Orientador: Vera Lucia Borges Isaac / Coorientador: Marcos Antonio Corrêa / Banca: Hérida Regina Nunes Salgado / Banca: André Rolim Baby / Resumo: O aumento da expectativa de vida tem provocado grande demanda por produtos que auxiliem na prevenção do envelhecimento da pele. O ácido hialurônico (AH) está sendo muito utilizado em formulações antienvelhecimento por se acreditar que ele possa atenuar os efeitos que o tempo produz na pele. Porém, para o desenvolvimento de um cosmético, é necessário avaliar o risco potencial dos ingredientes que compõem a formulação, que devem estar em concentração que apresente margem de segurança adequada, sendo importante a realização de teste de absorção, estudo do potencial de risco irritativo e testes de mutagenicidade. O objetivo deste estudo foi desenvolver um gel de ácido hialurônico com alta massa molecular e incorporar ácido hialurônico de massas moleculares menores, realizar o controle microbiológico dos géis, avaliar a toxicidade dérmica aguda e a citotoxicidade, determinar o comportamento reológico das formulações, analisar seu perfil de liberação, permeação e retenção cutânea in vitro. Foi preparado como gel base, a mistura de água e AH de alta massa molecular e, posteriormente, neste gel formado foram incorporados os AHs de menores massas moleculares. O controle de qualidade microbiológico foi realizado de acordo com a Farmacopeia Brasileira (2010), a avaliação da toxicidade dérmica aguda foi realizada utilizando-se 25 ratos wistar, que foram divididos em 5 grupos com 5 animais em que cada grupo recebeu a aplicação de um dos géis para posterior analise dos resultados. Para a avaliação da citotoxicidade utilizou-se o método colorimétrico 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)2,5-difenil brometo de tetrazoilium (MTT) descrito por MOSMANN, utilizando-se linhagens celulares de HepG2 (Human Epidermoide Cancer Cells) e HaCaT. As amostras tiveram seu comportamento reológico avaliado em reômetro HAAKE. O estudo de liberação, permeação e retenção cutânea... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Increased life expectancy has caused a great demand for products that help in the prevention of skin aging. Hyaluronic acid is being used in anti-aging formulations because it is expected that it can decrease the effects of time in the skin. However, for the development of a cosmetic it is necessary to evaluate the potential risk of the ingredients in the formulation that should be with adequate concentration to provide a margin of safety, being important to carry out absorption test, studies of the potential risk of irritating the skin and mutagenicity tests. The aim of this study was to develop a gel of hyaluronic acid with high molecular weight and incorporate hyaluronic acid with small molecular weights in it, analyze the microbiological control of the gels, evaluate the acute dermal toxicity and cytotoxicity, determine rheological characteristics, analyze the release profile, skin permeation and retention in vitro. It was prepared like gel base, the mixture of water and AH of high molecular weight, and after was incorporate AH of smaller molecular weight. The quality control microbiological was accomplished in agreement with Brazilian Pharmacopoeia (2010), the evaluate the acute dermal toxicity was made with 25 rat wistar, that were divided in 5 groups with 5 animals in each group received the application from one of the gels for subsequent analyzes of the results. For the evaluation of the cytotoxicity was used the method colorimeter 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)2,5-difenil tetrazoilium bromide (MTT) described by MOSMANN (1983), being used cellular lineages of HepG2 (Human Epidermoide Câncer Cells) and HaCaT. The samples had its behavior rheological characteristics. The analyze the release profile, skin permeation and retention were accomplished using cells of Franz modified. The microbiological was in agreement... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

This thesis examines how the rheological properties change depending on the composition of hyaluronan, HA and sodium hydroxide, NaOH. This was performed to see if there was any relationship between the rheological properties of a sample depending on different compositions of HA and NaOH. Moreover, the fluidity of the samples was studied by investigating . Five concentrations of HA (11, 18, 20, 25, 33 wt%) were investigated with six concentrations of NaOH (0, 1, 2, 4, 6, 8 wt%). Rheology was used to determine rheological properties of the composition and the rheometric data was obtained from three different measurements: time sweep, frequency sweep and amplitude sweep. G', G'' andwere investigated but no clear correlation was found. However, some patterns were detected for frequency sweep and amplitude sweep. The graphs generally followed the same shape and the compositions with 11% HA generally had the lowest G' and G'' values. Additionally, the majority of the samples, that could be measured, could be defined as fluids, due to  being higher than 1.

A hepatopatia da fibrose cística (FC) é uma complicação grave sendo descrita como terceira causa de morte nestes pacientes. Sua prevalência é muito variável, desde 14,3% até 41% em crianças e adolescentes. A discrepância entre os diferentes estudos clínicos se deve à forma utilizada para o diagnóstico da hepatopatia (características clínicas, bioquímicas e/ou ultra-sonográficas), à idade dos pacientes selecionados, ao tipo de estudo empregado (transversal ou longitudinal) e também, à falta de um marcador específico e sensível de disfunção hepatobiliar. Em 1995, Williams et al, elaboraram um escore ultra-sonográfico que mostrou boa relação com as alterações laboratoriais hepáticas pretendendo, desta forma, graduar o nível da lesão hepática. O escore foi elaborado por meio da avaliação do padrão do parênquima hepático, do contorno do fígado e do grau de ecogenicidade periportal. Quanto aos marcadores não invasivos para diagnosticar a doença hepática, vários tem sido estudados, entre eles o ácido hialurônico (AH).O AH é o maior mucopolissacarídeo componente da matriz extracelular, é encontrado na maioria dos tecidos e fluidos corporais, particularmente abundante em tecido conectivo frouxo. É sintetizado na membrana citoplasmática de fibroblastos e de outras células, sendo que uma pequena parte é metabolizada neste local. Através dos vasos linfáticos chega à corrente sanguínea e é rapidamente eliminada pelo fígado, ao nível do sinusóide hepático. Neste estudo buscamos relacionar as alterações ultra-sonográficas com o nível sérico de AH e, desta forma, realizar o diagnóstico precoce da hepatopatia da FC. Foi realizado um estudo transversal em 57 pacientes com FC, todos caucasóides, que apresentavam uma média de idade de 10,2 + 4,9 anos. A avaliação constou de dados clínicos, laboratoriais e ultra-sonográficos. Os pacientes foram classificados de acordo com um escore ultra-sonográfico em:Grupo 1 (G1) – ausência de doença hepática: escore 3; - Grupo 2 (G2) – doença hepática moderada: escore 4 – 6; - Grupo 3 (G3) – doença hepática grave: escore 7 - 9. O nível sérico do ácido hialurônico foi medido através da técnica de ELISA (Enzyme Linked Immunoassay) e comparado com 23 controles saudáveis. Vinte e nove pacientes foram incluídos no G1, dezoito pacientes no G2 e dez pacientes no G3. Os pacientes do sexo masculino apresentaram escore ultra-sonográfico mais alterado (P= 0,018). O nível sérico da ALT e da AST foram consideravelmente mais elevados no G3 do que no G1. O nível sérico da GGT foi mais elevado no G3 do que no G1 e G2. A porcentagem do volume expiratório forçado no primeiro segundo (%VEF1) apresentou uma correlação positiva fraca com o escore Z P/I (r= 0,31/P= 0,031). O nível sérico de AH variou de 1,8 a 45 ng/mL (mediana= 13,9), apresentou uma mediana semelhante entre os grupos 1,2,3 e o grupo controle (P= 0,431), entre os grupos 1,2 e 3 (P= 0,24) e também, quando comparado cada grupo com o grupo controle (todos P> 0,1). Não houve correlação entre o nível sérico de AH e o escore ultra-sonográfico (P= 0,164). Desta forma, concluímos que o AH isoladamente não se mostrou um marcador da hepatopatia causada pela fibrose cística. / Cystic fibrosis (CF) liver disease (LD) is a serious complication, being described as the third cause of death in these patients. Its prevalence varies widely, from 14.3% to 41.0% in children and adolescents. The discrepancy shown by the various clinical studies is due to the method employed for the diagnosis of LD (clinical, biochemical and/or ultrasonographic characteristics), the age of selected patients, the type of study (crosssectional or longitudinal) and the absence of a specific and sensitive marker. In 1995, WILLIAMS et al, developed an ultrasonographic score that showed a good relation to liver biochemical alterations, in order to measure the liver involvement. The score was elaborated through an evaluation of three cardinal features of hepatic ultrasound in CF: coarseness of the parenchyma, nodularity of the liver edge and increased periportal echogenicity. Regarding non-invasive markers to diagnose the hepatic disease, several have been studied, among them the hyaluronic acid (HA). Hyaluronic acid is a major mucopolysaccharide in the extracellular matrix, found in most body tissues and fluids, particularly abundant in loose connective tissue. It is synthetized in the cytoplasmatic membrane of fibroblasts and other cells, with a small part being metabolized there. Through the lymph vessels, it reaches the bloodstream and is rapidly eliminated by the liver, at the hepatic sinusoid level. In this study, we attempted to correlate the ultrasound findings with HA serum level, and thus, obtain the early diagnosis of CFLD. A cross-sectional study was performed with 57 patients with CF, all white individuals presenting mean age of 10.2 + 4.9 years. The evaluation considered clinical, laboratorial and ultrasonographic data. The patients were classified according to an ultrasonographic score into: - Group 1 (G1) – absence of liver disease: score 3- Group 2 (G2) – moderate liver disease: score 4 – 6; - Group 3 (G3) – severe liver disease: score 7 - 9. HA serum level was measured by ELISA (Enzyme Linked Immunoassay) in the CF patients and 23 healthy controls. Twenty-nine patients were included in G1, 18 in G2 and 10 in G3. The male patients presented an ultrasonographic score with more alterations (P= 0,018). The serum levels of ALT and AST in G3 were considerably higher than in G1. The serum level of GGT in G3 was higher than in G1 and G2. The percent of forced expiratory volume in the first second (%FEV1) presented a small positive correlation with Z score W/A (r= 0.31/P= 0.031). HA serum level ranged from 1.8 to 45 ng/mL (mean = 13.9), and presented a similar mean value between Groups 1,2,3 and the control group (P= 0.431), among Groups 1,2 and 3 (P= 0.24), as well as when comparing each group to the control group (all P> 0.1). There was no correlation between HA serum level and ultrasonographic score (P= 0.164). Thus, we concluded that HA lonely cannot be considered as a marker of liver disease caused by cystic fibrosis.

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:46Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-08-26 / Objetivo: esse estudo tem o objetivo de analisar comparativamente a concentração de ácido hialurônico em pregas vocais de ratas fêmeas, idosas e jovens, e em ratos machos jovens. Método: foram utilizadas pregas vocais de 13 ratas e 10 ratos, divididos em 3 grupos: 5 ratas fêmeas idosas, 8 ratas fêmeas jovens e 10 ratos machos jovens. A concentração tecidual do ácido hialurônico foi determinada por fluorescência. Resultado: foram encontradas as seguintes concentrações de ácido hialurônico em pregas vocais de acordo com os grupos: 581,67 ng/mg em ratas idosas, 1275,64 ng/mg em ratas jovens e 999,39 ng/mg em ratos machos jovens. A análise estatística mostrou diferença entre o grupo de ratas idosas e os grupos ratas jovens e ratos jovens. Conclusão: a prega vocal das ratas idosas possui uma concentração de ácido hialurônico menor que a concentração da prega vocal das ratas e dos ratos jovens. / Objective: this study analyzes hyaluronic acid concentration in vocal folds of adult rats comparing old female, young female and young male groups. Method: 13 female and 10 male rats were used divided in tree groups: 5 old female rats, 8 young female rats and 10 male young rats. The hyaluronic acid concentration was determined by fluorescence. Results: the following hyaluronic acid concentration by groups were found: 581,67 ng/mg in old female rats, 1275,64 ng/mg in young female rats and 999,39 ng/mg in young male rats. Statistical analysis showed difference among the old female group and the others young groups. Conclusions: the old female vocal fold has less hyaluronic acid concentration than the vocal fold of young male and female rats. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Orientadora: Profa. Dra. Christiane Bertachini Lombello / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do ABC, Programa de Pós-Graduação em Engenharia Biomédica, 2014. / A engenharia de tecidos envolve o desenvolvimento de novos materiais ou dispositivos capazes de interações específicas com os tecidos biológicos, buscando a utilização de materiais biocompatíveis que devem servir como arcabouço para o crescimento de células in vitro, organizando e desenvolvendo o tecido que posteriormente será implantado no paciente. Uma variedade de arcabouços como hidrogéis e polímeros, sintéticos e naturais, têm sido investigados para a expansão de condrócitos in vitro, visando o reparo da cartilagem lesionada. Uma molécula de interesse particular na regeneração de cartilagem é o ácido hialurónico (AH). Trata-se de um biopolímero atraente para a fabricação de arcabouços artificiais para engenharia de tecidos por ser biocompatível e biodegradável. A biocompatibilidade do AH deve-se ao fato de estar presente na matriz extracelular nativa, deste modo, cria-se um ambiente propício que facilita a adesão, proliferação e diferenciação celular, para além da existência de sinalização celular específica, o que contribui para a regeneração do tecido. O uso de hidrogel composto de ácido hialurónico e quitosana (QUI) também tem sido investigado em aplicações de engenharia de tecidos de cartilagem, com resultados promissores. A utilização da QUI visa a aprimorar as propriedades mecânicas do AH, para uma proposição futura de aplicação clínica na regeneração da cartilagem articular. Baseando-se nestas informações, este trabalho visa avaliar inicialmente os aspectos da interação celular com biomaterial polimérico a base de AH em blendas com QUI. A abordagem da hipótese levantada envolve a síntese e análises de intumescimento e degradação da blenda polimérica; a inoculação de células no biomaterial; análises de citotoxicidade, adesão, proliferação e morfologia celular sobre a blenda. O ensaio de intumescimento demonstrou a capacidade hidrofílica da blenda, o que resultou em um aumento de 300 % de sua massa inicial após 24 horas de imersão em solução aquosa. Os dados de degradação permitiram a previsão do comportamento das amostras de blenda em PBS em até 30 dias, mostrando que tais amostras apresentam boa estabilidade em PBS, apresentando praticamente nenhuma perda de massa (3 %) no período analisado. A avaliação da citotoxicidade mostrou que os biomateriais, incluindo o AH, a QUI e a blenda, não foram citotóxicos para células Vero. Com a análise quantitativa realizada com o MTT pode-se verificar uma viabilidade celular de 98 % para a blenda, confirmando assim a sua não citotoxicidade. Os ensaios de microscopia de luz e eletrônica das células cultivadas sobre a blenda demonstraram adesão, espalhamento e proliferação celular sobre este biomaterial, diferenciados do padrão controle das células. Com isto, pode-se inferir que a blenda produzida a partir de AH e QUI é um hidrogel promissor para aplicações em Engenharia de Tecido, objetivando futuramente o tecido cartilaginoso. / Tissue engineering involves the development of new materials or devices capable of specific interactions with biological tissues, searching the use of biocompatible materials as scaffolds for cell growth in vitro, organizing and developing tissue that is subsequently implanted into patient. A variety of scaffolds such as polymeric hydrogels, natural and synthetic, have been investigated for the expansion of chondrocytes in vitro in order to repair the damaged cartilage. An hydrogel of particular interest in cartilage regeneration is hyaluronic acid (HA). HA are attractive biopolymers for manufacturing artificial scaffolds for tissue engineering it is biocompatible and biodegradable. The biocompatibility of HA is due to the fact that it is present in native extracellular matrix, thus creates an environment, which facilitates the adhesion, proliferation and differentiation, in addition to the existence of specific cell signaling, which contribute to tissue regeneration. The use of hydrogel composed of hyaluronic acid and chitosan has also been investigated for applications in tissue engineering of soft tissues, like cartilage, with promising results. The use of chitosan aims to improve the mechanical properties of HA. Based on this information, this study aims to evaluate initial aspects of cell interaction with the polymeric biomaterials based on hyaluronic acid in blends with chitosan. The approach to hypothesis involves synthesis and analysis of swelling and degradation of the polymer blend; inoculation of cells on the biomaterial; analysis of cytotoxicity, adhesion and cell morphology on the blend. The swelling assay demonstrated hydrophilicity of the blend, resulting in an increase of 300 % of its initial weight after 24 hours of immersion in aqueous solution. The degradation data allowed the prediction of the behavior of the samples blend in PBS for up to 30 days, showing that these samples had good stability in PBS, with practically no weigth loss (3 %) in the period analyzed. The evaluation of cytotoxicity showed that the biomaterials, including hyaluronic acid, chitosan and the blends, were non cytotoxic for Vero cells. The quantitative analysis performed with the MTT can verify a cell viability of 98 % for the blend, thus confirming its not cytotoxicity. The experiments of light and electron microscopy of .cultured cells on the blend showed adhesion, spreading and proliferation on this biomaterial, distinguished from the pattern of the control cells. These results showed that the blends produced from CHI and HA hydrogels are promising for applications in tissue engineering, aiming at future cartilaginous tissue.

A hepatopatia da fibrose cística (FC) é uma complicação grave sendo descrita como terceira causa de morte nestes pacientes. Sua prevalência é muito variável, desde 14,3% até 41% em crianças e adolescentes. A discrepância entre os diferentes estudos clínicos se deve à forma utilizada para o diagnóstico da hepatopatia (características clínicas, bioquímicas e/ou ultra-sonográficas), à idade dos pacientes selecionados, ao tipo de estudo empregado (transversal ou longitudinal) e também, à falta de um marcador específico e sensível de disfunção hepatobiliar. Em 1995, Williams et al, elaboraram um escore ultra-sonográfico que mostrou boa relação com as alterações laboratoriais hepáticas pretendendo, desta forma, graduar o nível da lesão hepática. O escore foi elaborado por meio da avaliação do padrão do parênquima hepático, do contorno do fígado e do grau de ecogenicidade periportal. Quanto aos marcadores não invasivos para diagnosticar a doença hepática, vários tem sido estudados, entre eles o ácido hialurônico (AH).O AH é o maior mucopolissacarídeo componente da matriz extracelular, é encontrado na maioria dos tecidos e fluidos corporais, particularmente abundante em tecido conectivo frouxo. É sintetizado na membrana citoplasmática de fibroblastos e de outras células, sendo que uma pequena parte é metabolizada neste local. Através dos vasos linfáticos chega à corrente sanguínea e é rapidamente eliminada pelo fígado, ao nível do sinusóide hepático. Neste estudo buscamos relacionar as alterações ultra-sonográficas com o nível sérico de AH e, desta forma, realizar o diagnóstico precoce da hepatopatia da FC. Foi realizado um estudo transversal em 57 pacientes com FC, todos caucasóides, que apresentavam uma média de idade de 10,2 + 4,9 anos. A avaliação constou de dados clínicos, laboratoriais e ultra-sonográficos. Os pacientes foram classificados de acordo com um escore ultra-sonográfico em:Grupo 1 (G1) – ausência de doença hepática: escore 3; - Grupo 2 (G2) – doença hepática moderada: escore 4 – 6; - Grupo 3 (G3) – doença hepática grave: escore 7 - 9. O nível sérico do ácido hialurônico foi medido através da técnica de ELISA (Enzyme Linked Immunoassay) e comparado com 23 controles saudáveis. Vinte e nove pacientes foram incluídos no G1, dezoito pacientes no G2 e dez pacientes no G3. Os pacientes do sexo masculino apresentaram escore ultra-sonográfico mais alterado (P= 0,018). O nível sérico da ALT e da AST foram consideravelmente mais elevados no G3 do que no G1. O nível sérico da GGT foi mais elevado no G3 do que no G1 e G2. A porcentagem do volume expiratório forçado no primeiro segundo (%VEF1) apresentou uma correlação positiva fraca com o escore Z P/I (r= 0,31/P= 0,031). O nível sérico de AH variou de 1,8 a 45 ng/mL (mediana= 13,9), apresentou uma mediana semelhante entre os grupos 1,2,3 e o grupo controle (P= 0,431), entre os grupos 1,2 e 3 (P= 0,24) e também, quando comparado cada grupo com o grupo controle (todos P> 0,1). Não houve correlação entre o nível sérico de AH e o escore ultra-sonográfico (P= 0,164). Desta forma, concluímos que o AH isoladamente não se mostrou um marcador da hepatopatia causada pela fibrose cística. / Cystic fibrosis (CF) liver disease (LD) is a serious complication, being described as the third cause of death in these patients. Its prevalence varies widely, from 14.3% to 41.0% in children and adolescents. The discrepancy shown by the various clinical studies is due to the method employed for the diagnosis of LD (clinical, biochemical and/or ultrasonographic characteristics), the age of selected patients, the type of study (crosssectional or longitudinal) and the absence of a specific and sensitive marker. In 1995, WILLIAMS et al, developed an ultrasonographic score that showed a good relation to liver biochemical alterations, in order to measure the liver involvement. The score was elaborated through an evaluation of three cardinal features of hepatic ultrasound in CF: coarseness of the parenchyma, nodularity of the liver edge and increased periportal echogenicity. Regarding non-invasive markers to diagnose the hepatic disease, several have been studied, among them the hyaluronic acid (HA). Hyaluronic acid is a major mucopolysaccharide in the extracellular matrix, found in most body tissues and fluids, particularly abundant in loose connective tissue. It is synthetized in the cytoplasmatic membrane of fibroblasts and other cells, with a small part being metabolized there. Through the lymph vessels, it reaches the bloodstream and is rapidly eliminated by the liver, at the hepatic sinusoid level. In this study, we attempted to correlate the ultrasound findings with HA serum level, and thus, obtain the early diagnosis of CFLD. A cross-sectional study was performed with 57 patients with CF, all white individuals presenting mean age of 10.2 + 4.9 years. The evaluation considered clinical, laboratorial and ultrasonographic data. The patients were classified according to an ultrasonographic score into: - Group 1 (G1) – absence of liver disease: score 3- Group 2 (G2) – moderate liver disease: score 4 – 6; - Group 3 (G3) – severe liver disease: score 7 - 9. HA serum level was measured by ELISA (Enzyme Linked Immunoassay) in the CF patients and 23 healthy controls. Twenty-nine patients were included in G1, 18 in G2 and 10 in G3. The male patients presented an ultrasonographic score with more alterations (P= 0,018). The serum levels of ALT and AST in G3 were considerably higher than in G1. The serum level of GGT in G3 was higher than in G1 and G2. The percent of forced expiratory volume in the first second (%FEV1) presented a small positive correlation with Z score W/A (r= 0.31/P= 0.031). HA serum level ranged from 1.8 to 45 ng/mL (mean = 13.9), and presented a similar mean value between Groups 1,2,3 and the control group (P= 0.431), among Groups 1,2 and 3 (P= 0.24), as well as when comparing each group to the control group (all P> 0.1). There was no correlation between HA serum level and ultrasonographic score (P= 0.164). Thus, we concluded that HA lonely cannot be considered as a marker of liver disease caused by cystic fibrosis.

abstract: Traumatic brain injury (TBI) is a significant public health concern in the U.S., where approximately 1.7 million Americans sustain a TBI annually, an estimated 52,000 of which lead to death. Almost half (43%) of all TBI patients report experiencing long-term cognitive and/or motor dysfunction. These long-term deficits are largely due to the expansive biochemical injury that underlies the mechanical injury traditionally associated with TBI. Despite this, there are currently no clinically available therapies that directly address these underlying pathologies. Preclinical studies have looked at stem cell transplantation as a means to mitigate the effects of the biochemical injury with moderate success; however, transplants suffer very low retention and engraftment rates (2-4%). Therefore, transplants need better tools to dynamically respond to the injury microenvironment. One approach to develop new tools for stem cell transplants may be to look towards the endogenous repair response for inspiration. Specifically, activated cell types surrounding the injury secrete the chemokine stromal cell-derived factor-1α (SDF-1α), which has been shown to play a critical role in recruiting endogenous neural progenitor/stem cells (NPSCs) to the site of injury. Therefore, it was hypothesized that improving NPSC response to SDF-1α may be a viable mechanism for improving NPSC transplant retention and migration into the surrounding host tissue. To this end, work presented here has 1. identified critical extracellular signals that mediate the NPSC response to SDF-1α, 2. incorporated these findings into the development of a transplantation platform that increases NPSC responsiveness to SDF-1α and 3. observed increased NPSC responsiveness to local exogenous SDF-1α signaling following transplantation within our novel system. Future work will include studies investigating NSPC response to endogenous, injury-induced SDF-1α and the application of this work to understanding differences between stem cell sources and their implications in cell therapies. / Dissertation/Thesis / Doctoral Dissertation Bioengineering 2015

Submitted by Laryssa Kataki De Oliveira Veloso (laryssakataki@hotmail.com) on 2018-06-15T13:25:57Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO LARYSSA FINAL.pdf: 1251310 bytes, checksum: 43a08fca6a961ece3b6833de3671f737 (MD5) / Approved for entry into archive by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br) on 2018-06-18T20:28:55Z (GMT) No. of bitstreams: 1 veloso_lko_me_bot.pdf: 1251310 bytes, checksum: 43a08fca6a961ece3b6833de3671f737 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-18T20:28:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 veloso_lko_me_bot.pdf: 1251310 bytes, checksum: 43a08fca6a961ece3b6833de3671f737 (MD5) Previous issue date: 2018-05-30 / OBJETIVO: Avaliar a eficiência da injeção de ácido hialurônico (AH) ou de soro fisiológico (SF), aplicados no subcutâneo da pálpebra inferior de portadores de ectrópio cicatricial, visando à correção não cirúrgica do mal posicionamento palpebral. MÉTODOS: este foi um estudo prospectivo, intervencionista, envolvendo 23 pálpebras de 15 portadores de ectrópio cicatricial, divididos aleatoriamente em dois grupos: G1 (13 pálpebras) no qual foram feitas quatro aplicações de 4ml de SF (Cloreto de Sódio 0,9%, Equiplex, Goiás, Brasil), associado a 1ml de cloridrato de lidocaína a 2,0% sem vasoconstritor (Xylestesin®, Cristália, São Paulo, Brasil), em intervalos de uma semana entre as aplicações; e G2 (10 pálpebras) que receberam aplicação de 1 ml de AH (Restylane® Lidocaine, Q med, Uppsala, Suécia) em aplicação única. Foram avaliadas as variáveis demográficas dos participantes, as queixas, o grau do ectrópio, o grau de flacidez palpebral, a localização do ectrópio, além de avaliações quantitativas realizadas utilizando-se a fotodocumentação sistematizada dos olhos dos pacientes, 30 dias após a primeira aplicação no G1 e 7 e 30 dias após as aplicações do G2. As imagens obtidas foram transferidas para um computador e avaliadas utilizando-se o programa Image J, avaliando-se a distância da pálpebra inferior até o reflexo corneano (DMR2), distância limbo-margem (LM), ângulo da comissura interna (AI) e externa (AE), área total (AT), lateral (AL) e medial (AM). As áreas a serem avaliadas foram delimitadas por uma linha que une as duas comissuras e outra linha que coincide com a margem da pálpebra inferior. As avaliações foram feitas sem tração e com tração da pálpebra inferior para baixo. Todos os dados foram transferidos para a planilha Excel, sendo realizada a análise comparativa antes e após as aplicações nos dois grupos. RESULTADOS: Os grupos foram semelhantes quanto a idade, sexo, cor da pele e grau do ectrópio. Houve melhora signficativa dos sintomas nos indivíduos de G2 após a aplicação de AH. Apos a injeção, o G1 apresentou redução significativa de AI com e sem tração, AE com tração, LM sem tração e AM com tração. No G2, após as injeções as medidas AI sem tração, AE, DMR2, AT e AM com e sem tração, LM e AL com tração apresentaram alterações significativas (p<0,05). A comparação das medidas realizadas no G2 após sete e 30 dias mostrou estabilidade dos resultados obtidos com a injeção de AH. CONCLUSÃO: A aplicação de AH na pálpebra inferior de portadores de ectrópio cicatricial mostrou melhora parcial do mal posicionamento palpebral. A aplicação de SF não foi efetiva no tratamento do ectrópio cicatricial. / PURPOSE: Evaluate the efficiency of injection of hyaluronic acid (HA) or saline solution (SF) applied to the lower eyelid subcutaneous, aiming at the non-surgical correction of cicatricial ectropion. METHODS: This was a prospective study involving 23 eyelids of 15 patients with cicatricial ectropion, randomly divided into two groups: G1 (13 eyelids) with four applications of 4ml of SF (Sodium Chloride 0.9%, Equiplex, Goiás , Brazil), associated to 1ml of lidocaine hydrochloride 2% without vasoconstrictor (Xylestesin®, Cristália, São Paulo, Brazil), with a one-week interval between applications; and G2 (10 eyelids) which received single application of 1 ml of AH (Restylane® Lidocaine, Q med, Uppsala, Sweden). Demographic variables, complaints, ectropion degree, eyelid flaccidity degree, ectropion location, and quantitative assessments using the systematized photodocumentation of patients eyelids 30 days after the first application in G1 and 7 and 30 days after applications in G2 were studied. The images were transferred to a computer and evaluated using the Image J program and the distance between the lower eyelid margin to corneal reflex (DMR2), limbus margin distance (LM), internal angle (IA) and external angle (EA), total (TA), lateral (LA) and medial areas (MA) were analyzed. The area measurements were delimited by a line between the two commissures and along the lid margin of the lower eyelid. The evaluations were done without traction and with traction downward of the lower eyelid. All data were transferred to the Excel spreadsheet and comparative analysis was performed before and after the applications in the two groups. RESULTS The groups were similar according to age, sex, skin color and degree of ectropion. There was a significant improvement in G2 individuals after the application of AH. After injections G1 presented a significant reduction of AI with and without traction, EA with traction, LM without traction and AM with traction. The G2 after injections showed AI measurements without traction, EA, DMR2, TA and MA with and without traction, LM and LA with traction with significant alterations (p <0.05). The comparison of the G2 measurements obtained after 7 and 30 days showed stability of the results obtained with the AH injection. CONCLUSION: The application of AH in the lower eyelid of patients with cicatricial ectropion resulted in partial improvement of palpebral malposition. The application of SF was not effective in the treatment of cicatricial ectropion.

Diversos experimentos em humanos e equinos discutem a eficácia do uso intra-articular do ácido hialurônico (AH). Pouco se sabe a respeito de seu potencial pró ou anti-inflamatório, bem como sobre a eficácia das moléculas de AH de diferentes pesos moleculares. O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos anti-inflamatórios, anabólicos e antioxidantes da aplicação intra-articular de AH em sinovite aguda induzida por lipopolissacarídeo (LPS) em equinos. Foram utilizadas 24 articulações metacarpofalangeanas hígidas de 12 equinos jovens, avaliadas por exame físico, radiográfico e ultrassonográfico. As articulações foram divididas aleatoriamente em três grupos de oito, sendo o grupo controle tratado com triancinolona (TA) (10 mg), o grupo AH de baixo peso molecular (AH-BPM), e o grupo AH de alto peso molecular (AH-APM). Inicialmente, foram aplicados 0,25 ng de LPS por via intra-articular (momento 0). Após uma hora (momento 1), coletou-se líquido sinovial (LS) para contagem celular e imediatamente após realizado o tratamento com TA, AH-BPM ou AH-APM. Posteriormente, LS foi coletado nos momentos 8, 24 e 48 horas para contagem celular, avaliação do burst oxidativo, quantificação de prostaglandina E2 (PGE2), condroitim sulfato (CS), AH e mensuração do peso molecular do AH. Exame físico dos animais, incluindo mensuração da circunferência articular e avaliação de claudicação por meio do equipamento Lameness Locator&reg; foi realizado em todos os momentos. As frequências cardíaca e respiratória dos animais aumentaram em todos os grupos às 8 horas (P&lt;0,05), sendo menor no grupo TA. Em relação à circunferência articular o grupo AH-BPM apresentou maior aumento às 24 e 48 horas em relação aos outros grupos (p&lt;0,05). O grau de claudicação do grupo AHAPM foi maior que o do grupo TA às 8 e 24 horas, mas similar ao grupo AH-BPM. O grupo TA apresentou maior quantidade de células nucleadas no LS do que o grupo AH-BPM as 24 e 28 horas e do que o grupo AH-APM às 48 horas. A concentração de PGE2 foi menor no grupo TA em relação ao grupo AH-APM às 8 horas, e a ambos os grupos que receberam AH às 48 horas (p&lt;0,05). O grupo AH-APM mostrou maior concentração de AH às 8 horas do que os outros grupos, contudo às 48 horas o grupo TA mostrou maior concentração de AH do que os outros grupos (p&lt;0,05). Também às 48 horas o grupo TA foi o que apresentou a menor porcentagem de AH de alto peso molecular (p&lt;0,05). A maior concentração de CS no LS às 24 e 48 horas ocorreu no grupo TA, também observou-se o grupo TA foi o único em que a concentração de CS aumentou as 8 horas em relação aos valores basais. O grupo AH-APM foi o que apresentou menor concentração de CS às 8 horas (p&lt;0,05). O grupo tratado com AHBPM apresentou maior intensidade de fluorescência nos momentos 24 e 48 horas (p&lt;0,05). Apesar da triancinolona possuir efeito superior ao ácido hialurônico no controle da inflamação, ela possui efeito catabólico sobre a cartilagem articular, demonstrado pelo aumento da concentração de CS, além de quebra da molécula de AH no líquido sinovial. O AH-APM é mais indicado para terapia intra-articular em equinos uma vez que demonstrou menor efeito catabólico e oxidativo do que o AH-BPM / Several experiments have compared the efficacy of intra-articular usage of yaluronic acid (HA) within horses. Little is known about the effectiveness of different subtypes of HA in terms of its pro- and anti-inflammatory potential. The goal of this study was to investigate the anti-inflammatory, anabolic and antioxidant effects of intra-articular application of HA in acute synovitis induced by lipopolysaccharide (LPS) in horses. 24 metacarpophalangeal joints of 12 young horses without musculoskeletal alterations were subjected to lameness examination (Lameness Locator&reg;), radiography and ultrasound. These joints were divided into three groups: a positive control group treated with triamcinolone acetonide (TA) (10mg) and 2 experimental groups treated with either hyaluronic acid of low molecular weight (HALMW) or hyaluronic acid of high molecular weight (HA- HWM). Initially, all joints were injected with 0.25ng of LPS. After an hour, synovial fluid (SF) was collected for cell counting. TA, HA- HWM or HA- LMW treatments were then applied to the joints. After treatment applications, SF was collected at 3 different time points (8, 24 and 48 hours) for cell counts, oxidative burst evaluation, prostaglandin E2 (PGE2) quantification, chondroitin sulfate (CS), HA and molecular weight measurements. Physical examinations, circumference measurements and lameness evaluations were carried out at each time point. The heart and respiratory rate of the animals increased in all groups at 8 hours (p &lt;0.05), that increase was lower in the TA group. Regarding the circumference of the joint the HA-LMW group showed a greater increase at 24 and 48 hours compared to the other groups (p &lt;0.05). The lameness of the HA-HMW group was higher than the TA group at 8 and 24 hours, but similar to the HALMW group. The TA group had a higher nucleated cells count in the SF compared to the HALMW group at 24 hours and 28 hours, and higher than the HA-HMW group at 48 hours. The PGE2 concentration was lower in the TA group in relation to the HA-HMW group at 8 hours, and lower than both groups that received HA at 48 hours (p &lt;0.05). The HA-HMW group showed higher HA concentration at 8 hours than the other groups at 48 hours. However, the TA group showed higher HA concentration than the other groups (p &lt;0.05). Also, at 48 hours the TA group was the one with the lowest percentage of high molecular weight HA (p &lt;0.05). The highest concentration of CS in SF at 24 and 48 hours occurred in the TA group, and it was also observed in the TA group was the only one in which the concentration of CS increased at eight hours compared to baseline. The HA-HMW group showed the lowest concentration of CS at 8 hours (p &lt;0.05). The group treated with HA-LMW showed higher fluorescence intensity at 24 and 48 hours (p &lt;0.05). Although triamcinolone have an superior effect of hyaluronic acid in controlling inflammation, it has catabolic effects on cartilage, shown by increased concentration of CS, and breakage of the HA molecule in synovial fluid. The HA-HMW is recommended for intra-articular therapy in equine joints since it showed less oxidative and catabolic effects

A hepatopatia da fibrose cística (FC) é uma complicação grave sendo descrita como terceira causa de morte nestes pacientes. Sua prevalência é muito variável, desde 14,3% até 41% em crianças e adolescentes. A discrepância entre os diferentes estudos clínicos se deve à forma utilizada para o diagnóstico da hepatopatia (características clínicas, bioquímicas e/ou ultra-sonográficas), à idade dos pacientes selecionados, ao tipo de estudo empregado (transversal ou longitudinal) e também, à falta de um marcador específico e sensível de disfunção hepatobiliar. Em 1995, Williams et al, elaboraram um escore ultra-sonográfico que mostrou boa relação com as alterações laboratoriais hepáticas pretendendo, desta forma, graduar o nível da lesão hepática. O escore foi elaborado por meio da avaliação do padrão do parênquima hepático, do contorno do fígado e do grau de ecogenicidade periportal. Quanto aos marcadores não invasivos para diagnosticar a doença hepática, vários tem sido estudados, entre eles o ácido hialurônico (AH).O AH é o maior mucopolissacarídeo componente da matriz extracelular, é encontrado na maioria dos tecidos e fluidos corporais, particularmente abundante em tecido conectivo frouxo. É sintetizado na membrana citoplasmática de fibroblastos e de outras células, sendo que uma pequena parte é metabolizada neste local. Através dos vasos linfáticos chega à corrente sanguínea e é rapidamente eliminada pelo fígado, ao nível do sinusóide hepático. Neste estudo buscamos relacionar as alterações ultra-sonográficas com o nível sérico de AH e, desta forma, realizar o diagnóstico precoce da hepatopatia da FC. Foi realizado um estudo transversal em 57 pacientes com FC, todos caucasóides, que apresentavam uma média de idade de 10,2 + 4,9 anos. A avaliação constou de dados clínicos, laboratoriais e ultra-sonográficos. Os pacientes foram classificados de acordo com um escore ultra-sonográfico em:Grupo 1 (G1) – ausência de doença hepática: escore 3; - Grupo 2 (G2) – doença hepática moderada: escore 4 – 6; - Grupo 3 (G3) – doença hepática grave: escore 7 - 9. O nível sérico do ácido hialurônico foi medido através da técnica de ELISA (Enzyme Linked Immunoassay) e comparado com 23 controles saudáveis. Vinte e nove pacientes foram incluídos no G1, dezoito pacientes no G2 e dez pacientes no G3. Os pacientes do sexo masculino apresentaram escore ultra-sonográfico mais alterado (P= 0,018). O nível sérico da ALT e da AST foram consideravelmente mais elevados no G3 do que no G1. O nível sérico da GGT foi mais elevado no G3 do que no G1 e G2. A porcentagem do volume expiratório forçado no primeiro segundo (%VEF1) apresentou uma correlação positiva fraca com o escore Z P/I (r= 0,31/P= 0,031). O nível sérico de AH variou de 1,8 a 45 ng/mL (mediana= 13,9), apresentou uma mediana semelhante entre os grupos 1,2,3 e o grupo controle (P= 0,431), entre os grupos 1,2 e 3 (P= 0,24) e também, quando comparado cada grupo com o grupo controle (todos P> 0,1). Não houve correlação entre o nível sérico de AH e o escore ultra-sonográfico (P= 0,164). Desta forma, concluímos que o AH isoladamente não se mostrou um marcador da hepatopatia causada pela fibrose cística. / Cystic fibrosis (CF) liver disease (LD) is a serious complication, being described as the third cause of death in these patients. Its prevalence varies widely, from 14.3% to 41.0% in children and adolescents. The discrepancy shown by the various clinical studies is due to the method employed for the diagnosis of LD (clinical, biochemical and/or ultrasonographic characteristics), the age of selected patients, the type of study (crosssectional or longitudinal) and the absence of a specific and sensitive marker. In 1995, WILLIAMS et al, developed an ultrasonographic score that showed a good relation to liver biochemical alterations, in order to measure the liver involvement. The score was elaborated through an evaluation of three cardinal features of hepatic ultrasound in CF: coarseness of the parenchyma, nodularity of the liver edge and increased periportal echogenicity. Regarding non-invasive markers to diagnose the hepatic disease, several have been studied, among them the hyaluronic acid (HA). Hyaluronic acid is a major mucopolysaccharide in the extracellular matrix, found in most body tissues and fluids, particularly abundant in loose connective tissue. It is synthetized in the cytoplasmatic membrane of fibroblasts and other cells, with a small part being metabolized there. Through the lymph vessels, it reaches the bloodstream and is rapidly eliminated by the liver, at the hepatic sinusoid level. In this study, we attempted to correlate the ultrasound findings with HA serum level, and thus, obtain the early diagnosis of CFLD. A cross-sectional study was performed with 57 patients with CF, all white individuals presenting mean age of 10.2 + 4.9 years. The evaluation considered clinical, laboratorial and ultrasonographic data. The patients were classified according to an ultrasonographic score into: - Group 1 (G1) – absence of liver disease: score 3- Group 2 (G2) – moderate liver disease: score 4 – 6; - Group 3 (G3) – severe liver disease: score 7 - 9. HA serum level was measured by ELISA (Enzyme Linked Immunoassay) in the CF patients and 23 healthy controls. Twenty-nine patients were included in G1, 18 in G2 and 10 in G3. The male patients presented an ultrasonographic score with more alterations (P= 0,018). The serum levels of ALT and AST in G3 were considerably higher than in G1. The serum level of GGT in G3 was higher than in G1 and G2. The percent of forced expiratory volume in the first second (%FEV1) presented a small positive correlation with Z score W/A (r= 0.31/P= 0.031). HA serum level ranged from 1.8 to 45 ng/mL (mean = 13.9), and presented a similar mean value between Groups 1,2,3 and the control group (P= 0.431), among Groups 1,2 and 3 (P= 0.24), as well as when comparing each group to the control group (all P> 0.1). There was no correlation between HA serum level and ultrasonographic score (P= 0.164). Thus, we concluded that HA lonely cannot be considered as a marker of liver disease caused by cystic fibrosis.