Here we report the expression and purification of two recombinant Fasciola hepatica enzymes, catL2 and catL5 which were used to perform cleavage studies with substrates potentially encountered by the parasite in vivo; BSA, hIgG3K and the important T cell marker, CD4. We examined the digestion products generated by the cleavage of human CD4 with catL5 using mass spectrometry and predicted candidate cleavage sites by performing a theoretical digest of the protein. / Ovine CD4 is also of interest to us as a target of F. hepatica cathepsin L activity. Here we confirm a recently reported ovine CD4 cDNA sequence and the existence of a single nucleotide polymorphism (T/C) within this sequence. The polymorphism translates to a serine-proline switch near the hinge region of the protein. Additionally, we have found that this polymorphism is also present in genomic DNA, suggesting that two alleles of CD4 exist in the ovine genome.

Orientador: Fernando Gomes Romero / Coorientador: Carlos Antonio Caramori / Banca: Anderson Marliere Navarro / Banca: Sergio Alberto Rupp Paiva / Resumo: Entre as complicações da cirrose, a encefalopatia hepática (EH) tem alta prevalência e interfere diretamente na qualidade de vida dos pacientes. O estado nutricional possui extrema importância para o prognóstico da doença, estando independentemente ligado a morbi-mortalidade. Por conta disso, a avaliação nutricional é fundamental para que seja realizado o diagnóstico nutricional precoce e assim se inicie o tratamento dietoterápico. No entanto, a avaliação do estado nutricional desses pacientes é um desafio, porque muitas das ferramentas utilizadas na população saudável podem ter seus resultados afetados pela retenção hídrica e pela depleção muscular, bastante comuns em cirróticos. A dietoterapia indicada para esses pacientes deve ser hipercalórica e hiperproteica, porém, a ingestão de proteínas é historicamente um ponto controverso do tratamento dietético. Nosso objetivo foi avaliar o estado nutricional através de diferentes métodos, a ingestão alimentar com ênfase na ingestão proteica e também a qualidade de vida de pacientes cirróticos com EH e observar a relação desses fatores entre si. O estudo foi transversal e incluiu 60 indivíduos com cirrose e EH submetidos à avaliação do consumo alimentar por recordatório de 24 horas, da qualidade de vida pelo questionário SF-36 e do estado nutricional através da bioimpedância elétrica (BIA), do exame de absorciometria por raios X de dupla energia (DEXA), da avaliação antropométrica e da força de preensão palmar (FAM). A média de idade foi 56,1 ± 12,9 anos e 61,7% dos indivíduos tinha EH clinicamente manifesta (os demais tinham a forma subclínica). Na avaliação do estado nutricional, o índice de massa corporal (IMC) detectou prevalência de sobrepeso e obesidade em 56,7% dos indivíduos e os exames de BIA e DEXA mostraram médias elevadas de porcentagem de massa gorda (29,8 ± 8,0 % e 30,1 ± 7,0 %, respectivamente). Ao mesmo tempo, outros... / Abstract: Hepatic encephalopathy (HE) has high prevalence among cirrhosis complications and has a big impact on quality of life of patients. Additionally, the nutritional status of these patients is important and independently linked to morbidity and mortality. For this reason, nutritional evaluation is essential to provide early nutrition diagnosis, allowing the start of the dietary treatment. However, the assessment of nutritional status of these patients is a challenge because many of the tools applied to the healthy population can be altered by water retention and muscle depletion, quite common in cirrhotic. These patients should receive high-calorie and high-protein diet, but the protein intake is historically a controversial point in the dietary treatment of cirrhotic individuals. The aims of this study were to evaluate the nutritional status of cirrhotic subjects with HE by different methods, investigate their food and protein intake and their quality of life, observing the relations of these factors to each other. This was a cross-sectional study that included 60 patients, whose dietary intake was assessed through 24-hour recall, quality of life evaluated using the SF-36 questionnaire and the nutritional status by bioelectrical impedance analysis (BIA), dual energy X-ray absorptiometry (DEXA), anthropometric assessment and handgrip strength (HGS). The mean age was 56.1 ± 12.9 years, and 61.7% of subjects had overt HE (the remaining patients had the subclinical form). The body mass index (BMI) detected a high prevalence of overweight and obesity (56,7%), whilst BIA and DEXA pointed a high percentage of body fat (29.8 ± 8.0 ± 7.0% and 30.1%, respectively). Other measures such as handgrip strength and thickness of the adductor pollicis muscle (APM) showed higher rates of undernourished subjects: 81.7% and 73.3%. Through the appendicular muscle mass index (AMMI), 16.7% of the sample was classified as sarcopenic and 7.4% with sarcopenic ... / Mestre

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2016-09-12T13:42:31Z No. of bitstreams: 1 Manuela dos Santos Caldas Alterações Iniciais...2016.pdf: 7635538 bytes, checksum: 6a93fba431df86f82cdcef4c267b57b0 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2016-09-12T13:54:54Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Manuela dos Santos Caldas Alterações Iniciais...2016.pdf: 7635538 bytes, checksum: 6a93fba431df86f82cdcef4c267b57b0 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-12T13:54:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Manuela dos Santos Caldas Alterações Iniciais...2016.pdf: 7635538 bytes, checksum: 6a93fba431df86f82cdcef4c267b57b0 (MD5) Previous issue date: 2014-02-07 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / O espaço-porta é o local de origem da fibrose em muitas doenças crônicas hepáticas. Essa área do fígado participa da drenagem linfática hepática e abriga diversos elementos celulares potencialmente fibrogênicos. Estudos sobre a fibrose hepática relacionados à infecção experimental de ratos pelo helminto Capillaria hepatica têm demonstrado que a fibrose começa em áreas portais com a distribuição de septos que sulcam o parênquima hepático se desenvolvendo em áreas próximas ao espaço de Disse. Entretanto, apesar de esta fibrose ocorrer de forma paralela aos sinusóides, estudos têm revelado que não apenas as células estreladas hepáticas participam da fibrose septal, mas também outros tipos celulares residentes nos espaços-porta. Diante destes aspectos, o presente estudo desenvolveu-se com o intuito de investigar a contribuição das células potencialmente fibrogênicas dos espaços-porta, nas fases iniciais da infecção, onde a fibrose se concentra. Para isso, foram utilizados fragmentos de fígado, em blocos parafinados, disponíveis nos arquivos do Laboratório de Patologia Experimental (CPqGM/Fiocruz) provenientes de ratos infectados com 800 ovos de Capillaria hepatica e foi possível observar que ocorreu a proliferação de colangiócitos e a concentração de miofibroblastos em áreas portais, além da ativação de células estreladas hepáticas, sendo todos os resultados vistos por meio da coloração de rotina HE, Picro-sírius vermelho e imunohistoquímica para α-actina de músculo liso, CD31 e GFAP. / Portal space is the local of origin for fibrosis in many chronic liver diseases. This area is involved with lymph drainage and contains several cell types, potentially fibrogenic. Experimental studies related to hepatic fibrosis during Capillaria hepatica infection in rats have suggested that the septal fibrosis indeed takes origin from portal spaces, with the distribution of the septs in the parenchymal region in proximity areas of Disse space. However, despite this fibrosis occurs in parallel to sinusoids, studies have revealed that not only the hepatic stellate cells participate in septal fibrosis, but also other resident cell types in the portal spaces. In face these aspects, the goal of present study was investigate the contribution of the cells potentially fibrogenic in the portal space, in the early phases of the infection. For this, blocks in paraffin available of the liver of rats infected with 800 eggs of Capillaria hepatica archived in the Laboratory of Experimental Pathology (Research Center Gonçalo Moniz, Fiocruz - BA), were utilized and it was observed that proliferation of colangiocytes and concentration of myofibroblasts occurred portal areas, in addition to the activation of hepatic stellate cells. All results were analised by routine staining HE, Sirius red and immunohistochemistry for α-SMA, GFAP and CD31

Pacientes com síndrome da imonodeficiência adquirida geralmente têm acometimento hepático por infecções oportunísticas e/ou neoplasias. A micobacteriose hepática é a infecção que mais comumente afeta esses pacientes. O objetivo do presente estudo é avaliar o perfil da micobacteriose hepática em pacientes sidéticos. Um estudo de caso-controle com casos prevalentes foi delineado para avaliar os pacientes sidéticos submetidos a necropsia no Hospital de Clínicas de Porto Alegre, num período de 10 anos (1986 a 1995). Foram selecionados todos os casos de micobacteriose hepática. Igual número de controles de pacientes sidéticos sem micobacteriose hepática foi identificado, de forma sistemática e aleatória. Dados clínicos, laboratoriais e histológicos foram avaliados em dois períodos de tempo: grupo 1, anos de 1986 a 1990 e grupo 2, anos de 1991 a 1995. Análises estatísticas descritivas e aplicação dos testes de qui-quadrado e t de Student foram realizadas. Casos e controles foram compostos de 47 necropsias cada um. A maioria dos pacientes com SIDA, tanto casos como controles, tinha idade entre 30 e 40 anos, pertencia ao sexo masculino e apresentava hepatomegalia. O risco de exposição classificado como sexual era o predominante. O tempo de duração da doença até o momento da necropsia foi significativamente maior no grupo 2, tanto dos casos como dos controles (p = 0,025 e p = 0,028, respectivamente). Testes laboratoriais que indicam dano hepático (albumina, bilirrubinas, fostatase alcalina, gama GT, transaminases e tempo de protrombina) e achados histológicos (exceto os aspectos morfológicos específicos decorrentes da infecção por micobactérias) não foram significativamente diferentes entre casos e controles. Todos os casos de micobacteriose hepática apresentavam bacilos ácido-álcool resistentes. Granuloma bem formado esteve presente em 85%> dos casos de necropsias e nos 15°/o restantes, necrose caseosa e macrófagos. Não foi identificada a espécie de micobactéria envolvida na injúria hepática. O acometimento hepático nunca foi fato isolado, sendo o baço o órgão mais comumente associado. Achados clínicos, laboratoriais e histológicos de pacientes sidéticos com micobacteriose hepática, exceto a presença do bacilo ácido-álcool resistente, não foram suficientes para diferenciar os casos dos controles. / Acquired immunodeficiency syndrome (AIDS) often compromise the liver with opportunistic infections and neoplasms. Mycobacterial infection of the liver is the commonest infection diagnosed on liver biopsy in patients with AIDS. The aim of the present study is to evaluate the profile of mycobacterial infection on the liver of AIDS patients. A case-contrai study was designed to evaluate necropsies of AIDS patients deceased at the Hospital de Clínicas de Porto Alegre, duríng a 1 O years period (1986-1995). Ali cases of AIDS with mycobacteria liver disease were selected. The same number of AIDS patients without mycobacterial infection were randomly and systematically selected to form the contrai group. Clinicai, histological and liver function data were analysed to characterise their profile for two time intervals: group 1 from 1986 to 1990 and group 2 from 1991 to 1995. Statistical analysis was descriptive and employed chi-square and Student t test. Cases and contrai were composed with 47 necropsies each. Most of the AIDS patients, cases and contrais, were 30-40 years old, male, with sexual exposure being the main risk factor and hepatomegaly. The duration of the disease was significantly longer in group 2 in cases and contrais comparing with group 1 (p = 0,025 and p = 0.028, respectively). Liver related blood tests (albumin, bilirubin, alkaline phosphatase, gamma-GT, transaminases leveis and prothombine time) and histological findings ( except for the specific morphological aspects of mycobacterial infection) were not significantly different in cases and contrais. Ali cases with mycobacterial liver disease had acid-fast bacilli on histology. A well formed granuloma was present in 85°/o of cases necropsies, while caseous necrosis and macrophages with acid-fast bacilli were present in the remaining 15%. lt was not possible to identify the mycobacterium species causing the disease. Liver involvement was never isolated and the spleen was the main organ with associated evidence of disease. Clinicai, laboratorial and histological data from AI OS patients with mycobacterial liver infection, proven by the presence of acid-fast bacilli, were not sufficient to differentiate cases and contrais.

Made available in DSpace on 2015-12-10T14:22:32Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-02-11. Added 1 bitstream(s) on 2015-12-10T14:28:39Z : No. of bitstreams: 1 000851629.pdf: 2433691 bytes, checksum: 15d23aa68fa6e2409553220bd1136b2b (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Entre as complicações da cirrose, a encefalopatia hepática (EH) tem alta prevalência e interfere diretamente na qualidade de vida dos pacientes. O estado nutricional possui extrema importância para o prognóstico da doença, estando independentemente ligado a morbi-mortalidade. Por conta disso, a avaliação nutricional é fundamental para que seja realizado o diagnóstico nutricional precoce e assim se inicie o tratamento dietoterápico. No entanto, a avaliação do estado nutricional desses pacientes é um desafio, porque muitas das ferramentas utilizadas na população saudável podem ter seus resultados afetados pela retenção hídrica e pela depleção muscular, bastante comuns em cirróticos. A dietoterapia indicada para esses pacientes deve ser hipercalórica e hiperproteica, porém, a ingestão de proteínas é historicamente um ponto controverso do tratamento dietético. Nosso objetivo foi avaliar o estado nutricional através de diferentes métodos, a ingestão alimentar com ênfase na ingestão proteica e também a qualidade de vida de pacientes cirróticos com EH e observar a relação desses fatores entre si. O estudo foi transversal e incluiu 60 indivíduos com cirrose e EH submetidos à avaliação do consumo alimentar por recordatório de 24 horas, da qualidade de vida pelo questionário SF-36 e do estado nutricional através da bioimpedância elétrica (BIA), do exame de absorciometria por raios X de dupla energia (DEXA), da avaliação antropométrica e da força de preensão palmar (FAM). A média de idade foi 56,1 ± 12,9 anos e 61,7% dos indivíduos tinha EH clinicamente manifesta (os demais tinham a forma subclínica). Na avaliação do estado nutricional, o índice de massa corporal (IMC) detectou prevalência de sobrepeso e obesidade em 56,7% dos indivíduos e os exames de BIA e DEXA mostraram médias elevadas de porcentagem de massa gorda (29,8 ± 8,0 % e 30,1 ± 7,0 %, respectivamente). Ao mesmo tempo, outros... / Hepatic encephalopathy (HE) has high prevalence among cirrhosis complications and has a big impact on quality of life of patients. Additionally, the nutritional status of these patients is important and independently linked to morbidity and mortality. For this reason, nutritional evaluation is essential to provide early nutrition diagnosis, allowing the start of the dietary treatment. However, the assessment of nutritional status of these patients is a challenge because many of the tools applied to the healthy population can be altered by water retention and muscle depletion, quite common in cirrhotic. These patients should receive high-calorie and high-protein diet, but the protein intake is historically a controversial point in the dietary treatment of cirrhotic individuals. The aims of this study were to evaluate the nutritional status of cirrhotic subjects with HE by different methods, investigate their food and protein intake and their quality of life, observing the relations of these factors to each other. This was a cross-sectional study that included 60 patients, whose dietary intake was assessed through 24-hour recall, quality of life evaluated using the SF-36 questionnaire and the nutritional status by bioelectrical impedance analysis (BIA), dual energy X-ray absorptiometry (DEXA), anthropometric assessment and handgrip strength (HGS). The mean age was 56.1 ± 12.9 years, and 61.7% of subjects had overt HE (the remaining patients had the subclinical form). The body mass index (BMI) detected a high prevalence of overweight and obesity (56,7%), whilst BIA and DEXA pointed a high percentage of body fat (29.8 ± 8.0 ± 7.0% and 30.1%, respectively). Other measures such as handgrip strength and thickness of the adductor pollicis muscle (APM) showed higher rates of undernourished subjects: 81.7% and 73.3%. Through the appendicular muscle mass index (AMMI), 16.7% of the sample was classified as sarcopenic and 7.4% with sarcopenic ...

As proteínas ligadoras de ácidos graxos (Fatty Acid Binding Proteins, FABPs) de parasitos têm um papel importante no processo de infecção por estes organismos. Por este motivo, estas proteínas são antígenos candidatos para vacina contra a infecção por Schistosoma mansoni e Fasciola hepatica. No presente trabalho foram caracterizadas FABPs de F. hepatica e comparadas com a proteína Sm14 de S. mansoni, a FABP de parasito melhor caracterizada, mediante análise de sequências e estruturas modeladas. Também foram clonadas, expressas e purificadas as FABPs tipo 1 e tipo 3 de F. hepatica. Os resultados do presente estudo indicam que a FABP tipo 3 de F. hepatica é relacionada estrutural, imunológica e funcionalmente com a Sm14, um candidato vacinal amplamente estudado. Devido à importância da Sm14 como alvo para o desenvolvimento de vacina para a esquistossomose, as características apresentadas pela FhFABP3 de F. hepatica apontam esta proteína como um candidato importante também para o desenvolvimento de uma vacina contra a fasciolose / Parasites fatty acid binding proteins (FABPs) have an important role in infection process by these organisms. For this reason, these proteins are candidates as vaccine antigens against Schistosoma mansoni and Fasciola hepatica infection. In the present study, FABPs from F. hepatica were characterized and compared with Sm14 protein from S. mansoni, the best characterized parasite FABP, by sequence analysis and modeled structure. Type 1 and type 3 FABPs from F. hepatica were also cloned, expressed and purified. The results of this study indicated that type 3 FABP from F. hepatica is structural, immunological and functionally related with Sm14, a vaccine candidate widely studied. Due to the importance of Sm14 as a target for vaccine development for schistosomiasis, the characteristics presented by the FhFABP3 from F. hepatica suggest this protein as a candidate also important for the development of a vaccine against fasciolosis

Pacientes com síndrome da imonodeficiência adquirida geralmente têm acometimento hepático por infecções oportunísticas e/ou neoplasias. A micobacteriose hepática é a infecção que mais comumente afeta esses pacientes. O objetivo do presente estudo é avaliar o perfil da micobacteriose hepática em pacientes sidéticos. Um estudo de caso-controle com casos prevalentes foi delineado para avaliar os pacientes sidéticos submetidos a necropsia no Hospital de Clínicas de Porto Alegre, num período de 10 anos (1986 a 1995). Foram selecionados todos os casos de micobacteriose hepática. Igual número de controles de pacientes sidéticos sem micobacteriose hepática foi identificado, de forma sistemática e aleatória. Dados clínicos, laboratoriais e histológicos foram avaliados em dois períodos de tempo: grupo 1, anos de 1986 a 1990 e grupo 2, anos de 1991 a 1995. Análises estatísticas descritivas e aplicação dos testes de qui-quadrado e t de Student foram realizadas. Casos e controles foram compostos de 47 necropsias cada um. A maioria dos pacientes com SIDA, tanto casos como controles, tinha idade entre 30 e 40 anos, pertencia ao sexo masculino e apresentava hepatomegalia. O risco de exposição classificado como sexual era o predominante. O tempo de duração da doença até o momento da necropsia foi significativamente maior no grupo 2, tanto dos casos como dos controles (p = 0,025 e p = 0,028, respectivamente). Testes laboratoriais que indicam dano hepático (albumina, bilirrubinas, fostatase alcalina, gama GT, transaminases e tempo de protrombina) e achados histológicos (exceto os aspectos morfológicos específicos decorrentes da infecção por micobactérias) não foram significativamente diferentes entre casos e controles. Todos os casos de micobacteriose hepática apresentavam bacilos ácido-álcool resistentes. Granuloma bem formado esteve presente em 85%> dos casos de necropsias e nos 15°/o restantes, necrose caseosa e macrófagos. Não foi identificada a espécie de micobactéria envolvida na injúria hepática. O acometimento hepático nunca foi fato isolado, sendo o baço o órgão mais comumente associado. Achados clínicos, laboratoriais e histológicos de pacientes sidéticos com micobacteriose hepática, exceto a presença do bacilo ácido-álcool resistente, não foram suficientes para diferenciar os casos dos controles. / Acquired immunodeficiency syndrome (AIDS) often compromise the liver with opportunistic infections and neoplasms. Mycobacterial infection of the liver is the commonest infection diagnosed on liver biopsy in patients with AIDS. The aim of the present study is to evaluate the profile of mycobacterial infection on the liver of AIDS patients. A case-contrai study was designed to evaluate necropsies of AIDS patients deceased at the Hospital de Clínicas de Porto Alegre, duríng a 1 O years period (1986-1995). Ali cases of AIDS with mycobacteria liver disease were selected. The same number of AIDS patients without mycobacterial infection were randomly and systematically selected to form the contrai group. Clinicai, histological and liver function data were analysed to characterise their profile for two time intervals: group 1 from 1986 to 1990 and group 2 from 1991 to 1995. Statistical analysis was descriptive and employed chi-square and Student t test. Cases and contrai were composed with 47 necropsies each. Most of the AIDS patients, cases and contrais, were 30-40 years old, male, with sexual exposure being the main risk factor and hepatomegaly. The duration of the disease was significantly longer in group 2 in cases and contrais comparing with group 1 (p = 0,025 and p = 0.028, respectively). Liver related blood tests (albumin, bilirubin, alkaline phosphatase, gamma-GT, transaminases leveis and prothombine time) and histological findings ( except for the specific morphological aspects of mycobacterial infection) were not significantly different in cases and contrais. Ali cases with mycobacterial liver disease had acid-fast bacilli on histology. A well formed granuloma was present in 85°/o of cases necropsies, while caseous necrosis and macrophages with acid-fast bacilli were present in the remaining 15%. lt was not possible to identify the mycobacterium species causing the disease. Liver involvement was never isolated and the spleen was the main organ with associated evidence of disease. Clinicai, laboratorial and histological data from AI OS patients with mycobacterial liver infection, proven by the presence of acid-fast bacilli, were not sufficient to differentiate cases and contrais.

Pacientes com síndrome da imonodeficiência adquirida geralmente têm acometimento hepático por infecções oportunísticas e/ou neoplasias. A micobacteriose hepática é a infecção que mais comumente afeta esses pacientes. O objetivo do presente estudo é avaliar o perfil da micobacteriose hepática em pacientes sidéticos. Um estudo de caso-controle com casos prevalentes foi delineado para avaliar os pacientes sidéticos submetidos a necropsia no Hospital de Clínicas de Porto Alegre, num período de 10 anos (1986 a 1995). Foram selecionados todos os casos de micobacteriose hepática. Igual número de controles de pacientes sidéticos sem micobacteriose hepática foi identificado, de forma sistemática e aleatória. Dados clínicos, laboratoriais e histológicos foram avaliados em dois períodos de tempo: grupo 1, anos de 1986 a 1990 e grupo 2, anos de 1991 a 1995. Análises estatísticas descritivas e aplicação dos testes de qui-quadrado e t de Student foram realizadas. Casos e controles foram compostos de 47 necropsias cada um. A maioria dos pacientes com SIDA, tanto casos como controles, tinha idade entre 30 e 40 anos, pertencia ao sexo masculino e apresentava hepatomegalia. O risco de exposição classificado como sexual era o predominante. O tempo de duração da doença até o momento da necropsia foi significativamente maior no grupo 2, tanto dos casos como dos controles (p = 0,025 e p = 0,028, respectivamente). Testes laboratoriais que indicam dano hepático (albumina, bilirrubinas, fostatase alcalina, gama GT, transaminases e tempo de protrombina) e achados histológicos (exceto os aspectos morfológicos específicos decorrentes da infecção por micobactérias) não foram significativamente diferentes entre casos e controles. Todos os casos de micobacteriose hepática apresentavam bacilos ácido-álcool resistentes. Granuloma bem formado esteve presente em 85%> dos casos de necropsias e nos 15°/o restantes, necrose caseosa e macrófagos. Não foi identificada a espécie de micobactéria envolvida na injúria hepática. O acometimento hepático nunca foi fato isolado, sendo o baço o órgão mais comumente associado. Achados clínicos, laboratoriais e histológicos de pacientes sidéticos com micobacteriose hepática, exceto a presença do bacilo ácido-álcool resistente, não foram suficientes para diferenciar os casos dos controles. / Acquired immunodeficiency syndrome (AIDS) often compromise the liver with opportunistic infections and neoplasms. Mycobacterial infection of the liver is the commonest infection diagnosed on liver biopsy in patients with AIDS. The aim of the present study is to evaluate the profile of mycobacterial infection on the liver of AIDS patients. A case-contrai study was designed to evaluate necropsies of AIDS patients deceased at the Hospital de Clínicas de Porto Alegre, duríng a 1 O years period (1986-1995). Ali cases of AIDS with mycobacteria liver disease were selected. The same number of AIDS patients without mycobacterial infection were randomly and systematically selected to form the contrai group. Clinicai, histological and liver function data were analysed to characterise their profile for two time intervals: group 1 from 1986 to 1990 and group 2 from 1991 to 1995. Statistical analysis was descriptive and employed chi-square and Student t test. Cases and contrai were composed with 47 necropsies each. Most of the AIDS patients, cases and contrais, were 30-40 years old, male, with sexual exposure being the main risk factor and hepatomegaly. The duration of the disease was significantly longer in group 2 in cases and contrais comparing with group 1 (p = 0,025 and p = 0.028, respectively). Liver related blood tests (albumin, bilirubin, alkaline phosphatase, gamma-GT, transaminases leveis and prothombine time) and histological findings ( except for the specific morphological aspects of mycobacterial infection) were not significantly different in cases and contrais. Ali cases with mycobacterial liver disease had acid-fast bacilli on histology. A well formed granuloma was present in 85°/o of cases necropsies, while caseous necrosis and macrophages with acid-fast bacilli were present in the remaining 15%. lt was not possible to identify the mycobacterium species causing the disease. Liver involvement was never isolated and the spleen was the main organ with associated evidence of disease. Clinicai, laboratorial and histological data from AI OS patients with mycobacterial liver infection, proven by the presence of acid-fast bacilli, were not sufficient to differentiate cases and contrais.

The liver fluke, Fasciola hepatica, is one of the most important parasites of livestock, and it also infects humans. The proteolytic system of trematodes is critical for their interaction with the host and is a potential target for the development of novel vaccines. This work is focused on proteases secreted by F. hepatica adults and on FheCy2, a new protease inhibitor from the cystatin family. The proteolytic activity of the secreted proteases was analyzed using: (a) chromogenic protein substrates and fluorogenic peptide substrates, (b) selective protease inhibitors, and (c) a fluorescent activity-based probe for visualization of proteases. The results showed that the secreted proteases are cysteine proteases of papain family belonging to cathepsins L and B. These proteases were effectivelly inhibited by FheCy2 as demonstrated by enzymological analysis. It can be assumed that FheCy2 participates in the physiological regulation of endogenous proteases secreted by F. hepatica adults, which makes it attractive candidate protein for vaccination studies. Key words: Fasciola hepatica, cathepsins, proteolytic activity, substrate specificity, protease inhibitors (In Czech)

Orientador: Fernando Gomes Romeiro / Resumo: Aminoácidos de cadeia ramificada aumentam a perfusão cerebral de pacientes com encefalopatia hepática (EH), mas o aminoácido responsável por esse aumento e os mecanismos envolvidos ainda não são conhecidos. Este estudo comparou a perfusão cerebral e a melhora clínica durante a suplementação de leucina ou isoleucina. Após a randomização, 27 indivíduos com cirrose e EH receberam suplementos de leucina ou isoleucina por um ano. Exames de tomografia computadorizada por emissão de fóton único (SPECT) e cintilografia cerebral dinâmica (DBS) foram realizados antes do estudo e após 1, 8 e 12 meses de suplementação. Apenas o grupo que recebeu isoleucina teve aumento da perfusão cerebral aos 8 meses de tratamento pelo exame de SPECT e pela cintilografia (p<0,001 e p = 0,05, respectivamente), também observado pelo SPECT aos 12 meses de suplementação (p < 0,05). O aumento do fluxo cerebral foi associado a melhora da EH aos 8 e 12 meses de suplementação (p=0,008 e 0,004, respectivamente), porém essa melhora não foi observada no grupo que recebeu leucina (p=0,313 e 0,055, respectivamente). A suplementação com isoleucina obteve melhor impacto na restauração da perfusão cerebral em pacientes com EH. / Abstract: Branched-chain amino acids increase the brain perfusion of patients with hepatic encephalopathy (HE), but the amino acid and the mechanisms involved are still unknown. This study compared brain perfusion and clinical improvement during leucine or isoleucine supplementation. After randomization, 27 subjects with cirrhosis and HE received leucine or isoleucine supplements for one year. Brain single photon emission computed tomography (SPECT) and dynamic brain scintigraphy (DBS) were performed pretreatment and at 1, 8 and 12 months of supplementation. Brain perfusion was increased only in the isoleucine group at 8 months of treatment by both SPECT and DBS (p<0.001 and p = 0.05, respectively) and by SPECT at the 12th month (p < 0.05). This was associated with hepatic encephalopathy improvement at 8 and 12 months (p=0.008 and 0.004, respectively), which was not observed in the leucine group (p=0.313 and 0.055, respectively). Isoleucine supplementation achieved a better impact on brain perfusion restoration in HE. / Doutor