Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Departamento de Biologia Celular, Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2012. / Submitted by Jaqueline Ferreira de Souza (jaquefs.braz@gmail.com) on 2012-06-25T13:01:16Z No. of bitstreams: 1 2012_LuanaSalgadoQuilici.pdf: 11627198 bytes, checksum: db0d5e877103552a600a1f29f103e6b1 (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Ferreira de Souza(jaquefs.braz@gmail.com) on 2012-06-25T13:01:29Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_LuanaSalgadoQuilici.pdf: 11627198 bytes, checksum: db0d5e877103552a600a1f29f103e6b1 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-06-25T13:01:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_LuanaSalgadoQuilici.pdf: 11627198 bytes, checksum: db0d5e877103552a600a1f29f103e6b1 (MD5) / Visando a continuidade dos estudos referentes à modulação da expressão gênica em células de mamífero, no presente trabalho foram construídos promotores sintéticos contendo intron A completo (IAs) e deletado em 200 (?200s) e em 600 pb (?600s), dirigindo a expressão do gene repórter da luciferase e do anticorpo (Ab) recombinante, fragmento FvFc, anti-CD3 (pCO). O intron sintético teve sítios de restrição alterados a fim de facilitar processos de clonagem e promover a manutenção do sítio aceptor de splicing na construção ?600s. Estas construções foram transfectadas de forma transiente em células CHO-K1, e a expressão do Ab também foi analisada em população mista estável. Verificou-se que as construções sintéticas mostraram resultados similares para a expressão do gene repórter da luciferase, exceto para a construção ?600. Para esta construção específica, a versão sintética teve rearranjos de sítios de restrição que preservaram o sítio aceptor de splicing. Dessa forma, na comparação dos resultados de expressão das construções de luciferase com promotores contendo IA original e sintético, a atividade da luciferase na versão sintética teve aumento significativo de quase 4 vezes, levando à hipótese de que o splicing do IA está diretamente relacionado ao efeito de melhoramento da expressão do gene repórter. Ao analisar a expressão do Ab anti-CD3, ao contrário, não se observou o aumento esperado nas construções com intron, sendo a construção contendo o promotor sem intron a que apresentou maior detecção de Ab secretado. Testou-se também os níveis de expressão do mRNA do Ab anti-CD3 por qPCR, onde se verificou que, para as construções com intron, apesar da baixa detecção do Ab secretado, havia alta expressão do mRNA correspondente. Esse resultado indica que a grande quantidade de mRNA produzida pode não estar sendo devidamente processada e traduzida, levando à retenção da proteína na célula. Com isso, foi mostrado que o IA e suas deleções inovadoras podem melhorar a expressão gênica, sendo ferramentas importantes para a otimização da expressão de proteínas de interesse comercial em células de mamífero. _________________________________________________________________________________ ABSTARCT / In this study we have designed different synthetic promoters containing the full intron A (IAs), and the deletions of 200 (? 200s) and 600 bp (? 600s), directing the luciferase and recombinant anti-CD3 antibody (Ab) expression (pCO). These constructs were transiently transfected on CHO-K1 cells, and the Ab expression was analysed also by stable production on a mixed population. The synthetic constructs showed similar luciferase activity results compared to the wild-type construct, except by the ?600 construct. Regarding this specific construct, the synthetic version has restriction sites rearrangements to preserve the acceptor splicing site. Thus, comparing the luciferase expression among the wild-type and synthetic ?600 construct, the luciferase activity has increased significantly, leading to a hypothesis that the improvement of gene reporter expression is directly correlated to the IA splicing. On the contrary, when we analysed the anti-CD3 Ab expression, we did not observe the increment of protein expression, with the intronless construct being the more productive one. The anti-CD3 Ab mRNA levels were detected by qPCR. For the intron-containing constructs, despite the low levels of secreted Ab, there was high expression of corresponding mRNA. This result indicates that the great amount of mRNA produced was not correctly processed and translated, leading to protein retention inside the cell. Overall, we demonstrated that the IA and its innovative deletions can improve gene expression, being important tools for protein expression in mammalian cells.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, Programa de Pós-Graduação em Agronomia, 2012. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2012-09-21T14:40:33Z No. of bitstreams: 1 2012_ MarcelaVersianiVenancioPires.pdf: 832777 bytes, checksum: f5f19b9567603c3e584148e9ad0de9a5 (MD5) / Approved for entry into archive by Luanna Maia(luanna@bce.unb.br) on 2012-09-24T13:26:59Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_ MarcelaVersianiVenancioPires.pdf: 832777 bytes, checksum: f5f19b9567603c3e584148e9ad0de9a5 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-09-24T13:26:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_ MarcelaVersianiVenancioPires.pdf: 832777 bytes, checksum: f5f19b9567603c3e584148e9ad0de9a5 (MD5) / Os frutos das espécies nativas do cerrado oferecem um elevado valor nutricional, além de atrativos sensoriais como, cor, sabor e aroma peculiares e intensos, ainda pouco explorados comercialmente. O baru (Dipteryx alata Vog.), árvore da família Leguminosae, é uma fruteira amplamente disseminada no Cerrado. O araticum (Annona crassiflora Mart.) é uma espécie frutífera da família Annonaceae, nativa da região do Cerrado, muito estudada atualmente em diversas áreas. Os objetivos deste estudo foram: a) estudar a variabilidade genética de acessos de baru com base em características morfológicas e com base em análise de DNA por marcadores moleculares RAPD e Microssatélites; b) estudar a variabilidade genética da coleção de trabalho de acessos de araticum, utilizando características morfológicas e marcadores moleculares RAPD e Microssatélites. Folhas de 10 acessos de baru e 18 acessos de araticum da coleção de trabalho da Embrapa Cerrados foram coletadas e o DNA genômico extraído utilizando o método do CTAB, com modificações. Amostras de DNA de cada material genético foram amplificadas via Reação em Cadeia da Polimerase para obtenção de marcadores moleculares RAPD e Microssatélites. Foram avaliadas 15 características morfológicas quantitativas do baru e 23 características morfológicas categóricas de baru e de araticum. As análises das amostras de DNA demonstraram grande diversidade genética entre os acessos. Os trabalhos de caracterização morfológica e molecular mostraram a importância dos diferentes grupos de características para avaliar a variabilidade genética dos acessos.Observou-se que o ambiente pode ter interferido muito nas características morfológicas dos acessos. Estudos de variabilidade genética utilizando apenas características morfológicas avaliadas in situ podem não ser adequados devido à grande influência ambiental sobre tais características. Os acessos de baru e araticum avaliados são importantes fontes de variabilidade para enriquecimento da atual coleção de trabalho da Embrapa Cerrados. Os resultados obtidos nesse trabalho sugerem que a análise das progênies ou de matrizes clonadas em diferentes ambientes assume importância estratégica para futuros estudos de caracterização morfo-agronômica de germoplasma. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The fruits of native species of the Brazilian Savanna offer a high nutritional value, as well as attractive color, flavor and intense aroma. Most of these species were not exploited commercially. The baru (Dipteryx alataVog.) is a fruit widely disseminated in the Brazilian Savanna. Araticum (Annona crassiflora Mart.) is an Annonaceae fruit, native in the Brazilian Savanna region, nowadays widely studied in several areas. The objectives of this work were: a) to analyze the genetic variability of baru accessions based on morphological characteristics and on DNA analysis using RAPD and microsatellite markers; b) studying the genetic variability of the araticum germplasm collections, using morphological and RAPD and microsatellites molecular markers. Young leaves of 10 baru and 18 araticum accessions from Embrapa Cerrados collections were collected and used to genomic DNA extractions using the CTAB method, with modifications. DNA samples from each genetic material were amplified by Polymerase Chain Reaction for obtaining. Fifteen quantitative and 23 categorical morphological characteristics were used to analyze baru and araticum genetic variability.DNA analyzes showed high genetic diversity among baru and araticum accessions. The characterization using morphological and molecular markers showed the importance of different types of characteristics to evaluate the genetic variability of accessions. It was observed that the environment may have high interference on morphological characteristics of the accessions. Genetic variability studies using only morphological characteristics assessed in situ may not be effective due to the large environmental influence on these phenotypic characteristics. The baru and araticum accessions evaluated in these work are important sources of variability to enlarge the current Embrapa Cerrados collections. The present results suggest that analysis of accessions (progeny or cloned plants)in different environment shave strategic importance for future studies of morpho-agronomic germplasm characterization.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2012. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2012-11-12T12:36:38Z No. of bitstreams: 1 2012_FrancieleMoraesAmaral.pdf: 2972295 bytes, checksum: 3e384e3b049cdffc1ac92f675bc2ad40 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2012-11-12T12:53:23Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_FrancieleMoraesAmaral.pdf: 2972295 bytes, checksum: 3e384e3b049cdffc1ac92f675bc2ad40 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-11-12T12:53:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_FrancieleMoraesAmaral.pdf: 2972295 bytes, checksum: 3e384e3b049cdffc1ac92f675bc2ad40 (MD5) / Trombofilias são definidas como uma predisposição à trombose devido a alterações hematológicas que induzem hipercoagulabilidade sanguínea; podem ser herdadas ou adquiridas. Elas são individualmente caracterizadas por uma grande variabilidade fenotípica, até quando ocorrem dentro da me sma família. Embora as trombofilias hereditárias ocorram, na maioria dos casos, devido a mudanças relacionadas com inibidores fisiológicos da coagulação ou mutações nos genes de fatores de coagulação, os níveis elevados de homocisteína no plasma também podem ser responsáveis por episódios vaso-oclusivos podendo ser adquiridos (deficiências nutricionais de folato e vitaminas B6 e B12) e / ou causados por fatores genéticos (mutações nos genes responsáveis pela expressão de enzimas envolvidas no metabolismo intracelular de homocisteína). Nosso objetivo foi investigar a frequência de polimorfismos Cistationina β-sintetase (CBS) 844ins68 e Metilenotetrahidrofolato redutase (MTHFR) C677T e A1298C em 85 pacientes ambulatoriais do Hospital de Base do Distrito Federal com o diagnóstico de trombose, de ambos os sexos (65 mulheres e 20 homens) com idades entre 14-56 anos, além de tentar compreender a possível associação de polimorfismos como fatores de risco para eventos trombóticos. Para isso, amostras de sangue foram submetidas à genotipagem por método baseado em PCR e dosagens séricas de ácido fólico, vitamina B12 e homocisteína. Todos os marcadores genéticos estavam em equilíbrio de Hardy-Weinberg. Houve diferença significativa entre os sexos nos valores séricos de homocisteína, sendo que os homens apresentaram dosagem mais elevada. Uma correlação positiva e significativa também foi evidenciada entre trombose recorrente e níveis de homocisteína (p= 0,006). Associação significativa com o risco de recorrência foi encontrada para homens (odds ratio (OR) = 4,214, intervalo de confiança de 95% (IC) = 1,1ββ80-15,048, p = 0,020), enquanto decréscimo desse risco foi verificado para as mulheres (odds ratio (OR) = 0,237, intervalo de confiança de 95% (IC) = 0,066-0,847, p = 0,020). A atividade física também foi significativamente associada com a redução do risco de trombose venosa cerebral (TVC) (odds ratio (OR) = 0,531, intervalo de confiança de 95% (IC) = 1,056-8,292, p = 0,035). Analisados separadamente, cada um dos polimorfismos estudados não teve influência sobre a variabilidade da dosagem sérica, porém quando a interação dos três polimorfismos foi realizada por MANOVA, os resultados foram significativos para homocisteína (p = 0,000). 677 MTHFR CC e genótipos CT (p = 0,000) e MTHFR 1298 entre AA e AC (p = 0,11), sendo que todos os heterozigotos apresentaram maior valor. Tromboses são eventos de etiopatogenia multigênica e multifatorial, em que o risco de manifestação da doença associado a cada alteração genética isolada é relativamente baixo, contudo a presença de mutações em vários genes aumenta significativamente este risco. Desta forma, nossos resultados indicam que as interações entre esses polimorfismos podem afetar os níveis séricos de homocisteína, onde a heterozigose pode ser um indicador de fator de risco para episódios vaso-oclusivos. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Thrombophilias are defined as a predisposition to thrombosis due to hematological changes inducing blood hypercoagulability; they can be inherited or acquired. They are individually characterized by a large phenotypic variability, even when they occur within the same family. Although hereditary thrombophilias are, in most cases, due to changes related to physiological coagulation inhibitors or mutations in the genes of coagulation factors, high levels of plasma homocysteine may also be responsible for vaso-occlusive episodes and may have acquired (nutritional deficiencies of folate and vitamins B6 and B12) and/or genetic causes (mutations in the genes responsible for expression of enzymes involved in the intracellular metabolism of homocysteine). We aimed to investigate the frequency of the polymorphisms Cystathionine β-synthase (CBS) 844ins68 and Methylenetetrahydrofolate reductase (MTHFR) C677T and A1298C in 85 outpatients of the Hospital de Base do Distrito Federal with a diagnosis of thrombosis, of both genders (65 women and 20 men) aged 14-56 years old, and to try to understand the possible association of such polymorphisms as risk factors for thrombotic events. For this, blood samples were submitted to genotyping by PCR-based methods and serum dosages of folic acid, vitamin B12 and homocysteine. All genetic markers were in Hardy-Weinberg equilibrium. There was significant difference between the genders in the serum homocysteine values, where the males had a higher dosage. A positive significant correlation was also evidenced between recurrent thrombosis and homocysteine levels (p=0.006). A significant association with risk of recurrence was found for man (odds ratio (OR) = 4.214; 95% confidence interval (CI) = 1.180-15.048, p=0.020), while decrease in this risk was found for women (odds ratio (OR) = 0.237; 95% confidence interval (CI) = 0.066- 0.847, p=0.020). Physical activity was also significantly associated with reduced risk of cerebral venous thrombosis (CVT) (odds ratio (OR) = 0.531; 95% confidence interval (CI) = 1.056-8.292, p=0.035). Analyzed separately, each one of the studied polymorphisms had no influence on serum dosage variability, but when the interaction of the three polymorphisms was performed by MANOVA, results were significant for homocysteine (p=0.000). In these interaction analyses, there were differences between CBS DD and ID genotypes (p=0.002); MTHFR 677 CC and CT genotypes (p=0.000); and MTHFR 1298 AA and AC genotypes (p=0.11), where all heterozygous had higher values. Thromboses are events of multigenic and multifactorial etiopathogenesis, where the risk of disease manifestation associated with each single genetic alteration is relatively low, but the presence of mutations in several genes significantly increases this risk. Thus, our results indicate that interactions among these polymorphisms can affect serum levels of homocysteine, where heterozygosis could be an indicator of risk factor for vaso-occlusive episodes.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2012. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2012-12-17T10:25:42Z No. of bitstreams: 1 2012_CeciliadeMoraisCarreiro.pdf: 1625987 bytes, checksum: d228df2f0f917ac1db90d61539f74e8a (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2012-12-19T11:11:50Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_CeciliadeMoraisCarreiro.pdf: 1625987 bytes, checksum: d228df2f0f917ac1db90d61539f74e8a (MD5) / Made available in DSpace on 2012-12-19T11:11:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_CeciliadeMoraisCarreiro.pdf: 1625987 bytes, checksum: d228df2f0f917ac1db90d61539f74e8a (MD5) / A conservação de animais domésticos naturalizados é ponto estratégico para a ovinocultura brasileira. Rebanhos de ovinos adaptados a ambientes extremos, como a Caatinga Nordestina e o Pantanal Matogrossense, representam um boa fonte de recurso genético para melhor adaptação de raças comerciais com baixo padrão zootécnico no Brasil. Para a introgressão de caraterísticas de rebanhos com alta resistência parasitária e alta conversão alimentar, o entendimento e o mapeamento dessas populações nativas são essenciais. Com o objetivo de aumentar os conhecimentos sobre o material genético de ovinos naturalizados, o Laboratório de Genética Animal da Embrapa Cenargen (Brasília/DF) vem realizando estudos com o grupo genético ovino Pantaneiro. Estudos preliminares evidenciam uma maior diversidade genética da população desses ovinos em relação a outras raças naturalizadas. Diante desse fato, o presente estudo analisou dez populações de ovinos Pantaneiros do estado do Mato Grosso do Sul (Brasil) para aprofundar os conhecimentos sobre este grupo genético. A amostragem envolveu animais de rebanhos convencionais e de núcleos de conservação, bem como englobou amostras de ovinos Crioulos para comparação, totalizando 343 amostras. O uso de Crioulos baseou-se na proximidade desses dois grupos. Fenotipicamente, os ovinos Pantaneiros assemelham-se à raça Crioula e esta origem deve ser investigada. Primeiramente, o estudo focou nesta proximidade entre os grupos. Para tal, a identificação de haplótipos por meio de marcadores mitocondriais e nucleares foi feita na tentativa de verificar possíveis diferenças entre OPT e OCL. Paralelamente também por meio de sequenciamento e genotipagem, observou-se o nível de divergência genética entre as várias populações de ovinos Pantaneiros. Os cálculos de diversidade haplotípica, diversidade nucleotídica e AMOVA foram realizados para inferir o grau de diferenciação entre os rebanhos OPT analisados. A partir desses dados, será possível desenhar um plano de conservação e manejo deste grupo localmente adaptado à difícil região do Pantanal. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The conservation of naturalized domestic animals is a strategic point for the Brazilian sheep industry. Flocks of sheep adapted to extreme environments, such as the Northeastern Brazilian Caatinga and the Brazilian Wetlands (also known as Pantanal) represent a good source of genetic resources to better fit commercial breeds with low standard livestock in Brazil. For introgression of herds characteristics with high parasitic resistance and high feed conversion, understanding and mapping these native populations are essential. Aiming to increase knowledge about the genetic material of naturalized sheep, the Laboratório de Genética Animal of Embrapa Cenargen (Brasilia/DF) has been studying the Pantaneiro genetic sheep group. Preliminary studies show a high genetic diversity of the population of sheep in relation to other naturalized breeds. Given this fact, this study analyzed ten Pantaneiro sheep populations from Mato Grosso do Sul (Brazil) to deepen the knowledge about this genetic group. The sampling involved animals from conventional herds and conservation centers, as well as South American Creole sheep for comparison, totalizing 343 samples. The use of Creole sheep was based on the proximity of these two groups. Phenotypically, Pantaneiro sheep resemble the Creole and this source should be investigated. Firstly, this study focused on these groups proximity. For this purpose, the haplotypes identification by mitochondrial and nuclear markers was done in the attempt to determine possible differences between OPT and OCL. Also, by sequencing and genotyping, the level of genetic divergence among the various OPT populations was observed. Estimates of haplotype diversity, nucleotide diversity and AMOVA were performed to infer the level of differentiation among the analyzed OPT herds. From these data, it will be possible to draw a plan of conservation and management of this group locally adapted to the difficult region of the Pantanal.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2012. / Submitted by Jaqueline Ferreira de Souza (jaquefs.braz@gmail.com) on 2013-01-09T14:01:52Z No. of bitstreams: 1 2012_PriscilaGomesAlves.pdf: 2754109 bytes, checksum: 0bade87fe4b724e8b185d716ad5599cb (MD5) / Approved for entry into archive by Marília Freitas(marilia@bce.unb.br) on 2013-01-10T13:37:48Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_PriscilaGomesAlves.pdf: 2754109 bytes, checksum: 0bade87fe4b724e8b185d716ad5599cb (MD5) / Made available in DSpace on 2013-01-10T13:37:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_PriscilaGomesAlves.pdf: 2754109 bytes, checksum: 0bade87fe4b724e8b185d716ad5599cb (MD5) / Amelogênese imperfeita (AI) é um grupo de alterações genéticas que afeta a formação e mineralização do esmalte dental. O termo amelogênese imperfeita é usado para definir a forma isolada, sem envolvimento sistêmico. No entanto, mais recentemente, esse termo também tem sido utilizado para indicar a presença de defeitos de esmalte generalizados em várias síndromes. O propósito do presente estudo foi realizar a caracterização fenotípica de pacientes com AI autossômica recessiva e possíveis quadros sindrômicos em pacientes atendidos na Clínica de Atendimento de Pacientes Portadores de Anomalias Dentárias do Hospital Universitário de Brasília. Todos os pacientes foram submetidos a exames clínicos, complementares e à análise histológica dos tecidos afetados. As manifestações bucais observadas nesses pacientes, associadas a AI, incluíram alterações na dentina, mordida aberta anterior, hiperplasia gengival e lesões periapicais. Histologicamente verificou-se a presença de esmalte hipoplásico com alteração em sua estrutura prismática, dentina interglobular com vários graus de comprometimento, calcificações associada a ilhas epiteliais tanto na gengiva quanto no folículo pericoronário. Dentre as alterações de outros órgãos e sistemas observados nesses pacientes, os exames médicos detectaram distúrbios na mineralização óssea, desordens neurológicas, auditivas e renais. As manifestações bucais associadas às alterações de outros órgãos e sistemas descritas nessas famílias estudadas nunca foram relatadas na literatura. Assim, a partir da caracterização fenotípica dessas duas famílias sugerem-se estudos moleculares para melhor entender as bases moleculares da AI sindrômica nessas famílias. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Amelogenesis imperfecta (AI) is a group of hereditary disorders that primarily affects the formation and mineralization of dental enamel. The term amelogenesis imperfecta usually defines an isolated trait without any systemic involvement. However, more recently, it has been also used to indicate the presence of generalized enamel defects in several syndromes or systemic conditions. The aim of this study was the to characterize the oro-dental features of two familes with an autossomal recessive form of AI treated in the Oral Care Center for Inherited Diseases, University Hospital of Brasilia. All individuals underwent clinical and complementary examination, and histological analysis of the affected tissues. Besides AI, other oral manifestations were observed in these patients including alterations in dentin, anterior open bite, gingival hyperplasia and periapical lesions. Histological analyses revealed the presence of enamel hypoplasia with structural changes in its prismatic organization, interglobular dentin with varying degrees of commitment, calcifications associated with epithelial islands in both the gum and in the dental follicle. Among the others organ systems alterations observed in these patients, medical examinations detected bone mineralization disorders, neurological, hearing and nephrological disorders. Oral manifestations associated with changes in other organs and systems described in these families have never been reported in the literature. Further molecular genetics analyses will be necessary in order to better understand the molecular basis of the syndromic AI in these families.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciência da Informação, Programa de Pós-Graduação em Ciência da Informação, 2012. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2013-04-11T15:08:47Z No. of bitstreams: 1 2012_RomualdoAlvesPereiraJunior.pdf: 7818334 bytes, checksum: 2ffaa0c5ae4b6b0b347879298e27251d (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2013-04-25T13:08:05Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_RomualdoAlvesPereiraJunior.pdf: 7818334 bytes, checksum: 2ffaa0c5ae4b6b0b347879298e27251d (MD5) / Made available in DSpace on 2013-04-25T13:08:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_RomualdoAlvesPereiraJunior.pdf: 7818334 bytes, checksum: 2ffaa0c5ae4b6b0b347879298e27251d (MD5) / Esta tese propõe um referencial epistemológico e teórico para a ideia de uma Arquitetura Genética da Informação, fundamentada pela Teoria Geral da Arquitetura da Informação, proposta por Lima-Marques (2011); no âmbito da disciplina de Arquitetura da Informação, proposta por Siqueira (2012); e considerações da Fenomenologia Genética. AArquitetura Genética da Informação compreende dois aspectos fundamentais: a gênese e a genética da informação intencional. A Gênese da Informação Intencional ocorre idealmente como fenômeno em uma das fases da redução fenomenológica; e a Genética da Informação Intencional é caracterizada em uma analogia qualitativa identicada entre a Ciência da Informação e a Genética, dentro de suas quatro principais abordagens de estudo, a saber: a Clássica, Molecular, Populacional e Quantitativa. Ontologicamente, são considerados principalmente o genoma, genótipo e fenótipo dos objetos (endurantes) e seus processos (perdurantes) em associação aos termos da informação. Como resultados da pesquisa, apresentamos a Arquitetura Genética da Informação; desenvolvemos ontologias de alto-nível de analogia entre a Arquitetura da Informação e a Genética, elicitando os termos da informação e processos biológicos que envolvem a informação; e apresentamos algumas aplicações práticas na temática de similaridade fenotípica (textual, visual, acústica e em redes de pesquisa), evolução e inovação tecnológica por memética, hereditariedade da informação e manipulação genética da informação. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / This thesis proposes an epistemological and theoretical framework for the idea of a Genetic Architecture of Information, founded by the General Theory of the Architecture of Information, proposed by Lima-Marques (2011); under the discipline of Architecture of Information, proposed by Siqueira (2012); and considerations of Genetic Phenomenology. The Genetic Architecture of Information comprises two main aspects: the genesis and genetic intentional information. The Genesis of Intentional Information ideally occurs as a phenomenon in one of the stages of the phenomenological reduction; and the Genetic of Intentional Information is charac- terized and identi ed in a qualitative analogy between the Information Science and Genetics, within its four main study approaches, namely: Classical, Molecular, Population and Quantitative. Ontologically, we mainly consider the genome, genotype and phenotype of objects (endurants) and processes (perdurants) in association with terms of information. As results, we present the Genetic Architecture of Information; high-level ontologies developed in analogy between Information Architecture and Genetics aiming to elicit terms of information and bio logical processes that involve information; and some practical applications, such as phenotypic similarity (textual, visual, acoustic and in research social networks), technological evolution and innovation by means of memetics, information hereditability, and genetic manipulation of information.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2013. / Submitted by Jaqueline Ferreira de Souza (jaquefs.braz@gmail.com) on 2013-05-02T12:03:49Z No. of bitstreams: 1 2013_RenatoFernandoAmabile_Parcial.pdf: 3662930 bytes, checksum: 173dc2dd353132060792cc71017ddac7 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2013-05-02T12:53:06Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_RenatoFernandoAmabile_Parcial.pdf: 3662930 bytes, checksum: 173dc2dd353132060792cc71017ddac7 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-05-02T12:53:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_RenatoFernandoAmabile_Parcial.pdf: 3662930 bytes, checksum: 173dc2dd353132060792cc71017ddac7 (MD5) / A versatilidade da cevada (Hordeum vulgare L.) em adaptar-se a diversos ambientes e a sua importância econômica proporcionou sua introdução no Cerrado, como cultura irrigada de inverno, na década de 70. Contudo, o êxito da sua inserção dentro do sistema de produção no Cerrado necessita de estudos contínuos e direcionados ao desenvolvimento de cultivares mais produtivas, com maior qualidade malteira e mais adaptadas. A caracterização e avaliação dos recursos genéticos da cevada, mediante caracterização agronômica e de qualidade e aliando o emprego de técnicas moleculares é a base do sucesso dos programas de melhoramento genético. Neste trabalho, objetivou-se gerar informações moleculares, morfoagronômicas e de qualidade de grãos, por meio da caracterização de genótipos elite de cevada irrigada e de estimativas de parâmetros genéticos, visando explorar mais eficientemente a variabilidade genética existente e permitir o desenvolvimento de variedades mais produtivas, com maior qualidade malteira e adaptadas a diferentes condições edafoclimáticas sob irrigação no Cerrado. Conduziu-se o ensaio na área experimental da Embrapa Cerrados, Planaltina, DF, situada a 15º35’ 30’’ de latitude Sul e 47º42’30’’ de longitude Oeste, numa altitude de 1.007 m, sob sistema de irrigação convencional. Foram avaliados 39 genótipos elite de cevada, hexástica e dística, provenientes da Coleção de Trabalho da Embrapa Cerrados, de origens diversas, adotando-se o delineamento experimental de blocos ao acaso, com quatro repetições. A variabilidade genética foi estimada utilizando 12 caracteres morfoagronômicos quantitativos, 10 caracteres de qualidade malteira e com base em 160 marcadores moleculares RAPD. Foram obtidos 160 marcadores RAPD, dos quais 141 (88,12%) foram polimórficos encontrando-se elevada variabilidade genética, passível de ser utilizada no melhoramento genético. Observou-se a existência de variabilidade genética entre os genótipos de cevada avaliados para caracteres qualitativos malteiros, sendo que os caracteres qualitativos que mais contribuíram para a divergência genética foram o nitrogênio solúvel e β-glucanas. A dissimilaridade genética de acessos elite de cevada com base em características morfoagronômicas foi estimada com base na distância generalizada de Mahalanobis e as análises de agrupamento foram realizadas utilizando como critério o método do UPGMA e o método das coordenadas principais. Foram observadas diferenças altamente significativas entre os genótipos para todas as características avaliadas. As características que mais contribuíram para a variabilidade foram a área foliar da folha bandeira e o espigamento, enquanto o teor de proteína e o acamamento foram as que menos contribuíram. Foi verificada uma tendência de agrupamento dos materiais dísticos e hexásticos. As correlações genotípicas encontradas foram, para todos os caracteres, em valores absolutos, superiores às suas correspondentes correlações fenotípicas e ambientais. Houve grande contribuição dos fatores genéticos na expressão dos caracteres e a acurácia seletiva foi alta para todos os caracteres. As elevadas magnitudes dos coeficientes de variação genética e das estimativas da herdabilidade ampla indicaram a existência de variabilidade genética apontando a possibilidade de obterem-se ganhos genéticos com a seleção para todos os caracteres. As distâncias genéticas estimadas com base em marcadores moleculares, características quantitativas e qualitativas foram fracamente correlacionadas, evidenciando a complementaridade dos diferentes grupos de características no estudo da diversidade genética. A utilização de índices de seleção e a análise da dispersão gráfica dos genótipos permitiram a seleção de genótipos promissores e indicação de cruzamentos para maximizar efeitos heteróticos e complementaridade gênica no programa de melhoramento genético da cevada irrigada no Cerrado. Como resultado finalístico desse trabalho, foi selecionada a BRS Savanna, para o cultivo em Goiás, Minas Gerais e do Distrito Federal. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The economic importance of barley (Hordeum vulgare L.) and its versatility to adapt to diverse environments afforded its introduction in the Savanna in the 70s as an irrigated winter crop. However, the success of the integration of barley within the production system in the Savanna requires continuous research and directed the development of more productive cultivars with higher malt quality and better adapted to the environment. The agronomical and quality characterization and evaluation of genetic resources of barley combining the use of molecular techniques is the basis for success of breeding programs. This work aimed to generate agronomic, grain quality and molecular information, through the characterization and the estimation of genetic parameters using a collection of elite genotypes. This information would allow to explore more efficiently the genetic variability and to enable the development of more productive varieties with higher malt quality and adapted to different soil and climatic conditions under irrigation in the Savanna. The experiments were conducted at the Embrapa Cerrados, Planaltina, DF, Brazil, located at 15°35'30" S latitude, 47°42'30" E longitude and 1.007 m located at 15º35'30'', under conventional sprinkling irrigation system. Thirty-nine elite, two and six-rowed barley genotypes from a Working Collection of Embrapa Cerrados from various origins, were evaluated, in a randomized complete block design with four replications. Genetic variability was estimated using 12 quantitative morphological characteristics, 10 parameters of malt quality and based on 160 RAPD markers. From the160 RAPD markers, 141 (88.12%) were polymorphic indicating high genetic variability, which can be used in breeding. It was observed that there is genetic variability for the malting qualitative traits among the barley genotypes evaluated, and the qualitative traits that contributed the most to the genetic diversity were soluble nitrogen and β-glucans. The genetic diversity of elite barley accessions based on agro-morphological traits was estimated based on the Mahalanobis distance and cluster analyses were performed using as criteria the UPGMA method and the method of principal coordinates. Highly significant differences were found among the genotypes for all traits evaluated. The traits that most contributed to the variability were the flag leaf area and silking, while the protein content and lodging were the traits that contributed the least. A cluster tendency of two and six-rowed samples was observed. The genotypic correlations found for all traits were greater than their corresponding phenotypic and environmental correlations. A significant influence of genetic factors on the traits expression was observed and it could be concluded that the phenotypic expression is decreased depending on the environment conditions. The selection accuracy was rated high for all traits. The high values found in the estimation of the coefficients of genetic variation and broad sense heritability indicated the existence of large genetic variability, allowing the possibility of obtaining genetic gains through the selection for all characters. The genetic distances estimated by molecular markers on quantitative and qualitative traits were weakly correlated, showing the complementarily of different groups of features in the study of genetic diversity. The use of selection indices and graphical analysis of the dispersion of genotypes allowed the selection of promising genotypes and directing crosses to maximize complementarily and heterosis effects on a genetic breeding program of irrigated barley in the Savanna. As a result of this advanced work the variety Savanna BRS was selected for cultivation in the Brazilian States of Goiás, Minas Gerais and Federal District.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2013. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2013-04-30T14:41:02Z No. of bitstreams: 1 2013_IelerFerreiraRibeiro.pdf: 1216592 bytes, checksum: d00140db9fb6953ef58299c495cacd72 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2013-05-02T13:04:00Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_IelerFerreiraRibeiro.pdf: 1216592 bytes, checksum: d00140db9fb6953ef58299c495cacd72 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-05-02T13:04:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_IelerFerreiraRibeiro.pdf: 1216592 bytes, checksum: d00140db9fb6953ef58299c495cacd72 (MD5) / O exercício físico, por aumentar o consumo de oxigênio, pode produzir um desequilíbrio entre a geração de espécies reativas de oxigênio (ERO) e a capacidade de defesa antioxidante do organismo, levando ao estresse oxidativo. Esta sobrecarga oxidativa pode acarretar dano celular e graves lesões musculares com consequente processo inflamatório. Neste contexto, muitos atletas consomem suplementos antioxidantes para evitar os danos oxidativos, a inflamação e o consequente comprometimento do desempenho. O pequi (Caryocar brasiliense Camb.), um fruto típico do cerrado brasileiro, contém diversos componentes antioxidantes, importantes para reduzir ERO produzidas durante a atividade física. Visto que nutrientes presentes na alimentação podem interagir com o genoma humano para influenciar a saúde e a doença, e variabilidade genética também pode influenciar a resposta à dieta, estudos que avaliem esta interação podem contribuir para futuras intervenções dietéticas baseadas no conhecimento do requerimento nutricional, do estado nutricional e do genótipo. Alguns polimorfismos já foram descritos na literatura como agentes interferentes do desempenho atlético em determinadas categorias de esportes. Entre eles, várias variantes sob a forma de polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs) já foram identificadas, incluindo os SNPs R577X no gene da α-actinina-3 (ACTN-3), T→ G na região promotora do gene da eritropoetina (EPO) e G6002A no receptor de eritropoetina (EPOR). O gene da ACTN-3 codifica a proteína α-actinina-3, componente altamente conservado da maquinaria contrátil das fibras rápidas da musculatura esquelética, e é expresso apenas em miofibras tipo II, que são fibras glicolíticas do músculo esquelético. O polimorfismo da ACTN-3 resulta na substituição de uma arginina (R) por um códon prematuro de parada (X) na posição 577 e cria uma proteína não funcional. A eritropoetina (EPO) é o principal hormônio endógeno regulador da eritropoiese, que permite a sobrevivência, proliferação, diferenciação das células progenitoras e, consequentemente, aumento da oxigenação dos tecidos. Assim, polimorfismos no gene da EPO ou de seu receptor (EPOR) podem afetar o desempenho atlético, por influenciarem a expressão de EPO. O objetivo deste trabalho foi investigar a influência dos SNPs rs1815739 no gene da ACTN-3, rs1617640 na região promotora do gene da EPO, e rs121918116 no gene da EPOR na peroxidação lipídica (Teste Tbars), hemograma completo e dosagens bioquímicas de creatina quinase (CK), aspartato aminotransferase (AST), alanina aminotransferase (ALT) e proteína Creativa (PCR e PCR-us), em uma amostra de corredores de rua do Distrito Federal (N=123), antes e depois da suplementação com 400mg de óleo de pequi em cápsulas ingeridas diariamente por 14 dias consecutivos. As amostras de sangue foram coletadas imediatamente após cada uma das corridas para realizar os testes. O DNA foi obtido por extração da fração leucocitária, e a genotipagem foi realizada por PCR seguida por corte com enzimas de restrição. Os dados estatísticos para as frequências alélicas e genotípicas foram gerados pelo programa Genepopweb®, e os demais dados pelo programa Statistical Package for the Social Sciences (SPSS). Os resultados demonstraram que todos os genótipos estudados encontraram-se em equilíbrio de Hardy- Weinberg (EHW). Apesar dos muitos parâmetros analisados apresentarem diferença significativa entre os sexos, faixas etárias e distâncias percorridas, nenhuma correlação entre esses parâmetros e os polimorfismos analisados foi encontrada. O polimorfismo da EPO influenciou os resultados do eritrograma e do plaquetograma, sugerindo uma vantagem aeróbica para o genótipo TG, e uma desvantagem para o genótipo GG sobre possíveis eventos de complicações microvasculares, enquanto não foi encontrada associação do polimorfismo da ACTN-3 com o desempenho de resistência. Ambos os polimorfismos influenciaram as respostas dos corredores ao óleo de pequi, onde respostas significativas foram observadas para o genótipo selvagem da EPO (TT) nos valores de eritrócitos (p=0,000), hematócrito (HCT, p=0,001), hemoglobina corpuscular média (HCM, p=0,000) e concentração hemoglobínica corpuscular média (CHCM, p=0,001); e para os genótipos TT e TG (p=0,000 para ambos) nos valores da amplitude ou variação da distribuição do tamanho dos eritrócitos (RDW). Diferenças significativas também foram observadas no plaquetograma só para os genótipos TT e TG. O polimorfismo da ACTN-3 influenciou principalmente os valores de AST e CK, onde os heterozigotos RX tiveram uma redução significativa nos valores de AST (p=0,037), e os homozigotos XX, nos valores de CK (p=0,010) após a suplementação o óleo de pequi. Esses resultados de resposta diferenciada de cada polimorfismo à suplementação com cápsulas de pequi demonstram a importância dos efeitos da nutrigenômica no desempenho do atleta. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Physical exercise, by increasing oxygen consumption, can produce an imbalance between the generation of reactive oxygen species (ROS) and antioxidant defense capacity of the organism, leading to oxidative stress. This oxidative overload can cause cell damage and severe muscle damage with consequent inflammation. In this context, many athletes consume antioxidant supplements to prevent oxidative damage, inflammation and consequent impairment of performance. Pequi (Caryocar brasiliense Camb.), a typical fruit of the Brazilian Cerrado, contains several antioxidant components that are important to reduce ROS produced during physical activity. Since nutrients present in food can interact with the human genome to influence health and disease, and genetic variability may also influence the response to diet, studies evaluating this interaction may contribute to future dietary interventions based on knowledge of nutritional requirement, nutritional status and genotype. Some polymorphisms have been described in the literature as agents interfering in athletic performance in certain categories of sports. Among them, several variants in the form of single nucleotide polymorphisms (SNPs) have been identified, including the SNPs R577X in the α-actinin-3 gene (ACTN-3), T→G in the promoter region of the erythropoietin (EPO) gene, and G6002A in the erythropoietin receptor (EPOR). The ACTN-3 gene encodes protein α-actinin-3, a highly conserved component of the contractile machinery of the fast skeletal muscle fibers, and is expressed only in type II myofibers, which are glycolytic fibers of skeletal muscle. The ACTN-3 polymorphism results in substitution of an arginine (R) by a premature stop codon (X) at position 577 and creates a non-functional protein. Erythropoietin (EPO) is the main endogenous hormone regulator of erythropoiesis, which allows the survival, proliferation, and differentiation of progenitor cells and, hence, increased oxygenation of the tissues. Thus, polymorphisms in the EPO gene or in its receptor can affect athletic performance by influencing the expression of EPO. The aim of this study was to investigate the influence of the SNPs rs1815739 in the ACTN-3 gene, rs1617640 in the promoter region of the EPO gene, and rs121918116 EPOR gene in the lipid peroxidation (TBARS assay), taking a complete hemogram and biochemical dosages of creatine kinase (CK), aspartate aminotransferase (AST), alanine aminotransferase (ALT) and C-reactive protein (CRP and hs-CRP), in a sample of street runners from the Federal District (N=123), before and after supplementation of 400mg of pequi oil capsules taken daily for 14 consecutive days. Blood samples were taken immediately after racing to perform the tests. DNA was obtained by extraction of leukocyte fraction, and genotyping was performed by PCR followed by cut with restriction enzymes. Statistical data for the allele and genotype frequencies were generated by the program Genepopweb®, and other data by the program Statistical Package for the Social Sciences (SPSS). Results showed that all genotypes were found in Hardy-Weinberg Equilibrium (HWE). Although many examined parameters showed significant differences between sexes, age group and distance covered, no correlation between these parameters and the analyzed polymorphisms was found. EPO polymorphism influenced results of erythrogram and plateletgram, suggesting an aerobic advantage for TG genotype and a disadvantage for GG genotype concerning possible microvascular complication events, while no association was found for ACTN-3 polymorphism with endurance performance. Both polymorphisms influenced runner’s response to pequi oil, where the significant responses were observed for EPO wild type genotype (TT) in the red blood cells, hematocrit, mean corpuscular hemoglobin and mean corpuscular hemoglobin concentration values; and for TT and TG genotypes in the red cell distribution width values. Significant differences were also observed in the plateletgram only for TT and TG genotypes. ACTN-3 mainly influenced AST and CK values, where heterozygous RX had significant decrease in AST values (p=0.037), and homozygous XX in CK values (p=0.010) after pequi oil supplementation. These results of differential response of each polymorphism to the supplementation with pequi capsules demonstrate the importance of the effects of nutrigenomics on athletic performance.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2008. / Submitted by Fernanda Weschenfelder (nandaweschenfelder@gmail.com) on 2009-09-29T18:45:29Z No. of bitstreams: 1 Dissert_Viviane Furlan.PDF: 1488185 bytes, checksum: 9382c9b43bf0e5df184ad2e6b2f4035d (MD5) / Approved for entry into archive by Marília Freitas(marilia@bce.unb.br) on 2010-02-04T22:29:37Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissert_Viviane Furlan.PDF: 1488185 bytes, checksum: 9382c9b43bf0e5df184ad2e6b2f4035d (MD5) / Made available in DSpace on 2010-02-04T22:29:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissert_Viviane Furlan.PDF: 1488185 bytes, checksum: 9382c9b43bf0e5df184ad2e6b2f4035d (MD5) Previous issue date: 2008-03 / A proteína CTLA-4 é expressa principalmente em células T ativadas, possuindo um papel fundamental na resposta imune, exercendo efeito regulador na ativação de célula T através da sua ligação com as moléculas da família B7, as quais são expressas em células apresentadoras de antígenos. Polimorfismos no gene CTLA-4 têm sido associados a várias doenças autoimunes e, recentemente, à doenças neoplásicas e infecciosas. A paracoccidioidomicose é uma micose sistêmica, causada pelo fungo dimórfico Paracoccidioides brasiliensis. As manifestações clínicas desta doença estão associadas a vários fatores como a secreção alterada de citocinas, hipergamaglobulinemia, e depressão da imunidade celular, sendo que a hiporesponsividade é também atribuída a uma maior expressão de CTLA-4 em células T de pacientes quando comparados a indivíduos controles. O presente trabalho teve por objetivo estudar a possível associação dos SNPs -318C/T na região promotora e +49A/G do éxon 1 do gene CTLA-4 com a PCM. Para isso, 74 pacientes com PCM e 76 indivíduos controles provenientes de regiões distintas do País tiveram suas freqüências alélicas e genotípicas determinadas. A comparação das freqüências genotípicas e alélicas, entre os grupos pacientes e controles, não mostrou diferenças significativas que pudessem associar o polimorfismo dos SNPs -318 e +49 do gene CTLA-4 com a PCM. A análise dos resultados referentes às freqüências haplotípicas obtidas mostrou que existe um forte desequilíbrio de ligação (D'=1) entre os SNPs -318 e +49 para os dois grupos estudados. Porém, a análise realizada não revelou diferenças significativas entre as freqüências haplotípicas dos grupos. Outro ponto importante analisado foi o estudo da estrutura genética (ancestralidade) dos grupos de pacientes e controles. Verificou-se que há predomínio de ancestralidade européia sobre as ancestralidades ameríndia e africana em ambos os grupos. Através desses resultados foi possível determinar que a população utilizada no estudo é geneticamente homogênea, e que o resultado negativo da associação detectado para o gene CTLA-4 e a PCM não está relacionado a ancestralidade da amostragem. Este trabalho demonstra que não foi observada nenhuma associação entre o polimorfismo dos SNPs -318 e +49 do gene CTLA-4 com a resistência e/ou susceptibilidade à Paracoccidioidomicose.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2006. / Submitted by Érika Rayanne Carvalho (carvalho.erika@ymail.com) on 2009-10-03T23:21:41Z No. of bitstreams: 1 2006_Carlos Frederico Martins.pdf: 1121178 bytes, checksum: b2ff281db7605650ff17aff1cbe0f4d0 (MD5) / Approved for entry into archive by Luanna Maia(luanna@bce.unb.br) on 2010-01-04T14:24:21Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2006_Carlos Frederico Martins.pdf: 1121178 bytes, checksum: b2ff281db7605650ff17aff1cbe0f4d0 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-01-04T14:24:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2006_Carlos Frederico Martins.pdf: 1121178 bytes, checksum: b2ff281db7605650ff17aff1cbe0f4d0 (MD5) Previous issue date: 2006 / A liofilização é um método que visa à preservação celular através da retirada da água dos sistemas biológicos por sublimação do gelo. Recentemente, a liofilização tem sido aplicada para preservar espermatozóides de mamíferos, representando uma ferramenta alternativa para conservação do material genético. Nesta tese foi testado o efeito da liofilização com diferentes meios protetores sobre a estrutura e a função dos espermatozóides bovinos. Para isto foram testados os seguintes meios: (T 1) - TCM hank’s com 10% de SFB; (T 2) - TCM hank’s com 10% de SFB e trehalose 0,2 M; (T 3) – Solução de EGTA, composta de 50mM/L de EGTA [ethylene glycol-bis (-aminoethyl ether)-N,N,N’,N’-tetraacetic acid] e 10mM/L de tris-HCl. Os efeitos da liofilização espermática foram estudados utilizando-se a microscopia óptica, para avaliar motilidade, retenção de cauda e de acrossoma com o uso da coloração de giemsa; a microscopia eletrônica, para avaliar ultra-estruturas importantes, tais como: membrana plasmática, acrossoma, mitocôndrias e microtúbulos; microscopia de fluorescência para avaliar a condição nuclear, através das técnicas de acridine orange test (AOT) e terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUDP nick-end labeling (TUNEL); e finalmente a injeção intracitoplasmática de espermatozóide (ICSI), para verificar o potencial de fecundação e de desenvolvimento embrionário dos espermatozóides liofilizados. Os resultados do primeiro trabalho indicaram que a viabilidade nuclear pode ser preservada de acordo com o meio protetor utilizado. Ainda demonstrou que a técnica de TUNEL é mais sensível que AOT para identificar danos nucleares, sendo a mais indicada para esta finalidade. No segundo trabalho, os dados revelaram que a liofilização ainda é um método agressivo aos espermatozóides, danificando a membrana plasmática e tornando-os imóveis. Porém, algumas estruturas, como acrossomo e mitocôndrias foram preservadas em todos os tratamentos. O núcleo foi melhor preservado nos meios com trehalose e EGTA. Estes tratamentos com a menor porcentagem de fragmentação nuclear também apresentaram as melhores taxas de cabeças descondensadas, formação de pró-núcleos e desenvolvimento embrionário, confirmando a avaliação de TUNEL. Estes resultados indicaram que o espermatozóide liofilizado participa do processo de fecundação quando utilizado pela ICSI. Entretanto, estudos adicionais são necessários, sendo que a melhoria desta tecnologia dependente dos meios protetores e de avanços na técnica de ICSI nos bovinos. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Lyophilization is a procedure developed for cell preservation, as a result of restriction of active water from biological systems by ice sublimation. Recently, freezedrying process has been used to preserve mammalian spermatozoa, becoming an alternative tool for genetic material preservation. In the present thesis the effect of lyophilization with different protecting medium on the bovine sperm cells structure and function was evaluated. The following medium were tested: (T 1) - TCM Hank’s with 10% FCS; (T 2) - TCM Hank’s with 10% de SFB and trehalose 0,2 M; (T 3)–EGTA solution, composed of 50mM/L de EGTA [ethylene glycol-bis (-aminoethyl ether)- N,N,N’,N’- tetraacetic acid] and 10mM/L of Tris-HCl. Effects of sperm lyophilization were evaluated using optical microscopy analysis to assess motility, maintenance of the tail, and acrosome integrity by trypan-bleu/giensa stain; electron microscopy analysis was used to evaluated ultrastructure of important components such as plasma membrane, acrosome and microtubules; fluorescence microscopy was used to analyzed nuclear integrity by Acridine Orange Test (AOT) and terminal deoxynucleotidyl transferasemediated dUDP nick-end labeling (TUNEL); and finally, intracytoplasmic sperm injection (ICSI) to verify the fecundity and embryo development potential of lyophilized spermatozoa. The results of the first experiment indicated that nuclear viability preservation depends on the protector media utilized. In addition, it showed that TUNEL technique is more sensitive than AOT to detect nuclear damage, being the most indicated for nucleus evaluation. In the second experiment, data demonstrated that lyophilization is an aggressive procedure for the sperm cells, causing damage in the plasma membrane and lost of motility. However, other cell components such as acrosome and mitochondria were similarly preserved in all treatments. Nuclei were better conserved in medium containing EGTA and trehalose. Those treatments, which had lower of fragmented DNA, also presented higher rates of decondensed sperm head, pronucleus formation and embryo development, confirming TUNEL evaluation. Theses results suggested that freeze-drying spermatozoa participate in the process of fertilization when used for ICSI. However, additional studies are needed, being the improvements in this technology reliant on the adequate protector media and in the higher efficiency of ICSI technique.