Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-03-20T12:32:19Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_EstudoPapelProteinas.pdf: 1960769 bytes, checksum: 15d801dd31a9d124e97a22426c8157fb (MD5) / Approved for entry into archive by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2017-03-22T15:10:14Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_EstudoPapelProteinas.pdf: 1960769 bytes, checksum: 15d801dd31a9d124e97a22426c8157fb (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-22T15:10:14Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_EstudoPapelProteinas.pdf: 1960769 bytes, checksum: 15d801dd31a9d124e97a22426c8157fb (MD5) Previous issue date: 2015-04-28 / O câncer gástrico (CG) é o quarto tipo câncer mais frequente e a segunda maior causa de mortalidade em todo o mundo. Um melhor entendimento da biologia da progressão dessa neoplasia é crucial para redução da taxa de mortalidade com o desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas e de tratamento dos pacientes. Em nosso estudo, foram analisadas amostras de câncer gástrico, encontrando-se expressão elevada de mRNA e de proteínas das quinases SRC e LYN, e níveis diminuídos da quinase CKB. Essas alterações podem ter um papel na invasão e na metástase dos tumores gástricos. A expressão dessas três quinases também foram associadas com a expressão do oncogene MYC, um possível biomarcador para o câncer gástrico. Objetivando-se entender os mecanismos que regulam a expressão desses genes, avaliou-se os padrões de metilação dessas três quinases. Assim, descobriu-se que a hipometilação de SRC e LYN e a hipermetilação de CKB estavam presentes apenas nas amostras neoplásicas gástricas. A perda de metilação de SRC e LYN foi associada com aumento nos níveis de expressão de seus mRNA e proteínas, sugerindo que a metilação do DNA está envolvida na regulação da expressão dessas quinases. A frequência de hipermetilação e metilação parcial de CKB foi mais elevada em amostras de câncer gástrico do que em amostras gástricas não-neoplásicas; no entanto, a expressão de CKB estava apenas parcialmente regulada por metilação do DNA. Analisando os dados de expressão, descobriu-se que alterações nos padrões de metilação do DNA das três quinases estudadas também estavam associadas com o avanço do câncer gástrico, invasão tumoral mais profunda e a presença de metástase. Portanto, a expressão de SRC, LYN e CKB ou a metilação do DNA, relacionada a esses genes, podem ser marcadores preditivos úteis para a progressão tumoral e alvos estratégicos em terapêutica anticâncer. / Gastric cancer (GC) is the fourth most frequent cancer type and the second ighest cause of câncer mortality worldwide. A better understanding of the biology of the progression of this neoplasia is crucial to reducing the mortality rate with the development of novel patient management and therapeutic strategies. In this study, we analyzed gastric cancer samples and found elevated expression of SRC and LYN kinase mRNA and protein but decreased levels of CKB kinase, alterations that may have a role in the invasiveness and metastasis of gastric tumors. Expression of the three studied kinases was also associated with MYC oncogene expression, a possible biomarker for gastric cancer. To understand the mechanisms that regulate the expression of these genes, we evaluated the DNA methylation patterns of the three kinases. We found that SRC and LYN hypomethylation and CKB hypermethylation were only present in neoplastic gastric samples. The loss of SRC and LYN methylation was associated with increased levels of mRNA and protein expression, suggesting that DNA methylation is involved in regulating the expression of these kinases. The frequency of hypermethylation and partial methylation of CKB was higher in the gastric cancer samples than in the non-neoplastic gastric samples; however, CKB expression was found to be only partly regulated by DNA methylation. In an analysis of the expression data, we found that alterations in the DNA methylation pattern of the three studied kinases were also associated with advanced gastric cancer, deeper tumor invasion and the presence of metastasis. Therefore, SRC, LYN and CKB expression or DNA methylation could be useful markers for predicting tumor progression and targeting in anti-cancer strategies.

Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-03-27T13:33:17Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_AnaliseGenesTP53.pdf: 906769 bytes, checksum: 868736765e91f437e42d5aca6b356441 (MD5) / Approved for entry into archive by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2017-03-30T12:15:36Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_AnaliseGenesTP53.pdf: 906769 bytes, checksum: 868736765e91f437e42d5aca6b356441 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-30T12:15:36Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_AnaliseGenesTP53.pdf: 906769 bytes, checksum: 868736765e91f437e42d5aca6b356441 (MD5) Previous issue date: 2016-06-17 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Apesar da considerável incidência, estudos de alterações genéticas nos genes TP53, PTEN, IDH1 e IDH2, em tumores não gliais, são raros e, em alguns casos, inexistentes. Os tumores não gliais são classificados geralmente como benignos e raramente evoluem à malignidade, apresentando diferentes classificações, incidências e localizações. Os genes supressores tumorais e de resposta a danos ao DNA, TP53 e PTEN, estão entre os genes mais frequentemente mutados em tumores humanos. Os genes IDH1 e IDH2 estão envolvidos no metabolismo celular e, também, foram encontrados frequentemente mutados em gliomas, melanomas e leucemias, sendo atualmente considerados como bons marcadores em gliomas. Foram realizadas análises de alterações genéticas nos genes citados, a fim de verificar se estão associados à etiologia e/ou progressão de tumores não gliais do Sistema Nervoso Humano (SNH). Foram utilizadas as técnicas de PCR-SSCP para amplificação da região de interesse e triagem mutacional das amostras para posterior sequenciamento. Foram analisadas 37 amostras de tumores não gliais (14 schwannomas, 3 Meningiomas, 4 Meduloblastomas, 2 Neurocitomas e 14 Metástases do Sistema Nervoso Central (SNC). Somente o gene IDH1 apresentou polimorfismos na SSCP em 12 (32,4%) amostras, sendo, então, submetidas ao sequenciamento. No entanto, as reações de sequenciamento foram satisfatórias em apenas em 5 amostras, entre as polimórficas, (1 metástase, 1 meningioma e 3 schwanomas,). Análises dessas 5 amostras identificaram diferentes mutações, uma delas, presente em todas, uma transversão T→A no éxon 4 do códon 106 do gene IDH1, resultando na substituição do aminoácido treonina por serina. Foram, também, identificadas outras mutações em regiões não codificantes (íntron 4) do gene IDH1 em duas dessas amostras. As mutações encontradas em nosso estudo ainda não haviam sido relatadas na literatura. Nossos resultados indicam a participação do gene IDH1 na patogênese desses tumores. / Despite the considerable incidence, studies of genetic changes in gene TP53, PTEN, IDH2 and IDH1, in not glial tumors are rare and, in some cases, nonexistent. Glial tumors are usually not classified as benign and rarely evolve to malignancy, with different classifications, effects and locations. The tumor suppressor genes and response to DNA damage, TP53 and PTEN are among the most commonly mutated gene in human tumors. The genes IDH1 and IDH2 are involved in cell metabolism and also were frequently found mutated in gliomas, melanomas and leukemias, currently being considered as good markers for gliomas. Genetic analyzes were performed in those genes, in order to verify that are associated with the etiology and/or progression of non-glial tumors of Human Nervous System (HNS). SSCPPCR techniques for the amplification of the region of interest and mutational screening of samples for subsequent sequencing were used. We analyzed 37 samples of non-glial tumors (14 schwannomas, meningiomas 3, 4 Medulloblastomas, 2 neurocytomas and 14 metastases of Central Nervous System (CNS). Only the gene IDH1 polymorphisms presented on the SSCP 12 (32.4%) samples, and then subjected to sequencing. However, sequencing reactions were satisfactory in only 5 samples, of the polymorphic, (1 metastasis, meningioma 1 and 3 schwannomas). Analysis of these samples have identified 5 different mutations, one present in all, one transversion T → A in codon 106 of exon 4 of the IDH1 gene resulting in amino acid substitution of threonine by serine. Were also identified other mutations in noncoding regions (intron 4) of gene IDH1 in two of these samples. The mutations found in our study had not yet been reported in the literature. Our results indicate the participation the gene IDH1 in the pathogenesis of these tumors.

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:21:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DissLFR.pdf: 1075822 bytes, checksum: f9dc443682a3269a2f32e2a5579089a0 (MD5) Previous issue date: 2005-06-10 / Financiadora de Estudos e Projetos / The ubiquitin system represents a selective mechanism for intracellular proteolysis in eukaryotic cells that involves the sequential activity of three enzymes, E1 (Ubiquitin activating enzyme), E2 (Ubiquitin-conjugating enzyme), and E3 (Ubiquitin-protein ligase). The identification of these proteins and their targets as well as structural data is essential to understand their function in the eukaryotic cell. In the present study the open reading frame of human Ubiquitin- conjugating enzyme UBE2G2 was isolated from a human brain cDNA panel, cloned into pET28 vector and expressed in Escherichia coli. His-tagged protein was then purified by nickel-affinity chromatography and subjected to structural and functional studies using circular dichroism (CD) and an in vitro ubiquitin-binding assay, respectively. The affinity chromatography assay rendered approximately the 27 mg of the soluble recombinant HisUBE2G2 after expressed in bacteria at low amounts of IPTG (0,1mM) in 3 hours of induction. The CD spectra of recombinant pure protein showed a secondary structure content according with the expected for a member of the E2 family (Ubiquitin-conjugating enzyme), with 35 % of α-Helix, 21 % of β sheets and 23 % of turns. Moreover, purified protein was able to bind ubiquitin molecules when mixed with a HeLa cell extract during the pull-down assay. Taken together the results presented in this work allow inferring that HisUBE2G2 was expressed in their active form. / O Sistema de Ubiquitinação representa o mecanismo de degradação protéica intracelular mais importantes em todos nas células eucarióticas e envolve a atividade seqüencial de três enzimas conhecidas como E1, enzima ativadora de ubiquitina, a E2 enzima conjugante de ubiquitina e a E3 enzima ligante de ubiquitina. A identificação destas proteínas e seus alvos protéicos, assim como as obtenções de dados estruturais são essenciais para entender a função deste sistema dentro da célula eucariótica. No presente trabalho, a fase de leitura aberta (ORF) do gene humano ube2g2 foi isolado de um painel de cDNA de cérebro humano, foi clonado no vetor pET28a e expressado em bactérias Escherichia coli. A proteína de 18,5 kDa em fusão com uma cauda de histidinas foi posteriormente purificada por cromatografia de afinidade e submetido a ensaios estruturais e funcionais a traves do medição do CD e a traves do ensaio de pull-down, respectivamente. A cromatografia de afinidade rendeu 27 mg de proteína solúvel, logo após de tê-la expressado heterologamente a baixas concentrações de indutor IPTG 0,1 mM em três horas de indução. O espectro de CD da proteína purificada mostrou o conteúdo de estrutura secundaria de acordo ao esperado para um membro típico da família de enzimas E2, apresentando um 35 % de hélices α, 21 % de folhas β e 23 % de giros. Alem do mais, a proteína purificada foi capaz de ligar molécula de ubiquitina quando misturada com um extrato de células HeLa, durante o ensaio de pull-down. Desta maneira e com esses resultados apresentados aqui pode se inferir que a proteína humana UBE2G2 foi expressa na sua forma ativa.

Submitted by Marlene Santos (marlene.bc.ufg@gmail.com) on 2017-10-03T17:52:20Z No. of bitstreams: 2 Tese - Fabiana Gonçalves dos Reis - 2017.pdf: 5970849 bytes, checksum: e7504d09f87c5499323f6d7c66e10a0f (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-10-04T12:07:46Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Fabiana Gonçalves dos Reis - 2017.pdf: 5970849 bytes, checksum: e7504d09f87c5499323f6d7c66e10a0f (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-04T12:07:46Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Fabiana Gonçalves dos Reis - 2017.pdf: 5970849 bytes, checksum: e7504d09f87c5499323f6d7c66e10a0f (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-08-09 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Neurological disorders are a group of conditions that manifest early in the development of the child, so that delayed neuropsychomotor development (ADNPM) and intellectual disability (ID) can impair cognitive, language, motor and social behavior. The etiology of ID is quite heterogeneous and prenatal, perinatal and postnatal factors are associated with an increased risk of this deficiency. However, 30 to 50% of the cases remain with the unknown etiology. In this context, the main objective of this study was to identify submicroscopic genomic alterations (<5Mb) by means of microarray chromosomal analysis (CMA) in patients with clinical indication of ADNPM and/or ID, sent by attending physicians of the state public health network of Goiás. We analyzed 149 cases of both sexes. Of the total number of patients, 47 had the diagnosis clarified using cytogenetics by G banding. Of 102 patients with an incomplete diagnosis, 72 agreed to participate in the present study and, therefore, performed the CMA. The elucidation of the diagnosis by CMA was possible in 22 patients. Among the results obtained, three rare cases were selected to compose this thesis. The first case is from a patient in whom a de novo microduplication of 0.45 Mb in the 5q35.2q35.3 region containing the NSD1 gene was identified. The effect of the dosing of this gene has been related to Sotos Syndrome and its inverted phenotype. The second case shows the molecular detection of an absent allele on the X chromosome and the presence of 28 CGG repeats in FMR1 gene in the present allele. The CMA showed that the patient had a de novo microdeletion of 4.176 Mb in the Xq27.3-q28 region that affected 34 genes, including five genes (TMEM185A, TMEM257, FMR1, IDS, and FMR2) that were directly correlated with ID phenotypes and neurological disorders. The third case is a de novo microdeletion of 1.59 Mb in the 1p32.3 region involving the DHCR24 gene, which causes a gene dosage effect influencing the activation of enzymes that cause desmosterolosis, which is a desmosterol conversion disorder in cholesterol. Thus, the results of this thesis showed the relevance of the use of the CMA technology to diagnose patients with clinical signs of ADNPM and/or ID that presented karyotype without alterations, evidencing the importance of this technology for public health. / Os distúrbios neurológicos constituem um grupo de condições que se manifestam precocemente durante o desenvolvimento da criança, de forma que o atraso do desenvolvimento neuropsicomotor (ADNPM) e a deficiência intelectual (DI) podem acarretar prejuízo às funções cognitivas, de linguagem, motricidade e comportamento social. A etiologia da DI é bastante heterogênea e fatores pré-natais, perinatais e pós-natais estão associados ao aumento do risco dessa deficiência. No entanto, 30 a 50% dos casos permanecem com a etiologia desconhecida. Neste contexto, o objetivo principal deste estudo foi identificar alterações genômicas submicroscópicas (<5Mb) por meio da análise cromossômica por microarranjos (CMA) em pacientes com indicação clínica de ADNPM e/ou DI, encaminhados por médicos assistentes da rede pública de saúde do Estado de Goiás. Foram analisados 149 casos, de ambos os sexos. Do total de pacientes, 47 tiveram o diagnóstico esclarecido utilizando-se a citogenética por bandeamento G. Dos 102 com diagnóstico não concluído, 72 concordaram em participar da presente pesquisa e, portanto, realizaram o CMA. A elucidação do diagnóstico pelo CMA foi possível em 22 pacientes. Dentre os resultados obtidos, foram selecionados três casos raros para compor esta tese. O primeiro caso é de um paciente em que foi identificada uma microduplicação de novo de 0,45 Mb na região 5q35.2q35.3, contendo o gene NSD1. O efeito da dosagem deste gene tem sido relacionado à síndrome de Sotos e ao seu fenótipo invertido. O segundo caso apresenta a detecção molecular de um alelo ausente no cromossomo X e a presença de 28 repetições CGG no gene FMR1 no alelo presente. O CMA mostrou que a paciente tem uma microdeleção de novo de 4,176 Mb na região Xq27.3-q28 que afetou 34 genes, dentre estes, cinco genes (TMEM185A, TMEM257, FMR1, IDS, and FMR2) que foram correlacionados diretamente com os fenótipos de DI e distúrbios neurológicos. O terceiro caso é de uma microdeleção de novo de 1,59 Mb na região 1p32.3 envolvendo o gene DHCR24, que acarreta um efeito de dosagem gênica influenciando na ativação de enzimas que causam a desmosterolose, que é um transtorno de conversão do desmosterol em colesterol. Assim, os resultados desta tese mostraram a relevância da utilização da tecnologia do CMA para diagnosticar pacientes com indicação clínica de ADNPM e/ou DI que apresentaram cariótipo sem alterações, evidenciando a importância desta tecnologia para a saúde pública.

Submitted by Franciele Moreira (francielemoreyra@gmail.com) on 2017-10-26T13:06:49Z No. of bitstreams: 2 Tese - Ricardo Goulart Rodovalho - 2017.pdf: 4249347 bytes, checksum: b731c79e9585351e61ca0e415749d4b1 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-10-26T14:48:15Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Ricardo Goulart Rodovalho - 2017.pdf: 4249347 bytes, checksum: b731c79e9585351e61ca0e415749d4b1 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-26T14:48:15Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Ricardo Goulart Rodovalho - 2017.pdf: 4249347 bytes, checksum: b731c79e9585351e61ca0e415749d4b1 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-09-05 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG / The main scope of the current study was to develop a short tandem repeat (STR) multiplex system, made up of 22 highly informative loci, for application in forensic genetics. The system comprised of 21 polymorphic autosomal short tandem repeat loci, namely D3S1358, TH01, D21S11, D18S51, Penta E, D5S818, D13S317, D7S820, D16S539, CSF1PO, Penta D, vWA, D8S1179, TPOX, FGA, D2S441, D17S1301, D19S433, D18S853, D20S482 and D14S1434, and the amelogenin gene locus. Strategies were developed to overcome the challenges involved in creating a multiplex system. Based on the literature and available databases, STR loci were selected to obtain discriminatory markers, and followed specific criteria for this purpose. Primers were designed using the Primer3 software and the AutoDimer was used to evaluate potential interactions between them. The 21 selected STR loci were validated individually and jointly, both to assess their sensitivity and to test the efficiency of the multiplex system. Statistical analyses were based on the genetic data of 450 unrelated individuals living in the State of Goiás, thus allowing the establishment of the parameters necessary to use this system. A total of 239 alleles were detected for the 21 loci in the set, allowing for a probability of identity of 4.23 x 10-25 to be obtained. The combined power of discrimination was 0.999999999999999999999999 and the combined power of exclusion was 0.99999. Upon complete validation of the entire system, this multiplex assay was considered to be a powerful tool for application in human identification by DNA analysis. / O escopo principal do atual estudo foi o desenvolvimento de um sistema multiplex de loci STR, composto por 22 loci altamente informativos para aplicação em genética forense. O sistema compreendeu 21 loci STRs polimórficos autossômicos, a seguir D3S1358, TH01, D21S11, D18S51, Penta E, D5S818, D13S317, D7S820, D16S539, CSF1PO, Penta D, vWA, D8S1179, TPOX, FGA, D2S441, D17S1301, D19S433, D18S853, D20S482 e D14S1434, e o locus do gene da amelogenina. As estratégias foram desenvolvidas para superar os desafios envolvidos na criação de um sistema multiplex. Com base na literatura e nas bases de dados disponíveis, os loci STRs foram selecionados para obter marcadores discriminatórios e seguiram critérios específicos para esse fim. Os primers foram projetados usando o software Primer3, e o AutoDimer foi usado para avaliar potenciais interações entre eles. Os 22 loci selecionados foram validados individualmente e em conjunto, tanto para avaliar sua sensibilidade quanto para testar a eficiência do sistema multiplex. As análises estatísticas foram baseadas nos dados genéticos de 450 indivíduos não relacionados e residentes no estado de Goiás, permitindo assim estabelecer os parâmetros necessários para a utilização do sistema. Um total de 239 alelos foram detectados para os 21 loci do conjunto, permitindo obter uma probabilidade de identidade de 4,23 x 10-25. O poder combinado de discriminação foi 0,999999999999999999999999 e o poder combinado de exclusão foi 0,99999. Após a validação completa de todo o sistema, este ensaio de multiplex foi considerado uma ferramenta poderosa para aplicação na identificação humana pela análise do DNA.

Submitted by Jaqueline Duarte (1157279@mackenzie.br) on 2018-08-20T20:55:16Z No. of bitstreams: 2 Marcos Procopio Calliari.pdf: 1108527 bytes, checksum: 03306313dad12d1da28dc52c0f171b36 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Giovanna Brasil (1154060@mackenzie.br) on 2018-08-27T19:11:41Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Marcos Procopio Calliari.pdf: 1108527 bytes, checksum: 03306313dad12d1da28dc52c0f171b36 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-27T19:11:41Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Marcos Procopio Calliari.pdf: 1108527 bytes, checksum: 03306313dad12d1da28dc52c0f171b36 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2018-05-15 / This paper intends to carry out an analysis of the generational approach in the present time and to offer a proposal to reinforce its importance as an analytical tool. For that, its structure comprises a theoretical conceptual discussion and analysis of examples of recent studies in the country, identifying gaps and opportunities, and a recommendation of methodological innovations that could increase its relevance and usage to its full potential. It takes a historical perspective on the subject starting from the analysis of Julian Marias (1949) to address some of the main authors who have deepened the concepts, such as Mentré (1920), Ortega y Gasset (1966), and in particular Mannheim (1952), to more recent authors such as Abrams (1982) and Strauss and Howe (1991). It notes that the current application of the generation approach does not respect the conceptual robustness, causing an underutilization of the approach and its social potential. The paper then presents three distinct examples of recent Brazilian studies with generational ambitions, and discusses the advances and limitations introduced by them. Considering the context identified, it then presents a proposal for methodological innovations, based on the precepts of the École des Annales, which can, by rescuing the analytical depth of the conceptual framework, serve as a stepping stone for future studies and research. While reviewing a tool with high public interest from various perspectives and presenting new possibilities of approach, it seeks to reinvigorate the field of study and its multiple uses. / A pesquisa procura analisar a abordagem geracional na atualidade e propor o resgate de sua relevância como ferramenta analítica, através de uma discussão conceitual teórica, observação de sua utilização no país e proposta de inovações metodológicas para futuros estudos. Para isso, faz uma análise histórica do tema iniciando pela perspectiva de Julian Marías (1949), para abordar alguns dos principais autores que aprofundaram os conceitos, como Mentré (1920), Ortega y Gasset (1966), e, em particular, Mannheim (1952), até atingir autores mais recentes, como Abrams (1982) e Strauss e Howe (1991). Ressalta que o que se utiliza da abordagem na atualidade não respeita a robustez conceitual, provocando uma subutilização do conceito geracional e de seu potencial social. Em seguida, o trabalho apresenta três exemplos distintos de estudos brasileiros recentes com aspectos geracionais, e discute avanços e limitações por eles apresentados. Considerando o cenário identificado, apresenta então uma proposta conceitual para inovações metodológicas, baseadas nos preceitos da Escola dos Annales, que possam, resgatando a profundidade analítica do arcabouço conceitual, servir de base para estudos e pesquisas futuras. Ao rever uma ferramenta com alto interesse público sob várias perspectivas e apresentar novas possibilidades de abordagem, busca revigorar o campo de estudo com múltiplos potencias de utilização.

Submitted by Irvana Coutinho (irvana@ufpa.br) on 2012-12-12T14:17:30Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_AvaliacaoPerfilMetilacao.pdf: 1830589 bytes, checksum: f88cbaf31829d2cb8cb979c72b380439 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva(arosa@ufpa.br) on 2012-12-20T12:59:58Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_AvaliacaoPerfilMetilacao.pdf: 1830589 bytes, checksum: f88cbaf31829d2cb8cb979c72b380439 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-12-20T12:59:58Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_AvaliacaoPerfilMetilacao.pdf: 1830589 bytes, checksum: f88cbaf31829d2cb8cb979c72b380439 (MD5) Previous issue date: 2012 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O câncer gástrico continua sendo uma importante causa de morte dentre os tipos de câncer no Brasil e no mundo. A origem do câncer de estomago provém, assim como nos demais, de acúmulo de alterações genéticas. Portanto, se faz necessário saber quais alterações genéticas são importantes para desencadear a patogênese do câncer gástrico. O MNU, conhecido carcinógeno, quando ingerido de forma oral em doses determinadas desencadeia o desenvolvimento de adenocarcinoma gástrico do tipo intestinal, com aparecimento de estágios pré definidos característico deste tipo tumoral. Com base nestes conhecimentos, realizamos um experimento com 6 macacos da espécie Cebus apella induzidos à desenvolver câncer gástrico do tipo intestinal. Os animais ingeriam 16mg/kg de peso diariamente da droga, com desenvolvimento de lesões pré-neoplásicas em todos. Infelizmente, devido à toxicidade da droga, somente um animal sobreviveu ao tratamento e desenvolveu desenvolveu uma massa tumoral propriamente dita. Foram feitas avaliações periódicas dos animais, em dias pré-determinados (ao início, no 120º, 150º, 300º, 940º) com coletas de fragmentos da mucosa gástrica. Foram coletadas 20 amostras de tecido, distribuídas entre mucosa normal, gastrite, displasia, metaplasia e tumoral. Destas amostras extraímos DNA para as análises do gene CDH1. Não há na literatura sequencia deste gene para a espécie utilizada no estudo. Com este objetivo, utilizamos iniciadores construídos a partir de sequencias de CDH1 de Callithrix jacchus (espécie filogeneticamente) e seqüenciamos cerca de 342pb da região promotora de CDH1 de C. apella. As análises mostraram uma similaridade de 98% desta região com a dos humanos, com presença de vários sítios de ligação de fatores de transcrição (sp1, Ap2, NF-x, AREB6, Puf e CTF) além da presença do CAAT Box. Esta região ainda possui 30 sitios CpGs, o que indica que ela pode estar sofrendo regulação epigenética. Para se verificar como se encontrava o padrão de metilação desta região realizamos uma análise de MSP com iniciadores específicos e constatamos que houve predominância de alelos não metilados de CDH1 para todas as amostras pré neoplásicas e a amostra de adenocarcinoma encontra-se metilada. O que pode ser constatado com um ensaio de Imunohistoquímica, onde somente a amostra tumoral não expressava a proteína caderina. Desta maneira nossas análises sugerem que a metilação do gene CDH1 desempenha papel importante na tumorigênese gástrica em C. apella, e é um evento tardio, uma vez que não é observado nos outro tipos teciduais não tumorais E, partindo-se da similaridade entre as seqüências, podemos sugerir que o mesmo evento pode está ocorrendo em humanos. Esta metilação do promotor do CDH1 leva a um silenciamento deste gene o que desencadeia o estabelecimento de adenocarcinomas gástricos, fato apoiado pela literatura onde vários trabalhos apontaram que a hipermetilação do promotor da caderina está associada ao desenvolvimento do câncer gástrico. / The gastric cancer remains a major cause of death among cancers in the world. In Brazil, are expected around 500 000 new cases in 2012/2013. The origin of stomach cancer, as in others, arises from the accumulation of genetic alterations. Therefore, it is necessary to know which genetic changes are important in triggering the pathogenesis of gastric cancer. We know that the intestinal type develops through well defined stages. The MNU - a known carcinogen - when ingested in oral form at dosages determined triggers development of this histological type of gastric cancer. Based on this knowledge, we conducted an experiment with six specime of Cebus paella, induced to develop intestinal type gastric cancer. The animals consumed 16mg/kg of body weight daily drugs. All pre-neoplasic lesions developed. Due to drug toxicity, only one survived the entire treatment and developed a tumor. Periodic evaluations were made of animals in pre-determined days (the beginning, days 120, 150, 300, 940) during which samples were made of the gastric mucosa. We collected 20 samples of tissue, distributed among normal mucosa, gastritis, dysplasia, metaplasia, and tumor. DNA extracted from these samples for further analyzes of the CDH1 gene. There is no sequence of this gene in the literature for the species under study. So the first step was to get this sequence. Using the initiators constructed from sequences of CDH1 Callithrix jacchus (species phylogenetically closer to C. apella) we get a sequence of 342pb. There is a similarity of 98% with humans, the presence of binding sites for transcription factors like (sp1, Ap2, NF-x, AREB6, Puf and CTF) and the presence of CAAT Box. The sequence has 30 CpG sites could suffer epigenetic regulation. We also performed MSP analysis with specific primers and found that the region analyzed, there was predominance of the unmethylated CDH1 alleles for all samples pre-neoplastic and adenocarcinoma sample is methylated. When we compared these data with immunohistochemistry revealed that only tumor sample did not express the protein cadherin. Our analyzes suggest that methylation of the CDH1 gene plays an important role in gastric tumorigenesis in C. apella. And, from the similarity between sequences, we suggest that the same occurs in humans. This cadherin promoter methylation leads to inactivation of the gene and establishment of gastric adenocarcinomas. The cadherin promoter hypermethylation has been reported in several articles associated with the development of gastric cancer.

Submitted by Irvana Coutinho (irvana@ufpa.br) on 2013-01-24T12:43:45Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_AvaliacaoEfeitoAntigenotoxicol.pdf: 986207 bytes, checksum: 5cb788fa976fca7b6c6ca781a3c1f029 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva(arosa@ufpa.br) on 2013-01-24T14:58:46Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_AvaliacaoEfeitoAntigenotoxicol.pdf: 986207 bytes, checksum: 5cb788fa976fca7b6c6ca781a3c1f029 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-01-24T14:58:46Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_AvaliacaoEfeitoAntigenotoxicol.pdf: 986207 bytes, checksum: 5cb788fa976fca7b6c6ca781a3c1f029 (MD5) Previous issue date: 2012 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O Método CANOVA® (CA) é um imunomodulador brasileiro de formulação homeopática. CA é indicado em condições clínicas nas quais o sistema imune se encontre comprometido. O N-Metil-N-Nitrosoureia (NMU) é um agente N-nitroso alquilante e carcinogênico utilizado como modelo experimental em roedores e macacos. O NMU também apresenta efeitos genotóxicos/mutagênicos analisáveis por testes clássicos de detecção de danos ao DNA e aberrações cromossômicas. Apesar de vários estudos terem demonstrado resultados promissores na utilização do medicamento CA, não existem trabalhos relatando possíveis efeitos antigenotóxicos deste medicamento, a despeito de seu potencial anticarcinogênico. Assim, o presente trabalho avaliou in vitro os efeitos antigenotóxicos e anticitotóxicos do medicamento CA em linfócitos humanos expostos ao NMU. Foram utilizadas amostras de linfócitos humanos que foram submetidos a diferentes concentrações de uma mistura contendo CA e NMU. A viabilidade das células expostas ao NMU foi avaliada pelo ensaio MTT, a genotoxicidade/antigenotoxicidade do CA foi avaliada pelo teste do cometa e a anticitotoxicidade do CA foi verificada pela quantificação de apoptose e necrose utilizando corantes fluorescentes (laranja de acridina/brometo de etídeo). No teste MTT verificamos que o NMU conseguiu diminuir a viabilidade dos linfócitos de forma significativa. No teste do cometa foi observado que CA diminui significativamente os danos ao DNA induzidos pelo NMU, caracterizando um claro efeito antigenotóxico do composto homeopático. CA também diminuiu de forma significativa a frequência de apoptose induzida pelo NMU em leitura realizada após 24 horas de tratamento. Concluímos que o CA apresentou um efeito antigenotóxico e anticitotóxico nas condições avaliadas no presente estudo, demonstrando, assim, um claro potencial citoprotetor. / The CANOVA® (CA) method is a Brazilian homeopathic immunomodulator. CA is indicated in clinical conditions where the immune system is impaired. N-Methyl-Nnitrosourea (NMU) is an N-nitroso carcinogenic alkylating agent used as an experimental model in rodents and monkeys. NMU also shows genotoxic/mutagenic effects that can be assessed by classical tests such as detection of DNA damage and chromosomal aberrations. Although several studies have shown promising results in the use of CA, there are no studies reporting possible antigenotoxic effects of this medicine, despite its anticancer potential. Therefore, the present study evaluated the in vitro antigenotoxic and anticytotoxic effects of CA in human lymphocytes exposed to NMU. Samples of human lymphocytes that were subjected to different concentrations of a mixture containing CA and NMU were used in the present study. The viability of cells exposed to NMU was evaluated by MTT assay, CA genotoxicity/antigenotoxicity was evaluated by the comet assay and CA anticytotoxicity was assessed by quantification of apoptosis and necrosis using fluorescent dyes (acridine orange/ethidium bromide). The MTT assay showed that NMU was able to decrease lymphocyte viability significantly. By using the comet assay it was observed that CA significantly reduces DNA damage induced by NMU, which sets a clear antigenotoxic effect of the homeopathic compound. CA also reduced significantly the frequency of NMU-induced apoptosis after 24 hours of treatment. We conclude that CA had an antigenotoxic and anticytotoxic effect in the conditions evaluated in this study, thereby demonstrating a clear cytoprotective potential.

Submitted by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2013-06-28T19:32:22Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_DoencaExperienciaRelacoes.pdf: 2091541 bytes, checksum: b33bfeb9502a457ecfedaa6dda9ddd81 (MD5) / Approved for entry into archive by Edisangela Bastos(edisangela@ufpa.br) on 2013-06-28T20:02:26Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_DoencaExperienciaRelacoes.pdf: 2091541 bytes, checksum: b33bfeb9502a457ecfedaa6dda9ddd81 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-06-28T20:02:26Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_DoencaExperienciaRelacoes.pdf: 2091541 bytes, checksum: b33bfeb9502a457ecfedaa6dda9ddd81 (MD5) Previous issue date: 2012 / O estudo ora apresentado analisa a representação biossocial de pessoas com Anemia Falciforme (AF) no Estado do Pará, agravo entendido como um fenômeno biocultural por envolver aspectos evolutivos, genéticos, ambientais, socioeconômicos e culturais da vivência cotidiana dos indivíduos acometidos pela síndrome. A investigação aborda as sociabilidades de quarenta (40) interlocutores com AF, representando cerca de 10% dos pacientes em tratamento na Fundação Hemopa (Belém), centro de referência em doenças hematológicas do Estado, englobando a sua situação de vulnerabilidade social, suas percepções de Saúde e Doença, os tratamentos complementares (folk medicine), diagnóstico, estigmas, preconceitos, tabus e dificuldades de acesso e acessibilidade aos serviços do SUS com os quais eles convivem rotineiramente. A metodologia compreensiva e a análise de conteúdo revelam as experiências próximas dos sujeitos que diariamente convivem com as instabilidades da enfermidade. A vivência da doença, elaborada através das relações sociais, conversas, percepções e enredamentos familiares e extrafamiliares do grupo em questão, que em seu conjunto organiza sua vida social de modo sui gêneris, foram os principais dados revelados, considerando a dor física e psicológica representada pelo corpo adoecido. O habitus em relação ao estilo de vida dos sujeitos é um recorte que engloba a natureza étnico-racial da AF, ainda entendida como “doença que vem do negro” e que necessita ser desmistificada pelos profissionais de saúde que os assistem no dia-a-dia em ambulatórios de todo o Estado. Concluo sugerindo que a AF é uma doença que está atrelada aos Determinantes Sociais em Saúde, incorporando as diversas suscetibilidades dos interlocutores, que necessitam de maior sensibilidade política e dos setores de atenção básica à saúde para que as pessoas que compartilham as vicissitudes da AF possam ser incluídas socialmente. / This study examines the biosocial representation of individuals with Sickle Cell Anemia (SCA) in Pará State, Brazil, considering that this as a biocultural phenomenon, involving evolutionary, genetic, environmental, socioeconomic and cultural aspects of their daily life. The research deals with the sociability and the health issues of forty people with SCA, representing 10% of the States' cases, contacted in the Fundação Hemopa, Belém, the reference center for blood disorders in the State. The research encompasses their routine situation of social vulnerability, their perceptions of Health and Disease, treatments (Western and Folk Medicine), diagnostic, stigmas, prejudices, taboos and difficulties of access and accessibility to the services of SUS (the Brazilian National Health System). A comprehensive qualitative methodology and content analysis were used to understand the experience of persons who live daily with the instability and complexity of the disease. The personal experience of disease was uncovered though the formal conversations/interviews about the origins of the biological heritage, social relations, family entanglements and extra-familial dimensions of the individuals' in question, focusing on the evolution of SCA, especially considering the physical and psychological pain and other health complications experienced by the study's participants. The habitus in relation to their life ways is a category which includes the perception of the ethnic/racial nature of SCA, still perceived as "a disease that comes from the black people" with all its associated taboos. I conclude suggesting that many impacts of SCA are linked to the Social Determinants of Health and that there are important differences in relation to the susceptibilities of the persons, with many biosocial layers that require greater awareness by the political, clinical and primary care institutions responsible for the care of the affected citizens.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-01-04T13:00:39Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Kaisson Ernane dos Santos - 2013.pdf: 2738475 bytes, checksum: 6c79ab9177dd126fa5cb677127debc2c (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-01-04T13:01:13Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Kaisson Ernane dos Santos - 2013.pdf: 2738475 bytes, checksum: 6c79ab9177dd126fa5cb677127debc2c (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-04T13:01:13Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Kaisson Ernane dos Santos - 2013.pdf: 2738475 bytes, checksum: 6c79ab9177dd126fa5cb677127debc2c (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2013-11-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The Major Histocompatibility Complex is mainly composed by genes of the adaptive immune response. In humans, part of this complex is known as the Human Leukocyte Antigens (HLA), whose genes are responsible for specific antigen presentation to effector immune cells. The classical class I HLA genes (HLA-A, -B and -C) are responsible for antigen presentation to T CD8+ cells and they constitute the most polymorphic genes in the human genome. This variability is maintained by selection mediated by microorganisms. In contrast to their classical counterparts, the non classical class I genes (HLA-G, -E and -F) present low variability and are associated with immune tolerance due to the interaction with NK and T cells inhibitor receptors. HLA-G is the most studied non classical gene, which is associated with immune response modulation, mainly during pregnancy. Considering that natural selection is acting on the HLA-G regulatory regions maintaining high heterozigosity in this region, we evaluated a nearby Alu insertion (AluyHG) correlating this Alu element with coding and 3’UTR HLA-G polymorphisms. The AluyHG insertion was particularly associated with the HLA-G haplotype known as G*01:01:01:01/UTR-1, considered a high-expressing HLA-G haplotype. The G*01:01:01:01/UTR-1/AluyHG haplotype would be the most recent HLA-G haplotypes, in spite of its high frequency in worldwide populations. / O Complexo Principal de Histocompatibilidade (MHC) é formado principalmente por genes que participam da resposta imunológica adaptativa. Entre esses genes encontramos o grupo denominado de Antígenos Leucocitários Humanos (HLA), que são responsáveis pela apresentação de antígenos específicos às células efetoras do sistema imunológico. Os genes HLA de classe I clássicos (HLA-A, -B e -C), responsáveis pela apresentação antigênica aos linfócitos T citotóxicos, são considerado como os mais polimórficos do genoma humano e de outros vertebrados. A variabilidade desses genes e elevada heterozigose é mantida por seleção mediada por microrganismos. Diferentemente dos genes clássicos, os genes HLA de classe I não clássicos (HLA-G, -E e -F) apresentam variabilidade reduzida e como função principal a tolerância imunológica, por meio de sua interação com receptores inibitórios presentes nas células NK e T. O HLA-G é o mais estudado entre esses genes e, devido sua importância como molécula imunomoduladora e sua importância em situações como gestação, e considerando evidências anteriores de seleção natural mantendo uma elevada heterozigose nas regiões regulatórias do HLA-G, avaliamos a presença de uma inserção Alu (AluyHG) próxima a este gene correlacionando os achados com a variabilidade contida nas suas regiões codificadora e 3’ não traduzida. A inserção AluyHG mostrou-se em desequilíbrio de ligação (LD) com os polimorfismos do gene HLA-G. Especificamente, o elemento inserido apresentou-se em LD com um haplótipo denominado G*01:01:01:01/UTR-1, considerado como um haplótipo de alta produção da molécula de HLA-G. Esse haplótipo aparentemente é o mais jovem entre humanos, apesar de sua elevada frequência nas populações estudadas até o momento.