Os objetivos deste trabalho foram obter um processo de pasteurização da polpa de juçara embalada em bolsas plásticas (100 mL) de alta, a fim de minimizar a degradação das antocianinas, mantendo as propriedades nutricionais e organolépticas do produto, com viabilidade técnica e econômica para as comunidades tradicionais e agricultores familiares. Para tanto se avaliou a degradação da antocianina e a atividade enzimática presente na polpa de juçara, submetida à acidificação e pasteurização depois de embalada; armazenada por 60 dias; e monitorou-se a qualidade da polpa mediante análises físicas, químicas e sensoriais. A polpa foi acidificada com ácido cítrico a pH 4,0. A outra parte não sofreu processo de acidificação. Em seguida, a polpa foi embalada em sacos de polipropileno diferenciado. Por fim, as polpas, acidificadas com ácido cítrico a pH abaixo de 4,0 e não acidificada, foram submetidas aos seguintes tratamentos: armazenada sob refrigeração a 6 °C; armazenada sob congelamento a -17 °C; pasteurizada a 80 °C por 5 minutos e armazenada sob refrigeração a 6 °C; pasteurizada a 80 °C por 5 minutos e armazenada sob congelamento a -17 °C; Num segundo momento, após a realização das análises do primeiro processo, a polpa embalada foi pasteurizada em tacho com aquecimento a gás, com água à temperatura de fervura - 97°C. A polpa foi mantida a esta temperatura por um (1) minuto. A acidificação e armazenamento foram realizados da mesma forma que no primeiro processo. A polpa de juçara manteve-se estável por 45 dias de armazenamento refrigerado e congelado para todos os tratamentos. Sensorialmente, não houve diferença significativa entre os tratamentos. Considerando-se a estabilidade da polpa, sua aceitação sensorial e o uso da refrigeração como alternativa ao congelamento, a pasteurização em tacho a 97°C se torna uma possibilidade às comunidades extrativistas. / The objectives of this study were to obtain a pasteurization process the juçara pulp packed in plastic bags (100 mL) high barrier in order to minimize anthocyanin\'s degradation, maintaining the organoleptic and nutritional properties of the product, technical and economic feasibility for the traditional communities and family farmers. For that we evaluated the anthocyanin\'s degradation and the enzymatic activity present in the juçara pulp, subjected to acidification, after pasteurization packed; stored for 60 days; and monitored to pulp quality by physical, chemical and sensory analysis. The pulp was acidified with citric acid to pH 4.0. The other part has not undergone the process of acidification. Then the pulp was packed in bags of different polypropylene. Finally, pulps, acidified with citric acid at pH below 4.0 and not acidified were treated as follows: stored under refrigeration at 6 ° C, stored in a freezer at -17 ° C, pasteurized at 80 ° C for 5 minutes and stored in a refrigerator at 6 ° C, pasteurized at 80 ° C for 5 minutes and stored under freezing at -17 ° C. Subsequently, after the analyzes of the first process, the pulp was pasteurized in packaged pot with heating the gas with water at boiling temperature - 97 ° C. The pulp was held at this temperature for one (1) minute. Acidification and storage were carried out in the same way as the first process.The juçara pulp remained stable for 45 days of cold and frozen storage for all treatments. No significant difference was found between treatments by sensorial analysis. Considering the stability of the pulp, its sensory acceptance and use of alternative freezing cooling, the packet pasteurization becomes a possibility by extractive communities.

Glucosyltransferases (GTs) are enzymes that enable transfer of glucose from an activated donor (UDP-glucose) to the acceptor substrates. A flavonol specific glucosyltransferase cloned from Citrus paradisi has strict substrate and regiospecificity (Cp3OGT). The amino acid sequence of Cp3OGT was aligned with a purported anthocyanin GT from Clitorea ternatea and a GT from Vitis vinifera that can glucosylate both flavonols and anthocyanidins. Using homology modeling to identify candidate regions followed by site directed mutagenesis, three double mutations of Cp3OGT were made. Biochemical analysis of the three mutant proteins was performed. S20G+T21S protein retained activity similar to the wildtype (WT- Kmapp-80 µM; Vmax = 16.5 pkat/µg, Mutant- Kmapp-83 µM; Vmax -11 pkat/µg) but the mutant was more thermostable compared to the WT and this mutation broadened its substrate acceptance to include the flavanone, naringenin. S290C+S319A mutant protein retained 40% activity relative to wildtype, had an optimum pH shift, but had no change in substrate specificity (Kmapp-18 µM; Vmax-0.5 pkat/µg). H154Y+Q87I protein was inactive with every class of flavonoid tested. Product identification revealed that the S20G+T21S mutant protein widened the substrate and regio-specificity of CP3OGT. Docking analysis revealed that H154 and Q87 could be involved in orienting the ligand molecules within the acceptor binding site. H363, S20, and S150 were also found to make close contact with the 7-OH, 4-OH and 3’-OH groups, respectively.

No description available.

Citrus paradisi 3-O-glucosyltransferase (Cp3GT, Genbank Protein ID: ACS15351) and Citrus sinensis 3-O-glucosyltransferase (Cs3GT, Genbank Protein ID: AAS00612.2) share 95% amino acid sequence identity. Cp3GT was previously established as a flavonol-specific 3-O-glucosyltransferase by direct enzymatic analysis. Cs3GT is annotated as a flavonoid-3-O-glucosyltransferase and predicted to use anthocyanidins as substrates based on gene expression analysis correlated with the accumulation of anthocyanins in C. sinensis cv. Tarocco, a blood orange variety. Mutant enzymes in which amino acids found in Cs3GT were substituted for position equivalent residues in Cp3GT were generated, heterologously expressed in yeast, and characterized for substrate specificity. Structure–function relationships were investigated for wild type and mutant glucosyltransferases by homology modelling using a crystallized Vitis viniferaanthocyanidin/flavonol 3-O-GT (PDB: 2C9Z) as template and subsequent substrate docking. All enzymes showed similar patterns for optimal temperature, pH, and UDP/metal ion inhibition with differences observed in kinetic parameters. Although changes in the activity of the mutant proteins as compared to wild type were observed, cyanidin was never efficiently accepted as a substrate.

Positive-ion electrospray ionisation Fourier transform ion cyclotron resonance and ion trap mass spectrometry have been used to investigate the reactions of the flavonoids 3-hydroxyflavone, 5-hydroxyflavone, 5-methoxyflavoe, quercetin, quercitrin and rutin with monovalent Li+, Na+, K+ and Cs+, divalent Cu2+, Zn2+ and Pb2+ and trivalent La3+ and Eu3+ metal cations. The effect of capillary-skimmer potential difference and the ion residence time in the hexapole ion trap of the Fourier transform ion cyclotron resonance mass spectrometer are systematically investigated for the flavonoid-alkali and divalent metal ion experiment. It is observed that these variables impact significantly on the type of ions observed in the ESI experiments and hence the mass spectra. The binding selectivity of alkali metal ions towards 3-hydroxyflavone, 5-hydroxyflavone and 5-methoxyflavone are determined using the results from FTICR mass spectrometry experiments. The selectivity order follows the order Li+>Na+>K+ for individual flavonoids. Collision-induced dissociation experiments are carried out by Fourier transform ion cyclotron resonance and ion trap mass spectrometry to compare the fragmentation behaviour of metal-flavonoid complexes. Low energy collision-induced dissociation experiments of the [2L+M]+ for 3-hydroxyflavone, 5-hydroxyflavone and 5-methoxyflavone alkali metal complexes show the loss of ligand only. When the energy is increased only the lithiated dimer [2L+Li]+ for 5-methoxyflavone shows the loss of methyl radical along with the ligand. For quercitrin the predominant dissociation pathways are the loss of rhamnose for Li+, Na+ and K+ complexes although aglycone loss is also observed for the K+ complex. The favourable dissociation pathways for rutin are the loss of disaccharide, aglycone and rhamnose for the Na+ complex and the loss of disaccharide for the K+ complex. Collision-induced dissociation data are also used to determine the threshold dissociation energies for displacement of one flavonoid ligand from alkali metal flavonoid complexes. The threshold dissociation energies for loss of one ligand from [2L+M]+ of 5-methoxyflavone and quercitrin follow the order Li+ > Na+ > K+, rutin follows the order Na+ > K+ > Li+ , and 3-hydroxyflavone and 5-hydroxyflavone follow the order Li+ > Na+. For the same metal cation experiment, 5-methoxyflavone system has the highest dissociation energy compared to the 3-hydroxyflavone and 5-hydroxyflavone experiment. Preliminary DFT calculations show that the calculated dissociation energies follow the same trend as the experimental dissociation energies for the simple flavonoid alkali metal cation experiments. For 5-methoxyflavone-divalent metal cation (Zn2+, Cu2+ and Pb2+) complexes loss of methyl radical is the common process. CO loss is also observed for the Zn2+ complex whereas CHO and H2O losses are observed for Cu2+. For 3-hydroxyflavone and 5-hydroxyflavone divalent metal cation experiments loss of ligand is the dominant process. Zn2+ and Cu2+ complexes also show CO loss. La3+ and Er3+ with the same flavonoids show the ligand as the dominant product. For quercetin-divalent metal cation experiment, ligand loss is the dominant process. For quercitrin and rutin various dissociation products are observed where the dissociation occurs via the loss of the rhamnose and/or the disaccharide moieties. Similar dissociation patterns are also observed for La3+ and Er3+ complexes for quercitrin and rutin.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:40Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-02-12Bitstream added on 2014-06-13T20:55:00Z : No. of bitstreams: 1 borges_ls_me_botfca.pdf: 911036 bytes, checksum: 28a62dfd0c7afee067eb1dd1f0f9ca48 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A produção orgânica é um sistema que permite alcançar bons níveis de produtividade, evitando ao mesmo tempo os riscos de contaminação química do agricultor, dos consumidores e do meio ambiente. Pelo fato da planta de jambu ser bastante utilizada como medicamento alternativo e por indústrias de cosméticos, vem aumentando o interesse devido às suas características físico-químicas. No entanto, as pesquisas sobre essa cultura ainda são muito incipientes. Existem poucos trabalhos e uma insuficiente diversidade de análises físico-químicas que possam caracterizar e diferenciar os tipos de cultivo em relação ao jambu. Assim, o objetivo do presente estudo foi analisar o óleo essencial e os compostos antioxidantes em diferentes partes de jambu (folha e inflorescência) cultivado sob adubação orgânica e mineral, além de caracterizar os minerais no solo e nas plantas, nos diferentes tipos de cultivo. O experimento foi conduzido na Fazenda Experimental São Manuel (São Manuel-SP), pertencente à Faculdade de Ciências Agronômicas - UNESP, campus de Botucatu) e na mesma época. O delineamento estatístico foi em blocos casualizados em esquema fatorial (2 x 6), duas fontes de adubação (orgânica e mineral) e seis doses de esterco de curral e uréia, com quatro repetições para todas as análises efetuadas, exceto para as características de potencial antioxidante e espilantol, que foram utilizadas três repetições. Os experimentos realizados apresentaram como tratamentos seis doses de adubação mineral (0, 30, 60, 90, 120, 150 g m-2 de uréia), aplicadas parceladas em duas vezes e seis doses de adubação orgânica (0, 2, 4, 6, 8 e 10 kg m-de esterco de curral), aplicadas no plantio. As características avaliadas foram teores de nutrientes na parte aérea, altura de plantas, massa fresca e seca, composição química do óleo essencial, teor de acido ascórbico; potencial... / The organic production it is a system that will achieve good levels of productivity, while avoiding the risk of chemical contamination of farmers, consumers and the environment. Because the plant jambu be widely used as alternative medicine and cosmetic industries, has been increasing interest due to their physical and chemical characteristics. However, the researches on this crop are still very incipient. There is little work and an insufficient variety of physical and chemical analysis that can characterize and differentiate the types of cultivation on the jambu.The purpose of this study was to analyze the essential oil and the antioxidant compounds in different parts of jambu (leaf and inflorescence) grown under organic and mineral fertilizer, and characterize the minerals in soil and plants in different types of cultivation. The experiment was conducted led in (Experimental Farm São Manuel (São Manuel-SP), belonging to the Faculty of Agricultural Sciences - UNESP, campus of Botucatu) and at the same time. The statistical design was factorial (2 x 6), two sources of fertilizer (organic and mineral) and six doses of the kraal manure and urea, with four replications for all analysis performed, except for the characteristics of potential antioxidant and spilantol, which were used three repetitions. The experiments presented treatments as six doses of conventional fertilization (0, 30, 60, 90, 120, 150 g m-2, urea), applied in two split doses of fertilizer and six non-conventional (0, 2, 4, 6, 8 and 10 kg m-2 of the kraal manure), applied at planting. The characteristics were nutrient content in shoot, plant height, fresh and dry weight, chemical composition of essential oil, ascorbic acid content, antioxidant potential, and presence of pesticides. The results show that the compounds were present in this study were trans-caryophyllene, germacrene D, L-dodecene and espatulenol and... (Complete abstract click electronic access below)

Submitted by Luciana Sebin (lusebin@ufscar.br) on 2016-09-14T12:16:38Z No. of bitstreams: 1 DissFCP.pdf: 4494134 bytes, checksum: 579efc0cd432aa20fa0626c57daa20b5 (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2016-09-15T13:58:27Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DissFCP.pdf: 4494134 bytes, checksum: 579efc0cd432aa20fa0626c57daa20b5 (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2016-09-15T13:58:35Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DissFCP.pdf: 4494134 bytes, checksum: 579efc0cd432aa20fa0626c57daa20b5 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-15T13:58:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DissFCP.pdf: 4494134 bytes, checksum: 579efc0cd432aa20fa0626c57daa20b5 (MD5) Previous issue date: 2015-03-27 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / During its evolutionary process, plants have developed biosynthetic pathways by which they produce and accumulate a wide variety of secondary compounds that receive this name because they are not directly involved in the primary processes of plant growth and development. Many of these secondary compounds are responsible for chemical protection of plants against pathogens, herbivores, competing plants, ultraviolet radiation and other environmental stresses. The production of secondary metabolites can vary quantitatively and qualitatively between individuals of the same species, between plants of different species, between organs, between stages of plant development and are under influences of environmental factors. Studies of the biological effects of these compounds represent an important tool for the development of more specific and natural pesticides that are less harmful to the environment, as well as drugs and natural preservatives for food. Myrcia splendens (Sw.) DC. is a tree species found in the Brazilian cerrado and there are few published papers dealing with this species and its secondary metabolites to act as potential natural pesticides, antioxidant and antifungal. The methodology for the extraction of secondary metabolites can determine the composition of extracts and influence the activity of them. In this sense, in the first chapter of this work investigations were carried out on the phytotoxic potential of extracts of M. splendens young leaves from two different extraction methodologies. The 2C extract had the highest overall phytotoxic activity, showing promise in the search phytotoxic substances. In the second chapter, we investigate the phytotoxic potential of extracts and fractions of mature leaves of M. splendens from the two extraction methods carried out and was identified one of the secondary metabolites possibly associated with the phytotoxicity of the most active fractions. 2B fraction had the highest total inhibitory activity and so was fractionated, resulting in 14 fractions, which were also tested in wheat coleoptile. The FM8 and FM9 fractions, which had inhibitory activity and sufficient income, were subjected to HPLC for isolation of major compound. Identification by NMR spectra revealed that the major compound is miricitrin (myricetin-3-O-rhamnoside). In the last chapter, the extracts of mature leaves of M. splendens were tested for their antioxidant potential based on their ability to react with the free radical DPPH (2,2-diphenyl-1-picrylhidrazila) and antifungal potential using the plant pathogenic fungus Alternaria alternata as the target species. Most of the extracts showed a strong antioxidant activity, especially those iv! ! extracted with more polar solvents. On the other hand, only one of the extracts (2B) showed inhibitory activity on mycelial growth of the phytopathogenic fungus tested. / Ao longo do seu processo evolutivo, as plantas desenvolveram rotas biossintéticas pelas quais produzem e acumulam uma imensa variedade de compostos secundários, que recebem este nome por não estarem diretamente envolvidos nos processos primários de crescimento e desenvolvimento vegetal. Muitos desses compostos secundários são responsáveis pela defesa química das plantas contra patógenos, herbívoros, plantas competidoras, radiação ultravioleta e outros estresses ambientais. A produção de metabólitos secundários pode variar quantitativa e qualitativamente entre indivíduos de uma mesma espécie, entre plantas de espécies diferentes, entre órgãos, entre estágios do desenvolvimento vegetal e sobre influências de fatores ambientais. Os estudos realizados sobre os efeitos biológicos destes compostos representam uma importante ferramenta para o desenvolvimento de agroquímicos naturais mais específicos e menos prejudiciais ao ambiente, bem como de medicamentos e conservantes naturais para a indústria alimentícia. Myrcia splendens (Sw.) DC. é uma especie arbórea encontrada no cerrado brasileiro e existem poucos os trabalhos publicados que tratam de investigações do potencial desta espécie e de seus metabólitos secundários para atuarem como pesticidas naturais, antioxidantes e antifúngicos. A metodologia empregada para a extração de metabólitos secundários pode determinar a constituição e rendimento dos extratos e influenciar a atividade dos mesmos. Nesse sentido, no primeiro capítulo deste trabalho foram realizadas investigações sobre o potencial fitotóxico de extratos de folhas jovens de M. splendens oriundos de duas metodologias de extração diferentes. O extrato 2C teve a maior atividade fitotóxica geral, se mostrando promissor na busca de substâncias fitotóxicas. No segundo capítulo, foi investigado o potencial fitotóxico de extratos e frações de folhas maduras de M. splendens das duas metodologias de extração realizadas e foi identificado um dos metabólitos secundários possivelmente associado à fitotoxicidade das frações mais ativas. A fração 2B apresentou a maior atividade inibitória total e por isso foi fracionada, resultando em 14 frações, que também foram testadas em coleóptilos de trigo. As frações FM8 e FM9, que possuíam atividade inibitória e rendimento suficiente, foram submetidas a CLAE para isolamento do composto majoritário. A identificação foi feita por espectros de RMN e revelou que o composto majoritário é a miricitrina (miricetina-3-O-ramnosídeo). No último capítulo, os extratos de folhas maduras de M. splendens foram testadas quanto ao seu potencial antioxidante baseado habilidade de reagir com o radical livre DPPH (2,2-difenil-1-picrilhidrazila) e antifúngico usando como espécie-alvo o fungo fitopatogênico Alternaria ii! ! alternata. A maior parte dos extratos apresentaram atividade antioxidante muito forte, especialmente aqueles extraídos com solventes mais polares. Por outro lado, apenas um dos extratos (2B) apresentou atividade inibitória no crescimento micelial do fitopatógeno testado.

Made available in DSpace on 2015-05-14T13:00:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 2644910 bytes, checksum: 94bc3ca3dd5252435423f525d32a2ea9 (MD5) Previous issue date: 2009-04-01 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Asthma is a chronic inflammatory disease characterized by cell migration and bronchial hyperreactivity (HRB). One strategy to treat allergic diseases is the development of new drugs with good efficacy and few side effects. Flavonoids are plant compounds known for its antioxidant, antiallergic and anti-inflammatory activities. Based on this premise, the study aimed to select flavonoids by the immunopharmacological screening and to evaluate prophylactic and therapeutic treatments in the experimental asthma model. For this purpose the flavonoids tested were myricetin, isoramnetin and glycosylated kampherol known as 3-O-[β-D-glycopiranosil-(1→6)-α-L-rhamnopyranosyl]-7-O-α-L-rhamnopyranosyl-kamferol (GRRK). The experimental model was BALB/c mice sensitized and challenged with ovalbumin (OVA) and the treatments were before (prophylactic) or after (therapeutic) to establishment of the experimental asthma model. The three flavonoids inhibited the animal death during the anaphylactic chock reaction induced by OVA and the inflammatory cell migration to the lung; however only the GRRK was used in the following experiments because of its best yield in the purification process. Both prophylactic and therapeutic treatments with GRRK (30 mg/kg) decreased significantly the total number of inflammatory cells (P< 0.05), eosinophils cells (P< 0.05), IL-5 (P< 0.05) and IL-13 (P< 0.05) production from bronchoalveolar lavage (BAL), IgE OVA-specific title (P< 0.01) in the sera, the bronchial hyperreactivity (HRB) (P< 0.05) induced by methacholine and mucus production (P< 0.001) by the globbet cells from the lung as compared with non-treated GRRK animals. The results obtained in the different treatments with GRRK were statistically comparable with that observed in the OVA-sensitized group treated with dexametasone. Moreover, treatment with GRRK was able to reduce the number of CD4+ T cells (p <0.001), B cells (p <0.001), expression of major complex of compatibility II class (MHC II class) and CD40 molecules in the antigen presenting cells (CD11b+ CD11c+) from BAL. Although the GRRK induced a suppressive effect in the Th2 immune response it was not able to exacerbate the Th1 immune response by IFN- production. The production of this cytokine was not modified when compared with non treated animals. The GRRK treatment also was not able to modify the regulatory immune response because there was no significant change in the production of TGF- and the number of TCD4+Foxp3+, a marker of LT regulatory (TReg). These results demonstrated that GRRK treatment before (prophylactic) or after (therapeutic) the establishment of allergic asthma, restored the morpho-functional changes in the airways by Th2-dependent immunossupression, although independent of Th1 and TReg. / A asma é uma doença inflamatória crônica caracterizada por migração celular para os pulmões e hiperreatividade brônquica (HRB). Uma estratégia para o tratamento de doenças alérgicas é o desenvolvimento de novos medicamentos com boa eficácia e poucos efeitos colaterais. Flavonóides são compostos derivados de plantas conhecidos por suas atividades antioxidante, antialérgica e antiinflamatória. Partindo desta premissa, o trabalho teve como objetivo selecionar flavonóides a partir de análises imunofarmacológicas e avaliar os tratamentos profiláticos ou terapêuticos no modelo de asma alérgica experimental. Para tal, os flavonóides testados foram: myricetina, isoramnetina e kanferol glicosilado conhecido por 3-O-[β-D-glycopiranosil-(1→6)-α-L-ramnopiranosil]-7-O-α-L-ramnopiranosil-kanferol (GRRK). O modelo experimental foi realizado em camundongos BALB/c sensibilizados e desafiados com ovalbumina (OVA) e os tratamentos foram antes (profilático) ou após (terapêutico) estabelecer o modelo de asma alérgica experimental. Os três flavonóides inibiram a morte dos animais durante o choque anafilático induzido por OVA e a migração de células da inflamação para os pulmões, entretanto, apenas o GRRK foi usado nos demais experimentos, devido ao seu melhor rendimento no processo de purificação. Os tratamentos profilático e terapêutico com GRRK (30 mg/kg) diminuíram, de forma significativa, o número total de células inflamatórias (P< 0,05), de eosinófilos (P< 0,05) a produção de IL-5 (P< 0,05) e IL-13 (P< 0,05) no lavado broncoalveolar (LBA), o título de IgE-OVA-específica (P< 0,01) no soro, a hiperreatividade brônquica (HRB) (P< 0,05) induzida com metacolina e a produção de muco (P< 0,001) pelas células caliciformes de pulmão quando comparados com os animais não tratados com GRRK e sensibilizado com OVA. Os resultados obtidos nos diferentes tratamentos com GRRK foram comparáveis estatisticamente aos efeitos observados no grupo de animais tratados com a droga padrão dexametasona. Além disso, o tratamento com GRRK foi capaz de diminuir: o número de linfócitos T CD4+ (P< 0,001) e de linfócitos B (P< 0,001), a expressão de moléculas de classe II do complexo principal de histocompatibilidade (MHC II) e da molécula CD40 em células apresentadoras de antígeno (CD11b+CD11c+) do LBA. Embora o tratamento com GRRK tenha induzido um efeito supressor na resposta imune de perfil Th2, não foi capaz de exacerbar a resposta imune Th1 com a produção de IFN- A produção desta citocina se manteve inalterada quando comparada ao grupo de animais não tratados. O tratamento também não foi capaz de alterar a reposta imune reguladora, pois não houve mudança significativa na produção de TGF- e no número de células TCD4+Foxp3+, marcador de LT regulador (LTReg). Esses resultados demonstram que o tratamento com GRRK antes (profilático) ou depois (terapêutico) de estabelecer a asma alérgica experimental, restabeleceu as alterações morfofuncionais das vias aéreas, por um mecanismo modulador das células Th2, embora independente de Th1 e de Treg

Mais de quarenta proteínas humanas estão envolvidas em doenças amilóides, sendo a transtirretina (TTR) uma dessas. A dissociação do tetrâmero da TTR é a etapa limitante para sua via de agregação. Esta etapa pode ser dificultada pela ligação de pequenas moléculas a dois sítios na interface tetramérica da TTR e facilitada em variantes mutantes. A mutante V30M é a variante amiloidogênica mais frequente da TTR e, apesar da mutação não se encontrar no sítio de ligação de pequenas moléculas, pode limitar a interação de inibidores com esta proteína. Desta forma, a busca de inibidores da agregação da TTR tipo selvagem (TTRwt) e mutantes amiloidogênicas vem sendo realizada. Na presente tese, flavonóides, freqüentemente encontrados em alimentos, e agonistas sintéticos do receptor do hormônio tireoidiano, seletivos para a isoforma beta deste receptor, foram selecionados para testes de inibição da agregação da TTRwt e mutante V30M. A interação dos melhores inibidores com a TTR foi também caracterizada em detalhes. Para isto, um ensaio de agregação in vitro da TTR foi utilizado para triagem dos compostos; e a assinatura termodinâmica da interação dos melhores inibidores com a TTR, bem como as estruturas cristalográficas TTR:inibidores foram determinadas por calorimetria de titulação isotérmica e cristalografia de proteínas, respectivamente. Os compostos sintéticos, GC-1 e GC-24, mostraram-se inibidores eficazes, porém com potência moderada. Já as flavonas luteolina (LUT), apigenina (API) e crisina (CHR), a flavanona naringenina (NAR), o flavonol kaenferol (KAE) e a isoflavona genisteína (GEN) apresentaram boa potência e eficácia de inibição da agregação da TTR in vitro. Os inibidores NAR, CHR, GEN e KAE não mostraram mesma capacidade de inibição da mutante V30M e apresentaram cooperatividade negativa para ligação aos dois sítios da TTR. A posição dos inibidores no sítio, bem como a variabilidade química/ estrutural dos compostos testados parecem influenciar os mecanismos de interação com os dois sítios da TTR e a ligação à mutante V30M. Modificações no sítio da mutante V30M foram identificadas e são apontadas como a principal causa para a seletividade de alguns inibidores à forma selvagem da TTR. De modo geral, a investigação detalhada da interação de pequenas moléculas com a TTR permitiu propor as bases moleculares da cooperatividade entre os sítios desta proteína e das diferenças de interação dos inibidores com a forma selvagem e mutante V30M da TTR. / More than forty human proteins are involved in human amyloid diseases, being transthyretin (TTR) one of these. TTR tetramer dissociation is a limiting step for its aggregation pathway. This step can be delayed by small molecules binding to two binding sites in the TTR tetramer interface and enhanced in TTR amyloidogenic variants. The V30M mutant is the most frequent TTR amyloidogenic variant and, eventhough the mutation is not situated in the TTR binding site, this mutation can limit small molecule interaction with the V30M mutant. Therefore, the search for wild type (TTRwt) and amyloidogenic TTR mutant inhibitors is under investigation. In the present thesis, flavonoids, frequently found in food, and synthetic thyroid hormone receptor beta-selective agonists were selected for evaluation of their inhibition ability on TTRwt and V30M mutant aggregation. The interaction of the best inhibitors with TTR was also characterized in details. For this, an in vitro TTR aggregation assay was used for inhibitor screening, and the thermodynamic signature of interaction, as well the TTR:inhibitors crystal complexes were determined by isothermal titration calorimetry and protein crystallography, respectively. The synthetic compounds, GC-1 and GC-24, displayed high efficacy, however moderated inhibition potency. The flavones luteolin (LUT), apigenin (API), chrisin (CHR), the flavanone naringenin (NAR), the flavonol kaenferol (KAE) and the isoflavone genistein (GEN) showed good potency and efficacy of TTR aggregation inhibition in vitro. The inhibitors, CHR, NAR, GEN and KAE, had lower inhibition capacity to the V30M mutant, and displayed negative cooperativity of binding to the two TTR binding sites. The inhibitor position in the binding site, as well as the chemical/ structural variability of the tested compounds seems to influence the interaction mechanism with the two TTR binding sites and the binding to the V30M mutant. Modifications on the V30M mutant binding sites were identified and pointed as the main reasons for the selectivity of some inhibitors to the wild type TTR. Overall, the detailed inspection of small molecule interaction with TTR suggests the molecular basis of the cooperativity between the two TTR binding sites and also of the differences between the inhibitors interaction with the wild type and with the V30M mutant TTR.

A quercetina é um flavonoide com alta atividade antioxidante reconhecida. Devido a este fato, a indústria alimentícia tem buscado alternativas para a aplicação deste bioativo como antioxidante em matrizes alimentícias. No entanto, incorporar a quercetina em formulações alimentícias pode ser desafiador, pois sua molécula tem relativo grau de hidrofobicidade. Os métodos de encapsulação em nanoemulsões podem tornar viável a proteção do flavonoide, bem como permitir sua dispersibilidade em meios aquosos . O objetivo do presente trabalho foi produzir nanoemulsões (fase oleosa: óleo de girassol) encapsulando quercetina pelo método do ponto de inversão da emulsão (EIP, emulsion inversion point), determinando parâmetros de operação que viabilizem um futuro escalonamento do processo, e a realização de um estudo de caso sobre a incorporação das nanodispersões em patê de frango. Os parâmetros de produção que foram avaliados foram : tipo e concentração de tensoativo (razão SOR, razão tensoativo:óleo), concentração de óleo, concentração de cosolvente e velocidade de agitação. Foram produzidas nanoemulsões utilizando dois tensoativos diferentes, Tween 80 e Brij 30. As porcentagens de quercetina encapsulada foram 0,15 e 0,30% (m/m). Dentre estas, a concentração de 0,30% foi a mais viável para a aplicação no patê de frango, por apresentar melhor distribuição de tamanho de gotícula (diâmetro hidrodinâmico), não apresentar variação significativa de oxidação lipídica e maior conservação da quercetina encapsulada por um período de 90 dias. Os valores de tensão interfacial obtidos mostram que a quercetina provoca abaixamento da tensão interfacial do sistema, o que pode indicar que a quercetina forma um complexo com os tensoativos utilizados, fato que influencia decisivamente na sua localização nas nanogotas. Das formulações testadas para patê de frango contendo quercetina, apenas a formulação usando quercetina livre não apresentou boa avaliação nos itens cor e sabor. Tal resultado justifica a necessidade da incorporação da quercetina em nanoemulsões para não causar alterações sensoriais no produto. / Quercetin is a flavonoid with recognized high antioxidant activity Due to this fact, the food industry has been trying to use it as an alternative as a preservative in food matrices. However, incorporating quercetin into food formulations may be challenging due to its relative degree of hydrophobicity. Encapsulation methods in nanoemulsions may render the protection of the flavonoid viable, as well as enable its dispersibility in aqueous media. The objective of the present study was to produce nanoemulsions (oil phase: sunflower oil) encapsulating quercetin by the emulsion inversion point method (EIP), determining operating parameters that enable a future process scale-up. A case study on the incorporation of nanodispersions into chicken patê was also carried out. The production parameters evaluated were: type and concentration of surfactant (SOR ratio, surfactant:oil ratio), soybean oil concentration, cosolvent concentration and stirring speed. Nanoemulsions were produced using two different surfactants, Tween 80 and Brij 30. The percentages of encapsulated quercetin were 0.15 and 0.30% (m / m). Among these, the concentration of 0.30% was the most feasible for application in chicken pâté, since it presented better droplet size distribution (hydrodynamic diameter), did not present significant variation of lipid oxidation and higher capacity of preserving encapsulated quercetina for a period of 90 days. The interfacial tension values obtained show that quercetin lowered the interfacial tension of the system, which may indicate that quercetin forms a complex with the surfactants used, a fact that decisively influences its location in the nanodroplets. Among the formulations tested in chicken pâté containing quercetin, only the formulation using free quercetin did not show good acceptance evaluation on the color and taste itens. Such an evaluation was important as it justifies the need for the incorporation of quercetin into nanoemulsions in order to not cause significant sensorial changes in the product.