Le virus de la maladie de Marek (GaHV-2), est un α-herpèsvirus induisant des lymphomes T chez le poulet. L’étude de la protéine IE ICP22 a montré que cette protéine est principalement asssociée à la phase lytique du cycle viral avec une localisation majoritairement cytoplasmique. Nos résultats montrent que cette protéine réprime la transcription des promoteurs viraux. Par ailleurs, nous avons montré que la protéine était produite à la fois à partir de deux transcrit, un transcrit monocistronique et un transcrit bicistronique de façon majoritaire. La transcription d’ICP22 est pilotée par un promoteur unique dont nous avons localisé le « core » promoteur dans les 200 nt en amont du gène. Dans notre étude, nous avons montré que le promoteur du gène ICP22 était faiblement soumis au mécanisme de méthylation. Ce promoteur peut être régulé par la protéine virale ICP4 connue pour être un transactivateur majeur au sein des alphaherpèsvirus. Enfin, nous avons mis en évidence qu’ICP22 était la cible de 3 miR viraux parmi lesquels la cible prédite pour le mdv1-miR-M1 et mdv1-miR-M5-3p entraînaient une diminution du taux du transcrit. / Marek’s disease virus (GaHV-2) is an α-herpesvirus that induces T-cell lymphoma in chickens. The study of the IE ICP22 protein showed that this protein is mainly associated to the lytic phase of the viral cycle viral with a cytoplasmic localization. Our results showed that this protein represses the transcription of the viral promoters. ICP22 protein is produced from two transcript, a monocistronic and a bicistronic. The transcription of ICP22 is drived by a unique promoter whose "core" promoter was located in the 200 nt upstream to the gene. In our study, we showed that ICP22 promoter was weakly subjected to régulation by methylation. This promoter is regulated by the viral protein ICP4 known to be a major transactivateur within alphaherpèsvirus. Finally, we highlighted that ICP22 was the target of 3 miR viral among which the target predicted for mdv1-miR-M1 and mdv1-miR-M5-3p decreased the rate of the ICP22 transcripts.

Le Gallid Herpesvirus 2 (GaHV-2) est un herpesvirus responsable de lymphomes T chez le poulet qui encode 25 miARN matures regroupés en deux clusters localisés au sein des régions TRL/IRL et TR/IR. Mes travaux ont consisté en l’étude de la régulation transcriptionnelle du cluster mdvl-miR-M8-M10 situé au sein de la région IR5/TR. Le promoteur est constitué d’au moins 2 séquences répétées de 60 pb contenant des éléments de réponse à la protéine p53. Nous avons montré que cette protéine classiquement suppresseur de tumeur était détournée de sa fonction par le virus au profit de l’expression du cluster de miR viraux. D’autre part, le promoteur de l’oncomiR-21 cellulaire, surexprimé au cours de la lymphomagenèse induite par GaHV-2 et localisé au niveau d’une région hyper conservée chez les vertébrés est piloté en partie par les protéines de la famille AP-1. Nous avons montré que l’oncoprotéine virale Meq surexprimée au cours de l’infection transactivait le promoteur de miR-21. Enfin, l’étude des cibles potentielles virale ou cellulaire du miR-21 semble indiquer que ce dernier pourrait être impliqué dans les mécanismes de latence virale et de lymphomagenèse / Gallid herpes virus 2 (GaHV-2) is an alphaherpesvirus involved in lymphomas on chickens that encodes 25 matures miRNA grouped in 2 clusters localized on IRL and TRL regions. In the first hand, I studied the transcriptional regulation of the mdvl-miR-M8-M10 cluster localized on IRS/TRS region. A promoter constituted of at last 2 repeats of 60 bp harbouring p53 responsive element was identified. We showed that tumour suppressive protein p53 was diverted from its function to permit viral miRNA expression. On the second hand, the promoter of the cellular oncomiR-21, over expressed during GaHV-2 lymphomagenesis localized in a region highly conserved on vertebrate and was piloted by AP-1 proteins. We have shown that viral oncoprotein Meq overexpressed during infection transactivated gga-miR-21 promoter. At last, study ofpotential viral and cellular targets for gga-mir-21 seemed to indicate that gga-miR-21could be involved in viral latency establishment and lymphomageneSis.

Le Gallid herpesvirus 2 est un virus oncogène responsable des lymphomes T chez les poulets. L´infection par ce virus est divisée en une phase lytique dépendante de l´expression des gènes très précoces ICP4 et ICP27 et une phase latente, caractérisée par l´expression de l’ARN long non codant LAT. Nous avons montré que le gène LAT exprime de transcrits épissés alternativement, plaçant le cluster de microARN mdv1-miR-M8-M10 dans leur premier intron. Un microARN de ce cluster régule l’expression d’ICP4 et ICP27. L’étude du promoteur d’ICP27 a permis d’identifier plusieurs éléments de réponse (ER) importants, dont une boîte GC et des ER AP1 et CRE, et montré que le promoteur n’est pas transactivé par la protéine virale VP16. Nous avons identifié un transcrit épissé d’ICP27, piloté par le promoteur gK et encodant une isoforme tronquée d’ICP27. Les deux isoformes d’ICP27 colocalise avec les protéines SR du splicéosome dans le noyau, mais sont associées à des localisations différentes. / Gallid herpesvirus2 (GaHV-2) is an oncogenic herpesvirus responsible of T-cell lymphoma in chicken. GaHV-2 infections are divided into a lytic phase, depending on the expression of immediate earky genes like ICP4 and ICP27, and a latent phase characterized by the expression of the long non-coding RNA LAT. In this study, we have shown that the LAT is expressed as several highly spliced transcripts, all placing the microRNA clyster mdv1-miR-M8-M10 in their first intron. One of those microRNAs regulated the expression of ICP4 and ICP27. Studies on the ICP27 promoter allowed us to identify several important response elements (REs), including a GC box and AP1 and CRE REs, and to show that the viral protein VP16 does not transactivate the promoter. We identified a spliced transcript driven by the gK promoter that encodes a truncated ICP27 isoforms. Both isoforms of ICP27 are colocalized with spliceosomal SR proteins in the nucleus, but show a slightly different localization.

Le Gallid herpesvirus 2 (GaHV-2), responsable de lymphomes T du poulet, est contrôlé par le vaccin CVI988/Rispens. Mes travaux de thèse ont montré que le vaccin était composé, au contraire des souches virulentes, d’une population dynamique de variants viraux majoritairement délétés de la région promotrice et d’une partie variable de l’extrémité 5’ du gène LAT codant des microARN et associé à la latence virale. Dans une approche vaccinale, un virus recombinant correspondant à l’un des variants majoritaires du vaccin CVI988/Rispens a été généré à partir d’une souche GaHV-2 hypervirulente, clonée en bacmide. Nous avons montré que ce recombinant, présentant une perte de pathogénicité presque totale, était capable de protéger significativement les poulets lors d’une épreuve avec des souches GaHV-2 hypervirulentes. Ces travaux posent les bases du développement de nouveaux vaccins à partir de souches hypervirulentes émergentes. / Gallid herpesvirus 2 (GaHV-2), responsible for T-cell lymphomas chicken, is controlled by the vaccine CVI988/Rispens. My work has shown that the vaccine contains, unlike virulent strain, a viral variants population mostly deleted from the promoter region and a variable portion of the 5' end of the gene LAT encoding microRNA and associated with viral latency. In a vaccine approach, a recombinant virus corresponding to a majority variant of the CVI988/Rispens vaccine was generated from a hypervirulent strain GaHV-2, cloned as bacmid. We showed that recombinant, with an almost total loss of pathogenicity, was able to significantly protect chickens against challenge with virulent strains GaHV-2. This work lays the basis for the development of new vaccines from emerging virulent strains.

Le virus de la maladie de Marek (GaHV-2), est un "-herpèsvirus induisant des lymphomes T chez le poulet. L’étude des pri-miARN des régions RL à partir des miR-M4, -M11, M31 et -M1 a montré des initiations de transcription dispersées et internes aux longs pri-miARN initialement décrits. Les tests de fonctionnalité des régions en amont ont permis de conclure quant à l’absence d’activité promotrice suggérant une régulation par le prmiR-M9M4, caractérisé dans cette étude, ou par le prMeq. Le gène de 7,5 kpb d’un ARNlnc (ERL, Edited Repeat Long) épissé et antisens à ces transcrits a été caractérisé. Une hyper-édition A-en-G des transcrits ERL par ADAR1 a été mis en évidence. Principalement lié au cycle lytique, l’édition indique une répression fonctionnelle durant cette phase. Les régulations de l’expression d’ADAR1 chez l’humain, positives par la voie de réponse aux interférons et négatives par SOCS1, ont été validées chez le poulet. L’inhibition de SOCS1 par le gga-miR-155 et son orthologue viral mdv1-miR-M4-5p a été montré fonctionnelle chez le poulet comme chez l’humain et mène à une surexpression d’ADAR1 lors de l’activation des voies de réponse aux interférons. / Marek’s disease virus (GaHV-2) is an "-herpesvirus that induces T-cell lymphoma in chickens. In this study, we have shown that some pri-miRNAs, which are specific of miR-M4, -M11, M31 et -M1, initiated at dispersed transcription start sites. They are located in internal positions from previously described pri-miRNAs but upstream sequences lack promoter activity, indicated a potential regulation by the upstream prmiR-M9M4, characterised during this study, or the prMeq. The 7.5 kbp gene of the ERL (Edited Repeat Long) lncRNA, which is alternatively spliced et antisense of these pri-miRNAs was defined. An extensive A-to-G hyperediting of it sequence was observed strongly linked to the lytic phase, indicated a functional repression during this phase. We showed that, like the human one, the chicken ADAR1 expression was positively controlled by the IFN response pathway et negatively by the suppressor of cytokine signaling 1 (SOCS1). Like the human et murine miR-155-5p, the chicken gga-miR-155-5p et the GaHV-2 analog mdv1-miR-M4-5p deregulate this pathway by targeting et repressing expression of SOCS1, leading to the upregulation of ADAR1.

Le Gallid Herpesvirus 2 (GaHV-2) est un herpesvirus responsable de lymphomes T chez le poulet. Son génome code pour 25 miARN matures regroupés en 2 clusters localisés au sein des régions répétées TRL/IRL etIRS/TRS. Mon travail a tout d’abord consisté en l’étude de la fonctionnalité des deux brins de mdv1-pré-miRM4sur deux cibles virales UL-28 et UL32. Le brin mdv1-miR-M4-5P ayant été identifié comme orthologue dumiARN cellulaire miR-155, leurs impacts ont été comparés sur six cibles cellulaires et la cible virale UL-28.Les différents miARN de GaHV-2 présentant des taux d’expression variables, nous avons identifié, dans larégion TRL/IRL, des ARNm responsables de leur transcription à partir d’exon ou d’intron. De plus, nous avonsidentifié un promoteur plutôt spécifique de la latence et responsable de la transcription de l’ensemble desmiARN de l’IRL/TRL, de l’oncogène meq et du transcrit Meq/vIL-8. / Gallid Herpesvirus 2 (GaHV-2) is a herpesvirus inducing T-lymphoma in chickens. Its genome encodes 25mature miRNAs splitted in two clusters localized in IRL/TRL and IRS/TRS repeated regions. In this work, wefirst analyzed the functionality of the two strands of mdv1-pre-miR-M4 on two viral targets named UL-28 andUL-32. As one strand of this miRNA was identified as an ortholog of cellular miRNA-155, their effects wereassessed on six cellular targets and on the UL-28 viral target. As a differential expression of miRNAs wasobserved during GaHV-2 infection, we found numerous IRL/TRL transcripts responsible for the intronic orexonic transcription of viral miRNAs. Moreover, we identified a latency promoter controlling at the same timetranscription of all IRL/TRL miRNAs, the oncogenic meq gene and the Meq/v-IL8 transcript.