Submitted by Iatã do Carmo Mendonça null (iata.mendonca@hotmail.com) on 2018-11-13T19:26:17Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Iatã Final.pdf: 6444130 bytes, checksum: 11f109faa73fa111dd02175f3cf51eaf (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Carolina Gonçalves Bet null (abet@iq.unesp.br) on 2018-11-21T12:18:13Z (GMT) No. of bitstreams: 1 mendonca_ic_me_araiq_int.pdf: 6335142 bytes, checksum: 3275b085559a59aa0ff58a993812c371 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-11-21T12:18:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 mendonca_ic_me_araiq_int.pdf: 6335142 bytes, checksum: 3275b085559a59aa0ff58a993812c371 (MD5) Previous issue date: 2018-10-05 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Considerando a variedade de compostos encontrados em produtos de origem natural, o estudo da biodiversidade de um país é de interesse tanto científico quanto econômico. Sendo possível destacar os ecossistemas marinhos que apresentam biodiversidade comparável às florestas tropicais. Devido ao ambiente diferenciado, muitas vezes inóspito, os habitantes do ambiente marinho exibem características bioquímicas diferenciadas, mostrando grande potencial para bioprospecção. A importância do estudo de organismos marinhos na busca por metabólitos secundários bioativos levou à proposta de aprofundar a prospecção química do fungo endofítico Humicola fuscoatra, isolado da alga vermelha Asparagopsis taxiformis. A partir de seu extrato foi possível purificar por técnicas cromatográficas, e identificar 7 substâncias com base nos dados de ressonância magnética nuclear uni e bidimensional (RMN de 1H, RMN de 13C, TOCSY-1D, COSY, HSQC, HMBC) e espectrometria de massas (EM). Dentre estes foram identificados um composto da classe das dicetopiperazinas (P01), duas isocumarinas (P02 e P05), além de 4 substâncias não relatadas na literatura, incluindo três valerolactamas (P03, P06 e P07) e uma cicloexadienona (P04). Além dos compostos purificados por CLAE, foi possível identificar duas substâncias por cromatografia a gás acoplada a espectrometria de massas (CG-EM) sendo elas uma dicetopiperazina e um ftalato. A variedade estrutural dos compostos isolados e a grande quimiodiversidade do extrato de Humicola fuscoatra reforçam a necessidade de se realizar estudos químicos de fungos endofíticos de origem marinha, visto que estes são uma fonte de metabólitos com grande potencial para contribuir na busca por protótipos para novos agentes terapêuticos, além de enfatizar a importância da preservação dos biomas aquáticos, sob constante ameaça por impactos ambientais e mudanças climáticas. / Seeing the variety of compounds obtained from natural products, study a country biodiversity have a scientific interest as well as economic. It is possible to highlight marine ecosystems that present biodiversity comparable to rainforests. Due to the unique environment, often inhospitable, the organisms of the marine environments display uncommon biochemical characteristics, showing great potential for bioprospecting. The importance of the study of marine organisms in the search for bioactive compounds led to the proposal to deepen the prospection of the endophytic fungus Humicola fuscoatra, isolated from the red alga Asparagopsis taxiformis. Its extract led to the purification by chromatographic methods, and identification of 7 compounds based on their NMR spectral data obtained by uni and bidimensional experiments (1H NMR, 13C NMR, TOCSY-1D, COSY, HSQC, HMBC) and mass spectrometry (MS). One diketopiperazine (P01), two isocoumarins (P02 and P05) in addition to four novel compounds, including three valerolactams (P03, P06 and P07) and one cyclehexadienone (P04) were isolated. Moreover another diketopiperazine and one phthalate derivative were identified by gas chromatography coupled to mass spectrometry (GC-MS). The structural variety of the identified compounds associated to the rich chemodiversity observed for the Humicola fuscoatra extract reinforces the need to develop additional chemical studies of endophytic fungal strains of marine origin, since they have been providing metabolites with great potential to the development of novel therapeutic agents, in addition to emphasize the importance of aquatic biomes preservation, as they have been continuously threatened by environmental and climate change impacts.

Orientadora: Dulce Helena Siqueira Silva / Banca: Alberto José Cavalheiro / Banca: Taicia Pacheco Fill / Resumo: Considerando a variedade de compostos encontrados em produtos de origem natural, o estudo da biodiversidade de um país é de interesse tanto científico quanto econômico. Sendo possível destacar os ecossistemas marinhos que apresentam biodiversidade comparável às florestas tropicais. Devido ao ambiente diferenciado, muitas vezes inóspito, os habitantes do ambiente marinho exibem características bioquímicas diferenciadas, mostrando grande potencial para bioprospecção. A importância do estudo de organismos marinhos na busca por metabólitos secundários bioativos levou à proposta de aprofundar a prospecção química do fungo endofítico Humicola fuscoatra, isolado da alga vermelha Asparagopsis taxiformis. A partir de seu extrato foi possível purificar por técnicas cromatográficas, e identificar 7 substâncias com base nos dados de ressonância magnética nuclear uni e bidimensional (RMN de 1H, RMN de 13C, TOCSY-1D, COSY, HSQC, HMBC) e espectrometria de massas (EM). Dentre estes foram identificados um composto da classe das dicetopiperazinas (P01), duas isocumarinas (P02 e P05), além de 4 substâncias não relatadas na literatura, incluindo três valerolactamas (P03, P06 e P07) e uma cicloexadienona (P04). Além dos compostos purificados por CLAE, foi possível identificar duas substâncias por cromatografia a gás acoplada a espectrometria de massas (CG-EM) sendo elas uma dicetopiperazina e um ftalato. A variedade estrutural dos compostos isolados e a grande quimiodiversidade do extrato de Humi... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Seeing the variety of compounds obtained from natural products, study a country biodiversity have a scientific interest as well as economic. It is possible to highlight marine ecosystems that present biodiversity comparable to rainforests. Due to the unique environment, often inhospitable, the organisms of the marine environments display uncommon biochemical characteristics, showing great potential for bioprospecting. The importance of the study of marine organisms in the search for bioactive compounds led to the proposal to deepen the prospection of the endophytic fungus Humicola fuscoatra, isolated from the red alga Asparagopsis taxiformis. Its extract led to the purification by chromatographic methods, and identification of 7 compounds based on their NMR spectral data obtained by uni and bidimensional experiments (1H NMR, 13C NMR, TOCSY-1D, COSY, HSQC, HMBC) and mass spectrometry (MS). One diketopiperazine (P01), two isocoumarins (P02 and P05) in addition to four novel compounds, including three valerolactams (P03, P06 and P07) and one cyclehexadienone (P04) were isolated. Moreover another diketopiperazine and one phthalate derivative were identified by gas chromatography coupled to mass spectrometry (GC-MS). The structural variety of the identified compounds associated to the rich chemodiversity observed for the Humicola fuscoatra extract reinforces the need to develop additional chemical studies of endophytic fungal strains of marine origin, since they have been providin... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Neste trabalho foram realizadas reações de redução de cetonas empregando diferentes organismos marinhos como biocatalisadores (algas, fungos e bactérias). Nas triagens foram utilizados derivados de acetofenonas (o-iodoacetofenona, m-iodoacetofenona, p-iodoacetofenona, o-fluoracetofenona, o-cloroacetofenona, o-bromoacetofenona, o-nitroacetofenona) e duas cetonas 1,3-dicarboniladas: a 4,4,4-triflúor-1-(furan-2-il)butano-1,3-diona e a 4,4,4-triflúor-1-(naftalen-2-il)butano-1,3-diona. As reações com as algas marinhas Bostrychia tenella e a Bostrychia radicans levaram aos álcoois com excelentes seletividades (ee >98%), contudo, obtiveram-se baixas conversões. Foram isoladas as bactérias Bt-01 (B. tenella) e Bt-02 (B. radicans), as quais catalisaram as reduções das acetofenonas com resultados similares aos obtidos com as algas. Os fungos (Br-09, Br-23, Br-27, Br-61) isolados da alga B. radicans reduziram as acetofenonas com boas seletividades e conversões. Ainda, reações de redução das acetofenonas com quatro linhagens de fungos isolados da alga Sargassum sp (SMA2-C, SMA2-8, SMA2-58, SGPY-41) levaram a obtenção dos respectivos álcoois com diferentes conversões e seletividades. As reduções das cetonas 1,3-dicarboniladas foram realizadas com as algas B. tenella e B. radicans, e com sete linhagens de fungos marinhos (Aspergillus sydowii Ce15, Aspergillus sydowii Ce19, Aspergillus sydowii Gc12, Bionectria sp Ce5, Penicillium raistrickii Ce16, Penicillium miczynskii Gc5 e Trichoderma sp Gc1). As algas e os fungos marinhos catalisaram a redução regiosseletiva e estereosseletiva das cetonas 1,3-dicarboniladas, onde ocorreu a redução do grupo α-trifluorcarbonílico. Concluiu-se que as algas e seus microrganismos associados, e os fungos marinhos têm potencial para serem utilizados como biocatalisadores em reações de redução. Este trabalho foi o primeiro estudo realizado no país envolvendo algas marinhas e seus microrganismos associados em reações de redução de cetonas, cujos resultados são bastante promissores. / In this work, were investigated the ketone reduction reactions using several marine organisms as biocatalysts (algae, fungi and bacteria). In the screening were utilized acetophenone derivatives (o-iodoacetophenone, m-iodoacetophenone, p-iodoacetophenone, o-fluoroacetophenone, o-chloroacetophenone, o-bromoacetophenone, o-nitroacetophenone) and two 1,3-dicarbonylated compounds: 4,4,4-trifluoro-1-(furan-2-yl)butane-1,3-dione and 4,4,4-trifluoro-1-(naftalen-2-yl)butane-1,3-dione. The reactions with algae Bostrychia tenella and Bostrychia radicans afforded the alcohols with high selectivities (ee > 98%), however, with low conversions. The bacteria Bt-01 and Bt-02 were isolated from algae B. tenella and B. radicans, respectively, which catalyzed the reductions of acetophenones as the same as obtained with the algae. The acetophenones were reduced by several fungi (Br-09, Br-23, Br-27, Br-61) in good selectivities and conversions. These fungi were isolated from Bostrychia radicans. In addition, the acetophenone reduction reactions were screened with four strains of fungi, which were isolated from algae Sargassum sp (SMA2-C, SMA2-8, SMA2-58, SGPY-41). The alcohols were obtained with different conversions and selectivities. The reductions of 1,3-dicarbonylated compounds were carried out with the algae B. tenella and B. radicans, and marine fungi (Aspergillus sydowii Ce15, Aspergillus sydowii Ce19, Aspergillus sydowii Gc12, Bionectria sp Ce5, Penicillium raistrickii Ce16, Penicillium miczynskii Gc5 and Trichoderma sp Gc1). The algae and marine fungi catalyzed regio- and estereoselectively reductions of the 1,3-dicarbonylated compounds. The α-trifluoromethylcarbonyl group was reduced preferentially. In conclusion, the algae and associated micro-organisms and marine fungi have potential for catalyzing ketone reduction reactions. This investigation was the first study carried out in the Brazil by using algae and associated micro-organisms in the ketone reduction reactions. The obtained results here are promising and interesting.

Os fungos são microrganismos amplamente dispersos, podendo ser encontrados em vegetais, animais, solo e ambientes aquáticos, participando do ciclo de elementos na natureza. Embora muitos papéis ecológicos tenham sido estudados e descritos para os fungos terrestres, a ecologia de fungos marinhos ainda é pouco conhecida. Assim, os oceanos, que representam aproximadamente metade da biodiversidade global, são uma fonte enorme e virtualmente inexplorada de microrganismos produtores de novos produtos naturais. O objetivo deste trabalho foi isolar linhagens de fungos derivados de uma espécie de alga marinha do gênero Sargassum, visando à avaliação do seu potencial para a produção de metabólitos secundários bioativos. Ao todo foram isoladas 58 linhagens, das quais 52 foram crescidas em meio de cultura líquido e, após a extração com solventes orgânicos, deram origem a 99 extratos. Tais extratos foram avaliados por ensaios de atividade biológica, cromatografia em camada delgada (CCD), ressonância magnética nuclear (RMN) e cromatografia líquida acoplada a detectores de arranjo de diodos, espalhamento de luz evaporativo e espectrômetro de massas (LC - PDA - ELSD - MS). A avaliação pelo ensaio antibiótico foi o que resultou no maior número de extratos ativos (n = 13), seguido dos ensaios enzimático (n = 8), citotóxico (n = 3) e anti-tuberculose (n = 1). O extrato AS Fub 39, que apresentou atividade antibiótica, foi selecionado para estudos adicionais. Este extrato foi purificado por HPLC, e o seu composto majoritário identificado como sendo o 8-metóxi-3,5-dimetilisocroman-6-ol. Posteriormente, a linhagem AS Fub 39 foi taxonomicamente identificada como pertencendo à espécie Penicillium steckii. / Fungi are widely disperse microorganisms, typically associated with plants, animals, soil and aquatic environments (fresh and sea water), participating in the elements cycling. Although many ecological roles have been described for terrestrial fungi, ecological studies of marine derived fungi are still scarce. Therefore, oceans, which represent approximately half of the global biodiversity, are a huge and virtually unexplored source of microorganisms producers of interesting metabolites. The aim of this study was to isolate fungal strains derived from a marine algae of the Sargassum genus, and the evaluation of their metabolical potential for the production of secondary metabolites. Overall, 58 strains were isolated, of which 52 were grown in liquid culture media and extracted with organic solvents, originating 99 crude extracts. These extracts were analyzed by bioassays, thin layer chromatography (TLC), nuclear magnetic resonance (NMR) and liquid chromatography coupled with a photo diode array, an evaporative light scattering, and a mass spectrometry detectors (LC - PDA - ELSD - MS). The evaluation with the antibiotic assay resulted in the largest number of active extracts (n = 13), followed by the enzymatic (n = 8), the cytotoxic (n = 3) and the antituberculosis (n = 1) assays. The crude extract AS Fub 39, which presented antibiotic activity, was selected for additional studies. This extract was purified by HPLC, and its major compound identified as the 8-methoxy-3,5-dimethylisocroman-6-ol. Later, the AS Fub 39 strain was taxonomically identified as Penicillium steckii.

Neste trabalho foram realizados estudos de reações de bio-oxidação dos esteroides Progesterona e 17α-Etinilestradiol por fungos de ambiente marinho. Para a Progesterona foi feita uma triagem de reações com os caldos enzimáticos e as massas miceliais dos fungos Aspergillus sydowii CBMAI 934, Aspergillus sydowii CBMAI 935, Penicilium oxalicum CBMAI 1185 e Penicilium citrinum CBMAI 1186. Para as reações envolvendo os fungos A. sydowii CBMAI 935, P. oxalicum CBMAI 1185 e P. citrinum CBMAI 1186 os produtos majoritários observados foram os metabólitos Testosterona e Testololactona, produtos de oxidação da Progesterona promovida por enzimas do tipo Baeyer-Villiger monoxigenases. Para as reações envolvendo o fungo A. sydowii CBMAI 934 foram observados produtos de hidroxilação da Progesterona em carbonos do núcleo esteroidal não ativados eletronicamente, sendo produtos de oxidação da Progesterona promovida por enzimas do citocromo P-450. Da triagem foram selecionados os fungos A. sydowii CBMAI 934 e A. sydowii CBMAI 935 para executar reações de bio-oxidação em quintuplicatas (32ºC, 130 rpm, pH 7,4) utilizando o caldo enzimático e a massa micelial para isolamento e caracterizações espectroscópicas (RMN, EMAR e IV) e polarimétricas dos produtos majoritários. Após 14 dias de reação com o caldo enzimático do fungo A. sydowii CBMAI 934 foi isolado a 7,15-di-Hidroxiprogesterona com 13 % de rendimento em massa. Contudo não foi possível determinar com exatidão a configuração relativa dos grupos hidroxilas. Já para a reação com a massa micelial do fungo A. sydowii CBMAI 934 após 14 dias de reação foi isolado o produto 15β-Hidroxiprogesterona com 58% de rendimento em massa. Após 7 dias de reação com o caldo enzimático do fungo A. sydowii CBMAI 935 foram isolados os produtos Testosterona e Testololactona com rendimentos em massa de 24% e 36%, respectivamente. A Testololactona também foi isolada da reação com a massa micelial do fungo A. sydowii CBMAI 935 após 7 dias com rendimento em massa de 87%. Para o 17 α-Etinilestradiol foi feita uma triagem com os mesmos fungos utilizados na triagem das reações com a Progesterona, exceto com o fungo A. sydowii CBMAI 934. Após 7 dias de reação e nas mesmas condições das reações com a Progesterona, não foram observados produtos de biotransformação do 17 α-Etinilestradiol. Este estudo envolvendo a bio-oxidação da Progesterona mostra o potencial de biotransformação de fármacos esteroidais no meio ambiente. / In this work was performed bio-oxidation studies of steroids progesterone and 17α-ethynylestradiol by marine-derived fungi. For progesterone was performed a reactions screening with culture broth and micelia from Aspergillus sydowii CBMAI 934, Aspergillus sydowii CBMAI 935, Penicilium oxalicum CBMAI 1185 e Penicilium citrinum CBMAI 1186. For reactions using A. sydowii CBMAI 935, P. oxalicum CBMAI 1185 e P. citrinum CBMAI 1186 the majoritarian products obtained were testosterone and testololactone, products from progesterone oxidation by Baeyer-Villiger mono-oxygenases enzymes. For reactions using A. sydowii CBMAI 934 was observed hydroxylation products from progesterone in carbons of progesterone by eletronic factors. The enzymes than promoted the hydroxylation of the progesterone were of citochrome P-450 group. From screening was selected A. sydowii CBMAI 934 and A. sydowii CBMAI 935 for quintuplicate bio-oxydations (32ºC, 130 rpm, pH 7,4) using the culture broth and micelia for isolation and spectroscopicals caracterizations (NMR, HRMS and IR) and polarimetrics of majoritary products. After 14 days, the reaction with culture broth from A. sydowii CBMAI 934 was isolated 7,15-dihydroxyprogesterone with 13% yield. But, the configurations of hydroxy groups were not possible to determine. Already for reaction with micelia from A. sydowii CBMAI 934 was isolated 15β-hydroxyprogesterone with 58% yield. After 7 days the reaction with culture broth from A. sydowii CBMAI 935 was isolated the testosterone and testololactone with 24% and 36% yields, respectively. The Testololactone also was isolated from reaction with micelia from A. sydowii CBMAI 935 after 7 days with 87% yield. For 17α-ethynylestradiol was performed a screening with same fungi used in reaction screening with Progesterone, except the A. sydowii CBMAI 934. After 7 days in same condictions of reactions with Progesterone, It was not observed products from 17α-ethynylestradiol. This study involving the bio-oxidation from Progesterone showed the potential of biontrasnformations steroidal drugs in environment.

Neste trabalho foram realizados estudos de reações de bio-oxidação dos esteroides Progesterona e 17α-Etinilestradiol por fungos de ambiente marinho. Para a Progesterona foi feita uma triagem de reações com os caldos enzimáticos e as massas miceliais dos fungos Aspergillus sydowii CBMAI 934, Aspergillus sydowii CBMAI 935, Penicilium oxalicum CBMAI 1185 e Penicilium citrinum CBMAI 1186. Para as reações envolvendo os fungos A. sydowii CBMAI 935, P. oxalicum CBMAI 1185 e P. citrinum CBMAI 1186 os produtos majoritários observados foram os metabólitos Testosterona e Testololactona, produtos de oxidação da Progesterona promovida por enzimas do tipo Baeyer-Villiger monoxigenases. Para as reações envolvendo o fungo A. sydowii CBMAI 934 foram observados produtos de hidroxilação da Progesterona em carbonos do núcleo esteroidal não ativados eletronicamente, sendo produtos de oxidação da Progesterona promovida por enzimas do citocromo P-450. Da triagem foram selecionados os fungos A. sydowii CBMAI 934 e A. sydowii CBMAI 935 para executar reações de bio-oxidação em quintuplicatas (32ºC, 130 rpm, pH 7,4) utilizando o caldo enzimático e a massa micelial para isolamento e caracterizações espectroscópicas (RMN, EMAR e IV) e polarimétricas dos produtos majoritários. Após 14 dias de reação com o caldo enzimático do fungo A. sydowii CBMAI 934 foi isolado a 7,15-di-Hidroxiprogesterona com 13 % de rendimento em massa. Contudo não foi possível determinar com exatidão a configuração relativa dos grupos hidroxilas. Já para a reação com a massa micelial do fungo A. sydowii CBMAI 934 após 14 dias de reação foi isolado o produto 15β-Hidroxiprogesterona com 58% de rendimento em massa. Após 7 dias de reação com o caldo enzimático do fungo A. sydowii CBMAI 935 foram isolados os produtos Testosterona e Testololactona com rendimentos em massa de 24% e 36%, respectivamente. A Testololactona também foi isolada da reação com a massa micelial do fungo A. sydowii CBMAI 935 após 7 dias com rendimento em massa de 87%. Para o 17 α-Etinilestradiol foi feita uma triagem com os mesmos fungos utilizados na triagem das reações com a Progesterona, exceto com o fungo A. sydowii CBMAI 934. Após 7 dias de reação e nas mesmas condições das reações com a Progesterona, não foram observados produtos de biotransformação do 17 α-Etinilestradiol. Este estudo envolvendo a bio-oxidação da Progesterona mostra o potencial de biotransformação de fármacos esteroidais no meio ambiente. / In this work was performed bio-oxidation studies of steroids progesterone and 17α-ethynylestradiol by marine-derived fungi. For progesterone was performed a reactions screening with culture broth and micelia from Aspergillus sydowii CBMAI 934, Aspergillus sydowii CBMAI 935, Penicilium oxalicum CBMAI 1185 e Penicilium citrinum CBMAI 1186. For reactions using A. sydowii CBMAI 935, P. oxalicum CBMAI 1185 e P. citrinum CBMAI 1186 the majoritarian products obtained were testosterone and testololactone, products from progesterone oxidation by Baeyer-Villiger mono-oxygenases enzymes. For reactions using A. sydowii CBMAI 934 was observed hydroxylation products from progesterone in carbons of progesterone by eletronic factors. The enzymes than promoted the hydroxylation of the progesterone were of citochrome P-450 group. From screening was selected A. sydowii CBMAI 934 and A. sydowii CBMAI 935 for quintuplicate bio-oxydations (32ºC, 130 rpm, pH 7,4) using the culture broth and micelia for isolation and spectroscopicals caracterizations (NMR, HRMS and IR) and polarimetrics of majoritary products. After 14 days, the reaction with culture broth from A. sydowii CBMAI 934 was isolated 7,15-dihydroxyprogesterone with 13% yield. But, the configurations of hydroxy groups were not possible to determine. Already for reaction with micelia from A. sydowii CBMAI 934 was isolated 15β-hydroxyprogesterone with 58% yield. After 7 days the reaction with culture broth from A. sydowii CBMAI 935 was isolated the testosterone and testololactone with 24% and 36% yields, respectively. The Testololactone also was isolated from reaction with micelia from A. sydowii CBMAI 935 after 7 days with 87% yield. For 17α-ethynylestradiol was performed a screening with same fungi used in reaction screening with Progesterone, except the A. sydowii CBMAI 934. After 7 days in same condictions of reactions with Progesterone, It was not observed products from 17α-ethynylestradiol. This study involving the bio-oxidation from Progesterone showed the potential of biontrasnformations steroidal drugs in environment.

Fungos isolados de organismos marinhos têm despertado o interesse de pesquisadores no mundo inteiro, por representarem uma fonte diferenciada de metabólitos secundários, devido às condições ambientais as quais esses microrganismos estão sujeitos. Diversas atividades biológicas têm sido relatadas para estas substâncias, principalmente antitumoral, antimicrobiano e antiparasitária. O crescente aumento nos casos de resistência a antibióticos aponta para a necessidade da disponibilidade de novos agentes terapêuticos. Neste contexto, este trabalho objetivou a identificação dos fungos associados a organismos marinhos coletados na Ilha do Arvoredo (SC), visando o isolamento bioguiado de metabólitos de extratos de micélio e meios de cultivo. As atividades antibiótica e antibiofilme frente aos patógenos Staphylococcus epidermidis ATCC 35984 e Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 e anti-Trichomonas vaginalis ATCC 30236 e isolados clínicos, foram investigadas. Todos os fungos isolados foram cultivados por períodos de 7, 14 e 21 dias. Utilizando técnicas moleculares, foram identificados 37 fungos pertencentes ao Filo Ascomycota e um ao Filo Basidiomycota, distribuídos entre 15 diferentes gêneros. O rastreamento de metabólitos quanto à atividade antibiótica foi realizado utilizando a técnica de difusão em agar, obtendo-se 19 amostras com halos de inibição superiores a 10 mm de diâmetro. As atividades antiformação e erradicação de biofilme previamente formado foram avaliadas pelo método de coloração com cristal violeta, e 5% do total de amostras apresentaram inibição de formação e 1% a erradicação de mais de 75% de biofilme de S. epidermidis. Da mesma forma, 5% das amostras foram capazes de inibir ou erradicar entre 51% e 75% biofilmes de P. aeruginosa. Entre os isolados, foram selecionados um fungo pertencente à ordem Sordariales (isolado F22, 14 dias de cultivo) e outro ao gênero Penicillium (isolado F37, 7 dias de cultivo). Os filtrados dos fungos foram particionados com acetato de etila e submetidos à separação cromatográfica, levando à identificação dos compostos mevalonolactona e cis-cyclo(leucyl-tyrosyl) (identificados por técnicas espectroscópicas e espectrométricas), ambos ativos na inibição da formação de biofilme de S. epidermidis ATCC. Mevalonolactona também apresentou atividade frente a isolados clínicos de S. epidermidis revelando, além da atividade antibiofilme, atividade antibiótica em concentração de 0,06 mg/mL. A atividade frente ao parasita T. vaginalis foi avaliada pela técnica de coloração de resazurina e a viabilidade dos trofozoítos caracterizada utilizando trypan blue. Duas amostras dos fungos Hipocrea lixii e Penicillium citrinum mostraram a presença de metabólitos ativos. A inibição do crescimento dos trofozoítos foi observada em 24 horas (MIC=2,5 mg/mL), de acordo com a curva cinética de crescimento. A ausência de hemólise de eritrócitos também foi observada para estas duas amostras. Os resultados obtidos corroboram com os relatos sobre o grande potencial dos fungos marinhos para a descoberta de metabólitos ativos. / Fungi isolated from marine organisms attract the interest of many researchers around the world, since they produce differentiated secondary metabolites due to the environmental conditions to which these organisms are subjected. Several biological activities have been reported for these compounds, mainly as antitumoral, antibacterial and, antiprotozoal. The increasing cases of antimicrobial drug resistance reveal the necessity for the search for new therapeutic agents. In this context, this study aimed to identify the fungi associated with marine organisms collected in the Arvoredo Island (SC/Brazil), in order to isolate bioactive metabolites in extracts of mycelia and broth. The antibiotic and antibiofilm activities against Staphylococcus epidermidis ATCC 35984 and Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 and anti-Trichomonas vaginalis ATCC 30236 and clinical isolates activity were investigated. The isolated fungi from marine organisms were cultured for 7, 14 and 21 days. Using molecular techniques, 36 fungi belonging to the Ascomycota and one to Basidiomycota phyla, were identified, distributed among 15 different genera. Screening for metabolites possessing antibiotic activity was performed using the agar diffusion assay, for which was obtained 19 samples with inhibition halo higher than 10 mm in diameter. The inhibition and eradication of biofilm were performed by cristal violet staining method, and 5% of the total samples showed inhibition and 1% eradication of more than 75% of S. epidermidis biofilm. Moreover, 5% of the samples were able to inhibit and eradicate between 51% and 75% of biofilm formed by P. aeruginosa. Among these samples, one strain belonging to the order Sordariales (isolate F22, 14-days of cultive) and one to the genus Penicillium (isolate F37, 7-days of cultive) were selected. The filtrate was extracted with ethyl acetate and subjected to separation by chromatographic techniques, leading to purified compounds mevalonolactone and cis-cyclo(leucyl-tyrosyl) (identified by spectroscopic and spectrometric techniques), both able to inhibit biofilm formation by S. epidermidis ATCC. Mevalonolactone also showed activity against clinical isolates of S. epidermidis revealing, both antibiofilm and antibiotic activities at 0.06 mg.mL-1. The anti-T. vaginalis assay was carried out using the resazurin staining method andviability of trophozoites were characterized using trypan blue. Two samples of the fungi Hypocrea lixii and Penicillium citrinum showed the presence of active metabolites able to inhibit the trophozoites growth in 24 hours (MIC = 2.5 mg.mL-1), according to the kinetic curve of growth. Absence of hemolysis of erythrocytes was also observed for these two filtrate samples. The results corroborate with the reports of the great potential of marine fungi in the discovery of active metabolites.

Fungos isolados de organismos marinhos têm despertado o interesse de pesquisadores no mundo inteiro, por representarem uma fonte diferenciada de metabólitos secundários, devido às condições ambientais as quais esses microrganismos estão sujeitos. Diversas atividades biológicas têm sido relatadas para estas substâncias, principalmente antitumoral, antimicrobiano e antiparasitária. O crescente aumento nos casos de resistência a antibióticos aponta para a necessidade da disponibilidade de novos agentes terapêuticos. Neste contexto, este trabalho objetivou a identificação dos fungos associados a organismos marinhos coletados na Ilha do Arvoredo (SC), visando o isolamento bioguiado de metabólitos de extratos de micélio e meios de cultivo. As atividades antibiótica e antibiofilme frente aos patógenos Staphylococcus epidermidis ATCC 35984 e Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 e anti-Trichomonas vaginalis ATCC 30236 e isolados clínicos, foram investigadas. Todos os fungos isolados foram cultivados por períodos de 7, 14 e 21 dias. Utilizando técnicas moleculares, foram identificados 37 fungos pertencentes ao Filo Ascomycota e um ao Filo Basidiomycota, distribuídos entre 15 diferentes gêneros. O rastreamento de metabólitos quanto à atividade antibiótica foi realizado utilizando a técnica de difusão em agar, obtendo-se 19 amostras com halos de inibição superiores a 10 mm de diâmetro. As atividades antiformação e erradicação de biofilme previamente formado foram avaliadas pelo método de coloração com cristal violeta, e 5% do total de amostras apresentaram inibição de formação e 1% a erradicação de mais de 75% de biofilme de S. epidermidis. Da mesma forma, 5% das amostras foram capazes de inibir ou erradicar entre 51% e 75% biofilmes de P. aeruginosa. Entre os isolados, foram selecionados um fungo pertencente à ordem Sordariales (isolado F22, 14 dias de cultivo) e outro ao gênero Penicillium (isolado F37, 7 dias de cultivo). Os filtrados dos fungos foram particionados com acetato de etila e submetidos à separação cromatográfica, levando à identificação dos compostos mevalonolactona e cis-cyclo(leucyl-tyrosyl) (identificados por técnicas espectroscópicas e espectrométricas), ambos ativos na inibição da formação de biofilme de S. epidermidis ATCC. Mevalonolactona também apresentou atividade frente a isolados clínicos de S. epidermidis revelando, além da atividade antibiofilme, atividade antibiótica em concentração de 0,06 mg/mL. A atividade frente ao parasita T. vaginalis foi avaliada pela técnica de coloração de resazurina e a viabilidade dos trofozoítos caracterizada utilizando trypan blue. Duas amostras dos fungos Hipocrea lixii e Penicillium citrinum mostraram a presença de metabólitos ativos. A inibição do crescimento dos trofozoítos foi observada em 24 horas (MIC=2,5 mg/mL), de acordo com a curva cinética de crescimento. A ausência de hemólise de eritrócitos também foi observada para estas duas amostras. Os resultados obtidos corroboram com os relatos sobre o grande potencial dos fungos marinhos para a descoberta de metabólitos ativos. / Fungi isolated from marine organisms attract the interest of many researchers around the world, since they produce differentiated secondary metabolites due to the environmental conditions to which these organisms are subjected. Several biological activities have been reported for these compounds, mainly as antitumoral, antibacterial and, antiprotozoal. The increasing cases of antimicrobial drug resistance reveal the necessity for the search for new therapeutic agents. In this context, this study aimed to identify the fungi associated with marine organisms collected in the Arvoredo Island (SC/Brazil), in order to isolate bioactive metabolites in extracts of mycelia and broth. The antibiotic and antibiofilm activities against Staphylococcus epidermidis ATCC 35984 and Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 and anti-Trichomonas vaginalis ATCC 30236 and clinical isolates activity were investigated. The isolated fungi from marine organisms were cultured for 7, 14 and 21 days. Using molecular techniques, 36 fungi belonging to the Ascomycota and one to Basidiomycota phyla, were identified, distributed among 15 different genera. Screening for metabolites possessing antibiotic activity was performed using the agar diffusion assay, for which was obtained 19 samples with inhibition halo higher than 10 mm in diameter. The inhibition and eradication of biofilm were performed by cristal violet staining method, and 5% of the total samples showed inhibition and 1% eradication of more than 75% of S. epidermidis biofilm. Moreover, 5% of the samples were able to inhibit and eradicate between 51% and 75% of biofilm formed by P. aeruginosa. Among these samples, one strain belonging to the order Sordariales (isolate F22, 14-days of cultive) and one to the genus Penicillium (isolate F37, 7-days of cultive) were selected. The filtrate was extracted with ethyl acetate and subjected to separation by chromatographic techniques, leading to purified compounds mevalonolactone and cis-cyclo(leucyl-tyrosyl) (identified by spectroscopic and spectrometric techniques), both able to inhibit biofilm formation by S. epidermidis ATCC. Mevalonolactone also showed activity against clinical isolates of S. epidermidis revealing, both antibiofilm and antibiotic activities at 0.06 mg.mL-1. The anti-T. vaginalis assay was carried out using the resazurin staining method andviability of trophozoites were characterized using trypan blue. Two samples of the fungi Hypocrea lixii and Penicillium citrinum showed the presence of active metabolites able to inhibit the trophozoites growth in 24 hours (MIC = 2.5 mg.mL-1), according to the kinetic curve of growth. Absence of hemolysis of erythrocytes was also observed for these two filtrate samples. The results corroborate with the reports of the great potential of marine fungi in the discovery of active metabolites.

Fungos isolados de organismos marinhos têm despertado o interesse de pesquisadores no mundo inteiro, por representarem uma fonte diferenciada de metabólitos secundários, devido às condições ambientais as quais esses microrganismos estão sujeitos. Diversas atividades biológicas têm sido relatadas para estas substâncias, principalmente antitumoral, antimicrobiano e antiparasitária. O crescente aumento nos casos de resistência a antibióticos aponta para a necessidade da disponibilidade de novos agentes terapêuticos. Neste contexto, este trabalho objetivou a identificação dos fungos associados a organismos marinhos coletados na Ilha do Arvoredo (SC), visando o isolamento bioguiado de metabólitos de extratos de micélio e meios de cultivo. As atividades antibiótica e antibiofilme frente aos patógenos Staphylococcus epidermidis ATCC 35984 e Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 e anti-Trichomonas vaginalis ATCC 30236 e isolados clínicos, foram investigadas. Todos os fungos isolados foram cultivados por períodos de 7, 14 e 21 dias. Utilizando técnicas moleculares, foram identificados 37 fungos pertencentes ao Filo Ascomycota e um ao Filo Basidiomycota, distribuídos entre 15 diferentes gêneros. O rastreamento de metabólitos quanto à atividade antibiótica foi realizado utilizando a técnica de difusão em agar, obtendo-se 19 amostras com halos de inibição superiores a 10 mm de diâmetro. As atividades antiformação e erradicação de biofilme previamente formado foram avaliadas pelo método de coloração com cristal violeta, e 5% do total de amostras apresentaram inibição de formação e 1% a erradicação de mais de 75% de biofilme de S. epidermidis. Da mesma forma, 5% das amostras foram capazes de inibir ou erradicar entre 51% e 75% biofilmes de P. aeruginosa. Entre os isolados, foram selecionados um fungo pertencente à ordem Sordariales (isolado F22, 14 dias de cultivo) e outro ao gênero Penicillium (isolado F37, 7 dias de cultivo). Os filtrados dos fungos foram particionados com acetato de etila e submetidos à separação cromatográfica, levando à identificação dos compostos mevalonolactona e cis-cyclo(leucyl-tyrosyl) (identificados por técnicas espectroscópicas e espectrométricas), ambos ativos na inibição da formação de biofilme de S. epidermidis ATCC. Mevalonolactona também apresentou atividade frente a isolados clínicos de S. epidermidis revelando, além da atividade antibiofilme, atividade antibiótica em concentração de 0,06 mg/mL. A atividade frente ao parasita T. vaginalis foi avaliada pela técnica de coloração de resazurina e a viabilidade dos trofozoítos caracterizada utilizando trypan blue. Duas amostras dos fungos Hipocrea lixii e Penicillium citrinum mostraram a presença de metabólitos ativos. A inibição do crescimento dos trofozoítos foi observada em 24 horas (MIC=2,5 mg/mL), de acordo com a curva cinética de crescimento. A ausência de hemólise de eritrócitos também foi observada para estas duas amostras. Os resultados obtidos corroboram com os relatos sobre o grande potencial dos fungos marinhos para a descoberta de metabólitos ativos. / Fungi isolated from marine organisms attract the interest of many researchers around the world, since they produce differentiated secondary metabolites due to the environmental conditions to which these organisms are subjected. Several biological activities have been reported for these compounds, mainly as antitumoral, antibacterial and, antiprotozoal. The increasing cases of antimicrobial drug resistance reveal the necessity for the search for new therapeutic agents. In this context, this study aimed to identify the fungi associated with marine organisms collected in the Arvoredo Island (SC/Brazil), in order to isolate bioactive metabolites in extracts of mycelia and broth. The antibiotic and antibiofilm activities against Staphylococcus epidermidis ATCC 35984 and Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 and anti-Trichomonas vaginalis ATCC 30236 and clinical isolates activity were investigated. The isolated fungi from marine organisms were cultured for 7, 14 and 21 days. Using molecular techniques, 36 fungi belonging to the Ascomycota and one to Basidiomycota phyla, were identified, distributed among 15 different genera. Screening for metabolites possessing antibiotic activity was performed using the agar diffusion assay, for which was obtained 19 samples with inhibition halo higher than 10 mm in diameter. The inhibition and eradication of biofilm were performed by cristal violet staining method, and 5% of the total samples showed inhibition and 1% eradication of more than 75% of S. epidermidis biofilm. Moreover, 5% of the samples were able to inhibit and eradicate between 51% and 75% of biofilm formed by P. aeruginosa. Among these samples, one strain belonging to the order Sordariales (isolate F22, 14-days of cultive) and one to the genus Penicillium (isolate F37, 7-days of cultive) were selected. The filtrate was extracted with ethyl acetate and subjected to separation by chromatographic techniques, leading to purified compounds mevalonolactone and cis-cyclo(leucyl-tyrosyl) (identified by spectroscopic and spectrometric techniques), both able to inhibit biofilm formation by S. epidermidis ATCC. Mevalonolactone also showed activity against clinical isolates of S. epidermidis revealing, both antibiofilm and antibiotic activities at 0.06 mg.mL-1. The anti-T. vaginalis assay was carried out using the resazurin staining method andviability of trophozoites were characterized using trypan blue. Two samples of the fungi Hypocrea lixii and Penicillium citrinum showed the presence of active metabolites able to inhibit the trophozoites growth in 24 hours (MIC = 2.5 mg.mL-1), according to the kinetic curve of growth. Absence of hemolysis of erythrocytes was also observed for these two filtrate samples. The results corroborate with the reports of the great potential of marine fungi in the discovery of active metabolites.

Os fungos são microrganismos amplamente dispersos, podendo ser encontrados em vegetais, animais, solo e ambientes aquáticos, participando do ciclo de elementos na natureza. Embora muitos papéis ecológicos tenham sido estudados e descritos para os fungos terrestres, a ecologia de fungos marinhos ainda é pouco conhecida. Assim, os oceanos, que representam aproximadamente metade da biodiversidade global, são uma fonte enorme e virtualmente inexplorada de microrganismos produtores de novos produtos naturais. O objetivo deste trabalho foi isolar linhagens de fungos derivados de uma espécie de alga marinha do gênero Sargassum, visando à avaliação do seu potencial para a produção de metabólitos secundários bioativos. Ao todo foram isoladas 58 linhagens, das quais 52 foram crescidas em meio de cultura líquido e, após a extração com solventes orgânicos, deram origem a 99 extratos. Tais extratos foram avaliados por ensaios de atividade biológica, cromatografia em camada delgada (CCD), ressonância magnética nuclear (RMN) e cromatografia líquida acoplada a detectores de arranjo de diodos, espalhamento de luz evaporativo e espectrômetro de massas (LC - PDA - ELSD - MS). A avaliação pelo ensaio antibiótico foi o que resultou no maior número de extratos ativos (n = 13), seguido dos ensaios enzimático (n = 8), citotóxico (n = 3) e anti-tuberculose (n = 1). O extrato AS Fub 39, que apresentou atividade antibiótica, foi selecionado para estudos adicionais. Este extrato foi purificado por HPLC, e o seu composto majoritário identificado como sendo o 8-metóxi-3,5-dimetilisocroman-6-ol. Posteriormente, a linhagem AS Fub 39 foi taxonomicamente identificada como pertencendo à espécie Penicillium steckii. / Fungi are widely disperse microorganisms, typically associated with plants, animals, soil and aquatic environments (fresh and sea water), participating in the elements cycling. Although many ecological roles have been described for terrestrial fungi, ecological studies of marine derived fungi are still scarce. Therefore, oceans, which represent approximately half of the global biodiversity, are a huge and virtually unexplored source of microorganisms producers of interesting metabolites. The aim of this study was to isolate fungal strains derived from a marine algae of the Sargassum genus, and the evaluation of their metabolical potential for the production of secondary metabolites. Overall, 58 strains were isolated, of which 52 were grown in liquid culture media and extracted with organic solvents, originating 99 crude extracts. These extracts were analyzed by bioassays, thin layer chromatography (TLC), nuclear magnetic resonance (NMR) and liquid chromatography coupled with a photo diode array, an evaporative light scattering, and a mass spectrometry detectors (LC - PDA - ELSD - MS). The evaluation with the antibiotic assay resulted in the largest number of active extracts (n = 13), followed by the enzymatic (n = 8), the cytotoxic (n = 3) and the antituberculosis (n = 1) assays. The crude extract AS Fub 39, which presented antibiotic activity, was selected for additional studies. This extract was purified by HPLC, and its major compound identified as the 8-methoxy-3,5-dimethylisocroman-6-ol. Later, the AS Fub 39 strain was taxonomically identified as Penicillium steckii.