Esse estudo teve por objetivo avaliar a viabilidade e qualidade in vitro do concentrado de hemácias felino (CHF), colhido e armazenado em bolsas e produtos nacionais, remanufaturadas, pelo Laboratório de Hemoterapia do Serviço de Anestesia da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia da Universidade de São Paulo, de acordo com normas definidas por órgãos regulamentadores como a ANVISA. Foram analisados parâmetros bioquímicos e hematológicos de 24 unidades de CHF nos dias 0, 14 e 21 de armazenamento. Utilizou-se sistema fechado para colheita e armazenamento do sangue com solução de anticoagulante-preservativa CPDA-1. A avaliação consistiu na mensuração de porcentagem de hematócrito, hemoglobina total, hemoglobina extracelular, porcentagem de hemólise, concentrações de potássio, lactato, glicose, ATP, pH, bicarbonato, pressão de CO2 e O2, inspeção visual da bolsa e cultura microbiológica aeróbia e anaeróbia. Os resultados obtidos foram avaliados estatisticamente por meio de testes paramétricos, sendo que as determinações de hematócrito, hemoglobina total não apresentaram variação significante nos 21 dias de preservação, enquanto os de potássio, lactato, pO2 aumentaram gradativamente de forma significante. Os níveis de ATP, glicose, pH, bicarbonato e pCO2 reduziram de forma significante com o decorrer do tempo. Não houve alteração à inspeção visual das bolsas de sangue, nem crescimento de microorganismos nas culturas realizadas. Por meio destas avaliações constatouse que o sistema remanufaturado com produtos nacionais pode ser empregado com segurança para obtenção de sangue felino tendo-se em vista que se manteve estéril, com eficiente conservação do concentrado de hemácias felino em CPDA-1 até o 21º dia de armazenamento. / This study aimed to evaluate the feasibility and quality of in vitro feline packed red blood cells (CHF), harvested and stored in bags and domestic products, manufactured, Hematology Laboratory at the Department of Anesthesia, Faculty of Veterinary Medicine, University of São Paulo, according to standards set by regulatory bodies such as ANVISA. Were analyzed biochemical and hematological parameters 24 units of CHF on days 0, 14 and 21 of storage. We used a closed system for collection and storage of blood with preservative-anticoagulant solution CPDA-1. The evaluation consisted in measuring percentage of hematocrit, total hemoglobin, extracellular hemoglobin, percentage of hemolysis, potassium concentrations, lactate, glucose, ATP, pH, bicarbonate, CO2 and O2 pressure, visual inspection of the bag and aerobic and anaerobic microbiological culture . The results were statistically analyzed using parametric tests, and determinations of hematocrit, total hemoglobin showed no significant variation within 21 days of preservation, while potassium lactate, pO2 gradually increased significantly. ATP levels, glucose, pH, pCO2 and bicarbonate decreased significantly with time. There was no change to the visual inspection of blood bags, or growth of microorganisms in the cultures performed. Through these evaluations it was found that the system refilled with domestic products can be used safely for obtaining blood feline bearing in mind that remained sterile, efficient storage of red blood cells feline in CPDA-1 until the 21 th days of storage.

A transfusão de sangue continua a ser uma importante ferramenta terapêutica, porém como qualquer outra, apresenta riscos. O sangue após coletado é processado e origina os hemocomponentes, dentre eles o Concentrado de Hemácias (CH). O CH é o hemocomponente mais utilizado na prática clínica. É indicado para o tratamento de anemias e em casos de hemorragia aguda ocorridas em cirurgia ou em decorrência de doenças ou traumas. Dentre os principais riscos da transfusão de CH estão a aloimunização e as reações transfusionais, imediatas ou tardias. Deve-se avaliar a real necessidade de se transfundir um paciente, principalmente, no período intra operatório. A transfusão de CH no intra operatório está associada a um pior prognóstico, maior tempo de internação, sobrevida menor e aumento do risco de infecção. Este estudo tem por objetivo analisar as solicitações de reserva de CH, e a partir desta análise, elaborar um protocolo de reservas cirúrgicas de CH com a finalidade de determinar o quantitativo de bolsas a serem reservadas ou não para a realização procedimentos cirúrgicos realizados no Hospital Regional de Ceilândia, no Distrito Federal. Para a elaboração do protocolo, foi realizado o levantamento de dados referentes às solicitações de reservas realizadas neste hospital entre março e agosto de 2017. Baseado nestes dados, calculou-se o Índice de Pacientes Transfundidos (IPT) que definiu o percentual das reservas que foram utilizadas. Verificou-se que a maioria das reservas solicitadas não foi utilizada. Do total de 216 pacientes que tiveram reservas preparadas, para as quais foram compatibilizadas 438 bolsas, apenas 48 destas bolsas foram transfundidas, ou seja, somente 10,95%. A partir do resultado do IPT, foi definida uma conduta hemoterápica cirúrgica para cada tipo de cirurgia. E, a partir destas, foi elaborado, um protocolo de reservas de CH para cirurgias, com o intuito de racionalizar a solicitação de reservas para ser implementado no hospital. Podendo assim ser um instrumento, para a equipe médica e para a agência transfusional, contribuindo para a economia de recursos financeiros e de sangue. / Blood transfusion continues to be an important therapeutic tool but it presents risks. The blood after collection is processed originating the blood components, among them the Red blood cells (RBC). RBC is the most widely used blood component in clinical practice. It is indicated for the treatment of anemias and in cases of acute hemorrhage occurring in surgery or due to pathologies or traumas. Among the main risks of RBC transfusion are alloimmunization and transfusion reactions. The actual need to transfuse a patient, especially during the intraoperative period, should be evaluated. Intraoperative RBC transfusion is associated with a worse prognosis, longer length of stay, shorter survival and increased risk of infection. The aim of this study was to analyze the RBC reserve requests and then to elaborate a protocol of RBC surgical reserves in order to determine the quantity of blood bags to be reserved or not for surgical procedures performed at the Regional Hospital de Ceilândia (HRC), in the Federal District. For the elaboration of this protocol, the data of the reservations requests performed in HRC March 2017 to August 2017 was carried out. The transfusion Index was calculated from the data, which defined the percentage of reservations that were used. It was found that most of the requested reserves were not used. Of the total of 216 patients who had prepared reservations, for which 438 bags were compatibilized, only 48 of these bags were transfused, that is, only 10.95%. From the result of the transfusion Index, so for each elective surgical procedures a guide surgical hemotherapy was defined. In addition, a reserve protocol of RBC for surgeries was elaborated, with the purpose of rationalizing the reservation request to be implemented in the hospital. This can be an instrument for the medical team and for the transfusion agency, contributing to the rational use of financial and blood resources.

O sangue total passa por processo de centrifugação a fim de que o paciente receba apenas o componente sanguíneo do qual necessita. O controle de qualidade, inicia com inspeção visual, onde são avaliados: coloração, lipemia, presença de coágulos e vazamentos. No Hemocentro Coordenador do Paraná, a principal causa de descarte de plasma fresco (PF) é a lipemia. Os PF turvos são descartados e os respectivos concentrados de hemácias (CH) permanecem em estoque. Durante o armazenamento, os CH passam por processo de alterações bioquímicas e morfológicas conhecido como lesão de armazenamento, cuja última etapa é a hemólise. É comprometida a função terapêutica e segurança transfusional. Alguns autores relatam a relação entre lipemia e hemólise. Lipemia é o aspecto turvo do plasma, devido à presença de lipoproteínas e tem relação principalmente com a dieta do doador. O objetivo deste estudo foi comparar os parâmetros de qualidade dos CH que tiveram os plasmas descartados por lipemia com os CH de plasmas límpidos. Os PF lipêmicos foram separados e foi realizado registro por fotografia e dosagem dos triglicerídeos. Conforme o grau de turbidez os plasmas foram classificados como: ligeiramente turvos, moderadamente turvos, intensamente turvos ou leitosos. Conforme a concentração de triglicerídeos foram classificados como normal (<175 mg/dl), limítrofe (175 a 199 mg/dl), elevado (200 a 499 mg/dl) ou muito elevado (>500 mg/dl). Os respectivos CH foram avaliados durante o período de validade. Os experimentos nos CH foram realizados entre 1º e 10º, entre 11º e 22º, entre 23º e 34º e entre 35º e 42º dias de armazenamento. Foram avaliados: esterilidade, índices hematimétricos, ERO, TBARS, metemoglobina. Nos sobrenadantes dos CH foram avaliados: Na+, K+, Cl-, lactato, glicose, pH e grau de hemólise. Os experimentos também foram realizados com controles, CH de plasmas límpidos do mesmo dia de doação do grupo teste. Houve aumento da hemólise mais expressivo nos CH teste, demonstrando que a lipemia impacta negativamente na qualidade do CH durante o armazenamento. A partir dos resultados do estudo foram elaboradas estratégias para processamento, controle de qualidade, modificação e distribuição dos CH de doações com lipemia, garantindo a distribuição de um hemocomponente seguro e eficaz, minimizando descarte por hemólise e efeitos adversos à transfusão. / The blood processing allows the patient receives only the blood component that he needs. The quality control starts with visual inspection and are evaluated: coloration, lipemia, clots and leaks. At the HEMEPAR, the main loss of fresh plasma (FP) is caused by lipemia. The lipemic F are discarded and the related red blood cell (RBC) remain in stock. During storage, RBCs go through the process of biochemical and morphological changes known as storage lesions, and the last one hemolysis. Therapeutic function and transfusion safety are compromised. Some authors report the relationship between lipemia and hemolysis. Lipemia is the turbid aspect of plasma, due to the presence of lipoproteins and is mainly related to the diet of the donor. The objective of this study was to compare the quality parameters of the RBCs from lipemic donations with RBC from clear donations. Lipemic FP were photographed and quantificated to triglycerides. According to the degree of turbidity the plasmas were classified as: slightly cloudy, moderately cloudy, intensely turbid or milky. Triglyceride concentrations were classified as normal (<175 mg / dl), borderline (175 to 199 mg / dl), high (200 to 499 mg / dl) or very high (> 500 mg / dl). The respective RBCs were evaluated during the period of validity. The CH experiments were performed between 1 and 10º, 11º and 22º, 23º and 34º and 35º and 42º days of storage. The following: sterility, hematimetric indexes, ROS, TBARS and methemoglobin were evaluated. In the supernatants Na +, K +, Cl-, lactate, glucose, pH and degree of hemolysis were evaluated. The experiments were also carried out with controls, RBC from clear donations of the same day of donation of the test group. There was an increase in hemolysis in the RBC test. It shows that lipemia negatively impacts the quality of RBC during storage. From the results of the study, were established strategies for processing, quality control, modification and distribution of RBC of donations with lipemic plasma to ensure the use of safe and effective blood product for transfusion.

Introdução. O transporte é um procedimento crítico na manutenção da cadeia do frio do sangue. Falhas neste procedimento podem comprometer a sua qualidade e a segurança transfusional. Objetivo. Avaliar as não conformidades (NC) do Hemocentro de Ribeirão Preto relacionadas ao transporte de concentrado de hemácias (CH). Analisar caixas térmicas e gelos recicláveis submetidos à temperatura de 20°C e 30°C e propor melhorias neste processo. Métodologia. Estudo retrospectivo de NC relacionadas ao transporte de CH no software do sistema da qualidade do Hemocentro de Ribeirão Preto e pesquisa experimental realizada com três caixas diferentes em combinação com três gelos recicláveis distintos, simulando uma situação de transporte, nas temperaturas externas de 20°C e 30°C. Realizou-se uma estatística descritiva com os dados. Utilizou-se a metodologia de análise de variância (ANOVA), com o auxílio do software SAS® 9, utilizando a PROC GLM. Para as comparações foram utilizados contrastes ortogonais baseados na distribuição t. Resultados. Os resultados mostraram diferenças significativas no desempenho entre as caixas e entre os gelos recicláveis. No entanto, as maiores diferenças ocorreram entre as temperaturas externas de 20°C e 30°C, indicando a interferência da temperatura externa na temperatura do conteúdo interno. Outra diferença encontrada foi entre pontos de aferição das temperaturas, dentro da mesma caixa, indicando que a distribuição do ar, no interior da caixa não é homogênea. Conclusão. São vários os interferentes existentes durante o transporte de CH, que podem comprometer a qualidade do sangue. O transporte deve ser validado, padronizando o maior número de variáveis possíveis, para minimizar as adversidades que ocorrem durante o procedimento / Introduction. The transport is a critical procedure in the maintenance of the blood cold chain. Failures in this procedure can compromise the blood quality and transfusion safety. Purpose: Evaluate the non-conformances (NC) of Hemocentro de Ribeirão Preto related to the Red Blood Cell (RBC) transport. Verify coolers, recycle ice at a temperature of 20°C and 30°C and propose improvements in this process. Methodology: Retrospective study of NC related to RBC transport in Hemocentro de Ribeirão Preto quality system software. Experimental research performed with three different insulated boxes combined with three different ice packs, simulating a situation of transport in the external temperatures of 20°C and 30°C. It was made a descriptive statistic of the data. The methodology of analysis of variance was used, through the software SAS® 9, using a PROC GLM. To do the comparisons orthogonal contrasts based on t distribution were used. Results: The results shown significant differences between insulated box and ice packs. However, the larger differences occurred between the temperatures of 20°C and 30°C, indicating that the external temperature interfere in the temperature inside the box. Another difference found was between points of temperature, inside the same insulated box, indicating that the air distribution inside the insulated box is not homogeneous. Conclusion. During RBC transport, many interfering exist that can compromise the blood quality. The transport must be validated, standardizing the largest number of details that is possible, to minimize adversity that occur during the procedure

O sangue total passa por processo de centrifugação a fim de que o paciente receba apenas o componente sanguíneo do qual necessita. O controle de qualidade, inicia com inspeção visual, onde são avaliados: coloração, lipemia, presença de coágulos e vazamentos. No Hemocentro Coordenador do Paraná, a principal causa de descarte de plasma fresco (PF) é a lipemia. Os PF turvos são descartados e os respectivos concentrados de hemácias (CH) permanecem em estoque. Durante o armazenamento, os CH passam por processo de alterações bioquímicas e morfológicas conhecido como lesão de armazenamento, cuja última etapa é a hemólise. É comprometida a função terapêutica e segurança transfusional. Alguns autores relatam a relação entre lipemia e hemólise. Lipemia é o aspecto turvo do plasma, devido à presença de lipoproteínas e tem relação principalmente com a dieta do doador. O objetivo deste estudo foi comparar os parâmetros de qualidade dos CH que tiveram os plasmas descartados por lipemia com os CH de plasmas límpidos. Os PF lipêmicos foram separados e foi realizado registro por fotografia e dosagem dos triglicerídeos. Conforme o grau de turbidez os plasmas foram classificados como: ligeiramente turvos, moderadamente turvos, intensamente turvos ou leitosos. Conforme a concentração de triglicerídeos foram classificados como normal (<175 mg/dl), limítrofe (175 a 199 mg/dl), elevado (200 a 499 mg/dl) ou muito elevado (>500 mg/dl). Os respectivos CH foram avaliados durante o período de validade. Os experimentos nos CH foram realizados entre 1º e 10º, entre 11º e 22º, entre 23º e 34º e entre 35º e 42º dias de armazenamento. Foram avaliados: esterilidade, índices hematimétricos, ERO, TBARS, metemoglobina. Nos sobrenadantes dos CH foram avaliados: Na+, K+, Cl-, lactato, glicose, pH e grau de hemólise. Os experimentos também foram realizados com controles, CH de plasmas límpidos do mesmo dia de doação do grupo teste. Houve aumento da hemólise mais expressivo nos CH teste, demonstrando que a lipemia impacta negativamente na qualidade do CH durante o armazenamento. A partir dos resultados do estudo foram elaboradas estratégias para processamento, controle de qualidade, modificação e distribuição dos CH de doações com lipemia, garantindo a distribuição de um hemocomponente seguro e eficaz, minimizando descarte por hemólise e efeitos adversos à transfusão. / The blood processing allows the patient receives only the blood component that he needs. The quality control starts with visual inspection and are evaluated: coloration, lipemia, clots and leaks. At the HEMEPAR, the main loss of fresh plasma (FP) is caused by lipemia. The lipemic F are discarded and the related red blood cell (RBC) remain in stock. During storage, RBCs go through the process of biochemical and morphological changes known as storage lesions, and the last one hemolysis. Therapeutic function and transfusion safety are compromised. Some authors report the relationship between lipemia and hemolysis. Lipemia is the turbid aspect of plasma, due to the presence of lipoproteins and is mainly related to the diet of the donor. The objective of this study was to compare the quality parameters of the RBCs from lipemic donations with RBC from clear donations. Lipemic FP were photographed and quantificated to triglycerides. According to the degree of turbidity the plasmas were classified as: slightly cloudy, moderately cloudy, intensely turbid or milky. Triglyceride concentrations were classified as normal (<175 mg / dl), borderline (175 to 199 mg / dl), high (200 to 499 mg / dl) or very high (> 500 mg / dl). The respective RBCs were evaluated during the period of validity. The CH experiments were performed between 1 and 10º, 11º and 22º, 23º and 34º and 35º and 42º days of storage. The following: sterility, hematimetric indexes, ROS, TBARS and methemoglobin were evaluated. In the supernatants Na +, K +, Cl-, lactate, glucose, pH and degree of hemolysis were evaluated. The experiments were also carried out with controls, RBC from clear donations of the same day of donation of the test group. There was an increase in hemolysis in the RBC test. It shows that lipemia negatively impacts the quality of RBC during storage. From the results of the study, were established strategies for processing, quality control, modification and distribution of RBC of donations with lipemic plasma to ensure the use of safe and effective blood product for transfusion.

Made available in DSpace on 2016-08-15T20:31:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 RejaneSS_DISSERT.pdf: 2305528 bytes, checksum: 47bde97e4a35896152b153a7383736d8 (MD5) Previous issue date: 2012-07-04 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / This study evaluated the clinical, hematological, biochemical and blood gas responses and the oxidative stress in sheep submitted to hiperacute anemia and subsequently underwent to homologous transfusion with whole blood, either fresh, or stored for 15 or 35 days. Eighteen adult Santa Inez crossbred sheep, males and females, were used, weighing on average 52kg. The animals were submitted to a single phlebotomy to remove 40% of blood volume and equally divided into three experimental groups: G0 - animals receiving fresh blood; G15 receiving blood stored for 15 days; and G35 - receiving blood stored for 35 days. The animals were submitted to clinical examination and blood collection 24 h after induction of anemia (T0), 30 minutes after transfusion (T30), six, twelve, twenty-four, forty-eight, seventy-two and ninety-six hours post-transfusion (T6, T12, T24, T48, T72 and T96, respectively), and eight and sixteen days post-transfusion (T8d and T16d, respectively). The blood bags stored for 35 days showed an increase in K, pCO2, pO2, lactate, plasma hemoglobin and decreased plasma pH, sodium and leukocytes. The sheep transfused from all groups had increased GV, red cell count and total hemoglobin in the T30. The animals of the G35 had higher plasma hemoglobin in T12, a significant decrease in blood pH indicating a mild metabolic acidosis on T96. With respect to oxidative stress, was observed a decreased on catalase values of the G35 at T30, T6, T12 and T24, suggesting the occurrence of hemolysis witch was supported by the concomitant increase in the total bilirubin values at the same periods. Animals that received blood stored for 35 days showed higher alteration on hematological, blood gas, biochemical and oxidative stress parameters / O presente trabalho objetivou avaliar as respostas clínicas, hematológicas, bioquímicas, hemogasométricas e o estresse oxidativo de ovinos induzidos à anemia superaguda e transfundidos com sangue total fresco ou armazenado por dois diferentes períodos (15 e 35 dias). Foram utilizados 18 ovinos, machos e fêmeas, com idade entre 3 e 4 anos, pesando em media 52kg. Os animais foram submetidos a uma única flebotomia para retirada de 40% do volume sanguíneo e divididos em três grupos experimentais, sendo o G0 composto por animais que receberam sangue fresco, G15 e G35 animais que receberam sangue armazenado em bolsas CPDA-1 por 15 e 35 dias, respectivamente. Foi realizado exame clínico e coleta de amostras de sangue 24 horas pós-indução da anemia (T0), 30 minutos pós-transfusão (T30), seis, 12, 24, 48, 72 e 96 horas após à transfusão (T6, T12, T24, T48, T72, T96, respectivamente) e oito e dezesseis dias após à transfusão (T8d e T16d, respectivamente). O sangue armazenado por 35 dias apresentou aumento do potássio, pCO2, pO2, lactato, hemoglobina plasmática e diminuição do pH, sódio e leucócitos. Ovinos transfundidos no T30 apresentaram aumento significativo do VG, hemácias e hemoglobina total. Os animais do G35 apresentaram maiores valores de hemoglobina plasmática no T12 e diminuição do pH sanguíneo, caracterizando leve acidemia metabólica no T96. Com relação ao estresse oxidativo o G35 apresentou redução da catalase no T30, T6, T12 e T24, indicando a ocorrência de hemólise, o que foi corroborado pelo aumento concomitante da bilirrubina. Os animais que receberam sangue armazenado por 35 dias apresentaram maiores alterações hematológicas, hemogasométricas, bioquímicas e oxidativas

Made available in DSpace on 2016-08-15T20:31:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 RejaneSS_DISSERT.pdf: 2305548 bytes, checksum: 418124494d2c13cd40a5d285bfaec106 (MD5) Previous issue date: 2012-09-04 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / This study evaluated the clinical, hematological, biochemical and blood gas responses and the oxidative stress in sheep submitted to hiperacute anemia and subsequently underwent to homologous transfusion with whole blood, either fresh, or stored for 15 or 35 days. Eighteen adult Santa Inez crossbred sheep, males and females, were used, weighing on average 52kg. The animals were submitted to a single phlebotomy to remove 40% of blood volume and equally divided into three experimental groups: G0 - animals receiving fresh blood; G15 receiving blood stored for 15 days; and G35 - receiving blood stored for 35 days. The animals were submitted to clinical examination and blood collection 24 h after induction of anemia (T0), 30 minutes after transfusion (T30), six, twelve, twenty-four, forty-eight, seventy-two and ninety-six hours post-transfusion (T6, T12, T24, T48, T72 and T96, respectively), and eight and sixteen days post-transfusion (T8d and T16d, respectively). The blood bags stored for 35 days showed an increase in K, pCO2, pO2, lactate, plasma hemoglobin and decreased plasma pH, sodium and leukocytes. The sheep transfused from all groups had increased GV, red cell count and total hemoglobin in the T30. The animals of the G35 had higher plasma hemoglobin in T12, a significant decrease in blood pH indicating a mild metabolic acidosis on T96. With respect to oxidative stress, was observed a decreased on catalase values of the G35 at T30, T6, T12 and T24, suggesting the occurrence of hemolysis witch was supported by the concomitant increase in the total bilirubin values at the same periods. Animals that received blood stored for 35 days showed higher alteration on hematological, blood gas, biochemical and oxidative stress parameters / O presente trabalho objetivou avaliar as respostas clínicas, hematológicas, bioquímicas, hemogasométricas e o estresse oxidativo de ovinos induzidos à anemia superaguda e transfundidos com sangue total fresco ou armazenado por dois diferentes períodos (15 e 35 dias). Foram utilizados 18 ovinos, machos e fêmeas, com idade entre 3 e 4 anos, pesando em media 52kg. Os animais foram submetidos a uma única flebotomia para retirada de 40% do volume sanguíneo e divididos em três grupos experimentais, sendo o G0 composto por animais que receberam sangue fresco, G15 e G35 animais que receberam sangue armazenado em bolsas CPDA-1 por 15 e 35 dias, respectivamente. Foi realizado exame clínico e coleta de amostras de sangue 24 horas pós-indução da anemia (T0), 30 minutos pós-transfusão (T30), seis, 12, 24, 48, 72 e 96 horas após à transfusão (T6, T12, T24, T48, T72, T96, respectivamente) e oito e dezesseis dias após à transfusão (T8d e T16d, respectivamente). O sangue armazenado por 35 dias apresentou aumento do potássio, pCO2, pO2, lactato, hemoglobina plasmática e diminuição do pH, sódio e leucócitos. Ovinos transfundidos no T30 apresentaram aumento significativo do VG, hemácias e hemoglobina total. Os animais do G35 apresentaram maiores valores de hemoglobina plasmática no T12 e diminuição do pH sanguíneo, caracterizando leve acidemia metabólica no T96. Com relação ao estresse oxidativo o G35 apresentou redução da catalase no T30, T6, T12 e T24, indicando a ocorrência de hemólise, o que foi corroborado pelo aumento concomitante da bilirrubina. Os animais que receberam sangue armazenado por 35 dias apresentaram maiores alterações hematológicas, hemogasométricas, bioquímicas e oxidativas

Submitted by Daniele Amaral (daniee_ni@hotmail.com) on 2016-10-06T19:17:32Z No. of bitstreams: 1 DissCPP.pdf: 3587784 bytes, checksum: 38e18e70b6c78d140d46b17a57600689 (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2016-10-21T13:32:45Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DissCPP.pdf: 3587784 bytes, checksum: 38e18e70b6c78d140d46b17a57600689 (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2016-10-21T13:33:00Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DissCPP.pdf: 3587784 bytes, checksum: 38e18e70b6c78d140d46b17a57600689 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-21T13:33:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DissCPP.pdf: 3587784 bytes, checksum: 38e18e70b6c78d140d46b17a57600689 (MD5) Previous issue date: 2015-10-14 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Reactive oxygen species (ROS) are products naturally generated by the cell metabolism and at low levels play an important physiological role in intracellular regulation, whereas in excess can cause damage to cells. To combat this damage, cells present a complex defense mechanism including different enzymes which act as antioxidants. Among these enzymes, and especially in cells such as erythrocytes, which are exposed to high levels of molecular oxygen, the Peroxiredoxins (Prxs), stand out for the abundance and great reactivity with its substrates. In this cell type, when occurs hemolytic diseases such as sickle cell anemia and beta thalassemia, increased production of ROS and consequently oxidative damage are observed, greatly aggravating the clinical picture of patients affected by these diseases. In these diseases, the PRDX2 appears to be a major line of antioxidant defense, as it is the third most present protein in the cytosol of the erythrocyte. Therefore, this study aimed to assess the role of PRDX2 in differentiated K562 cells for the expression of erythroid characteristics, through gene silencing using shRNA_PRDX2. It was possible to obtain a 70% of the PRDX2 expression inhibition, which caused a decrease in the proliferation, cell viability and interaction, showing the importance of PRDX2 in oxidative protection on this cell type. In order to evaluate the modulation of antioxidant system in these cells, we also analyzed the pattern of gene and protein expression of all other PRDXs beyond the gene expression of other antioxidant enzymes during the process of differentiation. We found that inhibition of PRDX2 expression adversely affects the expression of PRDX5 and causes increased expression of their biological reducing agents, which increase the recycling PRDX2, compensating for their lack the cell. These data are not get described in the literature and additional analysis is needed to better understand this interaction beyond the molecular mechanisms involved in the expression of related enzymes in protection against ROS. Understanding these mechanisms seems important to work with a better insight of the pathophysiology of hemolytic diseases by identifying possible targets to assist in the management and can mitigate the effects of the disease in these patients. / Espécies reativas de oxigênio (EROs) são produtos gerados naturalmente pelo metabolismo celular e em baixos níveis fisiológicos desempenham importante papel na regulação intracelular, enquanto que em excesso podem causar diversos danos às células. Para combater esses danos, as células apresentam um complexo mecanismo de defesa incluindo diferentes enzimas que atuam como antioxidantes. Dentre estas enzimas e, principalmente em células como os eritrócitos, que são expostas a altos teores de oxigênio molecular, as Peroxirredoxinas (Prxs), se destacam pela abundância e grande reatividade com os seus substratos. Neste tipo celular, quando ocorrem doenças hemolíticas como a anemia falciforme e a beta talassemia, uma maior produção de EROs e consequentemente de danos oxidativos são observados, agravando sobremaneira o quadro clínico dos pacientes acometidos por estas doenças. Nessas doenças, a PRDX2 aparenta ser uma importante linha de defesa antioxidante, já que é a terceira proteína mais presente no citosol do eritrócito. Diante disso, esse trabalho teve como objetivo a avaliação do papel de PRDX2 em células K562 diferenciadas para a expressão de características eritróides, através do silenciamento gênico de PRDX2 utilizando shRNA. Foi possível a obtenção de uma inibição de 70% da expressão de PRDX2, a qual causou diminuição na proliferação, viabilidade e interação celular, mostrando a importância da PRDX2 na proteção oxidativa nesse tipo celular. Com o objetivo de avaliar a modulação do sistema antioxidante nestas células, analisamos também, o padrão de expressão gênica e proteica de todas as outras PRDXs além da expressão gênica de outras enzimas antioxidantes durante o processo de diferenciação. Verificamos que a inibição da expressão de PRDX2 afeta negativamente a expressão de PRDX5 e causa o aumento da expressão de seus redutores biológicos, o que aumentaria a reciclagem de PRDX2 compensando sua falta na célula. Esse dado é inédito na literatura e análises adicionais são necessárias para melhor compreender essa interação além dos mecanismos moleculares envolvidos na expressão de enzimas relacionadas na proteção contra EROS. A compreensão destes mecanismos parece importante para colaborar com o melhor entendimento da fisiopatologia de doenças hemolíticas, identificando possíveis alvos que auxiliem no manejo e que possam amenizar os efeitos da doença desses pacientes.

Orientador: Elenice Deffune / Resumo: As vesículas extracelulares (VEs) são formações membranárias heterogêneas de tamanhos submicrométricos, que possuem funções específicas dependentes de sua biogênese. Os Concentrados de hemácias (CH) sofrem inúmeras alterações bioquímicas e morfológicas durante a estocagem comprometendo o meio intracelular e extracelular. O controle de qualidade das unidade de CH avalia essa lesão de estoque das hemácias principalmente a partir da determinação do grau de hemólise através da dosagem de hemoglobina livre. Não se sabe ao certo a quantidade de vesículas extracelulares que um CH pode gerar durante seu armazenamento mas muitos estudos relacionam as VEs com complicações pós-transfusionais. O objetivo deste estudo foi analisar o controle de qualidade de concentrados de hemácias sob o aspecto da identificação de vesículas extracelulares, correlacionando o grau de hemólise e a identificação de VEs em CH de hemácias em diferentes dias de conservação. Métodos: CH foram obtidos de 20 doadores saudáveis, refrigerados armazenados por 35 dias, e avaliados para o perfil de doação de sangue, grau de hemólise e dosagem de VEs por citometria de fluxo nos dias 5, 15, 25 e 35 de armazenamento. Resultados: Não houve diferença estatística significante entre o perfil da doação e as dosagens de grau de hemólise e VEs. O número total de VEs aumentou significativamente com o armazenamento assim como o grau de hemólise, observando maior correlação entre os métodos em D25 (p=0,0002) e D35 (p<0,0001). O tam... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The extracellular vesicles (EVs) are heterogeneous membrane formations of submicrometric sizes, which have specific functions depending on their biogenesis. Red blood cell (RBC) undergo numerous biochemical and morphological changes during storage age compromising the intracellular and extracellular environment. The quality control of these units evaluates this lesion RBCs inventory mainly from the haemolysis determination through the measurement of free haemoglobin. It is unclear how much EVs the RBCs can generate during its storage but many studies related the EVs with post-transfusion complications. The objective of this study was to analyze the RBCs quality control under the aspect of the identification of EVs, correlating the haemolysis and the identification of VEs on different days of conservation. Methods: RBC were obtained from 20 healthy donors, refrigerated and stored for 35 days, and evaluated for blood donation profile, haemolysis and EVs counting by flow cytometry on storage days 5, 15, 25 and 35. Results: There was no statistically significant difference between the donation profile and haemolysis percentual and EVs dosages. The total number of EVs increased significantly with storage as well as the haemolysis, observing a higher correlation between the methods in D25 (p = 0.0002) and D35 (p <0.0001). The size of the VEs was evaluated by the fluorescence intensity that demonstrated VEs < 3μm. The haemolysis proved to be an unreliable parameter, since even in th... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2016-09-12T14:28:27Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Tese _Diógenes Soares Moura_final.pdf: 4560976 bytes, checksum: efbc9854c7666e2a40de8b98b027e62d (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-12T14:28:27Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Tese _Diógenes Soares Moura_final.pdf: 4560976 bytes, checksum: efbc9854c7666e2a40de8b98b027e62d (MD5) Previous issue date: 2016-02-25 / CAPEs / O presente trabalho explora a utilização de lasers na região do infravermelho do espectro eletromagnético em aplicações biomédicas. O uso dos lasers na indústria, para processamento de materiais e em aplicações médicas, como a realização de cirurgias, têm atraído grande interesse nas últimas décadas. Neste trabalho, laser infravermelho foi explorado no corte de bolsas de sangue e no desenvolvimento de sistema de avaliação de elasticidade de hemácias baseado em técnica de aprisionamento óptico. No corte de bolsas de sangue foram determinados os parâmetros da ablação como tempo de perfuração, taxa de ablação e diâmetro dos furos para diferentes fluências e taxas de repetição do laser. Neste trabalho foram utilizados laser pulsados no regime de femtossegundos, com comprimento de onda de 800 nm, com taxa de repetição de 10 Hz e 1 KHz. Os resultados mostraram uma dependência do processo de ablação com o aumento da fluência e da taxa de repetição do laser. Além disso, foram avaliados os resíduos gasosos emitidos durante o processo de ablação das bolsas. A avaliação dos parâmetros de ablação à laser de bolsas de sangue consiste em um estudo pioneiro e introduz um novo direcionamento no processo de corte das mesmas. No desenvolvimento de um sistema para avaliação automática de elasticidade de hemácias aprisionadas opticamente foram utilizados lasers contínuos nos comprimentos de onda de 785 nm e 1064 nm. O sistema permite obter o valor da elasticidade de uma célula em 20 segundos, o que imprime uma redução significativa do tempo do processo de avaliação (60 ×) comparada ao método convencional. O sistema automático pode ajudar a expandir as aplicações de pinças ópticas em Hematologia e Hemoterapia. Além disto, o sistema construído foi utilizado para avaliar danos em hemácias aprisionadas opticamente. Foi verificada uma dependência da elasticidade das células com o comprimento de onda, potência do laser incidente e com tempo de aprisionamento da hemácia. Observou-se que as hemácias, após 2 minutos de exposição ao laser de 785 nm tornaram-se até ~ 104% menos deformáveis que as hemácias controle. A exposição ao laser de 1064 nm de 2 minutos a 10 mW induziu um aumento de até ~ 20% na rigidez celular. Atribuiu-se a dependência do comprimento de onda dos danos ópticos à absorção do laser pela hemoglobina. As modificações observadas nas propriedades elásticas das células estudadas estabelecem novos limites para aplicações utilizando lasers em hemácias. / This work explores the use of lasers in the infrared region of the electromagnetic spectrum in biomedical applications. The use of lasers in industry for materials processing and in medical applications, such as in surgeries, have attracted great interest in recent decades. In this work, infrared lasers were explored in blood bags cutting and in the development of a red blood cells elasticity evaluation system based on optical trapping technique. For the blood bags cutting process, ablation parameters such as drilling time, ablation rate and ablation diameter for different laser fluence and repetition rates were determined. In this work we used pulsed laser in femtosecond regime, with a wavelength of 800 nm, with repetition rate of 10 Hz and 1 KHz. The results showed a dependence of the ablation process with laser fluence and repetition rate. In addition, the waste gases emitted during the blood bags ablation process were evaluated. The evaluation of the blood bag laser ablation parameters consists of a pioneering study and introduces a new direction in the blood bag cutting process. In the development of a system for automatic evaluation elasticity of optically trapped red blood cells (RBCs), continuous laser at a wavelength of 785 nm and 1064 nm were used. The system allows to obtain the value of cell elasticity in 20 seconds, establishing a significant reduction in the assessment process time (× 60) compared to the conventional method. The automated system can help expand the applications of optical tweezers in Hematology and Hemotherapy. In addition, the constructed system was used to evaluate damage to red blood cells optically trapped. A dependence of the cells elasticity with the wavelength and power laser and with cell time trapping was observed. The results shows that the red blood cells was up to ~104% less deformable after 2 minutes of 785 nm laser exposition. The 2 minutes exposure to 10 mW of 1064 nm laser induced an increase up to ~ 20% on cell rigidity. We ascribed the wavelength dependence of the optical damages to the laser absorption by the hemoglobin. Moreover, the increase of RBCs rigidity could be associated to initial changes optically caused in the hemoglobin after irradiation. The results establish new limits for laser applications in RBCs, by identifying considerable modifications on their elastic properties.