006 / A importância econômica de pimentões e pimentas do gênero Capsicum (Solanaceae), vem crescendo no Brasil e em diversos países, com aumento do consumo in natura ou pelo processamento de molhos, temperos e conservas de pimentas. Apesar dos avanços tecnológicos no sistema de produção, as doenças, como a antracnose, causada por Colletotrichum spp ainda representam um sério entrave à produtividade do pimentão, tanto em campo quanto em casa-de-vegetação. Dado ao crescimento da importância da antracnose em solanáceas e aos poucos relatos sobre medidas alternativas de controle voltadas para esse patossistema, este trabalho objetivou identificar isolados de Colletotrichum de Solanaceae cultivadas (no capítulo 1), avaliar o efeito do estádio fisiológico na resistência genética de frutos de diferentes espécies de Capsicum à doença (capítulo 2) e, por fim, avaliar medidas alternativas de controle através de testes da interação de controle químico e coberturas, além de manejo da adubação nitrogenada (capítulo 3). A antracnose em Capsicum pode ser causada por várias espécies de fungos do gênero Colletotrichum mas, no Brasil, a maioria dos relatos identificam Colletotrichum gloeosporioides como o principal agente causal da doença, com raros registros das demais espécies. No capítulo 1, vinte e dois isolados de Colletotrichum sp. foram estudados quanto ao crescimento micelial, coloração de colônias e morfometria e morfologia de conídios, e agressividade a frutos e plântula de Capsicum e outras solanáceas. Todos os cinco isolados de pimenta foram classificados como C. gloeosporioides, assim como a maioria dos de pimentão e um isolado de jiló. Os demais isolados foram identificados como C. acutatum. C. acutatum foi a espécie predominante entre os isolados de jiló. Os isolados mais agressivos em frutos de jiló foram aqueles originalmente isolados de frutos desta mesma espécie. Em geral, estes isolados foram também patogênicos ao pimentão. Os isolados que causaram maiores lesões em pimentão foram os isolados de pimenta e pimentão, e estes geralmente não foram capazes de causar lesões em fruto s de jiló.Os isolados mais agressivos aos frutos de jiló são da espécie C. acutatum, enquanto que os isolados mais agressivos ao pimentão são da espécie de C. gloeosporioides. A grande maioria dos isolados não foi capaz de causar sintomas em plântulas. Os resultados dos testes em plântulas foram insuficientes para diferenciar a agressividade ou a especificidade dos isolados. No capítulo 2, avaliou-se a reação de frutos verdes e maduros à inoculação com diferentes espécies de Colletotrichum em 11 genótipos de Capsicum (frutos pertencentes às espécies Capsicum annuum, C. baccatum e C. chinense). Frutos verdes de C.annuum se mostraram consistentemente mais suscetíveis que frutos maduros contra todos os isolados testados. A mesma resposta foi observada em C. baccatum e C. chinense quando inoculados com isolados de C. gloeosporioides. Entretanto, para inoculações com C. acutatum, as maiores lesões ocorreram em frutos maduros. Todas as três espécies de Capsicum testadas apresentaram diversidade quanto a suscetibilidade à Colletotrichum spp., variando de materiais extremamente suscetíveis até com bom nível de resistência, mostrando que o germoplasma desse gênero tem fontes de resistência promissoras para o melhoramento para resistência à antracnose. Os efeitos do controle químico, coberturas e adubação nitrogenada no progresso de antracnose do pimentão foram estudados no capítulo 3, em duas séries de experimentos instalados em condições de campo. Os experimentos foram realizados com o híbrido “Maximos F1” no inverno (março a julho)e no verão (setembro a dezembro). Os tratamentos de controle químico foram Fosfato bipotássico (K2HPO4) e Clorotalonil e os tratamentos de cobertura do solo foram cobertura plástica e orgânica (palhada de Andropogon sp.), totalizando quatro tratamentos, em blocos ao acaso com quatro repetições. Foram testados os níveis 0 Kg/ha, 50 Kg/ha , 150 Kg/ha e 450 Kg/ha de N, aplicados na forma de uréia (45-46 % N), em blocos ao acaso com quatro repetições. O trabalho demonstrou que a severidade de antracnose de pimentão é influenciada pela época de plantio, cobertura do solo e pelos químicos adotados. A severidade da antracnose foi muito maior no plantio de verão que no de inverno, nas parcelas pulverizadas com K2HPO4 do que nas com Clorotalonil e com cobertura plástica do que com cobertura orgânica. No plantio de inverno, o efeito da cobertura orgânica foi melhor evidenciado sob K2HPO4, com menores taxas de progresso da doença em comparação com a cobertura plástica, enquanto as taxas de progresso foram uniformemente baixas com uso de Clorotalonil, independentemente do tipo de cobertura. Já no plantio de verão, o efeito da cobertura orgânica foi melhor evidenciado sob Clorotalonil, com menores taxas de progresso com cobertura orgânica, enquanto nas parcelas pulverizadas com K2HPO4 as taxas de progresso foram uniformemente altas, independentemente da cobertura usada. No plantio de verão, nenhum tratamento resultou em controle satisfatório da doença. A maior dosagem de nitrogênio (450 Kg/ha), resultou em maiores severidades de antracnose, tanto no inverno quanto no verão. As demais dosagens(0 a 150 Kg/ha) mostraram valores muito próximos de severidade. _____________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Although pepper and sweet-pepper anthracnose may be caused by several Colletotrichum species, most domestic (Brazilian) reports identify Colletotrichum gloeosporioide the main causal agent, with rare records of other species. Twenty-two Colletotrichum isolates were studied as to their mycelial growth, colony coloration and conidial morphology and morphometrics, as well as to their aggressiveness to Capsicum fruits and plantlets. All five pepper isolates belonged to the C. gloeosporioides taxon, as well as the majority of sweet-pepper isolates and one S. gilo isolate. Most of the remaining isolates were identified as C. acutatum. C. acutatum was the predominant species among S. gilo isolates. The most aggressive isolates on S. gilo fruits were the ones that were originally isolated from this same species, and they were generally pathogenic to sweetpepper as well. In agreement, most aggressive isolates to sweet-pepper were obtained from pepper and sweet-pepper, but these were not capable of inducing symptoms on S. gilo fruits. The most aggressive isolates to S. gilo fruits belong to C. acutatum, while most aggressive isolates to sweet-pepper belong to C. gloeosporioides. Almost none of the isolates was able to induce symptoms on plantlets. The results from plantlet inoculation were insufficient to differentiate among isolates according to their host specificity or aggressiveness. This work studied the reaction of green and mature fruits to inoculation with different Colletotrichum spp. isolates onto 11 Capsicum genotypes (fruits of the species Capsicum annuum, C. baccatum e C. chinense). Green fruits of C. annuum were consistently more susceptible than mature fruit, irrespective of the isolate tested. When inoculated with the C. gloeosporioides isolates, C. baccatum and C. chinense fruits responded the same way. However, when these Capsicum species were inoculated with the C. acutatum isolate, larger lesions were verified in mature fruit. All three Capsicum species presented genetic variability as to susceptibility to Colletotrichum spp., from extremely susceptible to resistant, demo nstrating that the genus includes promising sources for breeding for anthracnose resistance. The effects of chemical control, soil mulch and nitrogen fertilization on the progress of sweet-pepper anthracnose were studied in two series of field experiments. Experiments were conducted in the winter (March to July) and summer (September to December) seasons, with sweet-pepper hibrid “Maximos F1”. Chemical treatments were Potassium phosphate dibasic (K2HPO4) and Chlorotalonil, and soil mulch treatments were plastic mulch and organic (Andropogon sp.) mulch, in a total of four treatment-combinations, in a randomized complete block design (RCBD), replicated four times. In separate experiments, the effect of four levels of nitrogen fertilization (0 Kg/ha, 50 Kg/ha , 150 Kg/ha and 450 Kg/ha de N) were tested in the winter and summer seasons. Nitrogen was applied in the form of urea (45-46 % N) and the experiments followed a RCBD, with four replicates. Results showed that severity of sweet-pepper anthracnose is affected by planting season, soil mulch and chemical control. Disease severity was much larger in the summer than in the winter season, larger with K2HPO4 than Chlorotalonil, and also larger with plastic mulch than organic mulch. In the winter season, the effect of the organic mulch was better noted under K2HPO4, while disease progress rates were uniformly low with Chlorotalonil, irrespective of mulch type. On the other hand, on the summer season, the effect of organic mulch was better noted under Chlorotalonil, while disease progress rates were uniformly high with K2HPO4, irrespective of soil cover type. In the summer, however, no treatmentcombination gave sufficient disease control. The highest nitrogen dose (450 Kg/ha) resulted in significantly larger disease severities in both seasons, while a differ among the remaining doses from 0 to 150 Kg/ha.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, 2006. / Submitted by wesley oliveira leite (leite.wesley@yahoo.com.br) on 2009-10-28T20:24:04Z No. of bitstreams: 1 Ana Cristina Oliveira Teixeira teste_final.pdf: 1029647 bytes, checksum: 69eb1c97ca79909a9fedec50bdad230f (MD5) / Approved for entry into archive by Gomes Neide(nagomes2005@gmail.com) on 2010-10-06T15:09:03Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Ana Cristina Oliveira Teixeira teste_final.pdf: 1029647 bytes, checksum: 69eb1c97ca79909a9fedec50bdad230f (MD5) / Made available in DSpace on 2010-10-06T15:09:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ana Cristina Oliveira Teixeira teste_final.pdf: 1029647 bytes, checksum: 69eb1c97ca79909a9fedec50bdad230f (MD5) Previous issue date: 2006 / A seca dos ponteiros da goiabeira (Psidium guajava L.) causada por Erwinia psidii (Rodrigues Neto et al., 1987) tem sua ocorrência mundial limitada ao Brasil, tendo sido detectada pela primeira vez no estado de São Paulo em 1982. Atualmente, essa bacteriose encontra-se também no Distrito Federal (DF), em Minas Gerais, Espírito Santo e Paraná. No DF, é considerada uma das doenças mais importantes da goiabeira pois, além de provocar grandes perdas na produção, é também uma doença de difícil controle. Considerando-se a escassez de estudos sobre essa bacteriose e o pouco conhecimento que se tem sobre a diversidade genética das populações de E. psidii nos pomares locais, além da suposição de que essa doença tenha sido introduzida através de mudas contaminadas assintomáticas provenientes de São Paulo, os objetivos desse trabalho foram (1) caracterizar por meio de testes bioquímicos, nutricionais e de patogenicidade, isolados bacterianos coletados em diferentes pomares na região de Brazlândia –DF; (2) caracterizar a diversidade genética entre os isolados de Brazlândia-DF obtidos de diferentes pomares e em diferentes épocas, e compará-los aos isolados de outros estados através de rep-PCR (REP, ERIC e BOX-PCR); (3) testar a especificidade de um antissoro policlonal para E. psidii, e desenvolver uma metodologia que permita sua detecção em mudas assintomáticas através do método de imunodifusão radial dupla. Todos os isoldados do DF, com exceção de UnB11 e UnB13, apresentaram-se como bactérias Gram-negativas, anaeróbicas facultativas, que produzem ácido a partir de manitol, mas não a partir de rafinose, não reduzem nitrato a nitrito, produzem enzima catalase e não apresentaram v reação de hipersensibilidade em folhas de fumo. Todos os resultados foram condizentes com o perfil descrito por Rodrigues Neto, et al. (1987) para a espécie. O teste de patogenicidade permitiu distinguir os isolados em três grupos de agressividade de acordo com o tempo de aparecimento dos sintomas. As comparações entre os perfis de amplificação obtidos por rep-PCR, a partir do DNA purificado de 43 isolados de E. psidii, revelaram alta similaridade entre os isolados do DF coletados em diferentes pomares e em diferentes épocas, e também alta similaridade entre os isolados do DF, e aqueles provenientes de outros estados, incluindo o isolado tipo IBSBF 435. A partir do enriquecimento bacteriano em extrato de folhas de goiabeira esmagadas, e a utilização da técnica de imunodifusão radial dupla com antissoro específico para E. psidii, foi possível detectar o patógeno após 36 horas de incubação das folhas contaminadas artificialmente. Testes realizados em casa de vegetação com mudas sadias inoculadas por aspersão com suspensão bacteriana de E. psidii, permitiram verificar o aparecimento de sintomas em plantas intactas, ou seja sem ferimentos prévios, indicando que a bactéria pode também penetrar por aberturas naturais. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The bacterial blight of guava (Psidium guajava L.) caused by Erwinia psidii is a serious disease affecting orchards in Brazil and it has not been reported in any other country. In Brazil, it was first detected in São Paulo state in 1982. Currently it is present in the Federal District (DF) and three other states (Minas Gerais, Espírito Santo and Paraná). In those production areas it has been considered a major disease, causing significant losses. Control measures are difficult to apply since the pathogen can be easily disseminated. Very little is known about the genetic diversity of E. psidii in Brazil and the objective of this study was to characterize 43 isolates, most of them collected in different orchards in the Federal District. All isolates showed biochemical and nutritional features according to those described for E. psidii. Pathogenicity tests were performed using detached branches and the symptoms were visible from one to nine days after inoculation, depending on the isolate aggressiveness. Genetic diversity among the isolates was evaluated by rep-PCR (REP, ERIC and BOXPCR) which showed high similarity among the Federal District isolates, collected in different orchards and periods. High similarity was also observed between this group of isolates and those from the other three states, including the type strain IBSBF 435. A polyclonal antiserum against the type strain was produced in rabbits and showed high specificity. It was used to optimize a serology-based methodology, using double immunodifusion for early detection of E. psidii in plantlets. Enrichment of the bacterial population directly on guava leaves extracts allowed the detection of the pathogen 36 hours after incubation, even from an initial artificial contamination of 103 ufc/ml.