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Efetividade da fluorescência a laser no diagnóstico de lesões de cárie. Estudos in vitro e in vivo

Diniz, Michele Baffi [UNESP] January 2006 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:48Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006Bitstream added on 2014-06-13T18:31:58Z : No. of bitstreams: 1 diniz_mb_me_arafo.pdf: 3188878 bytes, checksum: afb48495eaac71c8663023ac0c8eba58 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O objetivo do presente estudo foi avaliar a efetividade da fluorescência a laser (KaVo DIAGNOdent) para a determinação da severidade de lesões de cárie oclusal em dentes permanentes in vivo e para determinação da remineralização in vitro de lesões de cárie induzidas artificialmente em esmalte de dentes bovinos. No estudo in vitro, 78 blocos de esmalte com lesões de cárie artificial (mancha branca) com valores de dureza Vickers de 38,48 l 0,85 foram submetidos ao tratamento com dentifrício fluoretado durante a ciclagem de pH, para promover a remineralização. Antes do início do experimento, após a desmineralização e após a remineralização foram realizadas análises com a fluorescência a laser e análises de microdureza superficial do esmalte. Foram encontradas diferenças significantes nas medidas de microdureza superficial (p < 0,0001) nas 3 etapas. Os valores encontrados nas leituras com a fluorescência a laser foram extremamente baixos (entre 0-5), apresentando diferença estaticamente significante somente após a remineralização. No estudo in vivo, foram selecionados 130 sítios de primeiros molares permanentes hígidos ou com presença de lesões de cárie incipientes na superfície oclusal, em crianças com idade entre 7 a 12 anos. Após profilaxia, foi realizada a inspeção visual pelo Examinador A e 23 o exame com o DIAGNOdent pelo Examinador B. Apenas os sítios com sinais sugerindo lesão de cárie foram abertos com equipamentos que permitiram preparos conservadores e a extensão da lesão (padrão-ouro) foi determinada pelo Examinador C. De acordo com os pontos de corte propostos pela KaVo (1999) e com os novos pontos de corte estabelecidos pela curva ROC, observamos uma diferença na especificidade, 0,31 e 0,85 respectivamente, considerando todas as lesões como cariadas, e um equilíbrio entre sensibilidade.... / The purpose of this study was to evaluate the effectiveness of laser fluorescence device (DIAGNOdent) in detecting in vivo depth of occlusal caries lesions in permanent teeth and detecting in vitro remineralization of artificial caries lesions in enamel bovine teeth. On in vitro study, 78 enamel blocks with artificial caries lesions (white spot lesions) with Vickers microhardness number of 38.48 l 0.85 were submitted to dentifrice treatment during the pH-cycling, to promote remineralization. At baseline, after demineralization and after remineralization analyses were carried through with laser fluorescence device and enamel superficial microhardness analyses. Significant differences in superficial microhardness measures were found in the 3 stages (p < 0.0001). Values found in laser fluorescence readings were extremely low (between 0-5), presenting difference statistically significant only after remineralization. On in vivo study, one hundred and third sites from occlusal surfaces of sound or carious first permanent molars were selected in children, aged between 7 and 12 years. After professional cleaning, visual inspection was performed by Examiner A and laser fluorescence (DIAGNOdent) assessment by Examiner B. Only the sites presenting signals suggesting caries lesions were opened that resulted from minimal intervention and the 26 lesion extension (gold-standard) was determined by Examiner C. In accordance with cut-off points proposed by KaVo (1999) and with the new cut-off points established by ROC curves, we observe a difference in specificity, 0.31 and 0.85 respectively, considering all lesions as caries, and a balance between sensitivity (0.70) and specificity (0.87) for the new cut-off points considering dentine lesions only. Accuracy for visual inspection was ...(Complete abstract, click electronic address below).
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Investigação da quebra de pigmentos por luz

Esteban Florez, Fernando Luis [UNESP] 16 February 2009 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-06-11T19:24:08Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-02-16Bitstream added on 2014-06-13T20:31:07Z : No. of bitstreams: 1 estebanflorez_fl_me_arafo.pdf: 4818126 bytes, checksum: 136867861dfe8fc2d361248949270525 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / O clareamento dental é uma técnica que surgiu no inicio do século XIX. Desde então, e em função dos resultados obtidos ao longo do tempo, esta foi sendo alterada de maneira a reduzir os riscos do procedimento e ao mesmo tempo melhorar o resultado estético obtido. Com o aparecimento das fontes de luz para uso odontológico, novas e interessantes possibilidades surgiram e permitiram a utilização de métodos de aceleração que respeitem a fisiologia pulpar, que diminuam o tempo de exposição do paciente aos agentes peróxidos e promovam ainda a obtenção de bons resultados estéticos. Nos dias de hoje, pode-se observar na literatura importantes questionamentos acerca da contribuição efetiva da luz visível no processo e, os efeitos dos agentes peróxidos nas estruturas cristalinas dos dentes, materiais restauradores em geral e tecidos moles. Estas preocupações foram o cerne da motivação para a realização desta pesquisa, sendo assim, este trabalho vem propor uma série de metodologias inovadoras que avaliem através de tecnologias modernas os mecanismos básicos de interação da luz visível com o peróxido de hidrogênio e com os pigmentos orgânicos. Os experimentos aqui demonstrados abordam os fatores críticos relacionados com a eficiência do processo em diferentes substratos por meio de análise de transmitância, de fluorescência e imagens digitais. Com estes estudos pretendemos responder de maneira objetiva algumas das questões que foram observadas serem de fundamental importância no esclarecimento da real eficiência e eficácia da luz no clareamento dental. / The dental bleaching is a technique that appeared in the beginning of the XIX century. Since then, and in function of the obtained results a long the time, this has been altered in way to reduce the procedure risks and at the same time improve the aesthetic results. With the rise of light sources to be used in dentistry, new and exciting possibilities appeared and allowed the use of catalytic methods that respect the pulpal physiology, which diminishes the exposure time of the patients to the bleaching agents and provides good aesthetic results. In nowadays, it is possible to observe in the literature important questionings over the real contribution of light in the process and, the effects of the peroxide over the crystalline structure of the teeth, restorative materials and soft tissues. These concerning were the major motivation to the realization of this research, in this way, this work proposes a new series of methods that asses by the use of new technologies the basic mechanisms of visible light interaction with the hydrogen peroxide and with the organic pigments. The experiments here demonstrated study the critical factors related with the process efficiency in different substrates by digital images, transmittance and fluorescence. With these studies we pretend to respond in objective way some questions that were observed to be of fundamental importance in the understanding of the light efficiency and efficacy to the dental bleaching.
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Avaliação do efeito citotóxico da terapia fotodinâmica associada ao LED e ao Photogem sobre a mucosa bucal de rato

Trindade, Flávia Zardo [UNESP] 16 March 2009 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:12Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-03-16Bitstream added on 2014-06-13T20:38:35Z : No. of bitstreams: 1 trindade_fz_me_arafo.pdf: 753799 bytes, checksum: 6cf9c912e4ce2332952d19081bfcbfa7 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A utilização da PDT para tratamento de diferentes tipos de infecções, tal como a candidose bucal, tem sido estudada. Entretanto, poucos são os dados científicos que relatam os possíveis efeitos tóxicos dessa terapia. Dessa forma, o objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos da irradiação na mucosa bucal de ratos com LED azul (de 460 nm e potência de 200 mW/cm2) em presença do fotossensibilizador (FS) Photogem®, em duas diferentes concentrações (500 mg/L e 1000 mg/L). Para isso, foram utilizados 101 ratos (Rattus Norvegicus Albinus Holtzman) distribuídos em 6 grupos, de acordo com os seguintes tratamentos: Grupo 1 – controle; Grupo 2 – aplicação do FS (500 mg/L); Grupo 3 – aplicação do FS (500 mg/L) e irradiação com LED; Grupo 4 - aplicação do FS (1000 mg/L); Grupo 5 – aplicação do FS (1000 mg/L) e irradiação com LED; e Grupo 6 – irradiação com LED. O FS foi aplicado por 30 minutos (tempo de pré-incubação) e o tempo de irradiação da mucosa foi de 20 minutos (dose de 144 J/cm2). Decorridos os 4 períodos de avaliação propostos (0 dia, 1dia, 3 dias e 7 dias), os animais tiveram a mucosa palatina fotografada para análise macroscópica, sendo então imediatamente sacrificados para remoção cirúrgica do palato e posterior análise em microscopia de luz e de fluorescência. Um mapeamento térmico foi realizado a fim de avaliar a variação de temperatura ocorrida no tecido durante a irradiação com LED. Macroscopicamente, em todos os grupos experimentais e para todos os períodos de avaliação propostos na presente pesquisa, observou-se que a mucosa apresentava-se intacta, com aspecto de normalidade semelhante ao do Grupo 1 (controle). Microscopicamente, alterações teciduais, caracterizadas especialmente por discreta inflamação, puderam ser observadas na mucosa palatina de apenas 4 de um total de 80 animais submetidos a PDT... / The use of PDT has been investigated for the treatment of different types of infection, like oral candidosis. There are, however, few research-based data that report the possible toxic effects of this therapy. Therefore, this study evaluated the effects of irradiating the palatal mucosa of rats with blue LED (460 nm; 200 mW/cm²) in the presence of the photosensitizer Photogem® at two concentrations (500 and 1000 mg/L). Then, 101 rats (Rattus norvegicus albinus Holtzman) were randomly distributed in six groups, according to the treatment performed on the palatal mucosa: Group 1: control; Group 2: Photogem® (500 mg/L); Group 3: Photogem® (500 mg/L) + blue LED; Group 4 - Photogem® (1000 mg/L); Group 5: (1000 mg/L) + blue LED; and Group 6: blue LED. The exposure times to the photosensitizing agent and to the light source were 30 min (pre-incubation time) and 20 min (144 J/cm2 energy density), respectively. At 0, 1, 3 and 7 days posttreatment, the animals had their palatal mucosa photographed for macroscopic analysis and were immediately sacrificed. The palate was removed for further analysis by light and fluorescence microscopy. Thermal mapping was made to evaluate the temperature change occurred in the tissue during LED irradiation. In all experimental groups and periods, the macroscopic analysis revealed intact mucosa with normal aspect similar to that of Group 1 (control). Tissue alterations, characterized primarily by a mild inflammation, were observed microscopically on the mucosa of only 4 out of 80 animals subjected to PDT. Photosensitizer penetration into the treated mucosa was identified by the fluorescence emitted by Photogem® and was limited to the epithelial layer. The thermal mapping revealed a temperature increase from 35 to 41ºC during the 20-min irradiation. In conclusion, under the tested conditions, PDT using Photogem® at 500 and 1000 mg/L concentrations... (Complete abstract click electronic access below)
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Estanho em amostras ambientais por espectrometria de fluorescência atômica (AFS) /

Garcez, Daniel Locoselli. January 2015 (has links)
Orientador: Amauri Antonio Menegário / Banca: Didier Gastmans / Banca: José Roberto Ferreira / Resumo: O presente estudo objetivou estabelecer um método analítico para determinação das concentrações de Sn em amostras naturais. Optou-se pelo acoplamento das técnicas analíticas de espectrometria de fluorescência atômica (AFS), geração de hidretos (HG) e sistema de injeção em fluxo (FI). O desenvolvimento do método considerou a otimização das condições de operação do AFS, da técnica de HG, do sistema FI e dos procedimentos de digestão de amostras ambientais (sólidas e líquidas). Os resultados obtidos demonstraram que as melhores condições para geração de SnH4 foram alcançadas com redutor (NaBH4) 4% (m/v) e ácido (HCl) 0,6 mol L-1. A vazão de injeção de amostra otimizadas foi de 1,2 mL min-1, e as vazões de fluxo de reagentes foram 1,2 mL min-1 de HCl e 1,6 mL min-1 para NaBH4. Nestas condições, foi obtida uma relação molar [BH4 −] / [H+] de 1,62 para as reações de geração de hidreto de Sn. O volume de amostra injetado foi definido como 500 μL. Para as digestões de solo e sedimento em equipamento de micro-ondas, foi definido o uso dos volumes de ácidos 3 mL HNO3 + 1 mL HCl. Após o desenvolvimento do método analítico, este foi aplicado em matrizes ambientais. Para tanto, foram realizadas amostragens de solo, sedimento e água, em duas áreas sob ação antrópica distintas, sendo estas: área de beneficiamento de cassiterita em Corumbataí/SP e área da Baía da Ilha Grande/RJ. Na primeira área de estudo os resultados indicaram ter ocorrido alteração da qualidade natural do ambiente, em decorrência das atividades ali desenvolvidas. No segundo caso não foram observados teores de Sn no ambiente, em concentrações incomuns para regiões marinhas. Por fim, o método analítico desenvolvido foi comparado com a técnica ICP OES e material de referência certificado, mostrando-se eficiente (preciso, exato e robusto) para determinação de Sn em amostras de solo, sedimento e água (concentração total.. / Abstract: The present study aimed to establish an analytical method to determine tin concentrations in natural samples. It was opted for the coupling of the analytical techniques: atomic fluorescence spectrometry (AFS), hydride generation (HG) and flow injection system (FI). The development of the method considered the AFS operating conditions, the HG technic, the FI system and the digestion procedures of the field samples (solid and liquid). The results showed that the best conditions for the generation of SnH4 were obtained with reductant (NaBH4) 4% (m/v) and acid (HCl) 0,6 mol L-1. The optimized flow rates for the device used in this study were 1,2 mL min-1 of sample, 1,2 mL min-1 of HCl and 1,6 mL min-1 of NaBH4. In these conditions, it was obtained a molar relationship [BH4 −] / [H+] equal to 1,62 for the reactions of stanene. The sample volume injected was 500 μL. The acid volumes defined for the microwave digestion of soil and sediment samples were equal to 3 mL HNO3 + 1 mL HCl. After the development of the analytical method, this procedure was applied to analyze the environmental samples described below. Soil, sediment and water samples were collected in two areas under different anthropogenic activities: processing area of cassiterite in Corumbataí/SP and an area of Ilha Grande Bay/RJ. In the first study area, the obtained data indicated that there was alteration in the natural quality of the environment as a result of the activities developed in that site. In the second area, was not observed Sn content in the environment, in unusual concentrations for marine regions. Finally, the analytical method was compared with the ICP OES technique and certified reference material, and it showed to be efficient (in precision, accuracy and ruggedness) to determine Sn in soil, sediment and water samples (total and dissolved concentrations) / Mestre
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Identificação de elementos traço em tumores de mama de cadelas e sua correlação com histopatologia e prognóstico de vida /

Sakamoto, Silmara Sanae. January 2011 (has links)
Resumo: O papel dos elementos traço em tumores mamários tem sido investigado nas últimas décadas, mas comparações de subclasses de tumores mamários malignos são ainda inéditas em medicina veterinária. Portanto, o objetivo do presente trabalho foi identificar a concentração dos elementos cálcio, ferro, cobre e zinco em neoplasias mamárias de cadelas, comparando-se um grupo controle com três tipos histológicos malignos. Cinquenta e uma biopsias mamárias foram avaliadas e divididas em quatro grupos (G1 - controle, G2 - carcinoma complexo, G3 - carcinoma tubular/tubulopapilífero e G4 - carcinoma sólido). O material foi colhido de mastectomias realizadas na rotina do Hospital Veterinário da UNESP-Araçatuba sendo classificado segundo os critérios diagnósticos propostos pela Organização Mundial de Saúde. As amostras foram analisadas, quanto aos elementos traço, pela técnica de Fluorescência de Raios X por Dispersão de Energia (EDXRF). A análise estatística revelou aumento significativo (p<0,05) dos elementos cálcio, ferro e zinco entre os grupos G1 e G2. Comparações entre o sistema TNM (Tumor/Linfonodo/Metástases) e os elementos traço não foram significativas (p˃0,05) à análise estatística, já que os mesmos demonstraram estar correlacionados ao tipo histológico e não ao sistema TNM de prognóstico de vida. O aparelho de EDXRF mostrou-se eficaz para a análise dos elementos traço, além de ser uma técnica mais acessível, multielementar e não destrutiva, permitindo que outras metodologias possam ser utilizadas para estudos complementares com as mesmas amostras / Abstract: The role of trace elements in breast cancer has been investigated in recent decades, but comparisons of subclasses of malignant mammary tumors are still unpublished in veterinary medicine. So, the aim of this work was to identify the concentration of calcium, iron, cooper and zinc in canine mammary tumors, comparing them with a control group and three malignant neoplasias. 51 mammary fragments of biopsies were analyzed and divided in four groups (G1 - Control, G2 - Complex Carcinomas, G3 - Tubular/Tubulopapillary Carcinoma and G4 - Solid Carcinoma). Samples of the tumors were collected during surgical procedures, mastectomy, performed at Veterinary Hospital of Sao Paulo State University - Araçatuba and were classified according to the diagnostic criteria proposed by the World Health Organization. Samples were analyzed by Energy Dispersive X-Ray Fluorescence Equipment (EDXRF). Statistical analysis revealed a significant difference (p<0.05) only in the groups G1 and G2, concerning to the calcium, iron and zinc elements. The comparison between TNM system and trace elements revealed an absence of statistical evaluation, because trace elements were connected with histopathologycal graduation. The EDXRF was useful for trace element analyses and it is a non-destructive, multielementar technology that permits complementary studies with the same samples / Orientador: Alexandre Lima de Andrade / Coorientador: Maria Cecília Rui Luvizotto / Coorientador: Andrea Antunes Pereira / Banca: Flávia de Rezende Eugênio / Banca: Paula Rahal / Mestre
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Medição de espessura de filmes eletrodepositados em suporte metálico por EDXRF / Measurement of thickness of films electrodeposited on metal support by XRF

Marcos Rogério Soares Santos 06 November 2013 (has links)
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Esse trabalho apresenta a técnica de fluorescência de raios X por dispersão de energia (EDXRF) para calcular a espessura de filmes metálicos finos por ser de custo relativamente baixo, não destrutiva e que permite também uma análise qualitativa e até quantitativa dos elementos do revestimento. As espessuras do Níquel, Zinco e Cromo sobre aço, foram calculadas utilizando cinco procedimentos diferentes e todas as relações matemáticas obtidas foram baseadas na lei de atenuação de Beer-Lambert, que relaciona as intensidades K&#945; e/ou K&#946; e as relações específicas do material (coeficiente de atenuação, &#956;m). Os resultados experimentais para as espessuras do Zinco e Níquel, utilizando somente a intensidade K&#945;, apresentaram valores próximos dos valores estimados. Quando foi considerada a razão K&#945;/K&#946;, os resultados experimentais divergiram bastante do estimado. Para calcular a espessura do Cromo foi necessário utilizar um método em que as camadas são calculadas separadamente, pois o revestimento de Cromo é composto por múltiplas camadas (Cromo, Cobre e Níquel), Os resultados para a espessura do Cromo foram satisfatórios. / This paper presents the energy dispersive of X-ray fluorescence ( EDXRF ) technique to calculate the thickness of thin metallic films to be relatively low-cost , non-destructive and also allows a qualitative and quantitative elements to the coating. The thicknesses of nickel , zinc and chromium on steel were calculated using five different procedures and all mathematical relationships were obtained based on Beer- Lambert attenuation law, which lists the K&#945; intensities and / or K&#946; and unique material relations ( attenuation coefficient , &#956;m). The experimental results for the thickness of the zinc and nickel , using only the intensity K&#945;, showed values close to the values estimated. When was considered the reason K&#945; / K&#946;, experimental results diverged quite the estimate. The thickness of chrome due multiple layers (chromium, copper and nickel ), required another method in which the layers are separately calculated. The results for the thickness of the chromium has been satisfactory.
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Elektrochemická příprava fluorescenčního senzoru s vysoce uspořádáným nanostrukturovaným povrchem / Electrochemical preparation of fluorescence sensor with highly ordered nanostructured surface

Bedlek, Marek January 2013 (has links)
This work deals with fabrication and examination of optical properties of self-ordered TiO2 and Au quantum dots array and its potential usage in medicine as optical sensor for biomolecules detection. Controlled anodization of Ti through Al2O3 template was chosen as a fabrication method for TiO2 QDs, in case of Au galvanic deposition through Al2O3 template onto beforehand prepared TiO2 QDs or substrate with dimple structure. The influence of anodization and deposition conditions on the final structure of QDs and their emission spectrum is also examined.
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Experimentální analýza utváření mazacího filmu v náhradách kyčelního kloubu / Experimental analysis of lubricant film formation in hip joint replacements

Švachová, Michaela January 2016 (has links)
This diploma thesis deals with an experimental analysis of lubricant film formation in hip joint replacements. The main objective is to clarify the effect of mean speed, slide-to-roll ratio, and material of femoral head on the development of film thickness, focusing on the role of particular constituents contained in model synovial fluid, such as albumin and -globulin. For this purpose, a model ball-on-disc configuration was applied, while the development of lubricant film was evaluated using the combination of fluorescent microscopy and optical interferometry. To better understand the process, coefficient of friction between implant surfaces was later investigated as well. The effect of material, slide-to-roll ratio, mean speed and model fluid composition was analysed. Results indicate that the main parameter, influencing the character of film formation, is slide-to-roll ratio. Under most conditions, the dominant constituent responsible for the film thickness development was albumin. Coefficient of friction is affected mainly by the material of implant. The thesis contains original scientific results extending the knowledge in the area of hip joint biotribology.
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Síntese e estrutura do peptídeo antimicrobiano Pantinina-3 e de seus análogos /

Conceição, Milena Barbosa da. January 2018 (has links)
Orientador: Reinaldo Marchetto / Coorientador: Edson Crusca Junior / Banca: Saulo Santesso Garrido / Banca: José Luiz de Souza Lopes / Resumo: O peptídeo antimicrobiano Pantinina-3 (P3) possui 13 resíduos e é derivado do veneno do escorpião africano Pandinus imperator. Ele apresenta alta atividade antimicrobiana contra bactérias Gram-positivas, principalmente Enterococcus resistente à vancomicina (VRE-S13) in vitro. Entretanto, este peptídeo também possui atividade hemolítica. Neste contexto, foram desenhados e sintetizados cinco análogos de P3 a partir de substituições pontuais de resíduos específicos por um resíduo de lisina, os quais foram denominados L2K, I5K, N7K, I9K e L13K. O objetivo da criação destes análogos foi estudar a relação de estrutura e atividade do peptídeo P3, a fim de investigar o efeito da modificação de suas características biofísicas em sua atividade biológica. Para isso, os peptídeos foram sintetizados por meio da técnica de síntese em fase sólida (SPFS), purificados por cromatografia líquida de alta eficiência em coluna de fase reversa (CLAE-FR) e identificados por espectrometria de massas (SM). Os peptídeos purificados foram testados quanto à sua atividade biológica e foi verificado que o análogo L2K apresentou atividade somente para a bactéria Gram-negativa testada, o análogo N7K mostrou ser mais ativo que P3 tanto para Gram-positivas quanto para Gram-negativas e os outros análogos não apresentaram atividade antimicrobiana. Foi avaliada também a atividade hemolítica dos peptídeos, e foi verificado que o único análogo que apresentou atividade contra eritrócitos foi N7K. A hidrofobicidade d... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The antimicrobial peptide Pantinin-3 (P3) has 13 residues and is derived from the venom of the African scorpion Pandinus imperator. It has high antimicrobial activity against Gram-positive bacteria, mainly vancomycin-resistant Enterococcus (VRE-S13) in vitro. However, this peptide also has hemolytic activity. In this context, five P3 analogs were designed and synthesized from point substitutions of specific residues by a lysine residue, which were named L2K, I5K, N7K, I9K and L13K. The objective of the creation of these analogues was to study the structure and activity relationship of the P3 peptide in order to investigate the effect of the modification of its biophysical characteristics on its biological activity. For this, the peptides were synthesized using the solid-phase peptide synthesis technique (SPPS), purified by high performance liquid chromatography on a reverse phase column (HPLC-RF) and identified by mass spectrometry (MS). The purified peptides were tested for their biological activity and it was found that the L2K analog showed activity only for the Gram-negative bacteria tested, the N7K analog showed to be more active than P3 for both Gram-positive and Gram-negative and the others did not present antimicrobial activity. The hemolytic activity of the peptides was also evaluated, and it was verified that the only analog that showed activity against erythrocytes was N7K. The hydrophobicity of the peptides was analyzed by the retention time obtained by HPLC-RF an... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre
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Evaluación molecular de la Capreomicina durante la fase de iniciación de la síntesis proteica en el ribosoma de E. coli / Molecular evaluation of Capreomycin during initiation phase of bacterial protein synthesis

Candusso - Carbone, Alessandra 10 February 2022 (has links)
La tuberculosis es una enfermedad muy prevalente en el Perú y los casos de tuberculosis multidrogorresistente (MDR) están en aumento. La capreomicina es un antibiótico péptido cíclico utilizado anteriormente en el esquema de segunda línea de tratamiento para tuberculosis MDR. El mecanismo molecular de acción conocido de este fármaco es la inhibición de la fase de elongación de proteínas. En esta investigación utilizamos el microorganismo E. coli, por ser un gold standard para estudios mecanísticos de antibióticos y un espectofotómetro , llamado Stopped-flow, para evidenciar los cambios conformaciones del factor de iniciación 3 fluorescente (IF3DL). Se observó que la unión de capreomicina a la subunidad menor 30S del ribosoma promueve el acercamiento de los dominios de IF3DL, el cual fue evidenciado como una disminución de fluorescencia. Esta reacción fue dependiente de concentración, encontrándose una mayor disminución de la fluorescencia en función del aumento de capreomicina. Cuando se añadió el factor de iniciación 1 (IF1) al complejo 30S-IF3DL, la unión de capreomicina también resultó en un acercamiento de los dominios de IF3DL, pero ligeramente menor que la que ocurre en ausencia de IF1. Los parámetros cinéticos entre los complejos 30S – IF3DL en ausencia o presencia de IF1 con capreomicina indican que el acercamiento de los dominios de IF3DL es independiente de IF1. En conclusión, capreomicina induce un acercamiento de los dominios de IF3, lo que podría afectar su función. / Tuberculosis is a prevalent disease in Peru and cases of multridrugresistant tuberculosis (MDR – TB) are increasing. Capreomycin is a ciclic peptide antibiotic, that was used before in the second line treatment of multidrugresistant tuberculosis. The known molecular mecanism of action is the inhibition of the elongation phase of protein synthesis. In this study, we used the microorganism E. coli, because it is a gold standard to study antibiotic mechanism of action and a spectrophotometer, called stopped-flow, to show conformational changes of the initiation factor 3 (IF3). It was shown that binding of capreomycin to the small subunit 30S brings IF3 domains into proximity, which seems like a decrease of fluorescence. This effect was found to be concentration dependent, finding a greater fluorescence decrease when the concentration of capreomycin was higher. When initiation factor 1 (IF1) was added to the 30S – IF3DL complex with capreomycin, a further decrease of inter domain distance was observed; yet, slightly less than in absence of IF1. The kinetic analysis of capreomycin binding in the presence or absence of IF1 shows that IF3DL inter domain distance reduction is IF1 – independent. In conclusion, capreomycin induces a reduction of the inter domain distance of IF3, which is expected to perturb its main fidelity function. / Tesis

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