El objetivo principal de esta tesis es la elucidación estructural del polisacárido del alga roja marina Porphyra columbina, extraído en agua caliente, purificado y liofilizado, y el estudio de su actividad antioxidante en ratones e hipolipemiante en conejos. Previamente se evaluó la toxicidad aguda oral y toxicidad oral a dosis repetidas considerando que el material biológico sería expuesto a diferentes concentraciones del mismo. El análisis del espectro FT-IR y RMN-¹H muestra que el polisacárido de P. columbina tiene una típica estructura de porfirano: unidades β-D-galactosa, 4-O-α-L-galactosa-6-sulfato o 3,6-anhidro-α- L-galactosa. Los estudios de toxicidad para el caso de toxicidad aguda oral muestran ser no tóxico hasta concentraciones de 2000 mg/Kg, y para toxicidad oral dosis repetidas de 28 días a 50 mg/Kg evidencia daño hepático. Las pruebas in vivo en ratones midieron las actividades de las enzimas antioxidantes superóxido dismutasa (SOD), catalasa (CAT) y glutatión peroxidasa (GPx) así como los niveles medios de malondialdehído (MDA). Los resultados muestran incremento de las 3 enzimas evaluadas y disminución del MDA por administración intraperitoneal dosis-dependiente del polisacárido. El efecto hipolipemiante en conejos se determinó por evaluación del perfil lipídico: medición de C, TG, HDL y cálculo de LDL y VLDL. Los resultados mostraron disminución estadísticamente significativa, p < 0.05, tanto para los lípidos y lipoproteínas en evaluación en las condiciones del diseño experimental comparado con el grupo control de lipemia. El peso corporal de los conejos mostró diferencias significativas, p < 0.05, para los grupos en tratamiento. / The main aim of this thesis is the structural elucidation of polysaccharide from the red seaweed Porphyra columbina, hot water extracted, purified and lyophilized, and the study of its antioxidant activity in mice and the lipid-lowering effect in Rabbits. Prior acute oral toxicity was evaluated considering the biological material would be exposed to different concentrations of the same. The IR and 1H-NMR spectrum shows that the polysaccharide of P. columbina has a typical porphyran structure: β-D-galactose, 4-O-α-L-galactose-6-sulphate or 3,6-anhydro-α-L-galactose units. The toxicity study for the case of acute oral toxicity shown to be nontoxic up to 2000 mg/Kg strength, and for repeated dose 28-day oral toxicity study to 50 mg/kg liver damage is evident. In vivo tests in mice measured the activities of antioxidant enzymes superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), and glutathione peroxidase (GPx) as well as the mean levels of malondialdehyde (MDA). The results show increase of the 3 enzymes tested also decreased MDA by intraperitoneal administration dose-dependent polysaccharide. Hypolipidemic effect in rabbits was determined by the evaluation of the lipid profile: measurement of C, TG, HDL and LDL and VLDL was calculated. The results were statistically significant, p < 0.05, for both lipids and lipoproteins in assessment compared with control group of lipemia. Body weight of the rabbits showed significant differences, p < 0.05, for the groups in treatment. Keywords: Porphyra, porphyrano, lipid peroxidation, antioxidant, hypolipidemic, lipoprotein.

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Ferreira.pdf: 2734543 bytes, checksum: cf5e2471694479d4f9df15d19b138b4e (MD5) Previous issue date: 2017-03-28 / FAPEAM - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / α-Amyrenone and β-amyrenone are triterpenoid isomers that occur naturally in various oleoresins of the Brazilian Amazon species Protium (Burseraceae). The mixture of α- and β-amyrenone can also be synthesised by oxidation from the principal components α and β- amyrins, obtained from the same oleoresins. However, information about its physicochemical properties and biological activity is poor in the scientifical literature. The main objectives of this study were to obtain the triterpenic mixture α,β-amyrenone and to evaluate its hypolipemiant, hypoglicemiant and anti-obesity effects via in vivo tests. Using a simple, high-yield process and a commercially available mix (comercial resin) rich in α,β amyrins as a substrate, the binary mix α,β-amyrenone was synthesised and submitted to physio-chemical analysis using different techniques, including liquid cromatography and nuclear magnetic resonance (1H and 13C), mass spectrometry, scanning electron microscopy, differential scanning calorimetry, thermogravimetry and derived thermogravimetry, and Fourier transform infrared spectroscopy. The in vitro effects of α,β-amyrenone were evaluated in relation to the inhibition of the enzymes α-amylase, α-glucosidase, lipase, and of an antioxidant enzyme, xanthine oxidase. Anti-hyperglicemic, hypolipemiant and anti-obesity effects on male adult mice of the BALB/c and C57BL/6 strains were evaluated. Bloodbiochemical and histopathological analysis were carried out on animals from obesity test. The mixture of α, β-amyrenone was obtained by optimization of semi-sinthesys of its precursor α, β- amyrin, in a direct way from resin, using hexan as solvent. The mixture inhibited α-glucosidase enzyme at a concentration of 1.6 μg/mL, reaching an inhibition index of 96.59% (SD ± 0.52) (p<0.05). For lipase, at a concentration of 100 μg/mL, an inhibition index of 82.99 ± 1.51 was achieved, with a CI50 (mg/mL) value of 1.193  0.41 μg/mL (p<0.05). The tests of α-amilase, α-glucosidase and of xanthine oxidase presented values less than 50% of inhibiting activity at a concentration of 100μg/mL. In the evaluation of the profile of acute or episodic hyperglycemia induced by maltose and sucrose, a 25mg/kg mixture of α,β-amyrenone achieved a greater reduction of the post-prandial glycemic peak in animals than acarbose at 50mg/kg (p<0.05). In the test for induced diabetes, animals presented reduced levels of plasmatic glycose with α,β-amyrenone at a concentration of 50mg/kg in comparison with animals from the standard (acarbose) group (p<0.05). In 50 and 100mg/kg concentrations, α,β-amyrenone reduced the plasmatic levels of triglycerides to a more marked degree than the standard orlistat in animals submitted to oral lipid-based emulsion. In chronic tests for the induction of obesity, a reduction in weight was seen in animals treated with α,β-amyrenone in 25 and 50mg/kg concentrations respectively. This study brought evidences of lowering action of α,β-amyrenone on post prandial glicemia, induced diabetes and body weight. In its anti-obesity action, α,β-amyrenone mainly affects the carbohydrates and the lipid metabolism via mechanisms that include the inhibition of digestive enzymes. Mixture of α,β-amyrenone seemed a potential chemical for treatment or prevention of metabolic syndromes, but further studies are necessary in order to clarify some aspects of its activity. / As α-amirenona e β-amirenona são isômeros triterpenoides que ocorrem naturalmente em várias oleorresinas de espécies de Protium (Burseraceae) da Amazônia Brasileira. Esta mistura de α e β-amirenonas pode também ser sintetizada por oxidação a partir dos compostos principais α e β-amirinas, obtidas das mesmas oleorresinas. Apesar disso, informacões sobre suas caracteristicas físico-químicas e atividades biológicas ainda são escassas na literatura científica. Este estudo teve como objetivos a obtenção da mistura triterpênica α, β-amirenona e a avaliação dos seus efeitos hipolipemiante, hipoglicemiante e antiobesidade em modelos experimentais in vivo. Utilizando um processo simples, de elevado rendimento, a α e β-amirinas foi extraida, a partir da resina de breu (Protium sp.) e o composto binário α, β-amirenona foi sintetizado e submetido à caracterização físico-química por meio de diferentes técnicas, como cromatografia líquida, ressonância magnética nuclear (1H e 13C), espectrometria de massa, microscopia eletrônica de varredura, calorimetria de varredura diferencial, termogravimetria, termogravimetria derivada e espectroscopia de infravermelho de transformada de Fourier. Os efeitos in vitro de α, β-amirenona foram avaliados em relação à inibição das enzimas α-amilase, α-glucosidase, lipase e xantina oxidase. Foram avaliados também os efeitos anti-hiperglicêmicos, hipolipemiantes e antiobesidade em camundongos machos adultos das linhagens BALB/c e C57BL/6. Análises bioquímicas sanguíneas e histopatológicas foram realizadas nos animais submetidos ao experimento da obesidade. A mistura de α-amirenona e β-amirenona foi obtida de forma otimizada a apartir de semi-sintese do seu precursor α e β-amirina, extraida diretamente do breu com solvente hexano. A mistura α e β-amirenona inibiu a enzima α-glucosidase em concentração de 1,6 μg/mL, atingindo um índice de inibição de 96,59± 0,52%. Para a lipase, em concentração de 100 μg/mL, obteve-se índice de inibição 82,99 ± 1,51%, com valor de CI50 de 1,193  0,41 mg/mL. Os testes de α-amilase, α- glucosidade e da xantina oxidase apresentaram valores menores que 50% de atividade na concentração de 100 μg/mL. Na avalição da hiperglicemia aguda induzida por maltose e sacarose, a mistura de α, β-amirenona a 25 mg/kg reduziu a glicemia pós-prandial mais do que a acarbose a 50 mg/kg (p<0,05). Os animais tratados com α, β-amirenona apresentaram diminuição dos níveis de glicose plasmática na dose de 50mg/kg. A administração de α, β-amirenona, nas doses de 50 e 100mg/kg, reduziu os níveis plasmáticos de triglicerídeos nos animais submetidos à emulsão lipídica oral de modo mais marcante do que o padrão orlistate. No teste crônico de indução da obesidade, verificou-se uma redução do peso dos animais tratados com α,β- amirenona nas doses de 25 e 50mg/kg respectivamente. Este estudo apresentou evidências da ação da α, β-amirenona na redução da glicemia pós-prandial e na glicemia de animais após indução do diabetes e na redução do peso corporal. A α, β-amirenona, em sua ação antiobesidade, afeta principalmente os carboidratos e o metabolismo lipídico por mecanismos que incluem, por exemplo, a inibição das enzimas digestivas, não descartando outros mecanismos envolvidos. A mistura de α, β-amirenona demonstrou ser um ativo potencial para o tratamento ou prevenção das síndromes metabólicas, havendo necessidade de futuros estudos que esclareçam melhor alguns aspectos da sua atividade.

Introdução: Recentes pesquisas têm indicado o enorme potencial de certas substâncias alimentares, como polifenóis antioxidantes e fibras na redução de riscos de doenças crônicas. O bagaço de uva, subproduto do processamento de vinhos e sucos, representa uma ótima fonte de fibras e antioxidantes naturais de baixo custo. Objetivo: Avaliar o potencial hipolipemiante, antioxidante e sensorial de subprodutos do processamento do vinho e do suco. Métodos: Para avaliar a capacidade antioxidante in vitro, foi utilizado o método do DPPH. O potencial antioxidante e hipolipemiante in vivo foi avaliado mediante ensaio biológico, no qual sessenta hamsters foram divididos em seis grupos diferenciados pelas dietas: controle, hiperlipemiante, extrato de bagaço do vinho (BV), extrato de bagaço do suco (BS), suplementada com BV e suplementada com BS. Amostras de sangue e fígado foram coletadas após 4 semanas de experimento para avaliação do perfil lipídico, capacidade de inibição da oxidação de LDL-colesterol (LDL-c) e atividade das enzimas antioxidantes superóxido dismutase (SOD), catalase (CAT) e glutationa peroxidase (GPx). Para a avaliação sensorial, foram desenvolvidos sorbet e picolé de BV e BS, cujos atributos sensoriais foram avaliados por 43 pessoas aplicando-se o método afetivo de escala hedônica de 9 pontos. Resultados: Extratos de BV e BS apresentaram uma expressiva capacidade antioxidante in vitro. No modelo animal, os grupos tratados com BV e BS apresentaram uma melhora significativa do perfil lipídico e da atividade da enzima CAT, em relação aos grupos controle e hipercolesterolêmico (p<0,05). Com relação aos valores de SOD, GPx e inibição da oxidação de LDL-c, observou-se melhores resultados em relação ao grupo hipercolesterolêmico, embora não significativamente em todos os grupos tratados. Na análise sensorial, somente o picolé de BV não preencheu totalmente os requisitos de aceitação. Conclusão: Os subprodutos de ambas as espécies de uva apresentaram potencial biológico e sensorial para serem utilizados como ingredientes funcionais. / Introduction: Recent studies have shown the great potential of certain food components such as antioxidant polyphenols and fiber in reducing the risk of chronic diseases. Grape pomace, a wine and juice processing byproduct, is a low cost material and a very good source of fiber and natural antioxidants. Objectives: To evaluate the hypolipidemic, antioxidant and sensory potential of wine and grape byproducts. Methods: To evaluate the in vitro antioxidant capacity, the DPPH method was used. The in vivo antioxidant and hypolipidemic potential was evaluated through an animal model, in which sixty hamsters were divided into six groups according to their diets: control, hyperlipidemic, wine pomace (WP) extract, juice pomace (JP) extract, WP supplemented diet and JP supplemented diet. Samples of blood and liver were collected after a 4-week experimental period to evaluate the lipid profile, ability to inhibit the LDL-cholesterol (LDL-c) oxidation and antioxidant activity of superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT) and glutathione peroxidase (GPx) enzymes. For the sensory evaluation, BV and BS sorbet and popsicle were developed, and the sensory attributes were evaluated by 43 tasters according to a 9- point affective hedonic scale. Results: WP and JP extracts showed a very good in vitro antioxidant capacity. In the animal model, both WP and JP treated groups presented a significant improvement in the lipid profile and CAT enzyme antioxidant activity in comparison to hypercholesterolemic and control groups (p <0.05). Regarding the values of SOD, GPx and inhibition of LDL-c oxidation, there values were better when compared to hypercholesterolemic group, even though they were not significant in all treated groups. In the sensory evaluation, only the BV popsicle was not fully accepted. Conclusion: Both grapes byproducts showed a biological and sensory potential to be used as functional ingredients.

O processo inflamatório tem um papel fundamental na gênese e desenvolvimento da aterosclerose, sendo que a disfunção endotelial é considerada um dos estágios iniciais da aterogênese. Por meio da inibição da enzima hidroxi-metil-glutaril coA redutase (HMGCR), as estatinas reduzem a biossíntese do colesterol e a formação de isoprenóides, produtos intermediários da síntese do colesterol que são importantes na modificação pós-transcricional de GTPases pequenas que estão envolvidas na disfunção endotelial e inflamação vascular. A ezetimiba é um inibidor da absorção do colesterol através da inibição da proteína NPC1L1. Com a finalidade de esclarecer os mecanismos moleculares da inibição da síntese e da absorção do colesterol sobre a modulação de biomarcadores inflamatórios e de adesão celular foram utilizados modelos in vitro com células endoteliais (HUVEC) e monócitos (células THP-1), e in vivo com células mononucleares do sangue periférico (CMSP) de indivíduos hipercolesterolêmicos (HC). O efeito das estatinas, atorvastatina e sinvastatina, e da ezetimiba na expressão de RNAm e proteínas de moléculas de adesão endoteliais e moduladores do processo inflamatório, como citocinas e óxido nítrico (NO), foi estudado em células HUVEC. O efeito desses fármacos sobre a expressão de moléculas de adesão monocitárias foi estudado em células THP-1. O efeito da terapia hipolipemiante sobre essas moléculas foi também estudada em CMSP de HC tratados com ezetimiba (10 mg/dia/4 semanas), sinvastatina (10 mg/dia/8 semanas) e sinvastatina combinada com ezetimiba (10 mg de cada/dia/4 semanas). A expressão de RNAm foi avaliada por RT-qPCR. A expressão de moléculas de adesão na superfície de células THP-1 e HUVEC foi estudada por citometria de fluxo. A quantificação de citocinas secretadas no sobrenadante de células HUVEC e no plasma dos HC foi analisada pela tecnologia Milliplex. A quantificação do perfil lipífico, Proteína C reativa ultra-sensível (PCRus) e NO foi realizada por métodos laboratoriais convencionais. O papel do NO na modulação dos marcadores inflamatórios pelas estatinas foi também estudada, usando modelo de células HUVEC com NOS3 silenciado por interferência de RNAm e também por meio do uso do inibidor da síntese do óxido nítrico, L-NAME. Também foi avaliado o efeito de hipolipemiantes na expressão dos microRNAs (miRs) 221, miR-222 e miR-1303 em células HUVEC por meio do stem-loop RT-qPCR. O tratamento com atorvastatina e sinvastatina reduziu a expressão de RNAm e proteínas das moléculas de adesão LSelectina, PSGL-1 e VLA-4, em células THP-1 pré-tratadas com TNF&#945; por 12 h. A ezetimiba reduziu a expressão de L-Selectina apenas no nível transcricional. Em células HUVEC, as estatinas diminuíram a expressão de RNAm de IL1B e SELP, entretanto aumentaram a de VCAM1. A ezetimiba reduziu a expressão de RNAm do IL1B. Entretanto as expressões de SELE, MMP9, IL6 e MMP9 não foram afetadas pelos tratamentos. A expressão das proteínas ICAM-1 e P-Selectina, na superfície de células HUVEC, foi diminuída pelo tratamento com as estatinas, mas não pela ezetimiba. Da mesma forma, a secreção das citocinas IL-6 e MCP-1 foram reduzidas pelas estatinas, entretanto a secreção de IL-8 não foi modificada por nenhum dos tratamentos. A expressão de NOS3 e a liberação de NO em células HUVEC foi aumentada pelas estatinas, porém não foi estimulada pela ezetimiba. Entretanto, os efeitos antiinflamatórios exercidos pelas estatinas foram independentes dessa via devido a que estes efeitos foram mantidos em células HUVEC com NOS3 silenciado por interferência de RNAm. Apesar de que o efeito sobre ICAM-1 e MCP-1 foi atenuado quando as células foram simultaneamente tratadas com L-NAME, os efeitos das estatinas parecem ser independentes da liberação de NO. As estatinas e a ezetimiba reduziram a expressão do miR-221, em células HUVEC. A expressão do miR-222 foi reduzida só pelo tratamento com atorvastatina. A expressão do miR-1303 não foi modulada pelos tratamentos hipolipemiantes. Em pacientes HC, a terapia de associação da sinvastatina e ezetimiba demonstrou melhorar o perfil lipídico de forma mais efetiva que ambas monoterapias. Da mesma forma, o tratamento combinado resultou em maior beneficio pela redução da expressão de RNAm em CMSP e da concentração plasmática das proteínas IL-1 &#946;, MCP-1, IL-8 e TNF&#945;. A expressão de ICAM1 foi diminuída apenas no nível transcricional, entretanto a expressão de RNAm mas não da proteína do TNF&#945; foi também reduzida pela sinvastatina em monoterapia. Não houve modulação de RNAm ou proteínas de outros marcadores estudados no modelo in vivo. Por outro lado, os efeitos anti-inflamatórios observados nos indivíduos HC foram independentes da modulação de PCRus e NO que não foram modificados pelos tratamentos hipolipemiantes. Neste estudo, foram confirmados os propostos efeitos pleiotrópicos das estatinas em modelos células de monócito e endotélio vascular in vitro e em pacientes HC. Por outro lado, apesar de ser menos potente que as estatinas foi mostrado que a inibição da absorção do colesterol tem também um efeito anti-inflamatório. A redução adicional do colesterol causado pela combinação das terapias hipolipemiantes outorga um maior beneficio cardiovascular em pacientes hipercolesterolêmicos. / The inflammatory process has a key role in the genesis and development of atherosclerosis and the endothelial disfunction is considered as a first step in atherogenesis. By inhibiting the hydroxyl-methyl-glutaryl coA reductase (HMGCR)m statins reduce the cholesterol synthesis and isoprenoid generation, which are intermediary products of cholesterol synthesis with important role in posttranscriptional modifications of small GTPases that are involved in endothelial disfunction and vascular inflammation. The ezetimibe is an inhibitor of cholesterol absorption by inhibiting the NPC1L1 protein. To clarify the molecular mechanisms of the inhibition of cholesterol synthesis and absorption modulating inflammatory and cell adhesion biomarkers we used in vitro models of endothelial cells (HUVEC) and monocytes (THP-1), and an in vivo model of peripheral blood mononuclear cells (PBMC) from hypercholesterolemic (HC) patients. The effect of the statins, atorvastatin and simvastatin, and the ezetimibe on mRNA and protein expression of endothelial adhesion molecules and modulators of the inflammatory process, as citokynes and nitric oxide (NO), was analyzed in HUVEC. The effect of these drugs on the expression of monocyte adhesion molecules was also studied in THP-1. The influence of hypolipemiant therapy on the adhesion molecules was also analyzed in PBMC from HC treated with ezetimibe (10 mg/day/4-weeks), simvastatin (10 mg/day/8-weeks) and simvastatin combined with ezetimibe (10 mg each/day/4-weeks). The mRNA expression was evaluated by RT-qPCR. The expression of adhesion molecules on the surface of THP-1 and HUVEC cells was analyzed flow cytometry. The citokynes in the supernatants of HUVEC were quantified using the milliplex technology. The Lipid profile, high-sensivity PCR (hsPCR) and NO were determined by conventional laboratory methods. The role of the NO on the statin-modulation of inflammatory markers was also studied using a model with silenced NOS3 by interference of mRNA and by the use of the inhibitor of NO synthesis, L-NAME. The effect of hypolipemiants on the expression of microRNAs (miRs) 221, miR-222 and miR-1303 was also evaluated in HUVEC using the stem-loom RT-qPCR. Atorvastatin and simvastatin reduced the mRNA and protein expression of the adhesion molecules L-Selectin, PSGL-1 and VLA-4 in THP-1 cells pre-treated with TNF&#945; for 12 h. The ezetimibe reduced the L-Selectin expression only at transcriptional level. In HUVEC, statins diminished IL1B and SELP mRNA expression, whereas VCAM1 was increased. The ezetimibe reduced the IL1B mRNA expression. However, SELE, MMP9, IL6 and MMP9 mRNA expressions were not affected by the treatments. The protein expression of ICAM-1 and P-Selectin on the surface of HUVEC was reduced by statins, but not by the ezetimibe. Similarly, IL-6 and MCP-1 secretion were reduced by statins, whereas IL-8 secretion was not modified by the treatments. The NO release and NOS3 expression in HUVEC was increased by the statins, however it was not stimulated by ezetimibe. Moreover, the anti-inflammatory statin effects were independent of this pathway due to statin effects were maintained in HUVEC with silenced NOS3. Although the statin effect on ICAM-1 and MCP-1 were attenuated by L-NAME co treatment, the statin effects seem to be independent of NO release. Statins and ezetimibe reduced miR221 in HUVEC. miR-222 expression was reduced only by atorvastatin. miR-1303 was not affected by the treatments. In HC patients, the improvement of the lipid profile simvastatin combined with ezetimibe was more efficient than both monotherapies. Similarly, the association therapy was better in reducing the mRNA expression in PBMC and plasma concentration of IL-1&#946;, MCP-1, IL-8 and TNF&#945;. ICAM1 expression was reduced only at transcriptional level, whereas mRNA but not protein expression of TNF&#945; was also reduced by the simvastatin monotherapy. There was no modulation mRNA or protein expression of other studied markers in the in vivo model. Additionally, the anti-inflammatory effects observed in the HC were independent of PCRus or NO modulation, which were not altered by the hypolipemiant treatments. In this study, the proposed plitropic effects of statins were confirmed in monocytes and endothelial cells in vitro and in HC patients. Moreover, although it was less potent than statins, an anti-inflammatory effect was also observed for the inhibition of cholesterol absorption. An additional reduction of the cholesterol caused by combined hypolipemiant therapies gives a greater cardiovascular beneffict in hypercholesterolemic patients.

Introdução: Recentes pesquisas têm indicado o enorme potencial de certas substâncias alimentares, como polifenóis antioxidantes e fibras na redução de riscos de doenças crônicas. O bagaço de uva, subproduto do processamento de vinhos e sucos, representa uma ótima fonte de fibras e antioxidantes naturais de baixo custo. Objetivo: Avaliar o potencial hipolipemiante, antioxidante e sensorial de subprodutos do processamento do vinho e do suco. Métodos: Para avaliar a capacidade antioxidante in vitro, foi utilizado o método do DPPH. O potencial antioxidante e hipolipemiante in vivo foi avaliado mediante ensaio biológico, no qual sessenta hamsters foram divididos em seis grupos diferenciados pelas dietas: controle, hiperlipemiante, extrato de bagaço do vinho (BV), extrato de bagaço do suco (BS), suplementada com BV e suplementada com BS. Amostras de sangue e fígado foram coletadas após 4 semanas de experimento para avaliação do perfil lipídico, capacidade de inibição da oxidação de LDL-colesterol (LDL-c) e atividade das enzimas antioxidantes superóxido dismutase (SOD), catalase (CAT) e glutationa peroxidase (GPx). Para a avaliação sensorial, foram desenvolvidos sorbet e picolé de BV e BS, cujos atributos sensoriais foram avaliados por 43 pessoas aplicando-se o método afetivo de escala hedônica de 9 pontos. Resultados: Extratos de BV e BS apresentaram uma expressiva capacidade antioxidante in vitro. No modelo animal, os grupos tratados com BV e BS apresentaram uma melhora significativa do perfil lipídico e da atividade da enzima CAT, em relação aos grupos controle e hipercolesterolêmico (p<0,05). Com relação aos valores de SOD, GPx e inibição da oxidação de LDL-c, observou-se melhores resultados em relação ao grupo hipercolesterolêmico, embora não significativamente em todos os grupos tratados. Na análise sensorial, somente o picolé de BV não preencheu totalmente os requisitos de aceitação. Conclusão: Os subprodutos de ambas as espécies de uva apresentaram potencial biológico e sensorial para serem utilizados como ingredientes funcionais. / Introduction: Recent studies have shown the great potential of certain food components such as antioxidant polyphenols and fiber in reducing the risk of chronic diseases. Grape pomace, a wine and juice processing byproduct, is a low cost material and a very good source of fiber and natural antioxidants. Objectives: To evaluate the hypolipidemic, antioxidant and sensory potential of wine and grape byproducts. Methods: To evaluate the in vitro antioxidant capacity, the DPPH method was used. The in vivo antioxidant and hypolipidemic potential was evaluated through an animal model, in which sixty hamsters were divided into six groups according to their diets: control, hyperlipidemic, wine pomace (WP) extract, juice pomace (JP) extract, WP supplemented diet and JP supplemented diet. Samples of blood and liver were collected after a 4-week experimental period to evaluate the lipid profile, ability to inhibit the LDL-cholesterol (LDL-c) oxidation and antioxidant activity of superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT) and glutathione peroxidase (GPx) enzymes. For the sensory evaluation, BV and BS sorbet and popsicle were developed, and the sensory attributes were evaluated by 43 tasters according to a 9- point affective hedonic scale. Results: WP and JP extracts showed a very good in vitro antioxidant capacity. In the animal model, both WP and JP treated groups presented a significant improvement in the lipid profile and CAT enzyme antioxidant activity in comparison to hypercholesterolemic and control groups (p <0.05). Regarding the values of SOD, GPx and inhibition of LDL-c oxidation, there values were better when compared to hypercholesterolemic group, even though they were not significant in all treated groups. In the sensory evaluation, only the BV popsicle was not fully accepted. Conclusion: Both grapes byproducts showed a biological and sensory potential to be used as functional ingredients.

O processo inflamatório tem um papel fundamental na gênese e desenvolvimento da aterosclerose, sendo que a disfunção endotelial é considerada um dos estágios iniciais da aterogênese. Por meio da inibição da enzima hidroxi-metil-glutaril coA redutase (HMGCR), as estatinas reduzem a biossíntese do colesterol e a formação de isoprenóides, produtos intermediários da síntese do colesterol que são importantes na modificação pós-transcricional de GTPases pequenas que estão envolvidas na disfunção endotelial e inflamação vascular. A ezetimiba é um inibidor da absorção do colesterol através da inibição da proteína NPC1L1. Com a finalidade de esclarecer os mecanismos moleculares da inibição da síntese e da absorção do colesterol sobre a modulação de biomarcadores inflamatórios e de adesão celular foram utilizados modelos in vitro com células endoteliais (HUVEC) e monócitos (células THP-1), e in vivo com células mononucleares do sangue periférico (CMSP) de indivíduos hipercolesterolêmicos (HC). O efeito das estatinas, atorvastatina e sinvastatina, e da ezetimiba na expressão de RNAm e proteínas de moléculas de adesão endoteliais e moduladores do processo inflamatório, como citocinas e óxido nítrico (NO), foi estudado em células HUVEC. O efeito desses fármacos sobre a expressão de moléculas de adesão monocitárias foi estudado em células THP-1. O efeito da terapia hipolipemiante sobre essas moléculas foi também estudada em CMSP de HC tratados com ezetimiba (10 mg/dia/4 semanas), sinvastatina (10 mg/dia/8 semanas) e sinvastatina combinada com ezetimiba (10 mg de cada/dia/4 semanas). A expressão de RNAm foi avaliada por RT-qPCR. A expressão de moléculas de adesão na superfície de células THP-1 e HUVEC foi estudada por citometria de fluxo. A quantificação de citocinas secretadas no sobrenadante de células HUVEC e no plasma dos HC foi analisada pela tecnologia Milliplex. A quantificação do perfil lipífico, Proteína C reativa ultra-sensível (PCRus) e NO foi realizada por métodos laboratoriais convencionais. O papel do NO na modulação dos marcadores inflamatórios pelas estatinas foi também estudada, usando modelo de células HUVEC com NOS3 silenciado por interferência de RNAm e também por meio do uso do inibidor da síntese do óxido nítrico, L-NAME. Também foi avaliado o efeito de hipolipemiantes na expressão dos microRNAs (miRs) 221, miR-222 e miR-1303 em células HUVEC por meio do stem-loop RT-qPCR. O tratamento com atorvastatina e sinvastatina reduziu a expressão de RNAm e proteínas das moléculas de adesão LSelectina, PSGL-1 e VLA-4, em células THP-1 pré-tratadas com TNF&#945; por 12 h. A ezetimiba reduziu a expressão de L-Selectina apenas no nível transcricional. Em células HUVEC, as estatinas diminuíram a expressão de RNAm de IL1B e SELP, entretanto aumentaram a de VCAM1. A ezetimiba reduziu a expressão de RNAm do IL1B. Entretanto as expressões de SELE, MMP9, IL6 e MMP9 não foram afetadas pelos tratamentos. A expressão das proteínas ICAM-1 e P-Selectina, na superfície de células HUVEC, foi diminuída pelo tratamento com as estatinas, mas não pela ezetimiba. Da mesma forma, a secreção das citocinas IL-6 e MCP-1 foram reduzidas pelas estatinas, entretanto a secreção de IL-8 não foi modificada por nenhum dos tratamentos. A expressão de NOS3 e a liberação de NO em células HUVEC foi aumentada pelas estatinas, porém não foi estimulada pela ezetimiba. Entretanto, os efeitos antiinflamatórios exercidos pelas estatinas foram independentes dessa via devido a que estes efeitos foram mantidos em células HUVEC com NOS3 silenciado por interferência de RNAm. Apesar de que o efeito sobre ICAM-1 e MCP-1 foi atenuado quando as células foram simultaneamente tratadas com L-NAME, os efeitos das estatinas parecem ser independentes da liberação de NO. As estatinas e a ezetimiba reduziram a expressão do miR-221, em células HUVEC. A expressão do miR-222 foi reduzida só pelo tratamento com atorvastatina. A expressão do miR-1303 não foi modulada pelos tratamentos hipolipemiantes. Em pacientes HC, a terapia de associação da sinvastatina e ezetimiba demonstrou melhorar o perfil lipídico de forma mais efetiva que ambas monoterapias. Da mesma forma, o tratamento combinado resultou em maior beneficio pela redução da expressão de RNAm em CMSP e da concentração plasmática das proteínas IL-1 &#946;, MCP-1, IL-8 e TNF&#945;. A expressão de ICAM1 foi diminuída apenas no nível transcricional, entretanto a expressão de RNAm mas não da proteína do TNF&#945; foi também reduzida pela sinvastatina em monoterapia. Não houve modulação de RNAm ou proteínas de outros marcadores estudados no modelo in vivo. Por outro lado, os efeitos anti-inflamatórios observados nos indivíduos HC foram independentes da modulação de PCRus e NO que não foram modificados pelos tratamentos hipolipemiantes. Neste estudo, foram confirmados os propostos efeitos pleiotrópicos das estatinas em modelos células de monócito e endotélio vascular in vitro e em pacientes HC. Por outro lado, apesar de ser menos potente que as estatinas foi mostrado que a inibição da absorção do colesterol tem também um efeito anti-inflamatório. A redução adicional do colesterol causado pela combinação das terapias hipolipemiantes outorga um maior beneficio cardiovascular em pacientes hipercolesterolêmicos. / The inflammatory process has a key role in the genesis and development of atherosclerosis and the endothelial disfunction is considered as a first step in atherogenesis. By inhibiting the hydroxyl-methyl-glutaryl coA reductase (HMGCR)m statins reduce the cholesterol synthesis and isoprenoid generation, which are intermediary products of cholesterol synthesis with important role in posttranscriptional modifications of small GTPases that are involved in endothelial disfunction and vascular inflammation. The ezetimibe is an inhibitor of cholesterol absorption by inhibiting the NPC1L1 protein. To clarify the molecular mechanisms of the inhibition of cholesterol synthesis and absorption modulating inflammatory and cell adhesion biomarkers we used in vitro models of endothelial cells (HUVEC) and monocytes (THP-1), and an in vivo model of peripheral blood mononuclear cells (PBMC) from hypercholesterolemic (HC) patients. The effect of the statins, atorvastatin and simvastatin, and the ezetimibe on mRNA and protein expression of endothelial adhesion molecules and modulators of the inflammatory process, as citokynes and nitric oxide (NO), was analyzed in HUVEC. The effect of these drugs on the expression of monocyte adhesion molecules was also studied in THP-1. The influence of hypolipemiant therapy on the adhesion molecules was also analyzed in PBMC from HC treated with ezetimibe (10 mg/day/4-weeks), simvastatin (10 mg/day/8-weeks) and simvastatin combined with ezetimibe (10 mg each/day/4-weeks). The mRNA expression was evaluated by RT-qPCR. The expression of adhesion molecules on the surface of THP-1 and HUVEC cells was analyzed flow cytometry. The citokynes in the supernatants of HUVEC were quantified using the milliplex technology. The Lipid profile, high-sensivity PCR (hsPCR) and NO were determined by conventional laboratory methods. The role of the NO on the statin-modulation of inflammatory markers was also studied using a model with silenced NOS3 by interference of mRNA and by the use of the inhibitor of NO synthesis, L-NAME. The effect of hypolipemiants on the expression of microRNAs (miRs) 221, miR-222 and miR-1303 was also evaluated in HUVEC using the stem-loom RT-qPCR. Atorvastatin and simvastatin reduced the mRNA and protein expression of the adhesion molecules L-Selectin, PSGL-1 and VLA-4 in THP-1 cells pre-treated with TNF&#945; for 12 h. The ezetimibe reduced the L-Selectin expression only at transcriptional level. In HUVEC, statins diminished IL1B and SELP mRNA expression, whereas VCAM1 was increased. The ezetimibe reduced the IL1B mRNA expression. However, SELE, MMP9, IL6 and MMP9 mRNA expressions were not affected by the treatments. The protein expression of ICAM-1 and P-Selectin on the surface of HUVEC was reduced by statins, but not by the ezetimibe. Similarly, IL-6 and MCP-1 secretion were reduced by statins, whereas IL-8 secretion was not modified by the treatments. The NO release and NOS3 expression in HUVEC was increased by the statins, however it was not stimulated by ezetimibe. Moreover, the anti-inflammatory statin effects were independent of this pathway due to statin effects were maintained in HUVEC with silenced NOS3. Although the statin effect on ICAM-1 and MCP-1 were attenuated by L-NAME co treatment, the statin effects seem to be independent of NO release. Statins and ezetimibe reduced miR221 in HUVEC. miR-222 expression was reduced only by atorvastatin. miR-1303 was not affected by the treatments. In HC patients, the improvement of the lipid profile simvastatin combined with ezetimibe was more efficient than both monotherapies. Similarly, the association therapy was better in reducing the mRNA expression in PBMC and plasma concentration of IL-1&#946;, MCP-1, IL-8 and TNF&#945;. ICAM1 expression was reduced only at transcriptional level, whereas mRNA but not protein expression of TNF&#945; was also reduced by the simvastatin monotherapy. There was no modulation mRNA or protein expression of other studied markers in the in vivo model. Additionally, the anti-inflammatory effects observed in the HC were independent of PCRus or NO modulation, which were not altered by the hypolipemiant treatments. In this study, the proposed plitropic effects of statins were confirmed in monocytes and endothelial cells in vitro and in HC patients. Moreover, although it was less potent than statins, an anti-inflammatory effect was also observed for the inhibition of cholesterol absorption. An additional reduction of the cholesterol caused by combined hypolipemiant therapies gives a greater cardiovascular beneffict in hypercholesterolemic patients.