Made available in DSpace on 2016-07-18T17:53:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Francijane Ferreira Paixao.pdf: 342552 bytes, checksum: 6c3ba89009e18cc2c819a6a07ee738d6 (MD5) Previous issue date: 2014-03-27 / This study aimed to evaluate the possible genotoxic effects of supplementation with capsiate extracted Pepper Capsicum annuum (sweet pepper), and the phenolic compound resveratrol extracted from grapes in Wistar rats by the micronucleus test in bone marrow. Sixty-four male rats, adult Wistar were divided into four groups (n = 16) and supplemented with: negative control group (GCN) - 0.5 ml of sodium chloride 0.9%; positive control group (GCP) - 50mg/kg cyclophosphamide; capsiate group (CG) - capsiate 10mg/kg diluted in 0.5 mL of 0.9% sodium chloride; resveratrol group (GR) - resveratrol 30mg/kg diluted in 0.5 mL of 0.9% sodium chloride. Only the PCM received intraperitoneal administration. The other groups were supplemented by gavage once a day for six weeks. At the end of six weeks the animals were anesthetized, sacrificed and the micronucleus test performed in bone marrow. The frequency of micronuclei in polychromatic erythrocytes of the BCM, PCM, GC and GR were 2.5, respectively, ± 0.53, 5.7 ± 1.03, 2.5 ± 0.73 and 2 ± 0.73 in a thousand cells. When comparing both groups there was statistically significant difference only GCP compared to other groups. It is concluded that supplementation at a dose of 10mg/kg capsiate and resveratrol at a dose of 30mg/Kg in daily frequency for 06 weeks did not produce genotoxicity in Wistar rats. / Este estudo teve como objetivo avaliar os possíveis efeitos genotóxicos da suplementação com o capsiate, extraído da pimenta Capsicum annuum (pimenta doce), e do composto fenólico resveratrol, extraído de uvas, em ratos Wistar através do teste de micronúcleo em medula óssea. Sessenta e quatro ratos machos, adultos de linhagem Wistar, foram distribuídos em quatro grupos (n=16) e suplementados com: grupo controle negativo (GCN)- 0,5ml de solução de cloreto de sódio 0,9%; grupo controle positivo (GCP)- 50mg/kg de ciclofosfamida; grupo capsiate (GC)- 10mg/kg de capsiate diluído em 0,5 mL de solução de cloreto de sódio 0,9%; grupo resveratrol (GR)- 30mg/kg de resveratrol diluído em 0,5 mL de solução de cloreto de sódio 0,9%. Somente o GCP recebeu a administração por via intraperitoneal. Os demais grupos foram suplementados por gavagem uma vez ao dia, durante seis semanas. Ao final das seis semanas os animais foram anestesiados, sacrificados e realizado o teste de micronúcleo em medula óssea. A frequência de micronúcleos em eritrócitos policromáticos do GCN, GCP, GC e GR foram, respectivamente, 2,5±0,53, 5,7±1,03, 2,5±0,73 e 2±0,73 em mil células. Na comparação entre os grupos observou-se diferença estatística significativa somente do GCP em relação aos demais grupos. Conclui-se que a suplementação de capsiate na dose de 10mg/Kg e resveratrol na dose de 30mg/Kg, em frequência diária, durante 06 semana, não produziu genotoxicidade em ratos Wistar.

El control traduccional y la traducción selectiva de algunos mRNA representan un mecanismo regulador de las células para adaptarse a diversas condiciones fisiológicas y de estrés ambiental. En Saccharomyces cerevisiae la activación de la ruta de control traduccional GCN, cuyo transductor principal es la quinasa Gcn2p, favorece la adaptación a situaciones de estrés por falta de nutrientes. Gcn2p es activada por tRNA descargados durante condiciones de ayuno de aminoácidos. Gcn2p fosforila eIF2¿ (Sui2p) en ser51 y esto inhibe la traducción general de los mRNA, al mismo tiempo que permite la traducción selectiva de determinados mRNA que son necesarios para la supervivencia celular. Uno de ellos es el mRNA de GCN4, un factor de transcripción que regula genes de biosíntesis de amino ácidos entre otros. El pH intracelular modula la actividad de muchos sistemas celulares, pero los mecanismos de regulación y de percepción son en su mayoría desconocidos. Previamente en el grupo se ha identificado dos genes de S. cerevisiae importantes para la tolerancia a la acidificación intracelular causada por ácidos débiles permeables: LEU2 y GCN2. En la presente tesis se ha comprobado que LEU2, funciona eliminando la dependencia de la absorción de leucina extracelular en cepas con auxotrofia para este aminoácido. Además, se ha profundizado en los mecanismos moleculares por los cuales Gcn2p responde a pH ácido intracelular. La acidificación intracelular activa Gcn2p probablemente por la inhibición de las aminoacil-tRNA sintetasas porque se observa la acumulación de tRNAleu descargados en condiciones sin ayuno de leucina. Gcn2p es requerida para el transporte de leucina y un mutante nulo gcn2¿ es sensible al estrés ácido sí es auxótrofo para leucina y Gcn4p no se requiere para la tolerancia a ácido. Además un mutante ser51>ala en eIF2¿ es sensible a ácido, lo que sugiere que Gcn2p, mediante la fosforilación de eIF2¿, puede activar la traducción de un regulador desconocido de transportadores de aminoácidos distinto de Gcn4p. En relación al estrés genotóxico, evidencias previas muestran que Gcn2p está implicado en el control del ciclo celular en respuesta a daño al DNA regulando la transición de fase G1-S. Pero, ¿cómo ocurre esta respuesta de Gcn2p y qué efectores están implicados? Hemos descubierto que distintos agentes lesionantes del DNA activan la quinasa Gcn2p, entre ellos el agente alquilante MMS. Todos ellos de algún modo generan estrés replicativo. La caracterización genética con los mutantes de la ruta GCN muestra que Gcn1p/Gcn20p están implicados en la fosforilación de eIF2¿ por Gcn2p en respuesta a MMS. Además Gcn1p y Gcn2p puede tener un papel relacionado con la toxicidad por MMS independientemente del control traduccional. El rastreo de diversas proteínas de control de daño y/o de reparación del DNA muestra que las proteínas Xrs2p, Tel1p y Mag1p se requieren para la activación de Gcn2p provocada por MMS. Las dos primeras, actúan en una ruta de señalización y control de daño donde el complejo MRX es independiente del control traduccional. La activación de Gcn2p también es dependiente de la proteína de reparación codificada por MAG1 (3-metiladenina DNA glicosilasa), la cuál es necesaria para la reparación del DNA debido a daño causado por agentes alquilantes como MMS. En la respuesta a MMS mediada por el control traduccional parece estar implicado el complejo epistático RAD52. Por lo tanto, Gcn2p está conectado funcionalmente con la maquinaria de reparación y/o control de daño en el DNA. La activación de Gcn2p por MMS está mediada por la inhibición de ciertas aminoacil-tRNA sintetasas. De ellas, parece tener un papel relevante Frs2p, la subunidad ¿ de la fenilalanil-tRNA sintetasa citosólica. / Aparicio Sanchis, R. (2014). Nuevas funciones de Gcn2p en respuesta a estrés ácido y genotóxico [Tesis doctoral]. Editorial Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/36067

Submitted by Marcos Anselmo (marcos.anselmo@unipampa.edu.br) on 2017-06-12T14:17:48Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) JONATHALINE APOLLO DUARTE.pdf: 1033426 bytes, checksum: 65249cf69187d253ce4462e7152ce8db (MD5) / Approved for entry into archive by Marcos Anselmo (marcos.anselmo@unipampa.edu.br) on 2017-06-12T14:18:00Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) JONATHALINE APOLLO DUARTE.pdf: 1033426 bytes, checksum: 65249cf69187d253ce4462e7152ce8db (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-12T14:18:00Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) JONATHALINE APOLLO DUARTE.pdf: 1033426 bytes, checksum: 65249cf69187d253ce4462e7152ce8db (MD5) Previous issue date: 2016 / O emprego de produtos naturais para o tratamento, cura ou prevenção de doenças pela população é datada desde os tempos mais remotos, e apesar dos inúmeros avanços na ciência, o uso de plantas com finalidade medicinal, ainda representa na maioria das vezes o único recurso terapêutico de muitas comunidades e de diversos grupos étnicos.Atualmente é possível verificarmos que apesar de todos os avanços nas indústrias farmacêuticas para a produção de fármacos sintéticos, a população ainda recorre às plantas medicinais.Entretanto, existe uma infinidade de plantas que ainda não são conhecidos os seus possíveis efeitos farmacológicos e/ou toxicológico. Diante desse contexto, a Schinus molle L. (Anacardiaceae), popularmente conhecida como anacauíta, é uma planta rica em óleo essencial, a qual vem sendo usada como uma opção de tratamento para diversas enfermidades, e apesar de seu amplo emprego na medicina popular, a literatura carece de informações voltadas para seu perfil imutoxicologico. Assim, investigouse os efeitos do óleo essencial frente a parâmetros citotóxico, mutagênico e genotoxico em cultura de linfócitos e macrófagos humanos. Inicialmente, determinaramse as DL50 para ambas as células estudadas, através do teste de proliferação celular, para então desenvolver os demais testes. As DL50 encontradas foram de 30.07μg/mL para linfócitos humanos e de 42.07μg/mL para macrófagos humanos, assim, foram definidas as concentrações a serem testadas, sendo essas DL50, DL50/10, DL50/100, DL50/1000 e DL50/10000 para as células em questão, e foi constatado que o óleo essencial foi capaz de promover citotoxicidade em concentrações superiores a DL50/1000, para ambas as células testadas. Entretanto, o mesmo proporciona efeito genotóxico em culturas de macrófagos, somente para as duas concentrações maiores e quando avaliado os frente a parâmetros mutagênicos, constatouse que, o mesmo não promove alterações cromossômicas assim como, também não alterou o índice de divisão celular, embora tenha sido capaz de proporcionar frequência de micronúcleo concentração dependente nos macrófagos. Contudo, é importante salientar a importância de conhecimento dos constituintes do óleo essencial da Schinus molle L., para maiores esclarecimentos referente a sua toxicidade, uma vez que, essa planta é amplamente empregada na medicina popular para as diversas finalidades. Dessa forma, os resultados encontrados nesse trabalho, tem a contribuir com a literatura. Para tanto, estudos complementares são necessários para auxiliar na construção completa do perfil toxicológico do óleo essencial da planta em estudo, buscando a segurança da população que a utiliza. / The use of natural products for the treatment, cure or prevention of disease by population is dated from the earliest times, and despite the numerous advances in science, the use of plants for medicinal purposes, yet is most often the only therapeutic resource many communities and various ethnic groups. It is currently possible to see that despite all the advances in the pharmaceutical industry for the production of synthetic drugs, people still make use of medicinal plants. However, there is a multitude of plants that are not yet known its possible pharmacological effects and / or toxicology. In this context, the Schinus molle L.(Anacardiaceae), popularly known as anacauíta, is a plant rich in essential oil, which has been used as a treatment option for various diseases, and despite its widespread use in therapy, the literature lacks information geared to your immunotoxicology profile. Thus, we investigated the effects of essential oil cytotoxic front parameters, mutagenic and genotoxic in cultured human lymphocytes and macrophages. Initially, the LD50 were determined for both the cells studied by the cell proliferation assay, and then to develop other tests. The LD50 was found to 30.07μg/ml for human lymphocytes and 42.07μg/ml for human macrophages, thus the concentrations to be tested have been identified and these LD50, LD50/10, LD50/100 LD50/1000 and LD50/10000 to the cells in question, and it was found that the essential oil was able to promote cytotoxicity at concentrations above LD50/1000, for both test cells, however, it provides genotoxic effects in macrophage cultures, only the two concentrations and larger when measured against the mutagens parameters, it was found that it does not promote chromosomal abnormalities as well as, did not alter the rate of cell division, although it was able to provide frequency micronucleus concentration dependent on macrophages. However, it is important to stress the importance of knowledge of essential oil constituents of Schinus molle L., for further information regarding its toxicity, since this plant is widely used in folk medicine for a variety of purposes. Thus, the results found in this work, is to contribute to the literature. Therefore, further studies are needed to help complete construction of the toxicological profile of the essential oil of the plant under study, seeking the safety of the population makes use of this. / Schinus molle L

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Species of the genus Psychotria L. are used in Brazilian folk medicine as tea, however, their indiscriminate and uncontrolled can cause more harm than good to health. It is important to understand these plants, from their cellular levels to the action on living organisms, and for monitoring toxic substances allelopathic bioassays are widely used with plant species as the target organisms. This study aimed to evaluate the genotoxic, antiproliferative and antimutagenic potential of infusions of Psychotria brachypoda (Muell. Arg.) Briton and Psychotria birotula Smith & Downs on the cell cycle of Allium cepa L., in addition to analyzing the antiproliferative and genotoxic potential on the germination on seeds and cell cycle of Eruca sativa Mill. For this, dried leaves were used to prepare extracts in two concentrations for each species: 5g.L-1 and 20g.L-1, using distilled water as a negative control and glyphosate 3% as a positive control. For the study, antiproliferative on the germination (allelopathic potential) variables were analyzed: total number of germinated seeds, seedling root length, index of germination rate, and germination percentage. To evaluate the genotoxic, antiproliferative and antimutagenic potential, both for the test with A. cepa and with E. sativa were analyzed mitotic index and the number of chromosomal alterations. The extracts of P. brachypoda have no genotoxic potential, though the extracts of P. birotula possess genotoxic potential on the A. cepa cell cycle and the extracts of P. brachypoda and P. birotula showed no antimutagenic potential, no entanto, apresentaram genotoxic, and antiproliferative potential on the germination and cell cycle E. sativa. / Espécies do gênero Psychotria L. são utilizadas na medicina popular brasileira, na forma de chá, porém, o uso indiscriminado e sem controle pode causar mais danos à saúde do que benefícios, sendo importante o conhecimento dessas plantas, desde os níveis celulares bem como a ação sobre os organismos vivos. Para monitorar substâncias tóxicas e alelopáticas são muito utilizados ensaios biológicos com espécies vegetais como organismos alvo. O presente trabalho objetivou avaliar o potencial antiproliferativo, genotóxico e antimutagênico de extratos das folhas de Psychotria brachypoda (Müll. Arg.) Briton e Psychotria birotula Smith & Downs sobre o ciclo celular de Allium cepa L., além do potencial antiproliferativo e genotóxico sobre a germinação de sementes e ciclo celular de Eruca sativa Mill. Para isto, foram utilizadas folhas secas para preparar extratos em duas concentrações para cada espécie: 5g.L-1 e 20g.L-1, sendo utilizada água destilada como controle negativo e o glifosato 3% como controle positivo. Para a análise do potencial antiproliferativo sobre a germinação (potencial alelopático) analisou-se as variáveis: número total de sementes germinadas, comprimento das raízes das plântulas, índice da velocidade de germinação e porcentagem de germinação. Para avaliação do potencial genotóxico, antiproliferativo e antimutagênico sobre o ciclo celular, tanto para o teste com A. cepa quanto com E. sativa foram analisados o índice mitótico e o número de alterações cromossômicas. Os extratos de P. brachypoda não apresentaram potencial genotóxico, já os extratos de P. birotula foram genotóxicos sobre o ciclo celular de A. cepa. Os extratos de P. brachypoda e P. birotula não apresentaram potencial antimutagênico, no entanto, demonstraram potencial antiproliferativo genotóxico sobre germinação e ciclo celular de E. sativa.

Submitted by Clebson Anjos (clebson.leandro54@gmail.com) on 2016-03-29T17:10:43Z No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 2083408 bytes, checksum: 7c334abdd8d37a59afd17254476fe905 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-29T17:10:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 2083408 bytes, checksum: 7c334abdd8d37a59afd17254476fe905 (MD5) Previous issue date: 2015-02-06 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The increasing resistance of micro-oganismos pathogens to existing antimicrobial market has driven the search for new therapeutic alternatives, such as natural herbal products belonging to various families of the plant kingdom, such as Asteraceae, which are presented as a viable solution due to the low cost and easy access of the population. However, the search for compounds derived from plants with pharmacological property must always be attached to toxicological studies in order to show the absence of these substances harm to the human body. Based on these premissias, pharmacological and toxicological effects of the ethanol extract (EPC), chloroform phase (FPC) and 5,7,4'-trimethoxyflavone (TMF) from Praxelis clematidea were studied. For the realization of in vitro antimicrobials studies was used the microdilution test with different fungal and bacterial strains. In carrying out studies of antioxidant activity and cytotoxicity was used human erythrocytes obtained from the blood bank of the University Hospital Lauro Wanderley. In acute toxicity studies and genotoxicity was used Swiss mice derived from the Vivarium Thomas George / UFPB. The experiments of antimicrobial activity revealed that EPC and FPC promoted an antifungal effect against Candida species, suggesting that both have secondary metabolites active against fungi. The TMF, major compound isolated from FPC, promoted an antibacterial effect against gram positive and gram negative species, with minimum inhibitory concentration (MIC) of 128 ug / mL and antifungal effect against different Candida species. The MIC TMF was 32 ug / ml for the strains of Candida krusei. With regard to the strains of Candida albicans, both the MIC and the minimum fungicidal concentration (MFC) was 64 ug / mL, combined with it, this involved the action antifungal effect on the cell wall and the plasma membrane of this species studied fungus. In addition, TMF caused decreased erythrocyte damage both by the exposure of hydrogen peroxide, as the osmotic change and showed an antioxidant effect against methemoglobin formation in erythrocytes. The TMF showed low theoretical toxicity and good oral bioavailability by in silico analysis. These data were confirmed by analyzing the cytotoxicity against erythrocytes, which showed hemolysis values below 10% for all blood types tested. In the evaluation of acute toxicity after oral administration of TMF (300 mg/kg), it can be seen that the test compound did not induce behavioral changes in mice and only alter feed intake of animals treated without altering body weight, organ weights and parameters biochemical and hematological evaluated. The analysis of the genotoxic potential of TMF showed that this metabolite was not able to damage the DNA of cells of the peripheral blood of treated animals. In conclusion, these results suggest that the EPC FPC and TMF have antimicrobial effect and which also has the flavonoid antioxidant effect with low cytotoxicity potency, toxicology and genotoxicity. / O aumento da resistência dos micro-oganismos patógenos aos antimicrobianos existentes no mercado tem impulsionado a busca de novas alternativas terapêuticas, como os produtos naturais a base de plantas pertencentes a várias famílias do reino vegetal, como por exemplo a Asteraceae, que se apresentam como uma solução viável devido ao baixo custo e fácil acesso da população. No entanto, a pesquisa de compostos derivados de plantas com propriedade farmacológica deve sempre ser unida aos estudos toxicológicos, afim de se comprovar a ausência de malefícios destas substâncias ao organismo humano. Com base nessas premissias, foram estudados os efeitos farmacológicos e toxicológicos do extrato etanólico (EPC), fase clorofórmica (FPC) e 5,7,4’-trimetoxiflavona (TMF) provenientes de Praxelis clematidea. Para a realização dos estudos antimicrobianos in vitro utilizou-se o teste de microdiluição com diferentes cepas fúngicas e bacterianas. Na realização dos estudos de atividade antioxidante e citotoxicidade utilizou-se hemácias humanas obtidas do banco de sangue do Hospital Universitário Lauro Wanderley. Nos estudos de toxicidade aguda e de genotoxicidade utilizou-se camundongos Swiss oriundos do Biotério Thomas George/UFPB. Os experimentos de atividade antimicrobiana revelaram que EPC e FPC promoveram um efeito antifúngico contra espécies do gênero Candida, sugerindo que ambos possuem metabólitos secundários ativos contra fungos. O TMF, composto majoritário isolado de FPC, promoveu um efeito antibacteriano contra espécies gram positivas e gram negativas, com concentração inibitória mínima (CIM) de 128 μg/mL e efeito antifúngico contra diferentes espécies do gênero Candida. A CIM do TMF foi 32 μg/mL para as cepas de Candida krusei. Com relação às cepas de Candida albicans, tanto a CIM como a concentração fungicida minima (CFM) foram 64 μg/mL, aliado a isso, este efeito antifúngico envolveu a ação sobre a parede celular e a membrana plasmática desta espécie de fungo estudada. Além disso, o TMF diminuiu os danos eritrocitários causados tanto pela exposição do peróxido de hidrogênio, quanto pela alteração osmótica e apresentou um efeito antioxidante frente a formação de metahemoglobina em hemácias. O TMF demonstrou uma baixa toxicidade teórica, bem como uma boa biodisponibilidade oral através da análise in silico. Estes dados foram confirmados através da análise da citotoxicidade frente a eritrócitos, que revelou valores de hemólise abaixo de 10 % para todos os tipos sanguíneos testados. Na avaliação da toxicidade aguda após a administração oral do TMF (300 mg/kg), pode-se observar que o composto em estudo não induziu alterações comportamentais nos camundongos e apenas alterou o consumo de ração dos animais tratados, sem modificar o peso corporal, peso dos órgãos e os parâmetros bioquímicos e hematológicos avaliados. A análise do potencial genotóxico do TMF revelou que este metabólito não foi capaz de causar danos no DNA das células do sangue periférico dos animais tratados. Em conclusão, estes resultados sugerem que o EPC, a FPC e o TMF apresentam efeito antimicrobiano, e que o flavonoide também possui efeito antioxidante, com baixa potência citotóxica, toxicológica e genotóxica.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2014. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2015-01-22T12:45:03Z No. of bitstreams: 1 2014_WillianMeloJunior.pdf: 2264980 bytes, checksum: 47db4fa2b95a2735926d361be45a79e0 (MD5) / Approved for entry into archive by Ruthléa Nascimento(ruthleanascimento@bce.unb.br) on 2015-02-10T17:04:55Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_WillianMeloJunior.pdf: 2264980 bytes, checksum: 47db4fa2b95a2735926d361be45a79e0 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-02-10T17:04:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_WillianMeloJunior.pdf: 2264980 bytes, checksum: 47db4fa2b95a2735926d361be45a79e0 (MD5) / A bebida psicoativa conhecida como ayahuasca (Banisteriopsis caapi e Psychotria viridis) é um sacramento incorporado a religiões não indígenas oriundas da região amazônica. Essa cocção sagrada tem propriedades de cura alardeadas em rituais xamânicos e um corpo de evidências crescente indica que o uso é seguro no contexto ritualístico. A perspectiva de uso da ayahuasca extrapolando o uso religioso seja em um contexto terapêutico ou recreacional ainda carece de dados pré-clínicos que atestem sua segurança. Esse estudo avaliou os perfis genotóxico, mutagênico, citotóxico e neurocomportamental da ingestão aguda de ayahuasca em ratos Wistar. Os bioensaios realizados foram análise de fragmentação de DNA por citometria de fluxo (CF), Ensaio Cometa (EC), teste do Micronúcleo (MN), análise das séries hematológicas (eritrograma, leucograma e plaquetograma) e avaliação sérica das funções renais, hepática e pancreática. Para avaliação neurocomportamental utilizaram-se os testes de campo aberto, labirinto em cruz elevado e natação forçada, que além de avaliar a locomoção e mobilidade são também modelos preditivos de ação ansiolítica e antidepressiva. Cinqüenta ratos Wistar, de ambos os sexos, foram aleatoriamente distribuídos em cinco grupos experimentais: grupo controle negativo (GC-) que recebeu água filtrada, grupo controle positivo que recebeu doxorrubicina (DOX) e grupos tratados (GT) com diferentes doses de ayahuasca (1X, 5X e 15X a dose ritualística). A observação comportamental mostrou redução da atividade locomotora geral nos testes de campo aberto e labirinto em cruz elevado. No teste de natação forçada, animais tratados do grupo 15X mostraram significativa redução do tempo de flutuação, animais tratados com as doses 1X, 5X e 15X mostraram comportamento ativo do tipo escalada aumentado, sugerindo uma possível ação antidepressiva da infusão. Ayahuasca mostrou baixo potencial genotóxico em doses 1X e 5X, ocorrendo aumento na incidência de eritrócitos micronucleados apenas na dose mais elevada (15X). Além disso, a bebida não mostrou ação citotóxica nas condições testadas e as funções hepática, renal e pancreática se mantiveram sem alterações significativas em todas as doses testadas. Esses resultados indicam que ratos tratados com ayahuasca nas doses até 5X a dose ritualística não apresentaram alterações genotóxicas ou citotóxicas, e o potencial antidepressivo observado é um efeito que deve ser investigado mais detalhadamente. __________________________________________________________________________ ABSTRACT / The psychoactive brew known as ayahuasca (Banisteriopsis caapi and Psychotria viridis) is a sacramental beverage incorporated by non-indigenous religions originated from the Amazon region. This sacred cooking has touted healing properties in shamanic rituals and an increasing body of evidence indicates that its use is safe in ritualistic context. The prospect of use of ayahuasca in a therapeutic context or in a recreational context still lacks of preclinical data about its safety. This study evaluated the genotoxic, mutagenic, cytotoxic and neurobehavioral profiles of ayahuasca. Bioassays were: analysis of DNA fragmentation by flow cytometry (FC), comet assay (CA), the micronucleus test (MN), hematological analysis (erythrogram, leukogram and thrombogram) and serum evaluation of renal, hepatic and pancreatic functions. For neurobehavioral assessment were used the open field test, elevated plus maze test and forced swimming test. These tests evaluate locomotion and mobility as well as are also predictive of anxiolytic and antidepressant action. 50Wistar rats of both sexes were randomly distributed into five experimental groups: negative control group (GC-) that received filtered water, Positive Control Group who received doxorubicin (DOX) and treated groups (GT) with different doses of ayahuasca (1X, 5X and 15X). Behavioral evaluation showed reduction in general locomotor activity in the open field and elevated plus maze tests. In water animals of 15X treated group showed significant reduction in the fluctuation, treated animals of 1X, 5X e 15X showed active behavior like climbing increased, suggesting a possible antidepressive effect. Ayahuasca showed low genotoxic potential at the 1 X and 5X doses; causing increase in the incidence of micronuclei erythrocytes only at the highest dose (15X). In addition, the beverage showed no cytotoxic effect in the tested conditions and hepatic, renal and pancreatic functions remained without significant changes at all tested doses. These results indicate that treated rats with doses up to 5X ritualistic dose showed no genotoxic or cytotoxic changes, and the antidepressant potential observed is an effect that should be investigated further.

Submitted by biblioteca unifenas (biblioteca@unifenas.br) on 2017-08-24T13:10:32Z No. of bitstreams: 1 Carolina Soares Horta de Souza.pdf: 898395 bytes, checksum: 8025b51d63570bf92cd6485289fa3c65 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-24T13:10:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Carolina Soares Horta de Souza.pdf: 898395 bytes, checksum: 8025b51d63570bf92cd6485289fa3c65 (MD5) Previous issue date: 2015-02-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The addition of the food coloring plays an important role in the food industry under the technological point of view. Natural dyes are difficult to navigate in standard products, so we were created synthetic dyes. Among artificial synthetic dyes allowed by law, are those of azo group and its use is one of the most controversial developments in the sector. The use of these substances is still raising a lot of questions as to toxicity, because in the literature, working with this momentum is limited and controversial. In this context, the aim, with this study was to evaluate the genotoxic potential of azo dyes by the micronucleus assay (MN). The MN test is widely used and internationally accepted for evaluation of mutagenic actions. The in vivo genotoxicity test was applied to research observed in erythrocytes Polychromatic (PCE) extracted from the bone marrow of the femur 168 Swiss mice Albinus, male and female, underwent five treatments (N-nitroso-N-ethylurea: control+; 150 mM NaCl: Control–; dye at 1, 1.5 and 2 g.Kg-1) and used four azo dyes (Tartrazine, Sunset Yellow, Red 40, Ponceau 4R) for 24h and 48h (after this time euthanasia was performed). We analyzed also the PCE/NCE ratio, which it is an important marker of cytotoxicity. The data obtained in the MN assay were subjected to analysis of one-way variance (ANOVA) using a factorial scheme of 5 × 2 × 2 (treatment × sex × time), and average compared to Tukey's test (p < 0.05) using SAS® software version 9.3. The dye Tartrazine showed genotoxicity dose- and sex-dependent; Sunset Yellow was genotoxic sex-independent; Red 40, its genotoxicity was dependent on the exposure time and the sex of the animal; the dye Ponceau 4R genotoxicity depends on the dose and time until euthanasia. However, it can be concluded that studies of these food additives often must be performed in order to constantly update data that are safe for consumption, since all four dyes tested in this study showed some degree of toxicity. Recalling that they have the use regulated by specific legislation establishing the Maximum Allowable Limits (LMP) and patterns of Acceptable Daily Intake for humans, extrapolated to animals. However, despite the control required by regulatory agencies, the use of dyes in food continues to raise a number of questions, mainly due to lack of studies evaluating the toxicity of these compounds which reinforces the attention they should be given. / A adição de corantes em alimentos e rações assume papel importante na indústria alimentícia sob o ponto de vista tecnológico. Corantes naturais são difíceis de serem utilizados em produtos padronizados, portanto, foram criados corantes sintéticos. Dentre os corantes sintéticos artificiais permitidos por lei, estão aqueles do grupo Azo e seu uso é um dos avanços mais controversos no setor. A utilização destas substâncias continua levantando uma série de dúvidas quanto à toxicidade, uma vez que, na literatura, trabalhos com esse ímpeto são escassos e controversos. Neste contexto, objetivou-se, com este trabalho, avaliar o potencial genotóxico de corantes azóicos através do ensaio de micronúcleo (MN). O teste do MN é amplamente utilizado e aceito internacionalmente para avaliação de ações mutagênicas. O teste in vivo foi aplicado para investigação de genotoxicidade observada em Eritrócitos Policromáticos (PCE) extraídos da medula óssea do fêmur de 168 camundongos Swiss albinus, machos e fêmeas, submetidos a cinco tratamentos (N-Nitroso-N-etilureia: controle+; 150 mM NaCl: controle–; corante a 1, 1,5 e 2 g.Kg-1), sendo utilizados quatro corantes azóicos (Tartrazina, Amarelo Crepúsculo, Vermelho 40, Ponceau 4R) nos tempos de 24h e 48h (após estes períodos foi executada eutanásia). Foi analisada também a relação PCE/NCE, cujo se trata de um importante biomarcador de citotoxicidade. Os dados obtidos no ensaio de MN foram submetidos à análise de variância (ANOVA), utilizando um esquema fatorial de 5 × 2 × 2 (tratamento × sexo × tempo), e comparação das médias pelo teste de Tukey (p < 0,05) usando o programa computacional SAS® versão 9.3. O corante Tartrazina apresentou genotoxicidade dose e sexo dependentes; Amarelo Crepúsculo foi genotóxico independente do sexo; Vermelho 40, a sua genotoxicidade foi dependente do tempo de exposição e do sexo do animal; a genotoxicidade do corante Ponceau 4R foi dependente da dose administrada e do tempo até a eutanásia. Contudo, pode-se concluir que estudos envolvendo estes aditivos alimentares devem ser realizados frequentemente com a finalidade de atualização constante de dados que ofereçam segurança para seu consumo, uma vez que todos os quatro corantes testados nesta pesquisa apresentaram algum grau de toxicidade. Lembrando que os mesmos possuem o uso regulamentado por legislação específica, que estabelece os Limites Máximos Permitidos (LMP) e padrões de Ingestão Diária Aceitável por humanos, extrapolados para animais. Porém, apesar do controle exigido pelas agências reguladoras, a utilização de corantes em alimentos continua levantando uma série de dúvidas, principalmente devido a escassez de trabalhos avaliando a toxicidade destes compostos o que reforça a atenção que lhes deve ser conferida.

Muitos genes têm sido indicados como responsivos ao estresse genotóxico, mas devido à necessidade de validação, a busca por marcadores gênicos continua. Vários genes são relacionados ao sistema ubiquitina-proteassomo (UPS), o qual é responsável pela remoção seletiva de proteínas, sendo que falhas no UPS têm sido relacionadas a doenças neurodegenerativas e ao câncer. Assim, o presente trabalho teve como objetivo a busca e confirmação de marcadores gênicos de resposta ao estresse genotóxico, por meio do estudo da expressão transcricional e protéica dos genes ERN1, EIF2AK3, GADD153 e TRAF2, visando à confirmação das respostas em linhagens de fibroblastos (GM07492A e AS405) e de glioblastoma (U87MG), sob tratamentos com peróxido de hidrogênio (H2O2) e Bleomicina (Blm). Foram utilizados o Ensaio Cometa, a análise de expressão gênica transcricional por qPCR em tempo real e de expressão gênica ao nível protéico (imunofluorescência). Os resultados mostraram que os tratamentos empregados foram capazes de induzir danos no DNA, sendo que a sensibilidade ao tratamento e a capacidade de recuperação das linhagens foi variável dependendo do agente testado. A análise de expressão gênica mostrou que GM07492A apresentou indução dos genes ERN1 e GADD153 após tratamento com H2O2 (resposta precoce, zero e 2 h) e Blm (durante todo pós-tratamento). A linhagem AS405 exibiu indução de ERN1 e GADD153 para H2O2, enquanto que para Blm foram induzidos os genes EIF2AK3 e GADD153. Para U87MG, a indução de EIF2AK3 pelo H2O2 ocorreu de modo tardio, enquanto GADD153 mostrou-se induzido após ambos os tratamentos. A proteína ERN1 apresentou expressão discreta e pontual, inclusive nos pontos onde não houve indução transcricional, indicando uma expressão basal. Essa proteína se expressou em GM07492A no tratamento com Blm em zero hora, diferentemente de AS405. Para U87MG tratada com H2O2 observou-se discreta expressão de ERN1, sendo mais evidente para Blm. Quanto à proteína GADD153, esta foi expressa em fibroblastos nos vários tempos analisados. No entanto, U87MG mostrou expressão nuclear apenas nas células tratadas, sendo mais evidente para H2O2 comparativamente à Blm. Assim, as alterações observadas nos perfis de expressão gênica são compatíveis com a indução de danos no DNA, indicando o envolvimento de genes do UPS nas respostas celulares ao estresse genotóxico. Em conjunto, os resultados estimulam uma avaliação mais detalhada desses genes como marcadores de resposta ao estresse e evidencia a sua importância no cenário da via UPS. / Many genes have been reported as responsive to genotoxic stress, but due to the need of validation, the search for genetic markers still continues. Several genes are related to the ubiquitin-proteasome system (UPS), which is responsible for the selective removal of proteins, and UPS failures have been associated to neurodegenerative diseases and cancer. Thus, this study aimed the search and confirmation of genetic markers that were responsive to genotoxic stress. For this, we evaluated the transcriptional or protein expression of the genes ERN1, EIF2AK3, GADD153 and TRAF2, seeking confirmation of responses in fibroblast cell lines (GM07492A and AS405) and glioblastoma (U87MG) under treatment with hydrogen peroxide (H2O2) and bleomycin (BLM). We used the Comet Assay, the transcriptional analysis of gene expression by quantitative real-time PCR and protein expression byimmunofluorescence. The results showed that the treatments employed were able to induce DNA damage, and that cell sensitivity to treatments and recovery capability of cell lines varied according to the tested agent. The gene expression analysis showed that GM07492A presented induction of ERN1 and GADD153 genes after treatment with H2O2 (early response, zero and 2 h) and Blm (throughout the post-treatment). The cell line AS405 showed induction of GADD153 and ERN1 after H2O2, whereas with Blm the genes induced were EIF2AK3 and GADD153. For U87MG, the induction of EIF2AK3 by H2O2 occurred at a later stage, while GADD153 was promptly induced after both treatments. The protein ERN1 showed discreet and punctual expression, even at time point without transcriptional induction, indicating a basal expression. This protein was expressed in GM07492A by treatment with Blm at zero hour, differently of AS405. For U87MG treated with H2O2, ERN1 showed a slight expression, being more evident for Blm. Regarding GADD153, protein expression was observed in fibroblasts at all time point. However, U87MG showed nuclear expression only in cells treated with H2O2, being more evident that in BLM-treated cells. Thus, the observed changes in gene expression profiles are consistent with the induction of DNA damage, which indicates the participation of UPS genes in cellular responses to genotoxic stress. Together, the results encourage further evaluation of these genes as markers of stress response, demonstrating its importance in the UPS acting scope.

Muitos genes têm sido indicados como responsivos ao estresse genotóxico, mas devido à necessidade de validação, a busca por marcadores gênicos continua. Vários genes são relacionados ao sistema ubiquitina-proteassomo (UPS), o qual é responsável pela remoção seletiva de proteínas, sendo que falhas no UPS têm sido relacionadas a doenças neurodegenerativas e ao câncer. Assim, o presente trabalho teve como objetivo a busca e confirmação de marcadores gênicos de resposta ao estresse genotóxico, por meio do estudo da expressão transcricional e protéica dos genes ERN1, EIF2AK3, GADD153 e TRAF2, visando à confirmação das respostas em linhagens de fibroblastos (GM07492A e AS405) e de glioblastoma (U87MG), sob tratamentos com peróxido de hidrogênio (H2O2) e Bleomicina (Blm). Foram utilizados o Ensaio Cometa, a análise de expressão gênica transcricional por qPCR em tempo real e de expressão gênica ao nível protéico (imunofluorescência). Os resultados mostraram que os tratamentos empregados foram capazes de induzir danos no DNA, sendo que a sensibilidade ao tratamento e a capacidade de recuperação das linhagens foi variável dependendo do agente testado. A análise de expressão gênica mostrou que GM07492A apresentou indução dos genes ERN1 e GADD153 após tratamento com H2O2 (resposta precoce, zero e 2 h) e Blm (durante todo pós-tratamento). A linhagem AS405 exibiu indução de ERN1 e GADD153 para H2O2, enquanto que para Blm foram induzidos os genes EIF2AK3 e GADD153. Para U87MG, a indução de EIF2AK3 pelo H2O2 ocorreu de modo tardio, enquanto GADD153 mostrou-se induzido após ambos os tratamentos. A proteína ERN1 apresentou expressão discreta e pontual, inclusive nos pontos onde não houve indução transcricional, indicando uma expressão basal. Essa proteína se expressou em GM07492A no tratamento com Blm em zero hora, diferentemente de AS405. Para U87MG tratada com H2O2 observou-se discreta expressão de ERN1, sendo mais evidente para Blm. Quanto à proteína GADD153, esta foi expressa em fibroblastos nos vários tempos analisados. No entanto, U87MG mostrou expressão nuclear apenas nas células tratadas, sendo mais evidente para H2O2 comparativamente à Blm. Assim, as alterações observadas nos perfis de expressão gênica são compatíveis com a indução de danos no DNA, indicando o envolvimento de genes do UPS nas respostas celulares ao estresse genotóxico. Em conjunto, os resultados estimulam uma avaliação mais detalhada desses genes como marcadores de resposta ao estresse e evidencia a sua importância no cenário da via UPS. / Many genes have been reported as responsive to genotoxic stress, but due to the need of validation, the search for genetic markers still continues. Several genes are related to the ubiquitin-proteasome system (UPS), which is responsible for the selective removal of proteins, and UPS failures have been associated to neurodegenerative diseases and cancer. Thus, this study aimed the search and confirmation of genetic markers that were responsive to genotoxic stress. For this, we evaluated the transcriptional or protein expression of the genes ERN1, EIF2AK3, GADD153 and TRAF2, seeking confirmation of responses in fibroblast cell lines (GM07492A and AS405) and glioblastoma (U87MG) under treatment with hydrogen peroxide (H2O2) and bleomycin (BLM). We used the Comet Assay, the transcriptional analysis of gene expression by quantitative real-time PCR and protein expression byimmunofluorescence. The results showed that the treatments employed were able to induce DNA damage, and that cell sensitivity to treatments and recovery capability of cell lines varied according to the tested agent. The gene expression analysis showed that GM07492A presented induction of ERN1 and GADD153 genes after treatment with H2O2 (early response, zero and 2 h) and Blm (throughout the post-treatment). The cell line AS405 showed induction of GADD153 and ERN1 after H2O2, whereas with Blm the genes induced were EIF2AK3 and GADD153. For U87MG, the induction of EIF2AK3 by H2O2 occurred at a later stage, while GADD153 was promptly induced after both treatments. The protein ERN1 showed discreet and punctual expression, even at time point without transcriptional induction, indicating a basal expression. This protein was expressed in GM07492A by treatment with Blm at zero hour, differently of AS405. For U87MG treated with H2O2, ERN1 showed a slight expression, being more evident for Blm. Regarding GADD153, protein expression was observed in fibroblasts at all time point. However, U87MG showed nuclear expression only in cells treated with H2O2, being more evident that in BLM-treated cells. Thus, the observed changes in gene expression profiles are consistent with the induction of DNA damage, which indicates the participation of UPS genes in cellular responses to genotoxic stress. Together, the results encourage further evaluation of these genes as markers of stress response, demonstrating its importance in the UPS acting scope.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:16:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Aliny pereira.pdf: 3649782 bytes, checksum: 3c890c86afafa7051e9fcb35ec9cd8b8 (MD5) Previous issue date: 2010-01-29 / Current inorganic drugs such cisplatin and related compounds widely used in the treatment cancer, however its application is limited by its severe toxicity and drug resistence. These limitations have prompted a search for news metal-based antitumor agents. Ruthenium (III) complexes represent a new family of promising metal-based anticancer drugs. In the present study, was investigated in vitro the effects of the compound on cell viability, cintetics cell cycle phases, mechanisms of apoptosis and DNA damage on tumors cells. Results of the viability using MTT reduction test and the trypan blue exclusion assay on K-562 cells revealed that this compound significantly reduced the viability of the K-562 tumors cells (IC50 approximately 10.74 and 73.45 &#956;M), respectively, moreover viability assays on A549 lung tumor cells showed that cis-(dichloro)tetrammineruthenium(III) induced effect moderate this cell lines (IC50 > 383 &#956;M). Additionally was observed that this compound exhibits little cytotoxicity towards MRC-5 normal human fibroblast cells (IC50 > 383 &#956;M) when compared to K562 tumor cell line (IC50 10.74 &#956;M). Clonogenic Assay was performed on A549 cells, and observed that lower concentrations (0.38 and 3.8 &#956;M) cis-(dichloro)tetrammineruthenium(III) diminished colony forming ability and highest concentrations (95 and 383 &#956;M) no colony was observed. In cell cycle analysis on K-562 and S180 tumor cells cistetrammineruthenium( III) induced change in the distribution the cell cycle phase since that % of cells entering G1, S and G2 was decreased, correlating with increase in the proportion of cells in the sub-G1-peak (indicating apoptosis). In the analysis of damage to the DNA molecule of S180 cells using the comet assay, it was observed that the ruthenium compound induced damage to the DNA molecule to both treatments (24 and 48 h) as evidenced by an increase in damage index. In addition, cis-[RuCl2(NH3)4]Cl treatment induced apoptosis in cells K-562 as evidenced for increased DNA content in the sub-G1 peak (75.35%) and a significant increase in caspase-3, 8 and 9 activity. In tumor cells S180 the apoptosis was demonstrated for by a increase numbers of Annexin V-positive cells and fragmentation DNA. Taken together, these findings strongly demonstrate that cis-[RuCl2(NH3)4]Cl exerts antitumor activity and this activity correlates with DNA damage, process apoptotic and change cell cycle. / Atualmente drogas inorgânicas como cisplatina e compostos relacionados são amplamente utilizados no tratamento do câncer, no entanto a aplicação destas drogas é limitada devido a severa toxicidade e resistência. Estas limitações têm promovido o desenvolvimento de novos agentes antitumorais baseados em metais que sejam mais eficazes. Dentre os vários complexos a base de metais desenvolvidos, complexos de rutênio (III) representam uma nova família de promissores agentes anticâncer. No presente estudo foi investigado in vitro o efeito do composto cis-tetraaminodiclororutênio(III) sobre a viabilidade celular, cinética das fases do ciclo celular, mecanismos de indução de apoptose e danos a molécula de DNA. Os resultados de viabilidade celular utilizando os ensaios de redução do MTT e azul de tripano sobre células leucêmicas K-562 demonstrou que o composto reduziu significativamente a viabilidade celular (IC50 aproximadamente 10.74 e 73.45 &#956;M), respectivamente, por outro lado, a viabilidade celular de células tumorais de pulmão A549 foi pouco afetada após tratamento com cis-tetraaminodiclororutênio(III) (IC50 > 383 &#956;M). Adicionalmente, foi observado que cis-tetraaminodiclororutênio(III) exibiu uma moderada citotoxicidade sobre células normais de fibroblasto humano MRC-5 (IC50 > 383 &#956;M) quando comparado a linhagem tumoral K-562 (10.74 e 73.45 &#956;M) O ensaio clonogênico foi realizado em células tumorais A549, e por meio dos resultados obtidos verificou-se que em baixas concentrações do composto (0,38 e 3,8 &#956;M) houve a diminuição na capacidade das células de formarem colônias e em concentrações elevadas 95 e 383 &#956;M não houve a formação de nenhuma colônia. Na análise do ciclo celular de células tumorais K-562 e S-180, cistetraaminodiclororutênio( III) alterou a distribuição das fases do ciclo celular de ambas as células, visto que a porcentagem de células nas fases G1, S e G2 diminuiu, o qual correlacionou com uma aumento do número de células em sub- G1 (indicativo de apoptose). Na análise de danos a molécula de DNA de células S180 utilizando o ensaio cometa, pôde-se observar que o composto induziu danos à molécula de DNA para ambos os tratamentos (24 e 48 h) como evidenciado por um aumento do índice de dano. Além disto, o tratamento com cistetraaminodiclororutênio( III) levou a indução de apoptose nas células S180 como evidenciado pelo aumento no número de células Anexina positiva. Em células K562 a indução de apoptose após tratamento com o composto foi demonstrado pelo aumento no conteúdo de DNA em picos sub-G1 (75,35%) e um aumento na atividade de caspase 3, 8 e 9. Estes dados em conjunto demonstraram que o composto cis-tetraaminodiclororutênio(III) apresentou efeito citotóxico frente as linhagens testadas e esta atividade está correlacionada com danos à molécula de DNA, alterações nas fases do ciclo celular e indução de apoptose.