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Die Effektivität und Verträglichkeit von Triclabendazol wurde in einer klinischen Phase 2 Studie untersucht. 81 Patienten (51 weiblich, 30 männlich, Alter 15-81 Jahre) mit chronischer oder latenter Fasciola hepatica Infektion, bei denen mindestens eine antihelminthische Therapie fehlgeschlagen war wurde in die Studie aufgenommen. Die Patienten erhielten 20mg/Kg Triclabendazol in 2 Dosierungen a 10 mg/Kg im Abstand von 12 h postprandial. Der Therapieerfolg wurde durch mikroskopische Stuhluntersuchungen, Bestimmung exkretorisch-sekretorischer Antigene im Stuhl und Ultraschall überprüft. Bei Siebzig (92%) von 76 Patienten konnten in der Nachuntersuchungsperiode (60 Tage) keine Fasciola hepatica-Eier in den mikroskopischen Stuhluntersuchungen nachgewiesen werden. Die häufigsten unerwünschten Wirkungen waren kolikartige Oberbauchbeschwerden, die bei 40 Patienten (49%) zeitgleich mit der Passage der Parasiten durch die Gallengänge beobachtet wurden. Triclabendazol ist eine effektive Therapie für Patienten mit Fasziolose bei denen andere antihelmithische Therapien nicht wirksam sind. / The efficacy and tolerability of triclabendazole (TCZ) was assessed in a clinical phase 2 study. Eighty-one patients (51 female, 30 male, age 15- 81 years) with chronic or latent F. hepatica infection refractory to previous anti-helminthic chemotherapy were enrolled in a 60 day open, non-comparative trial. Patients received 20 mg/kg TCZ as two doses of 10 mg/kg administered after food 12 hr apart. Efficacy of treatment was assessed by stool microscopy, determination of fasciola excretory-secretory antigen in feces, and by ultrasonography. Seventy (92%) of the 76 patients who completed the 60 day follow up period became egg negative. The most important adverse event was colic-like abdominal pain (40 patients [49%]) consistent with the expulsion of the parasite through the bile ducts as confirmed by US on Days 2 - 7. Triclabendazole is an effective therapy for the treatment of F. hepatica infection in patients who have failed to respond to other antihelminthic agents.

A cirrose hepática é uma doença crônica e irreversível com modificações histológicas caracterizadas por nódulos de regeneração e desarranjo de hepatócitos, com aumento difuso de tecido conjuntivo e perda de função. As células-tronco têm sido amplamente estudadas para o tratamento de injúrias hepáticas. Fibrose e cirrose foram induzidas em ratos Wistar, através da aplicação de tioacetamida (TAA) intraperitoneal a 200 mg/kg por 8 ou 14 semanas, seguido de terapia celular com aplicação intravenosa única de 1x106 células-tronco de membrana amniótica de ratas. Amostras de sangue foram coletadas para análises bioquímicas, e tecido hepático para histologia e imunohistoquímica. A histopatologia para colorações de hematoxilina-eosina para graduação e estadiamento da lesão hepática foi realizada, com observação de alterações celulares; picrosírius para quantificação do colágeno parenquimal; ácido periódico-Schiff para mucopolissacarídeos neutros e glicogênio; e alcian blue para mucopolissacarídeos ácidos. Imunohistoquímica foi realizada para marcação de PCNA, colágenos tipo 1 e 3, e α-SMA. O cultivo celular apresentou ótimo crescimento, sendo transduzido com GFP e negativo para micoplasma. Os animais induzidos experimentalmente mostraram baixo ganho de peso durante o experimento, com notável recuperação nas duas primeiras semanas após término da indução. A mortalidade experimental foi de 10 %. A indução da fibrose e cirrose hepática obtiveram sucesso no período de 8 e 14 semanas, respectivamente Análises macroscópicas mostraram melhor aspecto de fígados cirróticos após terapia celular. Não houve diferenças estatísticas após a terapia celular para as análises bioquímicas, graduação, estadiamento, alterações celulares, proliferação de ductos, mucopolissacarídeos ácidos e neutros e imunohistoquímicas para colágeno 1 e 3, PCNA e α- SMA. Houve, porém, uma tendência a melhora na graduação e estadiamento da fibrose e cirrose com redução da atividade necroinflamatória; redução na proliferação de ductos; menor deposição de mucopolissacarídeos ácidos e neutros; diminuição das alterações celulares com indicativos de menor grau de lesão tecidual e maior grau de regeneração; diminuição da expressão de α-SMA e colágenos 1 e 3; e aumento do PCNA. O colágeno intralobular teve diminuição após terapia celular em fígados fibróticos. Em animais induzidos a cirrose, houve diminuição de ambos colágenos interlobular e intralobular. Conclui-se que houve uma tendência de melhora dos animais após tratamento com células-tronco da membrana amniótica de ratas, o que nos encoraja a aplicação de protocolos de terapia celular. Apesar dos resultados promissores, um maior número de animais precisa ser testado para que se tenham mais dados, que possam dar subsídios para o uso destas células na prática clínica para o tratamento da cirrose hepática / Liver cirrhosis is a chronic and irreversible disease with histological changes characterized by regenerative nodules and disarray of hepatocytes with diffuse increase in connective tissue and loss of function. Stem cells have been extensively studied for the treatment of liver injury. Fibrosis and cirrhosis was induced in Wistar rats by application of thioacetamide (TAA) intraperitoneally at 200 mg/kg for 8 or 14 weeks, followed by cell therapy with a single intravenous administration of 1x106 stem cells from amniotic membrane of rats. Blood samples were collected for biochemical analyzes, and liver tissue for histology and immunohistochemistry. Histopathology by hematoxylin-eosin for grading and staging of hepatic injury with observation of cellular changes was performed; picrosirius for quantification of parenchymal collagen; periodic acid-Schiff for neutral mucopolysaccharides and glycogen; and alcian blue for acid mucopolysaccharides. Immunohistochemistry was performed for PCNA, type 1 and 3 collagens, and α-SMA. Cell culture showed optimal growth, being transduced with GFP and negative for mycoplasma. Animals induced to liver disease showed low weight gain during the experiment, with remarkable recovery in the first two weeks after completion of induction. Experimental mortality was 10%. Induction of fibrosis and cirrhosis was successful after the period of 8 and 14 weeks, respectively. Macroscopic analysis showed improvement in the aspect of cirrhotic livers after cell therapy. There were no statistical differences after cell therapy for biochemical analyzes, grading, staging, cellular changes, proliferation of ducts, acidic and neutral mucopolysaccharides and immunohistochemistry for collagen 1 and 3, PCNA and α-SMA. There was, however, a tendency on improvement in grading and staging of fibrosis and cirrhosis with reduced necroinflammatory activity; reduction in the proliferation of ducts; lower deposition of acidic and neutral mucopolysaccharides; decrease in cellular changes indicating a lower degree of tissue damage and a greater degree of regeneration; decreasing on the expression of α-SMA and type 1 and 3 collagens; and increased PCNA. Intralobular collagen decreased after cell therapy in fibrotic livers. In cirrhotic animals, there was a decrease of both interlobular and intralobular collagen. We conclude that was a trend to improvement of animals after treatment with stem cells derived from amniotic membrane of rats, which encourages the application of cell therapy protocols. Despite the promising results, a larger number of animals must be tested, so we can have more data to make allowances for the use of these cells in clinical practice for the treatment of liver cirrhosis

Made available in DSpace on 2016-12-23T13:53:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Deivid Franca Freitas.pdf: 4560063 bytes, checksum: a75776cab41721dc487d8be459fbc52e (MD5) Previous issue date: 2013-02-27 / The fasciolosis is a disease that affects domestic and wild ruminants and eventually the man. By causing great economic losses to cattle ranching and the high power of global dissemination, it sought alternatives to facilitate the understanding and visualization of disease delimiting potential risk areas in the Espírito Santo state. Thus, favorability maps were drawn on the current and future risk to F. hepatica based on climatic and environmental variables considered essential for maintenance of the disease and bioclimatological zoning maps and prevalence through the Geographic Information System (GIS). The data of cattle slaughter in the Espírito Santo were collected from the 11 slaughterhouses supervised by federal and state inspection services (SIF/SIE/MAPA), beyond the origins of livestock slaughtering in a slaughterhouse located in the municipality of Anchieta in the years 2009 to 2011. So, mapping results showed that areas of high risk gaskets totaled 35.42% for the current risk and tended to lessen with increases of 1°C to 5°C in temperature for 33.84%. The zoning map showed that 52.24% of the state areas are located in zones considered suitable for disease development. The combination of maps generated by zoning and prevalence of the 11 slaughterhouses distributed in the state showed that the highest prevalence rates were found in the municipalities located in the Southern region with averages ranging from 0.01% to 28.41%. Considering the result became clear that the epidemiological data, combined with GIS become a valuable tool for making decisions in order to minimize the occurrence and prioritize strategies for prevention and control of fasciolosis in Espirito Santo / A fasciolose é uma enfermidade que acomete os ruminantes domésticos e selvagens e eventualmente o homem. Por ocasionar grandes perdas econômicas à pecuária mundial e pelo alto poder de disseminação, buscou-se alternativas para facilitar a compreensão e visualização da doença delimitando possíveis áreas de risco no estado do Espírito Santo. Dessa forma, foram elaborados mapas de favorabilidade sobre o risco atual e futuro para F. hepatica com base em variáveis ambientais e climáticas consideradas fundamentais para manutenção da doença e mapas de zoneamento bioclimatológico e de prevalência por meio do Sistema de Informações Geográficas (SIG). Os dados de abate de bovinos no Espírito Santo foram coletados junto a 11 matadouros fiscalizados pelos serviços de inspeção federal e estadual (SIF/SIE/MAPA), além das origens do gado abatido em um matadouro localizado no município de Anchieta nos anos de 2009 à 2011. Assim, os resultados do mapeamento demonstraram que as áreas de alto risco perfizeram um total de 35,42% para o risco atual e tenderam a diminuir com os acréscimos de 1°C a 5°C na temperatura para 33,84%. O mapa de zoneamento demonstrou que 52,24% das áreas do estado encontram-se em zonas consideradas aptas para o desenvolvimento da doença. A combinação dos mapas gerados pelo zoneamento e das prevalências observadas nos 11 matadouros distribuídos no estado demonstraram que as maiores prevalências foram verificadas nos municípios situados na região Sul com médias que variaram de 0,01% à 28,41%. Dessa forma, ficou evidente que dados epidemiológicos aliados ao SIG podem ser considerados uma ferramenta valiosa para a tomada de decisões que visem minimizar a ocorrência e priorizar estratégias de prevenção e controle da fasciolose no Espírito Santo

A cirrose hepática é uma doença crônica e irreversível com modificações histológicas caracterizadas por nódulos de regeneração e desarranjo de hepatócitos, com aumento difuso de tecido conjuntivo e perda de função. As células-tronco têm sido amplamente estudadas para o tratamento de injúrias hepáticas. Fibrose e cirrose foram induzidas em ratos Wistar, através da aplicação de tioacetamida (TAA) intraperitoneal a 200 mg/kg por 8 ou 14 semanas, seguido de terapia celular com aplicação intravenosa única de 1x106 células-tronco de membrana amniótica de ratas. Amostras de sangue foram coletadas para análises bioquímicas, e tecido hepático para histologia e imunohistoquímica. A histopatologia para colorações de hematoxilina-eosina para graduação e estadiamento da lesão hepática foi realizada, com observação de alterações celulares; picrosírius para quantificação do colágeno parenquimal; ácido periódico-Schiff para mucopolissacarídeos neutros e glicogênio; e alcian blue para mucopolissacarídeos ácidos. Imunohistoquímica foi realizada para marcação de PCNA, colágenos tipo 1 e 3, e α-SMA. O cultivo celular apresentou ótimo crescimento, sendo transduzido com GFP e negativo para micoplasma. Os animais induzidos experimentalmente mostraram baixo ganho de peso durante o experimento, com notável recuperação nas duas primeiras semanas após término da indução. A mortalidade experimental foi de 10 %. A indução da fibrose e cirrose hepática obtiveram sucesso no período de 8 e 14 semanas, respectivamente Análises macroscópicas mostraram melhor aspecto de fígados cirróticos após terapia celular. Não houve diferenças estatísticas após a terapia celular para as análises bioquímicas, graduação, estadiamento, alterações celulares, proliferação de ductos, mucopolissacarídeos ácidos e neutros e imunohistoquímicas para colágeno 1 e 3, PCNA e α- SMA. Houve, porém, uma tendência a melhora na graduação e estadiamento da fibrose e cirrose com redução da atividade necroinflamatória; redução na proliferação de ductos; menor deposição de mucopolissacarídeos ácidos e neutros; diminuição das alterações celulares com indicativos de menor grau de lesão tecidual e maior grau de regeneração; diminuição da expressão de α-SMA e colágenos 1 e 3; e aumento do PCNA. O colágeno intralobular teve diminuição após terapia celular em fígados fibróticos. Em animais induzidos a cirrose, houve diminuição de ambos colágenos interlobular e intralobular. Conclui-se que houve uma tendência de melhora dos animais após tratamento com células-tronco da membrana amniótica de ratas, o que nos encoraja a aplicação de protocolos de terapia celular. Apesar dos resultados promissores, um maior número de animais precisa ser testado para que se tenham mais dados, que possam dar subsídios para o uso destas células na prática clínica para o tratamento da cirrose hepática / Liver cirrhosis is a chronic and irreversible disease with histological changes characterized by regenerative nodules and disarray of hepatocytes with diffuse increase in connective tissue and loss of function. Stem cells have been extensively studied for the treatment of liver injury. Fibrosis and cirrhosis was induced in Wistar rats by application of thioacetamide (TAA) intraperitoneally at 200 mg/kg for 8 or 14 weeks, followed by cell therapy with a single intravenous administration of 1x106 stem cells from amniotic membrane of rats. Blood samples were collected for biochemical analyzes, and liver tissue for histology and immunohistochemistry. Histopathology by hematoxylin-eosin for grading and staging of hepatic injury with observation of cellular changes was performed; picrosirius for quantification of parenchymal collagen; periodic acid-Schiff for neutral mucopolysaccharides and glycogen; and alcian blue for acid mucopolysaccharides. Immunohistochemistry was performed for PCNA, type 1 and 3 collagens, and α-SMA. Cell culture showed optimal growth, being transduced with GFP and negative for mycoplasma. Animals induced to liver disease showed low weight gain during the experiment, with remarkable recovery in the first two weeks after completion of induction. Experimental mortality was 10%. Induction of fibrosis and cirrhosis was successful after the period of 8 and 14 weeks, respectively. Macroscopic analysis showed improvement in the aspect of cirrhotic livers after cell therapy. There were no statistical differences after cell therapy for biochemical analyzes, grading, staging, cellular changes, proliferation of ducts, acidic and neutral mucopolysaccharides and immunohistochemistry for collagen 1 and 3, PCNA and α-SMA. There was, however, a tendency on improvement in grading and staging of fibrosis and cirrhosis with reduced necroinflammatory activity; reduction in the proliferation of ducts; lower deposition of acidic and neutral mucopolysaccharides; decrease in cellular changes indicating a lower degree of tissue damage and a greater degree of regeneration; decreasing on the expression of α-SMA and type 1 and 3 collagens; and increased PCNA. Intralobular collagen decreased after cell therapy in fibrotic livers. In cirrhotic animals, there was a decrease of both interlobular and intralobular collagen. We conclude that was a trend to improvement of animals after treatment with stem cells derived from amniotic membrane of rats, which encourages the application of cell therapy protocols. Despite the promising results, a larger number of animals must be tested, so we can have more data to make allowances for the use of these cells in clinical practice for the treatment of liver cirrhosis

Submitted by Cássia Santos (cassia.bcufg@gmail.com) on 2017-03-31T11:35:53Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Fernanda Martins de Aquino - 2017.pdf: 2825789 bytes, checksum: 21dd668e99af981f702f5b0d0823a01c (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-04-03T12:12:17Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Fernanda Martins de Aquino - 2017.pdf: 2825789 bytes, checksum: 21dd668e99af981f702f5b0d0823a01c (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-03T12:12:17Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Fernanda Martins de Aquino - 2017.pdf: 2825789 bytes, checksum: 21dd668e99af981f702f5b0d0823a01c (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-03-08 / Amongst the several parasite-diseases that may be found on the bovine species slaughter line, cysticercosis surely is the most frequent one. Besides being a zoonosis and a public health issue, it also causes great economic losses on the Brazilian meat productive chain. On the other hand, fasciolosis, also considered a zoonosis, has a lower occurrence when compared to cysticercosis, fact that may be due to its epidemiologic dynamics. Aiming to learn the level of infection of these zoonosis in the bovine herd of the state of Goiás, this project was undertaken with the scope of determining the prevalence and spatial distribution, as well to evaluate the association with some epidemiologic variables with the occurrence of these diseases and also to estimate economic losses inflicted on the producers and industries. A retrospective study was carried out on a total of 23.255.979 animals slaughtered per year, mesoregions and microregions. The data were used to create one epidemiologic map for bovine cysticercosis and one for bovine fasciolosis, gathering all cities of the state of Goiás. A prevalence of bovine cysticercosis on the state of Goiás of 0,53% (CI 95% 0,5295 – 0,5354), where the percentage of viable cysticercosis was 42,31%, non-viable cysticercosis 57,69% and the presence of bovine fasciolosis was de 0,0026% (CI 95% 0,0024 – 0,0028). The mesoregion Centro presented a greater chance (OR = 4,44) of finding positive cattle for cysticercosis when compared to the mesoregions Norte (OR = 1) and Nordeste (OR = 1,02), whilst the mesoregions diagnosed with greater chances of finding animals positive for fasciolosis, due to having a greater effective herd (p ≤ 0,05), were Noroeste, Sul, part of the region Centro and two cities of the region Leste of the state. The losses estimated for the evaluated period, from 2007 to 2014, ranged from R$ 64.809.817,50 (US$ 20.574.545,24) due to the presence of cysticercosis, and around R$ 15.072,75 (US$ 4.785) due to the presence of Fasciola hepatica in bovine liver. Such results outline the importance of developing strategic measures and action policies to try and control the spreading of these relevant zoonosis. / Dentre os vários parasitos que podem ser encontrados na linha de abate da espécie bovina, é notório que a cisticercose é a de maior frequência. Além de ser uma zoonose e um problema de saúde pública, ainda causa grandes prejuízos econômicos na cadeia produtiva de carnes do Brasil. Por outro lado a fasciolose, também considerada uma zoonose, possui uma menor ocorrência quando comparada à cisticercose, fato que pode estar atribuído a sua dinâmica epidemiológica. Visando conhecer o nível de infecção destas zoonoses no rebanho bovino goiano, realizou-se este trabalho com o objetivo de determinar a prevalência e a distribuição espacial, além de avaliar a associação de algumas variáveis epidemiológicas com a ocorrência destas enfermidades nos animais e estimar as perdas econômicas causadas aos produtores e indústrias. Foi realizado um estudo do tipo retrospectivo referente a um total de 23.255.979 animais abatidos agrupados por ano, mesorregiões e microrregiões de Goiás. Os dados foram utilizados para criar um mapa epidemiológico da cisticercose bovina e um mapa epidemiológico da fasciolose bovina abrangendo todos os municípios goianos. A prevalência de cisticercose bovina no estado de Goiás foi de 0,53% (IC 95% 0,5295 – 0,5354), sendo a porcentagem de cisticercose viável 42,31% e cisticercose inviável 57,69% e a prevalência de fasciolose bovina de 0,0026% (IC 95% 0,0024 – 0,0028). A mesorregião Centro apresentou maior chance (OR = 4,44) de encontrar bovinos positivos para a cisticercose quando comparada as mesorregiões Norte (OR = 1) e Nordeste (OR = 1,02), enquanto as mesorregiões diagnosticadas com chances mais elevadas de se encontrar animais com fasciolose, porque continham maior rebanho efetivo (p ≤ 0,05) foram a Noroeste, Sul, parte da região Centro e dois municípios da região Leste do estado. As perdas estimadas para o período analisado, de 2007 a 2014, foram de R$ 64.809.817,50 reais (US$ 20.574.545,24 dólares) devido à presença da cisticercose no rebanho e cerca de R$ 15.072,75 reais (US$ 4.785 dólares) devido à presença de Fasciola hepatica no fígado de bovinos. Os resultados encontrados neste trabalho destacam a importância de se realizar medidas e ações políticas estratégicas na tentativa de controlar a disseminação destas importantes zoonoses.

As proteínas ligadoras de ácidos graxos (Fatty Acid Binding Proteins, FABPs) de parasitos têm um papel importante no processo de infecção por estes organismos. Por este motivo, estas proteínas são antígenos candidatos para vacina contra a infecção por Schistosoma mansoni e Fasciola hepatica. No presente trabalho foram caracterizadas FABPs de F. hepatica e comparadas com a proteína Sm14 de S. mansoni, a FABP de parasito melhor caracterizada, mediante análise de sequências e estruturas modeladas. Também foram clonadas, expressas e purificadas as FABPs tipo 1 e tipo 3 de F. hepatica. Os resultados do presente estudo indicam que a FABP tipo 3 de F. hepatica é relacionada estrutural, imunológica e funcionalmente com a Sm14, um candidato vacinal amplamente estudado. Devido à importância da Sm14 como alvo para o desenvolvimento de vacina para a esquistossomose, as características apresentadas pela FhFABP3 de F. hepatica apontam esta proteína como um candidato importante também para o desenvolvimento de uma vacina contra a fasciolose / Parasites fatty acid binding proteins (FABPs) have an important role in infection process by these organisms. For this reason, these proteins are candidates as vaccine antigens against Schistosoma mansoni and Fasciola hepatica infection. In the present study, FABPs from F. hepatica were characterized and compared with Sm14 protein from S. mansoni, the best characterized parasite FABP, by sequence analysis and modeled structure. Type 1 and type 3 FABPs from F. hepatica were also cloned, expressed and purified. The results of this study indicated that type 3 FABP from F. hepatica is structural, immunological and functionally related with Sm14, a vaccine candidate widely studied. Due to the importance of Sm14 as a target for vaccine development for schistosomiasis, the characteristics presented by the FhFABP3 from F. hepatica suggest this protein as a candidate also important for the development of a vaccine against fasciolosis

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Abstract not available

This study reports the localization and partial characterization of thioredoxin from the parasitic trematode Fasciola hepatica. Snails (Pseudosuccinia columella) were raised in culture and infected with F. hepatica so that Western blotting and immunohistochemical techniques could be utilized to determine the presence of thioredoxin in different stages of the parasite’s development. The results of these experiments showed that thioredoxin was present in the tegument, gut epithelium, excretory canal epithelium and sperm, of the adult parasite as well as in the tegument and gut of the redia and cercaria intermediate stages. In situ hybridization was used to determine the localization and possible differential mRNA expression of two different F. hepatica thioredoxin isotypes (Fh2020.A and Fh2020.SL) in the adult parasite. The in situ hybridization results showed that both isotypes are expressed in the tegument and gut epithelium. Fh2020.A stains with a greater intensity possibly demonstrating a difference in the amount of expression between the two isotypes. Recombinant F. hepatica thioredoxin expressed in bacteria using the pMAL™ Protein Fusion and Expression System was used to test its affects on the production of super oxide anion by murine peritoneal macrophages, bovine monocyte-derived macrophages and bovine whole blood neutrophils, and nitric oxide production by mouse peritoneal macrophages and bovine monocyte-derived macrophages. The results of the cellular assays were not definitive due to the fact that the maltose binding protein (MBP) moiety of the recombinant thioredoxin, when tested alone, increased production of nitric oxide by bovine monocyte-derived macrophages. Consequently, since the MBP could not be effectively separated from the thioredoxin portion of the recombinant, allowing the thioredoxin affects to be tested independently, no true conclusions regarding its affects on the host immune cells tested could be drawn. This is the first report of the localization of thioredoxin in both the adult F. hepatica as well as in specific intermediate stages of the parasite. These studies demonstrate the possible affects that a protein tag can have on experimental results and demonstrate how such data may be interpreted when a non-cleaved recombinant protein is used in cellular or other assays when compared to native or cleaved recombinant proteins.