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Participação do parotin sobre o metabolismo lipidico de ratos normais e diabeticos : estudo "in vitro" e "in vivo"Guimarães, Alcides, 1945- 16 July 2018 (has links)
Acompanha memorial / Tese (livre-docencia) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-07-16T13:30:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1
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Previous issue date: 1982 / Resumo: Este trabalho foi realizado com o objetivo de estudar os possíveis efeitos do princípio ativo das glândulas sa livares (Parotin) sobre o metabolismo lipídico de ratos normais e diabéticos. Foram utilizados 48 ratos machos (Rattus norvégicus, albinus , Wistar), com 3 meses de idade, pesando em media 220 gramas. A parte experimental foi desenvolvida em dois modelos: 1, Estudo "In Vitro" - de te rminação do glicerol ; 2. Estudo "In Vivo" - determinação dos ácidos graxos livres. Para o estudo "In Vitro", foram utilizados 24 animais, distribuídos em 2 Grupos: Grupo I - Controle - 12 animais; Grupo II - Diabéticos Experimentais -12 animais. Tanto para o Grupo I como para o Grupo II foi utilizado o tecido gorduroso da cabeça do epidídimo, incubado em frascos de Warburg para agitação, nos seguintes meios biológicos: TKRF + insulina; TKRF + Parotin; TKRF + Parotin + insulina; TKRF + adrenalina; TKRF + adrenalina + Parotin; TKRF + b drenalina + insulina e TKRF. Após agitação por 60 minutos, o glicerol liberado pelo tecido adiposo foi dosado pelo método de KORN (1954). Para o estudo "In Vivo", foram utilizados 24 animais distribuídos em 4 Grupos: Grupo I - Controle - 6 animais; Grupo II - Diabéticos - 6 animais; Grupo III- Diabéticos + insulina - 6 animais; Grupo IV - Diabéticos + Parotin - 6 animais, Nos animais dos 4 grupos experimentais foram realizadas dosagens de ácidos graxos livres (método de DOLE & MEINERTZ ,1960) e de glicose (método da ortotoluidina) nos i ntervalos de tempo de 0, 4, 8, 12, 24 e 32 horas. Nas condições experimentais utilizadas, verificou-se que o Parotin promoveu diminuição na concentração de glicerol para o meio de incubação e diminuição da lipólise, com menor liberação de ácidos graxos livres para o plasma, da mesma forma que a insulina. Entretanto, a associação insulina + Parotin, não mostrou ser efetiva na diminuição da liberação de glicerol para o meio de incubação / Abstract: Not informed / Tese (livre-docencia) - Univer / Fisiologia e Biofisica do Sistema Estomatognatico / Livre docente em Odontologia
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Estudio de la saliva por sialometría en personas de la tercera edad institucionalizadas, con y sin xerostomía /Oleiniski, Jose Carlos January 1999 (has links)
Tese (Doutorado) - Universidad Complutense de Madrid, Facultad de Odontologia. / Made available in DSpace on 2012-10-19T01:34:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0
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Alterações genômicas em tumores de glândulas salivaresCoelho, Miriam Marangon [UNESP] 09 December 2009 (has links) (PDF)
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Previous issue date: 2009-12-09Bitstream added on 2014-06-13T18:29:20Z : No. of bitstreams: 1
coelho_mm_me_botib.pdf: 1279286 bytes, checksum: c9db6d651dfd0584937d8d5948869e47 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Os tumores de glândulas salivares (TGS) são lesões raras que apresentam heterogeneidade morfológica e sobreposição histológica entre os vários subtipos de tumores. Neste estudo foi utilizada a técnica de hibridação genômica comparativa de alta resolução (HR-CGH) em 64 amostras de TGS, incluindo: 27 adenomas pleomórficos (AP); 11 tumores de Warthin (TW); seis carcinomas ex-adenomas pleomórficos (CXAP); seis carcinomas adenóides císticos (CAC); quatro carcinomas mucoepidermóides (CME); três carcinomas ductais salivares (CDS); três adenocarcinomas (ACAR); dois oncocitomas (ON) e dois carcinomas epiteliaismioepiteliais (CEM). Destas, 47 amostras eram provenientes de tecidos fixados em formalina e em blocos de parafina (FFEP) e 17 de tecidos a fresco. Após a microdissecção, o DNA genômico foi amplificado e marcado por técnica baseada na PCR (SCOMP) e por nick translation, respectivamente. Os cromossomos foram cariotipados usando a imagem DAPI invertido e a intensidade do sinal de hibridação foi determinada ao longo de cada cromossomo. Uma biblioteca com amostras de DNA normais foi construída para selecionar os limites superiores e inferiores para perdas e ganhos cromossômicos. Em todos os casos, as perdas genômicas foram observadas mais freqüentemente do que os ganhos. Na análise comparativa das regiões mínimas comuns detectadas pela HR-CGH envolvendo todos os tipos tumorais, foram observadas alterações genômicas comuns aos diversos tipos, como também exclusivas para os diferentes tipos histológicos. As regiões genômicas consistentemente alteradas nos dois subgrupos tumorais com maior número amostral (adenomas pleomórficos e tumores de Warthin) foram investigadas em bancos de dados para a seleção de genes candidatos que pudessem estar relacionados com a etiologia destes tumores. Os genes NEDD9 (6p24-p25), PPARG (3p25) e c-MYC (8q24.21) foram... / Salivary gland tumors (SGT) are uncommon lesions showing morphologic heterogeneity and histologic overlap among various tumoral subtypes. In the present study, high resolutioncomparative genomic hybridization (HR-CGH) method was performed in 64 SGT samples, including 27 pleomorphic adenomas (PA), 11 Warthin’s tumors (WT), six carcinoma ex pleomorphic adenoma (CXPA), six cystic adenocarcinomas (CAC), four mucoepidermoid carcinomas (MEC), three salivary ductal carcinomas (SDC), three adenocarcinomas (ACAR), two oncocitomas (ON), and two epithelium-myoepithelium carcinomas (EMC). Among these samples, 47 were formalin-fixed and paraffin embedded tissues and 17 were fresh tissues. After laser capture microdissection (LCM), the DNA samples were amplified and labeled by PCR-based methods (SCOMP) and nick translation reaction, respectively. Chromosomes were karyotyped based on their inverted DAPI image and the relative hybridization signal intensity was determined along each chromosome. A library with differentially labeled normal samples was built to select the superior and inferior limits for chromosomal gains and losses. Genomic losses were more frequently observed than gains. The comparison among all tumor samples showed common chromosomal imbalances and also exclusive genomic alterations related to the different histological tumor types. Non-random genomic regions involved in pleomorphic adenomas and Warthin´s tumors were investigated in databases in order to select candidate genes that could be related to the etiology of these tumors. The NEDD9 (6p24-p25), PPARG (3p25) and c-MYC (8q24.21) genes were selected and the gene transcript levels were evaluated by quantitative real time PCR (qRT-PCR) in PA samples. In accordance to the HR-CGH results, it was observed high transcript levels of NEDD9 in 17 out of 37 PA; low levels of PPARG was detected in 11 out of 36 samples; and high levels... (Complete abstract click electronic access below)
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Contribuição ao estudo sialografico de parotidas clinicamente normais : classificação anatomica e correlação com a função glandularKreich, Eliane Maria 15 April 1996 (has links)
Orientador: Oswaldo Di Hipolito Junior / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-07-21T04:41:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1
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Previous issue date: 1996 / Resumo: O presente estudo teve por finalidade analisar e correlacionar características anatomicas e a atividade funcional de glândulas parótidas saudáveis, empregando técnica sialográfica. O estudo anatomico foi realizado em 55 indivíduos, dos quais 37 participaram do exame funcional, que consistiu na verificação da eliminação da substância de contraste, Lipiodol UF, em glândulas estimuladas e não-estimuladas. Os resultados demonstraram que a análise das imagens sialográficas pela observação do sistema de ductos glandulares permitiu a constituição de 5 grupos anatomicos distintos. Na avaliação funcional, glândulas estimuladas levaram períodos de tempo mais uniformes e curtos para a eliminação do Lipiodol UF, em relação às não-estimuladas. A correlação dos achados anatomicos aos funcionais foi submetida a tratamento estatístico, onde a média do tempo de eliminação da substância de contraste em glândulas estimuladas no Grupo I foi significantemente maior que as dos Grupos II e III ; o tempo máximo para o esvaziamento de glândulas estimuladas foi de 5 minutos, em todos os Grupos, enquanto que as glândulas nãoestimuladas não apresentaram diferença estatística entre os Grupos.
Ao final, foi sugerida a avaliação conjunta do modelo anatomico e da função excretora de glândulas realizada com a
utilização de estímulo / Abstract: The aim of the present study was analyse and correlate anatomic features and the functional activity of healthy parotid glands by a sialographic technic. The anatomic study was performed in 55 subjects, from which, 37 took part in the functional exam, which was to verify the elimination of the contrast substance, Lipiodol UF, in stimulated and non-stimulated glands. The results showed that the analysis of the sialographic image by the observation of the glandular ducts system allowed the formation of 5 distincts anatomic groups. In the functional evaluation, stimulated glands presented more uniform and shorter periods of time to eliminate Lipiodol UF than non-stimulated. The correlation between the anatomic and functional findings was submitted to statistical treatment and the mean elimination time of the contrast substance in stimulated glands from Group I was significatively higher than the mean from Group li and III, and the maximum time required for the emptying of stimulated glands was 5 minutes, in ali groups, while non-stimulated glands did not show statistical difference between the groups. Finaly, it was sugested that the combined evaluation of the anatomic model and excretory function of glands, should be performed with the use of a stimulus / Mestrado / Radiologia Odontologica / Mestre em Odontologia
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Purificação e caracterização da arilsulfatase A de parotida bovinaNakamune, Ana Claudia de Melo Stevanato 17 July 2002 (has links)
Orientadores: Jose Mauro Granjeiro, Eulazio Mikio Taga / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-01T22:51:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1
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Previous issue date: 2002 / Resumo: A arilsulfatase A de parótida bovina foi purificada 6.614 vezes, até homogeneidade, através de fracionamento com sulfato de amônio, precipitação ácida, precipitação cetônica, cromatografia de troca iônica (DEAE-Sephadex A50) e cromatografia de exclusão molecular (Sephacryl S-200). O rendimento obtido foi de 35,1% e a atividade específica foi de 79,4 UElmg. A pureza da enzima foi comprovada através de eletroforese em condição nativa (PAGE) e desnaturante (SDS-PAGE), e cromatografia de exclusão molecular (Sephacryl S-200). Como determinado através de filtração em gel e SDS-PAGE, a enzima apresentou uma Mr de 135,0 e 60,5 kDa, respectivamente. Os estudos cinéticos demonstraram que a temperatura ótima para a enzima é de 40°C e que a 70°C e 20°C, existia atividade enzimática residual de 28,5% e 44,0 %, respectivamente. Quanto ao pH ótimo, foi observado um platô entre o pH 4,5 e o pH 5,5. A KM obtida para o p-NCS foi de 1,1 mmol L-1, a VMax 241,6 IJmol min-1, a constante catalítica 806,0 S-1 e a energia de ativação 13,583 kcal rroI-1. A enzima foi fortemente inibida por prata (Ki 0,4x10-6 moi L-1) e fosfato (Ki 2,95x10-6 moi L-1), mas insensível ao bário, chumbo, cl o reto , nitrato e sulfato / Abstract: Arylsulfatase A from bovine parotid was purified 6,614-fold to homogeneity, by procedures involving ammonium sulfate fractionation, acid treatment, acetone preciptation, DEAE-Sephadex ion-exchange chromatography and Sephacryl S-200 gel filtration. The enzyme recovery was 35.1 % and specific activity 79.4 units per mg protein. The following homogeneity criteria were used: PAGE, SDS-PAGE and gel filtration on Sephacryl-S200. The relative molecular mass of 135.0 (dimer) and 60.5 kDa (monomer) were determined by gel filtration chromatography and SDSPAGE, respectively. Kinectic studies showed an optimum temperature of 40° C, and a broad optimum pH between 4.5-5.5. The I<M value of 1.1 mmol L -1 was obtained, a VMax 241.6 IJmol L-1, and kcat 806.0 S-1 for p-NCS and activation energy 13.583 kcal mor1. The enzyme was inhibited by silver (Ki 0.4x10-6 moi L-1) and phosphate (Ki 2.95x10-6 moi L-1) but was not inhibited by barium, lead, nitrate and sulfate / Doutorado / Bioquimica / Doutor em Biologia Funcional e Molecular
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Efeitos das frações I, II, III e IV do Parotin sobre a incorporação de glicose e consumo de oxigenio pelo tecido adiposo de ratos normais e diabeticosVeiga, Maria Cecília Ferraz de Arruda, 1953- 28 July 1987 (has links)
Orientador: Decio Teixeira / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-07-17T22:46:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1
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Previous issue date: 1987 / Resumo: O presente trabalho foi realizado com a finali dade de se verificar," In Vitro" , os eventuais efeitos das diferentes Frações do princípio ativo Parotin, sobre a incorporação de glicose e o consumo de oxigênio pelo tecido adiposo do epidídimo de ratos normais e diabéticos.
Foram utilizados 70 ratos machos (Rattus, norvegicus, albinus, Wistar) com, aproximadamente 3 meses de idade, pesando entre 150 e 200 gramas, que foram aleatóriamen-te, distribuídos em dois grupos experimentais: Grupo I - Contrôle (normais)l e Grupo 11 - Diabéticos (aloxânicos).
Os animais pertencentes aos dois grupos, -após jejum de 24 horas, foram sacrificados, por decapitação, e o tecido adiposo da cabeça do epidídimo foi removido e mantido em sôro fisiológico à 40C. A seguir, os tecidos foram incubados em frascos de Warburg, afim de se determinar "In Vitro",
o consumo de oxigênio, e a incorporação de glicose frente ,as diferentes Frações do Parotin. O sistema experimental para a determinação do consumo de oxigênio e da incorporação de glicose para ambos os grupos, constou de: a) Endogeno (5ratos); b)Glicose (5 ratos); c) Glicose + Insulina (5 ratos); d) Glicose + Fração I do Parotin (5 ratos) . e) Glicose + Fração II do Parotin (5 ratos) f) Glicose + Fração III do Parotin (5 ratos); g) Glicose + Fração IV do Parotin (5 ratos) . Nas condições experimentais utilizadas verificou-se que as Frações do Parotin, principalmente a Fração II
e a Fração III.que mostraram maior atividade, aumentaram significativamente a incorporação de glicose e o consumo de oxignio pelo epidídimo ae ratos normais e diabéticos, enquanto que as frações I e IV foram menos efetivas. Foi observado também que as Frações do Parotin e a Insulina foram mais efetivas em aumentar a incorporação de glicose e o consumo de oxigênio nos animais diabéticos / Abstract: Not informed. / Doutorado / Farmacologia / Doutor em Ciências
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Síntese de DNA em cromossomos politênicos de Trichosia pubescens (Diptera, Sciaridae) em condições experimentais: ação do hormônio ecdisona e dos citostáticos hidroxiuréia e metotrexatoCipullo, Roberto January 1982 (has links)
Tese (doutorado) - Universidade de São Paulo. Instituto de Biociências / Made available in DSpace on 2013-12-05T19:30:39Z (GMT). No. of bitstreams: 0
Previous issue date: 1982
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Efeitos do estresse sobre o crescimento e diferenciação das celulas precursoras da molecula ossea (CFU-C) em ratosMalacrida, Solange Aparecida 05 December 1996 (has links)
Orientadores: Mary Luci de Souza Queiroz, Nancy Airoldi Teixeira / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-21T23:28:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1
Malacrida_SolangeAparecida_M.pdf: 2096449 bytes, checksum: 4e659e79b9be635dc5dd44f5df2af885 (MD5)
Previous issue date: 1996 / Resumo: Neste trabalho investigamos o crescimento e diferenciação das células precursoras da medula óssea após estresse induzido pelo modelo do desamparo aprendido. Ratos Wistar fêmeas pesando 180 + 20 g foram divididos em 4 grupos: Grupo Controle; Grupo Confinado (CF); Grupo Estressado (CHE) - recebeu 60 choques escapáveis de 1 mA com intervalos randômicos variando de 5 a 25 segundos e com duração determinada pela fuga do animal; Grupo Deprimido (CHI) - recebeu choques inescapáveis de mesma intensidade, freqüência e duração dos administrados aos animais do grupo CHE. A medula óssea foi retirada 24 h após o tratamento e as células formadoras de colônias (CFU-C) estudadas através da técnica de cultura donal em meio semi-sólido. Os resultados demonstraram que ocorre redução reversível significativa no número de. CFU-C nos animais dos grupos CHI e CF. Estudamos também o envolvimento do eixo hipotálamo-hipófiseadrenal na resposta observada através do tratamento dos animais CHI, CF e Controle com o inibidor da síntese de corticóides metirapone (O ou 47 mg/Kg/dia) ou com dexametasona (O ou 1 mg/Kg). O envolvimento dos receptores opióides foi estudado através do uso da naltrexona (O ou 8 mg/Kg) ou indução de tolerância cruzada à morfina (O ou 12 mg/Kg/dia). A administração de metirapone reduziu o número de CFU-C no grupo Controle mas não alterou o quadro de mielossupressão observado anteriormente nos grupos CHI e CF. Por outro lado, a administração de dexametasona promoveu uma proteção contra os efeitos mielossupressores do estresse. Observamos também uma reversão da mielossupressão após bloqueio dos receptores opióides com o antagonista naltrexona e após a suspensão da administração de morfina em animais tratados cronicamente com a droga. Concluímos portanto, que a proteção contra a mielossupressão causada pelo estresse depende da integridade do eixo hipotálamo-hipófiseadrenal. As endorfinas promovem mielossupressão que pode ser revertida pelo uso de antagonistas ou pela redução na liberação de fatores hipotalâmico-hipofisários, induzida por altos níveis de corticóides / Abstract: In this work we have investigated the growth and differentiation of bone marrow stem cells after stress induced by the learned helplessness model. Female Wistar rats weighing 180 + 20g were divided into four groups: Control Group; Confined Group (CF); Stressed Group (CHE) - received 60 escapable shocks of 1 mA with random interval between 5 to 25 seconds determinated by the escape of the animal; and Helpless Group (CHI) received inescapable shocks in the same intensity and frequency given to the CHE group. Twenty-four hours later, the bone marrow was collected and the colony forming cells (CFU-C) studied by the technique for the clonal culture of hematopoietic cells in semi-solid medium. In the animais of the groups CHI and CF, CFU-C numbers were reversibly reduced. We have also studied the role of the hypothalamic-pituitary-adrenal axis in the above response using in the groups CHI, CF and Control, the drugs metyrapone which inhibits the synthesis of corticosteroids (O or 47 mg/Kg/day) or dexamethasone (O or 1 mg/Kg). The involvement of opioid receptors was investigated using naltrexone (O or 8 mg/Kg) or induced cross-tolerance to
morphine (O or 12 mg/Kg/day). The administration of metyrapone reduced the number of CFU-C in the control group, whereas in the CHI and CF group we observed the same pattern of mielossupression observed previously. On the other hand, the administration of dexamethasone protected against the mielossupression induced by the stress. Similarly, the same protection was observed after blockade of opíoid receptors with the antagonist naltrexone and after the interruption of the chronic morphine administration. We therefore conclude that the protection against mielossuppression induced by stress depends on the integrity of the hypothalamic pituitary axis. On the other hand, the endorphins lead to mielossuppression which is reverted by the use of antagonists or by the reduced liberation of pituitary hypothalamic factors, induced by high levels of corticosteroids / Mestrado / Farmacologia / Mestre em Ciências
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Alterações celulares pos-fecundação e com o envelhecimento en glandulas da espermateca de rainhas de Apis mellifera (Hymenoptera: Apoidea)Falco, Jose Ricardo Penteado 03 February 1995 (has links)
Orientador: Maria Luiza Silveira Mello / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-20T03:24:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1
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Previous issue date: 1995 / Resumo: Núcleos das glândulas da espennateca de rainhas de Apis mellifera, virgens, recém-fecundadas e enve1hecidas, foram estudados através de testes citoquímicos apropriados- reação de Feulgen e concentração crítica de eletrólitos (CEC), a fim de se verificar possíveis alterações ao nível de DNA e complexos DNA-proteína com a fecundação e o envelhecimento. Foram encontradas: 1 )alterações nos valores de CEC com a fecundação e com o envelhecimento, 2)poliploidização dos núcleos da camada íntima e do epitélio glandular nas três situações em estudo. Alterações nos valores de CEC (aumento com a fecundação e decréscimo com o envelhecimento) indicam modificações na disponibilidade de grupamentos fosfatos livres do DNA (não ligados à proteínas), que poderiam ser causadas pela alteração na estrutura cromatínica, em resposta ao processo de fecundação (início da secreção glandular), e pelo envelhecimento (nonnal, casual, ou programado), devido a alterações quantitativas e qualitativas das proteínas nucleares. Estas alterações devem estar relacionadas à diferenças na expressão gênica, e também poderiam ser as responsáveis pelas alterações nos valores FeulgenDNA, detectados à nivel das subclasses de conteúdo de DNA. Assume-se não ter havido perda no conteúdo de DNA para a idade considerada como envelhecida neste estudo / Abstract: Spermathecal glands nuclei of virgin, mated and old queen bees of Apis mellifera were studied cytochemically using the Feulgen reaction and the critical eletrolyte concentration (CEC) method, in order to detect possible changes in DNA and DNA-protein complexes with fecundation and ageing. The results showed l)altered CEC values (increase with fecundation and decrease with aging), 2)poliploidy on secretory epithelium and intima in the three situations studied. Differences in CEC values indicate differences in availability of free DNA phosphates, that could be caused by altered chromatin structure, due to alteractions in nuclear proteins, in response to fecundation and aging. The differences may be related to changes in gene expression, and could be responsible for the altered Feulgen-DNA values, detected in DNA content subclasses. No loss of DNA could be assumed, at least considering the insect age presumed here to be involved with aging processes / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Ciências Biológicas
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Mecanismo de ação do estrógeno no gene Amphiregulin em células MCF7 e MDA-MB-231 via P13KLuvizon, Aline Carbonera [UNESP] 26 February 2014 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2015-05-14T16:53:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0
Previous issue date: 2014-02-26Bitstream added on 2015-05-14T16:59:08Z : No. of bitstreams: 1
000822183.pdf: 282765 bytes, checksum: db910f4ab312864b17680fd86c4fc745 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / A importância do estrógeno (E2) no desenvolvimento do câncer de mama é bem estabelecido na literatura. O uso de antagonistas de E2 para o tratamento de tumores positivos para o receptor de estrógeno mostra-se importante para a sobrevida de pacientes acometidas pela doença. Amphiregulin (Areg), um fator de crescimento regulador multifuncional que pode ser induzido por estrógeno, possui papel central no desenvolvimento da glândula mamária e na morfogênese de órgãos e é expresso tanto em tecidos normais como cancerosos. Estudos clínicos sugerem que amphiregulin também desempenha papel importante na progressão do câncer da mama humano e a sua expressão aumentada tem sido associada com doença agressiva. Para investigar o mecanismo pelo qual o E2 induz a expressão de AREG, células MCF-7 e MDA-MB-231 foram tratadas durante 10 minutos, 30 minutos, 1 hora e 4 horas com veículo (controle) ou E2 isoladamente ou em associação com Fulvestrant (ICI, inibidor do receptor de estrógeno), Actinomicina D (ACTD, inibidor da transcrição gênica), Ciclohexamida (CHX, inibidor da síntese proteica) ou LY (inibidor da via PI3K). Os inibidores também foram utilizados isoladamente. O RNAm foi extraído das células pelo método de trizol e a expressão de AREG foi analisada por qRT-PCR. O tratamento de ambas as células com E2 induziu aumento do RNAm de AREG em todos os tempos analisados. Esse aumento foi parcialmente dependente de ER nas células MCF-7 nos tempos de 10 minutos, 1 e 4 horas. Em 30 minutos não foi observado a ligação do E2 com o ER para que houvesse o aumento da expressão do gene alvo. Nas células MDA-MB-231 o estrógeno aumentou o RNAm de AREG por pelo menos duas vias distintas em todos tempos analisados. Uma das vias ativa a via PI3K para que este efeito ocorra. Nossos resultados demonstram que o E2 é capaz de induzir a expressão de AREG em linhagens de células de câncer de ... / The relevance of estrogen in breast cancer development is well established in the literature. The use of E2 antagonists for ER-positive breast cancer treatment is shown to be important to patients´ survival. Amphiregulin, a multifunctional growth regulator factor that may be induced by estrogen plays a central role in development of mammary glands and organ morphogenesis, is expressed in both normal and cancerous tissues. Clinical studies suggest that amphiregulin also is important in human breast cancer progression and its expression has been associated with aggressive disease. To investigate the mechanism whereby E2 induces AREG expression, MCF-7 and MDA-MB-231 cells were treated for 10 minutes, 30 minutes, 1 hour or 4 hours with vehicle (control) or estrogen (E2) isolated or in association with Fulvestrant (ICI, estrogen receptor inhibitor), Actinomycin D (ACTD, gene transcription inhibitor), Cycloheximide (CHX, protein synthesis inhibitor ) or LY (PI3K inhibitor). The inhibitors were also used alone. mRNA was extracted from the cells by the Trizol method and AREG expression analyzed by qRT-PCR. Treatment of both cell types with E2 increased AREG mRNA expression at all moments. This increase was partially ER-dependent in MCF- 7 cells at 10 minutes, 1 and 4 hours. At 30 min, no binding of E2 to ER was obseved. In MDA-MB-231 cells, the estrogen-induced AREG mRNA was enhanced by two distinct pathways at the moments analyzed and PI3K pathways participated in one of them. Our results showed that E2 was able to induce the AREG expression in breast cancer cell lines in an ER-dependent and -independent manner
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