Orientador: Tereza Cristina Cardoso / Coorientador: Alício Martins Júnior / Banca: Fernanda da Cruz Landim e Alvarenga / Banca: Eunice Oba / Resumo: Este estudo foi delineado com objetivo de verificar os efeitos da exposição experimental do sêmen fresco bovino ao BoHV-5, previamente à congelação, através de análises in vitro e de produção de embriões. Os seguintes testes foram avaliados no Grupo I (sêmen não exposto ao vírus) e II (sêmen exposto ao vírus): motilidade e movimento espermático, através de análise computadorizada, integridade da membrana plasmática/acrossomal (IMPA) e função mitocondrial (FM), utilizando sondas fluorescentes, translocação da fosfatidilserina (PS) na membrana do espermatozóide, com Anexina-V, desenvolvimento embrionário in vitro, evidenciado pela proporção de embriões gerados, detecção viral em espermatozóides e embriões, através do emprego da técnica de hibridização in situ (ISH) e PCR. Nenhuma diferença significativa foi observada para IMPA e FM entre os grupos. Entretanto, resultados da translocação da PS no Grupo II foram significativamente diferentes (P=0,00005) dos encontrados no Grupo I; valores maiores (P<0,05) para velocidade média (VAP), velocidade curvilínea (VCL) e amplitude de deslocamento lateral da cabeça (ALH) e menores para a retilinearidade (STR) e linearidade (LIN) foram obtidos no Grupo II quando comparados com o Grupo I. Concluindo, a ISH revelou a presença de DNA viral nos espermatozóides e embriões infectados; além disso, o BoHV-5 levou à alterações funcional e morfológica nos espermatozóides, sem comprometer o desenvolvimento embrionário, mesmo após ser carreado para os embriões, através da infecção dos oócitos na fertilização in vitro / Abstract: This study was designed to verify the effects of experimental exposure of fresh bull semen to BoHV-5, previously to the freezing process, on in vitro sperm evaluations and embryo production. The following tests were performed in groups I (semen not exposed to virus) and II (semen exposed to virus): sperm motility and movement by computerized analysis (CASA), plasma/acrosomal membrane integrity (PAMI) and mitochondrial function (MF) by fluorocromes dyes, sperm membrane phosphatidylserine (PS) transposition using Annexin-V, in vitro embryonic development evidenced by the proportion of yielded embryos, and viral detection in sperm and embryos performed by in situ hybridization (ISH) assay and PCR. No significant difference was observed for PAMI and MF between groups. However, results of PS transposition in group II were significantly different (P=0.00005) from those found in group I; higher values (P<0.05) for mean velocity (VAP), curvilinear velocity (VCL) and lateral head displacement (ALH) and lower values for straightness (STR) and linearity (LIN) were obtained in group II when compared to those observed in group I. In conclusion, the ISH assay showed the presence of viral DNA on spermatozoa and embryos; besides, BoHV-5 induced functional and morphological sperm alterations, but did not compromise the embryonic development even after being carried to the embryos through the IVF infected oocytes / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-03-29Bitstream added on 2014-06-13T18:31:15Z : No. of bitstreams: 1 souza_dg_me_araca.pdf: 1858727 bytes, checksum: 571362381118ee9810c1695198ec90f5 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Este estudo foi delineado com objetivo de verificar os efeitos da exposição experimental do sêmen fresco bovino ao BoHV-5, previamente à congelação, através de análises in vitro e de produção de embriões. Os seguintes testes foram avaliados no Grupo I (sêmen não exposto ao vírus) e II (sêmen exposto ao vírus): motilidade e movimento espermático, através de análise computadorizada, integridade da membrana plasmática/acrossomal (IMPA) e função mitocondrial (FM), utilizando sondas fluorescentes, translocação da fosfatidilserina (PS) na membrana do espermatozóide, com Anexina-V, desenvolvimento embrionário in vitro, evidenciado pela proporção de embriões gerados, detecção viral em espermatozóides e embriões, através do emprego da técnica de hibridização in situ (ISH) e PCR. Nenhuma diferença significativa foi observada para IMPA e FM entre os grupos. Entretanto, resultados da translocação da PS no Grupo II foram significativamente diferentes (P=0,00005) dos encontrados no Grupo I; valores maiores (P<0,05) para velocidade média (VAP), velocidade curvilínea (VCL) e amplitude de deslocamento lateral da cabeça (ALH) e menores para a retilinearidade (STR) e linearidade (LIN) foram obtidos no Grupo II quando comparados com o Grupo I. Concluindo, a ISH revelou a presença de DNA viral nos espermatozóides e embriões infectados; além disso, o BoHV-5 levou à alterações funcional e morfológica nos espermatozóides, sem comprometer o desenvolvimento embrionário, mesmo após ser carreado para os embriões, através da infecção dos oócitos na fertilização in vitro / This study was designed to verify the effects of experimental exposure of fresh bull semen to BoHV-5, previously to the freezing process, on in vitro sperm evaluations and embryo production. The following tests were performed in groups I (semen not exposed to virus) and II (semen exposed to virus): sperm motility and movement by computerized analysis (CASA), plasma/acrosomal membrane integrity (PAMI) and mitochondrial function (MF) by fluorocromes dyes, sperm membrane phosphatidylserine (PS) transposition using Annexin-V, in vitro embryonic development evidenced by the proportion of yielded embryos, and viral detection in sperm and embryos performed by in situ hybridization (ISH) assay and PCR. No significant difference was observed for PAMI and MF between groups. However, results of PS transposition in group II were significantly different (P=0.00005) from those found in group I; higher values (P<0.05) for mean velocity (VAP), curvilinear velocity (VCL) and lateral head displacement (ALH) and lower values for straightness (STR) and linearity (LIN) were obtained in group II when compared to those observed in group I. In conclusion, the ISH assay showed the presence of viral DNA on spermatozoa and embryos; besides, BoHV-5 induced functional and morphological sperm alterations, but did not compromise the embryonic development even after being carried to the embryos through the IVF infected oocytes

Made available in DSpace on 2015-08-20T17:10:04Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-03-20. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-20T17:25:55Z : No. of bitstreams: 1 000837195_20150920.pdf: 65943 bytes, checksum: 3d08551c973f38fe482173b18c355947 (MD5) Bitstreams deleted on 2015-09-21T13:18:54Z: 000837195_20150920.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2015-09-21T13:19:51Z : No. of bitstreams: 1 000837195.pdf: 1333023 bytes, checksum: 03e8d0fbb6f677497c15b782303ed41d (MD5) / O herpesvírus caprino tipo 1 (CpHV-1) e o herpesvírus bovino tipo 1 (BoHV-1) acarretam consideráveis perdas econômicas para o produtor, uma vez que determinam transtornos reprodutivos na espécie hospedeira. A escassez de estudos sobre esses vírus em plantéis caprinos brasileiros direcionaram o presente estudo que objetivou verificar se indícios da infecção por esses vírus influenciam a eficiência reprodutiva, por meio de uma análise precedente dos parâmetros reprodutivos descritos na escrituração zootécnica apresentados por animais positivos e negativos no exame pontual de um rebanho caprino com histórico de problemas reprodutivos no município de Monte Santo de Minas (MG), além de proceder pesquisa de ocorrência de anticorpos neutralizantes contra o BoHV-1 e o CpHV-1 pelo teste de virusneutralização (VN) em rebanhos caprinos em três ambientes diferentes: estado de São Paulo, Zona da Mata Mineira (MG) e uma propriedade no município de Monte Santo de Minas (MG). Assim, verificou-se que nos rebanhos do estado de São Paulo e da Zona da Mata Mineira não havia indícios de circulação viral recente de qualquer das espécies virais estudadas. Por outro lado, no rebanho de Monte Santo de Minas (MG) houve evidências da circulação viral recente especificamente para o CpHV-1, mas não para o BoHV-1. A análise estatística mostrou que houve mais chances dos animais serem positivos para o BoHV-1 no rebanho de Ipiguá (SP), e para o CpHV-1 no rebanho de Monte Santo de Minas (MG) e que, apesar do não isolamento, tanto BoHV-1 quanto CpHV-1 estão presentes entre rebanhos caprinos nos estados de São Paulo e de Minas Gerais. Ademais, a associação das condições sanitárias caracterizadas pela análise sorológica com detecção de alterações de parâmetros reprodutivos específicos no rebanho de Monte Santo de Minas (MG) direcionam o diagnóstico da infecção pelo CpHV-1 como... / The caprine herpesvirus type 1 (CpHV-1) and the bovine herpesvirus type 1 (BoHV-1) cause considerable economic losses for the producer, since they determine the host species reproductive disorders. The scarcity of studies about theses virus in brazilian goat herds directed this study that aimed to verify if infection evidence by them influence reproductive efficiency, carrying out the previous analysis of reproductive parameters of the zootechnical bookkeeping showed by negative and positive animals on the pontual assay of a goat herd with reproductive problems, in the municipality of Monte Santo de Minas, by research of the occurrence of neutralizing, besides research of the occurrence of neutralizing antibodies against BoHV-1 and CpHV-1, using virusneutralization test (VN), in goat herds in three different environments: São Paulo State, Zona da Mata Mineira (Minas Gerais State) and in a farm in the municipality of Monte Santo de Minas (Minas Gerais State). Thus, it was found that in São Paulo State and in Zona da Mata Mineira (MG) there was no evidence of recent viral circulation of any of the genotypes studied. On the other hand, in Monte Santo de Minas farm there were evidences of recent viral circulation specifically for CpHV-1, but not for BoHV-1. The statistical analysis showed that there were more chances of the animals were positive for BoHV-1 in Ipiguá herd (SP), and for CpHV-1 in Monte Santo de Minas (MG) herd and, despite not isolated both BoHV-1 and CpHV-1 are present in got herds of São Paulo and Minas Gerais herds. In addition, the association of health conditions characterized by serological analysis with detection of specific changes in reproductive parameters in Minas Gerais (MG) goat directs the diagnosis of infection by CpHV-1 as the cause of the problems presented by the herd showing that the presence of this virus causes reproductive problems in ...

Orientador: Samir Issa Samara / Coorientador: Edviges Maristela Pituco / Banca: Maria da Glória Buzinaro / Banca: Bruna Alexandrino / Banca: Moacir Marchiori Filho / Banca: Fernanda Senter Magajevski / Resumo: O herpesvírus caprino tipo 1 (CpHV-1) e o herpesvírus bovino tipo 1 (BoHV-1) acarretam consideráveis perdas econômicas para o produtor, uma vez que determinam transtornos reprodutivos na espécie hospedeira. A escassez de estudos sobre esses vírus em plantéis caprinos brasileiros direcionaram o presente estudo que objetivou verificar se indícios da infecção por esses vírus influenciam a eficiência reprodutiva, por meio de uma análise precedente dos parâmetros reprodutivos descritos na escrituração zootécnica apresentados por animais positivos e negativos no exame pontual de um rebanho caprino com histórico de problemas reprodutivos no município de Monte Santo de Minas (MG), além de proceder pesquisa de ocorrência de anticorpos neutralizantes contra o BoHV-1 e o CpHV-1 pelo teste de virusneutralização (VN) em rebanhos caprinos em três ambientes diferentes: estado de São Paulo, Zona da Mata Mineira (MG) e uma propriedade no município de Monte Santo de Minas (MG). Assim, verificou-se que nos rebanhos do estado de São Paulo e da Zona da Mata Mineira não havia indícios de circulação viral recente de qualquer das espécies virais estudadas. Por outro lado, no rebanho de Monte Santo de Minas (MG) houve evidências da circulação viral recente especificamente para o CpHV-1, mas não para o BoHV-1. A análise estatística mostrou que houve mais chances dos animais serem positivos para o BoHV-1 no rebanho de Ipiguá (SP), e para o CpHV-1 no rebanho de Monte Santo de Minas (MG) e que, apesar do não isolamento, tanto BoHV-1 quanto CpHV-1 estão presentes entre rebanhos caprinos nos estados de São Paulo e de Minas Gerais. Ademais, a associação das condições sanitárias caracterizadas pela análise sorológica com detecção de alterações de parâmetros reprodutivos específicos no rebanho de Monte Santo de Minas (MG) direcionam o diagnóstico da infecção pelo CpHV-1 como... / Abstract: The caprine herpesvirus type 1 (CpHV-1) and the bovine herpesvirus type 1 (BoHV-1) cause considerable economic losses for the producer, since they determine the host species reproductive disorders. The scarcity of studies about theses virus in brazilian goat herds directed this study that aimed to verify if infection evidence by them influence reproductive efficiency, carrying out the previous analysis of reproductive parameters of the zootechnical bookkeeping showed by negative and positive animals on the pontual assay of a goat herd with reproductive problems, in the municipality of Monte Santo de Minas, by research of the occurrence of neutralizing, besides research of the occurrence of neutralizing antibodies against BoHV-1 and CpHV-1, using virusneutralization test (VN), in goat herds in three different environments: São Paulo State, Zona da Mata Mineira (Minas Gerais State) and in a farm in the municipality of Monte Santo de Minas (Minas Gerais State). Thus, it was found that in São Paulo State and in Zona da Mata Mineira (MG) there was no evidence of recent viral circulation of any of the genotypes studied. On the other hand, in Monte Santo de Minas farm there were evidences of recent viral circulation specifically for CpHV-1, but not for BoHV-1. The statistical analysis showed that there were more chances of the animals were positive for BoHV-1 in Ipiguá herd (SP), and for CpHV-1 in Monte Santo de Minas (MG) herd and, despite not isolated both BoHV-1 and CpHV-1 are present in got herds of São Paulo and Minas Gerais herds. In addition, the association of health conditions characterized by serological analysis with detection of specific changes in reproductive parameters in Minas Gerais (MG) goat directs the diagnosis of infection by CpHV-1 as the cause of the problems presented by the herd showing that the presence of this virus causes reproductive problems in ... / Doutor

Orientador: João Pessoa Araújo Junior / Banca: José Paes de Oliveira Filho / Banca: Clarice Weis Arns / Resumo: O herpesvírus canino (HVC-1) causa doença infecto-contagiosa que acomete cães em todo o mundo. É considerado o responsável por causar problemas reprodutivos, respiratórios, oculares, alterações neurológicas podendo levar à morte neonatos e adultos imunossuprimidos. Assim, o presente trabalho teve como objetivos isolar o HVC-1 a partir de amostras biológicas, padronizar uma técnica diagnóstica para detecção do herpesvírus canino, verificar a presença de cães infectados no estado de São Paulo e comparar 3 modificações na técnica de diluição limitante em relação à quantificação molecular pela qPCR (quantitative Polymerase Chain Reaction). Para isso, foram coletadas 139 amostras sangue, fragmentos de órgãos de 12 neonatos que foram a óbito e 5 amostras de suabes de secreção genital, de animais provenientes de canis e domicílios. Após a obtenção do DNA das amostras colhidas, foram submetidas à qPCR e snPCR (seminested Polymerase Chain Reaction) para o teste de detecção do HVC-1. Foi encontrada positividade em nove foram amostras de sangue e em fragmentos de órgãos de um animal, as amostras de secreções genitais foram todas negativas. O isolamento viral foi realizado a partir de fragmento de rim. As células infectadas apresentaram efeitos citopáticos compatíveis com as do HVC-1. As amostras positivas foram sequenciadas apresentando identidade de 100% com o HVC-1 (Genbank ™: X75765). As técnicas moleculares para a detecção do agente mostraram-se sensíveis e específicas, tanto a snPCR como a qPCR. Nessas técnicas foi possível detectar até 15,35 cópias/ μL de DNA de amostras de sangue e 1,15 cópias/μg de tecido. O uso de técnicas moleculares possibilitou a detecção de infecções ativas por HVC-1 com ótimo limiar de detecção. No entanto, mais estudos são necessários para conhecer a epidemiologia da infecção do HVC-1 na população canina no Brasil / Abstract: The canine herpesvirus (CHV-1) causes contagious disease affecting dogs worldwide. It is considered the responsible for cause reproductive problems, respiratory, eyes, neurologic changes may lead to death newborns and immunocompromised adults. Therefore, our study aimed to isolate CHV-1 from biological samples, standardize a diagnostic techniques for the detection of canine herpesvirus, verify the presence of infected dogs in São Paulo state and compare three modifications in the technique of limiting dilution in relation to molecular quantification to qPCR (by quantitative PCR to determine the viral titer). Thus, we collected 139 blood samples, organ's fragments from 12 neonates death and 5 genital secretions samples with swabs of animals from kennels and households. After obtaining the DNA from samples were accomplished the qPCR (quantitative PCR) and snPCR (seminested PCR) assay for detection of CHV-1. It was found positivity in nine blood sample and organ's fragments of an animal, the genital secretions samples were all negative. The viral isolation was performed from kidney. The infected cells showed cytopathic effects compatible with the CHV-1. Positive samples were sequenced showed 100% identity with the CHV-1 (Genbank™: X75765). The molecular techniques for detection agent were sensitive and specific, both the snPCR as the qPCR. In these techniques was enabled to detect DNA 15.35 copies/mL of blood samples and 1.15 copies/μg of tissue. The use of molecular techniques allowed the detection active infections of of HCV-1 with optimal detection limit. More studies are needed to understand the infection epidemiology of CHV-1 in the canine population in Brazil / Mestre

Orientador: Alexandre Secorun Borges / Banca: João Pessoa Araújo Junior / Banca: Paulo Eduardo Martins Ribolla / Banca: Eduardo Furtado Flores / Banca: Marcelo Mendes Brandão / Resumo: Herpesvirus bovino (BoHV-5) é um alfaherpesvirus que causa meningoencefalite não-supurativa preferencialmente em bovinos jovens. Esta enfermidade ocorre naturalmente em surtos ou casos isolados, apresentando baixa morbidade e alta letalidade. A epidemiologia, as características anatomopatológicas e o diagnóstico do BoHV-5 são bem conhecido. No entanto, as interações moleculares entre a células hospedeiras e o BoHV-5 são pobremente compreendidas. Técnicas moleculares como a PCR quantitativa e o sequenciamento de RNA (RNA-seq) são importantes ferramentas para o estudo de interações entre vírus e células hospedeiras. Neste estudo células MDBK foram infectadas pelo BoHV-5, cepa SV507-99 e o mRNA extraído em 0, 6, 12, 18, e 24 horas após a infecção (pi) foi utilizado para avaliar a expressão de genes do vírus e da célula hospedeira por qPCR e o mRNA de 1h, 6h e 24h pi foram utilizado no estudo por RNA-seq. Células MDBK não infectadas foram usadas como controle. A qPCR demonstrou que os três genes do BoHV-5 estudados (bICP0, UL9 e US4) apresentaram perfil de expressão semelhante nos diferentes momentos após infecção e que o gene bovino GAPDH teve sua expressão diminuída pela infecção viral. Ao menos 900 genes foram diferencialmente expressos para cada momento de infecção na análise por RNA-seq. Estes genes estavam principalmente relacionados a vias celulares de controle de ciclo celular, produção de interleucinas, quimiotaxia para células inflamatórias, reparo e dano ao DNA, resposta a vírus, apoptose, processo oxidativo, e ubiquitização de moléculas. Estes resultados representam novos conhecimentos sobre a interação entre o BoHV-5 e as células bovinas e podem representar um ponto de partida para novas pesquisas e melhor compreensão da patogenia deste vírus / Abstract: Bovine herpesvirus 5 (BoHV-5) is an Alphaherpesvirus that causes nonsuppurative meningoencephalitis mainly in young cattle. This disease occurs naturally in either outbreaks or isolated cases, and exhibits low morbidity and high lethality. Besides BoHV-5 epidemiology, pathological findings and diagnosis were well known, the molecular interactions between host cell and BoHV-5 are poorly understood. Molecular biology techniques such as quantitative PCR (qPCR) and RNA sequencing (RNA-seq) are important tools to study virus and host cell interactions. In this study we infected MDBK cells and use the extracted mRNA at 0, 6, 12, 18 and 24h post infection (pi) to analyse BoHV-5 (bICP0, UL9 e US4) and host cell gene (GAPDH) expression using qPCR and 1h, 6h and 24h pi in the RNA-seq study. Mock-infected cells were used to control purpouse. The qPCR releveled that the three BoHV-5 genes showed the same expression behavior during the infection and the GAPDH gene were down-regulated in the infected group. At least 900 genes were differentially expressed during BoHV-5 in each moment analysed by RNA-seq. These genes were up- or down-regulated and mainly associated with cell cycle, interleukin production, inflammatory cells chemotaxis, DNA damage and repair, response to virus, apoptosis, oxidation-reduction process, and ubiquitination pathways. The results demonstrate new insights about BoHV-5 and bovine cells interactions and could be a starting point to new researches and to better understand the pathology of this virus / Doutor

Made available in DSpace on 2015-10-06T13:02:50Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-12-12. Added 1 bitstream(s) on 2015-10-06T13:19:26Z : No. of bitstreams: 1 000847194.pdf: 1197011 bytes, checksum: 7209fde66f8374f6f0f630a8a112ded9 (MD5) / Herpesvirus bovino (BoHV-5) é um alfaherpesvirus que causa meningoencefalite não-supurativa preferencialmente em bovinos jovens. Esta enfermidade ocorre naturalmente em surtos ou casos isolados, apresentando baixa morbidade e alta letalidade. A epidemiologia, as características anatomopatológicas e o diagnóstico do BoHV-5 são bem conhecido. No entanto, as interações moleculares entre a células hospedeiras e o BoHV-5 são pobremente compreendidas. Técnicas moleculares como a PCR quantitativa e o sequenciamento de RNA (RNA-seq) são importantes ferramentas para o estudo de interações entre vírus e células hospedeiras. Neste estudo células MDBK foram infectadas pelo BoHV-5, cepa SV507-99 e o mRNA extraído em 0, 6, 12, 18, e 24 horas após a infecção (pi) foi utilizado para avaliar a expressão de genes do vírus e da célula hospedeira por qPCR e o mRNA de 1h, 6h e 24h pi foram utilizado no estudo por RNA-seq. Células MDBK não infectadas foram usadas como controle. A qPCR demonstrou que os três genes do BoHV-5 estudados (bICP0, UL9 e US4) apresentaram perfil de expressão semelhante nos diferentes momentos após infecção e que o gene bovino GAPDH teve sua expressão diminuída pela infecção viral. Ao menos 900 genes foram diferencialmente expressos para cada momento de infecção na análise por RNA-seq. Estes genes estavam principalmente relacionados a vias celulares de controle de ciclo celular, produção de interleucinas, quimiotaxia para células inflamatórias, reparo e dano ao DNA, resposta a vírus, apoptose, processo oxidativo, e ubiquitização de moléculas. Estes resultados representam novos conhecimentos sobre a interação entre o BoHV-5 e as células bovinas e podem representar um ponto de partida para novas pesquisas e melhor compreensão da patogenia deste vírus / Bovine herpesvirus 5 (BoHV-5) is an Alphaherpesvirus that causes nonsuppurative meningoencephalitis mainly in young cattle. This disease occurs naturally in either outbreaks or isolated cases, and exhibits low morbidity and high lethality. Besides BoHV-5 epidemiology, pathological findings and diagnosis were well known, the molecular interactions between host cell and BoHV-5 are poorly understood. Molecular biology techniques such as quantitative PCR (qPCR) and RNA sequencing (RNA-seq) are important tools to study virus and host cell interactions. In this study we infected MDBK cells and use the extracted mRNA at 0, 6, 12, 18 and 24h post infection (pi) to analyse BoHV-5 (bICP0, UL9 e US4) and host cell gene (GAPDH) expression using qPCR and 1h, 6h and 24h pi in the RNA-seq study. Mock-infected cells were used to control purpouse. The qPCR releveled that the three BoHV-5 genes showed the same expression behavior during the infection and the GAPDH gene were down-regulated in the infected group. At least 900 genes were differentially expressed during BoHV-5 in each moment analysed by RNA-seq. These genes were up- or down-regulated and mainly associated with cell cycle, interleukin production, inflammatory cells chemotaxis, DNA damage and repair, response to virus, apoptosis, oxidation-reduction process, and ubiquitination pathways. The results demonstrate new insights about BoHV-5 and bovine cells interactions and could be a starting point to new researches and to better understand the pathology of this virus

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:51Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-07-05Bitstream added on 2014-06-13T19:22:37Z : No. of bitstreams: 1 souza_wj_dr_jabo.pdf: 513241 bytes, checksum: 3c1539fc3f14169cf4056ce94931dea2 (MD5) / Este trabalho teve como objetivo analisar parâmetros clínicos, alterações sorológicas e qualidade do sêmen de touros jovens infectados experimentalmente com o herpesvírus bovino tipo 1 (BoHV-1) entre os dias 0 e 49 pós-inoculação (PI), com o intuito de caracterizar as manisfestações que direcionam o diagnóstico, nas diversas fases de infecção. Neste experimento foram utilizados 12 touros com aproximadamente 30 meses de idade. Seis animais foram inoculados com a amostra padrão Nebraska do BoHV-1 pelas vias intranasal e intraprepucial com 10 mL de suspensão viral (107,0TCID50/mL) repartidos 5 mL em cada via. Os outros seis animais ficaram como grupo controle. Todos os touros inoculados com o BoHV-1 apresentaram edema e hiperemia no prepúcio entre o terceiro e o décimo sexto dia pi, dos quais dois também apresentaram exsudato nasal, detectado entre o terceiro e o oitavo dia PI. Nenhum dos animais do grupo controle manifestou sinais clínicos da doença. Por meio da técnica de virusneutralização (VN) foram detectados títulos de anticorpos com valores entre 4 e 512 em todos os animais inoculados, no período entre 14º e 49º dia PI. Em todos os animais inoculados foi constatada a presença de material genético do BoHV-1 nas amostras de sêmen analisadas por meio da técnica da reação em cadeia pela polimerase (PCR). Em quatro desses animais foi detectado o material genético viral aos 7,14 e 21 dias PI e em dois animais o material genético do vírus foi identificado por mais uma semana, ou seja, até o 28º dia PI. Todos os animais do grupo controle apresentaram resultados negativos nas técnicas de VN e PCR. Em relação à qualidade do sêmen, não foram observadas diferenças estatísticas (p≥0,05) entre o grupo de touros controle e o grupo de touros inoculados experimentalmente com o BoHV-1, por meio das... / This study aimed to analyze clinical parameters, serological alterations and quality from the semen of young bulls experimentally infected with type 1 bovine herpes virus (BoHV-1) between days 0 and 49 post-inoculation (P. I.), in order to characterize the manifestations that orientate diagnosis, in several phases of infection. Twelve bulls were used in this experiment, all being approximately 30 months old. Six animals were inoculated with the Nebraska standard sample of BoHV-1 through intranasal and intrapreputial routes, each with 10 ml of the viral suspension (total dosage of 107.0TCID50/ml) divided in 5 ml for each route. The other six animals were used as a control group. All bulls inoculated with BoHV-1 presented edema and hyperemia on the foreskin between the third and sixteenth days after the inoculation, from which two animals also presented nasal exudate, detected between the third and eighth days P. I. No animals from the control group manifested any clinical signs characteristic of the infection caused by BoHV-1. By means of the viral neutralization (VN) technique, antibody titers with values ranging from 4 to 512 were detected in all inoculated animals between days 14 and 49 after the inoculation. In all inoculated animals, genetic material of BoHV-1 was present in semen samples analyzed by means of the polymerase chain reaction (PCR) technique. In four of these animals, viral genetic material was detected on days 7, 14 and 21 P. I. and in two animals the genetic material of the virus was identified for one more week, until day 28 after the infection. All animals in the control group showed negative results for the previously mentioned VN and PCR techniques. Considering the quality of semen samples from experimental bulls, no statistical differences were observed (p ≥ 0.05) between the control group and the group... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:49Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-06-17Bitstream added on 2014-08-13T18:00:23Z : No. of bitstreams: 1 000760131_20150710.pdf: 238404 bytes, checksum: d603c88625d587b452adf4dd0eb7962f (MD5) Bitstreams deleted on 2015-08-03T12:21:13Z: 000760131_20150710.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-03T12:22:26Z : No. of bitstreams: 1 000760131.pdf: 2193129 bytes, checksum: 28172a25b2901b04864665b4d4b50f8b (MD5) / O herpesvírus canino (HVC-1) causa doença infecto-contagiosa que acomete cães em todo o mundo. É considerado o responsável por causar problemas reprodutivos, respiratórios, oculares, alterações neurológicas podendo levar à morte neonatos e adultos imunossuprimidos. Assim, o presente trabalho teve como objetivos isolar o HVC-1 a partir de amostras biológicas, padronizar uma técnica diagnóstica para detecção do herpesvírus canino, verificar a presença de cães infectados no estado de São Paulo e comparar 3 modificações na técnica de diluição limitante em relação à quantificação molecular pela qPCR (quantitative Polymerase Chain Reaction). Para isso, foram coletadas 139 amostras sangue, fragmentos de órgãos de 12 neonatos que foram a óbito e 5 amostras de suabes de secreção genital, de animais provenientes de canis e domicílios. Após a obtenção do DNA das amostras colhidas, foram submetidas à qPCR e snPCR (seminested Polymerase Chain Reaction) para o teste de detecção do HVC-1. Foi encontrada positividade em nove foram amostras de sangue e em fragmentos de órgãos de um animal, as amostras de secreções genitais foram todas negativas. O isolamento viral foi realizado a partir de fragmento de rim. As células infectadas apresentaram efeitos citopáticos compatíveis com as do HVC-1. As amostras positivas foram sequenciadas apresentando identidade de 100% com o HVC-1 (Genbank ™: X75765). As técnicas moleculares para a detecção do agente mostraram-se sensíveis e específicas, tanto a snPCR como a qPCR. Nessas técnicas foi possível detectar até 15,35 cópias/ μL de DNA de amostras de sangue e 1,15 cópias/μg de tecido. O uso de técnicas moleculares possibilitou a detecção de infecções ativas por HVC-1 com ótimo limiar de detecção. No entanto, mais estudos são necessários para conhecer a epidemiologia da infecção do HVC-1 na população canina no Brasil / The canine herpesvirus (CHV-1) causes contagious disease affecting dogs worldwide. It is considered the responsible for cause reproductive problems, respiratory, eyes, neurologic changes may lead to death newborns and immunocompromised adults. Therefore, our study aimed to isolate CHV-1 from biological samples, standardize a diagnostic techniques for the detection of canine herpesvirus, verify the presence of infected dogs in São Paulo state and compare three modifications in the technique of limiting dilution in relation to molecular quantification to qPCR (by quantitative PCR to determine the viral titer). Thus, we collected 139 blood samples, organ´s fragments from 12 neonates death and 5 genital secretions samples with swabs of animals from kennels and households. After obtaining the DNA from samples were accomplished the qPCR (quantitative PCR) and snPCR (seminested PCR) assay for detection of CHV-1. It was found positivity in nine blood sample and organ´s fragments of an animal, the genital secretions samples were all negative. The viral isolation was performed from kidney. The infected cells showed cytopathic effects compatible with the CHV-1. Positive samples were sequenced showed 100% identity with the CHV-1 (Genbank™: X75765). The molecular techniques for detection agent were sensitive and specific, both the snPCR as the qPCR. In these techniques was enabled to detect DNA 15.35 copies/mL of blood samples and 1.15 copies/μg of tissue. The use of molecular techniques allowed the detection active infections of of HCV-1 with optimal detection limit. More studies are needed to understand the infection epidemiology of CHV-1 in the canine population in Brazil

Orientador: Samir Issa Samara / Coorientador: Carlos Frederico Martins / Coorientador: José Robson Bezerra Sereno / Banca: Luis Antonio Mathias / Banca: Iveraldo dos Santos Dutra / Banca: Karen Martins Leão / Banca: Bruna Alexandrino / Resumo: Este trabalho teve como objetivo analisar parâmetros clínicos, alterações sorológicas e qualidade do sêmen de touros jovens infectados experimentalmente com o herpesvírus bovino tipo 1 (BoHV-1) entre os dias 0 e 49 pós-inoculação (PI), com o intuito de caracterizar as manisfestações que direcionam o diagnóstico, nas diversas fases de infecção. Neste experimento foram utilizados 12 touros com aproximadamente 30 meses de idade. Seis animais foram inoculados com a amostra padrão Nebraska do BoHV-1 pelas vias intranasal e intraprepucial com 10 mL de suspensão viral (107,0TCID50/mL) repartidos 5 mL em cada via. Os outros seis animais ficaram como grupo controle. Todos os touros inoculados com o BoHV-1 apresentaram edema e hiperemia no prepúcio entre o terceiro e o décimo sexto dia pi, dos quais dois também apresentaram exsudato nasal, detectado entre o terceiro e o oitavo dia PI. Nenhum dos animais do grupo controle manifestou sinais clínicos da doença. Por meio da técnica de virusneutralização (VN) foram detectados títulos de anticorpos com valores entre 4 e 512 em todos os animais inoculados, no período entre 14º e 49º dia PI. Em todos os animais inoculados foi constatada a presença de material genético do BoHV-1 nas amostras de sêmen analisadas por meio da técnica da reação em cadeia pela polimerase (PCR). Em quatro desses animais foi detectado o material genético viral aos 7,14 e 21 dias PI e em dois animais o material genético do vírus foi identificado por mais uma semana, ou seja, até o 28º dia PI. Todos os animais do grupo controle apresentaram resultados negativos nas técnicas de VN e PCR. Em relação à qualidade do sêmen, não foram observadas diferenças estatísticas (p≥0,05) entre o grupo de touros controle e o grupo de touros inoculados experimentalmente com o BoHV-1, por meio das... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: This study aimed to analyze clinical parameters, serological alterations and quality from the semen of young bulls experimentally infected with type 1 bovine herpes virus (BoHV-1) between days 0 and 49 post-inoculation (P. I.), in order to characterize the manifestations that orientate diagnosis, in several phases of infection. Twelve bulls were used in this experiment, all being approximately 30 months old. Six animals were inoculated with the Nebraska standard sample of BoHV-1 through intranasal and intrapreputial routes, each with 10 ml of the viral suspension (total dosage of 107.0TCID50/ml) divided in 5 ml for each route. The other six animals were used as a control group. All bulls inoculated with BoHV-1 presented edema and hyperemia on the foreskin between the third and sixteenth days after the inoculation, from which two animals also presented nasal exudate, detected between the third and eighth days P. I. No animals from the control group manifested any clinical signs characteristic of the infection caused by BoHV-1. By means of the viral neutralization (VN) technique, antibody titers with values ranging from 4 to 512 were detected in all inoculated animals between days 14 and 49 after the inoculation. In all inoculated animals, genetic material of BoHV-1 was present in semen samples analyzed by means of the polymerase chain reaction (PCR) technique. In four of these animals, viral genetic material was detected on days 7, 14 and 21 P. I. and in two animals the genetic material of the virus was identified for one more week, until day 28 after the infection. All animals in the control group showed negative results for the previously mentioned VN and PCR techniques. Considering the quality of semen samples from experimental bulls, no statistical differences were observed (p ≥ 0.05) between the control group and the group... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor