Foi realizada inicialmente uma revisão sobre o processo de hemostasia, as características da hemofilia A, e os fatores que influem na formação de inibidores contra o Fator VIII, um dos principais problemas na terapêutica de reposição do mesmo em hemofílicos A graves. Posteriormente, visando verificar possíveis suscetibilidades genéticas no desenvolvimento de tais anticorpos, foram descritos estudos envolvendo 154 hemofílicos A graves localizados no Rio Grande do Sul, 47 com e 107 sem inibidores. A pesquisa envolveu 10 polimorfismos em cinco sistemas relacionados à resposta imune (IL4, IL4R, IL10, TNFα e TNFR1). Três desses polimorfismos (IL4R 1902A>G, TNFα -863A>C, e TNFR1 303A>G) nunca haviam sido estudados dentro desse contexto. Não foram observadas diferenças estatisticamente significativas nas prevalências desses polimorfismos entre as duas séries, em concordância com algumas, mas não todas as investigações prévias. A questão de por que alguns pacientes desenvolvem tais inibidores, mas outros não, permanece em aberto. / A review was initially made on the hemostatic process, the characteristics of hemophilia A, and the factors that influence the formation of inhibitors against Factor VIII, one of the main problems that exist in the therapeutics of its replacement in severe hemophilia A patients. Afterwords, in an attempt to verify possible genetic susceptibilities in the development of such antibodies, a description was made of studies involving 154 severe hemophilia A subjects living in Rio Grande do Sul, 47 with and 107 without inhibitors. The research included 10 polymorphisms in five systems related to the immune response (IL4, IL4R, IL10, TNFα and TNFR1). Three of them (IL4R 1902A>G, TNFα -863A>C, and TNFR1 303A>G) had never been studied in this context. No statistical significant differences were found between the two series, in agreement with some, but not all previous investigations. The question of why some, but not all severe hemophilia A patients develop anti-Factor VIII antibodies remain open.

A Hemofilia B (HB) é uma doença hemorrágica causada pela redução ou ausência da atividade do Fator IX da coagulação (FIX), devido a mutações no gene que codifica a proteína. O padrão de herança é recessivo ligado ao sexo. O FIX ativado, em complexo com o fator VIII (FVIII) ativado, forma o complexo Xase intrínseco, o qual leva à ativação do fator X (FX). O FX ativado transforma a protrombina em trombina, a qual converte fibrinogênio em fibrina, formando o coágulo sanguíneo. O gene do FIX localiza-se no cromossomo Xq27.1, ele compreende 33kb e está organizado em 8 éxons (a-h). Existem 1.094 mutações descritas que resultam em hemofilia B nas formas grave, moderada ou leve, sendo que mais da metade dessas mutações estão associadas à forma grave da hemofilia B. O presente estudo tem por objetivo geral a caracterização molecular das mutações em pacientes diagnosticados com hemofilia B residentes no Rio Grande do Sul. Esse estudo das mutações possibilita uma melhor compreensão da genética molecular da doença na população estudada; fornece ferramentas importantes para análises bioquímicas e predição de alterações na estrutura tridimensional da molécula do FIX e melhora o entendimento da relação genótipo/fenótipo. Um total de 52 pacientes masculinos com hemofilia B está incluído no estudo. A estratégia utilizada para a detecção de mutações na hemofilia B foi iniciada pela investigação da presença de grandes deleções, utilizando-se a técnica de PCR. Não foram encontradas, porém, quaisquer grandes deleções. A seguir, foi feito o sequenciamento direto dos 8 éxons do gene do fator IX e suas regiões flanqueadoras. Os produtos de PCR foram purificados para o sequenciamento e, após, essas amostras foram encaminhadas a uma empresa terceirizada para o sequenciamento. Serão apresentados resultados dos éxons 1 a 8, nos quais foram encontradas 19 diferentes mutações, sendo 15 mutações de sentido trocado, 1 pequena deleção de dois nucleotídeos e 3 mutações sem sentido. Esses resultados foram comparados com as informações existentes no banco de dados mundial e estudos específicos anteriores desenvolvidos no Brasil, Argentina e México. / Hemophilia B (HB) is a hemorrhagic disorder caused by the reduction or absence of activity from the coagulation Factor IX (FIX), due to mutations in the protein encoding gene. The pattern of inheritance is sex-linked recessive. The activated FIX, along with the activated Factor VIII (FVIII), originates the intrinsic Xase complex, which leads to the activation of Factor X (FX). The activated FX transforms prothrombin into thrombin, which converts fibrinogen into fibrin, resulting in blood clot. The FIX gene is located on chromosome Xq27.1, comprises 33kb and is arranged in 8 exons (a-h). There are 1,094 described mutations that result in Hemophilia B in its severe, moderate or mild forms, and more than half of these mutations are associated with Hemophilia B’s severe form. The overall purpose of the present study is to present the molecular characterization of mutations in patients diagnosed with Hemophilia B who are residents in Rio Grande do Sul. This study on mutations allows a better understanding of molecular genetics of the disease in the analyzed population; it also provides important tools for biochemical analyses and for the prediction of changes in the three-dimensional structure of the FIX molecule, and it improves the understanding of the genotype/phenotype relationship. A total of 52 male patients diagnosed with Hemophilia B, is included in the study. The strategy used to detect mutations in Hemophilia B was first to examine the presence of major deletions, using PCR methods. No large deletions, however, were found. Afterwards, we performed the direct sequencing of the 8 exons of the Factor IX gene and its flanking regions. The PCR products were purified for the sequencing process, and then these samples were sent to a third-party company for sequencing. The results for exons 1 to 8 are presented; we found 19 different mutations, from which 15 are missense mutations, 1 is a small deletion of two nucleotides and 3 are non-sense mutations. These results were compared with those of the world database and specific previous studies performed in Brazil, Argentina and Mexico.

A Hemofilia B (HB) é uma doença hemorrágica causada pela redução ou ausência da atividade do Fator IX da coagulação (FIX), devido a mutações no gene que codifica a proteína. O padrão de herança é recessivo ligado ao sexo. O FIX ativado, em complexo com o fator VIII (FVIII) ativado, forma o complexo Xase intrínseco, o qual leva à ativação do fator X (FX). O FX ativado transforma a protrombina em trombina, a qual converte fibrinogênio em fibrina, formando o coágulo sanguíneo. O gene do FIX localiza-se no cromossomo Xq27.1, ele compreende 33kb e está organizado em 8 éxons (a-h). Existem 1.094 mutações descritas que resultam em hemofilia B nas formas grave, moderada ou leve, sendo que mais da metade dessas mutações estão associadas à forma grave da hemofilia B. O presente estudo tem por objetivo geral a caracterização molecular das mutações em pacientes diagnosticados com hemofilia B residentes no Rio Grande do Sul. Esse estudo das mutações possibilita uma melhor compreensão da genética molecular da doença na população estudada; fornece ferramentas importantes para análises bioquímicas e predição de alterações na estrutura tridimensional da molécula do FIX e melhora o entendimento da relação genótipo/fenótipo. Um total de 52 pacientes masculinos com hemofilia B está incluído no estudo. A estratégia utilizada para a detecção de mutações na hemofilia B foi iniciada pela investigação da presença de grandes deleções, utilizando-se a técnica de PCR. Não foram encontradas, porém, quaisquer grandes deleções. A seguir, foi feito o sequenciamento direto dos 8 éxons do gene do fator IX e suas regiões flanqueadoras. Os produtos de PCR foram purificados para o sequenciamento e, após, essas amostras foram encaminhadas a uma empresa terceirizada para o sequenciamento. Serão apresentados resultados dos éxons 1 a 8, nos quais foram encontradas 19 diferentes mutações, sendo 15 mutações de sentido trocado, 1 pequena deleção de dois nucleotídeos e 3 mutações sem sentido. Esses resultados foram comparados com as informações existentes no banco de dados mundial e estudos específicos anteriores desenvolvidos no Brasil, Argentina e México. / Hemophilia B (HB) is a hemorrhagic disorder caused by the reduction or absence of activity from the coagulation Factor IX (FIX), due to mutations in the protein encoding gene. The pattern of inheritance is sex-linked recessive. The activated FIX, along with the activated Factor VIII (FVIII), originates the intrinsic Xase complex, which leads to the activation of Factor X (FX). The activated FX transforms prothrombin into thrombin, which converts fibrinogen into fibrin, resulting in blood clot. The FIX gene is located on chromosome Xq27.1, comprises 33kb and is arranged in 8 exons (a-h). There are 1,094 described mutations that result in Hemophilia B in its severe, moderate or mild forms, and more than half of these mutations are associated with Hemophilia B’s severe form. The overall purpose of the present study is to present the molecular characterization of mutations in patients diagnosed with Hemophilia B who are residents in Rio Grande do Sul. This study on mutations allows a better understanding of molecular genetics of the disease in the analyzed population; it also provides important tools for biochemical analyses and for the prediction of changes in the three-dimensional structure of the FIX molecule, and it improves the understanding of the genotype/phenotype relationship. A total of 52 male patients diagnosed with Hemophilia B, is included in the study. The strategy used to detect mutations in Hemophilia B was first to examine the presence of major deletions, using PCR methods. No large deletions, however, were found. Afterwards, we performed the direct sequencing of the 8 exons of the Factor IX gene and its flanking regions. The PCR products were purified for the sequencing process, and then these samples were sent to a third-party company for sequencing. The results for exons 1 to 8 are presented; we found 19 different mutations, from which 15 are missense mutations, 1 is a small deletion of two nucleotides and 3 are non-sense mutations. These results were compared with those of the world database and specific previous studies performed in Brazil, Argentina and Mexico.

A hemofilia A (HA) é uma doença hemorrágica hereditária ligada ao cromossomo X, causada pela atividade reduzida ou ausente do fator VIII da coagulação (FVIII). Essa doença é o resultado de mutações heterogêneas no gene do FVIII. A identificação das mutações patogênicas é importante para o aconselhamento genético e para a avaliação das manifestações clínicas. Embora mais de 700 mutações no gene já tenham sido descritas como responsáveis pela HA grave (nível de FVIII <1%), não existem dados a respeito na população do Rio Grande do Sul. O objetivo desse trabalho é a identificação das alterações genéticas em 48 pacientes hemofílicos graves, de diferentes famílias, com resultado negativo para a presença das inversões nos íntrons 22 e 1. Tais inversões são as mutações mais comumente encontradas (40-50% e 5%, respectivamente) em hemofílicos A graves. Todos os pacientes foram analisados para a presença de grandes deleções por PCR multiplex, utilizando-se 35 pares de primers que abrangem os 26 éxons e as regiões 5’ e 3’UTR do gene. Os pacientes que não apresentaram grandes deleções foram analisados por sequenciamento direto dos exons. As variações nas sequências foram verificadas com os softwares Codon Code Aligner e MEGA5.04, para realizar alinhamentos múltiplos e para analisar a tradução da proteína mutada. O software PolyPhen-2 foi utilizado para verificar se as mutações alterariam a estrutura e a função da proteína; o software SDM foi utilizado para verificar se as mutações alterariam a estabilidade da proteína. Uma figura com a localização das mutações no gene do FVIII foi desenhada com o programa Pymol. Foram encontradas em 70% dos pacientes: uma grande deleção (incluindo os éxons 4, 5 e 6), nove pequenas deleções, cinco pequenas inserções, oito mutações de sentido trocado e seis mutações sem sentido, das quais treze são recorrentes e dezesseis são novas mutações, não descritas no banco de dados online HAMSTeRS. Quarenta e quatro por cento dos indivíduos com mutação encontrada desenvolveram inibidores, sugerindo um maior risco de desenvolvimento de inibidores em pacientes com grandes deleções, mutações sem sentido e pequenas deleções/inserções, quando comparado com pacientes com mutações de troca de sentido. Entre outras mutações de efeito evidente, foram encontradas duas mutações (D542G e S109P) que podem interferir em sítios de ligação ao cálcio, uma mutação (P2205R) que pode ser prejudicial à interação entre o FVIII e o fator de von Willebrand (FvW) e uma mutação (L2297R), que altera a superfície eletrostática da proteína. Esses dados contribuem para o melhor entendimento da funcionalidade e da estrutura do FVIII. / Hemophilia A (HA) is an X-linked inherited bleeding disorder caused by reduced or absent clotting factor VIII (FVIII) activity, determined by heterogeneous mutations in the FVIII gene. Identification of these pathogenic mutations is important for genetic counseling and the assessment of clinical manifestations. Although more than 700 mutations of the FVIII gene have been reported as responsible for severe hemophilia (FVIII: C<1%), the corresponding data is currently insufficient for Southern Brazilian populations. The aim of this study was to identify genetic changes in 48 unrelated severe HA patients, who showed negative results for inversions in introns 22 and 1. These inversions are the most common mutations (40-50% and 5%, respectively) in severe HA patients. All patients were screened for gross deletions by multiplex PCR, with 35 pairs of primers for the 26 exons and 5’- and 3’- UTR of the gene. Those without any gross deletion were then analyzed by direct sequencing for all exons. Sequence variation was analyzed with the Codon Code Aligner and the Mega0.4 softwares for multiple alignments and protein translation. PolyPhen-2 was used to predict if the mutations would alter protein’s structure and function; SDM was used to verify if the mutations would alter the protein stability. One image with the location of FVIII mutations was drawn with the Pymol software. In 70% of the patients one gross deletion (including exons 4, 5 and 6), nine small deletions, five small insertions, eight missense and six nonsense mutations were found, of which thirteen were recurrent and sixteen were novel, never reported in the HAMSTeRS database. Forty-four per cent of these mutation carriers developed FVIII inhibitors, suggesting a higher risk of inhibitors development in patients with large deletions, small deletions/insertions, and nonsense mutations than in patients with missense mutations. Among mutations of clear effect, two mutations (D542G and S109P) that may interfere with calcium binding, a mutation that may affect FVIII and von Willebrand factor (FvW) interaction (P2205R), and L2297R, that clearly affects the molecule’s electrostatic surface were found. The results enable us to better understand structural and functional aspects of this protein.

Introdução: A Hemofilia A (HA) é a doença hemorrágica ligada ao X mais freqüente na população mundial, causada por alterações no fator VIII (FVIII), afetando 1:5000 nascimentos masculinos. A forma grave dessa doença é encontrada em 50% dos pacientes e é caracterizada por intensos episódios hemorrágicos. O principal problema no tratamento desses pacientes é o desenvolvimento de anticorpos que neutralizam o FVIII infundido, chamados de inibidores contra o FVIII. Alterações estruturais no gene do fator VIII são possíveis fatores de risco ao desenvolvimento de inibidores. Duas inversões (Inv1 e Inv22) são as mais freqüentes e ocorrem exclusivamente em famílias de pacientes com HA grave, afetando cerca de 50% das famílias. Outros fatores genéticos e ambientais estão descritos na literatura como candidatos a fatores de risco ou associados com a produção de anticorpos contra o FVIII. Objetivos: Estabelecer as freqüências dessas inversões em hemofílicos graves do Rio Grande do Sul e verificar a associação entre o desenvolvimento dos inibidores e a presença das inversões nos pacientes, bem como estudar outros fatores relacionados ao surgimento dos inibidores. Metodologia: Foram entrevistadas e estudadas 158 famílias não aparentadas, representadas por 229 pacientes com hemofilia A graves (<1% FVIII) provenientes dos centros de hemoterapia do Rio Grande do Sul (Hemocentro-RS) que aceitaram livremente participar desse estudo. A partir disso, os pacientes foram genotipados para as duas inversões. Desses, foram dosados inibidores de 136 famílias (168 pacientes). Resultados: As freqüências das inversões do intron 1 e 22 nas famílias foram de aproximadamente 4% e 45%, respectivamente, estando essas de acordo com as freqüências de outras populações mundiais. Não foi encontrada uma associação estatisticamente significativa entre o surgimento de inibidores e a presença das inversões nos pacientes. Outros possíveis fatores de risco como tipo de tratamento, a etnia e a idade dos pacientes, a dose administrada de FVIII, a duração do tratamento e a presença de infecções virais crônicas foram também estudados. Quando analisados em separado, o tempo de uso de FVIII, a utilização de crioprecipitado, a dose do fator e a idade dos pacientes estão associados com desenvolvimento de inibidores, porém quando analisados em conjunto em um modelo preditor da formação de inibidores esse modelo fornece resultados não significativos. Conclusões: Esse estudo constitui-se em uma primeira aproximação ao problema, que é complexo; a continuação das pesquisas, agora envolvendo também fatores específicos do sistema imune dos pacientes, poderá fornecer dados mais conclusivos. / Introduction: Hemophilia A (HA) is the most common sex-linked bleeding disorder caused by genetic changes in factor VIII, affecting 1:5000 male births. Severe HA is the most frequent form and occur in 50% of the patients and is characterized by intense hemorragic episodes. The main problem in the treatment of these patients is the development of FVIII antibodies that neutralize the infused FVIII, called FVIII inhibitors. Structural alterations in the factor VIII gene are possible risk factors for the development of inhibitors. Two inversions (Inv1 and Inv22) are the most frequent and they occur exclusively in patients of families with severe HA, affecting about 50% of the families. Other genetic and environmental factors are described in the literature as candidates to risk factors or as being associated with the production of FVIII antibodies. Objectives: To establish the frequencies of these inversions in Rio Grande do Sul and to verify the association between the development of the inhibitors and the presence of the inversions in the patients, as well as to study other factors related to the appearance of the inhibitors. Patients and Methods: The study was carried out on 158 unrelated families, represented by 229 patients with severe HA (<1% FVIII) ascertained from Rio Grande do Sul’s centers of hemotherapy (Hemocentro-RS) that freely accepted to participate in the investigation. The patients were genotyped for the two inversions, and their inhibitor levels tested in 136 families (168 patients). Results: Intronn 1 and 22 inversion frequencies were approximately 4% and 45%, in agreement with those reported for other world populations. No statistically significant association between the occurrence of inhibitors and the presence of these inversions in the patients was found. Other possible risk factors as the type of treatment, ethnic group, patients' age, administered FVIII dose, duration of treatment and the presence of chronic viral infections were also studied. When separately analyzed, duration of FVIII, treatment, cryoprecipitate use, the factor dose and the patients' age are associated with inhibitor development, but when analyzed together in a model of inhibitors formation prediction the model yields non-significant results. Conclusions: This study is a first approximation to this complex problem; the continuation of the research, now involving also specific factors of the patient’s immune system, could furnish more conclusive data.

Foi realizada inicialmente uma revisão sobre o processo de hemostasia, as características da hemofilia A, e os fatores que influem na formação de inibidores contra o Fator VIII, um dos principais problemas na terapêutica de reposição do mesmo em hemofílicos A graves. Posteriormente, visando verificar possíveis suscetibilidades genéticas no desenvolvimento de tais anticorpos, foram descritos estudos envolvendo 154 hemofílicos A graves localizados no Rio Grande do Sul, 47 com e 107 sem inibidores. A pesquisa envolveu 10 polimorfismos em cinco sistemas relacionados à resposta imune (IL4, IL4R, IL10, TNFα e TNFR1). Três desses polimorfismos (IL4R 1902A>G, TNFα -863A>C, e TNFR1 303A>G) nunca haviam sido estudados dentro desse contexto. Não foram observadas diferenças estatisticamente significativas nas prevalências desses polimorfismos entre as duas séries, em concordância com algumas, mas não todas as investigações prévias. A questão de por que alguns pacientes desenvolvem tais inibidores, mas outros não, permanece em aberto. / A review was initially made on the hemostatic process, the characteristics of hemophilia A, and the factors that influence the formation of inhibitors against Factor VIII, one of the main problems that exist in the therapeutics of its replacement in severe hemophilia A patients. Afterwords, in an attempt to verify possible genetic susceptibilities in the development of such antibodies, a description was made of studies involving 154 severe hemophilia A subjects living in Rio Grande do Sul, 47 with and 107 without inhibitors. The research included 10 polymorphisms in five systems related to the immune response (IL4, IL4R, IL10, TNFα and TNFR1). Three of them (IL4R 1902A>G, TNFα -863A>C, and TNFR1 303A>G) had never been studied in this context. No statistical significant differences were found between the two series, in agreement with some, but not all previous investigations. The question of why some, but not all severe hemophilia A patients develop anti-Factor VIII antibodies remain open.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:08:10Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo244_1.pdf: 3855273 bytes, checksum: fa4f7d87eabf64a4b676b720450b27fb (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Esta pesquisa teve como objetivo descrever as associações sociotécnicas das redes encontradas nas patentes do United States Patent and Trademark Office que tratavam do tratamento da hemofilia. Com esse intuito, a pesquisa foi fundamentada em nossa não modernidade (LATOUR, 1994) e na Teoria do Ator-rede (LATOUR, 2008). Com essa teoria foi possível iniciar a pesquisa com uma visão simétrica e incluir os não-humanos como mediadores envolvidos nas associações que formam o coletivo. A compreensão da existência das relações e das ações de traduções dos atores humanos e dos não-humanos possibilitou o rastreamento de algumas redes que tornam as invenções possíveis. Além disso, um resgate teórico das características das patentes de Hemoterapia, bem como a explicitação do foco que seria dado a elas, facilitou o manejo dos documentos durante a pesquisa. Para se chegar às associações sociotécnicas, foram utilizadas, como método, parte da Cienciometria e alguns softwares da Análise de Redes Sociais que auxiliaram no tratamento dos documentos-patentes e no mapeamento dos grafos das redes, respectivamente. A abordagem usada foi predominantemente qualitativa. Como resultados, encontraram-se as tecnologias que permitiam a existência de outras, ou seja, as associações promotoras de novas invenções nas décadas de 1970, 1980, 1990 e 2000

Orientadores: Maria Lourdes Barjas-Castro, Joyce Annicchino Bizzacchi / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-05T09:45:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Correa_MariaElviraPizzigatti_D.pdf: 882619 bytes, checksum: 8e4b1e53b229c75c79f183dde30c420e (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: Os adesivos teciduais são produtos originários de proteínas do plasma humano, utilizados como agentes hemostáticos em diferentes procedimentos cirúrgicos. Objetivos: avaliar a influência da cola de fibrina como agente hemostático local após extrações dentárias em pacientes hemofílicos. Analisar a influência dos adesivos nos processos de reparação tecidual em pele e em alvéolo dentário em modelo animal. Capítulo I Pacientes e Métodos: Foram realizadas extrações dentárias em 31 pacientes hemofílicos, sem prévia terapia de reposição de fatores de coagulação. Os pacientes receberam antifibrinolítico oral (Ipsilon® - 200mg/kg, VO, 8/8 horas, por 7 dias). Foi realizada a avaliação da saúde bucal através dos índices: Gengival (IG); Índice de Placa (IP) e através do Índice CPOD (dentes cariados, perdidos e obturados). Após as extrações os alvéolos foram preenchidos com cola de fibrina autóloga. Os pacientes foram avaliados 24 horas após o procedimento. Resultados: em seis procedimentos (19,4%) foram observados sangramentos que foram controlados com reaplicação da cola de fibrina e dose única de fator de coagulação (um hemofílico grave, 3 hemofílicos moderados e em 2 hemofílicos leves). As médias dos índices IG, IP e CPOD foram, no grupo que sangrou, 1,7; 1,8; e 18 e, no que não apresentou sangramento, 1,8; 1,8; e 19, respectivamente. Conclusão: A cola de fibrina foi efetiva como agente hemostático local após extrações dentárias em pacientes hemofílicos, reduzindo significantemente a terapia de reposição de fatores de coagulação. As condições de saúde bucal, refletidas pelos resultados obtidos através da avaliação dos índices IG, IP e CPOD, demonstraram não haver influência desses fatores na eficácia da cola de fibrina autóloga como agente hemostático local. Capítulo II - Material e Métodos: Vinte e cinco ratos Wistar foram submetidos a duas incisões em dorso de pele após anestesia intramuscular. Na incisão do lado direito, foram inseridas esponjas embebidas em Selante de Fibrina associado ao fator XIII e aprotinina (Beriplast P® - Aventis Beringher) e, na incisão do lado esquerdo, foram inseridas esponjas sem adesivos, como controle. Os animais foram divididos em cinco grupos e sacrificados nos dias 1, 7, 14, 21, e 28 após a cirurgia. O tecido do dorso do animal foi dissecado e preparado blocos para análise microscópica (HE). O estudo histomorfométrico foi realizado em microscópio KS400 (40x - Zeiss, Jena). A composição celular do tecido de granulação foi analisada randomicamente, em 20 campos de cada amostra. Os dados foram estatisticamente analisados usando o Wilcoxon signed rank test. Os resultados mostraram um elevado número de células inflamatórias na periferia do grupo com Selante de Fibrina comparado com o controle. Esses dados sugerem que o Selante de Fibrina induziu uma intensa e prolongada resposta inflamatória no processo cicatricial e que o Selante de Fibrina persistiu até 28 dias após a cirurgia.Capítulo III: Material e Métodos: Setenta e cinco ratos Wistar foram submetidos a extração do incisivo superior após anestesia intramuscular. Os ratos foram divididos em 3 diferentes grupos e os adesivos foram aplicados nos alvéolos. O primeiro grupo (25 ratos) recebeu cola de fibrina, o segundo grupo (25) Selante de Fibrina (Beriplast P® - Aventis Beringher) e o terceiro (25) foi considerado como grupo controle. Os animais foram sacrificados por inalação de éter nos dias 1, 7, 14, e 28 após a cirurgia. Os crânios foram dissecados, submetidos a descalcificação e preparados para análise microscópica (HE). O estudo histomorfométrico foi realizado pelo sistema KS400 (Zeiss,Jena). Neoformação óssea foi cuidadosamente delimitada em quatro regiões alveolares. Os dados foram analisados estatisticamente usando regressão múltipla, ANOVA e Turkey test. Os resultados mostraram que a neoformação óssea (µm2) no grupo controle e com Selante de Fibrina foram estatisticamente similar, entretanto o alvéolo que recebeu a cola de fibrina apresentou menor área de formação óssea comparada com o grupo que recebeu o Selante (p=0,0034). Concluindo, os adesivos defibrina não influenciaram no processo de cicatrização óssea / Abstract: Fibrins adhesives are plasma protein derivate and it has been used in different surgical procedures as a local hemostatic agent. Objectives: Evaluate the autologous fibrin glue as a local hemostatic agent after tooth extraction in hemophilia patients. Analyze the influence of the fibrin adhesives in a tissue healing process in skin and alveolar bone in an animal model. Chapter I: Patients and Methods: Thirty-one hemophilic patients were submitted to teeth extractions using autologous fibrin glue and an oral antifibrinolytic drug (epsilon-aminocaproic acid). Oral health indexes (plaque-PI, gingival-GI and decay-missing-filling-teeth-DMFT index) were evaluated before tooth extraction. Results: Post-surgical bleeding episodes were observed in 6 hemophilic patients (1 severe, 3 moderate and 2 mild type). The media of PI and GI in the bleeding group were 1.8 and 1.7, respectively and in the non-bleeding group 1.8 for both (PI: p=0.8; GI: p=0.56). The global DMFT index was 18 in the bleeding group and 19.6 in the non-bleeding group (p=0.67). Conclusion: The autologous fibrin glue was efficient as a local hemostatic agent after tooth extraction in hemophilia patients. The status of oral health did not interfere in the dental extraction bleeding of hemophilic patients. Chapter II: Material and Methods: Twenty-five Wistar rats were submitted to intramuscular anesthesia. Two incisions were realized on animal back and subcutaneous ventrally pockets were made. Into the right side a vegetal sponge imbibed in FS associated to factor XIII and aprotinina (BeriplastP®-Aventis- Beringher) was introduced and in the left side the sponge without FS was insert as control. Animals were divided in 5 groups and they were sacrificed on days 1, 7, 14, 21 and 28 after the surgery. Animal back tissues were dissected and blocks were prepared for light microscopy study (H&E). The morphometric study was performed by microscopy (KS400)-40x. Twenty randomized fields from each sponge were analyzed and the cellular composition of the granulation tissue was examined with regard to its content of capillaries, granulation tissue cells and inflammatory cells. The data were statistically analyzed using the Wilcoxon signed rank test for the weight differences between the numbers of inflammatory cells for each animal in both groups. The results showed a high number of inflammatory cells in the peripheral area of the FS group comparing with the controls. The results suggest that the FS induced an intense and prolonged inflammatory response in wound healing, and the FS persisted up to 28 days after surgery. Chapter III: Material and Methods: Seventy-five Wistar rats were submitted to a superior incisor extraction after intramuscular anesthesia. The rats were divided into tree different groups and the sealants were introduced into the alveolar bone. The first group (25) received human homemade fibrin glue, the second group (25) FS associated to factor XIII and aprotinin(Beriplast®¿Aventis-Beringher) and the third group (25) was the control. Animals were sacrificed by prolonged diethyl inhalation on days 1, 7, 14 and 28 after surgery. Animal craniums were dissected and submitted to a decalcification, and preparated for H&E light microscopy. The morphometric study was performed by means of an interactive computerized image analysis system KS400(Zeiss, Jena). New bone formation was carefully delimited in four different alveolar regions of each specimen. The data were statistically analyzed using multiple regression, ANOVA and Tukey's test. Results showed that the amount of alveolar bone formation(µm2) in the control group and commercial sealant was statistically similar. However, alveolus receiving homemade sealant presented less amount of new bone formation comparing to commercial sealant and control group (p=0.0034). The present study demonstrated that fibrin adhesives did not influence on the alveolar healing process / Doutorado / Clinica Medica / Doutor em Clínica Médica

Orientadores: Margareth Castro Ozelo, Joyce Maria Annichino Bizzacchi / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-08T06:42:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_JanainaBossoJoseda_M.pdf: 4876420 bytes, checksum: 5b610c8a9244d994e2a21f8261d30ef2 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: A iontoforese é uma técnica de transferência de drogas mediadas por um fluxo elétrico. Os benefícios terapêuticos da introdução de medicamentos pela iontoforese incluem a diminuição de efeitos colaterais sistêmicos aos quais o paciente apresenta intolerância e a ação localizada do medicamento podendo este estar em maior concentração na área alvo, onde sua ação é mais efetiva e prolongada. No caso da hemofilia, efeito adicional é observado, pois o paciente é poupado de um procedimento invasivo, como punção venosa ou aplicação intra-articular, que depende da reposição dos concentrados de fator. O emprego da iontoforese corrobora a idéia de intervenção direta nos quadros agudos de hemartrose e na sinovite crônica, de maneira não invasiva. Primeiramente, elaboramos um protocolo em conjunto com o Departamento de Medicina Nuclear do Hospital das Clínicas da Unicamp com o objetivo de comprovarmos, através de experimentos cintilográficos em humanos o transporte transdérmico dinâmico pela iontoforese. Uma vez comprovado o mecanismo iontoforético, avaliamos através de modelo experimental suíno o comportamento dos fármacos com potencial uso na hemofilia, seja nos episódios agudos de hemartrose (ácido e-aminocapróico - EACA) ou tratamento da sinovite crônica (ácido hialurônico e cloridrato de oxitetraciclina). O uso de fármacos com poder hemostático durante os episódios agudos de hemartrose, além do tratamento da sinovite crônica, permitem a longo e curto prazo uma recuperação mais rápida da articulação, além de otimizar o consumo final de hemoderivados ou qualquer outra forma de reposição de fator. Neste protocolo suíno foi possível confirmar que o ácido e-aminocapróico e o cloridrato de oxitetraciclina são drogas que efetivamente poderiam ser utllizadas em protocolos iontoforéticos. A determinação da concentração do ácido hialurônico neste experimento foi prejudicada por se tratar de um complexo polissacarídeo. Assim, acreditamos que estudos complementares utilizando outras técnicas mais sensíveis de quantificação de fármacos devem ser realizadas com este intuito no futuro. A avaliação do efeito da aplicação iontoforética do EACA, ácido hialurônico e cloridrato de oxitetraciclina em modelo experimental murino (camundongos portadores de hemofília A), foi realizada através de avaliação histológica que avaliou a área de lesão proliferativa correspondente à articulação tratada e não tratada. Embora em nenhum dos grupos estudados os resultados entre os animais tratados e não tratados tenha evidenciado uma diferença estatisticamente significativa, foi possível notar uma tendência de melhora sempre que as medicações foram administradas através da iontoforese. Desta forma, o princípio da aplicação assim como as questões práticas da terapêutica iontoforética foram reconhecidas como uma possível via de administração em condições clínicas apresentadas pelos pacientes hemofílicos. Novos estudos precisam ser realizados a fim de que sejam observados o comportamento farmacológico e as doses terapêuticas ideais das drogas utilizadas para o uso através de iontoforese / Abstract: Iontophoresis is technique of transferring drugs by an electric flow. The therapeutic benefits of introducing drugs by iontophoresis include lowering of systematic side effects and the local action of medication with a larger concentration into the damage area, where its action is more effective and prolonged. Besides that, the hemophilic patients are avoided to get venous puncture or an injection into their joint. The use of iontophoresis takes the idea of direct intervention in acute hemarthroses and chronic synovitis in one non aggressive way. First of all we created a protocol in association with Nuclear Medicine Department of the Clinical Hospital of UNICAMP and we standardize cintilographic experiments in humans to evaluate the transdermal dynamics delivered by iontophoresis, confirming iontophoretics mechanism. Once it proved the iontophoretic mechanism, we evaluate in a swine experimental model the behavior of drugs with potential use in hemophilia (e-aminocaproic acid during the acute episodes of hemarthroses; hyaluronic acid and oxitetracycline clorhydrate to treat chronic cases) by electrospray ionization mass spectrometry. The use of haemostatic drugs during the acute treatment of hemarthroses, besides the treatment of chronic synovitis, allows in long and short period of time, once recover faster of the joints also reduce the final consumption of replacement products. In swine protocol, we observed that e-aminocaproic acid and oxitetracycline clorhydrate are drugs which may actually cause and be used in iontophoretics¿s protocols. However new complementary studies are necessary to make possible the use of hyaluronic acid, once it¿s a large polissacaride. We believe that others studies using different methods more sensitive of drug quantifications should be used with this purpose of accomplishment in the future. The evaluation of the iontoforetic application¿s effect of these drugs in murino¿s experimental models (knockout mice with hemophilia A) was performed by the histologic analysis, showing that in both groups (EACA and OTC) iontophoretic treatment resulted in a lower average of damage when comparing the treated limb and the one not treated. / Mestrado / Clinica Medica / Mestre em Clinica Medica

Orientador: Maria Elvira Pizzigatti Correa / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas. Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-15T16:05:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Feio_PatriciadoSocorroQueiroz_M.pdf: 2401000 bytes, checksum: ec8461997196edfbdd60b22b52c1dc43 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: A hemofilia é uma doença hemorrágica hereditária ligada ao cromossomo X, decorrente da ausência ou da baixa quantidade no plasma dos fatores de coagulação Fator VIII (hemofilia A) ou do Fator IX (hemofilia B). Clinicamente, a hemofilia se caracteriza por episódios recorrentes de sangramentos profundos, que podem ocorrer espontaneamente ou em decorrência de traumatismos. O sistema músculo-esquelético é freqüentemente afetado pelos eventos hemorrágicos nos pacientes portadores de hemofilia. Dentro desse sistema, as articulações são alvos de episódios recorrentes de sangramentos, resultando em hemartroses. Estes episódios estimulam a hiperplasia da membrana sinovial articular, caracterizando o quadro das sinovites hemofílicas. O ciclo vicioso típico de hemartrose-sinovite-hemartrose quando estabelecido, tem como conseqüência a cronificação das alterações agudas articulares. Histologicamente, na sinovite é observada a proliferação de fibroblastos sinoviais e a presença de um infiltrado de células inflamatórias. Apesar da articulação temporomandibular (ATM) ser uma articulação do tipo sinovial são poucos os relatos sobre o seu envolvimento na sinovite hemofílica. Portanto, o objetivo deste estudo foi o de avaliar as características morfológicas da ATM de camundongos deficientes de fator VIII. Além disso, avaliar a indução de sinovite por hiper-extensão bucal. Para isso, as ATM de 30 camundongos deficientes de Fator VIII foram avaliadas. Cinco desses animais fizeram parte do grupo controle. E os outros 25 fizeram parte do grupo experimental para indução de sinovite pelo método de hiper-extensão bucal. Os animais do grupo controle foram sacrificados e as ATMs foram preparadas para avaliação histológica através da microscopia óptica. Os animais do grupo de estudo foram sacrificados após 2 e 5 dias e 2,4 e 6 semanas do procedimento. A seguir, as ATM foram preparadas para análise em microscopia e a membrana sinovial anterior inferior foi avaliada segundo os critérios descritos por Muto et al (1998b). Como resultado, as ATMs do grupo controle não apresentaram nenhuma alteração anatômica e a membrana sinovial anterior inferior apresentou entre 2-5 camadas de células sinoviais. No grupo de estudo o número de camadas de células sinoviais foram semelhantes ao grupo controle. Não foi observada dilatação capilar, adesão sinovial nem a presença de sangue na cavidade articular. Portanto, nossos resultados caracterizaram histologicamente a membrana sinovial anterior inferior de camundongos deficientes de Fator VIII e a metodologia empregada de hiper-extensão bucal não foi capaz de provocar sinovite na membrana sinovial avaliada / Abstract: Hemophilia is a hereditary hemorrhagic disease linked to chromosome X due to the deficiency of the activity of coagulation Factor VIII in hemophilia A, or Factor IX in hemophilia B. Clinically, hemophilia is characterized by recurrent severe bleedings, mostly in the musculoskeletal system. When the hemorrhage occurs inside the joint, it is called hemarthosis. Hemarthosis can stimulate the synovial membrane which results in synovial hyperplasia that can characterize the hemophilic synovitis. The typical vicious cycle haemartrosis-synovitis-haemarthrosis when established produces as a consequence, the chronification of joint acute changes. Histologically, synovitis is characterized by proliferation of the sinovial cells surrounded by an inflammatory infiltrate. Despite the fact that temporomandibular joint (TMJ) is a synovial joint there are few clinical reports in the literature regarding its involvement in hemophilic synovitis. Therefore, the goal of this study was to evaluate the morphological characteristics of TMJ in Factor VIII deficient mice. In addition, the second goal was to induce a TMJ synovitis using a forced jaw opening model. For this purpose, 30 Factor VIII deficient mice were enrolled in this study. Five of these animals were included in the control group and their TMJ was evaluated using light microscopy to establish the regular morphology of this joint. The other 25 were submitted to a forced jaw opening, for 5 minutes per day, during 10 days. These animals were sacrificed after 2 and 5 days and 2, 4 and 6 weeks of the procedure. TMJ was prepared for optical microscopy analysis and the anterior inferior synovial membrane was studied using Muto et al (1998) criteria. As a result, the anatomic characteristic of the TMJ was similar with other mice and the anterior inferior synovial membrane of this group presented 2-5 cell layers. In the study group, no anatomic changes were observed. No difference was observed regarding the thickness of sinovial cell layer of the studied group and the control group. Capillaries dilatation, synovial adhesion and blood in the joint chambers were not observed. Therefore, our results have histologically characterized the anterior inferior synovial membrane of TJM in Factor VIII deficient mice. The methodology used for inducing sinovites was not capable of inducing sinovites in the TMJ of Factor VIII deficient mice / Mestrado / Estomatologia / Mestre em Estomatopatologia