Resumo: O objetivo deste estudo foi verificar os efeitos da suplementação energética e com diferentes fontes de gordura na produção de embriões FIV e no perfil metabólico em novilhas nelore. Foram realizados dois experimentos, no primeiro, vinte novilhas Nelore (Bos taurus indicus) com idade média de 30 meses, com peso médio de 417,0 ± 42,4 kg foram distribuidas aleatoriamente em 3 tratamentos: T1 (n= 7), animais receberam 100% das exigências de manutença de energia, calculados conforme NRC (1997), T2 onde os animais receberam 170% das exigências de manutenção de energia (1,7 X M), e T3, onde os animais receberam 170 % das exigências de manutenção de energia com adição de 200 g de gordura protegida-AGCL (Megalac®). No segundo experimento 12 novilhas Nelore (Bos taurus indicus) com idade variando de 14 a 18 meses, com peso médio inicial de 309,6 kg, foram distribuidas em 4 tratamentos, de acordo com peso e população folicular avaliada por ultrasonografia: T1, animais receberam 100% dos requerimentos de mantença de energia, calculados conforme NRC (1997), T2- animais receberam 170% das exigências de mantença de energia, T3- idem ao T2, com adição de 4% de óleo de soja na MS, e T4- idem ao T2, com adição de 200 g de AGCL (Megalac ®). O período de adaptação foi quinze dias, onde os animais receberam feno de capim Brachiaria e ração concentrada... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Two experiments were carried to evaluate the effect of the energy and fat in the metabolic profile, follicular dynamic, oocyte and in vitro embryo production in Nelore heifers (Bos taurus indicus). In the first, twenty Nelore heifers with 30 months old, and average weight 417,0 ± 42,4 were allocated in 3 treatments, in accordance with weight and follicular population evaluated by ultrasound: T1, animals received 100% of energy maintenance, calculated as NRC (1997), T2- animals received 170% of energy maintenance; T3: animals received 170% of energy maintenance with addition of 200 g Megalac ®. In the second experiment, 12 Nelore heifers with 14-18 months and 309,6 kg average weight, were allocated in 3 treatments, in tree periods: T1, animals received 100% of energy maintenance, calculated as NRC (1997), T2- animals received 170% of energy maintenance; T3: animals received 170% of energy maintenance with addition of 4% soybean oil in Dry Matter and T4: animals received 170% of energy maintenance with addition of 200 g Megalac ®. After adaptation period, the treatment initiated, animals had synchronized ovulation, blood samples were collected, and follicular aspiration was carried to evaluate the oocytes and in vitro embryo production. Follicular development was monitored daily by ultrasonography until day post heat. The consumption of MS and the weight gain were lower in group T1 (P< 0.05), in relation to the others treatments. The FSH, LH, and albumin concentrations were not different (P > 0.05) among treatments. The cholesterol concentrations were higher in the T3 and T4 groups (P< 0.05) only in the second experiment... (Complete abstract, click electronic access below) / Orientadora: Gisele Zoccal Mingoti / Coorientador: Roberto Sartori Filho / Banca: Ciro Moraes Barros / Banca: César Roberto Esper / Banca: Paulo Henrique Franceschini / Doutor

O objetivo deste estudo foi avaliar a eficiência da baixa tensão de oxigênio (5% de CO2; 5% de O2 e 90% de N2) na maturação oocitária in vitro em meio quimicamente definido (0,1% de PVA) ou suplementado com 10 % de PFF. Foram avaliados a migração dos grânulos corticais, a quantificação e distribuição da proteína HSP70, a maturação nuclear, as concentrações intracelulares da glutationa reduzida, a avaliação dos índices de penetração espermática e o desenvolvimento e qualidade de embriões fecundados in vitro em oócitos antes da maturação (0 hora) e após a maturação in vitro nos diferentes tratamentos (atmosfera = 5 ou 20% de O2 e suplementação do meio de maturação = 0,1% de PVA ou 10% de PFF). Para verificar a influência da atmosfera e da suplementação do meio no sistema de maturação foram avaliados o ciclo celular das células do cumulus, o número de células do cumulus por oócitos, as concentrações intracelulares de glutationa reduzida (GSH) das células do cumulus, as concentrações de TBARS no meio de maturação e a resistência das células do cumulus ao estresse oxidativo. Avaliações quanto às concentrações de GSH e HSP70 foram realizadas em oócitos in vivo, visando comparar a eficiência do sistema in vitro. Para a maioria dos parâmetros avaliados não houve interação entre a atmosfera e a suplementação do meio de maturação, indicando que o efeito da atmosfera independe do meio utilizado. Foi observado que em atmosfera com baixa tensão de O2 houve diminuição da concentração de glutationa nas células do cumulus, do índice de clivagem e do número total de blastômeros dos embriões e houve aumento do número de células por oócito após o período de maturação in vitro. A suplementação do meio de maturação com 0,1% de PVA diminuiu os índices de migração dos grânulos corticais, contudo não alterou os índices de penetração espermática. Os oócitos do grupo 0 hora apresentaram índices maiores de HSP70 do que cada um dos demais grupos, indicando provável diminuição dos estoques de HSP70 durante o período de maturação em todos os grupos de maturação in vitro. As células do cumulus provenientes de oócitos maturados em meio suplementado com 0,1% de PVA apresentaram maior número de células na fase S e G2/M do que o grupo 0 hora, entretanto isso não refletiu em aumento no número de células por oócito após a maturação. Este trabalho permite concluir que o uso de baixa tensão de oxigênio não melhora as condições do sistema de maturação oocitária in vitro em suínos, sendo que o efeito do uso desta atmosfera é, na maioria das variáveis avaliadas, independente do tipo de suplementação que se utiliza no meio de maturação in vitro. / The aim of this study was to evaluate the efficiency of low oxygen tension (5% CO2, 5% O2 and 90% N2) on in vitro oocyte maturation using defined media (0.1% PVA) or supplemented with 10% PFF. To achieve this goal, oocytes were evaluated prior to in vitro maturation (0 hour) and after in vitro maturation on different treatments (atmosphere = 5 or 20% O2 and media supplementation = 0.1% PVA or 10% PFF) for cortical granules migration, quantification and distribution of HSP70 protein, nuclear maturation, intracellular concentrations of reduced glutathione, evaluation of sperm penetration and development and quality of in vitro-produced embryos. Furthermore, to evaluate the effects on maturation system, several factors were analyzed, such as: the cell cycle phase of cumulus cells, the number of cumulus cells per oocyte, the intracellular concentrations of reduced glutathione in cumulus cells, the concentrations of TBARS in maturation media and the resistance of cumulus cells to the oxidative stress. Some of these evaluations were performed on in vivo oocytes, aiming to analyze oocyte competence after in vitro maturation. Concerning the majority of the parameters analyzed, there were no interaction between atmosphere and the supplementation of maturation media, indicating that the effect of atmosphere is independent of the media used. It was possible to observe that low tension atmosphere of O2 decreased glutathione concentrations in cumulus cells, cleavage rate and total number of embryo blastomeres and increased the number of cells per oocyte after the period of in vitro maturation. The maturation media supplementation with 0.1% PVA decreased the migration of cortical granules; however this fact did not have effect on in vitro sperm penetration levels. The 0 hour oocytes showed higher levels of HSP70 than each one of the in vitro maturated groups, indicating decrease of this protein stock during the maturation period in all of the in vitro maturated groups. The cumulus cells originated from maturated oocytes in supplemented media with 0.1% PVA showed higher number of cells in S and G2/M phase than 0 hour group; however this fact did not reflect in increased cell numbers per oocyte after maturation. Therefore, the use of low oxygen tension does not improve the conditions of the in vitro porcine oocyte maturation system and their effect in most of the factors analyzed is not dependent on the supplementation of maturation media.

A administração oral de isotretinoína (IST) é eficaz no tratamento da acne; no entanto, seu uso está associado a efeitos adversos, como ressecamento da pele, epistaxe, distúrbios imunológicos e psiquiátricos, enquanto a eficácia da aplicação tópica é prejudicada pela intensa irritação causada na pele. Proteger a IST do contato direto com a pele e direcionar sua liberação para os folículos pilosos, local onde a acne se desenvolve, pode reduzir a irritação e aumentar a eficácia do tratamento. O polímero Delonix (DLX), galactomanano natural derivado da semente de Delonix regia, pode ser manipulado para produzir nanopartículas para a liberação direcionada de IST na pele. Desta forma, o objetivo deste estudo foi desenvolver nanopartículas poliméricas de DLX (IST-DLX) contendo IST e avaliar seu potencial para o tratamento tópico da acne. O DLX foi coletado, purificado e caracterizado quanto a composição de monossacarídeos e massa molecular (MM). Nanopartículas DLX sem IST (branco), nanopartículas fluorescentes de DLX (nanopartículas contendo BODIPY (BOD-DLX)) e nanopartículas IST-DLX foram preparadas e caracterizadas por tamanho, índice de polidispersividade (PdI), potencial zeta (pz) e eficiência de encapsulação (EE). O estudo de liberação in vitro das nanopartículas IST-DLX foi realizado utilizando células de difusão e membrana sintética, enquanto a penetração cutânea das nanopartículas BOD-DLX e IST-DLX foi avaliada por microscopia confocal e tape stripping diferencial em pele de orelha de porco dermatomizada, respectivamente. A influência das nanopartículas IST-DLX na modulação de IL-6, IL-10 e TNF-? foi avaliada in vitro utilizando células de macrófagos AMJ-2 estimuladas com lipopolisacarídeos (LPS) e a atividade antimicrobiana foi avaliada em meio de cultura de Propionibacterium acnes. In vivo, as nanopartículas IST-DLX foram avaliadas quanto a penetração e irritação cutânea em ratos Wistar (protocolo de aprovação CEUA-FCFRP nº 17.5.213.60.3). A MM do polímero DLX foi de ~177 kDa, contendo predominantemente manose e galactose na proporção de 6,3:1. O tamanho das nanopartículas IST-DLX, determinado por dispersão de luz, foi entre 215 a 232 nm, PdI < 0,2, pz < -30 mV e EE > 25%. As nanopartículas IST-DLX sustentaram a liberação da IST, com cerca de 37% de IST sendo liberado em 48 h. As imagens de microscopia confocal mostraram que as nanopartículas BOD-DLX concentraram-se na epiderme e nos folículos pilosos em comparação com a solução de BODIPY livre, a qual permeou até a derme. Foi observada uma penetração de IST significativamente maior e descontrolada em todas as camadas da pele de orelha de porco quando a solução de polímero de IST-DLX foi usada em comparação com um acúmulo de IST menor e controlado quando as nanopartículas IST-DLX foram aplicadas. As nanopartículas IST-DLX direcionaram a IST para os folículos pilosos (26%) em comparação com a solução de IST (6,5%) que permeou por todas as camadas da pele. As nanopartículas IST-DLX reduziram significativamente a produção de IL-6 em células de macrófagos estimuladas por LPS, mesmo após 48 h, em comparação com a solução de IST livre, que reduziu significativamente a produção de IL-6 apenas até 24 h. Tanto as nanopartículas ISTDLX quanto a solução de IST livre não inibiram o crescimento de P. acnes. Não foi observado nenhum sinal de eritema nos ratos tratados com nanopartículas IST-DLX, com ou sem irradiação UVA, enquanto os tratados com solução de IST apresentaram eritema. A espessura da epiderme dos ratos tratados com as nanopartículas foi significativamente menor do que daqueles tratados com IST livre, com ou sem irradiação UVA. Conclui-se que as nanopartículas IST-DLX direcionam e sustentam a liberação de IST na pele em concentrações ótimas, modulam a resposta inflamatória da IL-6 e previnem o eritema inflamatório relacionado ao IST in vivo. Sendo assim, o polímero DLX pode ser considerado um polímero promissor para a liberação sustentada e direcionada de fármacos. / Oral isotretinoin (IST) has been effective in acne treatment; however, its use is associated with side effects such as skin dryness, epistaxis, immune disorder and psychiatric concerns while its topical gel application\'s effectiveness is hampered by irritancy. Protecting IST from direct skin contact and targeting its release to the hair follicles where the acne develops can reduce irritation and increase the effectiveness of treatment. Delonix (DLX) polymer is a natural galactomannan derived from Delonix regia seed that may be engineered to yield nanoparticles for IST skin targeting. Therefore, the aim of this study was to develop IST-loaded DLX (IST-DLX) polymeric nanoparticles and assess its skin targeting prospects for acne treatment. DLX was collected, purified and characterized by monosaccharide composition and molecular weight (Mw). Blank DLX nanoparticles, fluorescent DLX nanoparticles (BODIPY-loaded (BOD-DLX) nanoparticles) and IST-DLX nanoparticles were prepared and characterized by size, polydispersibility index (PdI), zeta potential (zp) and encapsulation efficiency (EE). In vitro release study of IST-DLX nanoparticles was performed using diffusion cells and synthetic membrane, while skin targeting of BOD-DLX and IST-DLX nanoparticles were assessed by confocal microscopy and differential tape stripping technique in dermatomed pig ear skin respectively. IST-DLX polymeric nanoparticles\' IL-6, IL-10 and TNF-? modulation was assessed in vitro using lipopolysaccharide (LPS) stimulated AMJ-2 macrophage cells and antimicrobial activity was assessed in Propionibacterium acnes culture medium. IST-DLX nanoparticles\' skin penetration and irritation were evaluated in vivo in Wistar rats (ethics committee approval protocol CEUA-FCFRP nº 17.5.213.60.3). DLX polymer Mw was ~177 kDa, containing predominantly mannose and galactose in ratio 6.3:1. IST-DLX nanoparticles\' size determined by light scattering was between 215 to 232 nm, PdI < 0.2, zp < -30 mV, EE > 25 %. IST-DLX nanoparticles sustained IST release, with about 37% IST being released in 48 h. Confocal images showed that BOD-DLX nanoparticles accumulated in the epidermis and hair follicles as compared to free BODIPY solution which permeated into the dermis. Significantly higher and uncontrolled IST penetration into all layers of pig ear skin with IST-DLX polymer solution was observed as compared to lower, controlled but optimum IST accumulation into the pig ear skin when IST-DLX nanoparticles were used. IST-DLX nanoparticles targeted the hair follicle (26 %) as compared to IST solution (6.5 %) which permeated through all skin layers. IST-DLX polymeric nanoparticles significantly reduced IL-6 production in LPS stimulated macrophage cells at 48 h as compared to free IST solution which significantly reduced IL-6 production only at 24 h. Both IST-DLX nanoparticles and free IST solution did not inhibit P. acnes growth. No sign of inflammatory erythema was observed in IST-DLX nanoparticles treated Wistar rats with or without UVA irradiation as compared to free IST treated ones. Epidermal thickness of rats treated with IST-DLX nanoparticles was significantly smaller than those treated with free IST with or without UVA irradiation. It can be concluded that IST-DLX nanoparticles can target, deliver and sustain IST release to the skin at optimum concentrations, modulate IL-6 inflammatory responses and may prevent IST related inflammatory erythema in vivo. DLX polymer could be promising polymer for drug delivery.

Sabendo do impacto que nutrição e ambiente podem ter sobre a reprodução é de fundamental importância para aplicação nas biotecnologias da reprodução analisar o ciclo reprodutivo de novilhas bovinas (taurinas e zebuínas) e bubalinas, temporalmente, sob as mesmas condições nutricionais e de manejo. Assim, este estudo teve como objetivo analisar temporalmente a dinâmica folicular de novilhas Holandesas, Gir e Búfalas, mantidas sob as mesmas condições de manejo. As fêmeas foram alocadas no Departamento de Reprodução Animal (CBRA/FMVZ/USP), Campus Pirassununga. No Experimento 1 as fêmeas foram pré-sincronizadas com duas doses de prostaglandina F2&alpha; (PGF; Dcloprostenol, 150 &micro;g IM, Prolise&reg;), com 14 dias de intervalo. O dia da primeira ovulação, após segunda dose de PGF, foi considerado como o dia 0 do ciclo. A partir do D0 foram realizadas avaliações diárias da dinâmica folicular (folículos > 3 mm) por ultrassonografia (Aloka SSD500, 7,5MHz), até à detecção da ovulação subsequente. O Experimento 2 foi realizado após a segunda ovulação, avaliando-se a dinâmica folicular a cada 12h para detectar o momento do desvio da primeira onda folicular. As variáveis resposta foram analisadas pelo PROC GLIMMIX do SAS. Não foi encontrada diferença entre os intervalos inter-ovulatórios (22,3±0,65; 22,1±0,95; 23,8±0,63 dias; Holandesas, Gir e Búfalas, respectivamente). No entanto, em relação às características a seguir, foram encontradas diferenças significativas (P<0,05) em pelo menos um dos grupos genéticos, Holandesas, Gir e Búfalas, respectivamente, para o número de ondas foliculares em um ciclo estral (2,6±0,17a, 3,4±0,24b, 2,8±0,11a ondas), número de folículos recrutados após primeira onda (26,1±1,7a, 66,2±15,9b, 22,7±1,91a folículos), e segunda ovulação (30,2±3,08a, 74,2±18,8b, 27,1±2,8a folículos), diâmetro do FD da primeira onda (15,8±0,66a, 12,3±0,32b, 12,1±0,03b mm), diâmetro do FD da segunda onda (11,8±0,73a, 9,4±0,52b, 10,6±0,31ab mm), diâmetro do folículo ovulatório (15±0,33a, 13,7±0,74ab, 13,5±0,46b mm), diâmetro máximo do CL (26,8±0,54a, 22,3±0,98b, 19,5±0,32c mm), concentração máxima de P4 no ciclo (7,7±0,33a, 8,0±0,85a, 5,3±0,28b ng/ml) e duração da dominância do FD da primeira onda (8,0±0,49a, 5,2±1,07b, 8,1±0,44a dias). Ainda com relação aos esteroides, a análise de testosterona plasmática nos 13 primeiros dias do ciclo foi semelhante entre as bovinas e menor para as bubalinas. Insulina e IGF plasmático também foram mensuradas. Novilhas taurinas e bubalinas (4,1±0,67 mUI/ml, 6,0±0,52 mUI/ml, respectivamente) apresentaram menores concentrações de insulina do que as zebuínas (9,0±2,15 mUI/ml), sendo que estas concentrações foram maiores durante a fase luteínica do que na fase folicular. Em relação ao desvio folicular no Experimento 2, não foram encontradas diferenças entre as raças para o momento do desvio (1,8±0,15; 2,1±0,21; 1,8±0,18 dias), entretanto, novilhas Holandesas apresentaram neste momento maior diâmetro de FD e FS (FD: 7,9±0,33; FS: 7,0±0,27 mm; P<0,05) quando comparadas às Gir (FD: 7,0±0,32; FS: 6,2±0,28mm) e às Búfalas (FD: 6,8±0,19; FS: 6,3±0,29mm). Não foram encontradas diferenças para concentrações de IGF-I total no fluído folicular e no plasma das taurinas e das zebuínas, porém as concentrações nas bubalinas foram superiores a das bovinas. Com esses resultados, conclui-se que novilhas de grupos genéticos diferentes (Bos taurus, Bos indicus e Bubalus bubalis) apresentam características de crescimento folicular e luteínico específicos para a raça, quando avaliadas temporalmente e nas mesmas condições de manejo ambiental e nutricional. / Considering the impact that nutrition and environment have over reproduction, it is essential for the reproductive biotechnologies to analyze the reproductive cycle of bovine (taurine and zebu) and bubaline heifers at the same time and under the same nutritional management. Therefore, the objective of this work was to study the follicular dynamic of Holstein (n=15), Gir (n=11) and Buffalo (n=15) heifers kept under the same conditions. All heifers were housed at the Department of Animal Reproduciton, (CBRA/FMVZ/USP), Pirassununga Campus. Animals were pre-synchronized with two doses of prostaglandin F2&alpha; (PGF; Dcloprostenol, 150&micro;g, IM), fourteen days apart (D0 = day of first ovulation). From D0, it was performed daily ultrasound scan of the ovaries to track follicular dynamics (follicles &#8805; 3mm) until the occurrence of the second ovulation. After the second ovulation, the follicular dynamic was performed twice daily to detect the time of deviation of the first follicular wave. The response variables were analyzed by PROC GLIMMIX, SAS. No difference was found among the inter-ovulatory interval (22.3±0.65; 22.1±0.95; 23.8±0.63 days) for Holstein, Gir and Buffalo, respectively. Differences were present (P<0.05) in at least one of the genetic groups, Holstein, Gir and Buffalo, respectively, for number of follicular waves (2.6±0,17a, 3.4±0,24b, 2.8±0,11a waves), number of follicles recruited after first (26.1±1.7a, 66.2±15.9b, 22.7±1.91a follicles), and second ovulation (30.2±3.08a, 74.2±18.8b, 27.1±2.8a follicles), diameter of first wave DF (15.8±0.66a, 12.3±0.32b, 12.1±0.03b mm), diameter of second wave DF (11.8±0.73a, 9.4±0.52b, 10.6±0.31ab mm), diameter of ovulatory follicle (15±0.33a, 13.7±0.74ab, 13.5±0.46b mm), maximum diameter of CL (26.8±0,54a, 22.3±0.98b, 19.5±0.32c mm), maximum concentration of P4 during ovulatory cycle (7.7±0.33a, 8.0±0.85a, 5.3±0.28b ng/ml) and length (8.0±0.49a, 5.2±1.07b, 8.1±0.44a days) of first wave dominant follicle dominance. No differences were found among the breeds for the moment of deviation (1.8±0.15; 2.1±0.21; 1.8±0.18 days). However, Holstein heifers presented larger DF and SF diameter (FD: 7.9±0.33; FS: 7.0±0.27mm; P<0.05) at deviation when compared with Gir (DF: 7.0±0.32; SF: 6.2±0.28mm) and Buffalo (DF: 6.8±0.19; SF: 6.3±0.29mm). Analyzing other steroids, concentration of blood testosterone during the first 13 days of the cycle was similar for the bovine heifers and lower for the bubaline heifers. Blood insulin and IGF-I were also measured. Holstein and bubaline heifers shown smaller concentrations of insulin (4.1±0.67 mUI/ml, 6.0±0.52 mUI/ml, respectively) than Gir heifers (9.0±2.15 mUI/ml), and also, when grouping the data collected from luteal phase and follicular phase, the result shows that during the period of high P4, insulin concentrations are lower than during the period of high E2. No differences were found among bovine breeds for the IGF-I concentration in follicular fluid, but they were lower than the concentrations presented in the bubaline follicular fluid. The results herein presented show that heifers from different genetic groups (Bos taurus, Bos indicus and Bubalus bubalis), maintained at the same nutritional and environmental status, have different folliculogenesis and luteal growth, which are specific to its breed.

L’hormone anti-Müllerienne (AMH), une glycopréotéine exclusivement produite par les cellules de la granulosa (CG) des follicules ovariens de la femme, est un marqueur unique de du statut folliculaire ovarien. Contrairement à l’inhibine B, l’estradiol et la FSH, l’AMH est produite par un large éventail de follicules allant des follicules primaires aux follicules à petit antrum. Cependant, les mécanismes précis régulant la production d’AMH par les CG restent mal connus. Nous avons montré que la sélection folliculaire précoce au cours de la phase de transition lutéo-folliculaire, un phénomène fréquemment retrouvé chez les femmes ayant un vieillissement ovarien, caractérisé par la présence d’au moins un follicule surdéveloppé au cours de la phase folliculaire précoce, n’altérait pas la puissance de la relation entre le compte folliculaire antral et les concentrations sériques d’AMH. En revanche, cette situation perturbait significativement celle entre le nombre de follicules antraux et les taux sériques de FSH, d’inhibine B et d’estradiol. Nous avons par la suite mis en évidence, en utilisant un nouvel outil, nommé Follicular Output RaTe (FORT), que le pourcentage de follicules qui répondent effectivement à la FSH exogène en atteignant la maturation pré-ovulatoire, était négativement et indépendamment lié aux taux sériques d’AMH, ce qui va dans le sens de l’hypothèse d’un effet inhibiteur de l’AMH sur la sensibilité des follicules à la FSH. Ensuite, nous avons regardé si la production d’AMH par ovaire et par follicule était altérée chez les femmes n’ayant plus qu’un seul ovaire suite à une ovariecomie unilatérale. En effet, tout indique que chez ces femmes, des réarrangements majeurs de la folliculogenèse sont mis en place pour maintenir une fonction ovarienne malgré la perte brutale d’une partie du pool folliculaire. Ainsi, par une analyse extensive et comparative de la folliculogenèse utilisant des marqueurs hormono-folliculiares, nous n’avons pu mettre aucune modification significative chez les femmes avec un ovaire unique, comparativement aux contrôles. A l’aide du modèle précédemment utilisé, nous avons constaté une augmentation de la sensibilité des follicules antraux à la FSH exogène, évaluée par le FORT, chez des femmes avec un seul ovaire, comparativement aux femmes avec 2 ovaires. Ces résultats supportent l’hypothèse d’une augmentation de la sensibilité folliculaire à la FSH, qui pourrait faire partie des possibles mécanismes compensatoires en jeu dans le maintien d’une folliculogenèse efficace chez les femmes ayant eu une ovariectomie unilatérale.Finalement, à l’aide de 2 approches complémentaires, in vitro and in vivo, nous avons montré que la FSH et l’AMPc stimulaient la transcription de l’AMH, et que la LH avait un effet additif. Nous avons montré que les gonadotrophines et l’AMPc agissaient à travers la protéine kinase A et la P38 MAP Kinase, impliquant notamment les facteurs de transcription GATA binding factor-4 et le steroidogenic factor-1. Par ailleurs, nous avons également mis en évidence que l’expression d’AMH pouvait être régulée de manière différentielle par l’estradiol, en fonction du type de récepteur aux estrogènes exprimés par les CG. Ainsi, la chute d’expression de l’AMH au sein des CG des follicules matures, qui expriment essentiellement ERβ, est probablement liée à un effet de l’estradiol. En résumé, ces travaux de thèse ont permis d’apporter de nouvelles données sur la régulation de la croissance folliculaire et sur la production d’AMH chez la femme. / Anti-Müllerian hormone (AMH), a glycoprotein that is exclusively produced by the granulosa cells (GC) of ovarian follicles in the adult female, is a unique biomarker of ovarian follicular status. In contrast with inhibin B, estradiol and FSH, AMH is produced in a wide range of follicles that goes from the primary to the small antral stages of folliculogenesis. However, the precise mechanisms that drive AMH expression by GC remain poorly understood.We showed that untimely and/or accelerated antral follicle growth during the luteal–follicular transition, a phenomenon that is frequent in ovarian-aged women and that is characterized by the presence of at least one overdeveloped antral follicle during the first days of the follicular phase does not alter the strength of the relationship between antral follicle count and serum AMH levels but does affect the relationship between serum FSH, inhibin B and estradiol levels and the number of antral follicles. The heftiness of AMH in relation to advanced antral follicle growth provides a further explanation for the reported stronger association between serum AMH levels and antral follicle counts as compared with the other hormonal markers of the ovarian fertility status. We subsequently demonstrated, using an innovative tool, the Follicular Output RaTe (FORT), that the percentage of follicles that effectively respond to exogenous FSH by reaching pre-ovulatory maturation is negatively and independently related to serum AMH levels, which is in keeping with the hypothesis that AMH inhibits follicle sensitivity to FSH. Given this hypothesis, we wondered if per-ovary and per-follicle AMH production could be altered in patients having a single ovary as a result of unilateral oophorectomy. Indeed, all indicate that major rearrangements of folliculogenesis occur to preserve and maintain ovarian function despite the abrupt halving of follicular stockpile in these patients. We performed an extensive and comparative evaluation of the folliculogenesis using homono-follicular markers failing to show major changes in unilaterally oophorectomized when compared with control women. Using the same model, we demonstrated an increased antral follicle responsiveness to exogenous FSH, as assessed by FORT, in normo-ovulating unilaterally oophorectomized women undergoing controlled ovarian hyperstimulation. These results support the hypothesis that increased FSH sensitivity ranks among the possible compensating mechanisms at stake in the maintenance of successful folliculogenesis after unilateral oophorectomy.Finally, using complementary approaches, in vitro and in vivo, we showed that FSH and cAMP enhance AMH transcription, and LH has an additive effect. Gonadotropins and cAMP act through protein kinase A and p38 MAPK signaling pathways and involve the GATA binding factor-4 and steroidogenic factor-1 transcription factors, among others. The expression profile of AMH and the dynamics of serum AMH after gonadotropin stimulation have been interpreted as a down-regulating effect of FSH upon AMH production by GC. We also demonstrated that AMH expression can be differentially regulated by estradiol depending on the estradiol receptors by GC. Therefore the decrease in AMH expression by GC of mature follicles, which mainly express ERβ, is likely due to the effect of estradiol.In short, this Ph.D. work offers new insight into the regulation of the follicular growth and AMH production in woman.

Objetivo: Avaliar os marcadores de reserva ovariana e anticorpos anti-corpo lúteo (anti-CoL) em pacientes com dermatomiosite (DM). Métodos: Todos as 40 pacientes do sexo feminino com DM, idade entre 18 e 42 anos, foram convidadas a participar. Os critérios de exclusão foram uso de contraceptivos hormonais nos últimos seis meses (n=13), associação de neoplasia (n=3), doenças autoimunes sistêmicas sobrepostas (n=3), gravidez atual (n=2), cirurgia ginecológica (n=1) e não concordância em participar do estudo (n=2). Dezesseis pacientes com DM e 23 controles saudáveis selecionados para participar deste estudo transversal foram avaliados na fase folicular precoce do ciclo menstrual. Anti-CoL IgG (immunoblotting), hormônio folículo estimulante (FSH), estradiol, inibina B, níveis séricos do hormônio anti-mülleriano (HAM) (ELISA) e contagem de folículos antrais (CFA) por ultrassonografia foram determinados. Resultados: Pacientes e controles tiveram média de idade, etnia e classe socioeconômica comparáveis (P > 0,05). A média de idade das pacientes foi de 29,1±4,7 anos e duração da doença de 5,6±3,2 anos. O ciclo menstrual, comorbidade e estilo de vida foram semelhantes em ambos os grupos (P > 0,05). HAM <= 1ng/mL (P=0,027) e número da CFA (P=0,017) foram significativamente reduzidos em pacientes com DM quando comparados ao grupo controle, enquanto que níveis séricos de estradiol (P < 0,001) foram maiores em pacientes com DM. Em contraste, os níveis de FSH no soro e inibina B, volumes de ovários, assim como a frequência de anticorpos anti-CoL foram semelhantes em ambos os grupos. Conclusão: O presente estudo foi o primeiro a identificar a reserva ovariana diminuída em pacientes com DM em idade reprodutiva. Mais estudos são necessários para avaliar os fatores envolvidos no prejuízo da reserva ovariana de pacientes com a miopatia inflamatória / Objectives: To assess ovarian reserve markers and anti-corpus luteum (anti-CoL) antibodies in dermatomyositis (DM) patients. Methods: All 40 female patients with DM, aged between 18 and 42 years, were invited to participate. Exclusion criteria were hormonal contraceptive use in the last six months (n=13), neoplasia associations (n=3), overlapped systemic autoimmune diseases (n=3), current pregnancy (n=2), gynecological surgery (n=1) and did not agree to participate of this study (n=2). Sixteen DM patients and 23 healthy controls were evaluated at early follicular phase of menstrual cycle were selected to participate in this cross-sectional study. IgG anti-CoL (immunoblotting), follicle stimulating hormone (FSH), estradiol, inhibin B, anti-müllerian hormone (AMH) serum levels (ELISA) and sonographicantral follicle count (AFC) was determined. Results: DM patients and controls had comparable mean age, ethnicity and socioeconomic class (P > 0.05). DM mean age of onset was 29.1±4.7 years and disease duration of 5.6±3.2 years. The menstrual cycles, comorbidity and life style were similar in both groups (P > 0.05). AMH<=1ng/mL (P=0.027) and number of the AFC (P=0.017) were significantly reduced in DM patients when compared to control groups, whereas serum estradiol level (P < 0.001) was higher in DM patients compared to controls. In contrast, serum FSH and inhibin B levels, ovarian volumes, as well as the frequency of anti-CoL antibody were alike in both groups. Conclusions: The present study was the first to identify diminished ovarian reserve in DM patients of reproductive age. Further studies are necessary to assess the idiopathic inflammatory myopathy-related factors involved in the ovarian impairment of patients

Submitted by CECÍLIA RODRIGUES ALVES SILVEIRA null (c_ras@hotmail.com) on 2017-03-16T23:38:33Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao_Cecilia_Rodrigues_Alves_Silveira.pdf: 1335776 bytes, checksum: 2c41b17b49dd121d78806d292d582d58 (MD5) / Approved for entry into archive by Juliano Benedito Ferreira (julianoferreira@reitoria.unesp.br) on 2017-03-21T18:39:02Z (GMT) No. of bitstreams: 1 silveira_cra_me_jabo.pdf: 1335776 bytes, checksum: 2c41b17b49dd121d78806d292d582d58 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-21T18:39:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 silveira_cra_me_jabo.pdf: 1335776 bytes, checksum: 2c41b17b49dd121d78806d292d582d58 (MD5) Previous issue date: 2016-06-17 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo do presente estudo foi avaliar o desempenho na produção embrionária in vivo e in vitro de doadoras da raça Holandesa não lactantes, verificar a ocorrência de polimorfismos no gene JY-1 e sua associação com a produção in vivo e in vitro de embriões. Primeiramente, foi verificada a similaridade na produção de embrião da mesma doadora entre as biotécnicas (produção in vivo e in vitro), sendo utilizadas 44 vacas e comparados os desempenhos nas produções de embrião. Na produção in vivo de embriões não foram observados efeitos de ano (P=0,13), estação dentro de ano (P=0,46) e touro dentro de estação e ano (P=0,20). Na produção in vitro, também não foram observados efeitos de ano (P=0,64) e estação dentro de ano (P=0,72), entretanto, o efeito do touro dentro da estação e ano foi significativo (P<0,01). Não há correlação entre as produções in vivo e in vitro dentro de doadora (r=- 0,04; P=0,56). Nenhuma probabilidade de semelhança entre as biotécnicas de produção de embriões, ou seja, se a mesma doadora tem o mesmo desempenho nas duas técnicas (acima ou abaixo da média), foi encontrada (P=0,12). Para verificar a ocorrência de polimorfismos no gene JY-1 e sua associação com a produção embrionária, dados retrospectivos de produções in vivo e in vitro de embriões foram obtidos de 144 vacas não lactantes da raça Holandesa. Para a identificação dos polimorfismos do gene JY-1, as regiões do éxon 2 e íntron 2 foram amplificadas e sequenciadas pelo método de PCR-sequenciamento. Foram detectados quatro SNPs [dois no éxon 2 (rs381676360; rs384600927) e dois no íntron 2 (rs378994837; rs211595914)]. O SNP rs381676360 provocou uma substituição não sinônima de aminoácido (leucina/isoleucina) e o rs384600927, uma substituição sinônima do aminoácido valina. Em relação ao equilíbrio de Hardy-Weinberg, uma das quatro frequências genotípicas não se encontrava em equilíbrio (rs211595914; P<0,01). Considerando o teste de desequilíbrio de ligação (DL), maiores valores de r2 (>0,33) foram observados entre os SNPs rs381676360, rs384600927 e rs378994837 (r2=0,767-0,973) e um SNP (rs211595914) apresentou baixos valores de r2 (r2=0,016-0,025). A associação dos SNPs com as características [número de embriões transferíveis produzidos in vivo (NET); taxa de embriões transferíveis in vivo; (%ET); número de embriões produzidos in vitro (NEV); taxa de clivagem (%CLIV) e taxa de embriões in vitro (%EV)] foi verificada. Nenhum dos SNPs isoladamente foi associado às características estudadas. Porém, quando todos os SNPs foram considerados em conjunto quanto à associação às características, valores significativos foram encontrados para o NET (P<0,01), NEV (P<0,01) e %EV (P<0,01). Desta forma, é possível concluir que o desempenho de produção de doadores de embriões depende da biotécnica utilizada. Ainda, que o gene JY-1 possui polimorfismos do tipo SNP em vacas não lactantes da raça Holandesa e que estes estão associados à produção embrionária. / The aim of this study was to evaluate the performance in in vivo and in vitro embryo production in non-lactating Holstein donors, verify the occurrence of JY-1 gene polymorphisms and their association with the in vivo and in vitro embryo production. First, the similarity in embryo production from the same donor between biotechnologies (in vivo and in vitro production) was verified, being used 44 cows and the embryo production performance was compared. In in vivo embryo production no effects of year (P=0.13), season within year (P=0.46) and sire within the season and year (P=0.20) were found. Regarding in vitro embryo production, no effects of year (P=0.64) and season within year (P=0.72) were found, however, the effect of sire within season and year was significant (P<0.01). There was no correlation concerning embryo production between techniques within donors (r=- 0.04, P=0.56). No probability of similarity between the embryo production techniques, i.e., if the same donor has the same performance in two techniques (above or below of the average), was found (P=0.12). To check the occurrence of JY-1 gene polymorphisms and their association with embryo production, retrospective data from in vivo and in vitro embryo production were obtained from 144 non-lactating Holstein cows. For the identification off JY-1 gene polymorphisms, the region of exon 2 and intron 2 was amplified and sequenced by PCR-sequencing method. Four SNPs were found [two in exon 2 (rs381676360; rs384600927) and two in intron 2 (rs378994837; rs211595914)]. SNP rs381676360 caused a non-synonymous amino acid substitution (leucine/isoleucine) and rs384600927 a synonymous substitution of the valine amino acid. Regarding the Hardy-Weinberg equilibrium, one of the four genotypic frequencies was not in equilibrium (rs211595914; P<0.01). For linkage disequilibrium test (LD) higher r2 values (>0.33) were observed between the SNPs rs381676360, rs384600927 and rs378994837 (r2=0.767 to 0.973) and one SNP (rs211595914) showed lower r2 values (r2=0.016 to 0.025). The association of SNPs with the characteristics [number of in vivo transferable embryos (NET); in vivo transferable embryo rate; (%ET); number of in vitro embryos (NEV); cleavage rate (% CLIV) and in vitro embryo rate (%EV)] was observed. None of the SNPs alone was associated with traits. However, when all SNPs were considered together for the association, significant values were found for NET (P<0.01), NEV (P<0.01) and %EV (P<0.01). Thus, it is possible to conclude that the donor embryo production performance depends on the implemented technique. Still, the JY-1 gene has SNP polymorphisms and they are associated with embryo production in non-lactating Holstein cows. / CNPq: 447172/2014-0 / FAPESP: 2014/13162-1

Sabendo do impacto que nutrição e ambiente podem ter sobre a reprodução é de fundamental importância para aplicação nas biotecnologias da reprodução analisar o ciclo reprodutivo de novilhas bovinas (taurinas e zebuínas) e bubalinas, temporalmente, sob as mesmas condições nutricionais e de manejo. Assim, este estudo teve como objetivo analisar temporalmente a dinâmica folicular de novilhas Holandesas, Gir e Búfalas, mantidas sob as mesmas condições de manejo. As fêmeas foram alocadas no Departamento de Reprodução Animal (CBRA/FMVZ/USP), Campus Pirassununga. No Experimento 1 as fêmeas foram pré-sincronizadas com duas doses de prostaglandina F2&alpha; (PGF; Dcloprostenol, 150 &micro;g IM, Prolise&reg;), com 14 dias de intervalo. O dia da primeira ovulação, após segunda dose de PGF, foi considerado como o dia 0 do ciclo. A partir do D0 foram realizadas avaliações diárias da dinâmica folicular (folículos > 3 mm) por ultrassonografia (Aloka SSD500, 7,5MHz), até à detecção da ovulação subsequente. O Experimento 2 foi realizado após a segunda ovulação, avaliando-se a dinâmica folicular a cada 12h para detectar o momento do desvio da primeira onda folicular. As variáveis resposta foram analisadas pelo PROC GLIMMIX do SAS. Não foi encontrada diferença entre os intervalos inter-ovulatórios (22,3±0,65; 22,1±0,95; 23,8±0,63 dias; Holandesas, Gir e Búfalas, respectivamente). No entanto, em relação às características a seguir, foram encontradas diferenças significativas (P<0,05) em pelo menos um dos grupos genéticos, Holandesas, Gir e Búfalas, respectivamente, para o número de ondas foliculares em um ciclo estral (2,6±0,17a, 3,4±0,24b, 2,8±0,11a ondas), número de folículos recrutados após primeira onda (26,1±1,7a, 66,2±15,9b, 22,7±1,91a folículos), e segunda ovulação (30,2±3,08a, 74,2±18,8b, 27,1±2,8a folículos), diâmetro do FD da primeira onda (15,8±0,66a, 12,3±0,32b, 12,1±0,03b mm), diâmetro do FD da segunda onda (11,8±0,73a, 9,4±0,52b, 10,6±0,31ab mm), diâmetro do folículo ovulatório (15±0,33a, 13,7±0,74ab, 13,5±0,46b mm), diâmetro máximo do CL (26,8±0,54a, 22,3±0,98b, 19,5±0,32c mm), concentração máxima de P4 no ciclo (7,7±0,33a, 8,0±0,85a, 5,3±0,28b ng/ml) e duração da dominância do FD da primeira onda (8,0±0,49a, 5,2±1,07b, 8,1±0,44a dias). Ainda com relação aos esteroides, a análise de testosterona plasmática nos 13 primeiros dias do ciclo foi semelhante entre as bovinas e menor para as bubalinas. Insulina e IGF plasmático também foram mensuradas. Novilhas taurinas e bubalinas (4,1±0,67 mUI/ml, 6,0±0,52 mUI/ml, respectivamente) apresentaram menores concentrações de insulina do que as zebuínas (9,0±2,15 mUI/ml), sendo que estas concentrações foram maiores durante a fase luteínica do que na fase folicular. Em relação ao desvio folicular no Experimento 2, não foram encontradas diferenças entre as raças para o momento do desvio (1,8±0,15; 2,1±0,21; 1,8±0,18 dias), entretanto, novilhas Holandesas apresentaram neste momento maior diâmetro de FD e FS (FD: 7,9±0,33; FS: 7,0±0,27 mm; P<0,05) quando comparadas às Gir (FD: 7,0±0,32; FS: 6,2±0,28mm) e às Búfalas (FD: 6,8±0,19; FS: 6,3±0,29mm). Não foram encontradas diferenças para concentrações de IGF-I total no fluído folicular e no plasma das taurinas e das zebuínas, porém as concentrações nas bubalinas foram superiores a das bovinas. Com esses resultados, conclui-se que novilhas de grupos genéticos diferentes (Bos taurus, Bos indicus e Bubalus bubalis) apresentam características de crescimento folicular e luteínico específicos para a raça, quando avaliadas temporalmente e nas mesmas condições de manejo ambiental e nutricional. / Considering the impact that nutrition and environment have over reproduction, it is essential for the reproductive biotechnologies to analyze the reproductive cycle of bovine (taurine and zebu) and bubaline heifers at the same time and under the same nutritional management. Therefore, the objective of this work was to study the follicular dynamic of Holstein (n=15), Gir (n=11) and Buffalo (n=15) heifers kept under the same conditions. All heifers were housed at the Department of Animal Reproduciton, (CBRA/FMVZ/USP), Pirassununga Campus. Animals were pre-synchronized with two doses of prostaglandin F2&alpha; (PGF; Dcloprostenol, 150&micro;g, IM), fourteen days apart (D0 = day of first ovulation). From D0, it was performed daily ultrasound scan of the ovaries to track follicular dynamics (follicles &#8805; 3mm) until the occurrence of the second ovulation. After the second ovulation, the follicular dynamic was performed twice daily to detect the time of deviation of the first follicular wave. The response variables were analyzed by PROC GLIMMIX, SAS. No difference was found among the inter-ovulatory interval (22.3±0.65; 22.1±0.95; 23.8±0.63 days) for Holstein, Gir and Buffalo, respectively. Differences were present (P<0.05) in at least one of the genetic groups, Holstein, Gir and Buffalo, respectively, for number of follicular waves (2.6±0,17a, 3.4±0,24b, 2.8±0,11a waves), number of follicles recruited after first (26.1±1.7a, 66.2±15.9b, 22.7±1.91a follicles), and second ovulation (30.2±3.08a, 74.2±18.8b, 27.1±2.8a follicles), diameter of first wave DF (15.8±0.66a, 12.3±0.32b, 12.1±0.03b mm), diameter of second wave DF (11.8±0.73a, 9.4±0.52b, 10.6±0.31ab mm), diameter of ovulatory follicle (15±0.33a, 13.7±0.74ab, 13.5±0.46b mm), maximum diameter of CL (26.8±0,54a, 22.3±0.98b, 19.5±0.32c mm), maximum concentration of P4 during ovulatory cycle (7.7±0.33a, 8.0±0.85a, 5.3±0.28b ng/ml) and length (8.0±0.49a, 5.2±1.07b, 8.1±0.44a days) of first wave dominant follicle dominance. No differences were found among the breeds for the moment of deviation (1.8±0.15; 2.1±0.21; 1.8±0.18 days). However, Holstein heifers presented larger DF and SF diameter (FD: 7.9±0.33; FS: 7.0±0.27mm; P<0.05) at deviation when compared with Gir (DF: 7.0±0.32; SF: 6.2±0.28mm) and Buffalo (DF: 6.8±0.19; SF: 6.3±0.29mm). Analyzing other steroids, concentration of blood testosterone during the first 13 days of the cycle was similar for the bovine heifers and lower for the bubaline heifers. Blood insulin and IGF-I were also measured. Holstein and bubaline heifers shown smaller concentrations of insulin (4.1±0.67 mUI/ml, 6.0±0.52 mUI/ml, respectively) than Gir heifers (9.0±2.15 mUI/ml), and also, when grouping the data collected from luteal phase and follicular phase, the result shows that during the period of high P4, insulin concentrations are lower than during the period of high E2. No differences were found among bovine breeds for the IGF-I concentration in follicular fluid, but they were lower than the concentrations presented in the bubaline follicular fluid. The results herein presented show that heifers from different genetic groups (Bos taurus, Bos indicus and Bubalus bubalis), maintained at the same nutritional and environmental status, have different folliculogenesis and luteal growth, which are specific to its breed.

O objetivo deste estudo foi avaliar a eficiência da baixa tensão de oxigênio (5% de CO2; 5% de O2 e 90% de N2) na maturação oocitária in vitro em meio quimicamente definido (0,1% de PVA) ou suplementado com 10 % de PFF. Foram avaliados a migração dos grânulos corticais, a quantificação e distribuição da proteína HSP70, a maturação nuclear, as concentrações intracelulares da glutationa reduzida, a avaliação dos índices de penetração espermática e o desenvolvimento e qualidade de embriões fecundados in vitro em oócitos antes da maturação (0 hora) e após a maturação in vitro nos diferentes tratamentos (atmosfera = 5 ou 20% de O2 e suplementação do meio de maturação = 0,1% de PVA ou 10% de PFF). Para verificar a influência da atmosfera e da suplementação do meio no sistema de maturação foram avaliados o ciclo celular das células do cumulus, o número de células do cumulus por oócitos, as concentrações intracelulares de glutationa reduzida (GSH) das células do cumulus, as concentrações de TBARS no meio de maturação e a resistência das células do cumulus ao estresse oxidativo. Avaliações quanto às concentrações de GSH e HSP70 foram realizadas em oócitos in vivo, visando comparar a eficiência do sistema in vitro. Para a maioria dos parâmetros avaliados não houve interação entre a atmosfera e a suplementação do meio de maturação, indicando que o efeito da atmosfera independe do meio utilizado. Foi observado que em atmosfera com baixa tensão de O2 houve diminuição da concentração de glutationa nas células do cumulus, do índice de clivagem e do número total de blastômeros dos embriões e houve aumento do número de células por oócito após o período de maturação in vitro. A suplementação do meio de maturação com 0,1% de PVA diminuiu os índices de migração dos grânulos corticais, contudo não alterou os índices de penetração espermática. Os oócitos do grupo 0 hora apresentaram índices maiores de HSP70 do que cada um dos demais grupos, indicando provável diminuição dos estoques de HSP70 durante o período de maturação em todos os grupos de maturação in vitro. As células do cumulus provenientes de oócitos maturados em meio suplementado com 0,1% de PVA apresentaram maior número de células na fase S e G2/M do que o grupo 0 hora, entretanto isso não refletiu em aumento no número de células por oócito após a maturação. Este trabalho permite concluir que o uso de baixa tensão de oxigênio não melhora as condições do sistema de maturação oocitária in vitro em suínos, sendo que o efeito do uso desta atmosfera é, na maioria das variáveis avaliadas, independente do tipo de suplementação que se utiliza no meio de maturação in vitro. / The aim of this study was to evaluate the efficiency of low oxygen tension (5% CO2, 5% O2 and 90% N2) on in vitro oocyte maturation using defined media (0.1% PVA) or supplemented with 10% PFF. To achieve this goal, oocytes were evaluated prior to in vitro maturation (0 hour) and after in vitro maturation on different treatments (atmosphere = 5 or 20% O2 and media supplementation = 0.1% PVA or 10% PFF) for cortical granules migration, quantification and distribution of HSP70 protein, nuclear maturation, intracellular concentrations of reduced glutathione, evaluation of sperm penetration and development and quality of in vitro-produced embryos. Furthermore, to evaluate the effects on maturation system, several factors were analyzed, such as: the cell cycle phase of cumulus cells, the number of cumulus cells per oocyte, the intracellular concentrations of reduced glutathione in cumulus cells, the concentrations of TBARS in maturation media and the resistance of cumulus cells to the oxidative stress. Some of these evaluations were performed on in vivo oocytes, aiming to analyze oocyte competence after in vitro maturation. Concerning the majority of the parameters analyzed, there were no interaction between atmosphere and the supplementation of maturation media, indicating that the effect of atmosphere is independent of the media used. It was possible to observe that low tension atmosphere of O2 decreased glutathione concentrations in cumulus cells, cleavage rate and total number of embryo blastomeres and increased the number of cells per oocyte after the period of in vitro maturation. The maturation media supplementation with 0.1% PVA decreased the migration of cortical granules; however this fact did not have effect on in vitro sperm penetration levels. The 0 hour oocytes showed higher levels of HSP70 than each one of the in vitro maturated groups, indicating decrease of this protein stock during the maturation period in all of the in vitro maturated groups. The cumulus cells originated from maturated oocytes in supplemented media with 0.1% PVA showed higher number of cells in S and G2/M phase than 0 hour group; however this fact did not reflect in increased cell numbers per oocyte after maturation. Therefore, the use of low oxygen tension does not improve the conditions of the in vitro porcine oocyte maturation system and their effect in most of the factors analyzed is not dependent on the supplementation of maturation media.

Objetivo: Avaliar os marcadores de reserva ovariana e anticorpos anti-corpo lúteo (anti-CoL) em pacientes com dermatomiosite (DM). Métodos: Todos as 40 pacientes do sexo feminino com DM, idade entre 18 e 42 anos, foram convidadas a participar. Os critérios de exclusão foram uso de contraceptivos hormonais nos últimos seis meses (n=13), associação de neoplasia (n=3), doenças autoimunes sistêmicas sobrepostas (n=3), gravidez atual (n=2), cirurgia ginecológica (n=1) e não concordância em participar do estudo (n=2). Dezesseis pacientes com DM e 23 controles saudáveis selecionados para participar deste estudo transversal foram avaliados na fase folicular precoce do ciclo menstrual. Anti-CoL IgG (immunoblotting), hormônio folículo estimulante (FSH), estradiol, inibina B, níveis séricos do hormônio anti-mülleriano (HAM) (ELISA) e contagem de folículos antrais (CFA) por ultrassonografia foram determinados. Resultados: Pacientes e controles tiveram média de idade, etnia e classe socioeconômica comparáveis (P > 0,05). A média de idade das pacientes foi de 29,1±4,7 anos e duração da doença de 5,6±3,2 anos. O ciclo menstrual, comorbidade e estilo de vida foram semelhantes em ambos os grupos (P > 0,05). HAM <= 1ng/mL (P=0,027) e número da CFA (P=0,017) foram significativamente reduzidos em pacientes com DM quando comparados ao grupo controle, enquanto que níveis séricos de estradiol (P < 0,001) foram maiores em pacientes com DM. Em contraste, os níveis de FSH no soro e inibina B, volumes de ovários, assim como a frequência de anticorpos anti-CoL foram semelhantes em ambos os grupos. Conclusão: O presente estudo foi o primeiro a identificar a reserva ovariana diminuída em pacientes com DM em idade reprodutiva. Mais estudos são necessários para avaliar os fatores envolvidos no prejuízo da reserva ovariana de pacientes com a miopatia inflamatória / Objectives: To assess ovarian reserve markers and anti-corpus luteum (anti-CoL) antibodies in dermatomyositis (DM) patients. Methods: All 40 female patients with DM, aged between 18 and 42 years, were invited to participate. Exclusion criteria were hormonal contraceptive use in the last six months (n=13), neoplasia associations (n=3), overlapped systemic autoimmune diseases (n=3), current pregnancy (n=2), gynecological surgery (n=1) and did not agree to participate of this study (n=2). Sixteen DM patients and 23 healthy controls were evaluated at early follicular phase of menstrual cycle were selected to participate in this cross-sectional study. IgG anti-CoL (immunoblotting), follicle stimulating hormone (FSH), estradiol, inhibin B, anti-müllerian hormone (AMH) serum levels (ELISA) and sonographicantral follicle count (AFC) was determined. Results: DM patients and controls had comparable mean age, ethnicity and socioeconomic class (P > 0.05). DM mean age of onset was 29.1±4.7 years and disease duration of 5.6±3.2 years. The menstrual cycles, comorbidity and life style were similar in both groups (P > 0.05). AMH<=1ng/mL (P=0.027) and number of the AFC (P=0.017) were significantly reduced in DM patients when compared to control groups, whereas serum estradiol level (P < 0.001) was higher in DM patients compared to controls. In contrast, serum FSH and inhibin B levels, ovarian volumes, as well as the frequency of anti-CoL antibody were alike in both groups. Conclusions: The present study was the first to identify diminished ovarian reserve in DM patients of reproductive age. Further studies are necessary to assess the idiopathic inflammatory myopathy-related factors involved in the ovarian impairment of patients