Thesis (doctoral)--Katholieke Universiteit te Nijmegen.

A doença do enxerto contra o hospedeiro (DECH) é uma complicação que ocorre após o transplante alogênico de medula óssea. A doença é mediada por células T do enxerto que atacam as células e os tecidos do receptor; um processo inflamatório, que ataca vários órgãos e tecidos, sendo este processo responsável por 15% das causas de óbito após o acometimento da doença. As citocinas estão envolvidas na ativação das células T citotóxicas e células natural killer (NK), que causam as lesões nas glândulas salivares e exibem características de morte celular com infiltração de linfócitos conduzindo à apoptose. É conhecido que as unidades secretoras das glândulas salivares, após serem acometidas pela DECH, não recuperam o seu status funcional e a presença do infiltrado inflamatório pode ser um fator importante na fibrose das glândulas salivares e outros tecidos. Há evidências de uma redução significativa do fluxo salivar nos pacientes com DECH e de alterações importantes na proteômica salivar (IgA, IgG, lactoferrina) e polimorfismos que modifiquem a síntese de proteínas que devem ser consideradas para a evolução do paciente. Consequentemente os pacientes apresentam redução de fluxo salivar, com perda variável das unidades secretoras glandulares, comprometendo a qualidade de vida e os resultados do transplante. E para melhor compreensão da DECH, contribuindo para o diagnóstico precoce e na conduta destes pacientes, o presente estudo determinou o perfil proteômico dos pacientes com a doença do enxerto contra o hospedeiro crônica e comparou com o perfil de proteínas dos pacientes submetidos ao transplante de células tronco hematopoiéticas em cinco diferentes períodos, por meio da coleta de saliva, uma técnica não invasiva, e análise proteômica; além de comparar o perfil com os grupos controles (Líquen plano oral e indivíduos saudáveis). Foram incluídos neste estudo o total de 23 pacientes submetidos ao transplante de células-tronco hematopoiéticas, na Unidade de Transplante de Medula Óssea do Hospital das Clínicas da Universidade de São Paulo. As amostras foram submetidas a análises prévias em gel de poliacrilamida contendo dodecil sulfato de sódio (SDS) e gel bidimensional (2-DE) para o conhecimento do perfil proteômico destes pacientes. As análises foram feitas por espectrometria de massa e os dados obtidos foram confrontados com banco de dados humanos. As proteínas do grupo dos pacientes com DECHc foram comparadas com o grupo controle de indivíduos saudáveis, por meio do heatmap, e ressaltamos as proteínas de maior abundância. Portanto 16 proteínas mostraram uma maior expressão, Ig gamma-1 chain C region; Isoform H14 of Myeloperoxidase; Isoform 2 of 14-3-3 protein Sigma; Fibrinogen beta chain; Alpha- 1-acidic glycoprotein 1; Isoform gamma-A of Fibrinogen gamma chain; Hemopexin; Keratin type I CK 14; Alpha-2-Macroglobulin; Thioredoxin; Complement C3; Vitamin D; Keratin type I CK16; Lactoperoxidase; Cystatin B e Neutrophil elastase. No entanto, ao comparamos estas proteínas com os diversos períodos analisados e os grupos controles, ressaltamos a importância de três proteínas para a doença do enxerto contra o hospedeiro crônica: Isoform 2 of 14-3-3 protein sigma, Hemopexin e CK14 / Graft versus host disease (GVHD) is a complication that occurred after allogeneic bone marrow transplantation. The disease is mediated by graft T cells that attack as cells and tissues of the recipient; An inflammatory process, which attacks various organs and tissues, being responsible for 15% of the causes of death after the disease. Cytokines are involved in the activation of cytotoxic T cells and natural killer (NK) cells, which cause lesions in salivary glands and exhibit cell death characteristics with lymphocyte infiltration leading to apoptosis. It is known as the secretory units of the salivary glands, after being affected by GVHD, do not recover their functional state and the presence of the inflammatory infiltrate can be an important factor in the fibrosis of the salivary glands and other tissues. There is evidence of a significant reduction in salivary flow in patients with GVHD and significant changes in salivary protein (IgA, IgG, lactoferrin) and polymorphisms that modify a protein symptom that are considered for patient evolution. Consequently, patients with salary reduction, with variable loss of glandular secretory units, compromise quality of life and transplant results. In order to better understand GVHD, contributing to the early diagnosis and in the management of these patients, the present study determined the proteomic profile of patients with graft versus chronic host disease and compared them with the protein profile of patients submitted to cell transplantation Hematopoietic stem cells in five different periods, through the collection of saliva, a noninvasive technique and proteomic analysis; In addition to a profile with the control groups (Lichen planus oral and healthy individuals). Included in this study were the 23 patients submitted to hematopoietic stem cell transplantation in the Bone Marrow Transplantation Unit of the Hospital das Clínicas of the University of São Paulo. As samples were submitted to previous analyzes on polyacrylamide gel containing sodium dodecyl sulfate (SDS) and 2-dimensional gel (2-DE) to know the proteomic profile of these patients. The analyzes were done by mass spectrometry and the data obtained were compared with human data. The proteins of the group of patients with GVHDc were compared to the control group of healthy individuals by means of the Heatmap, and we emphasized as proteins of greater abundance. Therefore, 16 proteins show a greater expression, Ig gamma-1 chain C region; Isoform H14 of Myeloperoxidase; Isoform 2 of 14-3-3 protein Sigma; Fibrinogen beta chain; Alpha-1-acidic glycoprotein 1; Isoform gamma-A of Fibrinogen gamma chain; Hemopexin; Keratin type I CK 14; Alpha-2-Macroglobulin; Thioredoxin; Complement C3; Vitamin D; Keratin type I CK16; Lactoperoxidase; Cystatin B e Neutrophil elastase. Isoform 2 of 14-3-3 protein sigma, Hemopexin and CK14. Isoform 2 of 14-3-3 protein sigma, Hemopexin and CK14. However, when comparing these proteins with the various types of analyzes and the control groups, we emphasize the relevance of three proteins for the graft versus host disease: Isoform 2 of 14-3-3 protein sigma, Hemopexin and CK14

A doença do enxerto contra o hospedeiro (DECH) é uma complicação que ocorre após o transplante alogênico de medula óssea. A doença é mediada por células T do enxerto que atacam as células e os tecidos do receptor; um processo inflamatório, que ataca vários órgãos e tecidos, sendo este processo responsável por 15% das causas de óbito após o acometimento da doença. As citocinas estão envolvidas na ativação das células T citotóxicas e células natural killer (NK), que causam as lesões nas glândulas salivares e exibem características de morte celular com infiltração de linfócitos conduzindo à apoptose. É conhecido que as unidades secretoras das glândulas salivares, após serem acometidas pela DECH, não recuperam o seu status funcional e a presença do infiltrado inflamatório pode ser um fator importante na fibrose das glândulas salivares e outros tecidos. Há evidências de uma redução significativa do fluxo salivar nos pacientes com DECH e de alterações importantes na proteômica salivar (IgA, IgG, lactoferrina) e polimorfismos que modifiquem a síntese de proteínas que devem ser consideradas para a evolução do paciente. Consequentemente os pacientes apresentam redução de fluxo salivar, com perda variável das unidades secretoras glandulares, comprometendo a qualidade de vida e os resultados do transplante. E para melhor compreensão da DECH, contribuindo para o diagnóstico precoce e na conduta destes pacientes, o presente estudo determinou o perfil proteômico dos pacientes com a doença do enxerto contra o hospedeiro crônica e comparou com o perfil de proteínas dos pacientes submetidos ao transplante de células tronco hematopoiéticas em cinco diferentes períodos, por meio da coleta de saliva, uma técnica não invasiva, e análise proteômica; além de comparar o perfil com os grupos controles (Líquen plano oral e indivíduos saudáveis). Foram incluídos neste estudo o total de 23 pacientes submetidos ao transplante de células-tronco hematopoiéticas, na Unidade de Transplante de Medula Óssea do Hospital das Clínicas da Universidade de São Paulo. As amostras foram submetidas a análises prévias em gel de poliacrilamida contendo dodecil sulfato de sódio (SDS) e gel bidimensional (2-DE) para o conhecimento do perfil proteômico destes pacientes. As análises foram feitas por espectrometria de massa e os dados obtidos foram confrontados com banco de dados humanos. As proteínas do grupo dos pacientes com DECHc foram comparadas com o grupo controle de indivíduos saudáveis, por meio do heatmap, e ressaltamos as proteínas de maior abundância. Portanto 16 proteínas mostraram uma maior expressão, Ig gamma-1 chain C region; Isoform H14 of Myeloperoxidase; Isoform 2 of 14-3-3 protein Sigma; Fibrinogen beta chain; Alpha- 1-acidic glycoprotein 1; Isoform gamma-A of Fibrinogen gamma chain; Hemopexin; Keratin type I CK 14; Alpha-2-Macroglobulin; Thioredoxin; Complement C3; Vitamin D; Keratin type I CK16; Lactoperoxidase; Cystatin B e Neutrophil elastase. No entanto, ao comparamos estas proteínas com os diversos períodos analisados e os grupos controles, ressaltamos a importância de três proteínas para a doença do enxerto contra o hospedeiro crônica: Isoform 2 of 14-3-3 protein sigma, Hemopexin e CK14 / Graft versus host disease (GVHD) is a complication that occurred after allogeneic bone marrow transplantation. The disease is mediated by graft T cells that attack as cells and tissues of the recipient; An inflammatory process, which attacks various organs and tissues, being responsible for 15% of the causes of death after the disease. Cytokines are involved in the activation of cytotoxic T cells and natural killer (NK) cells, which cause lesions in salivary glands and exhibit cell death characteristics with lymphocyte infiltration leading to apoptosis. It is known as the secretory units of the salivary glands, after being affected by GVHD, do not recover their functional state and the presence of the inflammatory infiltrate can be an important factor in the fibrosis of the salivary glands and other tissues. There is evidence of a significant reduction in salivary flow in patients with GVHD and significant changes in salivary protein (IgA, IgG, lactoferrin) and polymorphisms that modify a protein symptom that are considered for patient evolution. Consequently, patients with salary reduction, with variable loss of glandular secretory units, compromise quality of life and transplant results. In order to better understand GVHD, contributing to the early diagnosis and in the management of these patients, the present study determined the proteomic profile of patients with graft versus chronic host disease and compared them with the protein profile of patients submitted to cell transplantation Hematopoietic stem cells in five different periods, through the collection of saliva, a noninvasive technique and proteomic analysis; In addition to a profile with the control groups (Lichen planus oral and healthy individuals). Included in this study were the 23 patients submitted to hematopoietic stem cell transplantation in the Bone Marrow Transplantation Unit of the Hospital das Clínicas of the University of São Paulo. As samples were submitted to previous analyzes on polyacrylamide gel containing sodium dodecyl sulfate (SDS) and 2-dimensional gel (2-DE) to know the proteomic profile of these patients. The analyzes were done by mass spectrometry and the data obtained were compared with human data. The proteins of the group of patients with GVHDc were compared to the control group of healthy individuals by means of the Heatmap, and we emphasized as proteins of greater abundance. Therefore, 16 proteins show a greater expression, Ig gamma-1 chain C region; Isoform H14 of Myeloperoxidase; Isoform 2 of 14-3-3 protein Sigma; Fibrinogen beta chain; Alpha-1-acidic glycoprotein 1; Isoform gamma-A of Fibrinogen gamma chain; Hemopexin; Keratin type I CK 14; Alpha-2-Macroglobulin; Thioredoxin; Complement C3; Vitamin D; Keratin type I CK16; Lactoperoxidase; Cystatin B e Neutrophil elastase. Isoform 2 of 14-3-3 protein sigma, Hemopexin and CK14. Isoform 2 of 14-3-3 protein sigma, Hemopexin and CK14. However, when comparing these proteins with the various types of analyzes and the control groups, we emphasize the relevance of three proteins for the graft versus host disease: Isoform 2 of 14-3-3 protein sigma, Hemopexin and CK14

Orientador: Carlos Takahiro Chone / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-14T17:38:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ortiz_Erica_M.pdf: 2620936 bytes, checksum: e99104f6d864e8b71f9b41dcfe9763c4 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: A imunossupressão é a principal causa de rinossinusite recorrente no transplante de células tronco hematopoiéticas (TCTH) com uma incidência aumentada na Doença do Enxerto contra o Hospedeiro (DECH) pós-TCTH. Descrições histológicas de mucosas oral, pulmonar e intestinal associadas ao TCTH e a DECH têm sido descritas. Porem, para entender melhor a fisiopatogenia da resposta imune nos pacientes transplantados, verificou-se a histologia e ultraestrutura da mucosa nasossinusal dos pacientes TCTH com e sem DECH. O processo unciforme de 24 pacientes submetidos ao TCTH (19 com DECH e 5 sem) foi submetido à análise histológica através das microscopias óptica e eletrônica de transmissão (ME). A ME mostrou alterações na estrutura ciliar, quantidade de mitocôndria, microvilos e vacuolização citoplasmática. Todos os transplantados com rinossinusite apresentaram perda ou ausência significante de cílios (P=0.018). Corpúsculos apoptóticos estavam aumentados e células caliciformes, diminuídas no epitélio nasossinusal dos pacientes transplantados com DECH crônica (P=0.04). Esta destruição epitelial poderia facilitar a penetração bacteriana ou viral, desencadeando uma recorrência ou exacerbação da infecção. / Abstract: Immunosuppression is the leading cause of recurrent sinus infections following Hematopoietic Stem Cell Transplantation (HSCT) with increased incidence of sinusitis in patients with chronic graft versus host disease (GVHD) following HSCT. Histological descriptions of the oral mucosa, lung ciliary epithelium and intestinal mucosa related to HSCT and GVHD have been described. However, we sought to verify the histological and ultra structural aspects of nasal mucosa in patients following HSCT with and without GVHD in order to better understand the pathophysiology of the immune response. The uncinate processes from 24 HSCT (19 with GVHD, 5 without) patients were subjected to histological analyses via light and transmission electron microscopy (TEM). TEM revealed altered cilia structure, mitochondria quantity, microvilli, cytoplasm vacuolization. All HSCT patients with rhinosinusitis had significant loss or absence of cilia (P=0.018). Apoptotic bodies were increased and Goblet cells decreased in nasal epithelium from patients with chronic GVHD (P=0.04).This tissue destruction would facilitate the bacterial and viral penetration and may result in a recurrence or exacerbation of the infection. / Mestrado / Otorrinolaringologia / Mestre em Ciências Médicas

Orientadores: Ester Maria Danielli Nicola, Eulália Sakano / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-25T13:39:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ortiz_Erica_D.pdf: 2854168 bytes, checksum: c4f7e3d14049e592b11a3b339481fa12 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: Introdução: Acredita-se que a imunossupressão seja única causa para maior prevalência de rinossinusites (RS) no transplantado de células tronco hematopoiéticas (TCTH) principalmente naqueles com Doença do Enxerto contra o Hospedeiro (DECH) crônica. Pacientes submetidos ao TCTH podem apresentar alterações nasossinusais, que podem se relacionar ao próprio transplante, assim como pelo regime de condicionamento ou pela DECH. Entretanto, estas alterações nasossinusais não estão bem descritas na literatura assim como a associação entre estas e a rinossinusite. Objetivo: verificar a histologia e ultraestrutura da mucosa nasossinusal com RS no TCTH com e sem DECH; e verificar a influencia da RS nas possíveis alterações histológicas nestes pacientes. Método: estudo prospectivo exploratório de coorte transversal com análise estatística de dados obtidos da avaliação de mucosa de processo unciforme de pacientes transplantados com (16) e sem DECH (8) com RS; através da microscopia eletrônica de transmissão e óptica. Comparação da recorrência das RS e alterações histológicas. Resultados: 47% (14) tiveram apenas 1 ou 2 episódios e 33%, mais de 3 episódios de rinossinusite. Apenas a presença de microvilosidades foi significativamente maior nos pacientes sem GVHD (p=0,05). Não houve diferença significativa na quantidade de cílios, ultraestrutura ciliar, metaplasia escamosa, células caliciformes, vacuolização citoplasmática, densidade do infiltrado inflamatório, linfócitos, eosinófilos e corpúsculos apoptóticos intraepiteliais, glândulas mucosas, espessura da membrana basal, edema e fibrose subepiteliais entre os grupos com e sem DECH. Houve diminuição significante de cílios conforme maior recorrência de rinossinusite (p=0,008). Conclusão: pacientes com RS e TCTH não apresentaram diferenças nas alterações histológicas nasossinusais, exceto aumento de microvilosidades naqueles sem a DECH. Os transplantados com e sem DECH apresentaram somente diminuição dos cílios conforme o aumento da recorrência de RS / Abstract: INTRODUCTION: It is believed that immunosuppression is the sole cause for the occurrence of rhinosinusitis in hematopoietic stem cell transplant (HSCT). There is a high incidence of sinusitis in recipient patients, especially in those with Chronic Graft-Versus-Host disease (GVHD). Histopathological abnormalities were described in recipients¿ sinus mucosa compared to immunocompetent patients. There were also mucosal abnormalities related to cytotoxicity in the transplanted patients with chronic GVHD but no difference in ultrastructure between HSCT patients with and without GVHD, except for increased goblet cells in patients without GVHD. The relation between the sinonasal mucosa abnormalities of patients with and without GVHD and rhinosinusitis is not well established yet. OBJECTIVE: To verify the ultrastructure of the sinonasal mucosa of HSCT with and without GVHD with rhinosinusitis to understand the cause of high sinusitis incidence in recipients with and without GVHD. METHOD: A prospective study with preliminary exploratory statistical analysis of data obtained from the evaluation of the uncinate process mucosa of patients transplanted with (16) and without GVHD (8) with rhinosinusitis by transmission electron and optical microscopy. RESULTS: Of the patients, 47% (14) had only 1 or 2 episodes, and 33% had more than 3 episodes of rhinosinusitis. Only the presence of microvilli was significantly higher in patients without GVHD. There was no significant difference in the amount of cilia, ciliary ultrastructure, squamous metaplasia, goblet cells, vacuolization, density of the inflammatory infiltrate, intraepithelial lymphocytes, eosinophils, mucous glands, apoptotic corpuscles intraepithelial basement membrane thickness, edema and subepithelial fibrosis between groups. There was a significant decrease of cilia with higher recurrence of rhinosinusitis. CONCLUSION: There was an increase in microvilli HSCT without GVHD with rhinosinusitis, and the ultrastructure and histological changes of HSCT with and without GVHD did not change with the recurrence of rhinosinusitis. However, there was a decrease of cilia in the epithelium of the sinonasal HSCT with higher recurrence of rhinosinusitis / Doutorado / Otorrinolaringologia / Doutora em Ciências Médicas

Orientador: Maria Elvira Pizzigatti Corrêa / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-22T13:37:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Feio_PatriciadoSocorroQueiroz_D.pdf: 2959247 bytes, checksum: a2ac8e141dbed328b3bf56ecc39c6db1 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: Apesar dos avanços, a doença do enxerto contra o hospedeiro (DECH) ainda é principal complicação pós-transplante alogênico de células-tronco hematopoéticas (alo TCTH), que limita sobrevida e induz maior morbidade nos pacientes. A descoberta de proteínas diferentemente presentes na DECH pode ser capaz de tornar o diagnóstico mais precoce e preciso, além de permitir melhor tratamento. Neste contexto, o estudo dos proteomas busca encontrar proteínas que funcionem como biomarcadores e a utilização da saliva para este fim apresenta vantagens por apresentar coleta não invasiva, indolor e de baixo custo. O objetivo deste estudo foi o de avaliar prospectivamente o proteoma salivar em pacientes submetidos ao alo TCTH e comparar a perfil das proteínas em pacientes que desenvolveram a DECH (DECH+) e os que não desenvolveram (DECH-), elaborando um painel de potenciais biomarcadores para esta doença. Foram incluídos neste trabalho 20 pacientes submetidos ao transplante alogênico de células-tronco hematopoéticas na Unidade de Transplante de Medula Óssea do Hospital de Clínicas da Unicamp. Todos os pacientes foram submetidos à avaliação odontológica e adequação do meio bucal quando necessário, além de serem avaliados para grau de mucosite, parâmetros clínicos de hipossalivação e avaliação das lesões orais de DECH. Foram coletadas amostras de saliva não estimulada em 3 períodos: pré-TCTH, no d+8-10 e d+ 80-100. Adicionalmente, foi avaliado o fluxo salivar dos pacientes em todas as coletas. Todas as amostras foram acondicionadas com inibidores de proteases para avaliação proteômica. A análise das amostras foi realizada por espectrometria de massas após digestão com tripsina e separação dos peptídeos por uma coluna reversa de nanocromatografia líquida. Os dados obtidos foram confrontados com o banco International Protein Index (IPI) human utilizando o software Mascot v.2.3.2.0 ® e os arquivos resultantes da busca foram carregados no software Scaffold ®. As proteínas que mostraram variação em razão de 100% (? 0,5 e >2) entre os grupos DECH+ e DECH- no período d+8-10 para d+80-100 foram consideradas significativas. Não houve correlação estatisticamente significativa dos parâmetros clínicos de hipossalivação com o grupo DECH+. Entretanto na avaliação longitudinal dos pacientes, a presença de saliva espessa e viscosa mostrou-se significativa (p = 0,003). Foram identificadas 69 proteínas nos pacientes avaliados, sendo as mais frequentes relacionadas à defesa e imunidade. No presente estudo, dez proteínas mostraram alteração no grupo DECH+, porém 4 estavam presentes em apenas uma amostra com a doença. Portanto, as proteínas Lactoferroxin-B, IGL@ protein, Submaxillary gland androgen-regulated protein 3B, Cystatin-SA, Cystatin-S e Prolactin-inducible protein foram consideradas como potencias biomarcadores para a doença do enxerto contra hospedeiro / Abstract: The graft-versus-host disease (GVHD) remains the major clinical complication of allogeneic hematopoietic stem cell transplantation (allo-HSCT), limiting survival and inducing major morbity. Differently expressed proteins in GVHD have the potential of improving early and accurate diagnosis, also allow a better treatment. Proteome analysis is emerging for the discovery of proteins which function as biomarkers and saliva can be useful for this purpose because offers an easy, inexpensive, safe, and non-invasive approach. The aims of this study were to evaluate salivary proteome in patients underwent allo-HSCT and compare the proteins expressions between patients with and without GVHD and elaborate a panel of possible biomarkers for this condition. Twenty patients underwent allo- HSCT at the Bone Marrow Transplantation Unit - UNICAMP were enrolled in this study. Patients underwent dental evaluation before HSCT and oral environment stabilization were performed when necessary. Also, an evaluation of grade of mucositis, clinical signs of hyposalivation and oral GVHD lesions. Unstimulated saliva samples were collected on 3 different times: pre-HSCT, d+8-10 e d+ 80-100. Additionally, the unstimulated salivary flow rate was measured. Thus, these samples were stored with protease inhibitors for proteomic evaluation. The samples were analyzed by mass spectrometry after protein digestion with trypsin and peptides separated by a Reverse Phase-nanoUltra Perfomance Liquid Chromatography. Protein search was performed using the Mascot v.2.3.2.0 ® engine against International Protein Index (IPI) human Database and the output files of the searches were loaded onto Scaffold software ®. The proteins which showed 100% fold change (? 0,5 e >2) between d+8-10 and d+80-100 were significant. There was no statistically significant correlation of clinical parameters of hyposalivation with GVHD+ group. However in the longitudinal assessment of patients, the presence of thick and viscous saliva was significant (p = 0,003). Sixty nine proteins were identified and the majority was involved in defense and immunity. The results indicated ten proteins differentially expressed in GVHD+ group, but 4 were presented only in one sample with disease. Therefore, Lactoferroxin-B, IGL @ protein, Submaxillary gland androgen-regulated protein 3B, Cystatin SA, Cystatin-S and Prolactin-inducible protein were identified as potential biomarkers for graft-versus-host disease / Doutorado / Patologia / Doutora em Estomatopatologia

Orientador: José Francisco Comenalli Marques Júnior / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-21T08:08:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Moraes_MaraCabral_M.pdf: 399240 bytes, checksum: bb189c0420b266a0b620156bd10cd435 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: INTRODUÇÃO: A ILD vem sendo utilizada como opção terapêutica para recaída de neoplasias hematológicas após transplante alogênico. Contudo, este procedimento não é isento de riscos e sua indicação deve ser criteriosa. Neste trabalho avaliamos a ILD quanto à eficácia da coleta; efeitos adversos para os doadores e pacientes e efeitos quanto à remissão da doença, redução de recaída e mortalidade. MÉTODOS: Foi realizado estudo retrospectivo dos pacientes (n=40) que receberam ILD, no Hemocentro da UNICAMP, de março 1995 a janeiro 2008, e dos respectivos doadores (n=40). As características dos pacientes, complicações e sobrevida foram comparadas a um grupo de pacientes (n=264) que realizou transplante alogênico e não recebeu ILD. RESULTADOS: As 54 coletas de linfócitos analisadas atingiram o alvo estabelecido de '10 POT. 7' CD3+/Kg receptor, sem nenhuma reação grave para os doadores. Não observamos diferença estatística na mortalidade (p= 0,85) ou incidência de DECHa (p=0,231) entre os grupos de pacientes. No entanto, as causas de óbito foram diferentes (p<0,001), com maior mortalidade por doença no grupo em estudo e por outras causas no grupo comparativo. A incidência de DECHc e remissão completa foram maiores no grupo comparativo (p<0,001), enquanto o tempo para o óbito foi maior no grupo em estudo (p=0,009). CONCLUSÕES: A coleta de linfócitos foi eficaz e segura para o doador. Para os pacientes a DECH se sobressaiu como efeito adverso, sem aumento após a ILD. Não foi observado aumento na remissão da doença ou queda na mortalidade após a ILD, contudo, o tempo para o óbito foi maior. Outros fatores e a heterogeneidade das amostras podem ter contribuído para os resultados encontrados / Abstract: BACKGROUND: Donor lymphocyte infusion (DLI) has been used as a therapeutic option for hematological recurrences after allogeneic transplantation. However, this procedure is not devoid of risks and its indication must be precise. In this article we assess DLI regarding collection efficacy; adverse effects in donors and patients and its impact on disease remission, recurrence induction and mortality. METHODS: A retrospective study of patients (n=40) who received DLI and their respective donors was performed at Hemocentro, UNICAMP, between March 1995 and January 2008. Patient characteristics, complications and survival were compared to a comparative group (n=264) consisting of patients who underwent allogeneic transplantation, but did not receive DLI. RESULTS: All the 54 lymphocyte collection procedures reviewed reached the set target of '10 POT. 7' CD3+/Kg receptor, with no serious adverse reactions to the donors. We did not observe statistical difference in mortality (p=0.85) nor in the incidence of acute GVHD (p=0.231) between the two patient groups. However, causes of death were statistically different (p<0.001), with a higher disease-related mortality rate in the study group and for other causes in the comparative group. Chronic GVHD incidence and complete remission were higher in the comparative group (p<0.001), while the overall survival was longer in the study group (p=0.008). CONCLUSIONS: Lymphocyte collection was efficient and safe to the donor. As for patients, GHVD was the most important side effect but did not have a higher incidence after DLI. We did not observe an increase in disease remission or decrease in mortality rate after DLI; however, overall survival was longer. Other factors and the sample heterogeneity might have contributed to the results observed / Mestrado / Clinica Medica / Mestra em Clínica Médica

Orientador: Carmino Antonio De Souza / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-24T04:16:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Miranda_ElianaCristinaMartins_D.pdf: 1801629 bytes, checksum: b4c847d7141a9b207af7438bdef8c791 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: O estudo analisa duas metodologias que estão sendo usadas para estimar a probabilidade de eventos. Um método é a inversão do Kaplan-Meier (1-KM), o qual não considera eventos competitivos, e o outro método é a função da incidência cumulativa (FIC). O estudo contemplou a definição do conceito de risco competitivo e a aplicação dos métodos citados em um conjunto de dados de pacientes submetidos ao transplante de células-tronco hematopoiéticas (TCTH). Os critérios de inclusão foram pacientes consecutivos transplantados no período de Janeiro de 1994 a Dezembro de 2010, com diagnóstico de leucemia aguda (LA) ou leucemia mieloide crônica (LMC). O evento de interesse foi a doença do enxerto contra o hospedeiro (DeCH) crônica, enquanto os eventos competitivos foram: recaída e morte prévia a DeCH crônica. O resultado após a aplicação do método 1-KM para o grupo de pacientes com LA foi de 52% e estratificado pelo tipo de enxerto foi 44% para medula óssea (MO) e 77% para sangue periférico (SP) p= 0.003. Quando aplicado o método FIC a probabilidade geral foi de 45% e por tipo de enxerto foi 17% para MO e 33% para SP, p= 0.00002. No grupo de pacientes diagnosticados com LMC, usando a mesma racional os resultados foram similares. Não há comparações entre os métodos estatísticos, principalmente porque o pressuposto de se considerar o evento competitivo é aplicado somente na metodologia FIC. A fonte de células SP cotejada com fonte de células MO conduzem a uma incidência cumulativa maior de DeCH, independente da doença de base. Os resultados apresentaram, na grande maioria, diferenças grandes entre os testes, indicando a importância de se averiguar os detalhes no momento da aplicação / Abstract: This study presents two methodologies that have been used to estimate the probability of events. One method is the Kaplan-Meier inversion (1-KM), which no consider the competitive events, and another one is the cumulative incidence function (CIF). The study showed the definition of competitive risk concepts and its application in the database of patients submitted to the hematopoietic stem cell transplantation (HSCT). Inclusion criteria were consecutive transplanted patients in the period between January 1994 to December 2010, with acute leukemia (AL) or chronic myeloid leukemia (CML). The interest event was chronic graft versus host disease (GVHD), insofar, competitive events were relapse or early death previous to chronic GVHD. The results after 1-KM application in the AL group was 52% and stratified by source of graft was 44% in bone marrow (BM) and 77% in peripheral blood (PB) with p=0.003. When CIF test applied the results was 45% and by source of graft was 17% in BM and 33% in PB, p= 0.00002. In the CML group the results were similar. There is no comparison between the statistical tests, mainly because their assumptions are not the same. PB as source of graft induces a higher incidence of chronic GVHD, independent of disease. All results presented, in the mayor, huge differences among the tests, indicating the importance to check the details at time of application / Doutorado / Clinica Medica / Doutora em Clínica Médica

O HPgV (Pegivirus Humano), conhecido anteriormente por GBV-C, causa infecção assintomática, persistente e com alta carga viral. Sendo o vírus de RNA sem patologia associada mais prevalente no mundo até os dias de hoje, os estudos in vitro ainda não foram capazes de mimetizar a replicação in vivo, permanecendo pouco esclarecidos vários aspectos de sua biologia. Estudos em macacos mostraram que os órgãos responsáveis pela maior replicação viral são o baço e a medula óssea, no entanto as células específicas permissíveis à infecção ainda não foram determinadas. Na década de 90, o HPgV ganhou notoriedade por diminuir os efeitos patológicos do HIV e aumentar a sobrevida de pacientes coinfectados HIV/HPgV, através da diminuição da ativação do sistema imune. Devido a essa característica, diversos estudos tentaram associar a presença de viremia a doenças hematológicas e um deles mostrou que a viremia de HPgV parece estar associada com o desenvolvimento de linfoma não- Hodgkin, porém muitas variáveis de confusão parecem influenciar esse resultado. Em conjunto, os dados mostram que o HPgV pode ter influência sobre a maturação e liberação de células progenitoras da medula óssea e, portanto, tornou-se primordial avaliar o impacto da viremia em pacientes com doenças hematológicas e definir o tropismo viral. Para tanto, o presente trabalho analisou a dinâmica de exposição à viremia de HPgV em pacientes submetidos ao transplante de células-tronco hematopoiéticas (HSCT), em cadáveres autopsiados pelo Sistema de Verificação de Óbitos da Capital de São Paulo (SVOC-SP) e em pacientes submetidos à cirurgia de artroplastia pelo Instituto de Ortopedia e Traumatologia (IOT) do HCSP. A carga viral de HPgV foi mensurada por qRT-PCR em Tempo Real levando em consideração valores adquiridos com um curva padrão desenvolvida para este trabalho. Para os pacientes HSCT, o efeito da presença de viremia antes e após o procedimento foi avaliada quanto aos principais desfechos do transplante: doença enxerto-hospedeiro aguda (aGVHD), recaída da doença hematológica primária e mortalidade. Para amostras SVOC e IOT, células específicas dos tecidos (cérebro, fígado, baço, linfonodo, medula óssea e sangue) foram avaliadas quanto à quantidade de RNA viral de polaridade positiva e negativa, a fim de quantificar a replicação e definir o tropismo do vírus. Os resultados mostraram que a prevalência de HPgV encontrada nos pacientes HSCT foi maior do que em estudos similares: 42% para as amostra pré- HSCT e 31% para as amostras pós-HSCT; porém, para as amostras SVOC, a prevalência foi menor do que o esperado: 1,2%. A presença de alta carga viral de HPgV em pacientes HSCT foi associada com aumento da taxa de incidência de aGVHD (95% CI 1,05-5,37, p=0,038). Dada a alta prevalência de HPgV na população brasileira, é essencial confirmar esse achado em outras coortes, de modo a determinar se o monitoramento do HPgV pode beneficiar o cuidado a esses pacientes. Nas amostras SVOC e IOT, a medula óssea apresentou maior número de populações celulares com replicação viral, com destaque para as células B progenitoras e para as células dendríticas. Porém, devido às condições da coleta e do processamento das amostras, o tipo celular permissível à infecção não pôde ser identificado com clareza, portanto fazendo-se necessária a coleta de um número maior de amostras SVOC / HPgV (Human Pegivirus), previously known as GBV-C, causes asymptomatic, persistent and high viral load infection. To date, it is the most prevalent RNA virus without associated pathologies in the world, yet in vitro studies have not yet been able to mimic the in vivo replication, consequently many aspects of its biology remaining unclear. Studies in non-humam primatas have shown that the organs responsible for the greatest viral replication are spleen and bone marrow, however the specific cells permissible for infection have not yet been determined. In the 1990s, HPgV gained notoriety by decreasing the pathological effects of HIV and increasing the survival of coinfected HIV/HPgV patients, by decreasing the activation of the immune system. Because of this characteristic, several studies have attempted to associate the presence of viremia with haematological diseases, and one has shown that HPgV appears to be associated with the development of non-Hodgkin\'s lymphoma, but many confounding variables still seems to influence this outcome. Together, the data show that HPgV may influence the maturation and release of bone marrow progenitor cells and therefore it has become crucial to evaluate the impact of HPgV viremia in patients with haematological diseases and to define viral tropism. Therefore, the present study analyzed the dynamics of HPgV viremia exposure in patients submitted to hematopoietic stem cell transplantation (HSCT), in cadavers autopsied by the São Paulo City Death Verification System (SVOC-SP) and in patients submitted to arthroplasty surgery by the Orthopedics and Traumatology Institute (IOT) of the Clinics Hospital of Sao Paulo. The HPgV was identified by real-time qRT-PCR and the viral load quantification was estimated by a standard curve developed for this work. For HSCT patients, the effect of viremia before and after the procedure was evaluated for the main transplant outcomes: acute graft vs host disease (aGVHD), relapse of primary haematological disease and mortality. For SVOC and IOT samples, tissue-specific cells (brain, liver, spleen, lymph node, bone marrow and blood) were evaluated for the amount of viral positive and negative RNA strains, in order to quantify replication and define virus tropism. The results showed that the prevalence of HPgV found in HSCT patients was higher than in similar studies: 42% for pre-HSCT samples and 31% for post-HSCT samples; however, for SVOC samples, the prevalence was lower than expected: 1.2%. The presence of high viral load of HPgV in HSCT patients was associated with an increase in the incidence rate of aGVHD (95% CI 1.05-5.37, p = 0.038). Given the high prevalence of HPgV in the Brazilian population, it is essential to confirm this finding in other cohorts, in order to determine if HPgV monitoring can improve the care of these patients. In the SVOC and IOT samples, the bone marrow presented a higher number of cell populations with viral replication, especially the progenitor B cells and the dendritic cells. However, due to the conditions of specimen collection and processing, the major permissible cell could not be clearly identified, thus making it necessary to collect a larger number of SVOC samples

A doença do enxerto versus hospedeiro (DEVH) é uma grave complicação do transplante de órgãos sólidos, com alta mortalidade. Seu estudo tem sido limitado pela carência de modelos experimentais apropriados. Descreve-se um modelo de DEVH baseado no aumento do quimerismo, sua evolução clínica, histopatológica, do número das células quiméricas, do perfil das citocinas e da tolerância imunológica. Ratos Lewis (LEW) foram submetidos a transplante simultâneo de intestino delgado e medula óssea provenientes de ratos ACI (grupo de estudo - E) ou LEW (grupo controle - C), tratados com FK-506 (1 mg/Kg/dia) entre o 0 e 13o PO, e uma dose semanal daí por diante. Os ratos foram divididos nos seguintes grupos: E1- 6 ratos sacrificados no 120o PO. E2- 8 ratos após apresentarem sinais clínicos graves de DEVH entre o 189o e o 271o PO. Como controle, ratos LEW foram receptores dos mesmos tipos de enxertos provenientes de ratos LEW, submetidos à mesma imunossupressão e foram assim divididos: C1- 6 ratos sacrificados no 120o PO, C2- 5 ratos sacrificados entre o 223o e o 270o PO. A citometria de fluxo foi realizada para quantificar a porcentagem das células linfóides de ACI doadores no sangue periférico nos E1, E2 em 6 períodos: 30o PO, 65o PO, 95o PO, 120o PO, 160o PO, 200o PO. Os animais foram examinados 2 vezes por semana à procura de sinais de DEVH (rash cutâneo, perda de peso, de pelo e hiperqueratose). No sacrifício dos animais do grupo E1 e C1, foram colhidas amostras de língua (LI), de linfonodos cervicais (LC), intestino delgado do receptor e do enxerto para análise das citocinas IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IFN-gama e TNF-alfa por meio da reação em cadeia da polimerase. Em todos os grupos foram também colhidas amostras destes órgãos para histopatologia e nos animais do grupo E2 linfonodos cervicais foram processados para análise da reatividade celular por meio da reação mista dos linfócitos (MLR). A evolução clínica e histopatológica foi graduada de 0 a 3 de acordo com a severidade dos sintomas e do infiltrado mononuclear das amostras. Os ratos dos grupos E1 e E2 iniciaram sinais da DEVH entre o 84o e 115o PO. Os ratos dos grupos C1 e C2 não apresentaram evidência de DEVH. Amostras de LI e LC dos ratos do grupo E1 apresentaram alterações histopatológicas grau 2 e do grupo E2 apresentaram alterações histopatológicas grau 3, respectivamente. Nenhuma alteração histopatológica foi encontrada nos ratos do grupo controle e em amostras do ID. Nenhuma alteração histopatológica foi encontrada no intestino delgado do receptor e do enxerto. O aumento da porcentagem de células do doador no sangue periférico do receptor foi progressivo chegando a 5,4±2.3% no 10o período, 21±4,6% no 3o período e 39,3±4% no 6o período. IL-2, IL-6, IL-10, IFN-gma e TNF-alfa estiveram aumentados em língua e IL-4, IL-6, IL-10, IFN-gama e TNF-alfa em linfonodos cervicais. Os linfócitos de ratos do grupo E2 mostraram hiporreatividade aos de ratos ACI e hiperreatividade aos de ratos PVG (terceira parte) denotando tolerância imunológica. Neste modelo experimental há uma inexorável evolução imunológica para DEVH; existe correlação direta entre o aumento do quimerismo em sangue periférico e da expressão de citocinas em língua e linfonodos cervicais e a severidade da DEVH, além da indução de tolerância imunológica do rato do grupo E2 quimérico ao rato ACI normal. / Graft-versus-host disease (GVHD) has been a major concern after small bowel transplantation (SBTX) and the lack of suitable experimental models has limited the study of GVHD after solid organ transplantation. Here we describe a re1evant experimental model of GVHD after fully allogeneic SBTX based on chimerism augmentation, its clinical and histophatological evolution, cytokine involvement, responsible donor cell and immunologic tolerance analysis. LEW rat recipients received orthotopic SBTX and simultaneous donor bone marrow cell infusion (250x106), from ACI rats (experimental group - E) or LEW (control group C). FK-506 was administered dayly at a dose of 1 mg/kg on day 0 to 13, then continued as a weekly injection of same dose until the experimental end point. The recipients were divided in the following groups: E1 - 6 rats sacrificed at 120° POD. E2 - 8 rats sacrificed with critical GVHD between DPO 189 to 271. LEW recipient of LEW grafts, under the same immunossupression were used as control and divided as: C1 - 6 rats sacrificed at POD 120; C2- 5 rats sacrificed between 223 and 270 POD the number of donor cell in the recipient circulation was determined by flowcytometry in 6 pos-operative time: 30, 65, 95, 120, 160, 200. The rats were analyzed twice a week for body weigh and searching for signs of GVHD (cutaneous rush, hiperkeratosis and loss of hair and body weigh). At the sacrificed, samples from tongue (TG), cervical lymph node (CLN), donor (SBD) and recipient (SBR) small bowel were taken from all animals for histophatology and from E1 and C1l animals for IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IFN-gama e TNF-alfa cytokines analysis using reverse transcription polymerase chain reaction. Samples from cervical lynph nodes of 5 animals from group E2 were used for mixed lymphocyte reaction for tolerance analysis. The clinical and histophatological evolution of the disease were evaluated from degree 0 to 3 according to the severity. GVHD in E1 and E2 animals started between 84 and 115 POD. Histophatological analysis of TG and CLN showed that E1 animals present GVHD grade 2 and E2 animals grade 3. The increase of donors cells in the recipient circulation was progressive and account for 5.4± 2.3% at POD 30, 21.4±4.6% at POD 95 and 39.3±4% at POD 200. IL-4, IL-6, IL-10, IFN-gama e TNF-alfa were upregulated in CLN and IL-2, IL-6, IL-10, IFN-gama e TNF-alfa were upregulated in TG when compared with the respective controls. The lymphocytes from E2 group showed hyporeactivety to lymphocytes of normal ACI and hypereactivety to those of PVG, meaning tolerance. No cytokines alteration was noted in SBD neither SBR. Animals from group C1 and C2 did not present any sign of disease. This result show that GVHD is a inexoravel evolution under the experimental conditions of this study and the evolution of the disease is near correlated with the augmentation of the donor cells in the recipient circulation and upregulation of cytokines gene expression in target organs. Tolerance to the same donor strain lynphocytes was also noted.