Os roedores fossoriais do gênero Ctenomys formam um grande grupo com 56 espécies, sendo os mamíferos dominantes da exploração do nicho subterrâneo neste continente. Apresentam grande variação cariotípica, com o número diplóide variando entre 10 em C. steinbachi a 70 em C. pearsoni. Dentre as espécies observadas no sul do Brasil, C. minutus é a que apresenta a distribuição mais ampla, ocorrendo desde o município de Jaguaruna, em Santa Catarina até São José do Norte no estado do Rio Grande do Sul. Sete números diplóides e oito citótipos eram descritos anteriormente para a espécie, sendo eles: 2n=42, 45, 46a, 46b, 47, 48, 49, 50a, apresentando, inclusive, zonas de hibridação entre 2n=46-48 e 2n=48 e 42. Com o objetivo de caracterizar, descrever e comparar os citótipos encontrados com os demais descritos para a espécie, analisando-os filogeneticamente, uma amostra de 51 espécimes de Ctenomys minutus Nehring,1887, foi coletada ao longo região da Planície Costeira do RS, entre os municípios de Tavares (31°23'S; 51°09'N) e São José do Norte (31°52'S; 51°54'N). Foram definidos cinco pontos de coleta ao longo da área de estudo, sendo os mesmos, distanciados cerca de 20km entre si. O material foi obtido a partir de medula óssea (FORD & HAMERTON, 1956) e analisado por meio das técnicas de coloração convencional, bandamento G (SEABRIGTH, 1971), bandamento C (SUMNER, 1972), NOR (HOWELL & BLACK 1980) e o material de meiose, segundo FORD & EVANS (1959). Para a realização da técnica de FISH, utilizou-se o kit de sondas “todos os telômeros humanos” (ONCOR). A homeologia dos caracteres entre os diversos citótipos foi estabelecida através de bandamento G e C e os caracteres foram definidos conforme MODI (1987) e ORTELLS (1995). Para a análise filogenética utilizou-se o método de “outgroup”, sendo escolhido C. lami como grupo externo, pois, segundo FREITAS (2001) mais antigo em relação a C. minutus A distribuição geográfica da espécie foi ampliada em cerca de 90km, passando o limite sul, do município de Tavares para o município de São José do Norte. Cinco números diplóides e três citótipos foram encontrados, 2n = 46b, 47b, 48b, 49b e 50b, sendo que, apenas 46b era descrito para a espécie. Em todos os citótipos estudados, o par sexual está representado, nos machos, por um cromossomo X submetacêntrico e um cromossomo Y acrocêntrico de tamanho similar ao braço longo de seu par e nas fêmeas, por um par X submetacêntrico. Comparando-se os padrões de bandas G dos cariótipos de C. minutus pode-se notar que 2n=50a, encontrado em Jaguaruna apresenta os cromossomos 20 e 17 e que esses estão fusionados na forma 2n=50b de São José do Norte. O par 2 está fissionado em 2n=50b, sendo que apresenta ainda uma inversão pericentromérica que o transforma em um metacêntrico. Os cromossomos 23 e 19 são mantidos entre as formas e o mesmo acontece entre os cromossomos 22, 24 e 16. Os citótipos 2n=48a e 2n=48b apresentam os mesmos cromossomos, com exceção do braço curto 2p de 2n=48b, que se apresenta na forma metacêntrica. No que se refere aos híbridos, 2n=47b difere de 2n=47a pelo par heterozigoto, formado pelos cromossomos 24 e 16 em 2n=47b e pelo par 2 em 2n=47a. Já em 2n=49a e 2n=49b a diferença não está no par heterozigoto, formado pelos cromossomos 23 e 19, mas sim, no par 2, que encontra-se fusionado em 2n=49a e fissionado com inversão em 2n=49b e nos cromossomos 20 e 17, que encontram-se fissionados em 2n=49a e fusionados em 2n=49b Pouca quantidade de heterocromatina constitutiva foi encontrada no bandamento C dos três citótipos analisados. Somente três autossomos apresentaram um bloco de heterocromatina constitutiva, que ocupou todo o braço curto em 48b e 50b e apenas um autossomo em 46b. Também o cromossomo Y nos machos, independente de seu citótipo, é totalmente positivo. Em relação a NOR, todos os citótipos analisados apresentaram marcação na constrição secundária do braço longo do par marcador. No que se refere à meiose, a aparente ausência de trivalentes em ambos os heterozigotos, aliada ao fato de que, em algumas diacineses, em vez da presença do número esperado de bivalentes mais o trivalente, observar-se um cromossomo a mais, pode indicar a presença de um univalente. A seqüência telomérica foi observada em todas as extremidades dos cromossomos. Não foram observadas bandas teloméricas etópicas em 2n=50b. Em 2n=46b e 48b, a desnaturação das metáfases não possibilitou a análise. Para a análise filogenética, apenas cinco caracteres puderam ser analisados. A árvore de consenso separou os citótipos em três grupos: o mais basal representado apenas por 50a, outro por 46a, 48a e 42 e o terceiro, possuindo as características mais apomórficas, representado por 46b, 48b e 50b. O índice de consistência obtido foi de 0.71 e o índice de retenção foi de 0.75. O caracter 01 (fusão 20/17) foi o principal responsável pela separação de 50a do restante dos citótipos. A formação do grupo basal pode ser explicada pela presença do Rio Araranguá, que atuaria como uma barreira geográfica. Quanto à separação dos outros dois grupos, duas hipóteses puderam ser formuladas. Uma, explicada por fatores extrínsecos e outra por fatores intrínsecos. Como nenhuma barreira geográfica que explique a separação foi encontrada, a explicação alternativa é que os dois rearranjos 02 e 05, que dão suporte a um dos grupos, poderiam ser responsáveis pelo surgimento de uma barreira reprodutiva. Para testar essas duas hipóteses, contudo, mais estudos devem ser realizados. Os achados indicam também a existência de duas novas zonas híbridas para a espécie, com, pelo menos uma delas, resultante de um contato secundário, após regressão do nível do mar e fechamento da ligação existente entre a lagoa dos Patos e o oceano, na feição atualmente denominada de Barra Falsa, na localidade de Bojuru, à cerca de 2.300 anos. Mais coletas devem ser realizadas para confirmar a existência desta zona. / The rodents of the genus Ctenomys form a large group of fifty-six species, being the dominating mammals occupying the subterranean niche in South America. Chromosome polymorphism among species ranges from 2n=10 to 70. Among the species observed in southern Brazil, C. minutus is the one with the widest geographic distribution, inhabiting the sand fields and dunes that extend from Jaguaruna, in the State of Santa Catarina, to São José do Norte, in the state of Rio Grande do Sul. Seven diploid numbers and eight cytotypes were previously described for this species: 2n=42, 45, 46a, 47, 48, 49, 50a, including the existence of hybrid zones between 2n=46 and 48, and 2n=48 and 42. A sample of 51 specimens of Ctenomys minutus Nehring, 1887 was collected along the Coastal Plain of Rio Grande do Sul, between collection points Tavares (31o23’S 51o09’N) and São José do Norte (31o52’S 51o54’N). Five collection points were actually defined along this area, distancing each other by approximately 20km. The geographic distribution of C. minutus was enlarged in 90km from Tavares to São José do Norte in south way. Three cytotypes and five karyotypes were found, 2n = 46b, 47b, 48b, 49b and 50b, four of which, were not described for the specie. The animals were captured with the use of Oneida Victor no 0 traps. Chromosomes were obtained from bone marrow according to FORD and HAMERTON (1956) and analyzed through G (SEABRIGHT, 1971) and C band patterns (SUMNER, 1972). The characterization of nucleolus organizer regions (NOR) was done through techniques, developed by HOWELL and BLACK (1980). For the fluorescence in situ hybridization (FISH), the all-telomeric human probes (ONCOR) were used. The phylogenetic analysis was performed through the outgroup method using the TREE GARDENER 2.2 software, considering C. lami as outgroup, since it is ancient in relation to C. minutus, according to FREITAS (2001). In all the cytotypes studied, the sex pair is represented by a submetacentric X chromosome and an acrocentric Y chromosome sized similarly to its pair’s long arm in the males. In the females, it is represented by a submetacentric X pair. Analyzing the G-band patterns found, and comparing them with those described by FREITAS (1997), it was observed that in cytotypes 50a and 50b, pairs 17 and 20 of the Jaguaruna cytotypes are fused in the São José do Norte karyotype, while pair 2 identified in 2n=50 from Jaguaruna is fissioned in São José do Norte. Cytotype 2n=48b differs from 2n=48a because of the presence of an inversion in chromosome 2p, which transforms it in a metacentric chromosome. Cytotype 47b’s difference from 47a stems from the heterozygote pair, which is formed by a 24/16 rearrangement in the former, and by a 2p/2q rearrangement in latter. 49a and 49b differ not because of the heterozygote pair, but because of the 2p/2q rearrangement, which is fused in 2n=49a and fissioned in 2n=49b, and by rearrangement 20/17 fissioned in 2n=49a and fused in 2n=49b. Constitutive heterochromatin was found in small quantity in the C banding for the three cytotypes analyzed. Only three autosomes presented it, occupying the entire length of the short arm in 2n=48b and 2n=50b and only one autosome in 2n=46b. Chromosome Y in males, independent of its cytotype, also showed positive. The nucleoulus organizer region (NOR) was found to be located in the secondary constriction of the long arm of pair 8. The probe hybridization was found in the telomeric regions of both short and long arms, of all chromosomes in the 2n=50b cytotype. No etopic signs were detected around the centromeres. In both 48b and 46b the desnaturation of the chromosomes did not allow the analysis. For the phylogenetic analysis, only five characters could undergo the analysis. The consense tree separated the karyotypes into three groups: the most basal one being represented only by 50a; 46a, 48a, and 42 formed another one; and the third group, represented by 46b, 48b and 50b, showing more apomorphic characteristics. The consistency index was 0.71 and the retention index, 0.75. Character 1 (fusion 20/17) was the main responsible for the separation of 50a from the remaining karyotypes. The group formed by 46b, 48b, and 50b was found to be supported by two synapomorphys, of character 2 (fusion 2p/2q) and character 05 (presence of heterochromatin in the marker pair). Character 4 (fusion 22/24/16) represented an autapomorphy for its respective cytotypes. The formation of the basal group can be explained by the presence of the Araranguá River, which acts as a geographical barrier. Regarding the other two groups’ separation, two hypotheses could be formulated. The first can be explained by extrinsic factors; the other one could be due to intrinsic factors. As there are no geographic barriers that can account for the separation, the alternative explanation would be that rearrangements 2 and 5, which support one of the groups, could be responsible for the appearance of a reproductive barrier. However, more studies are required for to test of these hypotheses. The present findings also indicate the existence of two possible new hybrid zones for this species – one of them, at least, being the result of a secondary ntact after the regression of the sea level and the closing of a connection between Patos Lagoon and the Atlantic Ocean, called Barra Falsa, in a location called Bojuru, approximately 2,300 years ago. More collects are also required to confirm this.

Os roedores fossoriais do gênero Ctenomys formam um grande grupo com 56 espécies, sendo os mamíferos dominantes da exploração do nicho subterrâneo neste continente. Apresentam grande variação cariotípica, com o número diplóide variando entre 10 em C. steinbachi a 70 em C. pearsoni. Dentre as espécies observadas no sul do Brasil, C. minutus é a que apresenta a distribuição mais ampla, ocorrendo desde o município de Jaguaruna, em Santa Catarina até São José do Norte no estado do Rio Grande do Sul. Sete números diplóides e oito citótipos eram descritos anteriormente para a espécie, sendo eles: 2n=42, 45, 46a, 46b, 47, 48, 49, 50a, apresentando, inclusive, zonas de hibridação entre 2n=46-48 e 2n=48 e 42. Com o objetivo de caracterizar, descrever e comparar os citótipos encontrados com os demais descritos para a espécie, analisando-os filogeneticamente, uma amostra de 51 espécimes de Ctenomys minutus Nehring,1887, foi coletada ao longo região da Planície Costeira do RS, entre os municípios de Tavares (31°23'S; 51°09'N) e São José do Norte (31°52'S; 51°54'N). Foram definidos cinco pontos de coleta ao longo da área de estudo, sendo os mesmos, distanciados cerca de 20km entre si. O material foi obtido a partir de medula óssea (FORD & HAMERTON, 1956) e analisado por meio das técnicas de coloração convencional, bandamento G (SEABRIGTH, 1971), bandamento C (SUMNER, 1972), NOR (HOWELL & BLACK 1980) e o material de meiose, segundo FORD & EVANS (1959). Para a realização da técnica de FISH, utilizou-se o kit de sondas “todos os telômeros humanos” (ONCOR). A homeologia dos caracteres entre os diversos citótipos foi estabelecida através de bandamento G e C e os caracteres foram definidos conforme MODI (1987) e ORTELLS (1995). Para a análise filogenética utilizou-se o método de “outgroup”, sendo escolhido C. lami como grupo externo, pois, segundo FREITAS (2001) mais antigo em relação a C. minutus A distribuição geográfica da espécie foi ampliada em cerca de 90km, passando o limite sul, do município de Tavares para o município de São José do Norte. Cinco números diplóides e três citótipos foram encontrados, 2n = 46b, 47b, 48b, 49b e 50b, sendo que, apenas 46b era descrito para a espécie. Em todos os citótipos estudados, o par sexual está representado, nos machos, por um cromossomo X submetacêntrico e um cromossomo Y acrocêntrico de tamanho similar ao braço longo de seu par e nas fêmeas, por um par X submetacêntrico. Comparando-se os padrões de bandas G dos cariótipos de C. minutus pode-se notar que 2n=50a, encontrado em Jaguaruna apresenta os cromossomos 20 e 17 e que esses estão fusionados na forma 2n=50b de São José do Norte. O par 2 está fissionado em 2n=50b, sendo que apresenta ainda uma inversão pericentromérica que o transforma em um metacêntrico. Os cromossomos 23 e 19 são mantidos entre as formas e o mesmo acontece entre os cromossomos 22, 24 e 16. Os citótipos 2n=48a e 2n=48b apresentam os mesmos cromossomos, com exceção do braço curto 2p de 2n=48b, que se apresenta na forma metacêntrica. No que se refere aos híbridos, 2n=47b difere de 2n=47a pelo par heterozigoto, formado pelos cromossomos 24 e 16 em 2n=47b e pelo par 2 em 2n=47a. Já em 2n=49a e 2n=49b a diferença não está no par heterozigoto, formado pelos cromossomos 23 e 19, mas sim, no par 2, que encontra-se fusionado em 2n=49a e fissionado com inversão em 2n=49b e nos cromossomos 20 e 17, que encontram-se fissionados em 2n=49a e fusionados em 2n=49b Pouca quantidade de heterocromatina constitutiva foi encontrada no bandamento C dos três citótipos analisados. Somente três autossomos apresentaram um bloco de heterocromatina constitutiva, que ocupou todo o braço curto em 48b e 50b e apenas um autossomo em 46b. Também o cromossomo Y nos machos, independente de seu citótipo, é totalmente positivo. Em relação a NOR, todos os citótipos analisados apresentaram marcação na constrição secundária do braço longo do par marcador. No que se refere à meiose, a aparente ausência de trivalentes em ambos os heterozigotos, aliada ao fato de que, em algumas diacineses, em vez da presença do número esperado de bivalentes mais o trivalente, observar-se um cromossomo a mais, pode indicar a presença de um univalente. A seqüência telomérica foi observada em todas as extremidades dos cromossomos. Não foram observadas bandas teloméricas etópicas em 2n=50b. Em 2n=46b e 48b, a desnaturação das metáfases não possibilitou a análise. Para a análise filogenética, apenas cinco caracteres puderam ser analisados. A árvore de consenso separou os citótipos em três grupos: o mais basal representado apenas por 50a, outro por 46a, 48a e 42 e o terceiro, possuindo as características mais apomórficas, representado por 46b, 48b e 50b. O índice de consistência obtido foi de 0.71 e o índice de retenção foi de 0.75. O caracter 01 (fusão 20/17) foi o principal responsável pela separação de 50a do restante dos citótipos. A formação do grupo basal pode ser explicada pela presença do Rio Araranguá, que atuaria como uma barreira geográfica. Quanto à separação dos outros dois grupos, duas hipóteses puderam ser formuladas. Uma, explicada por fatores extrínsecos e outra por fatores intrínsecos. Como nenhuma barreira geográfica que explique a separação foi encontrada, a explicação alternativa é que os dois rearranjos 02 e 05, que dão suporte a um dos grupos, poderiam ser responsáveis pelo surgimento de uma barreira reprodutiva. Para testar essas duas hipóteses, contudo, mais estudos devem ser realizados. Os achados indicam também a existência de duas novas zonas híbridas para a espécie, com, pelo menos uma delas, resultante de um contato secundário, após regressão do nível do mar e fechamento da ligação existente entre a lagoa dos Patos e o oceano, na feição atualmente denominada de Barra Falsa, na localidade de Bojuru, à cerca de 2.300 anos. Mais coletas devem ser realizadas para confirmar a existência desta zona. / The rodents of the genus Ctenomys form a large group of fifty-six species, being the dominating mammals occupying the subterranean niche in South America. Chromosome polymorphism among species ranges from 2n=10 to 70. Among the species observed in southern Brazil, C. minutus is the one with the widest geographic distribution, inhabiting the sand fields and dunes that extend from Jaguaruna, in the State of Santa Catarina, to São José do Norte, in the state of Rio Grande do Sul. Seven diploid numbers and eight cytotypes were previously described for this species: 2n=42, 45, 46a, 47, 48, 49, 50a, including the existence of hybrid zones between 2n=46 and 48, and 2n=48 and 42. A sample of 51 specimens of Ctenomys minutus Nehring, 1887 was collected along the Coastal Plain of Rio Grande do Sul, between collection points Tavares (31o23’S 51o09’N) and São José do Norte (31o52’S 51o54’N). Five collection points were actually defined along this area, distancing each other by approximately 20km. The geographic distribution of C. minutus was enlarged in 90km from Tavares to São José do Norte in south way. Three cytotypes and five karyotypes were found, 2n = 46b, 47b, 48b, 49b and 50b, four of which, were not described for the specie. The animals were captured with the use of Oneida Victor no 0 traps. Chromosomes were obtained from bone marrow according to FORD and HAMERTON (1956) and analyzed through G (SEABRIGHT, 1971) and C band patterns (SUMNER, 1972). The characterization of nucleolus organizer regions (NOR) was done through techniques, developed by HOWELL and BLACK (1980). For the fluorescence in situ hybridization (FISH), the all-telomeric human probes (ONCOR) were used. The phylogenetic analysis was performed through the outgroup method using the TREE GARDENER 2.2 software, considering C. lami as outgroup, since it is ancient in relation to C. minutus, according to FREITAS (2001). In all the cytotypes studied, the sex pair is represented by a submetacentric X chromosome and an acrocentric Y chromosome sized similarly to its pair’s long arm in the males. In the females, it is represented by a submetacentric X pair. Analyzing the G-band patterns found, and comparing them with those described by FREITAS (1997), it was observed that in cytotypes 50a and 50b, pairs 17 and 20 of the Jaguaruna cytotypes are fused in the São José do Norte karyotype, while pair 2 identified in 2n=50 from Jaguaruna is fissioned in São José do Norte. Cytotype 2n=48b differs from 2n=48a because of the presence of an inversion in chromosome 2p, which transforms it in a metacentric chromosome. Cytotype 47b’s difference from 47a stems from the heterozygote pair, which is formed by a 24/16 rearrangement in the former, and by a 2p/2q rearrangement in latter. 49a and 49b differ not because of the heterozygote pair, but because of the 2p/2q rearrangement, which is fused in 2n=49a and fissioned in 2n=49b, and by rearrangement 20/17 fissioned in 2n=49a and fused in 2n=49b. Constitutive heterochromatin was found in small quantity in the C banding for the three cytotypes analyzed. Only three autosomes presented it, occupying the entire length of the short arm in 2n=48b and 2n=50b and only one autosome in 2n=46b. Chromosome Y in males, independent of its cytotype, also showed positive. The nucleoulus organizer region (NOR) was found to be located in the secondary constriction of the long arm of pair 8. The probe hybridization was found in the telomeric regions of both short and long arms, of all chromosomes in the 2n=50b cytotype. No etopic signs were detected around the centromeres. In both 48b and 46b the desnaturation of the chromosomes did not allow the analysis. For the phylogenetic analysis, only five characters could undergo the analysis. The consense tree separated the karyotypes into three groups: the most basal one being represented only by 50a; 46a, 48a, and 42 formed another one; and the third group, represented by 46b, 48b and 50b, showing more apomorphic characteristics. The consistency index was 0.71 and the retention index, 0.75. Character 1 (fusion 20/17) was the main responsible for the separation of 50a from the remaining karyotypes. The group formed by 46b, 48b, and 50b was found to be supported by two synapomorphys, of character 2 (fusion 2p/2q) and character 05 (presence of heterochromatin in the marker pair). Character 4 (fusion 22/24/16) represented an autapomorphy for its respective cytotypes. The formation of the basal group can be explained by the presence of the Araranguá River, which acts as a geographical barrier. Regarding the other two groups’ separation, two hypotheses could be formulated. The first can be explained by extrinsic factors; the other one could be due to intrinsic factors. As there are no geographic barriers that can account for the separation, the alternative explanation would be that rearrangements 2 and 5, which support one of the groups, could be responsible for the appearance of a reproductive barrier. However, more studies are required for to test of these hypotheses. The present findings also indicate the existence of two possible new hybrid zones for this species – one of them, at least, being the result of a secondary ntact after the regression of the sea level and the closing of a connection between Patos Lagoon and the Atlantic Ocean, called Barra Falsa, in a location called Bojuru, approximately 2,300 years ago. More collects are also required to confirm this.

Orientador: Maria Edwiges Hoffmann / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-13T23:01:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Capucci_MariaSilvia_M.pdf: 3943915 bytes, checksum: 09f71139068aefa2802e999207ae38fb (MD5) Previous issue date: 1990 / Resumo: A estreptozotocina é uma nitrosoamida de ocorrência natural que tem sido largamente utilizada como indutora de diabete em animais experimentais. Estudos sobre o mecanismo de ação da STZ apontam o DNA como alvo molecular de seus efeitos, pela sua reatividade como agente alquilante. Agentes alquilantes são capazes de induzir uma resposta adaptiva em bactérias e em alguns tipos de células de mamíferos. Isso nos levou a pesquisar os efeitos da STZ na taxa de síntese da DNA de células de mamíferos (fibroblastos de hamster chinês, linhagem V79). A STZ inibiu a taxa de incorporação de timidina-3H em células V79 de maneira dependente de dose. Realizando-se um tratamento com doses parceladas (0,38 mM e 11,0 mM) observou-se um aumento estatisticamente significativo (teste de Kruskall-Wallis) da incorporação de timidina-3H em relação aos valores obtidos para a dose tóxica de 11,0 mM. Estes resultados indicam que a STZ, similarmente a outros agentes alquilantes, é capaz de induzir uma resposta adaptativa em fibroblastos V79. Analisando também os efeitos da STZ sobre a taxa de síntese de DNA na linhagem celular humana Hela, observamos um padrão diferente de inibição quando comparado à linhagem V79. As curvas de sobrevivência celular ao tratamento com STZ mostraram, entretanto, uma atividade citotóxica aparentemente paradoxal com os resultados de inibição de síntese de DNA: a linhagem humana mostrou-se mais sensível ao efeito letal da STZ. Estes resultados sugerem que a toxicidade da droga não está relacionada exclusivamente com mecanismos de lesão do DNA, podendo sua ação alquilante ser também exercida sobre outros alvos celulares. Além disso, observamos que em comparação com a STZ, o análogo não diabetogênico MNU, mostrou ser uma toxina mais potente para células V79. Entretanto, o padrão de inibição de síntese de DNA de ambos os compostos não são suficientemente diferentes para corroborar a idéia de que o DNA é o único alvo de ação da STZ. Para determinar se as mitocôndrias poderiam consistir num outro alvo de ação da STZ e MNU, analisamos os efeitos dos dois agentes em mitocôndrias "in situ" de célula V79 permeabilizadas com digitonina. A determinação do fluxo de Ca++ e consumo de oxigênio indicaram que estes dois agentes aumentam a permeabilidade da membrana mitocondrial. AMNU mostrou-se mais tóxica para mitocôndrias que a STZ, o que concorda com seu maior efeito letal. Os resultados citados indicam uma possível explicação alternativa para a ação tóxica da STZ e MNU, sugerindo que além de danos ao DNA, injúrias às mitocôndrias exercem um papel crítico na citoxicidade destes compostos nitrogenados e na ação diabetogênica da STZ / Abstract: Streptozotocin is a naturally occurring nitrosoamide that has been extensively used as diabetes inducer in experimental animal models. Studies at the molecular level indicated the DNA as the major target of STZ, because of its alkylation properties. It¿s known that alkylating agents induces an adaptive response in bacterias and in some mammalian ceIl lines. This led us to investigate the effects of STZ on DNA synthesis rate in V79 fibroblasts.STZ inhibited timidine-3H uptake in this cell line in a dose dependent manner. In a split-dose protocol (0,38 mM and 11,0 mM) we observed an increase in DNA synthesis rate when compared to that for the higher dose treatment only. Although this increase in DNA synthesis rate is small it was reproducibly found and statistically significant (Kruskall-Wallis test). These results show that STZ, similarly to other alkylating agents, induces an adaptive response in V79 cells. In comparison to V79 cells, HeIa human cell line showed a different DNA synthesis inhibition pattern: at the same concentration, STZ showed to be a much more potent toxin to V79 cells. Determinations of cellular survival capacity to STZ treatment showed, however, an absence of parallelism between both effects, the HeIa cells being more susceptible to the STZ lethal effect than V79 one. These results indicate that STZ toxicity isn't exclusively related with DNA and, therefore, aIkylation in targets other than DNA may be involved on the STZ toxicity mechanism. Besides. We observed that, in comparison to STZ, the non-diabetogenic analogue MNU, showed to be a more potent toxin to V79 cells. However, the DNA synthesis inhibition patterns of bath drugs were not much different to support the view that the DNA is the unique target for their toxic action. With the aim to determine wether the mitochondria could be another target for STZ or MNU inducing cell killing, we analysed the effects of both drugs in mitochondria "in situ" of digitoninpermeabiIized V79 ceIls. Determination of Ca++ fIux and oxygen consumption have indicated that these drugs increase the permeability of the inner membrane of mitochondria. The order of mitochondria susceptibility to MNU was markedly higher than to STZ in accordance to their killing effects. The results of the present studies provide an alternative for the toxic action of STZ and MNU, suggesting that besides DNA damage injuries to mitochondria could exert a critical role in the citoxicity of these nitroso coumpounds and in the diabetogenic action of STZ / Mestrado / Genetica / Mestre em Ciências Biológicas

Un requisito básico para cualquier programa de mejoramiento basado en la selección asistida por marcadores (MAS) es contar con un adecuado número de marcadores polimórficos. Entre toda la variedad de marcadores moleculares disponibles, los microsatélites, unidades cortas de entre 1 y 6 bp repetidas en tándem, ofrecen apreciables ventajas. Ser una técnica basada en el PCR, necesitar pequeñas cantidades de DNA y su naturaleza codominante, han hecho de ellos una herramienta muy popular en trabajos de investigación en animales y plantas. Pese a la importancia del camote (Ipomoea batatas L.) en el mundo, sólo un pequeño número de marcadores microsatélites están disponibles para este cultivo. Con el objetivo de generar mayor cantidad de microsatélites en el presente trabajo se construyeron dos librerías genómicas utilizando el DNA del cultivar africano “Tanzanía”. La búsqueda se basó en hallar microsatélites trinucleótidos, los cuales cuentan con la particularidad de reducir considerablemente la presencia de “bandas tartamudas” en comparación con los microsatélites dinucleótidos. El enriquecimiento de las librerías genómicas alcanzó el 1.59 % de un total de 2900 colonias evaluadas por diferentes métodos de selección, como White/blue, Colony lift y Southern blot. Quince pares de iniciadores fueron diseñados y ocho de ellos mostraron polimorfismo en un total de once accesiones de camote, provenientes de diversos lugares del mundo, mantenidas en el banco de germoplasma del Centro Internacional de la Papa (CIP). / --- A basic requisite for any breeding program based in marker-assisted selection (MAS) is counting with a suitable number of polymorphic markers. Among the large variety of molecular markers available, microsatellites, short tandem repeat units of between 1 and 6 bp in length, offer appreciable advantages. Being a PCR-based technique, requiring only small amounts of DNA and their co-dominant nature have made them a very popular tool in animal and plant studies. Despite the importance of sweetpotato (Ipomoea batatas L.) in the world, only a small set of microsatellite markers are available for this crop. Aiming to generate a large number of SSR markers in sweetpotato, two genomic libraries have been constructed using DNA of an african sweetpotato cultivar "Tanzania". In order to look for tri-nucleotide microsatellites, which frequently produce fewer “stutter bands” as compared to di-nucleotide microsatellites. The enrichment of genomic libraries achieved 1.59 % of a total number of 2900 clones evaluated by different screening methods as White/blue, Colony lift and Southern blot. Fifteen pair of primers were designed, and eight of them showed polymorphism in eleven sweetpotato accessions from different places of the world, which are kept in the germoplasm bank of the International Potato Center (CIP).

Resumo: A identificação e o manejo adequado de estoques diferenciados constituem empreendimentos de fundamental importância para o setor pesqueiro, pela sua relação direta com a produtividade total e uso sustentável dos recursos. Do mesmo modo, o conhecimento acerca da variabilidade e estrutura genética das espécies é essencial para o estabelecimento de programas de preservação. Com distribuição global, o tubarão-azul Prionace glauca (Carcharhinidae) ocorre na área oceânico-epipelágica de toda a costa brasileira, sendo um importante recurso econômico pesqueiro, já que representa cerca de 60% dos tubarões capturados pelas frotas industriais que operam com espinhéis. Os marcadores genéticos moleculares do tipo microssatélite têm sido amplamente empregados no estudo de populações de peixes, com inferências sobre conservação e manejo de espécies, padrões de migração, diferenciação de estoques naturais e cultivados, prospecção de evidencias de introgressão genética, sistemas reprodutivos e efeitos da fragmentação de ambientes sobre taxons relacionados, gerando informações fundamentais para o manejo adequado e conservação das espécies. Com o objetivo de analisar a estruturação genética das populações de tubarão-azul encontradas no litoral brasileiro foram analisadas amostras de indivíduos provenientes de populações naturais capturados na região próxima ao Rio Grande do Sul (n=33), São Paulo (n=33) e na região próxima ao Rio Grande do Norte (n=30) utilizando 8 primers polimórficos de microsatélites. Os testes foram conduzidos via PCR e resolvidos em gel de poliacrilamida 6%, sendo a genotipagem realizada através do programa Kodak Digital Science 1D. O número de alelos/lócus, heterozigosidade esperada e observada, equilíbrio de Hardy-Weinberg (HWE) e o coeficiente de endocruzamento (Fis) foram obtidos por aplicação do programa Popgene v.1.32... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Not available / Orientador: Fausto Foresti / Coorientador: Otto Bismarck Fazano Gadig / Banca: Daniela Cristina Ferreira / Banca: Edson Seizo Mori / Mestre

Un requisito básico para cualquier programa de mejoramiento basado en la selección asistida por marcadores (MAS) es contar con un adecuado número de marcadores polimórficos. Entre toda la variedad de marcadores moleculares disponibles, los microsatélites, unidades cortas de entre 1 y 6 bp repetidas en tándem, ofrecen apreciables ventajas. Ser una técnica basada en el PCR, necesitar pequeñas cantidades de DNA y su naturaleza codominante, han hecho de ellos una herramienta muy popular en trabajos de investigación en animales y plantas. Pese a la importancia del camote (Ipomoea batatas L.) en el mundo, sólo un pequeño número de marcadores microsatélites están disponibles para este cultivo. Con el objetivo de generar mayor cantidad de microsatélites en el presente trabajo se construyeron dos librerías genómicas utilizando el DNA del cultivar africano “Tanzanía”. La búsqueda se basó en hallar microsatélites trinucleótidos, los cuales cuentan con la particularidad de reducir considerablemente la presencia de “bandas tartamudas” en comparación con los microsatélites dinucleótidos. El enriquecimiento de las librerías genómicas alcanzó el 1.59 % de un total de 2900 colonias evaluadas por diferentes métodos de selección, como White/blue, Colony lift y Southern blot. Quince pares de iniciadores fueron diseñados y ocho de ellos mostraron polimorfismo en un total de once accesiones de camote, provenientes de diversos lugares del mundo, mantenidas en el banco de germoplasma del Centro Internacional de la Papa (CIP). / A basic requisite for any breeding program based in marker-assisted selection (MAS) is counting with a suitable number of polymorphic markers. Among the large variety of molecular markers available, microsatellites, short tandem repeat units of between 1 and 6 bp in length, offer appreciable advantages. Being a PCR-based technique, requiring only small amounts of DNA and their co-dominant nature have made them a very popular tool in animal and plant studies. Despite the importance of sweetpotato (Ipomoea batatas L.) in the world, only a small set of microsatellite markers are available for this crop. Aiming to generate a large number of SSR markers in sweetpotato, two genomic libraries have been constructed using DNA of an african sweetpotato cultivar "Tanzania". In order to look for tri-nucleotide microsatellites, which frequently produce fewer “stutter bands” as compared to di-nucleotide microsatellites. The enrichment of genomic libraries achieved 1.59 % of a total number of 2900 clones evaluated by different screening methods as White/blue, Colony lift and Southern blot. Fifteen pair of primers were designed, and eight of them showed polymorphism in eleven sweetpotato accessions from different places of the world, which are kept in the germoplasm bank of the International Potato Center (CIP).

Orientador: Paulo Y. Kageyama / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-24T17:03:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Gandara_FlavioBertin_M.pdf: 1569016 bytes, checksum: c7adf80aec8739c3d070d983c87314eb (MD5) Previous issue date: 1996 / Resumo: Com a finalidade de se estimar a diversidade genética e a taxa de cruzamento em uma espécie arbórea rara, ou seja, com baixa densidade populacional, foi estudada uma população natural de Cedrela fissilis Vell. (Meliaceae). A população está situada na Fazenda Intervales pertencente à Fundação para a Conservação e Produção Florestal do Estado de São Paulo, localizada no município de Sete Barras-SP. Na área levantada, Cedrelafissilis é uma espécie rara, onde ocorrem 34 indivíduos adultos em uma área de 270 ha (densidade média de cerca de 1 indivíduo a cada 8 ha ). Para a estimativa dos parâmetros genéticos, foi utilizada a técnica de eletroforese de isoenzimas em gel horizontal de amido. Foram analisados 34 indivíduos adultos e 5 famílias de 3 O indivíduos cada, formadas a partir da coleta de sementes em 5 árvores da população. Foram utilizados 7 sistemas enzimáticos (6-PGDH, PGI, G2DH, IDH, MDH, PO), resultando em 13 locos gênicos. Para os indivíduos adultos, obteve-se os seguintes parâmetros: heterozigosidade média = 0,222, heterozigosidade para os locos polimórficos = 0,288, porcentagem de locos polimórficos = 76,9% e número médio de alelos por loco = 2,31. Para as famílias, obteve-se os seguintes parâmetros: heterozigosidade média = 0,193, heterozigosidade para os locos polimórficos = 0,228, porcentagem de locos polimórficos = 84,6% e o número médio de alelos por loco = 2,38. A população adulta está em equilíbrio de Hardy-Weinberg, porém as famílias diferiram significativamente das expectativas do equilíbrio. O valor médio da taxa de cruzamento aparente (ta) estimado a partir do coeficiente de endogamia foi de 0,85. A taxa qe cruzamento multiloco (tm) foi de 0,92, sendo que os valores da taxa de cruzamento individuais para cada árvore variaram de 0,62 a 1,08. A média das taxas de cruzamento para cada loco (t8) foi de 0,83, inferior a tm, mas sem diferir desta significativamente. As 5 árvores matrizes foram fecundadas por um conjunto de pólen homogêneo, indicando a ocorrência de cruzamentos aleatórios.Através da ocorrência de alelos exclusivos às famílias foi estimada a distância mínima de caminhamento de pólen (distância das árvores matrizes até a borda da área levantada) que atingiu o valor de 950 m. Para o estudo da estrutura genética espacial foi empregada a análise da autocorrelação espacial, utilizando-se o índice I de Moran. O pequeno número de valores significativos encontrado sugere que a distribuição espacial dos genótipos é aleatória. Os resultados mostram que a população de Cedrelafissilis estudada, apesar de ter uma baixa densidade de indivíduos adultos, apresenta altas taxa de cruzamento, amplo fluxo de pólen, cruzamentos ao acaso e distribuição espacial aleatória de genótipos. Portanto, as suposições de que espécies raras estariam sujeitas a um fluxo gênico via pólen restrito, apresentariam auto-fecundação e cruzamentos preferenciais, e teriam populações estruturadas geneticamente, não se aplica a esta população de Cedrela .fissilis. As principais conclusões deste trabalho são: 1. A diversidade genética apresentada pela população estudada de Cedrela fissilis (H=0,222) está na média das populações de espéciés arbóreas tropicais já estudadas. 2. Cedrela fissilis é uma espécie preferencialmente alógama (tm=0,92), porém pode apresentar variações da taxa de cruzamento entre árvores (tindividual entre 0,62 e 1,08). 3. O fluxo gênico via pólen em Cedrelafissilis pode ocorrer a longa distância (acima de 950 m) o que condiz com as grandes distâncias encontradas entre indivíduos. 4. A população de Cedrela fissilis não apresenta estruturação genética, o que evidencia que o fluxo gênico é suficientemente amplo para prevenir a formação de estrutura genética a partir da deriva genética e/ou da seleção local. 5. Os resultados obtidos sobre o fluxo gênico via pólen, sistema reprodutivo e distribuição espacial dos genótipos são concordantes entre si e são coerentes com a baixa densidade da população / Abstract: A natural population of Cedrela fissilis Vell. (Meliaeeae) was surveyed with the aim of estimating the genetic diversity and the outerossing rate of arare tree species, that is, a species with low populational density. The population site was at the Fazenda Intervales belonging to the "Fundação para a Conservação e Produção Florestal do Estado de São Paulo", located at Sete Barras - São Paulo State. In the study area, Cedrelafissilis is arare species, weere 34 adult trees occur in an area of 270 ha (mean density of one tree for 8 ha). To estimate the genetic parameters, the technique of isozyme eleetrophoresis in horizontal straeh gels was applied. Thirty-four adult trees and 5 families with 30 individual each, formed from seeds collected directly from 5 trees of the population were analized. Seven enzymatie systems (6-PGDH, PGI, G2DH, IDH, MDH, PO), resulting in 13 genetic loci, were utilized.For adult trees, the parameters was: mean heterozigosity = 0.222, heterozigosity for the polimorphic loci = 0.288, percentage of polimorphi lo i = 76.9% and mean number of alleles per loeus = 2.31. For families, the parameters was: mean heterozigosity = 0.193, heterozigosity for the polimorphie loei = 0.228, percentage of polimorphi loei = 84.6% and mean number of alleles per loeus = 2.38. The adult population was in Hardy-Weinberg equilibrium, but the families differed significantly from the equilibrium expectations. The mean apparent outerossing rat~ (ta) estimated from the coefficient of inbreeding was 0.85. The multiloeus outerossing rate (tm) was 0.92, but the individual outcrossing rates for each tree varied from 0.62 to 1.08. The mean single outcrossing rates (ts) was 0.83, therefor lower than tm, but did not differ significantly from it. All mother trees were fertilized by an homogeneous pollen pool, indicating random outcrossing. Utilizing alIeles exclusives to the families, the minimum distance of pollen flow (distance between the mother tree and the border of the surveyed area) was estimated and reached 950 m. To study the spatial genetic structure, spatial autocorrelation analysis through the I index of Moran was utilized. The small number of significant values showed that spatial distribution of genotypes is random. The results of this research show that the population of Cedrela fissilis, in spite of having a low density of adult trees, exhibits a high outcrossing rate, extensive polIen flow, random outcrossing and random spatial distribution of genotypes. Therefore, the presumptions that rare species exhibit limited gene flow by polen, show self-fertilization and biparental breeding, and have genetic structured populations do not apply to this population of Cedrela fissilis. The main conclusions of this study are: 1. :rhe genetic diversity showed by this population ofCedrelafissilis (H=O.222) is on the average for the populations of tropical tree species already studied. 2. Cedrelafissilis is preferably alogamous (tm=0.92), but can show variations among trees in the outcrossing rate (tindividual between 0.62 and 1.08). 3. The gene flow by pollen in Cedrelafissilis can reach a considerable distance (over 950m) agreeing with the low density of trees. 4. The population of Cedrela fissilis does not show genetic structure, suggesting that gene flow is sufficiently wide to prevent genetic structuring due to genetic drift and/or local selection. 5. The results for gene flow by pollen, breeding system and spatial distribution of genotypes agree amongst each other and are coherent with the low population density / Mestrado / Mestre em Ciências

Orientador : William Jose da Silva / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-14T02:15:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Zanchetta_CristianeSavoia_M.pdf: 3349339 bytes, checksum: 0b7bf00bda399efbfa65dd5ec1597c8f (MD5) Previous issue date: 1992 / Mestrado / Genetica / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador : Maria Luiza S. Mello / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-13T22:48:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Penna_MariaLecticiaFirpe_M.pdf: 3414482 bytes, checksum: 6a8e1df3b4b5c80949f4faa3becf307d (MD5) Previous issue date: 1990 / Resumo: A possibilidade de provocar instabilidade e alterações na cinética celular pelo ácido retinóico, ácido derivado da vitamina A, em cromossomos humanos, foi pesquisada em culturas de linfócitos de 10 indivíduos do sexo feminino entre 20 e 30 anos de um grupo considerado controle. Para tal foram utilizadas culturas incubadas nas últimas 5 horas com ácido retinóico em concentrações de 20 µg/ml de meio e 2µg/ml de meio. O ácido retinóico foi diluído em DMSO e apresentou como concentração final na cultura de linfócitos 0,5% v/v e 0,05% v/v, respectivamente. Foram obtidas também culturas controle com DMSO puro nas concentrações supra-citadas e sem nenhuma droga. Utilizaram-se frascos em duplicata para cada situação experimental, um crescido na presença de BrdU e outro sem esta droga. Nas culturas crescidas em presença de BrdU foram realizadas contagens de trocas entre cromátides irmãs e freqüência de metáfases em diferentes gerações celulares e nas mantidas na ausência de DrdU freqüência de aberrações numéricas e/ou estruturais, índice mitótico e freqüência relativa de fenótipos nucleares. A instabilidade cromossômica foi pesquisada através das freqüências de trocas entre cromátides irmãs e de aberrações numéricas e/ou estruturais e a cinética celular, através dos valores de índice mitótico, freqüência relativa de células nas diferentes gerações e freqüência relativa dos fenótipos nucleares. A análise estatística dos dados permitiu concluir que o ácido retinóico promoveu um pequeno, mas significativo aumento na freqüência de trocas entre cromátides irmãs em linfócitos em cultura, independente da concentração da droga utilizada. Este aumento ocorreu de forma global na cultura, sem preferência por nenhuma região, par ou grupo cromossômico. Por outro lado, ele não foi capaz de provocar aberrações cromossômicas numéricas e/ou estruturais estatisticamente significativas. Em relação à cinética celular e dadas as condições utilizadas neste trabalho, não foram constatadas alterações significativas promovidas pelo ácido retinóico / Abstract: The possibility of using retinoic acid (derived from Vitamin A) to provoke instability and alterations in the ceIIuIar kinetics of human chromosomes was studied in cultures of lymphocytes from 10 women, considered to be a control group, all between 20 and 30 years of age. Cultures were incubated for the last 5 hours in media containing retinoic acid at concentrations of 20 µ/ml and 2 µ/m. The retinoic acid was diluted in DMSO and presented concentrations of 0.5% v/v and 0.05% v/v respectively in the cultures of lymphocytes. Control cultures were also prepared containing pure DMSO in the same concentrations but containing no drug. Duplicate flasks were used in each experimental situation, one grown in the presence of DrdU and the other in its absence. Counts of crossing over between sister chromatids and the frequency of metaphases in different cellular generations were determined in the cultures grown in the presence of DrdU. In those grown without DrdU, the frequency of numerical and/or structural aberrations was determined, and also the mytotic index and the relative frequency of nuclear phenotypes. Chromosomic instability was investigated using the frequency of crossing over between sister chromatids and numerical and/or structural aberrations. Cellular kinetics were investigated through the values for mitotic index, relative frequency of the different generations of cells and the relative frequency of nuclear phenotypes. A statistical analysis of the data allows one to conclude that retinoic acid provoked a small, but significant increase. ln the frequency of crossing over between sister chromatids in cultured lymphocytes, independent of the concentration of drug used. This increase occurred throughout the culture, with no preference for region or chromosomic pair or group. On the other hand, it was not capable of causing significant numerical and/or structural chromosomic aberrations. With respect to the cellular kinetics and given the conditions used in this research, no significant alterations provoked by the retinoic acid were detected. / Mestrado / Genetica / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador : Solange Bento Farah / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-13T22:44:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cerutti_JaneteMaria_M.pdf: 2982145 bytes, checksum: 69768617bb052fbd8234a583cb8f7482 (MD5) Previous issue date: 1991 / Mestrado / Genetica / Mestre em Ciências Biológicas