Orientador: Sérgio de Freitas / Banca: Nilza Maria Martinelli / Banca: Karina Lucas da Silva Brandão / Resumo: Chrysoperla externa é uma espécie de crisopídeo encontrada em diversos agroecossistemas brasileiros, capaz de se alimentar de diferentes pragas agrícolas. Em cada ambiente em que for encontrada poderá sofrer diferentes pressões seletivas do ambiente. Para a verificação das mutações genéticas presentes nas populações de C. externa podem ser usados marcadores moleculares, em especial os genes mitocondriais, que são de fácil manipulação. C. externa é de fácil criação e a mais estudada para multiplicação massal, por isso se faz necessário estudar a resposta das populações quando liberadas em ambientes diferentes, visto que estas podem não sobreviver em áreas biogeográficas distintas, inviabilizando o seu papel como agente de controle de pragas. O objetivo deste trabalho foi caracterizar geneticamente as populações de C. externa nos municípios de Brotas (SP), Jaboticabal (SP), Rifaina (SP), São Carlos (SP), São José dos Campos (SP) e São Sebastião do Paraíso (MG). Para o gene COI foram verificados oito haplótipos, seis mutações e a maior diversidade haplotípica foi encontrada em Brotas e São Sebastião do Paraíso. Para o gene 16S foram observadas quatro mutações, seis haplótipos e a maior diversidade haplotípica ocorreu no município de São Sebastião do Paraíso. A distância genética encontrada entre as populações de C. externa não foi significativa para os dois genes analisados, evidenciando que provavelmente as populações são geneticamente compatíveis. O estudo da estrutura genética dessas populações de C. externa, de ambos os genes, mostrou que essas populações não apresentam um padrão de distribuição haplotípica. Então, talvez sejam necessários outros estudos com populações desta espécie oriundas de localidades mais distantes geograficamente dos que as utilizadas neste trabalho / Abstract: Chrysoperla externa is a species of green lacewing found in several Brazilian agroecosystems able to feed on various agricultural pests. In each environment that is found may experience different environmental selective pressures. In order to verify genetic mutations in C. externa populations it may be used molecular markers, in particular mitochondrial genes, which are easy handling and extraction. C. externa is easy to create and the most studied for mass multiplication, so it is necessary to study on the response of populations when released in different environments, since they may not survive in different biogeographic areas, derailing its role as a pest controller. The objective of this study was to characterize genetically the populations of C. externa from the cities of Brotas (SP), Jaboticabal (SP), Rifaina (SP), São Carlos (SP), São José dos Campos (SP) and São Sebastião do Paraíso (MG). For the COI gene it was found eight haplotypes, six mutations and greater haplotype diversity in Brotas and São Sebastião do Paraíso. In the 16S there were four mutations, six haplotypes and haplotype diversity was higher in São Sebastião do Paraíso. The genetic distance among populations of C. externa was not significant for the two genes analyzed, showing that the populations are probably genetically compatible. The study of the genetic structure of populations of C. externa, showed for both genes that these populations do not show a pattern of haplotype distribution. So, it may need further study on populations of this species originating from geographically more distant locations of those used in this work / Mestre

Orientador: José Moacir Marin / Banca: Everlon Cid Rigobelo / Banca: Maria Cristina Monteiro de Souza-Gugelmin / Resumo: O objetivo deste estudo foi investigar a ocorrência de cepas de Escherichia coli produtoras de Shiga toxina (STEC) em queijos mussarela produzidos artesanalmente. Foram analisadas 59 amostras de queijo, produzidas no Vale do Jequitinhonha (Nordeste de Minas Gerais, Brasil). Isolando-se 147 cepas de E. coli e através da técnica de PCR, foram investigadas a presença dos genes da Shiga toxina (stx 1 e stx 2) e da intimina (eae). Dezesseis cepas bacterianas (10,8%) apresentaram o gene stx ( todas portavam o gene stx 1) e 13 delas também se mostraram eae positivas. Os isolados de E. coli foram também examinados para a detecção dos genes codificadores de adesinas (pap, sfa e afa). Não foram identificados nenhum desses genes.Todas as cepas STEC isoladas foram pesquisadas para resistência a 12 agentes antimicrobianos. As resistências predominantes detectadas foram de 37,5% para estreptomicina, 37,5% para a tetraciclina, 31,2% para a ampicilina e 31,2% para a amicacina. A resistência a múltiplas drogas foi encontrada em 5 cepas (31,2%). A presença dos genes codificadores dos fatores de virulência indica que o queijo mussarela produzido artesanalmente pode representar um risco à saúde dos consumidores. / Abstract: The aim of the present study was to investigate the occurrence of Escherichia coli strains presenting the Shiga toxin gene (probably STEC strains) in mussarela cheese produced by artesanal method in the Jequitinhonha Valey (Northeast of Minas Gerais State, Brazil). Fifty-nine cheese samples were analyzed and a hundred forty seven strains of E. coli were isolated. Using the PCR method the strains were screened for the Shiga toxin (stx 1 and stx 2) and the intimin (eae) genes. Sixteen isolates (10,8%) carried the stx gene (all of them showed the stx 1 gene ) and thirteen also presented the eae gene. Using the same method the strains were screened for the presence of pap, afa, and sfa genes, adhesin genes caracteristics of the E. coli extraintestinal pathogenic strains (ExPEC). None of them showed these adhesin genes and could not be classified as an ExPEC strains. The susceptibility of the probably STEC strains to twelve antimicrobial drugs were evaluated. The most important resistance was detected to the streptomycin (37,5%), tetracycline (37,5%), ampicillin (31,2%) and amikacin (31,2%). The multidrug resistance was detected in 5 isolates (31,2%). The presence of coding genes for virulence factors in the E. coli isolates recovered from mussarela cheese produced by artesanal method could represent a risk for the human health. / Mestre

Resumo: O presente trabalho teve como objetivo avaliar a agressividade de linhagens de Ralstonia solanacearum provenientes de solanáceas, plantas ornamentais e eucalipto, em plantas de batata, tomate e fumo, bem como caracterizar as linhagens por meio de técnicas moleculares. Vinte e duas linhagens foram utilizadas nos ensaios de avaliação da agressividade, em experimentos conduzidos em casa-de-vegetação evidenciaram alta severidade da doença pelas linhagens de R. solanacearum quando inoculadas em plantas de tomate e batata, sendo a batata mais afetada nas inoculações. Todas as linhagens mostraram-se agressivas, sendo que o fumo mostrou baixa suscetibilidade ao ataque das bactérias. As linhagens mais agressivas em plantas de tomate foram IBSBF 309, IBSBF 1712, IBSBF 1839, IBSBF 1882, IBSBF 1883 e IBSBF 2000, pertencentes às biovares I, II e III. As linhagens mais agressivas às plantas de fumo foram IBSBF 309, IBSBF 2131 e IBSBF 292T, pertencentes à biovar I. Foi efetuado também ensaio de microbiolização in vitro em sementes de eucalipto, a fim de se identificar possíveis linhagens patogênicas a esta espécie vegetal e concluiu-se que todas as linhagens utilizadas infectaram plantas de eucalipto ou afetaram seu crescimento. A caracterização molecular de 41 linhagens de Ralstonia solanacearum, provenientes de diversas plantas hospedeiras, incluindo solanáceas, bananeira, helicônia, plantas ornamentais e eucalipto, foi efetuada empregando-se ERIC e BOX-PCR e os resultados mostraram grande diversidade genética entre as linhagens. A análise de PCR-RFLP da região espaçadora 16S-23S DNAr permitiu distinguir os isolados pertencentes à biovar III das demais biovares (I, II, IIA e IIT), quando digeridos com as enzimas Taq I e Hin6 I. A análise de sequenciamento de parte dos genes Endoglucanase (Egl) e MutS possibilitou a classificação em filotipos e os resultados... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: This study aimed to evaluate the aggressiveness of strains of Ralstonia solanacearum from solanaceus, ornamental and eucalyptus plants, on potato, tomato and tobacco, and to characterize the strains through molecular techniques. Twenty-two strains were used in this study to evaluate the aggressiveness and, the experiments conducted in a greenhouse revealed the high susceptibility of tomato and potato plants, with the potato being the most affected on through the inoculations. All isolates proved to be aggressive and higher tolerance to the attack of bacteria was verified on tobacco plants. Strains more aggressive on tomato were IBSBF 309, IBSBF 1712, IBSBF 1839, IBSBF 1882, IBSBF 1883 and IBSBF 2000, belonging to biovars I, II and III. The more aggressive strains on the tobacco plants were IBSBF 309, IBSBF 292T and IBSBF 2131 belonging to biovar I. Tests in vitro of microbiolization of eucalyptus seeds were also performed in order to identify possible pathogenic strains to this species and the results showed that all strains used cause infection on emerging plants or affected their growth. To molecular characterization of 41 strains of Ralstonia solanacearum from several host plants including solanaceous, banana, heliconia, ornamentals and eucalyptus were employed to ERIC and BOX-PCR, and the results showed high genetic diversity among strains. The analysis of PCR-RFLP of 16S-23S spacer region rDNA allowed us to distinguish the isolates belonging to biovar III from the others (biovars I, II, IIA and IIT) when digested with enzymes Taq I and Hin6 I. The sequence analysis of the partial of Endoglucanase (Egl) and MutS genes allowed the classification in phylotypes and the results revealed a predominance of the phylotype II in Brazil, and four isolates were classified in the phylotype I, all belonging to biovar III / Orientador: Antonio Carlos Maringoni / Coorientador: Suzete Aparecida Lanza Destéfano / Banca: Valdemar Atilio Malavolta Junior / Banca: Ivan Paulo Bedendo / Mestre

Orientador: Celso Luís Marino / Banca: Mario Luiz Teixeira de Moraes / Banca: Esteban Roberto González / Resumo: Uma anomalia foi detectada na progênie F1 de um cruzamento controlado entre genitores normais e sem parentesco de Eucalyptus grandis, em um viveiro de mudas para plantios comerciais da empresa Suzano Papel e Celulose. As plantas anormais apresentaram altura reduzida, superbrotamento caulinar, redução drástica da área foliar e alteração na forma do limbo da folha. A proporção entre plantas afetadas e normais foi de 3:1 (3 plantas normais : 1 planta anômala), sugerindo uma segregação mendeliana do caráter, que foi confirmada pelo teste do qui-quadrado (χ 2=2,32; p>0,1). Através da técnica de BSA (Bulked Segregant Analysis) utilizada em conjunto com marcadores RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA) foi possível identificar um marcador ligado a essa anomalia de eucalipto, o qual foi convertido em SCAR (Sequence Characterized Amplified Region). A sequência SCAR apresentou identidade a sequências expressas de eucalipto do banco de dados de ESTs (Expressed Sequence Tags) do projeto FORESTs-FAPESP, portanto, encontra-se em uma região do genoma que pode estar envolvida direta ou indiretamente com o caráter da anomalia. Diante do exposto, este trabalho teve como objetivo a caracterização molecular dessa região genômica relacionada à anomalia observada em mudas de eucalipto. Na análise de ligação das marcas, molecular e morfológica, estas apresentaram-se ligadas a uma distância de 0,0 cM com 0% de freqüência de recombinação (LOD= 1000), demonstrando que o marcador molecular está relacionado à anomalia. A sequência SCAR apresentou similaridade a um EST de 632 pb do banco de dados GenBank e a um consenso de 841pb do banco de dados FORESTs-FAPESP, os quais apresentaram o domínio Bet v 1, uma família de proteínas relacionadas à defesa da planta. Como a região em estudo está relacionada a uma família multigênica, esta se apresentou em várias... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: From a controlled crossing between two normal genitors without parentage from relationship of a seedling nursery for commercial crops of Suzano Papel e Celulose it was observed a lethal anomaly in Eucalyptus grandis full sib family F1. The abnormal plants had reduced height, lack of apical dominance, drastic reduction in the leaf area and an alteration in leaf blade. Segregation ratio was 3:1 (3 normal plants : 1 anomalous plant). Thus, this anomaly is probably inherited in a mendelian manner (χ2=2,32; p>0,1). By using the BSA (Bulked Segregant Analysis) approach used with RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA) markers, it was possible to identify one marker linked to this anomaly, which was later converted to SCAR (Sequence Characterized Amplified Region). The SCAR sequence was similar to ESTs (Expressed Sequence Tag) from FOREST-FAPESP database, hence, it is inside a genome region that is supposed to be directly or indirectly involved in the anomaly character. Based on such pieces of information, the present research had as main objective to carry out the molecular characterization of the genomic region related to the anomaly observed in eucalyptus seedlings. During the linkage analyses of molecular and morphologic markers, the latter presented 0% recombination frequency and a distance of 0 cM with LOD=1000. The SCAR sequence was similar to EST of 632 bp from GenBank and a consensus of 841 bp from FORESTs, which presented the Bet v 1 domain, a protein family related to plant defense. As the analyzed region is related to a multigenic family, it was observed in several copies in the eucalyptus genome, making difficult its cloning. By the analyses carried out both in FORESTs and GenBank, it was noticed that the similarity between SCAR and EST is restricted to SCAR 5' region. In the 3'race technique it was verified that EST 3' region... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Angelo Berchieri Júnior / Banca: Raphael Lucio Andreatti Filho / Banca: Ivens Gomes Guimarães / Resumo: Patogenos intestinais são expostos a várias condições de estresse durante o ciclo de infecção. Anaerobiose é uma condição hostil oferecida pelo hospedeiro no intestino e lúmen intestinal, onde a sobrevivência, multiplicação e entrada nas células epiteliais é prioridade para a invasão do agente patogênico. A fumarato reductase (frdABCD), dimetil sulfóxido (DMSO)- Nóxido de trimetilamina (TMAO) reductase (dmsABC), e nitrato reductase (narGHIJ), são genes de Salmonella Typhimurium que codificam enzimas envolvidas na respiração anaeróbica de fumarato, DMSO ou TMAO, e nitrato, respectivamente. Eles são regulados em resposta à disponibilidade de nitrato, oxigênio e a taxa de crescimento celular. A vitamina B12 (cobalamina) é sintetizada por Salmonella Typhimurium em condições anaeróbicas, sendo usado como cofator em quatro reações conhecidas. A deleção dos genes cobS e cbiA inibem a produção de cobalamina. No presente estudo, foi avaliada a infecção de aves por mutantes de STM, com o sistema respiratório comprometido por alterações nos genes narG, napA, cobS, cbiA, frdA, dmsA e torC. Aves de um dia de idade, foram inoculadas com 0.1 mL de cultura de Salmonella Typhimurium contendo 108 UFC/mL, diluída a 10-2 e 10-3. Sinais clínicos e mortalidade foram avaliados durante 21 dias. Em geral, os sintomas das aves infectadas com as cepas mutantes foram semelhantes aos apresentados pelas aves do grupo controle. Com exceção de STM cbiA, os demais mutantes reduziram a capacidade de causar mortalidade em comparação com a cepa original. A mortalidade do grupo de aves infectadas com STM ΔnarG, STM ΔfrdA, STM ΔdmsA e STM ΔcobSΔcbiA, apresentaram diminuição significativa da mortalidade em comparação ao grupo controle (p<0.05) / Abstract: Intestinal pathogens are exposed to various stress conditions during their infectious cycle. Anaerobiosis, one of such hostile condition, is offered by the host within gut and intestinal lumen, where survival, multiplication and entry into intestinal epithelial cells are priority for the invasion of the pathogen. The fumarate reductase (frdABCD), dimethyl sulfoxide (DMSO)- trimethylamine N-oxide (TMAO) reductase (dmsABC), and nitrate reductase (narGHIJ) operons in Salmonella Typhimurium (STM) encode enzymes involved in anaerobic respiration to the electron acceptors fumarate, DMSO, TMAO, and nitrate, respectively. They are regulated in response to nitrate and oxygen availability and changes in cell growth rate. Vitamin B12 (cobalamin) is synthesized by Salmonella Typhimurium only under anaerobic growth conditions used as a cofactor in four known reactions. The deletion of cobS and cbiA genes prevent any form of cobalamin production. In the present study we evaluate the infection of birds by mutants of STM, with the anaerobic respiratory system committed by mutations in the genes: narG, napA, cobS, cbiA, frdA, dmsA, and torC. Virulence was assessed by oral inoculation of groups of one-day-old broilers with 0.1 mL of culture contained 108 CFU/mL or diluted at 10-3 and 10-2 of strains mutants of Salmonella Typhimurium. Clinical signs and mortality were recorded over a period of 21 days. In general, the symptoms of chickens infected with the mutant strains were similar to those presenting by control birds. Except for STM ΔcbiA, all showed reduced capacity to cause mortality in comparison with the original strain. The mortality of group of chickens infected with STM ΔnarG, STM ΔfrdA, STM ΔdmsA and STM ΔcobSΔcbiA showed significant decrease in mortality compared to control group (p<0.05) / Mestre

Orientador: Ana Elizabete Silva / Banca: Maria Inês Moura Pardini / Banca: Fátima Pereira de Souza / Resumo: O câncer gástrico é a segunda causa de morte por câncer no mundo e o quinto tipo com maior prevalência no Brasil, sendo previstos 21.800 casos novos em 2008. Esta neoplasia apresenta etiologia bastante complexa, envolvendo fatores genéticos e ambientais. Os fatores etiológicos de maiores destaques incluem a infecção pela bactéria Helicobacter pylori, a ingestão de determinados alimentos, como defumados, enlatados e com elevada quantidade de sal, além do estilo de vida dos indivíduos, associado ao consumo de cigarro e álcool. Uma lesão pré-cancerosa importante no desenvolvimento da neoplasia gástrica é a metaplasia intestinal, podendo aumentar o seu risco em até 10 vezes. Atualmente é reconhecida a participação de alterações epigenéticas como metilação aberrante do DNA, que atua de forma igualmente relevante e complementar no processo de desenvolvimento e progressão do câncer. Vários genes com papel importante no controle do ciclo celular, reparo do DNA, apoptose, angiogênese e adesão celular podem apresentar expressão alterada devido metilação aberrante de sua região promotora, assim a investigação do padrão de metilação de genes envolvidos com o processo neoplásico pode ser uma estratégia interessante para a indicação de marcadores moleculares que possam auxiliar no diagnóstico precoce do câncer. Desta forma, no presente trabalho foi investigado o padrão de metilação dos genes WT1 e RARß em metaplasia intestinal (35 amostras) e suas respectivas mucosas gástricas normais, em comparação com o câncer gástrico (8 amostras) também com suas respectivas mucosas normais, através da técnica MS-PCR (Methylation Specific PCR). Devido à participação da infecção pela H. pylori na carcinogênese gástrica, foi investigada molecularmente a presença dessa bactéria nas amostras...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Worldwide, the gastric cancer is the second cause of death by cancer. In Brazil, it is the fifth type with more abundant, foreseen 21.800 new cases in 2008. This neoplasia presents very complex etiology involving genetic and environmental factors. The main etiologic factors include: infection by H. pylori, intake of specific foods such as curing food, canned food, and high consumption of salt wealthy food, besides people life style associated to alcohol and cigarette consumptions. An important previous-cankered lesion in development of gastric neoplasia is the intestinal metaplasia, what can increase your risk in ten times. At this moment, it is recognized the participation of epigenetic alterations like ADN aberrant methylation, which actuate in a same way considerable and complementary in development process and cancer evolution. Many genes with important role in control of cellular cycle, ADN repair, apoptosis, angiogenesis and cellular adhesion can present changed expression due aberrant metthylation of your promoter region. In this manner, the investigation of metithyation pattern of genes involved with the neoplasic process can be an interesting strategy for the indication of molecular markers that can help in cancer precocious diagnosis. Thus, in this present study were investigated the metthylation pattern of RARß and WT1genes (35 samples) and their respective normal mucous gastrics by technic MSPCR (Methylation Specific PCR). Due to participation of infection by H. pylori in gastric carcinogenesis, it was too molecular investigated the presence of this bacterium in the studied samples and the possible association with the metthylation pattern presented by both genes. The results showed high pattern of methylation in both valued lesions, that is, 97% and 100%, respectively of methylated samples in metaplasia group ...(Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Resumo: A hipófise anterior compõe-se de cinco tipos celulares que são definidos pelos hormônios que secretam. A diferenciação desses tipos celulares resulta de uma cascata temporalmente regulada de fatores transcricionais expressos no tecido hipofisário. Mutações de um desses fatores podem resultar tanto em defeitos estruturais da glândula como em deficiências hormonais, que podem ser isoladas (Déficit de hormônio do crescimento - DGH) ou combinadas (DHHC), dependendo do papel do fator transcricional mutado. A Displasia Septo - óptica (DSO) caracteriza-se pela presença de hipoplasia hipofisária, hipoplasia de nervo óptico e/ou má formações de estruturas da linha média. Foram avaliados 11 pacientes com quadro clinico de SOD, DGH e DHHC e realizado o sequenciamento genético do gene HESX1 desses indivíduos. Nos casos de DHHC foi feita uma análise adicional do gene PROP1. A mutação missense em estado de heterozigose A1772G levando a substituição N125S foi identificada em um paciente portador de DSO, no gene HESX1. Essa troca já foi previamente relatada como um polimorfismo na população Afro-Caribenha. Encontramos três pacientes portadores da variante alélica A9A e N20S no exon 1 do gene PROP1, já descritos previamente na literatura como polimorfismos. / Abstract: The anterior pituitary is made of five types of cell defined according to the hormones they secrete. Differentiation among such cell types derives from a cascade of temporally regulated transcriptional factors expressed in the pituitary tissue. Mutation in one of these factors may result in both structural gland defects and hormonal deficiencies, which may be either isolated (DGH - Growth Hormone Deficiency) or combined, depending on the role of the mutated transcriptional factor. Septo-optic dysplasia (SOD) is characterized by pituitary hypoplasia, optic nerve hypoplasia and/or malformation of medium line structures. Eleven patients with a clinical state of SOD, DGH and CPHD were assessed, and genetically sequenced for the HESX1 gene. For CPHD cases, an additional analysis for the PROP1 gene was also conducted. One SOD patient was found to have a missense mutation in A1772G heterozygosis state, leading to the N125S replacement, in HESX1 gene. Such replacement has already been reported as a polymorphism in the Afro-Caribbean population. We found three patients with the alelic variation A9S and N20A in exon 1 of PROP1 gene, previously described as polymorphisms. / Orientador: Célia Regina Nogueira / Coorientador: Denise Perone / Mestre

Resumo: As plantas daninhas da família Poaceae são as principais plantas que infestam a cultura de cana-de-açúcar. As espécies de gramíneas conhecidas por capim-colchão, estão entre as de maior ocorrência nas lavouras de cana-de-açúcar no Brasil. Atualmente o uso do controle químico está sendo o mais empregado para controle de Digitaria, porém há alguns relatos de falha no controle, principalmente com referência a herbicidas pertencentes ao grupo das triazinas, que bloqueiam a cadeia fotossintética, no fotossistema. As técnicas moleculares estão sendo bem recomendadas para análise da diversidade genética em plantas daninhas. Para a caracterização molecular vinte iniciadores foram utilizados para o RAPO e, para o PCR¬RFLP utilizou-se de dois iniciadores específicos P1 e P2 e a enzima de restrição Mael. O seqüenciamento foi realizado com o amplicom produzido com os iniciadores P1 e P2. Para o tratamento químico utilizou-se a ametrina. Com isso, esse trabalho teve como objetivos: caracterizar dez acessos de Digitaria spp. por marcadores RAPO e PCR¬RFLP, sequenciar uma região conservada do gene psbA e verificar possíveis associações entre o polimorfismo desse gene e a resposta fenotípica à ametrina. Pela análise molecular não houve variabilidade genética entre os acessos e todos apresentaram a mesma resposta fenotípica ao herbicida utilizado. Com esses resultados, concluiu-se que o capim-colchão dos dez acessos estudados pertence à espécie Digitaria nuda e não foi observada relação entre a ocorrência de polimorfismo e a suscetibilidade à ametrina, provavelmente porque todos os acessos estudados foram controlados na dose recomendada do herbicida. / Abstract: The weed of family Peaceae are the most important infesting sugarcane crop plants. The gramineous species known as crabgrass are among the ones with high occurrence in Brazil sugarcane crop. Presently the use of chemical control is being the most common way used for the control of Digitaria, but with few controlling occurrences fails, with emphasis for those herbicides belonging to triazine group which block the photosynthetic chain at the photosystem II leveI. Molecular techniques are being recommended for the analysis of the genetic diversity such weed. For the molecular characterization twenty primers were used for RAPO and for the PCR¬RFLP a set of two specific primers P1 and P2 were used together with restriction enzyme Mael. The ONA sequencing was performed with an amplicon sample produced with the primers P1 and P2. For the chemical treatment control ametryn was selected. Thus this work had objectives as follows: to characterize ten accessions of Digitaria spp. by RAPO and PCR-RFLP markers, and to sequence a conserved region of the psbA gene so as to investigate the possible polymorphic associations of this gene in response to the phenotypic response to ametryn. For the molecular analysis it did not have genetic variability among the accessions and all had presented the same phenotypic response to the used herbicide. Based on the obtained results, it is concluded the crabgrass that ten collected accessions belong to the species Digitaria nuda, and it was not observed any relation among the polymorphism and susceptibility to ametryn probably because all the studied accessions had been controlled in the recommended dose of the herbicide. / Orientador: Janete Apparecida Desidério Sena / Coorientador: Pedro Luís da Costa Aguiar Alves / Banca: Robinson Antonio Pitelli / Banca: Josélia Oliveira Marques / Banca: Nubia Maria Correia / Banca: José Eduardo Garcia / Doutor

Orientador: José Moacir Marin / Banca: Alessandra Aparecida Medeiros / Banca: Maria de Fátima Martins / Resumo: A um longo tempo a mastite tem sido reconhecida como a doença que provoca as maiores perdas econômicas nos rebanhos leiteiros. De fevereiro a novembro de 2004, 670 amostras de leite mastítico bovino, provenientes de dois estados brasileiros foram coletadas, das quais foram isoladas 231 cepas de Escherichia coli. Estas cepas foram analisadas para a detecção dos genes de produção de Shiga toxina (stx 1 e stx 2) e do gene da intimina (eae). Vinte cepas (8,6%) foram detectadas através de PCR contendo os genes da Shiga toxina (8 stx 1, 12 stx 2 e nenhuma delas ambos os genes). Duas cepas (0,8%) de E. coli eram eae positivo não produtoras de Shiga toxina. As cepas de E. coli foram também examinadas para detectar a resistência a 12 agentes antimicrobianos. As resistências mais comuns foram para tetraciclina (92,2%), estreptomicina (90,4%), ácido nalidíxico (88,3%), amicacina (86,5%) e cefalotina (84,8%). A resistência a múltiplas drogas foi encontrada em 152 cepas (65,8%). . Entre os sorogrupos determinados, O111, O26, O158 e O125 foram os mais comuns, todos sorogrupos EPEC clássicos. / Abstract: Mastitis has been recognized for some time as the most costly disease in dairy herds. From February to November 2004, 670 samples of bovine mastitic milk were collected from two Brazilian states, from which 231 Escherichia coli strains were isolated. These strains were screened for the presence of Shiga toxin-producing (stx 1 and stx 2) and intimin (eae) genes. Twenty (8.6%) strains were detected by PCR to harbor the Shiga toxin genes (8 the stx 1 gene, 12 the stx 2 gene and none both of them) Two (0.8%) of the E. coli strains studied were eae positive non Shiga toxin-producing. The E coli strains were also examined for resistance to 12 antimicrobial agents. The most commonly observed resistance was to tetracycline (92.2%), streptomycin (90.4%), nalidixic acid (88.3%), amikacin (86.5%) and cephalothin (84.8%). Multidrug resistance was found among 152 isolates (65.8%). Among the serogroups determined O111, O26, O158 and O125 were the most commonly, all of them classic EPEC serogroups. / Mestre

Orientador: Manoel Victor Franco Lemos / Banca: José Eduardo Garcia / Banca: Cristina Lacerda Soares Petrarolha Silva / Banca: Odair Aparecido Fernandes / Banca: Antônio Carlos Monteiro / Resumo: Os países industrializados apresentam uma forte tendência em buscarem, cada vez mais, sistemas de controle biológico eficiente e específicos sendo menos tóxicos para os humanos e o ecossistema em geral. Os bioinseticidas à base de microrganismos entomopatogênicos não encontram grandes restrições quanto a sua utilização. Dentre as bactérias que possuem atividade entomopatogênica, Bacillus thuringiensis é a que apresenta maior valor potencial no controle dos insetos-praga, por apresentar vários genes cry e possuir mecanismos de recombinação genética como: conjugação e transformação. O objetivo desse estudo foi identificar e caracterizar a linhagem B. thuringiensis var. londrina. A análise morfológica dos cristais indica uma nova proteína Cry. Para comparação foram utilizadas as linhagens de B. thuringiensis var. tenebrionis, var. tolworthi e var. kurstaki - HD1 que possuem os genes cry3Aa, cry3Ba e cry1Aa, respectivamente. Foi realizada a extração do DNA total das quatro linhagens, em seguida esse material foi submetido à reação de PCR com os oligonucleotideos iniciadores específicos dos genes acima citado. Para a confirmação dos resultados utilizou-se a técnica de hibridização por Southern blotting e seqüenciamento dos amplicon. O amplicom para o gene cry3 obtido pela linhagem padrão B. thuringiensis var. tenebrionis foi igual ao tamanho esperado, porém o obtido pela linhagem var. londrina foi maior em números de nucleotídeo que o esperado, indicando uma possível recombinação. A técnica de Southern blotting confirmou a recombinação do gene mostrando diferenças entre as bandas das linhagens padrão e da linhagem var. londrina, confirmando assim um novo gene cry3. Os bioensaios executados com esse novo gene não indicaram eficiência para alguns insetos-praga de lavoura da ordem Lepidoptera e foram eficientes... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Industrialized countries show a strong tendency to look for efficient and specific biological control systems that are less toxic to humans and ecosystems. Bioinsecticides based on entomopathogenic microorganisms are well accepted by the public. Among those, bacteria that exhibit such entomopathogenic activities, Bacillus thuringiensis is the one with major potential over the pests, since it harbors several cry genes and holds genetic recombination mechanisms such as bacterial conjugation and transformation in order to accomplish these control procedures. The aim of this research was to identify and characterize the strain of B. thuringiensis var. londrina. As a comparison some other strains of B. thuringiensis such as B. thuringiensis var. tenebrionis, var. tolworthi and var. kurstaki - HD1 that holds the genes cry3Aa, cry3Ba and cry1Aa, were used respectively. Alkaline lysis procedure was used for the DNA extraction from the four bacterial strains followed by its use on PCR reactions using the specific primers for the genes. To confirm the results were utilized the techniques of Southern blotting hybridization and DNA sequencing. The obtained amplicons have shown a difference in size considering the pattern strains compared to the var. londrina. The genetic recombination that took place so as to generate the var. londrina cry gene was detected by Southern blotting analysis, the hybridization results confirm the genetic recombination showing the banding pattern differences that took place generating the new cry3 gene. The bioassays showed that the recombinant gene was efficient to control Sphenophorus levis (Coleopteran). / Doutor