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Early Growth Response genes 2 and 3 play a role in chronic inflammation pathology and are essential for the differentiation of T follicular helper cellsOgbe, Ane Theodora January 2015 (has links)
The Early Growth Response genes 2 and 3 (Egr2/3) are zinc finger transcription factors that play an important role in the immune system. These transcription factors have reported functions in T cell receptor signaling, differentiation of effector T cell subsets and the development of lupus-like autoimmune diseases. Using CD2-Egr2-/- Egr3-/- mouse model, I investigate the development of inflammation pathology, differentiation of T follicular helper (Tfh) cells and the formation of germinal centers (GC) following viral challenge within these mice. The onset of inflammation pathology in CD2-Egr2-/- Egr3-/- mice was discovered to correlate with high levels of pro-inflammatory cytokines in the serum and the development of autoimmune diseases as previously reported by Li et al, 2012. Most importantly, a novel role for the Egr2/3 genes in the differentiation of T follicular helper (Tfh) cells was identified. Tfh cells are responsible for T cell dependent antibody immune response in the GC. They support the differentiation of GC B cells into plasma cells producing long lived high-affinity isotype-switched antibodies and memory B cells. Tfh cell differentiation is regulated by Bcl6 however; the regulators of Bcl6 during Tfh differentiation remain largely unknown. We have now discovered that Egr2/3 genes are required for Bcl6 expression during Tfh cell differentiation. In the absence of the Egr2 and 3 genes, Tfh cell differentiation is severely impaired and GC formation and functions were defective in response to Vaccinia Virus Western Reserve strain (VVWR) infection. Further investigation revealed that Egr2 regulated Bcl6 expression in a Tfh-specific manner as adoptive transfer of WT CD4+ T cells into Egr2-/- Egr3-/- mice was able to rescue Bcl6 expression, Tfh differentiation and GC formation. When the molecular mechanism of how Egr2 regulated Bcl6 was investigated, it was uncovered that Egr2 directly bound to the promoter region of Bcl6 gene in CD4 T cells to regulated Bcl6 expression. Indeed constitutive expression of either Egr2 or Bcl6 in CD2-Egr2-/- Egr3-/- CD4+ T cells rescued Tfh cell differentiation and GC formation. Our results inferred that the Egr2/3 genes are essential for Tfh differentiation and GC formation by regulating Bcl6 expression in CD4 T cells under Tfh condition. Our studies thus suggest that the Egr2/3 genes are paramount for minimising immunopathology and are also critical for efficient antibody production by regulating Tfh cell differentiation.
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Presynchronizing injections of prostaglandin F[subscript]2alpha[subscript] or prostaglandin F[subscript]2alpha[ subscript + Gonadotropin-releasing hormone before a fixed time artificial insemination CO-Synch + CIDR program in suckled beef cowsHill, Scott L. January 1900 (has links)
Master of Science / Department of Animal Sciences and Industry / Jeffrey S. Stevenson / We hypothesized that pregnancy outcomes may be improved by inducing luteal regression, ovulation, or both before a control CO-Synch + CIDR program (100 mcg GnRH i.m. [GnRH-1] and insertion of a progesterone-impregnated intravaginal controlled internal drug release [CIDR] insert on d -10, 25 mg PGF2alpha (PG) i.m. and CIDR insert removal on d -3, and 100 mcg GnRH i.m. [GnRH-2] and timed AI [TAI] on d 0) in suckled beef cows. This hypothesis was tested in 2 experiments, in which cows were treated with either PG or PG + GnRH before initiating a control CO-Synch + CIDR program to increase the proportion of cows starting the program in a low (< 1 ng/mL; Exp. 1) or high (≥ 1 ng/mL; Exp. 2) progesterone status, respectively. Blood was collected before each injection for later progesterone analyses. In Exp. 1, cows at 9 locations (n = 1,537) were assigned to either: (1) control or (2) PrePG (same as control with a PG injection on d -13). The PrePG cows had larger (P < 0.05) follicles on d -10 and more (P < 0.05) ovulated after GnRH-1 than controls (60.6 vs. 36.5%). Incidence of estrus between d -3 and 0 was greater (P < 0.05) for treated multiparous cows than multiparous controls and treated and control primiparous cows (74.1 vs. 64.3, 58.6, and 59.1%, respectively). In Exp. 2, cows at 4 locations (n = 803) were assigned to: (1) control (same as Exp. 1) or (2) PrePGG (same as control with PG injection on d -20 and GnRH injection on d -17. Cows with BCS > 5.0 or ≥ 70 d postpartum at TAI were more (P < 0.05) likely to become pregnant than thinner cows or those with fewer days postpartum. Treated cows in both experiments were more (P < 0.05) likely than controls to have luteolysis after initial PG injections and reduced (P < 0.05) serum progesterone. In both experiments, pregnancy rates at d 35 did not differ between treatment and control; however, cows classified as anestrous before d -10, but with elevated progesterone on d
-10, had increased (P < 0.05) pregnancy outcomes than remaining anestrous cows with low progesterone concentrations. In summary, luteal regression and ovulation were enhanced by treatments before the 7 d CO-Synch + CIDR program; however, pregnancy per TAI was not improved.
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Desenvolvimento de sistemas de liberação para a administração tópica passiva e iontoforética do minoxidil no tratamento da alopecia androgênica / Development of delivery systems for the topical passive and iontophoretic administration of minoxidil for the androgenic alopecia treatmentGelfuso, Guilherme Martins 16 December 2009 (has links)
Diante da hipótese de que micropartículas poliméricas podem atravessar a barreira epidérmica através da rota transfolicular, e baseado na evidência de que a iontoforese é um método que consegue direcionar a liberação de fármacos para os folículos pilosos, este trabalho teve como objetivo estudar in vitro a permeação cutânea do minoxidil sulfato (MXS), fármaco utilizado no tratamento da alopecia androgênica, tanto em sua forma microencapsulada como não encapsulada utilizando ou não a iontoforese, na tentativa de aumentar, controlar e direcionar a sua liberação tópica para o folículo piloso. O MXS foi primeiramente incorporado em um gel hidrofílico contendo 2,0% (m/m) do ativo e sua permeação e retenção cutânea in vitro verificada com e sem a presença de corrente elétrica durante 6 h, utilizando células de difusão e pele de orelha de porco. A quantidade de MXS retida no EC da pele foi determinada e diferenciada daquela retida nos folículos pilosos utilizando-se a técnica denominada tape stripping diferencial. Foi observado que o fluxo passivo de fármaco através da pele aumentou 150 vezes com aplicação de iontoforese anódica e que o aumento do pH da formulação de 3,5 para 5,5 restringiu 3 vezes essa permeação iontoforética e aumentou a retenção do MXS no EC e folículos pilosos. Estes resultados mostram que a iontoforese do MXS nestas condições é capaz de promover a liberação folicular do fármaco de maneira bastante significativa. Uma série de micropartículas de quitosana contendo MXS foi obtida por spray drying modificando quantidades e proporções de polímero e fármaco. O sistema selecionado para estudo foi obtido a partir de 1,50 g de polímero e 0,75 g de MXS, e apresentou alta eficiência de encapsulação (~82%), diâmetro médio igual a 3,05 µm, morfologia esférica e sem porosidades, e potencial zeta igual a + 5,87 mV. Quando incorporadas a uma formulação hidroalcoólica, essas micropartículas sofreram intumescimento, aumentando 1,5 vezes o seu diâmetro médio, mas não tiveram sua morfologia esférica alterada. Experimentos de liberação in vitro mostraram que as micropartículas obtidas foram capazes de sustentar 3,5 vezes a liberação do MXS. As micropartículas ainda restringiram a permeação passiva do fármaco, reduzindo 2 vezes seu fluxo de permeação e aumentando em 5 vezes a retenção de fármaco na região folicular, apesar das partículas em si não penetrarem a pele após administração passiva. Assim, este sistema foi capaz de promover uma liberação mais sustentada do fármaco, o que deve reduzir o número de aplicações do produto pelo paciente ao longo do dia, e garantiu a entrada de grandes quantidades do fármaco nos folículos pilosos, seu alvo de ação. A iontoforese dessas micropartículas, apesar de também não fazê-las penetrar a pele, conseguiu direcioná-las mais rapidamente para as aberturas foliculares, como mostrou os estudos de microscopia confocal de varredura a laser das micropartículas marcadas. Adicionalmente, a iontoforese aumentou 6 vezes a quantidade de MXS retida nos folículos já nas primeiras 3 h de aplicação, garantindo assim que grandes quantidades do fármaco atingissem seu local de ação mais rapidamente que quando as partículas foram aplicadas passivamente sobre a pele. / Given the hypothesis that polymeric microparticles can penetrate the skin barrier along the transfollicular route, and based on the evidence that iontophoresis is a method that can direct the delivery of drugs to the hair follicles, this work aimed to study the in vitro skin permeation of minoxidil sulfate (MXS), a drug used to treat androgenic alopecia, both in its micro-encapsulated and non-encapsulated form, using or not iontophoresis, in an attempt to increase, control and direct its topical delivery to the hair follicle. The MXS was first incorporated in a hydrophilic gel containing 2.0% (w/w) MXS and its skin permeation and retention was in vitro observed with and without the presence of electric current for 6 h, using diffusion cells and skin of porcine\'s ears. The amount of MXS retained in EC was determined and differentiated from that retained in the hair follicles using the technique called differential tape stripping. It was observed that the passive flux of drug through the skin was increased 150-fold with the application of anodal iontophoresis and, by increasing the pH of the formulation from 3.5 to 5.5, iontophoretic permeation of MXS was 3-fold restricted, whereas it increased its retention in stratum corneum and hair follicles. These results show that iontophoresis of MXS in these conditions can promote the follicular delivery of the drug quite significantly. A series of chitosan microparticles containing MXS was obtained by spray drying, modifying quantities and proportions of polymer and drug. The system selected for study was obtained from 1.50 g of polymer and 0.75 g of MXS, and showed high encapsulation efficiency (~ 82%), mean diameter of 3.05 µm, spherical morphology without porosities, and zeta potential equal to + 5.87 mV. When incorporated into a hydro ethanolic formulation, these microparticles suffered swelling, increasing 1.5 times its diameter, but their spherical morphology was not modified. Permeation experiments showed in vitro that the microparticles obtained were able to sustain 3.5 times the release of MXS. The microparticles also restricted the passive permeation of the drug, reducing 2-fold its permeation flux and increasing by 5-fold the retention of drug in the follicular region, although the microparticles themselves did not penetrate the skin after passive administration. Thus, this system was able to promote a more sustained release of the drug, which must reduce the number of product applications by the patient throughout the day, and ensured the entry of large amounts of drug in hair follicles, their target. Iontophoresis of microparticles, although not making them penetrate the skin either, was able to direct them quickly to the follicular openings, as shown by laser confocal scanning microscopy studies of the labeled microparticles. In addition, iontophoresis increased 6-fold the amount of MXS retained in the follicles within the first 3 h of application, thereby ensuring that large quantities of the drug achieved its site of action more quickly than when the particles were applied passively to the skin.
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Prospecção retrospectiva de lipídos presentes no líquido folicular associados ao potencial de desenvolvimento dos oócitos / Retrospective analysis follicular fluid lipids associated with the oocytes development potentialAndrade, Gabriella Mamede 28 January 2014 (has links)
A produção in vitro de embriões, no Brasil, ocupa lugar de destaque dentre as biotecnologias da reprodução animal e o atual desafio é torná-la cada vez mais acessível, para tanto, é fundamental aproximar os resultados de produção e sobrevivência dos embriões produzidos in vitro daqueles desenvolvidos naturalmente. Boa parte desta variação do potencial de desenvolvimento do embrião está relacionada à características do oócito. Há a possibilidade de essa capacidade estar relacionada ao perfil lipídico do líquido folicular e das células do folículo, neste sentido, este projeto teve como objetivo principal avaliar a correlação do potencial de desenvolvimento de oócitos com o conteúdo do perfil lipídico no líquido folicular e das células foliculares, baseado no sistema de ativação partenogenética, cultivo individual e analise retrospectiva. Não existe, até o momento, uma caracterização detalhada do microambiente folicular, um componente importante dos fluídos são os lipídios e recentemente tem sido demonstrado que eles estão envolvidos em vários aspectos do metabolismo além de também funcionarem como moléculas sinalizadoras ou até mesmo serem capazes de induzir modificações na cromatina. Os íons oriundos do estudo do perfil lipídico foram avaliados em comparação ao potencial de desenvolvimento do oócito. No conjunto de dados do MALDI observou-se maior concentração de triacilglicerídeos, principalmente contendo ácidos graxos como o oleico, linoleico e esteárico nos líquidos foliculares e células do folículo provenientes do ambiente folicular de oócitos que clivaram. No perfil lipídico do líquido folicular feito por LC-MS/MS os lipídios identificados foram de classes diversas, com participação expressiva no modo positivo de triacilgliceróis, fosfatidilcolinas, esfingomielinas, monoacildiacilglicerídeos entre outros e no modo negativo a classe lipídica que prevaleceu foi dos lipídios mitocondriais, as cardiolipinas. Também foram detectados lipídios citosólicos como o CE e alguns pouco descritos no líquido folicular como o PIP2 e PIP3, além disso, alguns lipídios foram característicos dos grupos clivados e blastocistos. O perfil lipídico do líquido folicular e das células do folículo é complexo e alguns lipídios deste ambiente tem potencial para serem biomarcadores de qualidade oocitária. / In vitro embryo production in Brazil occupies a prominent place among the animal reproduction biotechnology, the current challenge is to make it increasingly accessible so it is essential to approach the results of production and survival of in vitro produced embryos of those developed naturally. Much of this potential change of embryo development is related to the oocyte characteristics. There is the possibility of this ability is related to the lipid profile of follicular fluid and follicle cells , in this sense, this project aimed to evaluate the correlation of the oocytes development potential with the content of the lipid profile in follicular fluid and cells follicular, based on parthenogenetic activation , individual cultivation and retrospective analysis system. There isn\'t, to date, a detailed characterization of the follicular microenvironment, an important component of the follicular fluid and cels are the lipids and recently has been shown that they are involved in various aspects of metabolism in addition also function as signaling molecules or even be capable of inducing changes in chromatin. Derived ions from the study of lipid profile were evaluated compered with oocyte developmental potential. In MALDI dataset observed triacylglycerides higher concentration, mainly containing fatty acids such as oleic, linoleic and stearic acids in follicular fluid and follicle cells from follicular environment of cleaved oocytes. In follicular fluid lipid profile done by LC-MS/MS lipids were identified in diferent classes, with significant participation in positive mode of triacylglycerols, phosphatidylcholines, sphingomyelins, monoacildiacilglicerídeos among others and in negative mode prevailed lipid class was of mitochondrial lipids, the cardiolipin. Cytosolic lipids were also detected as CE and some little follicular fluid as described in the PIP2 and PIP3, and others lipids were characteristic of cleaved and blastocysts groups. The lipid profile of follicular fluid and follicle cells is complex and some of this lipid environment has the potential to be biomarkers of oocyte quality.
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Eficácia do tratamento com antibiótico injetável associado a selante de tetos sobre a saúde do úbere de novilhas com lactações induzidas / Efficacy of injectable antibiotic treatment associated with roof sealant on udder health of heifers with induced lactationMonteiro, Camylla Pedrosa 31 August 2018 (has links)
O estudo teve como objetivos avaliar: 1) produção e composição do leite de novilhas submetidas a protocolo de indução de lactação (PIL); 2) eficácia de antibiótico injetável associado a selante de tetos sobre a prevalência de infecções intramamárias (IIM) e contagem de células somáticas (CCS) e 3) eficácia de GnRH sobre regressão de cistos foliculares (CFs) e taxa de concepção inicial e prenhez acumulada em novilhas tardias. Foram utilizadas 114 novilhas da raça Jersolando (Holandesa x Jersey), com 34,7 ± 4,8 (média ± desvio padrão) meses de idade, 439 ± 56,35 kg de peso corporal e 3,00 ± 0,30 de escore de condição corporal (ECC). O utilizado PIL era composto por benzoato de estradiol, progesterona injetável, prostaglandina, dexametasona e somatotropina recombinante bovina. Dezesseis dias antes do PIL as novilhas foram aleatoriamente distribuídas em dois grupos: a) ATBS (n=57, 1mL/kg Norfloxacina injetável Norflomax®, Ourofino Saúde Animal), via intramuscular associado com selante de tetos (4g subnitrato de bismuto Sellat®, Ourofino Saúde Animal), e b) CONT (n=57) sem a aplicação de nenhum medicamento. A lactação iniciou-se no 21º dia do PIL e os animais foram submetidos à duas ordenhas diárias. No 15º dia de lactação (DEL) foi realizado diagnóstico de CFs e mais dois grupos foram criados de acordo com peso corporal, ECC e presença/ausência de CFs: a) GnRH (n=53, 5 mL de GnRH injetável Sincrofort®, Ourofino Saúde Animal) e b) Controle (n=53). Do total (n=104), 91% das novilhas induzidas responderam com sucesso ao PIL com média de produção de leite de 15,19 kg/leite/dia durante as primeiras 22 semanas de lactação. Os tratamentos foram avaliados em fatorial 2x2, sendo o fator 1 correspondente ao tratamento com ATBS e o fator 2 correspondente ao tratamento com GnRH. O ATBS não alterou a produção de leite quando comparado com o GnRH. A prevalência de IIM nas duas primeiras semanas de lactação foi de 18% com o ATBS e 28% nas não tratadas, e Staphylococcuscoagulase negativa (SCN) foi o patógeno mais frequentemente isolado no 7º (20,95%) e 14º (17,11%) DEL. Os quartos mamários tratados com ATBS tiveram 0,56 vezes menos risco de IIM e diminuíram a CCS em relação aos controles. A aplicação de GnRH não influenciou na cura dos CFs em relação aos controles. A ciclicidade aos 45 dias de lactação foi de 68% e 35% para os animais tratados com ATBS e controle, respectivamente. Já para os tratados com GnRH, a ciclicidade foi de 57% e 46% para o controle. No tratamento com ATBS houve taxa de prenhez acumulada de 60% contra 89% no controle, enquanto que o tratamento com GnRH não influenciou esta variável. A indução de lactação foi eficaz em novilhas e o tratamento com ATBS diminuiu a prevalência de IIM nas duas primeiras semanas de lactação. / The present study aimed to evaluate: 1) the milk production and composition of heifers submitted to lactation induction protocol (PIL), 2) the effectiveness of injectable antibiotic treatment associated with teat sealant on the prevalence of intramammary infections (IMI) and somatic cell count (SCC), and 3) the effectiveness of GnRH treatment on follicular cyst (FC) regression and optimization of the accumulated pregnancy rate in late heifers. Thus, 114 heifers of Jersolando breed (Holstein x Jersey) were used, with 34.7 ± 4.8 (mean ± standard deviation) months of age, 439 ± 56.35 kg of body weight and 3.00 ± 0.30 body condition score (BCS). The heifers were housed in Compost bedded-pack barns shed and submitted to the PIL consisting of estradiol benzoate, injectable progesterone, prostaglandin, dexamethasone and bovine recombinant somatotropin. Sixteen days prior to initiation of PIL, heifers were randomly assigned to two groups: a) ATBS (n = 57, 1mL/kg Norfloxacin injectable Norflomax®, Ourofino Animal Health), intramuscularly, associated with internal teat sealant (4g bismuth subnitrate Sellat®, Ourofino Animal Health), and b) CONT (n=57) without the application of any medication. Lactation began on the 21stday of the PIL and the animals were submitted to two daily milking. On the 15th day in milk (DIM) a diagnosis of FC was performed and two other groups were created according to body weight, BCS and presence / absence of CFs: a) GnRH (n = 53, 5 mL of Sincrofort® injectable GnRH, Ourofino Animal Health) and b) Control (n = 53). From 104 induced heifers, 91% responded successfully to PIL, with a mean milk yield of 15.19 kg/milk/day during the first 22 weeks of lactation. The treatments were evaluated in a 2x2 factorial, with factor 1 corresponding to the ATBS treatment and factor 2 corresponding to GnRH treatment. The ATBS treatment did not change the milk production when compared to those treated with GnRH. The prevalence of IMI during the first two weeks of lactation was 18% for ATBS-heifers and 28% for untreated heifers. Staphylococcus coagulase negative (SCN) was the most frequently isolated pathogen in the 7th (20.95 %) and 14th (17.11%) DIM. The ATBS-treated mammary quarters had a 0,56lower times risk of infection and decreased the SCC compared to controls, with or without GnRH. The GnRH application did not influence on the cure of FCs in relation to control. Cyclicity at 45 days of lactation was 68% for the animals treated with ATBS and 35% for the control, while the animals treated with GnRH had a cyclicity of 57% and 46% for the control. The ATBS had cumulative pregnancy rate of 60%, in the control was 89% and the GnRH treatment did not influence this variable. Induction of lactation was effective in heifers and treatment with ATBS decreased the prevalence of IMI in the first two weeks of lactation.
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Taxa de recuperação in vivo e competência in vitro de oócitos bubalinos, zebuínos e taurinos aspirados em diferentes fases da onda de crescimento folicular. / In vivo recovery rate and in vitro competence of Bubalus bubalis, Bos indicus and Bos taurus oocytes obtained at different phases of follicular waveGimenes, Lindsay Unno 20 September 2010 (has links)
O objetivo do presente estudo foi o de determinar em qual fase da onda de crescimento folicular são obtidas maiores taxas de recuperação e competência de oócitos obtidos por aspiração folicular (OPU) em novilhas cruzadas (Bos indicus x Bos taurus; Capítulo 1) ou em novilhas bubalinas (Bubalus bubalis), zebuínas (Nelore; Bos indicus) e taurinas (Holandês; Bos taurus; Capítulo 2). No Capítulo 1, 30 novilhas cruzadas foram submetidas à OPU aos 2 (D2), 4 (D4) e 6 (D6) dias após a emergência da onda de crescimento folicular (n=10/ grupo), em delineamento "cross-over" realizado em 3 réplicas. Os oócitos recuperados foram selecionados e os viáveis submetidos aos procedimentos de produção in vitro. Os dados foram analisados por ANOVA, utilizando o PROC MIXED, considerando os efeitos fixos de momento de OPU, de réplica e da interação entre eles, e o efeito aleatório de doadora. Foram produzidos maior taxa de blastocistos aos 6 dias pós-FIV, bem como maior número de blastocistos aos 9 dias pós-FIV e maior número de núcleos dos embriões eclodidos quando procedeu-se com aspiração no D2. Contudo, a OPU realizada no D6 também influenciou positivamente a taxa de blastocistos 6 dias pós FIV e não diferiu dos outros momentos com relação ao número de núcleos dos embriões eclodidos. No Capítulo 2, foram realizados 2 experimentos (1 e 2). No Experimento 1, foi avaliado o efeito de 50 mg de progesterona injetável na sincronização de emergência folicular em novilhas Nelore, Holandesas e bubalinas submetidas a protocolo de sincronização à base de progestágeno associado a 2 mg de benzoato de estradiol (n=10/ grupo). Os dados foram analisados por regressão logística, utilizando o PROC GLIMMIX. O momento da emergência folicular não foi afetado pela administração de progesterona injetável, ocorrendo entre 4,2 a 4,5 dias após o início do protocolo de sincronização para os três grupos genéticos. No Experimento 2, foram avaliados os efeitos de momento de sincronização da emergência folicular para a aspiração folicular (1, 3 ou 5 dias após a emergência) e de grupo genético (Nelore, Holandês e búfalo) na produção de embriões in vitro. Um total de 27 novilhas (9 de cada grupo genético, subdivididas nos 3 momentos de aspiração folicular) foram submetidas a 6 sessões de OPU, em delineamento "cross-over". Os oócitos recuperados foram selecionados e os viáveis submetidos aos procedimentos de produção in vitro. Os dados foram analisados por ANOVA, utilizando o PROC MIXED, considerando os efeitos fixos de momento de OPU, de grupo genético, de réplica e da interação entre eles, e o efeito aleatório de doadora. Os resultados demonstraram que novilhas Nelore apresentaram melhor eficiência para a produção de embriões in vitro do que as novilhas Holandesas ou bubalinas, e que a aspiração folicular realizada em diferentes momentos da onda folicular sincronizada não influenciou a produção in vitro. / The objective of the present study was to determine in which phase of follicular wave higher recovery rates and better oocyte competence can be obtained by ovum pickup (OPU) in crossbred (Bos indicus x Bos taurus; Chapter 1) or buffalo (Bubalus bubalis), Nelore (Bos indicus) and Holstein heifers (Bos taurus; Chapter 2). In Chapter 1, 30 crossbred heifers were submitted to OPU on days 2 (D2), 4 (D4) or 6 (D6) after follicular wave emergence (n=10/ group), in a cross-over design performed in 3 replicates. Oocytes recovered were selected and those viable were submitted to in vitro embryo procedures. Data were analyzed by ANOVA, using PROC MIXED, in which time of OPU, replicate and interaction between these factors were considered as fixed effects, and donor was considered as a random effect. Higher blastocyst rate (6 days after IVF), number of blastocysts (9 days after IVF), and number of nuclei of hatched embryos were produced when OPU was done on D2. However, OPU on D6 also produced a higher blastocyst rate (6 days after IVF), and did not differ from other times of OPU concerning number of nuclei of hatched embryos. In Chapter 2, two experiments were performed. In Experiment 1, the effect of 50 mg of injectable progesterone was evaluated in the synchronization of follicular wave emergence of Nelore, Holstein, and buffalo heifers submitted to a progestin plus 2 mg of estradiol benzoate protocol (n=10/ group). Data were analyzed by logistic regression, by PROC GLIMMIX. The time of follicular wave emergence was not affected by administration of injectable progesterone. Besides, follicular wave emergence occurred between 4.2 and 4.5 days after the beginning of synchronization protocol for all genetic groups. In Experiment 2, the effects of time of OPU relative to follicular wave emergence (1, 3 or 5 days) and of genetic group (Nelore, Holstein, and buffalo) on in vitro embryo production were evaluated. A total of 27 heifers (9 of each genetic group, assigned in the 3 times of OPU) were submitted to 6 OPU sessions, in a cross-over design. Oocytes recovered were selected and those viable were submitted to in vitro embryo procedures. Data were analyzed by ANOVA, using PROC MIXED, in which time of OPU, genetic group, replicate and interaction between these factors were considered as fixed effects, and donor was considered as a random effect. Results demonstrated that Nelore heifers showed a better efficiency for in vitro embryo production than Holstein or buffalo heifers. Additionally, OPU performed at different times of synchronized follicular wave did not influence in vitro embryo production.
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Sincronização da ovulação com dispositivo intravaginal de progesterona (CIDR®) em novilhas Bos indicus, Bos indicus x Bos taurus e Bos taurus / Synchronization of ovulation with intravaginal progesterone device in Bos indicus, Bos indicus x Bos taurus and Bos taurus heifersCarvalho, João Batista Pereira de 04 August 2004 (has links)
O presente estudo avaliou os efeitos do tratamento com dispositivo intravaginal de progesterona (CIDR®), associado ao benzoato de estradiol (BE) e à prostaglandina F2α (PGF), sobre a dinâmica folicular de novilhas B. indicus (Nelore e Gir), B. taurus (Angus e HPB) e respectivos cruzamentos. Para avaliar o efeito de diferentes concentrações séricas de progesterona (P4) na dinâmica folicular (fatorial 2 x 3), metade das novilhas dos três grupamentos genéticos receberam uma dose de PGF no momento da inserção do dispositivo (D0). Do D0 à retirada do dispositivo (D8), o crescimento folicular foi monitorado por ultra-sonografia em intervalos de 24h, e do D8 até a ovulação, essa monitoração foi realizada em intervalos de 12h. Amostras de sangue foram colhidas para dosagem da concentração de P4 no D0, no D3, no D6, no D8 e no D10. O diâmetro máximo do FD foi menor (P<0,05) nas novilhas B. indicus (9,5 ± 0,5mm) do que nas cruzadas (12,3 ± 0,4mm) e B. taurus (11,6 ± 0,5mm). O tratamento com PGF no D0 aumentou (P<0,05) o diâmetro do FD (11,9 ± 0,4 x 10,5 ± 0,5mm). A taxa de crescimento do FD foi menor (P<0,05) nas novilhas B. indicus (0,9 ± 0,1mm/dia) do que nas novilhas cruzadas (1,2 ± 0,1mm/dia) e B. taurus (1,1 ± 0,1mm/dia). A taxa de crescimento foi maior (P<0,05) nas novilhas tratadas com PGF no D0 (1,2 ± 0,1 x 0,9 ± 0,1mm/dia). A taxa de ovulação foi menor (P<0,05) nas novilhas B. indicus (39,1 %) do que nas novilhas cruzadas (84,0 %) e B. taurus (72,7 %). Novilhas tratadas com PGF no D0 apresentaram maior (P<0,05) taxa de ovulação (78,8 x 54,0 %). O intervalo entre a retirada do dispositivo de P4 (D8) e a ovulação foi maior (P<0,05) nas novilhas B. indicus (78,0 ± 2,3h) do que nas novilhas B. taurus (73,5 ± 1,0h). A concentração sérica de P4 durante o tratamento (D0 a D8) diferiu (P<0,05) entre as novilhas B. indicus (5,4 ± 0,4ng/ml), B. taurus (3,3 ± 0,2ng/ml) e cruzadas (4,3 ± 0,3ng/ml). A concentração de P4 foi menor (P<0,05) nas novilhas tratadas com PGF no D0 (3,3 ± 0,2 x 5,2 ± 0,3ng/ml). Em resumo, as novilhas B. indicus apresentaram menor taxa de crescimento (mm/dia), menor diâmetro máximo do FD, menor taxa de ovulação e maior concentração sérica de P4 durante o tratamento do que as novilhas B. taurus. O tratamento com PGF no D0 aumentou a taxa de crescimento folicular, o diâmetro máximo do FD e a taxa de ovulação, e diminuiu a concentração sérica de P4 durante o tratamento em novilhas. / This study evaluated the effect of treatment with progesterone intravaginal device (CIDR®) associated to estradiol benzoate (BE) and prostaglandin F2α in the follicular dynamic of B. indicus (Nelore and Gir), B. taurus (Angus and BWH) and respectively cross-breed. Aiming to evaluate the effect of different plasmatic progesterone concentration (P4) in the follicular dynamic (3 by 2 factorial design), a half of heifers in each genetic group received PGF at moment of device insertion (D0). The ultrasonography was performed from D0 to D8 (device withdrawal) every 24 hours, and from D9 to ovulation every 12 hours to evaluate the follicular growth. All heifers were bled on D0, on D3, on D6, on D8 and on D10 for determination of serum progesterone concentration. The maximum diameter of DF was lower (P<0.05) in B. indicus heifers (9.5 ± 0.5mm) than in cross-breed (12.3 ± 0.4mm) and in B. taurus (11.6 ± 0.5mm) heifers. The PGF treatment on D0 increased (P<0.05) the diameter of DF (11.9 ± 0.4 x 10.5 ± 0.5mm). The growth rate of DF was lower (P<0.05) in B. indicus heifers (0.9 ± 0.1mm/day) than in cross-breed (1.2 ± 0.1mm/day) and in B. taurus (1.1 ± 0.1mm) heifers. The growth rate was higher (P<0.05) in heifers that received PGF on D0 (1.2 ± 0.1 x 0.9 ± 0.1mm/day). The ovulation rate was lower (P<0.05) in B. indicus heifers (39.1%) than in cross-breed (84.0%) and in B. taurus (72.7%). Heifers treated with PGF presented higher (P<0.05) ovulation rate (78.8 x 54.0%). The interval between device removal (D8) and ovulation was larger (P<0.05) in B. indicus (78.0 ± 2.3h) than in B. taurus heifers (73.5 ± 1.0h). The mean serum P4 concentration during the treatment (D0 to D8) differed (P<0.05) between B. indicus (5.4 ± 0.4ng/ml), B. taurus (3.3 ± 0.2ng/ml) and cross-breed (4.3 ± 0.3ng/ml) heifers. The P4 concentration was lower (P<0.05) in heifers that received PGF on D0 (3.3 ± 0.2 x 5.2 ± 0.3ng/ml). In brief B. indicus heifers presented lower growth rate (mm/day), lower maximum diameter of DF, lower ovulation rate and higher serum P4 concentration during the treatment than B. taurus heifers. The PGF treatment on D0 increased the follicular growth rate, the maximum diameter of DF and the ovulation rate, decreased the serum P4 concentration during the treatment in heifers.
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Estudo da dinâmica folicular no protocolo de nove dias de sincronização de cios com o uso de um novo dispositivo de liberação sustentada de progesterona, associado ou não ao eCG, em ovelhas Santa Inês / Study of follicular dynamics during nine day estrus synchronization protocol using a new progesterone sustained release device, associated or not with eCG, in Santa Inês ewesBarros, Marina Berrettini Paes de 08 March 2010 (has links)
O presente trabalho teve como objetivo o estudo da dinâmica folicular da ovelha Santa Inês no protocolo de nove dias de sincronização de cios, com e sem a administração do eCG, utilizando um novo dispositivo intravaginal de silicone Primer-PR® (Tecnopec Brasil). No experimento 1, dez ovelhas receberam o dispositivo vaginal no D0, retirada no D9 e aplicação de 0,4mL de d-cloprostenol. Os exames ultrassonográficos foram diários, desde D-3 da colocação do dispositivo vaginal até o D9 e a partir deste, de 12 em 12 horas até a ovulação. Concomitantemente ao experimento 1, as coletas de sangue foram realizadas entre as ovelhas que receberam o dispositivo (grupo GP, n=10) e àquelas em estado fisiológico (grupo GF, n=12). No experimento 2, nove ovelhas receberam igual tratamento do experimento 1 e 250UI de eCG na retirada do dispositivo. Os exames ultrassonográficos para o acompanhamento da dinâmica folicular ocorreram de 12 em 12 horas do D9 até a ovulação. Neste experimento, o sangue foi coletado em dias intervalados desde D-1 até D13. No experimento um, a emergência folicular ocorreu em 8,5 dias ± 16 horas após a colocação do dispositivo vaginal. As ovelhas entraram e saíram do cio, respectivamente, 45,6 ± 12,71h e 72 ± 12,96h após a retirada do mesmo e a ovulação ocorreu em 73 ± 14,38 h. O diâmetro inicial médio do folículo foi de 3,48 ± 0,28 mm e do ovulatório de 5,22 ± 0,72 mm, diferindo significativamente (p=0,006) entre o primeiro e o segundo folículo ovulatório e entre o primeiro folículo de animais com simples (5,77 ± 0,34mm) ou dupla (4,83 ± 0,18mm) ovulação (P=0,003). A taxa de crescimento no período foi 0,73 ± 0,43 (mm/dia). No experimento 2, o estro iniciou-se às 36 ± 6,4h, finalizou às 81 ± 8,46h com a ovulação em 74,3 ± 7,56 h após a retirada do dispositivo vaginal. O diâmetro inicial médio do folículo foi de 4,04 ± 0,78 mm e do ovulatório de 5,40 ± 0,59 mm, diferindo significativamente entre o primeiro folículo de animais com simples (5,91± 0,27mm) ou dupla (5,2 ± 0,22mm) ovulação (P=0,007). A taxa de crescimento folicular no período foi de 0,66 ± 0,43 mm ao dia. No experimento 1, o dispositivo Primer-PR® elevou a concentração plasmática de progesterona do grupo GP a 6,56 ± 2,32 ng/mL, enquanto o grupo fisiológico (GF) ficou em 3,8 ± 2,69 ng/mL no mesmo período. No experimento 2 a concentração plasmática de progesterona durante a permanência do dispositivo vaginal foi de 11,50 ± 3,11ng/mL. Conclui-se que foi possível realizar o acompanhamento da dinâmica folicular dentro do protocolo de nove dias de sincronização de cios na ovelha Santa Inês e que o novo dispositivo utilizado foi eficiente em sincronizar a emergência da onda folicular ovulatória. / The present study aimed the assessment of follicular dynamics in Santa Inês ewes during the nine day estrus synchronization protocol, with or without the administration of eCG, using a new intravaginal silicon device, Primer-PR® (Tecnopec Brasil). In Experiment 1, ten ewes received the vaginal device on D0, which was removed on D9 and received 0,4mL of d-cloprostenol. Ultrasound exams were performed daily, since D-3 of the device placement until D9 and every 12 hours thereafter, until ovulation. During Experiment 1, blood samples were taken from the ewes that received the device (grupo GP, n=10) and the ewes that were in physiological state (grupo GF, n=12). In Experiment 2, nine ewes received the same treatment in Experiment 1 and 250UI of eCG on the day of the device removal. Ultrasound exams for follicular development were performed every 12 hours starting on D9 until ovulation. Blood samples were taken every other day from D-1 until D13. In Experiment 1, follicular emergence occurred in 8,5 days ± 16 hours after the vaginal device placement. The ewes started and ended estrus at, respectively, 45,6 ± 12,71h and 72 ± 12,96h after device removal and ovulation was detected in 73 ± 14,38 h. The mean initial follicle diameter was 3,48 ± 0,28 mm and the mean ovulatory follicle diameter was 5,22 ± 0,72 mm, being statistically different (p=0,006) between the first and second ovulatory follicle and between the first follicle of single ovulation (5,77 ± 0,34mm) or double ovulation individuals (4,83 ± 0,18mm) (P=0,003). The follicular growth rate during this period was 0,73 ± 0,43 (mm/day). In Experiment 2, estrus started at 36 ± 6,4h, ended at 81 ± 8,46h with ovulation occurring in 74,3 ± 7,56 h after the vaginal device removal. The mean initial follicle diameter was 4,04 ± 0,78 mm and the mean diameter ovulatory follicle was 5,40 ± 0,59 mm, differing statistically between the first follicle of single ovulation individuals (5,91± 0,27mm) or double ovulation individuals (5,2 ± 0,22mm) (P=0,007). Follicular growth rate during the period was 0,66 ± 0,43 mm per day. In Experiment 1, Primer-PR® device increased plasmatic progesterone concentration in group GP to 6,56 ± 2,32 ng/mL, whereas physiological group (GF) had 3,8 ± 2,69 ng/mL during the same period. In Experiment 2 plasmatic progesterone concentration throughout the vaginal device use was 11,50 ± 3,11ng/mL. It can be concluded that it was possible to perform ultrasound evaluation of follicular dynamics during the nine day estrus synchronization protocol in Santa Inês ewes and that the new device used was efficient in synchronizing the emergence of ovulatory follicular wave.
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Avaliação da dinâmica ovariana, características uterinas, fluxo sanguíneo uterino e ovariano e concentrações séricas de progesterona em éguas no período pós-parto / Assessment of ovarian dynamics, uterine characteristics, uterine and ovarian blood flow and serum progesterone concentrations in the postpartum period in maresLemes, Kléber Menegon 30 October 2013 (has links)
O objetivo do presente estudo foi avaliar as características de dinâmica ovariana, aspectos do processo de involução uterina e características da hemodinâmica uterina e ovariana em éguas durante o período pós-parto (n = 10). Para isso, o conteúdo apresentado nesta dissertação está dividido em dois capítulos. No primeiro capítulo, os aspectos do processo de involução uterina e características de vascularização endometrial e mesometrial foram avaliados. Uma drástica redução (P<0,05) no diâmetro uterino foi observada durante os primeiros 7 dias pós-parto, com subsequente diminuição nas taxas de involução uterina, sendo que este processo se completou em torno de 21 dias para o corno anteriormente não gravídico (CNG) e 24 dias para o corno anteriormente gravídico (CG). Em relação às quantidades de fluido intrauterino, foi observado aumento nas quantidades entre os dias 1 e 2 pós-parto (d1 e d2), com significativa redução entre o d4 e d7, sendo que nenhuma quantidade de fluido foi observada em nenhum animal após o d16, ou após o terceiro dia pós-ovulação (D3). Nenhuma diferença (P>0,05) foi observada entre os cornos uterinos (CG e CNG) em relação às características de vascularização. Neste contexto, foi observado aumento (P<0,05) nos escores de vascularização endometrial entre d1 e d4, permanecendo semelhante até o d13, assim como aumento (P<0,05) de vascularização mesometrial entre o d1 e d2. No entanto, houve redução (P<0,05) nos escores de vascularização mesometrial do d2 ao d10. Após a ovulação, foi observado aumento de vascularização endometrial do D0 ao D5, com redução dos escores do D5 ao D11 e um novo aumento entre o D11 e o D14. De forma semelhante, o padrão de vascularização mesometrial foi similar ao observado no endométrio. No segundo capítulo, foram avaliados os aspectos de desenvolvimento e vascularização folicular durante o primeiro estro pós-parto, assim como as características de desenvolvimento e vascularização do corpo lúteo (CL) e níveis séricos de progesterona (P4) durante os 16 dias após a primeira ovulação pós-parto. Adicionalmente, os animais foram divididos em dois grupos, sendo o grupo precoce (ovulação antes do d10) ou tardia (ovulação após o d10). Em relação ao desenvolvimento folicular, nenhuma diferença foi observada entre os grupos nos dias relativos à primeira ovulação pós-parto, no entanto, quando avaliados os dias relativos ao parto, diferenças foram observadas entre os grupos. Neste contexto, o grupo precoce apresentou maior diâmetro (P<0,05) do folículo dominante (F1) em todos os dias no período pós-parto inicial (d1-d7), assim como apresentou um maior número de folículos (P<0,05) na classe > 25 mm durante os primeiros dias pós-parto (d1-d3). Adicionalmente, os animais do grupo tardia apresentaram maior número de folículos (P<0,05) na classe de 20-25 mm durante período pós-parto inicial (d4-d7). Em relação às características de vascularização, nenhuma diferença (P>0,05) foi observada entre os grupos quanto a vascularização do F1, pedículo ovariano ipsilateral ao F1, área e vascularização do CL ou níveis séricos de P4. Portanto, no período pós-parto inicial, padrões distintos nas características de vascularização uterina foram observados, porém, após a primeira ovulação pós-parto, os padrões observados assemelham-se aos de éguas não prenhes, possivelmente refletindo um retorno às características uterinas pré-gestacionais. Em relação às características de desenvolvimento folicular, não foram observadas diferenças entre os grupos em relação aos dias precedendo a primeira ovulação pós-parto, assim como as características de dinâmica folicular se assemelham aos resultados obtidos em ciclos de éguas não gestantes. No entanto, quando avaliadas as características em relação ao pós-parto imediato, diferenças no perfil de desenvolvimento folicular foram observadas entre os grupos, devido ao maior desenvolvimento folicular no grupo precoce durante a primeira semana pós-parto. Portanto, apesar do número reduzido de animais, os resultados observados sugerem que eventos cruciais ocorrem antes do parto, levando ao maior desenvolvimento folicular em alguns animais, principalmente os que apresentam rápido desenvolvimento folicular e ovulação pós-parto. / The aim of this study was to evaluate the characteristics of ovarian dynamics, aspects of the uterine involution process and characteristics of uterine and ovarian hemodynamic during the postpartum period in mares (n = 10). Thus, the content presented in this thesis is divided into two chapters. In the first chapter, the aspects of the uterine involution process and characteristics of endometrial and mesometrial vascularization were evaluated. A rapid reduction (P<0,05) in uterine diameter was observed during the first 7 days postpartum, with subsequent decrease in the rate of uterine involution, and this process was completed in about 21 days for formerly nongravid horn (CNG) and 24 days for the formerly gravid horn (CG). For intrauterine fluid accumulations, an increase (P<0,05) was observed between days 1 and 2 postpartum (d1 and d2), with a significant reduction between d4 and d7, and no amount of fluid collections was observed in the animals after d16 or after the third day post-ovulation (D3). No differences (P>0,05) was observed between the uterine horns (CG and CNG) in relation to vascular perfusion characteristics. In this context, an increase (P<0,05) in the endometrial vascularity scores was observed between d1 and d4, remaining similar until d13, as well as an increase (P<0,05) in mesometrial vascularization occurred between d1 and d2. However, a reduction (P<0,05) in scores of mesometrial vasculature was observed from d2 to d10. After ovulation, an increase of endometrial vascularization was observed from D0 to D5, with reduction in scores from D5 to D11 and a further increase between D11 and D14. Similarly, the pattern of mesometrial vascularization was similar to that observed in the endometrium. In the second chapter, follicular development and vascularization were assessed during the first postpartum estrus, as well the characteristics of development and vascular perfusion of the corpus luteum (CL) and serum progesterone (P4) during the 16 days after the first postpartum ovulation. Additionally, the animals were divided into two groups: the group early (ovulation before the d10) or late (ovulation after d10). With regard to follicular development, no difference was observed between groups in days relative to the first postpartum ovulation, however, when evaluated on the day of parturition, differences were observed between groups. In this respect, the early group had a larger diameter (P<0,05) of the dominant follicle (F1) each day in the early postpartum period (d1-d7) and had a greater number of follicles (P<0,05) in the > 25 mm class during the first days postpartum (d1-d3). Additionally, the animals in the late group showed a greater number of follicles (P<0,05) in the 20-25 mm class during early postpartum period (d4-d7). Regarding the characteristics of vascular perfusion, no difference (P>0,05) was observed between groups regarding the vascularization of F1, ipsilateral ovarian pedicle blood flow, area and vascularization of the CL or serum P4. Therefore, in the initial postpartum period, distinct patterns in the characteristics of uterine vascularization was observed, however, after the first ovulation postpartum, the observed patterns resemble those observed in non-pregnant mares, possibly reflecting a return to nonpregnant uterine characteristics. Regarding the characteristics of follicular development, no differences were observed between groups in relation to the days prior to the first postpartum ovulation, as well the characteristics of follicular dynamics are similar to the results obtained in cycles of non-pregnant mares. However, when the characteristics were evaluated concerning the immediate postpartum period, differences in the profile of follicular development were observed between groups, due to increased follicular development in the early group during the first week postpartum. Therefore, although a small number of animals, the results suggest that critical events occur before foaling, leading to increased follicle development in some animals, particularly those with rapid follicular development and postpartum ovulation.
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Etude de la fonction de Patj dans la régulation de la polarité épithéliale. / Study of the function of Patj in the regulation of the epithelial polarity.Penalva, Clothilde 19 December 2014 (has links)
La polarité apico-basale des cellules épithéliales est requise pour le développement de l’épithélium, le maintien de son intégrité et sa fonction. Elle est définie par les relations dynamiques d’un réseau de protéines de polarité qui se localisent asymétriquement et s’excluent mutuellement pour déterminer les différents domaines corticaux. Le complexe Crumbs (Crb) est un déterminant clé du domaine apical, essentiel et suffisant pour sa définition. Patj, une protéine contenant un domaine L27 et 4 domaines PDZ, a été identifiée comme faisant partie biochimiquement du complexe Crb (via Stardust), mais sa fonction reste à préciser. Au cours de ma thèse j’ai analysé la fonction Patj chez la drosophile. La mutation Patj est létale et induit une perte de Crb de la membrane apicale dans l’épithélium folliculaire, mais pas dans l’embryon. La fonction de Patj est donc tissu spécifique. J’ai pu mettre en évidence que Patj régule positivement Crb et que les domaines PDZ1 ou PDZ4 associés au domaine L27 sont suffisants pour la fonction de Patj. J’ai de plus tenté de déterminer comment Patj régule Crb à l’échelle moléculaire. Tout d’abord, l’analyse fonctionnelle in vivo suggère que Patj régulerait la stabilité de Crb indirectement en favorisant le recrutement d’autres déterminants du domaine apical au sein du complexe. Ensuite, des approches biochimiques et génétiques ont permis de montrer qu’en plus d’interagir indirectement avec Crb, Patj interagit aussi directement via ces domaines PDZ1 et PDZ4. Ces données permettent de proposer un modèle mécanistique dans lequel Patj en liant à la fois Sdt et Crb formerait des dimères de Crb, qui en association avec sa dimèrisation extracellulaire déjà connue permettrait la formation d’oligomères de Crb à la membrane apicale. L’oligomérisation de Crb favoriserait son activité de déterminant apical. De plus, j’ai observé une redondance entre Patj et Lin-7, un autre membre du complexe Crb, dans la polarité apico-basale, une telle fonction pour Lin-7 n’ayant pas encore été reportée. Ainsi, mes travaux apportent de nouveaux éléments pour la compréhension de la polarité épithéliale. / Apico-basal polarity is required for epithelium development, function and integrity. Polarization is defined by a network of polarity proteins that are localized asymmetrically and the dynamic interplay between them. Crb is a key determinant of the apical domain, necessary and sufficient for its identity. Patj, a protein containing a L27 domain and four PDZs domains, has been identified as a core component of the Crb complex, as it interacts with Crb through Sdt. But its function remains elusive. During my thesis I investigated Patj function in Drosophila. Patj mutation is lethal and induces a decrease of Crb from the apical domain in the follicular epithelium, but not in embryonic epithelium. Thus, Patj function is tissue-specific. Patj positively regulates Crb, and the PDZ1 or PDZ4 together with the L27 domain of Patj are sufficient for its function. Then, I focused on the molecular mechanism underlying Crb regulation. In vivo analysis suggests that Patj regulates Crb stability indirectly by modulating its ability to recruit apical proteins. Biochemical and genetics analyses allow showing that in addition of its indirect interaction through Sdt, Patj interacts directly with Crb through its PDZ1 and PDZ4. Extra-cellular dimerisation of Crb is involved in a feedback promoting its apical localization. Patj with Crb direct interaction could participate to this feedback via an intra- cellular dimerisation, allowing Crumbs oligomerisation at the apical membrane. In addition, I have seen that Patj is redundant with Lin-7, another core component of Crb complex, for apico- basal polarity. In conclusion my thesis work provides new clues for the understanding of epithelial polarity regulation.
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