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Caracterização de um gene de subunidade 'alfa' de proteina G do nematoda Caenorhabditis elegans

Silva, Iara Fino 13 July 2018 (has links)
Orientador :Crodowaldo Pavan / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-13T22:48:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_IaraFino_M.pdf: 3242615 bytes, checksum: 07306ddb2fe21fcba28dc7f4ba9d3219 (MD5) Previous issue date: 1991 / Mestrado / Genetica / Mestre em Ciências Biológicas
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Caracterização e mapeamento de genes que alteram a produção de glicoaminose em Aspergillus niger

Masiero, Marcia 15 July 2018 (has links)
Orientador : Renato Bonatelli Junior / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-15T23:56:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Masiero_Marcia_D.pdf: 3870049 bytes, checksum: f18c97d9c652435e9e3f4b7a7cded294 (MD5) Previous issue date: 1992 / Doutorado / Genetica / Doutor em Ciências Biológicas
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Genoma e diversidade genética de populações de Chrysodeixis includens nucleopolyhedrovirus (ChinNPV)

Craveiro, Saluana Rocha 08 April 2016 (has links)
Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2016. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2016-09-26T20:04:04Z No. of bitstreams: 1 2016_SaluanaRochaCraveiro.pdf: 3241510 bytes, checksum: 02323233a9f77526e278dded20e15f95 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2017-01-10T17:19:11Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_SaluanaRochaCraveiro.pdf: 3241510 bytes, checksum: 02323233a9f77526e278dded20e15f95 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-10T17:19:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_SaluanaRochaCraveiro.pdf: 3241510 bytes, checksum: 02323233a9f77526e278dded20e15f95 (MD5) / Chrysodeixis includens nucleopolyhedrovirus (ChinNPV) é um vírus patogênico à lagarta falsa-medideira, Chrysodeixis includens (Walker, 1858), uma praga polífaga que ataca 174 plantas hospedeiras, incluindo soja e algodão. Os baculovírus formam um grande grupo de vírus de DNA fita dupla circular, que infectam insetos da ordem Lepidoptera, Hymenoptera e Diptera. Para uma melhor compreensão da virulência, evolução e biologia molecular de ChinNPV, este trabalho teve como objetivo determinar a sequência completa do genoma e a diversidade genética de sete isolados de ChinNPV (IA a IG). A diversidade genética foi inicialmente investigada por meio de análise das variações presentes nos core genes pif-2, lef- 9 e helicase de isolados de ChinNPV e de outros Alphabaculovirus. O gene pif-2 de ChinNPV recebeu destaque por, em contraste com o esperado, apresentar um grande número de polimorfismos não-sinônimos com a identificação de dois sítios sob pressão diversificadora. Os genomas dos isolados de ChinNPV (IA a IG) possuem tamanho variando de 138.869 a 140.859 bp e conteúdo de CG ~ 39%. Um total de 142 ORFs foram identificadas incluindo 37 core genes, 102 genes encontrados em outros baculovírus, 3 genes bro e duas ORFs únicas (Psin5 e Psin8). Homologous repeats (hrs), típicas de baculovírus, estão ausentes no genoma de ChinNPV. Os genomas dos isolados de ChinNPV têm alta similaridade com identidade mínima de 96,4% e, polimorfismos, indels e pequenos fragmentos foram observados ao longo dos genomas. Dois homólogos ao gene p26 (p26a e p26b) foram encontrados em ChinNPV. O padrão de agrupamento observado no cladograma da proteína P26 de NPVs indica que a aquisição do gene ocorreu em três eventos independentes de captura dentro da família Baculoviridae. ChinNPV tem uma sequência genômica distinta comparada a outros baculovírus sequenciados. As sete novas sequências do genoma completo de ChinNPV determinadas aqui constituem uma importante ferramenta para o melhor entendimento dos fatores de virulência, interação inseto-hospedeiro e da variação fenotípica observada em populações de baculovírus. _________________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Chrysodeixis includens nucleopolyhedrovirus (ChinNPV) is a virus pathogenic to the soybean looper, Chrysodeixis includens (Walker, 1858), a polyphagous pest that attacks 174 host plants including soybean and cotton. Baculoviruses are a large group of circular doublestranded DNA viruses that infect insects of the orders Lepidoptera, Hymenoptera and Diptera. In order to better understanding the virulence, evolution and molecular biology of ChinNPV, this study aimed to determine the complete genome sequence and genetic diversity of seven ChinNPV (IA to IG) isolates. Genetic diversity was initially investigated by analyzing variation present in the pif-2, lef-9 and helicase core genes in ChinNPV and other Alphabaculovirus isolates. The pif-2 gene unexpectedly showed a large number of non-synonymous polymorphisms with two sites identified to be under diversifying selection. The ChinNPV (IA to IG) genomes range in length between 138,869 and 140,859 bp and GC content of ~39% A total of 142 ORFs were identified including 37 baculovirus core genes, 102 genes found in other baculoviruses, three bro genes and two ORFs unique to ChinNPV (Psin5 and Psin8). The typical baculoviral homologous repeats (hrs) are absent in the ChinNPV genome. The ChinNPV genomes have high similarity with minimal identity of 96.4% and polymorphisms, indels and small fragment insertions throughout the genome were observed. Two p26 gene homologs (p26a and p26b) were found in the ChinNPV genome. The clustering pattern seen in the cladogram of NPV P26 protein indicates that the acquisition of these genes occurred in three independent capture events within the family Baculoviridae. ChinNPV has a distinct genomic sequence compared to other baculoviruses sequenced so far. The seven new ChinNPV whole genome sequences determined herein constitute an important tool for a better understanding of virulence factors, insect-host interaction and phenotypic variation observed in baculovirus populations.
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Transformação genética de soja [Glyicine max (L.) Merrill] para expressão do gene HaHB11 relacionado à tolerância a estresses abióticos

Queiroz, Lídia Nascimento 10 February 2014 (has links)
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2014. / Submitted by Jaqueline Ferreira de Souza (jaquefs.braz@gmail.com) on 2014-08-07T13:40:15Z No. of bitstreams: 1 2014_LidiaNascimentoQueiroz_Parcial.pdf: 497818 bytes, checksum: 7e4ff8edf43e92feb69984ba825ac6f5 (MD5) / Approved for entry into archive by Patrícia Nunes da Silva(patricia@bce.unb.br) on 2014-08-07T13:51:45Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_LidiaNascimentoQueiroz_Parcial.pdf: 497818 bytes, checksum: 7e4ff8edf43e92feb69984ba825ac6f5 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-08-07T13:51:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_LidiaNascimentoQueiroz_Parcial.pdf: 497818 bytes, checksum: 7e4ff8edf43e92feb69984ba825ac6f5 (MD5) / A ocorrência de perdas de produção na cultura de soja no Brasil é reflexo, entre outros fatores, do déficit hídrico. Ferramentas de melhoramento genético visam fornecer subsídios para contornar esses problemas na medida em que possibilitam a introdução de genes exógenos nas plantas, envolvidos na resposta a estresses ambientais. Vários genes de fatores de transcrição em plantas foram caracterizados e relacionados à tolerância ao estresse hídrico. Dentre eles, o gene do fator de transcrição HaHB11, de girassol, que atua como regulador positivo da cascata de sinalização dependente de ABA (ácido abscísico), aumentando a expressão dos genes de resposta que resultariam na tolerância a estresse hídrico. Na tentativa de obter plantas transgênicas de soja mais tolerantes à seca, o gene do fator HaHB11 foi clonado no vetor pAHAS e a construção obtida foi utilizada para transformação genética de soja via biobalística, utilizando embriões zigóticos como tecido alvo. Foram gerados 14 eventos de transformação, sendo que plantas da segunda geração do primeiro evento apresentaram um locus único de integração dos transgenes. Assim, plantas T4 deste primeiro evento, com 14 dias após a germinação, foram testadas em bioensaios para avaliação da resposta ao estresse hídrico. As plantas transgênicas apresentaram menor perda de água na parte aérea comparadas com as WT durante o estresse, além de possuírem mais raízes laterais desenvolvidas. Além disso, as plantas transgênicas também se recuperaram melhor da condição de estresse. Estes resultados indicam que as plantas transgênicas tiveram melhor desempenho durante o estresse hídrico, e que isso provavelmente está ligado a uma via de resposta dependente de ABA. No entanto, ensaios adicionais são necessários para elucidar melhor o papel do transgene em soja. / The occurrence of losses of soybean (Glycine max) production in Brazil is related, among other factors, to water deficit. Breeding techniques aimed at addressing these problems have continuously failed due to their inability to introduce desirable genes that may be involved in response to environmental stress. Several genes of transcription factors related to drought tolerance in plants have been characterized. Among them, is the gene for sunflower transcription factor HaHB11, which acts as a positive regulator of the ABA-dependent (abscisic acid) signaling cascade, by increasing gene expression response, which results in tolerance to water stress. In an attempt to obtain transgenic drought-tolerant soybeans plants, the HaHB11 gene was cloned into the pAHAS vector and the construction obtained was used for soybean genetic transformation via biolistic using zygotic embryos as target tissues. Fourteen transformation events were generated, and plants arising from the second generation of the first event had a single locus for the gene. Fourteen days after germination plants from this first event were subjected to a bioassay to assess their response to water stress. In addition to developing more lateral roots, transgenic plants showed lower water loss in shoots compared non-transgenic plants when subjected to water stress,. In addition, transgenic plants also recovered better from stress condition. These results indicate that transgenic plants performed better during water stress, and this may be linked to an ABA-dependent response pathway. However, additional trials are required to further elucidate the role of the transgene in soybean.
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Estudo da estrutura genética de ovinos localmente adaptados do Brasil por meio de marcadores de base única (SNP - Single Nucleotide Polymorphism) / Study of genetic structure of Brazil locally adapted sheep by single nucleotide polymorphism markers

Toledo, Natália Martins de 31 March 2014 (has links)
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Veterinária, 2014. / Submitted by Larissa Stefane Vieira Rodrigues (larissarodrigues@bce.unb.br) on 2014-11-06T17:18:06Z No. of bitstreams: 1 2014_NatáliaMartinsDeToledo.pdf: 1632413 bytes, checksum: b047cf6ecb4820b6901844d7a9043076 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2014-11-10T15:57:02Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_NatáliaMartinsDeToledo.pdf: 1632413 bytes, checksum: b047cf6ecb4820b6901844d7a9043076 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-11-10T15:57:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_NatáliaMartinsDeToledo.pdf: 1632413 bytes, checksum: b047cf6ecb4820b6901844d7a9043076 (MD5) / Brasil possui diversas raças ovinas no seu territótio que surgiram em consequência tanto de múltiplas introduções desde o período da colonização bem como de eventos genéticos e demográficos. De forma a aumentar a compreensão da formação desses grupos genéticos, o objetivo dessa dissertação foi analisar a distribuição da diversidade genética de 721 indivíduos de 30 raças por meio do ovine SNP50 BeadChip. Foram utilizados oito grupos genéticos brasileiros, cinco deslanados e três lanados. Além disso, mais 22 raças foram analisadas como possíveis fundadoras das raças brasileiras. A partir dos resultados das distâncias genéticas geradas pelo índice Fst foi possível identificar que existem duas fontes de variação principais para as raças brasileiras: uma de origem Africana e outra com origem na região Mediterrânea da Europa. As raças lanadas Crioula e Bergamácia apresentaram maior proximidade genética com raças coletadas nas Américas (Corriedale, Gulf Coast Native, Ille de France, Hampshire e Suffolk) e Caribe (St.Elizabeth) do que com raças européias mediterrâneas. A análise de componentes principais (PCA) confirmou a proximidade genética entre as populações de Santa Inês e Bergamácia, e de Morada Nova com Rabo Largo observadas anteriormente com marcadores microssatélites. Além disso, a raça Somalis apresentou uma maior homogeneidade genética e diferenciação entre as raças localmente adaptadas. O grupo genético Pantaneiro apresentou relativa diferenciação genética da raça Crioula bem como uma maior proximidade da raça Bergamácia Brasileira. Os resultados desse estudo serão usados para direcionar o enriquecimento do Banco de germoplasma existente, bem como fornecer subsídios para as associações de criadores sobre a diversidade genética existente dentro de cada raça. ________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Brazil has several sheep breeds in their territory that arose as a result of multiple introductions from the period of colonization as well as genetic and demographic events. In order to increase the understanding of the formation of these genetic groups, the goal of this dissertation was to analyze the distribution of genetic diversity of 721 individuals of 30 breeds through the ovine SNP50 BeadChip. . Five Brazilian hair sheep breeds and three wool sheep breeds were used. In addition another 22 breeds were analyzed as possible founders of Brazilian breeds. Based on the results of genetic distances generated by Fst, two sources of variation for Brazilian breeds were found: one African and an other Mediterranean. The Crioula Lanada and Bergamacia showed greater genetic proximity breeds collected in the Americas (Corriedale, Gulf Coast Native, Ille de France, Hampshire e Suffolk) and the Caribbean (St.Elizabeth) than Mediterranean European breeds. Principal Components Analysis (PCA) detected close genetic relationships among populations of Santa Ines and Bergamacia , and Morada Nova with Rabo Largo, previously observed with microsatellite markers. In addition, the Somalis showed greater integrity and genetic differentiation between the locally adapted breeds. The analyzes are indicative of differentiation between Pantaneiro and Crioula Lanada, but are not conclusive to the general understanding of the sheep group Pantaneiro. The results of this study will be used to direct enrichment of the Bank of germplasm and to give subsidies to breeders associations on the genetic diversity within each breed.
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Diversificação do polimorfismo de cromossomos B na subespécie de gafanhoto Xyleus discoideus angulatus (Romaleidae) em populações do nordeste brasileiro

BERNARDINO, Andrezza Carolina Souza 12 February 2015 (has links)
Submitted by Isaac Francisco de Souza Dias (isaac.souzadias@ufpe.br) on 2016-06-09T18:09:37Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação biblioteca CD - corrigida.pdf: 1306281 bytes, checksum: f6269bdbfa9eb44850607213a01cdaa0 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-09T18:09:38Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação biblioteca CD - corrigida.pdf: 1306281 bytes, checksum: f6269bdbfa9eb44850607213a01cdaa0 (MD5) Previous issue date: 2015-02-12 / FACEPE / Cromossomos B foram descritos para a subespécie de gafanhoto Xyleus discoideus angulatus e embora alguns estudos tenham proposto a possível origem do cromossomo B na subespécie, pouco se conhece a respeito da sua composição molecular. Neste trabalho, uma análise citogenética foi realizada nos cromossomos supernumerários do gafanhoto X. d. angulatus em distintas populações do nordeste do Brasil, para obter um melhor conhecimento acerca das características destes cromossomos e de sua dinâmica evolutiva em diferentes populações. Para isso, um levantamento populacional de cromossomos B em X. d. angulatus foi realizado, assim como a medição cromossômica destes elementos e o mapeamento físico do DNA C0t-1, de sequências teloméricas e de cromossomos B no cariótipo de indivíduos com B. Os resultados mostraram que houve uma alta prevalência (44,44%) de cromossomos B em uma população de Juazeiro do Norte – CE, além de mostrar que alguns cromossomos B eram menores em algumas populações. A técnica de FISH apresentou padrões semelhantes para sondas de C0t-1 em todos os indivíduos, além disso, as sondas teloméricas e de cromossomos B obtidas por microdissecção mostraram variações na sua distribuição. É provável que tenham ocorrido mecanismos de mutação e acumulação dos elementos supernumerários, que deram origem à sua alta prevalência. A presença de quatro morfotipos de cromossomos B em X. d. angulatus evidencia uma variação da composição molecular destes elementos ao longo da evolução. / B chromosomes was described for the grasshopper subspecie Xyleus discoideus angulatus and, although some studies have suggested the possible origin of the B chromosomoes in this subspecies, little is known about its molecular composition. In this study, cytogenetic analysis was performed in supernumerary chromosomes of grasshopper X. d. angulatus in distinct populations of northeastern Brazil, in order to get a better understanding of the characteristics of these chromosomes and their evolutionary dynamics in different populations. For this purpose, a populational survey of B chromosomes in X. d. angulatus was performed, as well as chromosomal measurement of these elements and the physical mapping of DNA C0t-1, telomeric and B chromosomes sequences in the karyotype of individuals with B. Results showed a high prevalence (44,44%) of B chromosomes in a population of Juazeiro do Norte - CE, and also that some B chromosomes were smaller in some populations. The FISH approach showed similar patterns for C0t-1 probes in all subjects, in addition, telomeric and B chromosome probes obtained by chromosome microdissection showed variations in their distribution. It is likely to have occurred mutation mechanisms and accumulation of supernumerary elements, giving rise to its high prevalence. The presence of four B chromosomes morphotypes in X. d. angulatus shows a variation of the molecular composition of these elements throughout evolution.
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Filogeografia do gênero Rhizoprionodon (Elasmobranchii, Carcharhinformes) no Atlântico Ocidental utilizando marcadores moleculares do DNA mitocondrial /

Mendonça, Fernando Fernandes. January 2010 (has links)
Resumo: Os tubarões representam atualmente um importante recurso para a pesca mundial. No entanto, a falta de informações básicas tais como características populacionais, definições taxonômicas precisas e avaliações dos volumes capturados têm favorecido a contínua e intensiva exploração de espécies e populações que já podem estar apresentando declínios em níveis críticos para a manuntenção da sustentabilidade. Pertencente à família Carcharhinidae, o gênero Rhizoprionodon é constituído por sete espécies de tubarões de pequeno porte distribuídas em praticamente todos os mares e devido seus hábitos associados às regiões costeiras, frequentemente representam uma grande parcela dos volumes desembarcados. Destas espécies, três apresentam-se distribuídas no Atlântico Ocidental (R. terraenovae, R. porosus e R. lalandii) com ocorrências desde o Norte dos EUA até a América do Sul, onde a pesca tem sido intensa, principalmente no Brasil. No presente estudo, utilizando marcadores moleculares do DNA mitocondrial, foram analisadas as estruturas populacionais das espécies R. porosus e R. lalandii, desde o Mar do Caribe até a região sul do Brasil, foi buscada a distinção espécie-específica entre R. terraenovae e R. porosus e foram desenvolvidos protocolos de identificação forense para espécies de tubarões amplamente explorados pela pesca na costa brasileira. Na análise utilizando sequencias da região controladora do mtDNA de amostras de R. porosus foram encontrados 53 halótipos com forte estruturação populacional (FST=0.271, P<0,0001), caracterizando a existência de duas populações distintas, separadas pela Corrente Marítima do Equador. Entre os tubarões da espécie R. lalandii foram encontrados 30 haplótipos também com forte estruturação (FST=0.254, P<0,0001) entre as populações do Caribe e as demais populações da costa brasileira. Provavelmente... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Not available / Orientador: Fausto Foresti / Coorientador: Otto Bismarck Fazzano Gadig / Banca: Claudio de Oliveira / Banca: Iracilda Sampaio / Banca: Rui Coelho / Banca: Patricia Charvet / Doutor
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Programa de fortalecimiento del autoconcepto para adolescentes que sufrieron maltrato infantil

Cortéz Alvarez, Fidel Hernán January 2010 (has links)
Se ha realizado un análisis de diversidad genética de chirimoya (Annona cherimola Miller) en base a una colecta hecha en Bolivia en huertos tradicionales y plantaciones recientes de los departamentos de La Paz, Cochabamba, Santa Cruz, Chuquisaca y Tarija. Para evaluar la población de 407 individuos se ha utilizado un grupo de 20 loci microsatélites informativos y específicos para chirimoya.
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Diversidade e estrutura genética de ovinos crioulos lanados do Brasil

Castro, Silvia Tereza Ribeiro January 2008 (has links)
Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Genética e Morfologia, Laboratório de Genética, 2008. / Submitted by Suelen Silva dos Santos (suelenunb@yahoo.com.br) on 2009-09-25T18:41:33Z No. of bitstreams: 1 2008_SilviaTerezaRibeiroCastro.pdf: 1299779 bytes, checksum: 1bb42265d969892d91060146d5e19357 (MD5) / Approved for entry into archive by Gomes Neide(nagomes2005@gmail.com) on 2010-12-22T15:42:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_SilviaTerezaRibeiroCastro.pdf: 1299779 bytes, checksum: 1bb42265d969892d91060146d5e19357 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-12-22T15:42:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_SilviaTerezaRibeiroCastro.pdf: 1299779 bytes, checksum: 1bb42265d969892d91060146d5e19357 (MD5) Previous issue date: 2008 / O conhecimento da variabilidade genética existente em raças locais de animais zootécnicos é importante para a conservação do patrimônio genético e para programas de melhoramento animal. O objetivo geral deste trabalho foi analisar a diversidade e a variabilidade genética do ovino Crioulo Lanado brasileiro por meio de marcadores genéticos do tipo RAPD e SSRs. As amostras analisadas representaram o rebanho de conservação da Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuária - EMBRAPA, bem como as populações de ovinos crioulos existentes na área de ocorrência. Os resultados indicaram que a variabilidade genética total da raça Fronteira e do ecótipo Serrana não está representada no rebanho de conservação da EMBRAPA nem nos demais rebanhos amostrados. Os animais mantidos pela EMBRAPA apresentaram mais introgressão de Corriedale que os da população externa. Em todas as análises o ecótipo Zebua foi o mais dissimilar entre os crioulos. _________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The knowledge of the existing genetic variability in local breeds of livestock is important for the conservation genetics and for programs of animal breeding. The general objective of this research was to analyze the diversity and the genetic variability of Brazilian Creole Wool Sheep raised in the Southearn region of the country through the utilization of molecular markers (RAPD and STR). The analyzed samples represented the conservation nucleus belonging to Brazilian Agricultural Research Corporation - EMBRAPA as well as others flocks present in the region. The results indicated that the total genetic variability of the Fronteira breed and the ecotype Serrana is not represented in the EMBRAPA’s flock nor in the others sampled flocks. The animals kept by EMBRAPA presented a higher introgression of Corriedale than that of the external population. In all analyses the Zebua ecotype was the most dissimilar among the Creoles.
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Isolamento e caracterização de promotores órgão-específicos de plantas de soja (Glycine max)

Santana, Renata Henrique 16 March 2012 (has links)
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2012. / Submitted by Tania Milca Carvalho Malheiros (tania@bce.unb.br) on 2012-06-06T14:50:44Z No. of bitstreams: 1 2012_RenataHenriqueSantana_Parcial.pdf: 2120476 bytes, checksum: 2586d1a4cfdd137b3464b1a681461c69 (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Ferreira de Souza(jaquefs.braz@gmail.com) on 2012-06-25T10:58:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_RenataHenriqueSantana_Parcial.pdf: 2120476 bytes, checksum: 2586d1a4cfdd137b3464b1a681461c69 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-06-25T10:58:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_RenataHenriqueSantana_Parcial.pdf: 2120476 bytes, checksum: 2586d1a4cfdd137b3464b1a681461c69 (MD5) / A planta de soja (Glycine max [L.] Merr) destaca-se mundialmente pela diversidade de produtos que proporciona para uso animal e humano. No Brasil, a soja é o produto que mais gera divisas cambiais atualmente. No entanto, a produtividade dessa cultura é afetada por diversos fatores bióticos e abióticos. No melhoramento da soja, a engenharia genética tem sido utilizada como ferramenta para geração de novos cultivares capazes de superar essas adversidades. Nessa técnica, o uso de promotores órgão-específicos em detrimento de promotores constitutivos para expressar transgenes restringe sua expressão temporal e espacialmente, aumentando a biossegurança e estabilidade do sistema. Neste trabalho utilizamos dados transcriptômicos e genômicos de domínio público para identificar genes órgão-específicos de soja, isolar e caracterizar suas regiões promotoras. Os genes GmSulfT1 e GmCit1 foram identificados por meio de análises in silico em três bancos de ESTs de soja: GenoSoja, Unigene e da Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia. Esses genes foram selecionados para validação biológica por apresentarem o perfil de EST órgão-específico em pelo menos dois dos bancos citados e pelo ineditismo. Seus perfis de expressão foram avaliados por RT-PCR semiquantitativa e Northern blot. O GmSulfT1 apresentou expressão preferencial em raiz e semente e o GmCit1, por sua vez, em folha de plantas de soja. As regiões promotoras desses genes foram identificadas no genoma da soja cv. Williams 82 e analisadas in silico para identificação de motivos putativos de elementos cis regulatórios. Iniciadores desenhados baseados nessas sequências foram capazes de amplificar fragmentos dessas regiões do genoma da soja cv. Conquista por PCR. Os promotores derivados de deleções da região promotora de GmSulfT1, PSulft0,5 e PCit0,4, PCit0,8 e PCit1,9, de GmCit1, foram clonados a montante do gene repórter gus em vetor binário utilizando o sistema Gateway®. Plantas de fumo (Nicotiana tabacum) foram transformadas para caracterização in vivo dos promotores. No ensaio histoquímico, o gene gus sob regulação dos promotores PSulfT0,5, PCit0,8 e PCit1,9 apresentou altos níveis de expressão em raízes e folhas, enquanto o PCit0,4 preferencialmente em folha. PCit0,4 isolado no presente trabalho poderá ser utilizado futuramente para conferir expressão preferencial em folhas de transgênicos. O caráter de alta expressão de gus em mais de um órgão atribuído por PSulfT0,5, PCit0,8 e PCit1,9, pode, da mesma forma, ser explorado para expressão de transgenes em plantas. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The soybean plant (Glycine max [L.] Merr) is a worldwide important crop due to the diversity of products that it provides for animals and humans. In Brazil, the soybean is currently the commodity that generates most of its foreign-exchange reserves. However, the productivity of this crop is reduced by several biotic and abiotic factors. In soybean breeding, genetic engineering has been successfully applied to generating new cultivars able to overcome these adversities. In this technique, the use of organ-specific instead of constitutive promoters restricts the transgene expression temporally and spatially, increasing biosafety and the stability of the system. In this work we used transcriptomic and genomic data of public domain to identify soybean organ-specific genes, isolate and characterize their promoter region. Genes GmSulfT1 and GmCit1, were in silico identified in three ESTs databases, GenoSoja, Unigene and from Embrapa Genetic Resources and Biotechnology. These genes were selected for further analysis due to their organ specific EST profile in at least two of the mentioned database, and novelty criteria. Their expression profiles were biologically validated by semiquantitative RT-PCR and Northern blot assays. GmSulfT1 was preferentially expressed in roots and seeds and GmCit1 in leaves of soybean plants. The promoter regions of these two genes were identified in the soybean cv. Williams 82 genome sequence and in silico analyzed to detect putative motifs of cis regulatory elements. Primers designed based in those sequences were able to amplify fragments of the promoter regions of GmSulfT1 and of GmCit1 by PCR with soybean cv. Conquista genomic DNA. The deleted promoters derived from GmSulfT1 promoter region, PSulft0.5, and from GmCit1, PCit0.4, PCit0.8 and PCit1.9, were fused with the reporter gene gus in a binary vector using the Gateway® System. Tobacco plants were transformed in order to in vivo characterizing these promoters. Histochemical assay showed high gus expression in roots and leaves under control of PSulfT0.5, PCit0.8 and PCit1.9, and under control of PCit0.4, more in leaves. PCit0.4, isolated in the present work, can be used hereafter to activate transgene expression preferentially in leaves. The high expression levels in more than one organ obtained using the other promoters isolated in this work can also be explored to express transgenes in plants.

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