Submitted by Marco Antonio Oliveira da Silva (maosilva@ipen.br) on 2016-08-26T11:30:14Z No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2016-08-26T11:30:14Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Diversos estudos de serpentes têm mostrado que algumas substâncias componentes de seus venenos possuem eficiência na atividade antitumoral nos ensaios realizados em laboratório em células in vitro e in vivo. O veneno da cascavel Crotalus vegrandis possuem atividades neurotoxica, miotoxica e hemorrágica. A crotoxina simile é um importante componente desse veneno sendo formada por uma proteína que possui uma unidade ácida (Crotapotina) ligada a uma subunidade básica (PLA2). Devido ao fato de existirem poucos estudos relativos ao veneno de Crotalus vegrandis, torna-se necessário o isolamento e a caracterização de suas biomoléculas e uma maior investigação do seu potencial e sua eficácia como agente terapêutico contra células tumorais. No presente trabalho, foi realizado o isolamento e a caracterização da crotoxina simile de Crotalus vegrandis, bem como seu efeito citotóxico em células L929 e B16F10. Realizou-se o cultivo dessas células em placas com 96 poços, para, então, serem colocadas em contato direto com diferentes frações do veneno purificado de Crotalus vegrandis por um tempo total de 48 horas. Para efeitos de comparação realizou-se o mesmo ensaio com frações do veneno purificado da cascavel brasileira Crotalus durissus terrificus. Para a avaliação da viabilidade celular o tratamento com as frações do veneno purificado de Crotalus vegrandis e Crotalus durissus terrificus, realizou-se os ensaios com MTT. Os resultados mostraram uma atividade de grande toxicidade para ambos os venenos em células tumorais B16F10 e pouca toxicidade para as células normais L929. Ainda nos ensaios comparativos com os dois venenos, verificou-se que, para uma dada concentração, as frações do veneno de Crotalus vegrandis possuem uma maior eficiência que qualquer concentração do veneno de Crotalus durissus terrificus, havendo uma maior especificidade para as células B16F10. A crotoxina símile isolada do veneno de Crotalus vegrandis apresentou atividade citotóxica mais preponderante na linhagem celular tumoral B16F10, após 48 horas concentrações de 250 e 125 ug/mL. / Dissertação (Mestrado em Tecnologia Nuclear) / IPEN/D / Instituto de Pesquisas Energéticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP

Este trabalho foi dividido em quatro etapas, além da introdução. A primeira parte consiste no estudo comparativo do comportamento eletroquímico de eletrodos de cobre em soluções tampão fosfato 0,10 mol L-1 com valores de pH 4,5 e 7,8, e em solução de NaOH com valores de pH 13,0 e 14,0. Mostrou-se que as espécies formadas eletroquimicamente sobre a superfície do eletrodo são dependentes do valor de pH e do potencial aplicado. Os resultados experimentais obtidos estão de acordo com aqueles reportados na literatura. A segunda parte da tese corresponde ao desenvolvimento de um sensor eletroquímico fabricado com microeletrodos de cobre para a determinação de peróxido de hidrogênio (H2O2) em amostras comerciais de antissépticos bucais e clareadores dentais. Nas condições experimentais otimizadas (solução tampão fosfato 0,10 mol L-1 (pH 7,0) e potencial de redução de -0,20 V), microeletrodos de cobre foram utilizados para a determinação de H2O2 sem a necessidade de etapas de extração, obtendo-se faixa linear de 0,015 a 6,4 mmol L-1 e limite de detecção de 2,8 µmol L-1. O método proposto mostrou-se reprodutível e a presença de interferentes na matriz da amostra analisada não alterou a resposta do sensor para H2O2. Na terceira parte, a reação de eletro-oxidação de glicerol em superfícies de cobre em soluções de NaOH foi investigada utilizando a microscopia eletroquímica de varredura (SECM) no modo de geração pelo substrato de cobre / coleta no microeletrodo de platina (tip) (SG/TC). Os experimentos com a SECM mostraram a dependência da corrente com a distância entre o gerador e a tip, assim como a dependência com a concentração da solução de NaOH. Além disso, a corrente monitorada no microeletrodo diminuiu significativamente após a adição de glicerol. A atividade eletrocatalítica de eletrodos de cobre, no que diz respeito à oxidação de glicerol em meio alcalino, permitiu o desenvolvimento de um sensor amperométrico para a determinação de glicerol em amostra de biodiesel, com um intervalo linear de 0,05 a 1,33 mmol L-1 e limite de detecção de 20 µmol L-1. A metodologia proposta foi aplicada para a determinação do analito em uma amostra de biodiesel de mamona. A quarta parte descreve a síntese, caracterização eletroquímica e utilização de nanotubos de carbono de paredes múltiplas (NCPM) decorados com nanopartículas de paládio (Pd) para a modificação da superfície de eletrodo de carbono vítreo (CV) para a oxidação de metanol, etanol e glicerol em solução de KOH 1,0 mol L-1. Os resultados mostraram que o NCPM/Pd é um bom catalisador para a eletro-oxidação de álcoois em meio alcalino e que maior atividade eletrocatalítica foi obtida para o glicerol. Em condições otimizadas, experimentos amperométricos foram realizados para o desenvolvimento do método analítico para a determinação de glicerol em biodiesel, obtendo-se um intervalo linear de 0,06 a 24 mmol L-1 e limite de detecção 30 µmol L-1. Amostras de biodiesel foram analisadas com sucesso por meio de curvas de adição de padrão utilizando o eletrodo CV/NCPM/Pd. / This thesis is divided into four parts, apart from a general introduction. Part 1 is concerned with a critical comparison of the electrochemical behaviour of copper electrodes, in 0.10 mol L-1 phosphate buffer solution (pH 4.5 and 7.8), and in NaOH solution (pH 13.0 and 14.0). The electrochemical study showed that the species formed on the surface depends on both pH and the applied potential. The experimental results are in good agreement with those reported in the literature. A second goal of the thesis was the development of an electrochemical sensor for hydrogen peroxide (H2O2) determination in commercial oral antiseptic and dental whitening samples using copper microelectrodes. With optimized experimental conditions (working potential applied = -0.20 V in 0.10 mol L-1 phosphate buffer solution pH= 7.0), copper microelectrodes can be used to detect H2O2 without any previous extraction steps, in the range of 0.015 to 6.4 mmol L-1 with a lower detection limit of 2.8 µmol L-1. In addition, the electrode exhibited an excellent reproducibility and long-term stability as well as negligible interference from sorbitol, ethanol, glycerin and saccharin. In the third part, the electrooxidation reaction of glycerol at copper surfaces in NaOH solutions was investigated using Scanning Electrochemical Microscopy (SECM) in a copper substrate generation / platinum microelectrode (tip) collection mode (SG/TC). The results showed the dependence of the current measured at the tip with respect to the distance between generator and the tip, as well as on the concentration of the NaOH solution. Other studies led to the conclusion that the current measured at the tip decreased significantly after addition of glycerol in the solution. The electrocatalytic activity of copper electrodes for the oxidation of glycerol in alkaline medium allowed the development of an amperometric method to determine glycerol in biodiesel samples in the range 0.05 to 1.33 mmol L-1 with a detection limit of 20 µmol L-1. The determination of the analyte in a castor biodiesel sample employing a single copper microelectrode was carried out. The four part of this thesis shows results on the synthesis, electrochemical characterization and use of a glassy carbon (GC) electrode modified with multi-wall carbon nanotubes (MWCNT) decorated with palladium (Pd) for the electrochemical oxidation of methanol, ethanol and glycerol in 1.0 mol L-1 KOH solution. The results showed that MWCNT/Pd is a good electrocatalyst for methanol, ethanol and glycerol oxidation in alkaline medium, with highest activity toward glycerol oxidation. With optimized experimental conditions, an amperometric method was developed for the determination of glycerol in biodiesel samples, in the range of 0.06 to 24 mmol L-1 and detection limit of 30 µmol L-1. Biodiesel samples were successfully analyzed by the standard addition method using the GC/MWCNT/Pd film electrode.

Made available in DSpace on 2016-08-19T12:56:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Veronica.pdf: 1479892 bytes, checksum: f4c4430e2fa15fb560cccf1bb130e810 (MD5) Previous issue date: 2013-06-10 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The presence of glycerol in biodiesel can cause serious problems, such as clogged injectors, emissions of aldehydes and environmental problems in the storage of biodiesel. This work intends to evaluate the electrochemical behavior of glycerol in the aqueous and organic electrochemical impedance technique in order to develop an analytical methodology for the determination of glycerol in biodiesel. Thus the analyzes were performed in an electrochemical system containing two platinum electrodes with geometric areas of 1 cm². Using this system analyzes were made by electrochemical impedance spectrometry for the aqueous and organic. The data obtained for the analyzes conducted in aqueous medium were not satisfactory for the study. However, with respect to the results obtained for the organic medium, they showed a great performance, showing obvious processes diffusional mass transport and a steady increase in the conductivity of the medium acetonitrile / glycerol. Having this increased conductivity also confirmed by measurements of electrical conductivity. From these data, we developed an analytical method for the quantification of glycerol in biodiesel using the technique of electrochemical impedance spectroscopy and electrical conductivity measurements. So the optimized operating parameters for the quantification of glycerol by electrochemical impedance were: 106 Hz a 0,1 Hz frequency range, amplitude of 15 mV and time of Eoc of 20 s. Using those parameters obtained an average concentration of glycerol in the biodiesel samples of 5.55 x 10ˉ³ mol Lˉ¹ , a correlation coefficient of 0.997 and a variation coefficient of 22,4 %. To analyze the electrical conductivity of the samples was used soy biodiesel, which through a simple methodology also quantified the glycerol. Thus the average concentration of glycerol in the samples of soybean biodiesel was 3.5 x 10ˉ4 mol Lˉ¹, for a coefficient of 0.998 and coefficient of variation (CV) of 9.8 %. Throughout this procedure was performed for n equal to 3 replicates, considering a confidence level of 95 %. / Existem na literatura inúmeros registros da indesejável presença do glicerol no biodiesel o qual pode ocasionar sérios inconvenientes, como entupimento de injetores, emissões de aldeídos ao ambiente, além dos problemas relacionados ao armazenamento do biodiesel. Este trabalho pretende avaliar o comportamento eletroquímico do glicerol no meio aquoso e orgânico pela técnica de impedância eletroquímica, visando desenvolver uma metodologia analítica para a determinação de glicerol em biodiesel. Assim, as análises foram realizadas em um sistema eletroquímico contendo dois eletrodos de platina com áreas geométricas de 1 cm². Utilizando esse sistema foram feitas analises por espectroscopia de impedância eletroquímica (EIE) para os meios aquoso e orgânico. Os resultados obtidos para o meio orgânico demonstraram um ótimo comportamento, que implicam em evidentes processos difusionais de transporte de massa e um constante aumento da condutividade do meio acetonitrila/glicerol; tendo esse aumento de condutividade, também confirmado, por medidas de condutividade elétrica. A partir desses dados desenvolveu-se uma metodologia analítica para a quantificação de glicerol em biodiesel utilizando a técnica de espectroscopia de impedância eletroquímica e medidas de condutividade elétrica. Assim, os parâmetros operacionais otimizados para a quantificação do glicerol por impedância eletroquímica foram: faixa de frequência de 106 Hz a 0,1 Hz, amplitude (rms) de 15 mV e tempo de Eoc de 20 s. Utilizando esses parâmetros, obteve-se uma concentração média de glicerol nas amostras de biodiesel interlaboratorial de 5,55 x 10ˉ³ mol Lˉ¹, para um coeficiente de correlação de 0,997 e coeficiente de variação (CV) de 22,4 %. Para as análises de condutividade elétrica foram utilizadas amostras do biodiesel de soja, empregando-se a mesma metodologia usada por EIE, para quantificar o glicerol. Desta forma, a concentração média de glicerol nas amostras de biodiesel de soja foi de 3,5 x 10ˉ4 mol Lˉ¹, para um coeficiente de correlação de 0,998 e coeficiente de variação (CV) de 9,8 %. Todo esse procedimento foi realizado para n igual a 3 replicatas, considerando um nível de confiança de 95 %.

A rabdomiólise é uma causa importante de lesão renal aguda (LRA) e decorre da lise das células musculares esqueléticas, com liberação do conteúdo intracelular para o compartimento extracelular e para a circulação. O extresse oxidativo e o processo inflamatório contribui para as alterações da função e estrutura renal que ocorrem na LRA. Estudos recentes tem evidenciado a participação da Vitamina D (Vit. D) no controle do processo inflamatório e do estresse oxidativo. Este estudo avaliou o efeito do tratamento com calcitriol (1,25-dihidroxivitamina D3) na evolução das alterações de estrutura e função renal, estresse oxidativo e no processo inflamatório renal provocados pela administração de glicerol. Ratos Wistar Hannover machos foram tratados com calcitriol (6 ng/dia, s.c., osmotic pump) ou veículo (salina 0,9%) por 7 dias, sendo no 3º dia injetados com glicerol (50%; 8ml/kg, i.m.) ou salina (8ml/kg, i.m). Os animais foram divididos em 4 grupos: Controle (n=7): receberam veículo s.c. e no 3º dia, injeção i.m de salina; Controle+Vit. D (n=7): receberam calcitriol s.c. e no 3º dia, injeção i.m de salina; Glicerol (n=13): receberam veículo s.c. e no 3º dia, injeção i.m de glicerol; Glicerol+Vit.D (n=10): receberam calcitriol s.c. e no 3º dia, injeção i.m de glicerol. Quatro dias após as injeções foram coletadas amostras de urina, plasma e tecido renal para estudos de função renal, histologia, imunoistoquímica, ELISA e Western blot. Os animais do grupo Glicerol tiveram aumento dos níveis plasmáticos de creatinina, redução da taxa de filtração glomerular, aumento da fração de excreção de sódio e redução da osmolalidade urinária comparados com os dos grupos controles. A análise histológica evidenciou aumento da área intersticial relativa e do número de túbulos com necrose no córtex renal dos animais tratados com glicerol. A lesão tubular foi também constatada pelo aumento da expressão de vimentina e PCNA nos animais do grupo Glicerol, em relação aos controles e ao grupo Glicerol+ Vit. D. Essas alterações foram menos intensas no grupo Glicerol+ Vit. D. A expressão de mioglobina estava aumentada no tecido renal de ambos os grupos tratados com glicerol. O estresse oxidativo foi observado pela aumento da expressão de 8-isoprostano nos animais do grupo Glicerol, essa alteração não estava presente nos animais controles e nos animais Glicerol+Vit. D. Ambos os grupos tratados com glicerol tiveram aumento do número de macrófagos, da expressão de NF-?B e dos níveis de IL1-? no córtex renal. Essas alterações foram atenuadas pelo tratamento com Vit. D. O grupo Glicerol apresentou também maior excreção urinária de VDBP, proteína transportadora de Vit. D e menor número de túbulos com bordadura em escova marcados com cubulina, receptor de Vit. D, em comparação aos grupos Controles e Glicerol+Vit. D. Portanto, a redução do receptor e a perda do transportador, reduz a captação de Vit. D nesse modelo, comprometendo a ativação renal de Vit. D e a sua ação no processo inflamatório e no estresse oxidativo no tecido renal. Concluindo, nossos resultados mostram que o tratamento com calcitriol reduziu as alterações de função e estrutura renal provocadas pelo glicerol. Esse efeito estava associado com a diminuição do processo inflamatório e do estresse oxidativo no tecido renal dos animais tratados com Glicerol+Vit. D. / Rhabdomyolysis provoked by the lysis of skeletal muscle cells can induce acute kidney injury (AKI) with release of intracellular content to the extracellular compartment and circulation. The oxidative stress and the inflammatory process contribute to the changes in renal function and structure in AKI. Recent studies have show the effect of vitamin D (Vit. D) on inflammatory process control and in the oxidative stress. This study evaluated the effect of calcitriol (1,25- dihydroxyvitamin D3) in the renal function and structure induced by glycerol and its relationship with the inflammatory process and the oxidative stress. Male Wistar Hannover rats were treated with calcitriol (6 ng/day, s.c., administered through an osmotic pump) or vehicle (saline 0.9%) for 7 days, and injected with glycerol (50%; 8ml/kg, i.m.) or saline (8ml/kg, i.m) 3 days after the beginning of this treatment. The animals were divided into 4 groups: Control (n = 7): received vehicle s.c. and on 3rd day after an injection i.m of saline; Control + Vit. D (n = 7): received Calcitriol s.c. and 3rd day after an injection i.m of saline; Glycerol (n = 13): received vehicle s.c and on 3rd day after an injection i.m of glycerol and Glycerol + Vit. D (n = 10): received Calcitriol s.c. and 3rd day after an injection i.m of glycerol. Four days after injections, urine samples, plasma and renal tissue were collected for renal function, histology, immunohistochemistry, ELISA and Western blot studies. Glycerol injected rats presented increase in plasma creatinine levels and sodium fractional excretion, and reduction glomerular filtration rate and urinary osmolality compared to controls groups. Histological analysis showed an increase in the relative interstitial area and in the number of tubules with necrosis in the renal cortex of these animals treated with glycerol. The tubular lesion was also evidenced by increased expression of vimentin and PCNA in the animals of the Glycerol group compared to controls. These changes were less intense in the Glycerol + Vit. D group. The myoglobin expression was increased in the renal tissue of both groups of the animal treated with glycerol. The oxidative stress was observed by the increased expression of 8-isoprostane in the kidneys from Glycerol group. However, this change was not observed in the control and Glycerol + Vit. D treated rats. Both glycerol-treated groups had increased number of macrophages, NF-?B expression and IL1- ? levels in the renal cortex. These changes were less intense in Vit. D treated animals. Glycerol group also presented higher urinary excretion of VDBP and less number of tubules with brush border marked with cubilin (Vit. D receptor) compared to the Control and Glycerol + Vit. D. Therefore, the reduction of the receptor and the loss of the transporter, reduces the uptake of Vit. D in this model, compromising the renal activation of Vit. D and its action in the inflammatory process and oxidative stress in renal tissue. In conclusion, our results show that treatment with calcitriol reduced the changes in renal function and structure caused by glycerol. This effect was associated with decreased inflammatory process and oxidative stress in the renal tissue of animals treated with Glycerol + Vit. D.

A utilização de combustíveis renováveis tem se destacado nos últimos anos, principalmente devido aos impactos ambientais gerados pelo uso de combustíveis fósseis e escassez dos mesmos. Dentre os combustíveis renováveis destaca-se o biodiesel, cujo processo produtivo apresenta como principal subproduto o glicerol bruto, que tem instigado nos últimos anos intensas discussões sobre a problemática de sua destinação e disposição final. Apesar de ser utilizado na indústria química, o seu teor de impurezas limita o seu processamento industrial. Buscando agregar valor a esse resíduo bruto e contribuir para a produção de bioenergia, este trabalho teve por intuito avaliar a produção dos biocombustíveis hidrogênio e metano, assim como de intermediários químicos a partir de glicerol bruto como substrato em reatores anaeróbios de leito fluidificado (RALF), mesofílicos (30°C), utilizando inóculo de cultura mista. O RALF-H2, com o objetivo de produzir hidrogênio e metabólitos solúveis, foi submetido à concentração de 10 g.L-1 de glicerol e variação do tempo de detenção hidráulica (TDH) de 8, 6, 4, 2, 1 e 0,5 h. Já o RALF-CH4, com intuito de produzir metano, operou sob TDH fixo de 24 h, submetido à variação da concentração de glicerol de 1, 2, 3, 4, 5 e 7 g.L-1, e portanto, da taxa de carregamento orgânico (TCO) de 1, 2, 3, 4, 5 e 7 kgDQO.m-3.d-1, respectivamente. No RALF-H2, os valores máximos de conteúdo de hidrogênio no biogás (69,2 %), produtividade volumétrica de hidrogênio (1,90 L.h-1.L-1) e rendimento de hidrogênio (0,28 molH2.mol-1glicerolconsumido) foram verificados no TDH de 0,5 h. O 1,3-propanodiol se destacou entre os metabólitos produzidos, com rendimento máximo de 0,57 mol1,3-PDO.mol-1glicerolconsumido, alcançado no TDH de 8 h. No RALF-CH4, o máximo conteúdo de metano no biogás (83,0%) foi verificado na TCO de 1 kgDQO.m-3.d-1, a maior produtividade volumétrica de metano (2,26 L.d-1.L-1) na TCO de 5 kgDQO.m-3.d-1 e o máximo rendimento (0,19 m3H4.kg-1DQOaplicada ou 0,77 molCH4.mol-1glicerolconsumido) na TCO de 4 kgDQO.m-3.d-1. Portanto, os resultados evidenciaram a possibilidade de produção de biocombustíveis e metabólitos de valor agregado utilizando glicerol bruto como substrato no processo da digestão anaeróbia. / The use of renewable fuels has been highlighted in recent years, mainly due to the environmental impacts generated by the use of fossil fuels and their scarcity. Among the renewable fuels highlights the biodiesel, whose production process displays as the main byproduct crude glycerol, which has instigated in recent years, intense debates about a problem of its destination and final disposal. Although it is used in the chemical industry, its impurities content limits its industrial processing. In order to add value to this crude residue and to contribute to the production of bioenergy, this work aimed to evaluate the production of biofuels hydrogen and methane, as well as chemical intermediates from crude glycerol as substrate in anaerobic fluidized bed reactors (AFBR), mesophilic (30°C), using mixed culture inoculum. The AFBR-H2, with the objective of producing hydrogen and soluble metabolites, was submitted to a concentration of 10 g.L-1 of glycerol and a variation of the hydraulic retention time (HRT) of 8, 6, 4, 2, 1 and 0.5 h. The AFBR-CH4, with the intention of producing methane, operated under fixed HRT of 24 h, subjected to the variation of the glycerol concentration of 1, 2, 3, 4, 5 and 7 g.L-1 and, therefore, of the organic loading rate (OLR) of 1, 2, 3, 4, 5 and 7 kgCOD.m-3d-1, respectively. In the AFBR-H2, the maximum values of hydrogen content in the biogas (69.2%), hydrogen volumetric productivity (1.90 L.h-1.L-1) and hydrogen yield (0.28 molH2.mol-1glycerolconsumed) were verified in the HRT of 0.5 h. The 1,3-propanediol was highlighted among the metabolites produced, with a maximum yield of 0.57 mol1,3-PDO.mol-1glycerolconsumed, reached in the TDH of 8 h. In the AFBR-CH4, the higher methane content in the biogas (83.0%) was detected in the OLR of 1 kgCOD.m-3.d-1, a higher volumetric productivity of methane (2.26 L.d-1.L-1) in the OLR of 5 kgCOD.m-3.d-1 and the maximum yield (0.19 m3CH4.kg-1CODapplied or 0.77 molCH4.mol-1glycerolconsumed) in the OLR of 4 kgCOD.m-3d-1. Therefore, the results evidenced the possibility of producing biofuels and value-added metabolites using crude glycerol as a substrate at the anaerobic digestion process.

O tratamento cirúrgico mais utilizado para a reparação das lesões de nervos periféricos com perda de substância é através de auto-enxertia de nervo. Essa técnica produz alterações na área doadora e muitas vezes não se dispõe de tecido suficiente para grandes perdas de tecido neural. Desta forma é necessária a busca de novas técnicas, menos traumáticas e mais simples, visando eliminar a morbidade na área doadora e prover a quantidade necessária de tecido para a regeneração neural. O objetivo desse trabalho foi comparar, em ratos Wistar, o grau de regeneração neural, utilizando-se de análise histológica e análise funcional, através de interposição de enxerto autógeno de nervo (Grupo A), veia autógena conservada em glicerol (Grupo B) e enxerto alógeno de nervo conservado em glicerol (Grupo C) para correção de defeito de 5 mm de nervo fibular. Quinze ratos machos da raça Wistar, com peso variando entre 200 e 300g, e idade ao redor de oito semanas foram divididos em três grupos de cinco animais de acordo com o tratamento empregado. Para a coleta de segmentos de nervos alógenos, foram escolhidos cinco ratos da Raça Sprague-Dawley, com sexo, idade e peso semelhantes ao da raça Wistar. Os animais foram submetidos à avaliação funcional (\"walking track analysis\") imediata, com três semanas e com seis semanas e sacrificados para realização dos estudos histológicos com a coloração de tetróxido de ósmio. Na análise microscópica das lâminas, realizada, em todos os grupos foram visualizados pequenos fascículos contendo axônios mielinizados de tamanhos variados e degeneração Walleriana em pequeno número de axônios. Nos grupos B (Veia autógena conservada em glicerol) e C(Nervo alógeno conservado em glicerol) o escape de fibras axonais mielinizadas para fora dos limites do epineuro e o processo inflamatório local foram menores que o do grupo A (Auto-enxertia). Em relação à avaliação funcional, onde foi utilizada a análise estatística por meio do modelo de análise de variância com medidas repetidas e o de comparações múltiplas de Bonferroni (p<0.05), não houve diferença estatisticamente significativa entre as recuperações funcionais do nervo fibular independente do tipo de reparação utilizada em nenhum período avaliado. / The most used surgical treatment of peripheral nerves for the repair of injuries with loss of substance is using nerve autograft. This technique produces alterations in the donor area and often not sufficient tissue is available for great losses of neural tissue. Thus the need for new less traumatic and simpler techniques is needed in order to eliminate morbidity in the donor area and to provide the necessary amount of tissue for neural regeneration. The objective of this study was to compare, in Wistar rats, the degree of neural regeneration, using histological and functional analysis through interposition of autogenous nerve graft (Group A), autogenous vein preserved in glycerol (Group B) and allogenous graft preserved in glycerol (Group C) for the correction of a 5-mm defect of fibular nerve. Fifteen male Wistar rats, weighing between 200 and 300 g and approximately 8 weeks old were divided into 3 groups of five animals according to the used treatment. For the collection of autogenous nerve segments 5 Sprague-Dawley rats were chosen, with similar sex and age as the Wistar rats. The animals were submitted to immediate functional evaluation (walking track analysis), at 3 and 6 weeks and sacrificed for histologic studies using osmium tetroxide stain. On microscopic analysis of the slides, performed in all groups, small fascicles containing myelinated axons of varied sizes and wallerian degeneration in a small number of axons were visualized. In Groups B (autogenous vein preserved in glycerol) and C (allogenous nerve preserved in glycerol) escape of axonal myelinated fibers outside the limits of the epineurium and the local inflammatory process were less than in Group A (autograft). Regarding functional evaluation, where statistical analysis by variance analysis using the models of repeated measures and that of Bonferroni\'s multiple comparisons were used (p<0.05) there was no statistically significant difference between functional recoveries of the fibular nerve independent of the type of repair used in any evaluated period.

Dans le contexte du développement des bio-raffineries, le glycérol et ses dérivéssont des co-produits de l’oléochimie pour lesquels de nouvelles voies de valorisation doiventêtre trouvées. Cette thèse porte sur l’étude de la polymérisabilité d’un dérivé du glycérol, ledivinylglycol (DVG), monomère symétrique à 6 carbones qui possède un diol vicinal et deuxfonctions vinyliques. Dans ces travaux, la réactivité des fonctions hydroxyle et vinyliques duDVG dans des réactions de polycondensation et polyaddition a été investiguée. Dans unpremier temps, la synthèse de polyesters et de polyuréthanes a été réalisée par réaction duDVG avec des diesters biosourcés et des diisocyanates, respectivement. Les fonctionsvinyliques du DVG ont ensuite été mises à profit pour synthétiser des polymères originaux parpolymérisation par ADMET et addition thiol-ène. Enfin, des réseaux tridimensionnels époxyamineont été préparés par polymérisation entre une série de diamines et le DVG bis-époxydé,préalablement obtenu par oxydation des doubles liaisons. Ces différentes méthodes depolymérisation ont montré que les doubles liaisons du DVG étaient plus réactives que lesfonctions alcool et qu’un panel de polymères originaux pouvait être obtenu à partir de cesynthon bio-sourcé. / In the context of the development of bio-refineries, glycerol and its derivatives areco-products of oleochemistry for which new valorization routes must be found. This thesisdeals with the polymerizability study of a glycerol derivative, divinylglycol (DVG), asymmetrical C-6 monomer which bears a vicinal diol and two vinyl functions. In this work, thereactivity of the hydroxyl and vinyl functions of DVG in polycondensation and polyadditionreactions was studied. In a first step, the synthesis of polyesters and polyurethanes wascarried out by reaction of DVG with biosourced diesters and diisocyanates, respectively. Thevinyl functions of DVG were then used to synthesize original polymers by ADMETpolymerization and thiol-ene addition. Finally, three-dimensional epoxy-amine networkswere prepared by polymerization between a series of diamines and the bis-epoxidized DVG,previously obtained by oxidation of the double bonds. These different methods ofpolymerization showed that DVG double bonds were more reactive than the alcohol functionsand that a panel of original polymers could be obtained from this bio-sourced synthon.

The long digital extensor tendon can suffer trauma with considerable lack of a segment, becoming extremely difficult the primary repair due to muscle contraction and wound contamination. In order to correct this, an experimental model was developed, using 6 adult ponies, weighing betweem 150 to 200 kg. Before the pre surgical adaptation, the animals were submitted to a surgical procedure under general anaesthesia. Through a surgical incision in the right rear limb, a piece of 3cm in length of the long digital extensor tendon was removed. In the tendon gap was implanted an homologus tendon segment preserved in glyceril 98% by mean of a Kessler modified suture, with mononylon 2.0. In the other limb was done a similar defect with excision of 3cm of the same tendon, repaired only with Kessler modified suture, leaving the mononylon strands in the gap, without the use of preserved homograft. After the surgical procedure, an external restraint with acrylic device was applied in both rear legs for a period of 60 days. Ninety days after the surgery all animals went under a new procedure in which, there were done biopsies of both repaired tendons. Besides they went thought histological analysis. It was verified that there was a good healing in both repairing methods. The tendon that was grafted presented advantages such as the dimensions maintenance of the receptor tendon. As well as the peritendineous adherence missing. As for the limb function there was not observed any change, so all animals, regardless of the repairing methods, presented a perfect motion in different trails level. / O tendão do músculo extensor digital longo (TEDL) pode sofrer ferimento traumático com considerável perda de segmento, tornando extremamente difícil o seu reparo primário devido à contratura dos músculos e contaminação da ferida. Com base nesta observação foi elaborado um modelo experimental em que foram utilizados seis pôneis adultos com peso médio de 100 kg. Após o período de adaptação pré-operatória, os animais foram submetidos à intervenção cirúrgica, sob anestesia geral inalatória, onde foi realizada a secção de um segmento de 3cm de comprimento do TEDL do membro posterior direito, mimetizando uma ruptura tendínea total. Em seguida foi implantado na falha tendínea, um segmento de tendão homólogo preservado em glicerina a 98% sendo este fixado aos cotos proximal e distal por meio de sutura de Kessler modificada com fio de nailon onofilamentoso 2.0. No membro contra-lateral foi realizado um defeito semelhante, onde também procedeu-se a retirada de segmento do TEDL medindo cerca de 3cm de comprimento. Para a reparação foi realizada somente a sutura de Kessler, ficando os fios de sutura no espaço criado, orientando desta maneira os cotos tendíneos, diferenciando do procedimento realizado no membro posterior direito pelo fato de não sofrer implantação de segmento tendíneo homólogo preservado. Após o procedimento cirúrgico todos os animais foram submetidos à imobilização externa com gesso acrílico em ambos os membros operados, por um período de sessenta dias, com o objetivo de impedir a flexão da articulação metatarsofalangeana evitando tensão na linha de anastomose . Decorridos noventa dias de pós-operatório, todos os animais passaram por nova intervenção cirúrgica, onde foram realizadas biópsias de ambos os tendões reparados e então submetidos a análise histológica. Onde se verificou adiantado estágio de cicatrização em ambos os métodos de reparo, sendo que o tendão que recebeu o implante apresentou vantagens, como a manutenção do diâmetro e espessura do tendão receptor e ausência de aderências peritendíneas. Quanto à funcionalidade dos membros operados não foi verificada nenhuma alteração digna de nota, pois todos os animais, independente do método de reparo, deambularam perfeitamente nas diferentes fases da marcha.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / During the 2005 and 2006 southern hemisphere natural breeding season, 104 Criollo mares were used to evaluate deep frozen semen fertility from 5 Criollo stallions. FR4 was used as extender (Nutricell, Brazil) with 5% glycerol (GLY) or 5% dimethylformamid (DMF) as cryoprotectants. Semen was loaded in 0.5mL straws (100x106 spermatozoa/straw). Mares were examined every other day by ultrasonography until detection of ≥30mm diameter follicles, when hCG was injected (2500UI i.v.). After 24 hours, mares were examined daily in Experiment I, and every 6 hours, in experiment II. Insemination with frozen semen was performed deep in the uterine horn ipsilateralis to the dominant follicle. Controls were inseminated with fresh semen in the body of the uterus. Only one estrus period per mare was used. Pregnancy diagnosis through ultrasonography was performed on the 15th day postovulation. In experiment I, pregnancy rates were 11.9% (5/42) and 62.5% (20/32), respectively for DMF and fresh semen (P<0.0001). In experiment II, pregnancy rates were 40% (4/10), 10% (1/10) and 70% (7/10), respectively for DMF, GLY (P>0.05) and fresh semen (P<0.0001). It was showed that GLY and DMF can be used for frozen of Criollo Stallion s semen. In this context DMF brought better results. / Durante a estação reprodutiva natural de 2005 e 2006 do hemisfério sul, 104 éguas Crioulas foram utilizadas para avaliar a fertilidade do sêmen congelado de cinco garanhões Crioulos. Como diluente usou-se FR4 (Nutricell, Brasil) com 5% de glicerol (GLI) ou 5% de dimetilformamida (DMF) como crioprotetores. O sêmen foi envasado em palhetas de 0,5mL (100x106 espermatozóides/palheta). Examinou-se as éguas em dias alternados por ultra-sonografia transretal para detecção de folículos ≥30mm de diâmetro, quando recebiam hCG (2500UI i.v.). Apos 24h eram examinadas diariamente no Experimento I e a cada 6h no Experimento II. As inseminações com sêmen congelado eram realizadas no fundo do corno ipsislateralis ao folículo dominante. Nas controle, com sêmen fresco no corpo uterino. Utilizou-se um ciclo estral/animal. O diagnóstico de gestação foi conduzido por ultra-sonografia no 15o dia pós-ovulação. No experimento I, a taxa de prenhez foi 11,9% (5/42) e 62,5% (20/32), respectivamente para DMF e sêmen fresco (P<0,0001). No experimento II, a taxa de prenhez foi 40% (4/10), 10% (1/10) e 70% (7/10), respectivamente para DMF, GLI (P>0,05) e sêmen fresco (P<0,0001). Demonstrou-se que o GLI e a DMF podem ser utilizados como crioprotetores para o congelamento do sêmen de garanhões Crioulos. Neste contexto, a DMF apresentou melhores resultados.

Endocannabinoids are endogenous lipid mediators involved in various biological processes, and have immunomodulatory and anti-inflammatory activities. Anandamide (arachidonoyl ethanolamine, AEA) and 2-arachidonoyl glycerol (2-AG) are the main representatives of this group. The endocannabinoid receptors CB1 and CB2 with AEA have been found in human HaCaT keratinocytes and fibroblasts, but the metabolic pathway leading to endocannabinoid production in the skin has not been fully elucidated. This study aimed to investigate the profile of endocannabinoids and their main metabolizing enzymes in human skin cells and assess whether omega-3 polyunsaturated fatty acids (n-3 PUFA) altered these profiles. In addition, an investigation was carried out to check whether UV radiation could stimulate the production of endocannabinoids and N-acylethanolamines (NAE) in human skin cells. For this purpose HaCaT keratinocytes and 46RB.1N fibroblast cells were treated with 10 and 50µM of eicosapentaenoic acid (EPA), docosahexaenoic acid (DHA) or oleic acid (OA) in the presence or absence of UVR (15mJ/cm2). Data suggest that n-3 PUFA may both directly (by up-regulating NAPE-PLD levels) and indirectly (by decreasing FAAH levels) increased endocannabinoid and NAE levels in HaCaT keratinocytes and 46BR.IN fibroblasts. DHA treatment significantly decreased COX-2 expression in the absence of UVR and inhibited UVR-induced COX-2 overexpression in 46BR.IN fibroblasts. In contrast, DHA appeared to induce COX-2 up-regulation in the absence of UVR and did not prevent UVR induced COX-2 up-regulation in HaCaT keratinocytes. EPA appeared to induce COX-2 down-regulation in the absence of UVR and did not prevent UVR induced COX-2 up-regulation in both HaCaT keratinocytes and 46BR.IN fibroblasts. UVR did not have any significant effect on endocannabinoid and NAE biosynthesis. However, UVR induced endocannabinoid production in some experiments of this study. A clinical study was carried on 16 volunteers from two different ethnic groups and two different skin types. The purpose was to assess the effect of UVR on the serum endocannabinoids and NAE, therefore, the volunteers were subjected to multiple doses (1.3, SED/ 6 min) of UVR for 6 weeks. Data showed that UVR did not have major effect on human serum NAE in both skin phototypes II and V but increased 2-AG in human serum in both skin types but the more pronounced effect was evident in skin phototypes V rather than in skin phototypes II. Human serum docosahxaenoylethanolamide levels were found to be higher in White Caucasians group (skin phototypes II). Based on these it can be concluded that n-3 PUFA and UVR alter the endocannabinoids and NAE profile in HaCaT keratinocytes and 46BR.IN fibroblasts. In addition, results of the clinical study indicated that UVR has no major effects on serum endocannabinoids or NAE therefore, further studies are required to address this question in vivo.