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Validação de ensaio imunocromatográfico para a detecção múltipla de anticorpos específicos contra HIV, HBV e HCVSouza, Iury Oliveira 10 June 2013 (has links)
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Dissertação_ICS_Iury Souza.pdf: 1047267 bytes, checksum: 06bc8acdb629b7e8ae63feab201995ad (MD5) / CAPES / Cerca de 33,3 milhões de pessoas apresentam infecção pelo Human
Immunodeficiency Virus (HIV) no mundo; 180 milhões estão infectados pelo
Hepatitis C Virus HCV e estima-se que 360 milhões apresentem infecção ativa pelo
Hepatitis B Virus (HBV). Outra realidade mundial é a co-infecção entre esses vírus.
Os dados mostram a importância global dessas viroses e a urgência do
desenvolvimento de novos ensaios de diagnóstico sensíveis, específicos, rápidos e
de baixo custo, que possam atender à demanda de entidades públicas inseridas em
programas para prevenção e diagnostico dessas doenças. O presente trabalho
consiste em validação relativa de um novo teste imunocromatográfico desenvolvido
pela empresa canadense Medmira para detecção de anticorpos específicos contra
HIV, HCV e HBV. Os resultados encontrados foram extremamente favoráveis para a
detecção de anticorpos específicos para HIV, apresentando 98,6% de sensibilidade
e 100% de especificidade. Para o anti-HBV a sensibilidade e especificidade
encontradas foram de 90,0% e 98,6%, e de 86,3% e 100%, para anti-HCV,
respectivamente. Nenhuma reatividade cruzada foi encontrada e a reprodutibilidade
e repetitividade foram de 100%. O índice kappa e a acurácia global do teste foram
de 0,91 (0,88-0,94) e 95,5% (93,5-97,5), respectivamente. Conclui-se que o ensaio
imunocromatográfico é clinicamente útil em triagens rápidas para detecção de
anticorpos anti-HIV, HCV e HBV. / Salvador
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Detecção de antigeno criptocócico no liquido cefalorraquidiano por \201Clateral flow assay\201D em casos suspeitos de meningite no Estado do PiauiMendonça Filho, Carlos Alberto January 2015 (has links)
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Previous issue date: 2015 / Made available in DSpace on 2016-07-05T23:52:47Z (GMT). No. of bitstreams: 3
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Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Teresina, PI, Brasil / A criptococose é uma importante infecção fúngica, que causa um número estimado de 1 milhão de casos e 625 mil mortes por ano, principalmente sob a forma de meningoencefalite em pessoas com imunodeficiência no mundo. O diagnóstico da meningite criptocócica é realizado através de achados das estruturas do fungo em fluidos biológicos em pesquisa direta com tinta da china, cultivo, anatomopatológico, exames de imagem e pesquisa de antígeno criptocócico. Tem sido empregado um teste imunocromatográfico conhecido como CrAg-LFA para detecção do antígeno do polissacarídeo capsular de Cryptococcus spp., em amostras de soro, urina e no líquor, este método tem se tornado um dos testes sorológicos a ser realizado na rotina de investigação micológica para criptococose. OBJETIVO: estimar a frequência de detecção de antígeno criptocócico obtido por CrAg-LFA em amostras de líquido cefalorraquidiano de pacientes com suspeita de meningite em um hospital de referência do estado do Piauí. METODOLOGIA: os pacientes internados com suspeita de meningite realizaram coleta do líquor para exames de tinta da China e CrAg-LFA. Dados como sexo, idade, procedência e resultados laboratoriais foram inseridos em um banco estruturado, essas informações foram obtidas a partir do livro de registro do laboratório, prontuários dos pacientes e fichas de investigação do Sistema de Informação de Agravos de Notificação (SINAN)
RESULTADOS: Foram analisados os resultados de 140 pacientes atendidos no hospital de referência e que realizaram os exames de tinta da China e CrAg-LFA. Foi observado predomínio de Cryptococcus spp em pacientes do sexo masculino 10/19 (52,6%) e a faixa etária mais atingida foi de 22 a 45 anos 10/19 (52,6%). Observamos que em pessoas com infecção pelo HIV, a taxa de detecção de antígeno criptocócico no líquor foi de 6/15 (40%), em pacientes HIV-negativos esta taxa de positividade foi significativamente inferior e atingiu 13/125 (10,4%) (p = 0,007). Entre 14 pacientes positivos com Tinta da China, todos foram positivos ao CrAg-LFA, apontando para sensibilidade de 100%. Do total de 140 pacientes do estudo 19 foram positivos sendo 14 positivos para tinta da China e CrAg-LFA, e 5 apresentaram positividade apenas para o CrAg-LFA. CONCLUSÃO: na amostra estudada o CrAg-LFA mostrou ser mais sensível que a tinta da China / Cryptococcosis is an important fungal infection causing an estimated 1 million cases and 625 thousand deaths per year, primarily in the form of encephalitis in immunodeficient individuals. Diagnosis of cryptococcal meningitis is performed by detection of fungal structures in biological fluids in detection with India ink staining, culture, pathology, imaging and cryptococcal antigen testing. An immunoassay known as Crag-LFA for the detection of capsular polysaccharide antigens of Cryptococcus spp. in has been employed, serum samples, urine and spinal fluid, this method is becoming one of the serological tests to be carried out in routine mycological research for cryptococcosis. OBJECTIVE: To estimate the frequency of cryptococcal antigen detection obtained by Crag-LFA in cerebrospinal fluid samples from patients with suspected meningitis in a reference hospital of the state of Piauí. METHODS: Patients hospitalized with suspected meningitis held collection of CSF for India ink staining and Crag-LFA testing. Data such as gender, age, origin and laboratory results were entered into a structured database. Information was obtained from the laboratory log book, patient charts and records of investigation of the Information System of Diseases Notification (SINAN) RESULTS: A total of 140 patient were analyzed and treated at the hospital and underwent India ink staining and Crag-LFA testing
We observed a prevalence of Cryptococcus spp. in male patients 10/19 (52.6%) and the most affected age group was 22 to 45 years old 10/19 (52.6%). We noted that in patients with HIV infection, detection of cryptococcal antigen in the cerebrospinal fluid was 6/15 (40%) in HIV-negative patients this positivity rate was significantly lower and reached 13/125 (10.4% ) (p = 0.007). Among 14 positive patients with India ink staining, all were positive for Crag-LFA detection, pointing sensitivity of 100%. Of the total of 140 patients in the study 19 and 14 were positive for India ink and Crag-LFA, respectively. Five patients were positive only for Crag-LFA detection. CONCLUSION: in the studied sample Crag-LFA proved to be more sensitive than India ink
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Avaliacao de diferentes abordagens para o diagnostico da leishmaniose visceral humanaAssis, Talia Santana Machado de January 2012 (has links)
Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2012-08-21T18:19:33Z
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Tese_versao_final_Tália.pdf: 1946064 bytes, checksum: 3f43e249b71311bf82e36d76fdcdf61d (MD5) / Made available in DSpace on 2012-08-21T18:19:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1
Tese_versao_final_Tália.pdf: 1946064 bytes, checksum: 3f43e249b71311bf82e36d76fdcdf61d (MD5) / A leishmaniose visceral (LV) e uma doenca parasitaria grave que afeta anualmente 500.000 pessoas em 65 paises. No Brasil, mais de 15.000 casos de LV foram registrados entre os anos de 2007 e 2010, com 880 mortes. Esta elevada taxa de letalidade esta, em parte, relacionada a ineficiencia dos servicos de saude em diagnosticar e tratar precocemente os pacientes. O diagnostico da LV exige suspeicao clinica e confirmacao laboratorial eficientes. Assim, uma reestruturacao do algoritmo e do arsenal de metodos diagnosticos disponiveis nos servicos de saude pode ajudar a melhorar este cenario, aumentando o acesso e a disponibilizacao de testes nos municipios. O objetivo deste estudo foi avaliar o desempenho de diferentes abordagens para o diagnostico da LV humana no Brasil, atraves da avaliacao do desempenho do teste de aglutinacao direta (DAT) e do teste rapido IT-LEISH; do desenvolvimento e validacao de modelos preditivos clinico-laboratoriais e da avaliacao de metodos diagnosticos pela analise de classes latentes (ACL). O grupo de estudo compreendeu 404 pacientes, residentes no Piaui, Maranhao, Bahia e Minas Gerais, com suspeita de LV, submetidos ao exame do aspirado de medula ossea e a coleta de sangue para a realizacao dos testes sorologicos. Para a avaliacao do desempenho do DAT e do IT-LEISHR foi utilizada a analise de validacao classica (AVC) utilizando como padrao de referencia o exame do aspirado de medula ossea. Para o desenvolvimento e a validacao dos modelos preditivos foram utilizados dados epidemiologicos, clinicos e laboratoriais dos pacientes avaliados. Os modelos preditivos utilizando regressao logistica multipla (RLM) foram desenvolvidos no software STATAR e aqueles utilizando arvore de classificacao e regressao (CART) foram desenvolvidos no software SPLUSR. Para a avaliacao da aplicabilidade da ACL foram utilizados dados do estudo de validacao do IT-LEISHR e do DAT e a analise foi realizada no software R. O DAT e o IT-LEISH apresentaram, pela AVC, sensibilidades e especificidades de 90 e 93%; 93 e 97%, respectivamente. O modelo preditivo composto pelas variaveis clinicas e laboratoriais associadas ao teste rapido foi o que apresentou melhor desempenho, tanto pela RLM, quanto por CART (sensibilidade de 90,1% e especificidade de 97,2-97,4%). A ACL mostrou-se util
na validacao de testes diagnosticos para LV no Brasil, estimando para o DAT e o IT-LEISH sensibilidades de 88,5 e 94% e especificidades de 95,4 e 100%, respectivamente. Diante do elevado desempenho apresentado, o DAT e o teste rapido IT-LEISH estao indicados para o diagnostico da LV humana no Brasil. Os modelos preditivos desenvolvidos sao uteis e poderiam ser utilizados em centros de referencia para a doenca no pais. A ACL esta indicada para validacao de testes diagnosticos no pais e quando possivel deve ser utilizada. / Visceral leishmaniasis (VL) is a severe parasitic disease that affects 500 000 people yearly in approximately 65 countries. In Brazil, more than 15.000 VL cases were reported between 2007 and 2010, with 880 deaths. This high fatality rate is partly related to the inefficiency of health services to diagnose and treat early patients. The diagnosis of VL requires effective clinical suspicion and laboratory confirmation. Thus, a restructuring of the algorithm and the arsenal of available diagnostic methods in health services can help improve this scenario, by
increasing the access and availability of tests in the municipalities. The objective of this study was to evaluate the performance of several approaches for the diagnosis of human VL in Brazil, through of evaluation of performance of DAT and rapid test IT-LEISH; of developing and validating of predictive models and of evaluation of diagnostic methods by
the latent class analysis (LCA). The study group was composed by 404 patients, from the
states of Piaui, Maranhao, Bahia and Minas Gerais, with suggestive clinical of VL, submitted to the examination of bone marrow aspirate and blood collection for the performance of serological tests. To evaluate the performance of the DAT and the rapid test IT-LEISHR was used the classic validation analysis, using as reference standard the examination of bone marrow aspirate. To develop and validate the predictive models were used epidemiological,
clinical and laboratory data of the patients. The predictive models using logistic regression were developed in STATAR software and those using classification and regression tree (CART) were developed in the software SPLUSR. To evaluate the applicability of the LCA were used data from the validation study of the rapid test IT-LEISHR and the DAT and the analysis was performed in software R. The DAT and the rapid test IT-LEISHR showed, by the
classic validation analysis, sensitivities and specificities of 90 and 93%, 93 and 97%
respectively. The predictive model composed of clinical-laboratory variables and rapid test IT-LEISHR developed using both logistic regression and the model CART showed the best
performance (sensitivity 90.1% and a specificity of 97.2 to 97.4%). The LCA proved to be a useful tool for the validation of diagnostic methods for human VL in Brazil, estimating for the
DAT and the rapid test IT-LEISHR sensitivities of 88.5 and 94% and specificities of 95.4 and 100% respectively. The DAT and the rapid test IT-LEISHR showed high performance and are indicated for the diagnosis of VL in Brazil. The predictive models developed are useful and could be used in reference centers for VL in the country. The LCA is indicated for validation
of diagnostic tests in Brazil and when possible should be used.
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Avaliação da utilização de ensaio imunocromatográfico para o diagnóstico e estudo de prevalência da hepatite ARibeiro, Camilla Rodrigues de Almeida January 2016 (has links)
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Previous issue date: 2016-06-14 / Made available in DSpace on 2016-07-05T23:56:05Z (GMT). No. of bitstreams: 3
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Previous issue date: 2016-06-14 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / O diagnóstico da infecção pelo vírus da hepatite A (HAV) através de testes de alta sensibilidade e especificidade pode levar um diagnóstico mais precoce e mais preciso, melhorando o prognóstico da doença. Deve também ser mencionado que um diagnóstico mais preciso pode tornar estudos epidemiológicos mais confiáveis e servir de base para a produção de programas de controle e erradicação mais efetivos. O objetivo deste estudo foi avaliar a utilização de um teste imunocromatográfico em surtos e estudos epidemiológicos de prevalência, triagem de candidatos para programas de vacinação e detecção de resposta imunológica pós-vacinação. Para este fim, 342 amostras provenientes de quatro grupos diferentes foram analisadas: (I) amostras de doadores de sangue (n= 96), (II) amostras de indivíduos vacinados contra a hepatite A (n= 46), amostras de surtos de hepatite A (III) (n= 103) e (IV) amostras de casos esporádicos de hepatite A (n= 97). Estas amostras foram submetidas ao teste rápido SD BIOLINE HAV IgG/IgM e todos os resultados do teste rápido foram comparados com os resultados do ensaio imunoenzimático para HAV (EIA), que é o padrão ouro para detectar anticorpos contra o HAV
Os resultados obtidos para o grupo I mostraram que, 33,3% (32/96) das amostras foram reagentes para anti-HAV IgG utilizando o teste rápido e 67,7% (65/96) foram reagentes para IgG anti-HAV por ELISA. No grupo II, 71,7% (33/46) das amostras foram reagentes para anti-HAV IgG por ELISA e nenhuma amostra do grupo II anti-HAV reagente por ELISA (0/33) foi reagente no teste rápido. Os grupos III e IV foram testados para a presença de anti-HAV IgG e anticorpos anti-HAV IgM. Em relação a anti-HAV IgG, no grupo III 60,1% (62/103) e 81,5% (84/103) foram reagentes pelo teste rápido e em ELISA, respectivamente. Para anticorpos anti-HAV IgM, 45,6% (47/103) e 47,5% (49/103) das amostras foram reagentes através do teste rápido no ELISA, respectivamente. Para o grupo IV, sobre a avaliação de anticorpos IgG anti-HAV, 61,8% (60/97) foram reagentes pelo teste rápido, e 75,2% (73/97) foram reagentes no ELISA e para os anticorpos anti-HAV IgM, 45,3 % (44/97) das amostras foram reagentes no teste rápido, e 46,9% (46/97) foram reagentes no ELISA. A sensibilidade e especificidade do teste rápido no grupo I para detecção de anticorpos anti-HAV IgG foram 49,23% e 100%, respectivamente
No grupo III, em relação ao IgM anti-HAV a sensibilidade e especificidade foram 95,92% e 100%, respectivamente e para IgG anti-HAV a sensibilidade e especificidade foram 78,79% e 21,62%, respectivamente. No grupo IV, em relação ao IgM anti-HAV a sensibilidade e especificidade foram 93,48% e 98,04%, respectivamente e para IgG anti-HAV a sensibilidade e especificidade foram 79,45% e 91,67%, respectivamente. O nível de concordância de acordo com o índice Kappa (k) foi considerado fraco nos grupos I e III, e bom no grupo IV ambos testados para o marcador IgG anti-HAV. Os grupos testados com o marcador IgM anti-HAV, obtivemos uma concordância boa para o grupo IV e excelente para o grupo III. Na testagem das amostras dos grupos III e IV por nested-PCR, para o grupo III obtivemos 47,5% (49/103), 45,5% (47/103) e 100,0% (103/103) das amostras reagentes por ELISA anti-HAV IgM, teste rápido e nested-PCR. Em relação ao grupo IV, obtivemos 46,9% (46/97) das amostras reagentes no ELISA, 45,3% (44/97) de amostras reagentes no teste rápido e 40,2% (39/97) das amostras com resultado reagente por nested-PCR. Em conclusão, o teste provou ser adequado para a detecção de anticorpos IgM anti-HAV, indicando sua aplicabilidade para o diagnóstico da hepatite A em surtos e casos esporádicos. No entanto, o baixo desempenho do teste rápido para detecção de IgG anti-HAV demonstrou que o mesmo precisa ser aprimorado para os estudos sobre detecção de infecção passada e resposta à vacinação / Abstract: The diagnosis of infection by the hepatitis A virus (HAV) through high sensitivity and specificity tests can lead an earlier and more accurate diagnosis, improving the prognosis of the disease. It should also be mentioned that a more precise diagnosis can become more reliable epidemiological studies and as a basis for the production of more effective control and eradication programs. The aim of this study was to evaluate an immunochromatographic test in outbreaks and epidemiological studies of prevalence, screening candidates for vaccination and post-vaccination surveillance programs. For this purpose, 342 samples from patients of four different groups were analyzed: (I) samples from blood donors (n=96), (II) samples from individuals vaccinated for hepatitis A (n=46), (III) samples from hepatitis A outbreaks (n=103) and (IV) samples from sporadic cases of hepatitis A (n=97). These samples were submitted to the rapid test SD BIOLINE HAV IgG/IgM and all results of the rapid test were compared to the results of HAV enzyme immunoassay (EIA) that is the gold standard to detect antibodies against HAV. The results obtained for the group I showed that, 33.3% (32/96) were positive for anti-HAV IgG using the rapid test and 67.7% (65/96) were positive for IgG anti-HAV by EIA. At group II, 71.7% (33/46) of the samples were positive for anti-HAV IgG by EIA and none of them (0/33) was reactive by rapid test. Groups III and IV were tested for the presence of anti-HAV IgG and anti-HAV IgM antibodies
Regarding anti-HAV IgG antibodies, at the group III 60.1% (62/103) and 81.5% (84/103) were positive by the rapid test and in EIA, respectively. For IgM anti-HAV antibodies, 45.6% (47/103) and 47.5% (49/103) of the samples were positive through the rapid test in EIA, respectively. For the group IV, regarding the evaluation of anti-HAV IgG antibodies, 61.8% (60/97) were positive by the rapid test, and 75.2% (73/97) were positive on EIA and for antibodies anti-HAV IgM, 45.3% (44/97) of the samples were positive to the rapid test, and 46.9% (46/97) were positive in EIA. The sensitivity and specificity of a rapid test for group I for detection of anti-HAV IgG antibodies were 49.23% and 100%, respectively. In group III, for IgM anti-HAV sensitivity and specificity were 95.92% and 100%, respectively, and anti-HAV-IgG the sensitivity and specificity were 78.79% and 21.62%, respectively. In group IV, in relation to anti-HAV IgM sensitivity and specificity were 93.48% and 98.04%, respectively, and anti-HAV-IgG the sensitivity and specificity were 79.45% and 91.67%, respectively
The level of agreement according to the Kappa index (k) was considered weak in groups I and III, and IV group good at both tested for anti-HAV IgG marker. The groups tested with anti-HAV IgM marker, we obtained a good agreement for the IV and excellent group for the group III. In testing of samples from groups III and IV by nested-PCR, for the group III obtained 47.5% (49/103), 45.5% (47/103) and 100.0% (103/103) of the samples ELISA reagents for IgM anti-HAV, rapid test and nested PCR. Regarding the group IV, it obtained 46.9% (46/97) of samples in ELISA reagents, 45.3% (44/97) of the rapid test reagents samples and 40.2% (39/97) of samples result reagent by nested-PCR. In conclusion, the test proved to be suitable for the detection of anti-HAV IgM antibodies, indicating their applicability for the diagnosis of hepatitis A outbreaks and sporadic cases. However, the poor performance of the rapid test for anti-HAV IgG detection showed that it needs to be improved for studies on past infection detection and response to vaccination
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Desenvolvimento de protótipos de testes imunocromatográficos para detecção de anticorpos específicos de leptospiras patogênicas em ratos e cães / Development of prototypes of immunochromatographic tests for the detection of antibodies specific for pathogenic leptospires in rats and dogsSouza, Dienny Rodrigues de 02 July 2018 (has links)
Submitted by Franciele Moreira (francielemoreyra@gmail.com) on 2018-08-14T13:28:54Z
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Previous issue date: 2018-07-02 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Leptospirosis is a zoonosis caused by pathogenic spirochetes belonging to the genus Leptospira.
The disease may progress to acute renal failure (Weil's Syndrome) and severe pulmonary
haemorrhagic syndrome (SPHS), with a mortality rate of > 50%. The highest incidence of the
disease occurs among the poorer populations and is associated with the lack of basic sanitation that
gets worse during periods of heavy rainfall and flooding. Rodents and dogs are the main sources of
transmission of the disease. Therefore, the identification of infected animals is essential towards
eliminating reservoir hosts such as dogs and rodents. Therefore, means allowing the identification
of leptospira infection in dogs and rodents is essential to permit control actions, decreasing the
infection rate in the environment and consequently helping to prevent disease in humans. The
objective of this study was to develop prototypes of lateral flow immunochromatographic tests to
aid in the diagnosis and control of leptospirosis. The design used in the prototypes was based on a
lateral flow immunochromatographic test for direct detection of specific antibodies using a
recombinant antigen, known as rLigBrep, attached to the nitrocellulose membrane test line. As an
antigen/antibody binding marker, polyvalent antibodies were conjugated to 40 nm colloidal gold,
murine anti-mouse immunoglobulin for the murine, anti-canine (Rockland) and anti-canine IgG
(Jackson) for canine prototypes. The canine prototypes were tested with 10 positive samples and
10 negative samples previously confirmed by the MAT and ELISA for canine leptospirosis. The
staining intensity was recorded on a scale of 0 to 3. Low concentrations of rLigBrep antigen
resulted in weak staining intensity. The results of the murine prototype provided the basic
specifications to developed the canine prototypes. In the first canine prototype using Rockland
conjugate, 5/10 positive samples presented staining intensity of 1. In the canine prototype using
Jackson conjugate, 9/10 positive samples presented staining intensity variation of 1 to 3. The
results of negative samples 8/10 presented a tenuous staining intensity on the test line, indicating
the necessity to reduce the concentration of antigen and/or conjugate on the test. The studied
prototypes were not evaluated to determine sensibility and specificity as they didn’t present similar
results obtained on ELISA and MAT. Therefore, it has not been defined if the rLigBrep protein can
be utilized in the development of a rapid immunochromatography test for the diagnosis of canine
leptospirosis and as a marker of infection in rodents. / A leptospirose é uma zoonose causada por espiroquetas patogênicas do gênero Leptospira. A
doença pode progredir para falência renal aguda (Síndrome de Weil) e síndrome hemorrágica
pulmonar severa (SPHS), com taxa de mortalidade > 50%. A maior incidência da doença ocorre
em populações mais carentes, ligada a deficiências em saneamento básico agravando-se em
períodos de chuvas constantes e enchentes. Os roedores e os cães são os principais transmissores
da doença. Portanto, meios que permitam a identificação de infecção por lepstospira em cães e
roedores é essencial para permitir ações de controle, diminuindo a taxa de infecção no meio
ambiente e consequentemente auxiliando na prevenção da doença nos humanos. O objetivo desse
estudo foi desenvolver protótipos de testes imunocromatograficos de fluxo lateral para auxiliar no
diagnóstico e controle da leptospirose. O desenho utilizado nos protótipos se baseiam em um teste
imunocromatográfico de fluxo lateral para detecção direta de anticorpos específicos, utilizando
antígeno recombinante rLigBrep fixado na linha teste da membrana de nitrocelulose. Como
marcador da ligação antígeno/anticorpo foram utilizado nanoparticulas deouro coloidal de 40 nm
conjugados a anti-imunoglobulina murina polivalente para o protótipo murino, anticorpo policlonal
anti-IgG F(c) canino da Rockland e anticorpo policlonal anti-IgG F(c) canino da Jackson para os
protótipos caninos. Os protótipos caninos foram testados com 10 amostras positivas e 10 amostras
negativas confirmadas em MAT e ELISA para leptospirose canina. A intensidade de coloração dos
resultados foi registrada em escala entre 0 a 3. As especificações dos materiais e concentrações do
protótipo murino serviram de base para o desenvolvimento do protótipo canino. No protótipo
canino utilizando conjugado Rockland, 5/10 amostras positivas apresentaram intensidade de
coloração 1. Com o protótipo canino, utilizando conjugado Jackson, nas 9/10 amostras positivas a
intensidade de coloração variou de 1 a 3. Entre resultados das amostras negativas 8/10
apresentaram uma coloração tênue na linha teste, indicando a necessidade de reduzir a
concentração de antígeno e/ou conjugado no teste. Os protótipos estudados não foram avaliados
para determinar a sensibilidade e especificidade pois ainda não apresentaram resultados
semelhantes aos obtidos em ELISA e MAT. Portanto, não foi definido se proteína rLigBrep pode
ser utilizada no desenvolvimento de um teste imunocromatográfico rápido para diagnóstico de
leptospirose canina e como marcador de infecção por leptospiras em roedores.
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Desenvolvimento de um método de solubilização de nanotubos de carbono e sua aplicação em imunoensaiosPereira, Stefane Reis 30 September 2016 (has links)
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Previous issue date: 2016-09-30 / FAPEAM - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / Since they were discovered, the carbon nanotubes have attracted the interest of many researchers due to their physical, chemical and electronic properties that allow its application in different areas of knowledge, including biomedical applications. Carbon nanotubes may be used as nanosensors and used as pathogens detection sensor. However, for application in immunoassays there must be a good solubilization of these carbon nanotubes. The problem for a good solubilization is aggregation of carbon nanotubes which reduces the important properties of these materials, proposals for a single nanotube. This study sought a method for solubilization of carbon nanotubes and their application in lateral flow systems. For this they used recombinant proteins ( "protein 2" rich in Histidine, HRP2) already obtained in previous work. In addition, the physical characteristics of carbon nanotubes was obtained through analysis by Raman spectroscopy, absorption spectroscopy in the ultraviolet-visible region (UV-Vis) spectroscopy in the infrared Fourier transform (FTIR) was performed. And its dispersion and functionalization was measured by flow cytometry. This work showed that methodology dispersion of carbon nanotubes allows their use in lateral flow systems. What makes it interesting not only for the detection of malarial antigens demonstrated in this study, but also for other applications in detection methods. This carbon nanotube solubilization methodology makes these nanotubes applicable in Immunoassays, chromatography and molecular tests. / Desde que foram descobertos, os nanotubos de carbono têm despertado o interesse de muitos pesquisadores devido às suas propriedades físicas, químicas e eletrônicas que possibilitam sua aplicação nas mais diversas áreas de conhecimento, incluindo aplicações biomédicas. Os nanotubos de carbono podem ser utilizados como nanosensores e ser utilizado como sensor de detecção de patógenos. Contudo, para sua aplicação em imunoensaios é preciso que haja uma boa solubilização destes nanotubos de carbono. O problema para uma boa solubilização é a agregação de nanotubos de carbono que reduz as importantes propriedades desses materiais, propostas para um único nanotubo. Este trabalho buscou desenvolver nanotubos de carbono solúveis aplicáveis em sistemas de fluxo lateral. Para isso foram utilizadas proteínas recombinantes (“Proteína 2” rica em Histidina, HRP2) obtidos em trabalhos anteriores. Além disso, foi realizada a caracterização física dos nanotubos de carbono através das análises por espectroscopia Raman, espectroscopia de absorção na região do ultravioleta-visível (UV-Vis), espectroscopia na região do infravermelho com transformada de Fourier (FTIV). Sua capacidade de dispersão e funcionalização foi medida por citometria de fluxo. Este trabalho mostrou que esta metodologia de solubilização de nanotubos de carbono permite sua utilização em sistemas de fluxo lateral, o que o torna interessante não só pela detecção de antígenos maláricos demonstrados neste estudo, mas também por outras aplicações em métodos de detecção. Esta metodologia de solubilização de nanotubos de carbono torna estes materiais aplicáveis em imunoensaios, cromatografias e testes moleculares.
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Desenvolvimento de teste rápido para detecção de Listeria monocytogenes em alimentos / Rapid test development for detection of Listeria monocytogenes in foodSilva Filho, Ernandes da 27 February 2018 (has links)
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Previous issue date: 2018-02-27 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Listeriosis is a bacterial infection caused by Listeria monocytogenes, a bacterium transmitted
mainly by the ingestion of contaminated food. It is the main responsible for food infections with
low morbidity rate, but when contamination occurs in immunosuppressed the mortality rates are
high, representing an important public health problem. Methods available for identification of the
presence of Listeria monocytogenes include isolation of the bacterium through conventional
culture, laborious, time-consuming and low sensitivity method, and usually complex and costly
molecular and / or immunological methods requiring trained personnel and equipment. Therefore,
the search for rapid, sensitive and specific methods for detecting the presence of Listeria
monocytogenes in foods is useful and necessary for infection prevention and great value to reduce
the mortality rate in the immunocompromised as well as to enable the epidemiological surveillance
of this disease. The objectives of the study were: To develop lateral flow immunochromatographic
test for the identification of L. monocytogenes in foods; To evaluate the performance of the lateral
flow immunochromatographic test using food samples naturally and artificially contaminated with
L. monocytogenes. As the detection agent, were impregnated glass fiber with anti-internalin-A
MAb-2D12 conjugated to colloidal gold. As a capture agent, were sensitized, on nitrocellulose
paper, the test line with polyclonal anti-internalin-B antibody, and in the control line with protein
A, to validate the activity of the detection agent. Inoculations of standard strains of Listeria
monocytogenes were used for evaluation of the Listeria detection in the proposed test. As a
negative control, we used strains of Listeria innocua, Enterobacter sp. and Bacillus cereus.
Positivity was obtained in prototypes of rapid tests sensitized with Polyclonal Anti-InlB. Positivity
was observed in samples containing culture medium and newly cultured bacteria, validating the
methodology used in the development of the test. The detection capacity of the test at D
concentration is 2x10 4 CFU / mL. / A listeriose é uma infecção bacteriana, provocada por Listeria monocytogenes, uma bactéria
transmitida principalmente pela ingestão de alimentos contaminados. É o principal agente
responsável pelas infecções alimentares com baixa taxa de morbidade, porém quando a infecção
ocorre em imunodeprimidos os índices de mortalidade são elevados, representando um importante
problema de saúde pública. Os métodos disponíveis para a identificação da presença de Listeria
monocytogenes incluem o isolamento da bactéria através de cultivo convencional, que consiste em
um método laborioso, demorado e de baixa sensibilidade e métodos moleculares e/ou imunológicos, normalmente complexos, de custo elevado, requerendo equipamentos e pessoal
treinado. Portanto, a busca por métodos alternativos, rápidos, sensíveis e específicos para a
detecção da presença de Listeria monocytogenes em alimentos, é útil e necessária para prevenção
da infecção e de grande valia para reduzir a taxa de mortalidade nos imunodeprimidos, bem como,
viabilizar a vigilância epidemiológica desta enfermidade. Os objetivos do trabalho foram:
Desenvolver teste imunocromatográfico de fluxo lateral para identificação de L. monocytogenes
em alimentos; Avaliar o desempenho do teste imunocromatográfico de fluxo lateral utilizando
amostras de alimentos naturalmente e artificialmente contaminados com L. monocytogenes. Como
agente de detecção, foi impregnado à fibra de vidro o monoclonal MAb-2D12 anti-internalina-A
conjugado ao ouro coloidal. Como agente de captura, foi sensibilizado, em papel de nitrocelulose,
a linha teste com anticorpo policlonal anti-internalina-B, e na linha controle com proteína A, para
validar a atividade do agente de detecção. Inóculos de cepas padrões de Listeria monocytogenes
foram utilizados para avaliação da detecção Listeria no teste proposto. Como controle negativo,
utilizamos cepas de Listeria innocua, Enterobacter sp. e Bacillus cereus. Foi obtido positividade
em protótipos de testes rápidos sensibilizados com policlonal anti-InlB. Observou-se positividade
em amostras contendo meio de cultura e a bactéria recém cultivada, validando a metodologia
empregada no desenvolvimento do teste. A capacidade de detecção do teste foi de 2x10 4 UFC/mL.
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Avaliação de diferentes métodos para a classificação de pacientes e de carreadores de antígenos empregados na sorologia de hanseníase / Evaluation of different methods for classification of leprosy patients and antigen carriers employed in leprosy serologyMoura, Rodrigo Scaliante de 31 March 2014 (has links)
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Previous issue date: 2014-03-31 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Serology to detect IgM antibodies against the PGL-I, a species-specific antigen from Mycobacterium leprae, can be used to aid in the identification of individuals with high bacillary load. Samples and the database from the U-MDT clinical trial were used to compare and report the perfomance of diverse classification methods. This study also evaluated the possibility of enhancement of serological tests by substituting the antigen carrier protein, the bovine serum albumin (BSA) by a human protein (HSA), aiming to eliminate unespecific bindings. The tests specificity was evaluated using sampes from household contacts, healthy population, TB patients and Visceral Leishmaniasis from endemic and non-endemic areas. In this study the most sensitive and the least specific approach was represented by counting the number of skin lesions, which identifiel 99% of MB leprosy patients. ML Flow HSA tests correcty allocated 70.9% and 68.6% of patients in the PB group, and 87% and 81% of patients in the MB group, respectively. The study suggests that the carrier protein of the antigen did not influence significantly in the seropositivity of studied groups. PGL-I serology did not presented cross-reactions with Visceral Leishmaniasis serum samples and confirmed a low positivity among control groups. / A sorologia para detecção de anticorpos da classe IgM contra o PGL-I, antígeno específico do M. leprae, pode ser utilizada para auxiliar na identificação de indivíduos com alta carga bacilar. Amostras e o banco de dados do ensaio clínico U-MDT foram utilizados para descrever o desempenho de diversos métodos de classificação. Este estudo também avaliou a possibilidade de melhoria dos testes sorológicos pela substituição da proteína carreadora do antígeno, a albumina bovina (BSA), por uma proteína humana (HSA), visando eliminar ligações não específicas. A especificidade dos testes foi avaliada utilizando amostras de contatos de pacientes, indivíduos saudáveis, pacientes de tuberculose e de leishmaniose visceral de áreas endêmica e não endêmica para hanseníase. Neste estudo, a abordagem mais sensível, porém menos específica foi a contagem de lesões, que foi capaz de detectar 99% dos pacientes multibacilares. Os testes ML Flow utilizando BSA ou HSA foram capazes de alocar corretamente 70,9% e 68,6% dos pacientes PB e, 87% e 81% dos pacientes MB, respectivamente. Portanto, este estudo sugere que a proteína carreadora do antígeno não influencia de maneira significativa na soropositividade dos grupos estudados. A sorologia PGL-I não apresentou reatividade cruzada com o soro de pacientes de Leishmaniose Visceral e se confirmou a baixa soropositividade entre os grupos controle.
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Uso de imunocromatografia rápida e outras técnicas parasitológicas para o diagnóstico laboratorial da Wuchereria bancrofti (Cobbold, 1877) em área endêmica de filariose linfática em Maceió, Alagoas / Use of immunochromatography rapid parasitological an other techniques for laboratory diagnosis of Wuchereria bancrofti (Cobbold, 1877) in endemic area of lymphatic filariasis in Maceió, AlagoasSilva, Valckicia Andréa Nascimento 26 April 2006 (has links)
Lymphatic filariasis is a highly impact disease because it can impair workers and make difficult their social life. Early diagnosis is very important for efficacy of the treatment. The
aim of this study was to establish, in a defined population, the prevalence of Wuchereria bancrofti, the causative agent of lymphatic filariasis, using rapid immunochromatographic
card test and thick blood smears; compare the immunochromatographic test with the thick blood smear parasitological method, and evaluate different parasitological techniques. Inhabitants of lymphatic filariasis endemic area were examined in Maceió, Alagoas State, Northeasth Brazil (at the edge of a channel - Reginaldo Canal - that crosses the city sectors Feitosa, Jacintinho and Pitanguinha). The examination of 3,000 children between 5 and 10
years old by immunochromatographic test revealed 10 (0,33%) antigen-positive, and of 411 individuals older than 10 years of age only one (0,24%) was antigen-positive. By thick blood smear method, in the same endemic area, among 5,261 children examined between 5 and 10 years old 4 (0,076%) microfilaremic were detected, and 25 (0.13%) from 19,875 individuals older than 10 years of age were found to be microfilaraemic. The parasite antigen assay using
rapid immunochromatographic for diagnosis made possible to carry out tests during daytime, in opposition of the traditional thick blood smears method. Comparing the results from
immunochromatographic test and thick smears, a increased ability for parasite detection by the immunological method was observed when children between 5-10 years old were
examined, being odds relative 4.4 (I.C. 95% = 1.3 - 16.6). However, with individuals older than 10 years of age, no significant difference on parasites detection ability between these techniques was observed. All antigen-positive individuals by immunochromatographic test were examined by membrane blood filtration and none of them were microfilaraemic. Positive individuals by immunochromatographic test and thick blood smears were also positive when submitted to the enzyme-linked immunosorbent assay. The enzyme-linked immunosorbent assay was better than immunochromatographic test in detected W. bancrofti
antigen. From the results of immunochromatographic test with children between 5 and 10 years old (age group preconized by WHO to verify active transmission of lymphatic filariasis)
it was possible to show a very low prevalence of parasitism in the delimited area, meaning that in a short time Maceió can be free from lymphatic filariasis transmission / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A filariose linfática é uma doença de grande impacto, pois pode incapacitar seus portadores para o trabalho e dificultar seu convívio social, sendo de grande importância o
diagnóstico ainda na fase inicial para que o tratamento seja eficaz. O objetivo do presente trabalho foi identificar em população definida, a prevalência de Wuchereria bancrofti,
causadora de filariose linfática, utilizando testes de imunocromatografia rápida em cartão e gota espessa de sangue; comparar a imunocromatografia rápida frente ao método parasitológico da gota espessa de sangue, e avaliar diferentes técnicas parasitológicas. Foram examinados moradores da região endêmica de filariose linfática, definida anteriormente em Maceió, AL (parte dos bairros centrais e contíguos Feitosa, Jacintinho e Pitanguinha, ao longo
do canal do Reginaldo). Através da imunocromatografia rápida foram avaliadas 3.000 crianças com idade entre 5-10 anos, sendo 10 (0,33%) antígeno-positivo; e entre 411
indivíduos > 10 anos examinados, apenas um (0,24%) foi antígeno-positivo. Através da gota espessa de sangue e na mesma área endêmica, foram examinadas 5.261 crianças com idade entre 5-10 anos, sendo 4 (0,076%) microfilarêmicas, e examinados 19.875 indivíduos > 10 anos, sendo 25 (0,13%) microfilarêmicos. A utilização de imunocromatografia rápida como forma de diagnóstico, através da pesquisa de antígenos do parasito, possibilitou a realização dos exames em horários matutino e vespertino, fato que se opõe ao método tradicional através de gota espessa. Fazendo-se uma comparação entre os resultados obtidos pela
imunocromatografia rápida com os da gota espessa pode-se observar uma maior capacidade de detecção dos parasitados pelo método imunológico quando avaliadas crianças de 5-10
anos de idade sendo a odds relativa igual a 4,4 (I.C. 95% = 1,3 16,6); já em indivíduos com > 10 anos não houve diferença significativa na capacidade de detecção de parasitados entre essas técnicas. Todos os indivíduos antígeno-positivo pela imunocromatografia rápida
foram submetidos a exames pela filtração de sangue em membrana e nenhum foi microfilarêmico. Os indivíduos positivos através da imunocromatografia e da gota espessa de
sangue, foram submetidos ao teste imunoenzimático, sendo todos positivos por essa última técnica. A técnica imunoenzimática mostrou igual capacidade na detecção de antígenos circulantes de W. bancrofti quando comparada com a imunocromatografia rápida. Através dos exames realizados, utilizando a imunocromatografia rápida na faixa etária de 5 a 10 anos (idade preconizada pela OMS para verificação de transmissão ativa da filariose linfática), foi detectada uma prevalência muito baixa da parasitose na área demarcada, mostrando que em pouco tempo a cidade de Maceió-AL poderá estar livre da transmissão da filariose linfática
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Análise da presença de glúten em alimentos rotulados como livres de glúten através de ensaio imunoenzimático e de fitas imunocromatográficasLaureano, Álvaro Macedo January 2010 (has links)
Introdução: A doença celíaca é uma condição autoimune que afeta cerca de 1% da população geral. Seu único tratamento é a dieta livre do glúten de trigo, centeio e cevada, que deve durar por toda vida. Objetivos: Esse estudo foi desenhado com o intuito de avaliar a presença de glúten por meio de teste imunocromatográfico e de R5-ELISA em alimentos comercializados no Brasil com o rótulo “sem glúten” e para determinar se o método imunocromatográfico é um método confiável e sensível o suficiente para detectar glúten em níveis “seguros” para celíacos. Materiais e métodos: Analisamos setenta amostras de alimentos embalados comercializados com o rótulo sem glúten, incluindo farinhas e biscoitos, entre outros. A extração do glúten foi feita por solução de etanol e após analisado por kit R5-ELISA e fitas imunocromatográficas disponíveis comercialmente. Resultados: Mais de um quarto das amostras analisadas (28,6) por R5-ELISA apresentaram teor de glúten acima de 5 ppm. Em quase metade dessas (12,9%) foi detectado nível de glúten superior a 20 ppm, o máximo tolerado pelo Codex Alimentarius para alimentos naturalmente livres de glúten. O método imunocromatográfico é qualitativo, fornecendo resultados positivos para amostras que tenham 5 ppm de glúten ou mais. 27,1% das amostras apresentaram resultado positivo quando testadas pelas fitas imunocromatográficas. Não encontramos diferença significativa entre os resultados do R5-ELISA iguais ou superiores a 5 ppm de glúten e os positivos para o teste imunocromatográfico (McNemar, p=1,00). Ao compararmos o R5-ELISA (> 5 ppm de glúten) com o método imunocromatográfico, encontramos uma sensibilidade de 90% e especificidade de 98%, (Kappa=0,89). Conclusões: Encontramos glúten em uma alta proporção das amostras utilizando os dois métodos. Nesse estudo também demonstramos que o teste imunocromatográfico bastante sensível para a detecção de glúten em níveis seguros aos portadores de doença celíaca e pode servir como uma alternativa barata e rápida ao R5-ELISA. / Objectives: This study was designed to compare the effectiveness of the R5-ELISA and immunochromatographic assays in detecting gluten in Brazilian foods labeled gluten-free and to determine if the immunochromatographic method is a sensitive and reliable method for detecting gluten at levels recommended as safe by the Codex Alimentarius Commission. Materials/Methods: We analyzed seventy different commercially available foods that were labeled “gluten-free” including several types of flours and snacks. Gluten was extracted by ethanol precipitation and subsequently analyzed using a commercially available immunochromatographic test and R5-ELISA kit. Results: More than a quarter of the samples (28.6%) analyzed by ELISA contained levels of gluten greater than 5 ppm. Almost half of these (12.9%) exhibited levels that exceeded 20 ppm, the maximum gluten level recommended by the Codex Alimentarius for a naturally gluten free product. The immunochromatographic method is qualitative and returns a positive reading for samples that contain gluten levels greater than 5 ppm. We found 27.1% of the samples tested positive in the immunochromatographic test. There was no statistically significant difference between the results of the ELISA (detection value >5 ppm) and the immunochromatographic test (McNemar test, p = 1.00). Comparing the ELISA (>5 ppm) and immunochromatographic test, we obtained 90% sensitivity and 98% specificity (Kappa of 0.89). Conclusions: We found gluten in a high proportion of the samples tested using both methods. In this study we also demonstrate that the immunochromatographic method is nearly as sensitive as the ELISA in detecting gluten levels and thus may serve as an inexpensive and rapid alternative to the R5-ELISA screening test.
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