Os citros são as plantas economicamente mais importantes da fruticultura mundial. O Brasil responde por cerca de 30% da produção do planeta, e o Estado de São Paulo produz cerca de 80% dos citros do país. A pior ameaça atual a esse mercado é a doença bacteriana conhecida como greening ou huanglongbing (HLB), pela severidade dos sintomas, por afetar todas as variedades de citros e pela rapidez com que se espalha pelos pomares, transmitida pelo inseto psilídeo Diaphorina citri. O greening torna os frutos inúteis para consumo e leva à morte da planta. Não existe cura para a doença, de modo que o principal método de controle de infestação é a combinação das pulverizações, para reduzir a população do inseto vetor, com a erradicação das plantas doentes. Este último procedimento é efetuado porque a planta doente funciona como foco de propagação para o restante do pomar. Por isso, é importante identificar e erradicar a planta doente o mais cedo possível. Hoje, a identificação das plantas doentes é feita por inspeção visual. Esse método é muito pouco eficaz, pois, na ausência de frutos, os sintomas nas folhas não se manifestam de maneira uniforme em toda a planta e podem ser bastante sutis, sendo até confundidos com outras doenças. Além disso, as plantas inoculadas permanecem cerca de um ano sem manifestar sintoma algum. Por isso, a inspeção visual tipicamente identifica apenas cerca de 27% das plantas infectadas. O método de diagnóstico mais preciso disponível atualmente é a reação em cadeia de polimerase em tempo real (RT- PCR). Entretanto, essa técnica é trabalhosa e dispendiosa, o que torna impossível seu uso para o diagnóstico de grandes quantidades de plantas. Este trabalho propõe uma metodologia de diagnóstico baseada na obtenção de espectros de fluorescência induzida por laser (LIFS) das folhas e na aplicação de redes neurais artificiais para distinguir plantas sadias e doentes. Um experimento realizado no campo com pés de laranjeira Pêra-rio enxertada em limoeiro Cravo demonstrou que plantas sintomáticas podem ser diagnosticadas com eficiência de 87%. Um experimento controlado usando mudas de laranjeira Valência em citrumeleiro Swingle atestou que a técnica proposta também é capaz de diagnosticar plantas assintomáticas, obtendo taxas de acerto de até 63%. Da comparação dos resultados com os obtidos por RT-PCR constatou-se que a técnica aqui proposta apresenta taxa de acerto até duas vezes maior nos estágios iniciais do desenvolvimento da doença, até dois meses antes do aparecimento dos sintomas. Foram feitos também estudos preliminares da viabilidade do uso das técnicas de imagens de fluorescência induzida por laser (LIFI) e espectroscopia de emissão óptica com plasma induzido por laser (LIBS) para o diagnóstico precoce do greening. Os resultados foram bons em ambos os casos: na fase assintomática da doença, LIFI obteve sempre mais de 68% de acerto, e LIBS obteve mais de 62% em todos os casos. Todas as técnicas forneceram, portanto, resultados muito melhores que os da inspeção visual, e todas são mais viáveis que o RT-PCR, tanto pela rapidez quanto pelo custo envolvido. / Citrus plants are the most economically important fruit worldwide. Brazil accounts for about 30% of the planet\'s production, and the State of São Paulo produces 80% of citrus in the country. Nowadays, the worst threat to this market is the bacterial disease known as greening or huanglongbing (HLB), because it causes severe symptoms, affects all citrus varieties, and spreads very quickly through the orchards, being transmitted by the insect Diaphorina citri. The greening-affected fruits are useless and the plant dies. There is no healing for this disease, so the main method for infestation control is pulverization, to reduce the population of the vector insect, combined with eradication of diseased plants. The last procedure is done because the diseased plant acts as a focus, spreading HLB to the healthy trees around. Therefore, it is important to identify and eradicate the diseased plant as soon as possible. The identification of diseased plants is done currently by visual inspection. This method is very inefficient, because, in the absence of fruits, the leaf\'s symptoms do not appear uniformly throughout the plant and when appear they can be quite subtle, and even they can be mistaken for other diseases. Moreover, inoculated plants do not show any symptoms for about a year. This is why visual inspection typically identifies only about 27% of infected plants. At present, the most accurate method of diagnosis available is real-time polymerase chain reaction (RT-PCR). However, this technique is laborious and costly, making impossible to use it for large scale diagnosis. This study proposes a new diagnostic methodology carried out in the leaves, without any preparation, based on laser-induced fluorescence spectroscopy (LIFS) and artificial neural networks to distinguish diseased plants from healthy ones. A field experiment using Pêra-rio orange grafted on Cravo lemon plants has shown that symptomatic trees can be diagnosed with an efficiency of 87%. A controlled experiment using Valência orange on Swingle citrumelo trees testified that the proposed technique is also able to diagnose asymptomatic plants, achieving accuracy rates up to 63%. Comparison with results obtained by RT-PCR revealed that the technique proposed here achieves accuracy rates up to twice as high in the early stages of disease development, until two months before the onset of symptoms. Preliminary studies about the feasibility of laser-induced fluorescence imaging (LIFI) and laser-induced breakdown spectroscopy (LIBS) for greening early diagnosis were also performed. Results were good in both cases: in the symptomatic stage of the disease, LIFI always got more than 68% accuracy, and LIBS obtained more than 62% in all cases. All the techniques have provided thus far better results than those from visual inspection, and they all are more applicable than RT-PCR, because of quickness and low cost of analysis.

Com uma grande diversidade climática, 13% de toda a água doce do mundo em seu território, abundância na energia solar e chuvas regulares, o Brasil é um país favorável para o desenvolvimento da agropecuária. Segundo o Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA) as vendas do setor do Agronegócio brasileiro, de janeiro até julho de 2016, alcançaram US$ 52,8 bilhões, respondendo por 49% de todas as exportações do país. Dois produtos que contribuem decisivamente para este sucesso são a soja e a laranja, onde o Brasil se enquadra como grande produtor e exportador. Um fator que pode comprometer o crescimento do setor do agronegócio são as pragas e doenças. Neste trabalho foram utilizadas técnicas de imagens e espectroscopia de fluorescência como ferramentas de diagnóstico de doenças e fenotipagem. As culturas estudadas, por sua relevância econômica, foram os citros e a soja. Foram investigadas folhas de laranja sadias e doentes com Huanglongbing (HLB), conhecida também como Greening e folhas de soja sadias e doentes com Green StemandFoliar Retention (GSFR), popularmente conhecida como Soja Louca II. Com base em descritores retirados dos espectros e das imagens foram desenvolvidos classificadores utilizando-se a Regressão por Mínimos Quadrados Parciais (PLSR). O desempenho dos classificadores para diferenciar folhas de soja doentes de folhas sadias alcançou 99% para o sistema de espectroscopia de fluorescência e 100% para o sistema de Imagens de Fluorescência. Já com o sistema de imagens de Refletância com Luz Polarizada o acerto na classificação correta entre folhas de laranja sadias e com HLB foi de 84%. Também foi estudada a possibilidade de utilização de imagens termais em diferentes situações de estresse hídrico e nutricional. Através deste sistema foi possível detectar plantas em condições de estresses hídricos decorridos dois dias após o corte de água. As técnicas acima mencionadas também foram testadas para fenotipagem de plantas. Foram analisadas 20 variedades diferentes de citros e 3 de soja. A taxa de acerto na diferenciação de citros geneticamente muito próximos ficou em torno de 63% e para soja foi alcançado 95%, isso quando empregado o sistema de espectroscopia de fluorescência. Com base nesses resultados é possível afirmar que as técnicasfotônicas combinadas com os modelos classificadores, podem ser utilizadas como ferramentas para diagnosticar as doenças, como a GSFR e o HLB, e avaliar diferentes tipos de estresse abiótico. Elas também podem ser utilizadas para diferenciar variedades de plantas, mesmo no caso de variedades muito próximas geneticamente, onde as técnicas tradicionais não são capazes de fazê-lo. Os resultados apresentados foram promissores e podem, em um futuro próximo, gerar sistemas portáteis que devem auxiliar os produtores no campo. / With a great climatic diversity, 13% of all the fresh water of the world in its territory, abundance in solar energy and regular rains, Brazil is a favorable country for the development of agriculture. According to the Ministry of Agriculture, Livestock, and Supply (MAPA), sales of the Brazilian Agribusiness sector, from January to July 2016, reached US$ 52.8 billion, accounting for 49% of all Brazilian exports. Two products that contribute decisively to this success are soy and orange, where Brazil is a major producer and exporter. One factor that can jeopardize the growth of the agribusiness sector is pests and diseases. In this work, fluorescence spectroscopy and imaging techniques were used as tools for the diagnosis of diseases and phenotyping. The crops studied, because of their economic relevance, were citrus and soybean. Healthy and infected leaves with Huanglongbing (HLB), also known as Greening, and healthy and infected leaves with Green Stem and Foliar Retention (GSFR), popularly known as Mad Soybean II, were investigated. Based on descriptors taken from spectra and images, classifiers were developed using Partial Least Squares Regression (PLSR). The performance of the classifiers to differentiate diseased leaves from healthy leaves reached 99% for the fluorescence spectroscopy system and 100% for the Fluorescence Imaging system. The success rate of classification for the system using polarized reflectance images reached 84%. We also studied the possibility of using thermal images in different situations of water and nutritional stress. Through this system, it was possible to detect plants in conditions of water stress after two days of water cut. The techniques above mentioned were also tested for plant phenotyping. Twenty different citrus and three soybean varieties were analyzed. The success rate of the differentiation using fluorescence spectroscopy for very close citrus was around 63% and for soybean was reached 95%. Based on these results it is possible to conclude that the photonic techniques combined with the classifier models can be used as tools to diagnose diseases such as GSFR and HLB and to evaluate different types of abiotic stress. They can also be used to differentiate plant varieties, even in the case of very closely varieties, where traditional techniques are not able to carry out. The results presented were promising and may, in the near future, generate portable systems that should assist farmers in the field.

Diaphorina citri é o inseto vetor das bactérias Candidatus Liberibacter spp., causadoras do huanglongbing (HLB), doença que tem causado sérios danos e grandes perdas econômicas à citricultura mundial, pois acomete todas as variedades comerciais de citros e não existem genótipos comerciais resistentes. Por esta razão, têm-se buscado estratégias que auxiliem no controle do inseto vetor, hoje feito quase que exclusivamente com o uso de excessivas aplicações de agroquímicos que aumentam o custo de produção e potencializam a agressão ao meio ambiente. Tem-se vislumbrado o desenvolvimento de plantas transgênicas que aumentem a resposta de defesa da planta contra Ca. Liberibacter spp. ou o vetor de forma mais efetiva, pelo direcionamento da expressão de genes alvo em tecidos específico, controlados por promotores de floema ou constitutivo. Nosso grupo tem buscado estratégias ainda não utilizadas em citros, mas efetivas para outras culturas, como o uso da bactéria entomopatogênica Bacillus thuringiensis (Bt) para o controle de D. citri. Essa bactéria se destaca devido à produção de proteínas com atividades inseticidas contra diversas fases imaturas de insetos, por isso tem sido amplamente utilizada tanto na produção de bioinseticidas quanto, principalmente, na produção de plantas transgênicas em culturas como algodão, milho e soja. Em trabalhos anteriores, identificamos que o gene cry11 codifica uma toxina capaz de causar elevada mortalidade em ninfas do psilídeo dos citros 120 horas após sua inoculação em seedlings de citros. Este gene foi clonado para a expressão em tecido de plantas de laranja doce sob o direcionamento de dois promotores, um específico de floema e o outro constitutivo. Foram obtidas 19 plantas transgênicas, com a inserção de uma a três cópias do transgene em seus genomas. Algumas delas apresentaram elevados níveis de expressão do transcrito. Todas essas plantas foram propagadas via enxertia em limoeiro Cravo e estão praticamente prontas para serem desafiadas com ninfas de D. citri. Esse é o primeiro esforço para a produção de citrus Bt visando ao manejo do HLB dos citros. / Diaphorina citri is the insect vector of Candidatus Liberibacter spp., the causal agents of huanglongbing (HLB), the most devastating disease of citrus worldwide, due to the severe losses it induces and the lack of commercial resistant genotypes. For this reason, strategies have been sought to assist in the control of the insect vector, nowadays done almost exclusively with the use of excessive applications of agrochemicals that increase the cost of production and potentiate the aggression to the environment. It has been envisioned the development of transgenic plants that increase the defense response of the plant against Ca. Liberibacter spp. or the vector more effectively, by targeting the expression of target genes in specific tissues, controlled by phloem or constitutive promoters. Our group has sought strategies not yet used in citrus, but effective for other crops, such as the use of the entomopathogenic bacterium Bacillus thuringiensis (Bt) for the control of D. citri. This bacterium stands out due to the production of proteins with insecticidal activity against several immature phases of insects, so it has been widely used both in the production of bioinsecticides and mainly in the production of transgenic plants in crops such as cotton, corn and soybean. In previous work, we have identified that the cry11 gene encodes a toxin capable of causing high mortality of citrus psyllid nymphs 120 hours after inoculation in citrus seedlings. This gene was cloned for expression in sweet orange plant tissue under the guidance of two promoters, one phloem specific and the other constitutive. Nineteen transgenic plants were obtained, with the insertion of one to three copies of the transgene into their genomes. Some of them had high levels of transcript expression. All these plants were propagated via grafting in Clove lemon tree and are practically ready to be challenged with D. citri nymphs. This is the first effort to produce citrus Bt for the management of citrus HLB.

A doença Huanglongbing (HLB) associada a bactéria Candidatus Liberibacter spp., que coloniza os vasos do floema, é considerada uma das mais graves doenças de citros. Uma importante estratégia para o controle desta doença consiste na produção de plantas transgênicas, expressando genes que codificam peptídeos antibacterianos especificamente no local de colonização do patógeno. O objetivo deste trabalho foi obter plantas transgênicas de laranja doce, expressando o gene que codifica o peptídeo antibacteriano atacina A (attA) dirigido por promotores específicos para a expressão gênica no floema. O trabalho foi iniciado com a elaboração de construções gênicas contendo o gene attA (associado ou não ao peptídeo sinal), sob o controle dos promotores AtSuc2 (transportador de sacarose), AtPP2 (proteína de floema 2), clonados de Arabidopsis thaliana, ou CsPP2 (proteína de floema 2), clonado de Citrus sinensis. Os experimentos de transformação genética foram realizados com C. sinensis cv. \'Hamlin\', \'Valência\', \'Pêra\' e \'Natal\', via Agrobacterium tumefaciens, utilizando-se segmento de epicótilo como explante. A identificação de plantas transgênicas foi realizada por meio da análise de PCR. Plantas PCR+ foram aclimatizadas e transferidas para casa-de-vegetação específica para o cultivo de plantas transgênicas. Análises de Southern e Northern blot foram realizadas em plantas aclimatizadas, confirmando-se a integração e transcrição do gene attA, respectivamente. A expressão do gene attA também foi confirmada pela análise de RT-qPCR. Plantas de laranja \'Hamlin\' contendo o gene attA (associado ou não ao peptídeo sinal), sob o controle dos promotores AtSuc2 ou AtPP2 foram propagadas por enxertia, para futura avaliação da resistência a Candidatus Liberibacter asiaticus / Huanglongbing (HLB) associated to Candidatus Liberibacter spp., which colonizes the phloem, is considered one of the most serious diseases of citrus. One important strategy to control this disease consists of producing transgenic plants expressing, in the bacteria colonization tissue, genes encoding antibacterial peptides. The objective of this work was to produce transgenic sweet orange plants expressing genes encoding the antibacterial peptide attacin A (attA) driven by phoem-specific promoters. The work started with the development of the gene constructs, containing the attacin A gene (with or without signal peptide) controlled by either sucrose transporter gene (AtSuc2) or phloem protein 2 gene promoters (AtPP2) from Arabidopsis thaliana, or phloem protein 2 gene promotor (CsPP2) from Citrus sinensis. The genetic transformation of C. sinensis \'Hamlin\', \'Valencia\', \'Pera\' and \'Natal\' cultivars was done via Agrobacterium tumefaciens. Epicotyls segments collected from in vitro germinated seedlings were used as explants. Transgenic plants were identified by PCR analyses. PCR positive plants were acclimatized and transferred to specific greenhouse. Integration and transcription of the attA gene was confirmed in acclimatized transgenic plants by Southern and Northern blot analysis, respectively. The attA gene expression was validated by RT-qPCR analysis. \'Hamlin\' transgenic cultivars containing the AtSuc2 or AtPP2 promoters controlling the expression of attA (with or without signal peptide) were propagated by grafting, for future evaluation of Candidatus Liberibacter asiaticus resistance

O objetivo do presente trabalho foi estudar a biologia e elaborar a tabela de vida de fertilidade de Diaphorina citri (Kuwayama, 1908) (Hemiptera: Liviidae) em duas espécies de Murraya [Murraya paniculata (L.) Jack e Murraya koenigii (L.) Sprengel] e estudar a biologia de Tamarixia radiata Waterston, 1922 (Hymenoptera: Eulophidae) em psilídeos provenientes das duas espécies de Murraya citadas, visando fornecer subsídios ao controle da praga em programas de MIP. Foram realizados experimentos em confinamento (sem chance de escolha) para avaliar o efeito de duas espécies de Murraya sobre a alimentação e fertilidade de D. citri, bem como a biologia da referida espécie de psilídeo nos dois hospedeiros. Também foi avaliado o efeito do hospedeiro no parasitismo sobre D. citri e na biologia de T. radiata. Pode-se concluir que: D. citri preferiu se alimentar em M. koenigii, porém para a oviposição o hospedeiro preferido foi M. paniculata. No entanto, os demais parâmetros observados indicaram que M. paniculata é o hospedeiro mais adequado para o desenvolvimento do psilídeo. Com base na tabela de vida de fertilidade, a taxa liquida de reprodução (R0), de D. citri, foi 3,1 vezes maior quando criado em M. paniculata; os demais parâmetros, exceto o tempo médio de cada geração (T), também favoreceram o desenvolvimento do inseto quando criado em M. paniculata. O desenvolvimento e parasitismo de T. radiata sobre ninfas de D. citri foram afetados quando criadas nas duas espécies, sendo observados melhores resultados quando os psilídeos foram criados em M. koenigii em testes de confinamento. Os resultados obtidos poderão fornecer subsídios ao controle e manejo do psilídeo transmissor do HLB. / The aim of the present research was to evaluate the biology and fertility life table of Diaphorina citri (Kuwayama, 1908) (Hemiptera: Liviidae) comparatives in the two species of Murraya [Murraya paniculata (L.) Jack e Murraya koenigii (L.) Sprengel], and to evaluate the biology of Tamarixia radiata Waterston, 1922 (Hymenoptera: Eulophidae) in the two species studied in confinement, aiming to provide subsidies for pest control in Integrated Pest Management (IPM). Experiments were carried out in confinement (no choice) to evaluate the effect of the two species of Murraya on the feeding and fertility of D. citri, as well as the biology of Asian Citrus Psyllid (ACP) in two hosts. Biology and the effect of host on parasitism of T. radiata on nymphs of D. citri was evaluated. It can be concluded that: D. citri preferred to feed on Murraya koenigii (L.) Sprengel, but for oviposition the preferred host was Murraya paniculata (L.) Jack. However, the other parameters observed indicate that M. paniculata is the most suitable host for the development of the psyllid. According to the fertility life table, the reproduction net rate (R0) of D. citri was 3.1 times higher if reared on M. paniculata; the other parameters, except the mean time of each generation (T), also supported results when it was reared on M. paniculata. The development and parasitism of T. radiata on nymphs of D. citri were affected when reared on different hosts, and better results were observed when T. radiata reared on M. koenigii. The results obtained may provide subsidies for the control and management of the HLB.

O objetivo do presente trabalho foi estudar a biologia e elaborar a tabela de vida de fertilidade de Diaphorina citri (Kuwayama, 1908) (Hemiptera: Liviidae) em duas espécies de Murraya [Murraya paniculata (L.) Jack e Murraya koenigii (L.) Sprengel] e estudar a biologia de Tamarixia radiata Waterston, 1922 (Hymenoptera: Eulophidae) em psilídeos provenientes das duas espécies de Murraya citadas, visando fornecer subsídios ao controle da praga em programas de MIP. Foram realizados experimentos em confinamento (sem chance de escolha) para avaliar o efeito de duas espécies de Murraya sobre a alimentação e fertilidade de D. citri, bem como a biologia da referida espécie de psilídeo nos dois hospedeiros. Também foi avaliado o efeito do hospedeiro no parasitismo sobre D. citri e na biologia de T. radiata. Pode-se concluir que: D. citri preferiu se alimentar em M. koenigii, porém para a oviposição o hospedeiro preferido foi M. paniculata. No entanto, os demais parâmetros observados indicaram que M. paniculata é o hospedeiro mais adequado para o desenvolvimento do psilídeo. Com base na tabela de vida de fertilidade, a taxa liquida de reprodução (R0), de D. citri, foi 3,1 vezes maior quando criado em M. paniculata; os demais parâmetros, exceto o tempo médio de cada geração (T), também favoreceram o desenvolvimento do inseto quando criado em M. paniculata. O desenvolvimento e parasitismo de T. radiata sobre ninfas de D. citri foram afetados quando criadas nas duas espécies, sendo observados melhores resultados quando os psilídeos foram criados em M. koenigii em testes de confinamento. Os resultados obtidos poderão fornecer subsídios ao controle e manejo do psilídeo transmissor do HLB. / The aim of the present research was to evaluate the biology and fertility life table of Diaphorina citri (Kuwayama, 1908) (Hemiptera: Liviidae) comparatives in the two species of Murraya [Murraya paniculata (L.) Jack e Murraya koenigii (L.) Sprengel], and to evaluate the biology of Tamarixia radiata Waterston, 1922 (Hymenoptera: Eulophidae) in the two species studied in confinement, aiming to provide subsidies for pest control in Integrated Pest Management (IPM). Experiments were carried out in confinement (no choice) to evaluate the effect of the two species of Murraya on the feeding and fertility of D. citri, as well as the biology of Asian Citrus Psyllid (ACP) in two hosts. Biology and the effect of host on parasitism of T. radiata on nymphs of D. citri was evaluated. It can be concluded that: D. citri preferred to feed on Murraya koenigii (L.) Sprengel, but for oviposition the preferred host was Murraya paniculata (L.) Jack. However, the other parameters observed indicate that M. paniculata is the most suitable host for the development of the psyllid. According to the fertility life table, the reproduction net rate (R0) of D. citri was 3.1 times higher if reared on M. paniculata; the other parameters, except the mean time of each generation (T), also supported results when it was reared on M. paniculata. The development and parasitism of T. radiata on nymphs of D. citri were affected when reared on different hosts, and better results were observed when T. radiata reared on M. koenigii. The results obtained may provide subsidies for the control and management of the HLB.

Medidas para controle de Diaphorina citri Kuwayama, 1908 (Hemiptera: Liviidae) vem sendo buscadas intensamente nos últimos anos visto que este inseto é considerado a mais importante praga da citricultura devido a sua capacidade de transmitir as bactérias causadoras do Huanglongbing (HLB). Como não existem, ainda, medidas curativas para a doença, seu manejo se baseia, principalmente, no controle do vetor. O controle biológico com utilização do parasitoide Tamarixia radiata (Waterston, 1922) (Hymenoptera: Eulophidae) vem trazendo bons resultados em diversas partes do mundo. Para uma eficiente utilização deste inimigo natural, sua produção em larga escala é imprescindível, o que exige também a criação da praga. Assim, o objetivo deste trabalho foi estudar alguns pontos chaves da criação das duas espécies, visando aumentar seu rendimento, propor um sistema de produção em larga escala do parasitoide, estimando seu custo de implantação e manutenção e também avaliar o estabelecimento e eficiência do parasitoide liberado em diferentes regiões produtoras do estado de São Paulo. Visando a criação de D. citri, foram avaliados aspectos referentes ao tamanho das brotações do hospedeiro [Murraya paniculta (L.)] e viabilidade de uso de outro hospedeiro [Murraya koenigii (L.) Sprengel]. Para T. radiata foram investigados os efeitos da alimentação suplementar e um novo sistema de coleta de adultos. Foi ainda avaliada, em campo, a validade do modelo de exigências térmicas para as duas espécies. Utilizando-se os resultados obtidos, propôs-se um sistema de criação em larga escala do parasitoide, avaliando-se seu custo de implantação e manutenção. Foram realizadas liberações do parasitoide em diferentes regiões, do estado de São Paulo, ao longo de um ano, para avaliar seu estabelecimento e parasitismo. Verificou-se que brotações de M. paniculata com comprimento entre 1,0 a 2,6 cm favorecem a oviposição, e aquelas com tamanho médio de 4,3 são melhores para alimentação. A viabilidade de ovos, de ninfas e total, e a duração da fase de ovo de D. citri não foram afetadas pelos hospedeiros, M. paniculata e M. koenigii; por outro lado, as durações da fase ninfal e total foram maiores em M. paniculata, para qual D. citri apresenta preferência quando em teste com chance de escolha, não tendo sido verificada diferença em teste sem chance de escolha. A umidade afeta a emergência de T. radiata no sistema de coleta proposto e tal sistema permite uma economia de tempo na coleta de parasitoides de até cinco vezes. O fornecimento de alimento para adultos de T. radiata não afetou sua longevidade, nem sua capacidade de parasitismo. Os modelos de exigências térmicas estimados para D. citri e T. radiata, são válidos para temperaturas mais elevadas. Recomenda-se o uso de mudas de M. paniculata apenas duas vezes na criação de D. citri. O maior custo do sistema é devido à produção de ninfas de T. radiata e à mão de obra. T. radiata se estabeleceu em todas regiões testadas com boas taxa de redução de ninfas. O parasitismo médio foi inicialmente alto tornando-se variável e foi afetado pela estação do ano. / Control methods for Diaphorina citri Kuwayama, 1908 (Hemiptera: Liviidae) have been intensively researched in recent years, since this insect is considered the most important citrus pest due to its ability to transmit the Huanglongbing (HLB) bacterium. Because no remedy for the disease is yet available, its management is based principally on control of the vector. Biological control using the parasitoid Tamarixia radiata (Waterston, 1922) (Hymenoptera: Eulophidae) is providing excellent results in many parts of the world. For efficient utilization of this natural enemy, large-scale production is necessary, which also requires rearing the pest. This study examined some key aspects of rearing these two species, in order to increase their productivity; propose a large-scale production system for the parasitoid, estimating the costs of its implantation and management; and also to evaluate the establishment and efficiency of the parasitoid, released in different citrus-producing areas of São Paulo state. Aspects of rearing D. citri related to the branch size of the host [Murraya paniculata (L.)] and the feasibility of using an alternative host [Murraya koenigii (L.) Sprengel] were evaluated. For T. radiata, the effects of supplementary feeding and a new system for collecting adults were investigated. The validity of the thermal-requirements model was evaluated in field conditions for both species. Based on the results obtained, a large-scale rearing system for the parasitoid is proposed, together with an evaluation of its implantation and management costs. Parasitoid releases were conducted, and its performance in different climate zones during one year was evaluated in order to assess its establishment and parasitism efficiency. The results indicated that M. paniculata buds sized 1.0 to 2.6 cm are best for egg laying, and buds averaging 4.3 cm are better for feeding. The egg, nymph and total viabilities, and the egg-stage duration of D. citri were not affected by the different hosts M. paniculata and M. koenigii; however, the nymphal stage and the total development duration were longer on M. paniculata, for which D. citri showed a preference in the free-choice test. No difference was seen in the no-choice test. The humidity affects the emergence of T. radiata in the proposed collection system. This system reduces the time required to produce the parasitoid by up to five-fold. The food supply for adults of T. radiata did not affect the longevity or parasitism capacity. The estimated thermal-requirement models for D. citri and T. radiata are valid at higher temperatures. M. paniculata seedlings should be used only twice in rearing D. citri. The highest cost in the rearing system is due to the production of T. radiata nymphs and to labor. T. radiata established successfully in all zones tested, with good rates of nymph reduction. The mean parasitism incidence was initially high and then became variable, and was affected by the season of the year.

A doença Huanglongbing (HLB) associada a bactéria Candidatus Liberibacter spp., que coloniza os vasos do floema, é considerada uma das mais graves doenças de citros. Uma importante estratégia para o controle desta doença consiste na produção de plantas transgênicas, expressando genes que codificam peptídeos antibacterianos especificamente no local de colonização do patógeno. O objetivo deste trabalho foi obter plantas transgênicas de laranja doce, expressando o gene que codifica o peptídeo antibacteriano atacina A (attA) dirigido por promotores específicos para a expressão gênica no floema. O trabalho foi iniciado com a elaboração de construções gênicas contendo o gene attA (associado ou não ao peptídeo sinal), sob o controle dos promotores AtSuc2 (transportador de sacarose), AtPP2 (proteína de floema 2), clonados de Arabidopsis thaliana, ou CsPP2 (proteína de floema 2), clonado de Citrus sinensis. Os experimentos de transformação genética foram realizados com C. sinensis cv. \'Hamlin\', \'Valência\', \'Pêra\' e \'Natal\', via Agrobacterium tumefaciens, utilizando-se segmento de epicótilo como explante. A identificação de plantas transgênicas foi realizada por meio da análise de PCR. Plantas PCR+ foram aclimatizadas e transferidas para casa-de-vegetação específica para o cultivo de plantas transgênicas. Análises de Southern e Northern blot foram realizadas em plantas aclimatizadas, confirmando-se a integração e transcrição do gene attA, respectivamente. A expressão do gene attA também foi confirmada pela análise de RT-qPCR. Plantas de laranja \'Hamlin\' contendo o gene attA (associado ou não ao peptídeo sinal), sob o controle dos promotores AtSuc2 ou AtPP2 foram propagadas por enxertia, para futura avaliação da resistência a Candidatus Liberibacter asiaticus / Huanglongbing (HLB) associated to Candidatus Liberibacter spp., which colonizes the phloem, is considered one of the most serious diseases of citrus. One important strategy to control this disease consists of producing transgenic plants expressing, in the bacteria colonization tissue, genes encoding antibacterial peptides. The objective of this work was to produce transgenic sweet orange plants expressing genes encoding the antibacterial peptide attacin A (attA) driven by phoem-specific promoters. The work started with the development of the gene constructs, containing the attacin A gene (with or without signal peptide) controlled by either sucrose transporter gene (AtSuc2) or phloem protein 2 gene promoters (AtPP2) from Arabidopsis thaliana, or phloem protein 2 gene promotor (CsPP2) from Citrus sinensis. The genetic transformation of C. sinensis \'Hamlin\', \'Valencia\', \'Pera\' and \'Natal\' cultivars was done via Agrobacterium tumefaciens. Epicotyls segments collected from in vitro germinated seedlings were used as explants. Transgenic plants were identified by PCR analyses. PCR positive plants were acclimatized and transferred to specific greenhouse. Integration and transcription of the attA gene was confirmed in acclimatized transgenic plants by Southern and Northern blot analysis, respectively. The attA gene expression was validated by RT-qPCR analysis. \'Hamlin\' transgenic cultivars containing the AtSuc2 or AtPP2 promoters controlling the expression of attA (with or without signal peptide) were propagated by grafting, for future evaluation of Candidatus Liberibacter asiaticus resistance

Medidas para controle de Diaphorina citri Kuwayama, 1908 (Hemiptera: Liviidae) vem sendo buscadas intensamente nos últimos anos visto que este inseto é considerado a mais importante praga da citricultura devido a sua capacidade de transmitir as bactérias causadoras do Huanglongbing (HLB). Como não existem, ainda, medidas curativas para a doença, seu manejo se baseia, principalmente, no controle do vetor. O controle biológico com utilização do parasitoide Tamarixia radiata (Waterston, 1922) (Hymenoptera: Eulophidae) vem trazendo bons resultados em diversas partes do mundo. Para uma eficiente utilização deste inimigo natural, sua produção em larga escala é imprescindível, o que exige também a criação da praga. Assim, o objetivo deste trabalho foi estudar alguns pontos chaves da criação das duas espécies, visando aumentar seu rendimento, propor um sistema de produção em larga escala do parasitoide, estimando seu custo de implantação e manutenção e também avaliar o estabelecimento e eficiência do parasitoide liberado em diferentes regiões produtoras do estado de São Paulo. Visando a criação de D. citri, foram avaliados aspectos referentes ao tamanho das brotações do hospedeiro [Murraya paniculta (L.)] e viabilidade de uso de outro hospedeiro [Murraya koenigii (L.) Sprengel]. Para T. radiata foram investigados os efeitos da alimentação suplementar e um novo sistema de coleta de adultos. Foi ainda avaliada, em campo, a validade do modelo de exigências térmicas para as duas espécies. Utilizando-se os resultados obtidos, propôs-se um sistema de criação em larga escala do parasitoide, avaliando-se seu custo de implantação e manutenção. Foram realizadas liberações do parasitoide em diferentes regiões, do estado de São Paulo, ao longo de um ano, para avaliar seu estabelecimento e parasitismo. Verificou-se que brotações de M. paniculata com comprimento entre 1,0 a 2,6 cm favorecem a oviposição, e aquelas com tamanho médio de 4,3 são melhores para alimentação. A viabilidade de ovos, de ninfas e total, e a duração da fase de ovo de D. citri não foram afetadas pelos hospedeiros, M. paniculata e M. koenigii; por outro lado, as durações da fase ninfal e total foram maiores em M. paniculata, para qual D. citri apresenta preferência quando em teste com chance de escolha, não tendo sido verificada diferença em teste sem chance de escolha. A umidade afeta a emergência de T. radiata no sistema de coleta proposto e tal sistema permite uma economia de tempo na coleta de parasitoides de até cinco vezes. O fornecimento de alimento para adultos de T. radiata não afetou sua longevidade, nem sua capacidade de parasitismo. Os modelos de exigências térmicas estimados para D. citri e T. radiata, são válidos para temperaturas mais elevadas. Recomenda-se o uso de mudas de M. paniculata apenas duas vezes na criação de D. citri. O maior custo do sistema é devido à produção de ninfas de T. radiata e à mão de obra. T. radiata se estabeleceu em todas regiões testadas com boas taxa de redução de ninfas. O parasitismo médio foi inicialmente alto tornando-se variável e foi afetado pela estação do ano. / Control methods for Diaphorina citri Kuwayama, 1908 (Hemiptera: Liviidae) have been intensively researched in recent years, since this insect is considered the most important citrus pest due to its ability to transmit the Huanglongbing (HLB) bacterium. Because no remedy for the disease is yet available, its management is based principally on control of the vector. Biological control using the parasitoid Tamarixia radiata (Waterston, 1922) (Hymenoptera: Eulophidae) is providing excellent results in many parts of the world. For efficient utilization of this natural enemy, large-scale production is necessary, which also requires rearing the pest. This study examined some key aspects of rearing these two species, in order to increase their productivity; propose a large-scale production system for the parasitoid, estimating the costs of its implantation and management; and also to evaluate the establishment and efficiency of the parasitoid, released in different citrus-producing areas of São Paulo state. Aspects of rearing D. citri related to the branch size of the host [Murraya paniculata (L.)] and the feasibility of using an alternative host [Murraya koenigii (L.) Sprengel] were evaluated. For T. radiata, the effects of supplementary feeding and a new system for collecting adults were investigated. The validity of the thermal-requirements model was evaluated in field conditions for both species. Based on the results obtained, a large-scale rearing system for the parasitoid is proposed, together with an evaluation of its implantation and management costs. Parasitoid releases were conducted, and its performance in different climate zones during one year was evaluated in order to assess its establishment and parasitism efficiency. The results indicated that M. paniculata buds sized 1.0 to 2.6 cm are best for egg laying, and buds averaging 4.3 cm are better for feeding. The egg, nymph and total viabilities, and the egg-stage duration of D. citri were not affected by the different hosts M. paniculata and M. koenigii; however, the nymphal stage and the total development duration were longer on M. paniculata, for which D. citri showed a preference in the free-choice test. No difference was seen in the no-choice test. The humidity affects the emergence of T. radiata in the proposed collection system. This system reduces the time required to produce the parasitoid by up to five-fold. The food supply for adults of T. radiata did not affect the longevity or parasitism capacity. The estimated thermal-requirement models for D. citri and T. radiata are valid at higher temperatures. M. paniculata seedlings should be used only twice in rearing D. citri. The highest cost in the rearing system is due to the production of T. radiata nymphs and to labor. T. radiata established successfully in all zones tested, with good rates of nymph reduction. The mean parasitism incidence was initially high and then became variable, and was affected by the season of the year.

La tension interfaciale est une grandeur physico-chimique d'intérêt pour de nombreuses industries et notamment l'industrie pétrolière. Cette grandeur est l'un des paramètres qui permet d'optimiser le rendement d'un puits de pétrole. La difficulté liée à sa mesure dans les conditions réservoirs a amené à étudier les systèmes eau/tensioactif/huile par simulation moléculaire. Ce travail a permis de montrer que la Dynamique Particulaire Dissipative (DPD) était un outil adapté pour l’étude de systèmes eau/tensioactif/huile sous différents aspects, de la caractérisation de la structure des interfaces au calcul de la tension interfaciale. Cette thèse a permis la démonstration de l’influence non-négligeable de la variation des paramètres de la force harmonique, l’amplitude K et la distance d’équilibre r0 , sur le calcul de la tension interfaciale et sur la structure des interfaces à forte concentration en tensioactif. En effet, la structure des tensioactifs aux interfaces est le résultat d’une balance subtile entre les forces intra et inter moléculaire. L’étude d’une population modèle de tensioactifs non chargés a permis de montrer que la DPD reproduit bien l'évolution de la tension interfaciale en fonction de la concentration en tensioactif en solution et en fonction du coefficient de partage de tensioactifs modèles non chargés. Une méthodologie est proposée pour caractériser les systèmes contenant des interfaces et où la tension interfaciale est calculée.Des travaux prospectifs ont permis de montrer que la DPD permettait d'étudier des phénomènes liés à la tension interfaciale comme le mûrissement d'Ostwald dans les émulsions d'huile dans l'eau. Ces derniers travaux ouvrent la voie à l’étude d’autres systèmes d’intérêt pour le milieu pétrolier comme le décollement de gouttes de pétroles adsorbées sur des parois ou l’étude d’émulsions pétrolières. / The interfacial tension is a physical-chemical property that numerous industrial areas have an interest of especially the petroleum industry. This property is one of the many which helps to optimize production wells' rate of return. Measuring that property in reservoir's conditions (high pressure and temperature) is highly difficult and led to study water/surfactant/oil systems using molecular modeling. The difficulty to measure that specific physical-chemical property linked to the pressure and temperature conditions in the reservoirs led the scientists to study water/surfactant/oil systems using molecular modeling. This thesis establishes that the Dissipative Particle Dynamics (DPD) is able to study water/surfactant/oil systems. The study of the effect of the variation of the harmonic force's parameters, namely the force constant K and the equilibrium distance r0, demonstrated that their variation can heavily influence the interfacial tension computation. Actually, a subtle balance exists between the intra and inter-molecular interactions, which influences the local structure of the surfactants at the oil-water interface, modifies the interfacial tension and influences the interface stability. It was demonstrated that DPD reproduces the variation of interfacial tension with the bulk surfactant concentration and the effect of the variation of hydrophobicity of models of un-charged surfactants on interfacial tension by mean of their coefficient partition. We established a method to properly study systems containing interfaces where interfacial tension is computed. Prospective work showed that DPD was a good tool to study microscopic phenomenon which can be observed macroscopically like the Ostwald ripening in oil in water emulsions. This is a first step before studying others systems of interest for the petroleum industry such as oil/water emulsion or the adsorption of oil droplets on rock wall.