Made available in DSpace on 2014-06-12T18:01:47Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo3087_1.pdf: 6663197 bytes, checksum: 5a8f3700cbca1aab6e9ddd9f246972fa (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2011 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Os Vírus da Imunodeficiência Humana (HIV) e o Vírus Linfotrópico de Células T Humanas (HTLV) são membros da família Retroviridae e agentes etiológicos da síndrome da imunodeficiência adquirida (AIDS) e da leucemia de células T do adulto/paraparesia espástica tropical, respectivamente. Estas infecções são importantes problemas de saúde pública, de modo que a triagem de doadores de sangue e populações de risco, através de métodos de diagnóstico altamente sensíveis e específicos, é considerada crucial. Os principais sistemas de diagnóstico são ainda baseados na detecção de anticorpos contra as proteínas virais p24 e envelope Env através da técnica Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay ELISA, a qual, embora útil, é limitada pela necessidade de grandes volumes de amostra, mão-de-obra e equipamentos especializados, elevado custo e tempo de processamento. A fim de superar estes entraves, nós desenvolvemos um ensaio baseado em p24 e Env através da técnica de microarranjos líquidos. Para tanto, sequências de aminoácidos codificantes das proteínas p24 e Env de HIV-1/2 e HTLV-1/2 de isolados da América do Sul foram selecionadas, em bancos de dados públicos, e alinhadas para a geração das respectivas sequências consenso. Estas foram submetidas à busca por homologia e, a partir dos melhores homólogos, dois tipos de antígenos foram desenvolvidos: (1) contendo a sequência completa e (2) contendo as regiões mais hidrofílicas de cada proteína. As sequências obtidas foram otimizadas para expressão bacteriana e submetidas à síntese comercial. Em seguida, estas foram clonadas em vetores de expressão procarióticos, os quais foram utilizados para transformar bactérias, visando à produção dos respectivos antígenos de HIV e HTLV. Os antígenos foram expressos, à exceção das proteínas completas do Env, e validados através de ensaios de microarranjos líquidos, utilizando três painéis padrão: HIV-1/2 (135 amostras), HTLV-1/2 (81 amostras) e negativo (347 amostras). Os antígenos completos p24 de HIV-1/2 e HTLV-1/2 foram considerados altamente sensíveis e específicos, e seu desempenho foi comparável ao observado utilizando antígenos comerciais como controle. Dentre os antígenos hidrofílicos, os melhores resultados foram obtidos a partir dos antígenos gp46 HTLV-1/2, os quais permitiram a diferenciação do subtipo viral. As proteínas p24 de HIV-1/2 e HTLV-1/2 foram ainda utilizadas para a produção de anticorpos policlonais através da imunização de coelhos, e os anticorpos obtidos serão ainda avaliados quanto à capacidade de capturar o antígeno p24 humano em casos de infecções iniciais. Os resultados obtidos neste projeto foram considerados extremamente promissores, permitindo o desenvolvimento de um teste diagnóstico com maior precisão, além de redução do custo, tempo de realização e volume de amostras

Submitted by Maria Aparecida (cidazen@gmail.com) on 2017-04-26T13:41:04Z No. of bitstreams: 1 Dinaura Maramaldo Cruz.pdf: 3121635 bytes, checksum: 83c3cab538352aacd4eaa7920d4fa684 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-26T13:41:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dinaura Maramaldo Cruz.pdf: 3121635 bytes, checksum: 83c3cab538352aacd4eaa7920d4fa684 (MD5) Previous issue date: 2011-10-04 / The type 1 and type 2 virus human T-lymphotropic type 1 are human retroviruses, that destroy or transform lymphocytes causing diseases that are externalized years or even decades after primary infection. The virus has a worldwide prevalence varies by geographic region and population, Brazil is assigned the highest absolute number of carriers. Risk factors such as transfusions, sharing needles, sexual contact and breastfeeding are no ways to prevent transmission. The objective of this study was the epidemiological profile of the sociodemographic and blood donors, the Blood Center of Maranhão - HEMOMAR with positive serology for HTLV-1/2, identifying the virus types. We analyzed the records of 924 blood donors of the Blood Center of Maranhão - HEMOMAR, which showed positive pattern and indeterminate ELISA test (OD / CO > 0.800) and the Western blot test in the period January 2002 to December 2009. Reactivity was identified for HTLV-1 / 2 by ELISA in the general population of donors is 0.24% (n = 924/398.362) and 0.02% in the Western blot test. Sex, age and color were statistically significant. Considering the group studied, there was a significant number of females, average age 40 years predominantly brown and black. Most had less than eight years. Among the cases 35.6% had co-infection with other serological markers, with higher prevalence for hepatitis B, and Hepatitis C, syphilis and HIV. The Western Blot test revealed the circulation of HTLV type 2 (2,4%) between subjects, but with higher prevalence for HTLV type 1 (70,1%). The presence of HTLV-1/2, the situation of co-infections associated with HTLV indicate the need for adoption of effective public health measures focused on the implementation of prevention strategies, since even in the presence of population studies suggests the existence of risk factors for transmission. Epidemiological studies have been relevant to advances in scientific knowledge about HTLV. The availability of qualified information on the means of transmission, prevention and risk perception, considering cultural and social aspects, are mechanisms for intervention in controlling the virus. / Os vírus linfotrópicos de células T humanas do tipo 1 (HTLV-1) e do tipo 2 (HTLV-2) são retrovírus humanos, que destroem ou transformam os linfócitos causando doenças que se exteriorizam anos ou mesmo décadas após a infecção primária. O vírus tem prevalência mundial que varia de acordo com a região geográfica e população estudada; ao Brasil é atribuído maior número absoluto de portadores. Fatores de risco como transfusões, uso compartilhado de agulhas, aleitamento materno e contato sexual sem prevenção são formas de transmissão. O objetivo deste trabalho foi conhecer o perfil epidemiológico e sociodemográfico dos doadores de sangue, do Hemocentro do Maranhão – HEMOMAR, com sorologia positiva para HTLV-1/2, identificando os tipos virais. Foram analisados os registros de 924 doadores de sangue do Hemocentro do Maranhão – HEMOMAR, que apresentaram padrão positivo e indeterminado no teste ELISA (DO / CO > 0,800) e no teste Western Blot no período janeiro de 2002 a dezembro de 2009. Identificou-se reatividade para o HTLV-1/ 2 pelo teste ELISA na população geral de doadores de 0,24% (n=924/398.362) e 0,02% no teste Western Blot. Sexo, idade e cor foram estatisticamente significantes. Considerando o grupo estudado, houve um número significativo do sexo feminino, média de idade de 40 anos predominando pardos e negros. A maioria tinha escolaridade inferior a oito anos. Entre os casos, 35,6% apresentaram co-infecção com outros marcadores sorológicos, com maior prevalência para Hepatite B, além de Hepatite C, Sífilis e HIV. O teste Western Blot revelou a circulação do HTLV tipo 2 (2,4%) entre os sujeitos, mas com maior prevalência para o HTLV tipo 1 (70,1%). A presença do HTLV-1/2, a situação de coinfecções associadas ao HTLV indica a necessidade de adoção de medidas eficazes de saúde pública focadas na implantação de estratégias de prevenção, uma vez que a presença do mesmo na população estudada sugere a existência de fatores de risco à transmissão. Estudos epidemiológicos têm sido relevantes para avançar no conhecimento científico sobre o HTLV. A disponibilização de informação qualificada sobre os meios de transmissão, prevenção e percepção de risco, considerando aspectos culturais e sociais, constitui mecanismos para intervenção no controle do vírus.

A significativa prevalência da infecção pelo HTLV-1/2 no Brasil tornou compulsória a triagem sorológica em bancos de sangue desde 1993. A realização de um diagnóstico eficaz e seguro desta infecção tem importância no correto aconselhamento dos pacientes, bem como na adoção de medidas preventivas em relação à transmissão do HTLV-1/2. Entretanto, a ineficiência dos testes confirmatórios disponíveis somado ao alto custo, são fatores limitantes para a conclusão segura do status clínico do paciente. O objetivo deste trabalho foi desenvolver, padronizar e validar uma plataforma molecular (NAT) multiplex utilizando a metodologia de PCR em tempo real para o diagnóstico confirmatório e discriminatório da infecção pelo HTLV-1/2. Para tanto, foi padronizada a PCR em tempo real utilizando o sistema de sondas de hidrólise (TaqMan®) e a região gênica viral pol foi utilizada como alvo dessas reações. As reações foram otimizadas e validadas em amostras de DNA de controles positivos e negativos, amostras de DNA obtidas a partir do sangue total de indivíduos infectados pelo HTLV-1/2, candidatos à doação de sangue e de pacientes infectados por outras viroses (HIV, HBV e HCV). Após a padronização, a plataforma molecular foi validada em relação aos seguintes parâmetros: sensibilidade analítica, sensibilidade diagnóstica, especificidade analítica, especificidade diagnóstica, precisão e robustez. O limite de detecção do teste (LoD) foi de 3,85 cópias/reação para HTLV-1 e 10,88 cópias/reação para HTLV-2. Para a especificidade, não foi observada reação cruzada com os vírus HAV, HBV, HCV, HIV-1 e HIV-2 e B19V obtidos a partir de um painel de referência viral e nem com amostras de indivíduos portadores de HIV, HBV ou HCV. A sensibilidade diagnóstica foi de 94,6% para HTLV-1 e 78,6% para HTLV-2. O coeficiente de variação encontrado no parâmetro precisão foi de até 0,475%. A metodologia desenvolvida é uma ferramenta simples, de baixo custo, sensível e altamente específica, portanto, adequada para detecção e discriminação da infecção por este retrovírus. A padronização desta plataforma tem um importante impacto no fortalecimento da capacitação tecnológica nacional. Além disso, propõe seu uso no algoritmo diagnóstico, o qual permitirá a conclusão segura do diagnóstico do HTLV-1/2. / The significant prevalence of HTLV-1/2 infection in Brazil has turned the serological testing for this virus mandatory in national blood banks since 1993. The performance of efficient and safe diagnosis of this infection has importance on the correct counseling of the patients and the prevention of the transfusion/hemoderivatives transmitted HTLV-1/2 infection. However, the inefficiency of the available confirmatory tests combined with their high cost present limiting factors for adequate conclusions over the clinical status of the patient. A safe diagnosis of the HTLV-1/2 infection is of crucial importance for the correct counseling of the patients and prevention of the transmission of the infection by blood transfusions, breastfeeding and solid organ transplantations. Therefore, the objective of this study was to develop, optimize and validate a molecular multiplex platform (NAT) utilizing the real-time PCR methodology for confirmatory and discriminatory diagnosis of the HTLV-1/2 infection. DNA samples obtained from HTLV-1/2 positive patients, blood donor candidates, and HIV, HBV and HCV infected patients were used in this study. The real-time PCR was optimized using the TaqMan® system (hydrolysis probes) and the pol gene was a target for real-time amplification. After optimization, the molecular platform was validated by analysis of the analytic and diagnostic sensitivity, analytic and diagnostic specificity, precision, and robustness. The detection limit (LoD) of the test was 3.85 copies/reaction for HTLV-1 and 10.88 copies/reaction for HTLV-2. Evaluation of the specificity did not demonstrate cross reaction with human viruses like HAV, HBV, HCV, HIV-1, HIV-2 and B19V obtained from a diagnostic panel and also with samples obtained from HIV, HBV or HCV positive individuals. The diagnostic sensitivity was 94.6% for HTLV-1 and 78.6% for HTLV-2. The estimated variation coefficient of the precision analysis was not more than 0.475%. Therefore, this methodology presents simple, inexpensive, sensitive and highly specific test, and can be used adequately for the detection and discrimination of this retroviral infection. The optimization of this molecular platform have important impact on the improvement of the technologic capability and it can be used for the definition of a national diagnostic algorithm which will permit a safe conclusion of the HTLV-1/2 diagnosis.

A significativa prevalência da infecção pelo HTLV-1/2 no Brasil tornou compulsória a triagem sorológica em bancos de sangue desde 1993. A realização de um diagnóstico eficaz e seguro desta infecção tem importância no correto aconselhamento dos pacientes, bem como na adoção de medidas preventivas em relação à transmissão do HTLV-1/2. Entretanto, a ineficiência dos testes confirmatórios disponíveis somado ao alto custo, são fatores limitantes para a conclusão segura do status clínico do paciente. O objetivo deste trabalho foi desenvolver, padronizar e validar uma plataforma molecular (NAT) multiplex utilizando a metodologia de PCR em tempo real para o diagnóstico confirmatório e discriminatório da infecção pelo HTLV-1/2. Para tanto, foi padronizada a PCR em tempo real utilizando o sistema de sondas de hidrólise (TaqMan®) e a região gênica viral pol foi utilizada como alvo dessas reações. As reações foram otimizadas e validadas em amostras de DNA de controles positivos e negativos, amostras de DNA obtidas a partir do sangue total de indivíduos infectados pelo HTLV-1/2, candidatos à doação de sangue e de pacientes infectados por outras viroses (HIV, HBV e HCV). Após a padronização, a plataforma molecular foi validada em relação aos seguintes parâmetros: sensibilidade analítica, sensibilidade diagnóstica, especificidade analítica, especificidade diagnóstica, precisão e robustez. O limite de detecção do teste (LoD) foi de 3,85 cópias/reação para HTLV-1 e 10,88 cópias/reação para HTLV-2. Para a especificidade, não foi observada reação cruzada com os vírus HAV, HBV, HCV, HIV-1 e HIV-2 e B19V obtidos a partir de um painel de referência viral e nem com amostras de indivíduos portadores de HIV, HBV ou HCV. A sensibilidade diagnóstica foi de 94,6% para HTLV-1 e 78,6% para HTLV-2. O coeficiente de variação encontrado no parâmetro precisão foi de até 0,475%. A metodologia desenvolvida é uma ferramenta simples, de baixo custo, sensível e altamente específica, portanto, adequada para detecção e discriminação da infecção por este retrovírus. A padronização desta plataforma tem um importante impacto no fortalecimento da capacitação tecnológica nacional. Além disso, propõe seu uso no algoritmo diagnóstico, o qual permitirá a conclusão segura do diagnóstico do HTLV-1/2. / The significant prevalence of HTLV-1/2 infection in Brazil has turned the serological testing for this virus mandatory in national blood banks since 1993. The performance of efficient and safe diagnosis of this infection has importance on the correct counseling of the patients and the prevention of the transfusion/hemoderivatives transmitted HTLV-1/2 infection. However, the inefficiency of the available confirmatory tests combined with their high cost present limiting factors for adequate conclusions over the clinical status of the patient. A safe diagnosis of the HTLV-1/2 infection is of crucial importance for the correct counseling of the patients and prevention of the transmission of the infection by blood transfusions, breastfeeding and solid organ transplantations. Therefore, the objective of this study was to develop, optimize and validate a molecular multiplex platform (NAT) utilizing the real-time PCR methodology for confirmatory and discriminatory diagnosis of the HTLV-1/2 infection. DNA samples obtained from HTLV-1/2 positive patients, blood donor candidates, and HIV, HBV and HCV infected patients were used in this study. The real-time PCR was optimized using the TaqMan® system (hydrolysis probes) and the pol gene was a target for real-time amplification. After optimization, the molecular platform was validated by analysis of the analytic and diagnostic sensitivity, analytic and diagnostic specificity, precision, and robustness. The detection limit (LoD) of the test was 3.85 copies/reaction for HTLV-1 and 10.88 copies/reaction for HTLV-2. Evaluation of the specificity did not demonstrate cross reaction with human viruses like HAV, HBV, HCV, HIV-1, HIV-2 and B19V obtained from a diagnostic panel and also with samples obtained from HIV, HBV or HCV positive individuals. The diagnostic sensitivity was 94.6% for HTLV-1 and 78.6% for HTLV-2. The estimated variation coefficient of the precision analysis was not more than 0.475%. Therefore, this methodology presents simple, inexpensive, sensitive and highly specific test, and can be used adequately for the detection and discrimination of this retroviral infection. The optimization of this molecular platform have important impact on the improvement of the technologic capability and it can be used for the definition of a national diagnostic algorithm which will permit a safe conclusion of the HTLV-1/2 diagnosis.

Made available in DSpace on 2016-08-19T18:15:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 VERONICA GUIMARAES DE SOUZA.pdf: 3740222 bytes, checksum: bbd94374950c3edeaa9e9522c0e561fb (MD5) Previous issue date: 2009-11-18 / INDTRODUCTION: HTLV are retroviruses with tropism for lymphocytes T, type 1 (HTLV-1) is endemic in the Caribbean region, Japan, South America, and parts of Africa; type 2 in some American native groups, rare in Africa, and the Europe associated with use of injectable drugs. In Brazil one esteem 2,5 million infected people in all the states where it was searched, with some prevalence. OBJECTIVE: This study had the objective identify the prevalence of HTLV-1 and 2 in the selection of pregnant taken care of in the prenatal one of three public services. METHODOLOGY Transversal study, carried through between 11/02 and 03/12/2008, with 2044 pregnant in three public services of prenatal, São Luis/MA. Patients had been guided on the study and enclosed after signature of the TCLE and filling of the questionnaire. They had participated pregnant between 18 and 45 years, without history of psychiatric illnesses, high blood pressure, kidney pathology, diabetes and others that would characterize specialized necessity of prenatal. The sample was calculated in 2041, to be able of the test of 95%, absolute error of 5%, was used program Stata 9,0, carried through test qui squared and accepted p< 0,05 (95%) as limit for significance. In the selection collection of digital blood in processed paper was used filter and in the laboratory of NUPAD - MG, to be submitted to ELISA test. The pregnant that had presented resulted modified had been contacted for new collection of peripheral vein blood for confirmatory tests western blot and PCR.RESULTS Of the 2044 evaluated pregnant, 7 pregnant had presented resulted modified, 01 indeterminate and 06 positives, showing prevalence of 0.34%. CONCLUSION This research MOSTROU that prevalence is higher then on blood donators and is necessary ampler studies and that they contemplate other extracts of the population to identify the reality of the presence of the virus in the State of the Maranhão. / INTRODUÇÃO: O HTLV é um retrovírus com tropismo pelos linfócitos T; o tipo 1 é endêmico na região do Caribe, Japão, América do Sul, e partes da África; o tipo 2 em alguns grupos nativos americanos e em estudos em doadores de sangue, raramente na África, e na Europa associado com uso de drogas injetáveis. No Brasil estima-se 2,5 milhões de pessoas infectadas em todos os Estados onde foi pesquisado, com prevalências variáveis. No Maranhão, a prevalência encontrada em doadores de sangue foi de 10/1000. OBJETIVO: Este estudo pretendeu identificar a prevalência do HTLV-1 e 2 na triagem de gestantes atendidas no pré-natal de três serviços públicos. METODOLOGIA: Foi realizado estudo transversal, entre 11/02/08 e 03/12/2008, com 2044 gestantes em três serviços públicos de pré-natal, São Luis/MA. As pacientes foram orientadas sobre o estudo e incluídas após assinatura do Termo de Consentimento Livre e Esclarecido) e preenchimento do questionário. Participaram gestantes consideradas de baixo risco gestacional entre 18 e 45 anos, sem história de doenças psiquiátricas, hipertensão arterial, nefropatia, diabetes e outros que caracterizariam necessidade de pré-natal especializado. A amostra foi calculada em 2041 gestantes, poder do teste de 95%, erro absoluto de 5%. Foi usado programa Stata 9.0, realizado teste qui quadrado e aceito p<0,05 (95%) como limite para significância. Na triagem usou-se coleta de sangue digital em papel filtro e processada no laboratório do NUPAD - MG, para ser submetida à técnica de ensaio imunoenzimático, específica para papel de filtro ( Biorad, Estados Unidos). As gestantes que apresentaram resultado alterado foram contatadas para nova coleta de sangue venoso periférico para testes confirmatórios Western blot e PCR. RESULTADOS: Das 2044 gestantes avaliadas, 7 gestantes apresentaram resultados alterados na fase de triagem, 01 indeterminado e 06 positivos. Posteriormente, foram submetidas aos testes confirmatórios, onde todas as 07 amostras foram positivas, mostrando prevalência de 0.34%, sendo 03 casos tipo HTLV 2 e 04 casos HTLV 1. CONCLUSÃO: Este estudo revelou que o vírus HTLV está presente na população estudada em prevalência mais alta que em doadores de sangue. Fazem-se necessário estudos mais amplos e que contemplem outros extratos da população para se identificar a realidade da presença do vírus no Estado do Maranhão, a fim de prevenir sua disseminação.

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandarego@gmail.com) on 2017-08-17T14:49:45Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Leilane da Silva Dias.pdf: 3352474 bytes, checksum: e5ac35eb128efb5462ee2c52e23201cf (MD5) / Approved for entry into archive by Delba Rosa (delba@ufba.br) on 2017-08-25T15:22:13Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Leilane da Silva Dias.pdf: 3352474 bytes, checksum: e5ac35eb128efb5462ee2c52e23201cf (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-25T15:22:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Leilane da Silva Dias.pdf: 3352474 bytes, checksum: e5ac35eb128efb5462ee2c52e23201cf (MD5) / A adesão ao seguimento ambulatorial por pacientes portadores de infecções virais crônicas é um desafio e uma proporção significativa abandona o acompanhamento. Não há dados relativos ao abandono de acompanhamento ambulatorial em pacientes infectados pelo vírus linfotrópico de células T humana tipo 1/2 (HTLV 1/2). O objetivo deste estudo foi determinar a frequência e identificar os preditores do abandono de acompanhamento ambulatorial por pacientes infectados pelo HTLV-1 /2. Conduzimos uma análise retrospectiva de uma coorte prospectiva gerada entre 2004 e 2012, que compreendeu 473 pacientes cadastrados no banco de dados do Ambulatório Magalhães Neto do Hospital Universitário Professor Edgard Santos. Abandono de acompanhamento ambulatorial foi definido como o não comparecimento a três anos ou mais consultas ambulatoriais consecutivas. As variáveis que apresentaram associação com abandono de acompanhamento com um valor de p <0,25 na análise univariada foram inseridas em um modelo de regressão logística multivariada. Fizemos entrevistas telefônicas com os pacientes que preencheram o critério de abandono de acompanhamento ambulatorial para identificar o principal motivo para o abandono do serviço. A frequência de abandono de acompanhamento ambulatorial foi de 36% (171/473). Na análise multivariada, os preditores independentes de abandono de acompanhamento ambulatorial foram idade (OR 0,970; IC 95% 0,954-0,987; P= 0,001) e sexo masculino (OR 1,800; IC 95% 1,188-2,727; P= 0,006). Nas entrevistas telefônicas, as principais razões citadas para abandono do acompanhamento foram o desinteresse pela patologia (27,2%) e a ausência de sintomas (18,2%). Em conclusão, os homens mais jovens e os assintomáticos constituem um grupo de risco para o abandono de acompanhamento ambulatorial. Educar estes pacientes sobre o HTLV-1/2 e explicar as razões para o acompanhamento, assim como as potenciais desvantagens do abandono, podem aumentar a adesão.