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Virtual reunification of papyrus fragments

Vannini, Lucia 20 April 2016 (has links) (PDF)
Many Greek and Latin papyri, originally belonging to only one book (be it in roll or codex form), are currently scattered among different libraries. While it is not possible to physically rejoin these fragments as they cannot be moved from their institutions, they may be virtually reunited thanks to the techniques of digitisation, image processing and electronic publishing. This paper focuses on some issues – emerged from the work of my MA dissertation – that virtual reunification of Greek and Latin papyri presents. Firstly, I propose a workflow for the creation of a digital edition of virtually rejoined fragments, by applying the model of virtual reunification recently suggested by R. Punzalan in Understanding Virtual Reunification (2014), the first systematic study on this topic. Also, as a principal reference point among the existing projects, I follow the Sinaiticus Project website, which, similarly, deals with an ancient Greek manuscript now dispersed in different institutions; however, while the Sinaiticus Project is exclusively dedicated to that artefact, the edition here proposed includes the possibility to be widened, in order to allow researchers to possibly include more reunified papyri in the future. Secondly, I propose some recommendations that can be followed by the owning institutions in order to digitise their fragments according to a common strategy. Finally, I focus on how a virtual reunification of papyrus fragments can be technically achieved – in other words, how the transcription code can present unified information about the papyrus as a whole and mark the parts of text belonging to each fragment. This project will hopefully help researchers study papyri divided among different libraries in a more systematic way, thanks to the availability of an electronic edition including the whole text and images of the virtually reunited fragments, and thanks to a consolidation of metadata.
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The role played by quasi-elastic and inelastic break-up of the 12C and 16O projectiles in the production of intermediate mass fragments at 14-35 MeV/u

Mira, Joele Paulus 12 1900 (has links)
Thesis (PhD)--Stellenbosch University, 2013. / ENGLISH ABSTRACT: See full text for the abstract / AFRIKAANSE OPSOMMING: Sien volteks vir die opsomming
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Maturation of Practices

Brunious, Wendell J 09 May 2014 (has links)
The disparate concepts of Pop Art and abstract painting heavily influence the scope of my work. Finding a link between these two concepts has been the focal point of my studio practices. The apex of my process is the focus on commercial imagery as abstract form. The merging of these two concepts presents a complex composition of balance, color and information. This thesis explores the various concepts as well as influences that have propelled the evolution of my work. It chronicles the steps I have taken in my quest to articulate my conceptual ideas. By describing the works and defining their characteristics, this analysis gives further insight to my perception as well as process.
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Manejo de lianas em bordas de floresta estacional semidecidual e de cerradão, Santa Rita do Passa Quatro, SP / Management of lianas in semideciduous forest and cerradão edges, Santa Rita do Passa Quatro, SP

Jordão, Sônia Maria Schaefer 03 February 2010 (has links)
No Estado de São Paulo, dentro de uma mesma zona climática, a floresta estacional semidecidual e o cerradão são comumente encontrados dividindo o espaço. Atualmente, essas duas formações encontram-se reduzidas a pequenos fragmentos florestais, em estágio avançado de perturbação. Com a fragmentação da floresta, há um aumento da luminosidade nas bordas dos remanescentes florestais e lianas heliófitas podem aumentar suas populações e competir vigorosamente com as espécies arbustivo-arbóreas. O objetivo desse estudo foi verificar o efeito do manejo das lianas sobre o processo de restauração florestal em bordas perturbadas de floresta estacional semidecidual e de cerradão. Também foi analisada a influência do tipo de vizinhança sobre a borda florestal e sobre os resultados do manejo. O experimento foi instalado na região de Santa Rita do Passa Quatro, SP, em bordas de floresta estacional semidecidual, com vizinhanças de cana-de-açúcar e rodovia e em bordas de cerradão, com vizinhanças de eucalipto, cana-deaçúcar e rodovia. O delineamento experimental foi de blocos casualizados, com parcelas de 100m2 e 3 repetições. Nas bordas de floresta estacional semidecidual foram testadas 3 técnicas de manejo: corte de lianas (C), corte de lianas + revolvimento do solo (CR) e corte de lianas + plantio de espécies arbóreas nativas (CP). Nas bordas de cerradão foram testadas 2 técnicas de manejo: corte de lianas (C) e corte de lianas + revolvimento do solo (CR). Para análise do processo de restauração florestal, foram avaliados o crescimento médio em altura e diâmetro das espécies arbustivoarbóreas, a mortalidade média e o número médio de indivíduos ingressantes no estrato arbustivoarbóreo, a chuva de sementes e a mortalidade média e o número médio de indivíduos ingressantes no estrato da regeneração. Nas duas formações florestais, verificou-se uma diminuição na riqueza de espécies arbustivo-arbóreas e no número de árvores de maior porte, no sentido das bordas com vizinhança de eucalipto, para as bordas com vizinhanças de cana-de-açúcar e rodovia, respectivamente. Tanto nas bordas de floresta estacional semidecidual, quanto de cerradão, os resultados do manejo das lianas foram influenciados pelo grau de infestação por lianas, pela estrutura da vegetação recém manejada, pelas espécies presentes e pela vizinhança do fragmento florestal. Embora na maioria dos casos as diferenças não tenham sido significativas, efeitos positivos do corte das lianas foram observados para o crescimento médio em altura ou diâmetro dos indivíduos, principalmente nas áreas mais infestadas. No entanto, nas bordas com vizinhança de rodovia, o corte das lianas pode intensificar os efeitos de borda, a ponto de prejudicar o ingresso das espécies arbustivo-arbóreas no estrato da regeneração. Nas bordas de floresta estacional semidecidual, o corte das lianas não será suficiente para promover a recuperação da fisionomia florestal, pois os indivíduos presentes sob as lianas correspondem a espécies de subbosque, sendo necessário o enriquecimento das bordas com espécies de dossel. Nas duas formações florestais, o revolvimento superficial do solo não favoreceu a regeneração das espécies arbustivo-arbóreas. / In São Paulo state, throughout the same climatic zone, semideciduous forests and cerradão patches commonly share the same geographic area. Currently, these two formations are reduced to small fragments, in advanced stage of disturbance. Along with the fragmentation of the forest, there is an increase in ligth incidence at the edges and lianas generally increase their populations, competing vigorously with trees and shrubs species. The objective of this study was to verify the effect of management of lianas on the processe of restoration of forest physionomy in disturbed edges of semideciduous forest and cerradão. It was also analyzed the influence of matrix on the edge of forests and the results of liana removal management. The experiment was installed in Santa Rita do Passa Quatro, SP, on the edges of semideciduous forest fragments surrounded by sugar cane and roads, and cerradão fragments bordered by eucalyptus plantations, sugar cane and roads. The experimental design was randomized with blocks of plots of 100m2 and 3 replications. At the edges of semideciduous forest three techniques of management were tested: cutting of lianas (C), cutting of lianas + revolving surface soil (CR) and cutting of lianas + planting of native tree species (CP). On the edges of cerradão two management alternatives were tested: cutting of lianas (C) and cutting of lianas + revolving surface soil (CR). To analyze the process of restoration of forest physionomy, we assessed the average growth in height and diameter of tree and shrub species, the average mortality and average number of individuals entering the tree stratum, the rain seed, the average mortality and the average number of individuals entering the stratum of regeneration. In both forests, there was a decrease in the richness of tree and shrub species and the number of larger trees from areas surrounded by eucalyptus to areas in a matrix of sugar cane and road. The results of lianas management, both on semideciduous forest and cerradão, were influenced by the degree of infestation, by the structure of vegetation recently managed, by the species composition and by the nature of surrounding matrix. Although in most cases the differences were not significant, positive effects of cutting lianas were observed on the average growth in height or diameter of the individual, mainly in the most infested areas. However, when the edges are contiguous to roads, lianas removal may intensify edge effects, as to disturb the number of individuals entering the stratum of regeneration. On semideciduous forests, cutting the lianas on the edges alone will not be enough to promote the recovery of the forest structure, because individuals providing support for lianas are understory species, being necessary the enrichment of the edges with the tree canopy species. In both forests, the revolving surface soil did not favor the regeneration of arbustive-arboreal species.
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Estudo espectroscópico de anticorpos empregando-se superfícies SERS-ativas visando o desenvolvimento de imunossensores / Spectroscopic study of antibodies employing SERS-active surfaces for the development of immunosensors

Almeida, Raquel Mariano de 15 April 2016 (has links)
Este estudo empregou anticorpos que podem ser peças chaves no eventual desenvolvimento de imunossensores, devido as suas características de seletividade e consequente determinação de espécies de interesse em análises clínicas, ambiental, saúde publica, entre outros. Para isto, foram feitos estudos de espectros Raman e SERS de anticorpos inteiros e/ou fragmentados (IgG humana, anti-IgG humana (H+L) e anti-IgG humana (Fab2)). Com isto, foram conhecidos os principais modos vibracionais destas biomoléculas que são úteis para a proposta de se construir imunossensores. Ambas as técnicas fornecem informações a respeito da estrutura secundária de proteínas. Quando há a imobilização dessas biomoléculas sobre superfícies SERS-ativas, é possível determinar a sua orientação. Considerando-se que na técnica SERS existe a possibilidade de se detectar uma molécula, por meio de hot spots, é importante que as imunoglobulinas estejam sem impurezas como, por exemplo, a albumina e transferrina no caso de anticorpos provenientes do soro humano. Assim, foram feitos experimentos de purificação dos anticorpos por meio de colunas de afinidade contendo proteína A, G ou uma mistura de A e G imobilizadas e, também, separação baseada no ponto isoelétrico. Testou-se a capacidade de ligação (quimissorção) de IgG humana ou de seus fragmentos F(ab)\' sobre superfícies de ouro por meio da técnica QCM-D. Para o estudo de superfícies SERS-ativas foram sintetizadas nanopartículas de ouro (NP-Au), com a aquisição de espectros de extinção no UV-Vis e obtenção de imagens MEV para caracterizá-las. Também, foram feitas variações no preparo de nanocubos de ouro (NC-Au) para obtenção de nanobastões de ouro (NB-Au), tendo-se em vista que estruturas com pontas favorecem a intensificação do sinal Raman em superfícies SERS-ativas. Por fim, considerando-se a existência de diversas ligações S-S, principalmente na região denominada dobradiça, no espectro SERS de IgGh diluída e do fragmento F(ab)\' constatou-se o surgimento de uma banda característica de C-S em 679 cm-1. Por isso, foi feita uma proposta da possível orientação desses anticorpos não fragmentados para que assumissem uma orientação sobre as superfícies SERS-ativas com características semelhantes às dos fragmentos F(ab)\'. / This study used antibodies that can be key elements in the possible evelopment of immunosensors, due to its selectivity and the consequent determination of species of interest in clinical analysis, environmental, public health, among others. For this, Raman and SERS spectra studies were made of whole and/or fragmented antibodies (human IgG, anti-human IgG (H + L) and anti-human IgG (Fab2)). With this, it were known the main vibrational modes of these biomolecules, useful for the proposal to assemble immunosensors. Both techniques provide information on the secondary structure of proteins. When these biomolecules are immobilized on SERS-active surfaces, it is possible to determine their orientation. Considering that, in the SERS technique, it is possible to detect a molecule through hot spots, it is important that the immunoglobulins are free of impurities, such as albumin and transferrin in the case of antibodies from human serum. Thus, purification experiments of antibodies were made via affinity columns containing protein A, G or a mixture of A and G immobilized and also separation based on isoelectric point. It was tested the binding capacity (chemisorption) of human IgG or its F(ab)\' on gold surfaces by means of QCM-D technique. For the study of SERS-active surfaces of gold nanoparticles were synthesized (Au-NP), with the acquisition of extinction spectra in the UV-Vis and obtaining SEM images to characterize them. Also, changes were made in the preparation of nanocubes gold (Au-NC) to obtain gold nanorods (Au-NR), having in view that ends with structures favor the enhancement of Raman signal on SERS-active surfaces. Finally, considering the existence of various S-S links, particularly in the region called hinge, in the SERS spectrum of diluted hIgG and F(ab)\', it was found the display of a characteristic band C-S 679 cm-1. Therefore, a proposal was made about the possible direction of these non-fragmented antibodies to assume an orientation on the SERS-active surfaces with similar characteristics to the F(ab)\'
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Microbiota cutânea e secreções dérmicas de Proceratophrys boiei (Amphibia, Anura) em fragmentos de Floresta Atlântica / Cutaneous Microbiota and Skin Secretions on Proceratophrys boiei (Amphibia, Anura) in Atlantic Forest Fragments

Assis, Ananda Brito de 01 December 2015 (has links)
A pele dos anfíbios atua como primeira barreira de proteção contra microorganismos invasores. Além dos componentes mecânicos, essa proteção deve incluir mecanismos bioquímicos e biológicos derivados tanto da comunidade microbiana ali residente quanto da secreção de moléculas bioativas a partir de glândulas dérmicas. Os objetivos gerais deste estudo foram: caracterizar a comunidade microbiana hospedada pela espécie Proceratophrys boiei e analisar a sua relação com comunidades microbianas ambientais; avaliar se nessa espécie a microbiota e a secreção cutâneas podem ser entendidas como um componente de proteção; avaliar a estabilidade de tais componentes a partir de diferentes populações em fragmentos florestais. Especificamente, as seguintes hipóteses foram testadas: 1. A composição da microbiota ambiental varia entre os fragmentos e micro-hábitats de Floresta Atlântica amostrados e tem relação com alguns parâmetros ambientais analisados; 2. A diversidade da microbiota cutânea de P. boiei é relacionada à diversidade da microbiota nos ambientes que ocupa. Ademais, em termos de composição, a microbiota cutânea é um subconjunto da microbiota ambiental que ocorre nos seus micro-hábitats; 3. A riqueza e abundância de bactérias da microbiota cutânea de P. boiei varia entre os diferentes remanescentes de Floresta Atlântica; 4. A riqueza e a abundância de bactérias presente na pele de P. boiei com atividade antimicrobiana varia entre populações ou locais de amostragem; 5. Existe efeito antimicrobiano das secreções sobre alguns patógenos e os perfis das secreções cutâneas diferem entre populações de P. boiei. Os resultados mostraram que a microbiota cutânea de P. boiei apresenta variações entre indivíduos e populações. Além disso, a qualidade do hábitat pode ser importante para a composição de bactérias hospedadas. Existe um compartilhamento de bactérias entre a microbiota cutânea de P. boiei e os micro-hábitats solo e água, ocupados por essa espécie, porém as comunidades dérmicas compõem-se principalmente por bactérias não detectadas nas amostras ambientais analisadas. Foi observada certa estabilidade na estrutura da microbiota cutânea de P. boiei quando analisadas populações distintas, mas variações na distribuição de morfotipos bacterianos em uma mesma localidade ocorre. Microbiota cutânea e secreções dérmicas de P. boiei podem prevenir infecções na pele, dada a atividade antimicrobiana demonstrada nesta pesquisa. Contudo, variações nos espectros de ação foram observadas em ambos os componentes, assim como, diferenças populacionais nas abundâncias e percentuais de bactérias produtoras de antimicrobianos. O estudo também demonstrou que certas características independem do contexto ambiental ocupado pelas populações, uma evidência de que o microambiente da pele dessa espécie oferece condições e certa estabilidade para a colonização de comunidades bacterianas específicas. A sustentabilidade de populações dessa espécie pode estar relacionada às interações entre hospedeiro, microrganismos e ambiente. / The skin of amphibians acts as first barrier of protection against invading microorganisms. Besides the mechanical components, this protection probably include biochemical and biological mechanisms derived from both the resident microbial community and the secretion of bioactive molecules from dermal glands. The aims of this study were to characterize the microbial community hosted by Proceratophrys boiei and analyse its relationship with environmental microbial communities; evaluate whether microbiota and skin secretion of this species can be understood as a protection component; evaluate the stability of these components through different populations in forest fragments. Specifically, the following hypotheses have guided this research: 1. The composition of environmental microbiota varies among microhabitats and fragments of Atlantic Forest and relates to some environmental parameters; 2. The diversity of skin microbiota of P. boiei relates to the diversity of microbes in the environment it occupies. Furthermore, in terms of composition, the skin microbiota is a subset of environmental microbes that occurs in its microhabitat; 3. The richness and abundance of bacteria from the skin microbiota of P. boiei varies between different remnants of Atlantic Forest; 4. The richness and abundance of bacteria present on the skin P. boiei with antimicrobial activity varies between populations or sampling sites; 5. There is antimicrobial activity of the skin secretions against some pathogens and its profiles differ between populations of P. boiei. The results showed variations on the microbial skin of P. boiei between individuals and populations and the quality of habitats could be important for the composition of hosted community. There is a sharing of bacteria between the skin microbiota of P. boiei and the microbial communities of microhabitats soil and water. However, mainly bacteria not detected in environmental samples composes the dermal communities. We observed some stability in the structure of the skin microbiota when analysed different populations, but variations in the distribution of bacterial morphotypes occurs in all sites. Skin microbiota and dermal secretions of P. boiei can prevent infection through the skin, according to the antimicrobial activity demonstrated in this study. There were variations in the action spectrum for both components, but population differences were mainly in abundance and percentage of bacteria producing antibiotics. This research showed the importance of the microbiota and skin secretion of P. boiei as components of protection and the importance of the environment for the composition of these associated communities. At the same time, we have shown that certain characteristics are independent of the environmental context occupied by the population, evidence that the microenvironment of the skin provides a certain stability for the colonization of specific bacterial communities. The sustainability of populations of this species may relates to interactions between host organisms and the environment.
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Enganos, enganadores e enganados no mito e na tragédia da Eurípides / Deceptions, deceivers and deceived in Myth and Euripides tragedy

Ribeiro Junior, Wilson Alves 05 August 2011 (has links)
O engano, enquanto reflexo da realidade, está representado em diversos gêneros literários e na literatura de várias épocas. Este trabalho analisa, primariamente, os antecedentes míticos, o léxico e a estrutura dramática dos enganos mencionados ou encenados em todas as tragédias conhecidas de Eurípides, completas ou fragmentárias. Precede a análise um breve estudo da teoria comportamental do engano e de sua presença na literatura antiga, notadamente a da Grécia (dos poemas homéricos até o fim do século -V), e um excurso sobre o engano na poesia pré-euripidiana e sua influência na tragédia grega. A última parte do estudo compreende uma sistematização da estrutura do engano euripidiano e de seu léxico. / Deception, as a reflex of our reality, can be found in many literary genres and literary compositions of all times. This work deals primarily with the mythical antecedents and with lexical and dramatical structure of deceits briefly described or staged in all known Euripides complete or fragmentary tragedies. A study on behavioral deception theory and its presence in ancient literature, specially in Greece from homeric poems until the fifth century B.C., with an excursus on deception in pre-euripidean poetry and its influence in Greek tragedy precedes the analysis. A systemization of lexical and structural characteristics of euripidean deception completes the study.
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"O uso de técnicas de play-back no desenvolvimento de um método capaz de atestar a presença ou ausência de aves no interior de fragmentos florestais" / Using playback techniques to develop a method able to attest the presence or absence of birds inside forest fragments

Boscolo, Danilo 01 July 2002 (has links)
Nosso objetivo foi desenvolver um método para atestar a presença ou ausência de seis espécies de aves (Basileuterus leucoblepharus, Batara cinerea, Carpornis cucullatus, Chiroxiphia caudata, Pyriglena leucoptera e Trogon surrucura) em fragmentos florestais. Foi determinado o horário do dia e época do ano em que o play-back é mais eficiente em atestar a presença dessas aves. Os testes ocorreram na Reserva Florestal do Morro Grande (Cotia, SP). Três horários foram testados (manhã, meio do dia e tarde) ao longo de um ano. O teste G verificou a variação de eficiência entre os diferentes horários, e o teste de Rayleigh a variação anual. A manhã e o meio do dia apresentaram-se mais eficientes que a tarde para B. leucoblepharus, C. caudata e T. surrucura. A única ave a apresentar uma época do ano mais eficiente foi B. cinerea. Para avaliar sua eficiência, a capacidade do método em atestar a presença das aves em 13 fragmentos foi correlacionada com sua abundância nos mesmos. Os testes ocorreram quatro vezes em cada área nos momentos de maior eficiência. Os resultados indicam que C. caudata seja recenseada pelo menos duas vezes por fragmento. Três visitas é o mínimo para B. cinerea, B. leucoblepharus, P. leucoptera e T. surrucura. Para C. cucullatus deve-se ser repetir quatro vezes. O método foi criado para gerar rapidamente dados de presença e ausência em grande quantidade de fragmentos. Essa informação pode auxiliar estudos sobre dinâmica de metapopulações destas espécies. / In order to provide rapid access to presence/absence data of six species of birds (Basileuterus leucoblepharus, Batara cinerea, Carpornis cucullatus, Chiroxiphia caudata, Pyriglena leucoptera and Trogon surrucura) inside forest fragments, an efficient playback method was developed. The broadcast of these birds’ vocalizations was carried out at the Morro Grande Forrest Reserve (Cotia, SP). Playback tests were executed three times a day (sunrise, noon and before sunset) during one year. Daily and seasonal variations in the efficiency of the play-back were tested with G-statistics and the Rayleigh test. Sunrise and noon were more efficient than the period before sunrise to B. leucoblepharus, C. caudata and T. surrucura. The only species to show an annual period of higher rate of response was B. cinerea. To evaluate the real efficiency of the method, 13 forest fragments were surveyed for presence of these birds. The data was compared to the abundance of the birds in these areas. Each fragment was surveyed four times. At least two surveys are needed for C. caudata. Three surveys are the minimum effort to access the distributional pattern of B. leucoblepharus, B. cinerea, P. leucoptera and T. surrucura. Due to its rarity, C. cucullatus must be censused not less than four times. The method developed in the current study was created to provide a rapid access to the patch occupancy patterns of these six species in a large number of fragments. That kind of data may be very useful in studies about metapopulation dynamics and conservation ecology.
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Fragmentos de cerrado : espécies arbóreas de usos múltiplos para conservação do cerrado /

Silva, Alexandre Marques da. January 2019 (has links)
Orientador: Mario Luiz Teixeira de Moraes / Resumo: O conhecimento da ecologia e da genética das espécies arbóreas que ocorrem nos fragmentos do Bioma Cerrado é uma etapa importante para a criação de programas conservacionistas. Os objetivos deste trabalho foram: i) identificar e selecionar fragmentos de Cerrado, na região de Três Lagoas – MS, que apresentam diversidade em relação à ocorrência de espécies arbórea; ii) localizar, nos fragmentos selecionados, os indivíduos das espécies arbóreas, que se destacam quanto as possibilidades de utilização de produtos não madeireiro; iii) marcar árvores matrizes, nas espécies arbóreas selecionadas, com base em caracteres de crescimento e na sua localização, para que os fragmentos possam ser denominados de “áreas de coleta de sementes – ACS”. O estudo foi realizado em quatorze fragmentos do Bioma Cerrado distribuídos em sete fazendas no município de Três Lagoas, (MS). A distância em quilômetros entre os fragmentos, variou de 3,0 a 64,8 km. O levantamento das espécies arbóreas ocorreu mensalmente entre os meses de julho a dezembro de 2012 e 2013. Todos os fragmentos foram visitados, e, nestes, foi realizado levantamento de diversidade das espécies arbóreas com potencial para produtos não madeireiros e madeireiros. A identificação das espécies arbóreas dos fragmentos foi feita a partir de caminhamento dentro da área e nas bordas, a considerar indivíduos reprodutivos. Para conhecer as estratégias ecológicas das espécies arbóreas de interesse, pesquisou-se sobre as características ecológica... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Knowledge of the ecology and genetics of tree species occurring in the Cerrado Biome fragments is an important step towards the creation of conservation programs. The objectives of this work were: i) to identify and select Cerrado fragments, in the Três Lagoas - MS region, which present diversity in relation to the occurrence of arboreal species; ii) to locate, in the selected fragments, the individuals of the tree species, which stand out as the possibilities of use of non-timber products; and (iii) marking selected tree species, based on growth characters and their location, so that the fragments can be referred to as "ACS - seed collection areas". The study was carried out in fourteen fragments of the Cerrado Biome distributed in seven farms in Três Lagoas, (MS). The distance in kilometers between the fragments ranged from 3.0 to 64.8 km. The survey of tree species occurred monthly between July and December of 2012 and 2013. All the fragments were visited, and, in these, a survey was carried out on the diversity of tree species with potential for non-timber and timber products. The identification of the tree species of the fragments was made from walking within the area and at the edges, to consider reproductive individuals. In order to know the ecological strategies of the arboreal species of interest, we investigated the ecological characteristics: uses, pollination syndrome, dispersion syndrome and successional group. It was proposed classification model for the species... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor
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Estudo espectroscópico de anticorpos empregando-se superfícies SERS-ativas visando o desenvolvimento de imunossensores / Spectroscopic study of antibodies employing SERS-active surfaces for the development of immunosensors

Raquel Mariano de Almeida 15 April 2016 (has links)
Este estudo empregou anticorpos que podem ser peças chaves no eventual desenvolvimento de imunossensores, devido as suas características de seletividade e consequente determinação de espécies de interesse em análises clínicas, ambiental, saúde publica, entre outros. Para isto, foram feitos estudos de espectros Raman e SERS de anticorpos inteiros e/ou fragmentados (IgG humana, anti-IgG humana (H+L) e anti-IgG humana (Fab2)). Com isto, foram conhecidos os principais modos vibracionais destas biomoléculas que são úteis para a proposta de se construir imunossensores. Ambas as técnicas fornecem informações a respeito da estrutura secundária de proteínas. Quando há a imobilização dessas biomoléculas sobre superfícies SERS-ativas, é possível determinar a sua orientação. Considerando-se que na técnica SERS existe a possibilidade de se detectar uma molécula, por meio de hot spots, é importante que as imunoglobulinas estejam sem impurezas como, por exemplo, a albumina e transferrina no caso de anticorpos provenientes do soro humano. Assim, foram feitos experimentos de purificação dos anticorpos por meio de colunas de afinidade contendo proteína A, G ou uma mistura de A e G imobilizadas e, também, separação baseada no ponto isoelétrico. Testou-se a capacidade de ligação (quimissorção) de IgG humana ou de seus fragmentos F(ab)\' sobre superfícies de ouro por meio da técnica QCM-D. Para o estudo de superfícies SERS-ativas foram sintetizadas nanopartículas de ouro (NP-Au), com a aquisição de espectros de extinção no UV-Vis e obtenção de imagens MEV para caracterizá-las. Também, foram feitas variações no preparo de nanocubos de ouro (NC-Au) para obtenção de nanobastões de ouro (NB-Au), tendo-se em vista que estruturas com pontas favorecem a intensificação do sinal Raman em superfícies SERS-ativas. Por fim, considerando-se a existência de diversas ligações S-S, principalmente na região denominada dobradiça, no espectro SERS de IgGh diluída e do fragmento F(ab)\' constatou-se o surgimento de uma banda característica de C-S em 679 cm-1. Por isso, foi feita uma proposta da possível orientação desses anticorpos não fragmentados para que assumissem uma orientação sobre as superfícies SERS-ativas com características semelhantes às dos fragmentos F(ab)\'. / This study used antibodies that can be key elements in the possible evelopment of immunosensors, due to its selectivity and the consequent determination of species of interest in clinical analysis, environmental, public health, among others. For this, Raman and SERS spectra studies were made of whole and/or fragmented antibodies (human IgG, anti-human IgG (H + L) and anti-human IgG (Fab2)). With this, it were known the main vibrational modes of these biomolecules, useful for the proposal to assemble immunosensors. Both techniques provide information on the secondary structure of proteins. When these biomolecules are immobilized on SERS-active surfaces, it is possible to determine their orientation. Considering that, in the SERS technique, it is possible to detect a molecule through hot spots, it is important that the immunoglobulins are free of impurities, such as albumin and transferrin in the case of antibodies from human serum. Thus, purification experiments of antibodies were made via affinity columns containing protein A, G or a mixture of A and G immobilized and also separation based on isoelectric point. It was tested the binding capacity (chemisorption) of human IgG or its F(ab)\' on gold surfaces by means of QCM-D technique. For the study of SERS-active surfaces of gold nanoparticles were synthesized (Au-NP), with the acquisition of extinction spectra in the UV-Vis and obtaining SEM images to characterize them. Also, changes were made in the preparation of nanocubes gold (Au-NC) to obtain gold nanorods (Au-NR), having in view that ends with structures favor the enhancement of Raman signal on SERS-active surfaces. Finally, considering the existence of various S-S links, particularly in the region called hinge, in the SERS spectrum of diluted hIgG and F(ab)\', it was found the display of a characteristic band C-S 679 cm-1. Therefore, a proposal was made about the possible direction of these non-fragmented antibodies to assume an orientation on the SERS-active surfaces with similar characteristics to the F(ab)\'

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