Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-06-13T13:46:36Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 277021 bytes, checksum: b140d81ef2bf2924ec3c8af245e6a87d (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-13T13:46:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 277021 bytes, checksum: b140d81ef2bf2924ec3c8af245e6a87d (MD5) Previous issue date: 2003-03-13 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A dengue é uma doença febril, exantemática aguda considerada a mais importante arbovirose que afeta o homem. O diagnóstico laboratorial da dengue é realizado após suspeita clínica e as técnicas imunoenzimáticas, principalmente ELISA, são as mais difundidas, detectando anticorpos das classes IgM e IgG. Este trabalho teve como objetivo o desenvolvimento de uma técnica de hemaglutinação passiva de fácil execução, rápida e eficiente na detecção de anticorpos antidengue em sangue humano total. As próprias hemácias do paciente foram utilizadas como antígeno figurado, sendo o anti- soro contra hemácias humanas produzido em coelhos e purificado por precipitação e cromatografia. As imunoglobulinas G obtidas foram digeridas com o uso de papaína para a obtenção de fragmentos Fab. Após a separação, os fragmentos foram ligados às partículas virais de dengue, previamente purificadas em gradiente de densidade contínuo de tartarato de sódio e potássio, utilizando o glutaraldeído como agente acoplador. Demonstrou-se que a estratégia de conjugação dos fragmentos Fab à partícula viral é factível com uso de glutaraldeído, contudo, há necessidade do desenvolvimento de estudos para a verificação do grau de eficiência de conjugação. O método de conjugação adotado não impediu os fragmentos Fabs de se ligarem às hemácias e nem os anticorpos antidengue de reconhecerem seus epítopos na partícula viral. A utilização de anticorpos monoclonais, ou sistemas de expressão para proteínas virais assim como para fragmentos de anticorpos facilitariam as etapas de montagem do conjugado, além de otimizar o funcionamento da técnica. Em conclusão, a detecção de anticorpos antidengue em amostras de soro e hemácias foi possível a partir do método proposto. / Dengue is an acute febrile illness considered the most important arthropod-borne viral disease affecting humans. Currently most laboratory diagnoses of dengue are made after some clinical observations and use of immunoenzimatic techniques, notably ELISA can reliably detect small amounts of IgM and IgG classes of antibodies and have deserved worldwide acceptance. However, ELISA is a somewhat laborious, time-consuming technique and requires a expensive equipment. The present work was carried out to develop a feasible, inexpensive, quick and efficient passive hemaglutination technique for detection of anti-dengue antibodies in human whole blood, using the patient's blood cells as figured antigen. Antiserum against human erythrocytes was produced in rabbits and the IgG was purified by precipitation and chromatographic methods. IgG was then fractioned by papain digestion to yield Fab fragments. After separation, these fragments were linked by glutaraldehyde to the dengue viral particles successfully purified following a protocol which included centrifugation through a sodium and potassium tartarate density- gradient. However, the glutaraldehyde-mediated step need further work to establish an efficient degree of conjugation. The method did not alter either the Fab binding to erythrocytes or the recognition of viral epitopes by anti-dengue antibodies. Possibly, the use of monoclonal antibodies or a suitable system for protein expression could improve the conjugation step and help to optimize the routine testing of samples. In conclusion, a simple technique has been demonstrated to be suitable for detection of anti-dengue antibodies in samples of human blood or erythrocytes plus serum.

Made available in DSpace on 2014-06-12T18:29:57Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo3542_1.pdf: 940761 bytes, checksum: abdc92152828f5a9e10a4614677d900d (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009 / Avaliou-se a dinâmica da produção da IgA secretora (IgAs) anti- Toxoplasma gondii na lágrima em pacientes portadores de uveíte posterior ativa presumivelmente por T.gondii. Dezesseis pacientes foram divididos em dois grupos relacionados ao início da sintomatologia: grupos 1 (dia 0) e 2 (dia 30). A lágrima foi coletada com intervalo de 15 dias e por último 30 dias até o final do primeiro trimestre. A dosagem da imunoglobulina G (IgG) e IgM séricas anti-T.gondii foi pelo método de imunofluorescência e a da IgAs pelo Elisa. Todos os pacientes tiveram IgG sérica positiva e IgM sérica negativa. A IgAs na lágrima foi positiva em todos os pacientes, apresentando comportamento diferente em cada paciente. Não foi visto diferença estatisticamente significante entre os intervalos estudados. Houve reatividade também nos olhos sadios semelhante aos doentes. Conclui-se que a dinâmica da IgAs anti-T.gondii na lágrima ocorre de forma variável para cada indivíduo

A asma é considerada uma das mais importantes doenças crônicas na infância, devido a sua alta incidência e ao aumento na morbidade observada nos últimos anos. Diversas anormalidades imunológicas têm sido descritas em pacientes com asma, incluindo hipogamaglobulinemia e deficiência de subclasses de IgG. O objetivo deste trabalho foi avaliar a imunidade humoral representada pelos níveis séricos totais imunoglobulinas, subclasses de IgG e níveis salivares de IgA e a imunidade específica representada pela resposta a antígenos timo-dependentes, antígenos timo--independentes tipo 1 e timo-independentes tipo 2 em crianças com asma brônquica moderada e grave. Foram coletadas amostras de sangue pré e pós-imunização com vacina Pneumo23® e saliva de 50 crianças, com idades entre 4 e 12 anos. Foram determinados os níveis séricos de IgG, IgA, IgM, IgE e subclasses de IgG (IgG2, IgG3 e IgG4) por nefelometria. A lgA secretória determinada nas salivas, os anticorpos IgG anti-toxóide tetânico, os anticorpos IgG e IgM anti-LPS 0111 e os níveis séricos anticorpos IgG pré e pós-vacinais anti-S. pneumoniae foram determinados por ensaio imunoenzimático. Foram avaliados os níveis séricos de IgE específicos para Dermatophagoides pteronyssinus, e o teste cutâneo para os alérgenos Dermatophagoides pteronyssinus, Dermatophagoides farinae e Blomia tropicalis. Foram observados níveis elevados de IgG total e das subclasses IgG2 e IgG3. Níveis altos IgG4 foram observados em 52% dos pacientes asmáticos, e deficiência de IgG4 apenas 8%. Os níveis séricos totais de IgM foram elevados em 24% dos pacientes, apenas um paciente apresentou resultado inferior ao valor de normalidade. Foi detectada deficiência de IgA sérica associada a deficiência de IgA secretória em 1 paciente. Foram detectados elevados níveis totais de IgE sérica e de anticorpos IgE anti-D. pteronyssinus (classes 4, 5 e 6). Testes cutâneos positivos Dermatophagoides pteronyssinus, Dermatophagoides farinae e Blomia tropicalis foram observados em 73% dos pacientes. Foram observados níveis séricos adequados de anti-toxóide tetânico em 76% das amostras e níveis normais de anticorpos IgG e IgM anti-LPS 0111, sendo que apenas 6% das crianças apresentaram níveis elevados IgM, e 4% de IgG anti-LPS 0111. Apesar da maioria dos pacientes apresentarem resposta de anticorpos anti-pneumococo, foram encontrados 2 pacientes deficiência de resposta de anticorpos para polissacarídeos. Em conclusão, foram identificadas imunodeficiências bem caracterizadas em 3 crianças asmáticas, que poderiam claramente levar a infecções, o que prioriza a importância da avaliação imunidade humoral. / Asthma is considered to be one of the most important chronic diseases childhood, with respect to its high incidence, and the increasing morbidity observed the last years. Several abnormalities have been described in patients with asthma, including hipogammaglobulinemia and IgG subclass deficiencies. The aim was to evaluate the humoral immunity represented by total seric immunoglobulin levels, IgG subclasses and salivary IgA levels and the specific immunity represented by response to thymus-dependent, thymus-independent type 1 and thymus-independent type 2 antigens in children with persistent moderate and severe bronchial asthma. Blood samples before and after immunization with Pneumo23® and saliva were collected from 50 asthmatic children (4-12 years old). IgG, IgA, IgM, IgE and IgG subclasses were analyzed by nephelometry. Secretory IgA, anti-tetanus IgG levels, anti-¬LPS 0111 IgG and IgM levels, and pre and post-immunization anti-pneumococcal IgG antibodies were measured by immunoenzymatic assay. Anti-Dermatophagoides pteronyssinus IgE levels and Prick tests with Dermatophagoides pteronyssinus, Dermatophagoides farinae, Blomia tropicalis were also evaluated. Elevated levels were observed of total IgG, IgG2 and IgG3 subclasses. High IgG4 levels were detected 52% of the asthmatic patients, and IgG4 deficiency in 8%. High seric total IgM levels were founded in 24% of the patients, and only one presented IgM level bellow normal age-matched controls. Seric IgA deficiency associated with secretory IgA deficiency founded in one patient. Elevated seric IgE levels and anti-D. pteronyssinus IgE antibodies (classes 4, 5 and 6) were detected. Positive prick test to Dermatophagoides pteronyssinus, Dermatophagoides farinae and Blomia tropicalis were observed in 73% of the patients. An adequate anti-tetanus toxoid antibody response was observed 76% of the samples and normal anti-LPS 0111 IgG and IgM levels, although 6% of children presented high anti-LPS 0111 IgM levels, and 4% presented high anti-LPS 0111 IgG levels. Although most of the patients showed a good anti-pneumococcal response, two patients presented anti-polysaccharide antibody deficiency. In conclusion, well-characterized immunodeficiencies were identified in three asthmatic children, which could clearly lead to infections, emphasizing the importance evaluating the humoral immunity.

A asma é considerada uma das mais importantes doenças crônicas na infância, devido a sua alta incidência e ao aumento na morbidade observada nos últimos anos. Diversas anormalidades imunológicas têm sido descritas em pacientes com asma, incluindo hipogamaglobulinemia e deficiência de subclasses de IgG. O objetivo deste trabalho foi avaliar a imunidade humoral representada pelos níveis séricos totais imunoglobulinas, subclasses de IgG e níveis salivares de IgA e a imunidade específica representada pela resposta a antígenos timo-dependentes, antígenos timo--independentes tipo 1 e timo-independentes tipo 2 em crianças com asma brônquica moderada e grave. Foram coletadas amostras de sangue pré e pós-imunização com vacina Pneumo23® e saliva de 50 crianças, com idades entre 4 e 12 anos. Foram determinados os níveis séricos de IgG, IgA, IgM, IgE e subclasses de IgG (IgG2, IgG3 e IgG4) por nefelometria. A lgA secretória determinada nas salivas, os anticorpos IgG anti-toxóide tetânico, os anticorpos IgG e IgM anti-LPS 0111 e os níveis séricos anticorpos IgG pré e pós-vacinais anti-S. pneumoniae foram determinados por ensaio imunoenzimático. Foram avaliados os níveis séricos de IgE específicos para Dermatophagoides pteronyssinus, e o teste cutâneo para os alérgenos Dermatophagoides pteronyssinus, Dermatophagoides farinae e Blomia tropicalis. Foram observados níveis elevados de IgG total e das subclasses IgG2 e IgG3. Níveis altos IgG4 foram observados em 52% dos pacientes asmáticos, e deficiência de IgG4 apenas 8%. Os níveis séricos totais de IgM foram elevados em 24% dos pacientes, apenas um paciente apresentou resultado inferior ao valor de normalidade. Foi detectada deficiência de IgA sérica associada a deficiência de IgA secretória em 1 paciente. Foram detectados elevados níveis totais de IgE sérica e de anticorpos IgE anti-D. pteronyssinus (classes 4, 5 e 6). Testes cutâneos positivos Dermatophagoides pteronyssinus, Dermatophagoides farinae e Blomia tropicalis foram observados em 73% dos pacientes. Foram observados níveis séricos adequados de anti-toxóide tetânico em 76% das amostras e níveis normais de anticorpos IgG e IgM anti-LPS 0111, sendo que apenas 6% das crianças apresentaram níveis elevados IgM, e 4% de IgG anti-LPS 0111. Apesar da maioria dos pacientes apresentarem resposta de anticorpos anti-pneumococo, foram encontrados 2 pacientes deficiência de resposta de anticorpos para polissacarídeos. Em conclusão, foram identificadas imunodeficiências bem caracterizadas em 3 crianças asmáticas, que poderiam claramente levar a infecções, o que prioriza a importância da avaliação imunidade humoral. / Asthma is considered to be one of the most important chronic diseases childhood, with respect to its high incidence, and the increasing morbidity observed the last years. Several abnormalities have been described in patients with asthma, including hipogammaglobulinemia and IgG subclass deficiencies. The aim was to evaluate the humoral immunity represented by total seric immunoglobulin levels, IgG subclasses and salivary IgA levels and the specific immunity represented by response to thymus-dependent, thymus-independent type 1 and thymus-independent type 2 antigens in children with persistent moderate and severe bronchial asthma. Blood samples before and after immunization with Pneumo23® and saliva were collected from 50 asthmatic children (4-12 years old). IgG, IgA, IgM, IgE and IgG subclasses were analyzed by nephelometry. Secretory IgA, anti-tetanus IgG levels, anti-¬LPS 0111 IgG and IgM levels, and pre and post-immunization anti-pneumococcal IgG antibodies were measured by immunoenzymatic assay. Anti-Dermatophagoides pteronyssinus IgE levels and Prick tests with Dermatophagoides pteronyssinus, Dermatophagoides farinae, Blomia tropicalis were also evaluated. Elevated levels were observed of total IgG, IgG2 and IgG3 subclasses. High IgG4 levels were detected 52% of the asthmatic patients, and IgG4 deficiency in 8%. High seric total IgM levels were founded in 24% of the patients, and only one presented IgM level bellow normal age-matched controls. Seric IgA deficiency associated with secretory IgA deficiency founded in one patient. Elevated seric IgE levels and anti-D. pteronyssinus IgE antibodies (classes 4, 5 and 6) were detected. Positive prick test to Dermatophagoides pteronyssinus, Dermatophagoides farinae and Blomia tropicalis were observed in 73% of the patients. An adequate anti-tetanus toxoid antibody response was observed 76% of the samples and normal anti-LPS 0111 IgG and IgM levels, although 6% of children presented high anti-LPS 0111 IgM levels, and 4% presented high anti-LPS 0111 IgG levels. Although most of the patients showed a good anti-pneumococcal response, two patients presented anti-polysaccharide antibody deficiency. In conclusion, well-characterized immunodeficiencies were identified in three asthmatic children, which could clearly lead to infections, emphasizing the importance evaluating the humoral immunity.

O diagnóstico sorológico da cisticercose vem se destacando como uma fonte alternativa seguramente eficaz ao estudo da doença. Com a proposta de acessibilidade, devido primordialmente a relação custo, os testes ELISA são promissores à pesquisa sorológica de campo. O problema iminente está na utilização de extratos antigênicos capazes de gerar ao teste, parâmetros compatíveis para a pesquisa de anticorpos na população de baixa prevalência. Nesse contexto, o presente trabalho objetivou a avaliação de um teste ELISA com alto valor preditivo positivo (VPP) para a pesquisa de anticorpos anti-cisticercos de Taenia solium em inquéritos sorológicos na população geral. Os antígenos ensaiados foram proteína 18/14 kDa de líquido vesicular de T. crassiceps (18/14-Tcra), liquido vesicular de T. crassiceps (LV-Tcra) e total de cisticercos de T. solium (T-Tso), respectivamente estes constituíram os testes ELISA-18/14, ELISA-Tcra e ELISA-Tso. Foram ensaiadas 610 amostras de soro de indivíduos supostamente saudáveis e 20 amostras de soro de indivíduos com neurocisticercose confirmados por critérios clínicos e laboratoriais. Após os ensaios, o teste ELISA-18/14 apresentou sensibilidade e especificidade de 100% e mesmo em diferentes prováveis prevalências (0,1; 0,5; 1,0 e 5,0%) o VPP e o valor preditivo negativo (VPN) foram fixados também em 100%. A repetitividade das leituras do teste expressa em coeficiente de variação apresentou-se entre 16 e 18%. O teste ELISA-Tcra não demonstrou o mesmo desempenho, a especificidade foi calculada em 96,3% e o VPP variou entre 2,6 a 59,3% para prevalências de 0,1 a 5,0%; quanto à sensibilidade e VPN houve similaridade entre os resultados. O ELISATso apresentou resultados ainda menos expressivos, a especificidade foi calculada em 95,7% e o VPP variou entre 2,3 a 55% para as prevalências de 0,1 a 5,0%; essa redução na especificidade se dá pelo aumento do número de resultados falso-positivos no teste em conseqüência da expressão de proteínas de alto peso molecular. Através dos parâmetros avaliados fica notório o desempenho promissor do teste ELISA-18/14 na pesquisa de anticorpos anti-cisticercos de Taenia solium em inquéritos sorológicos da população geral. / The serum diagnosis of cyticercosis has been highlighted as an efficient alternative source in the study of the disease. With an accessability proposal , due to the expense, the ELISA´s tests are promising to the serum´s field research. This problem makes necessary the use of antigens extracts able to give the test, trusted and compatible parameters to the research of antibodies in the population of low prevalence. In this context, this current work stablished the evaluation of the ELISA´s test with a high predictive value positive(PPV) to the anti-cysticerci of Taenia solium antibodies research in a serum inquiry of the general population. The antigens tested were the 18/14 kDa protein of the vesicular liquid of T. crassiceps (18/14-Tcra), the vesicular liquid of T. crassiceps (LV-Tcra) and the total of T.solium (T-Tso). That constituted in the ELISA 18/14, ELISATcra and ELISA-Tso test respectively. There were 610 sample of serum were tested of healthy people and 20 samples of serum with confirmed neurocysticercosis by clinical and laboratorial criterias. After these tests, the ELISA´s test showed sensibility and specificity in 100% of the cases, even in different prevalences (0,1; 0,5; 1,0 and 5,0%) the VPP and the predictive value negative (VPN) were also fixed in 100%. The repetition of the test expressed in variation coefficient occurred between 16 and 18% of the cases. The ELISATcra didn´t show the same development, the specificity were calculation in 96,3% and the VPP wanted between 2,6 and 59,3% to the prevalences of 0,1 to 5,0%; there were similarities of the results of sensibility and VPP. The ELISA-Tso showed less important results the specificity was calculated in 95,7% and the VPP between 2,3 and 55,0% to the prevalences of 0,1 to 5,0%, this reduction of specificity is due to the increase of the number of false-positive results in the test because of the expression of proteins of high molecular weight. Through these parameters it´s clear the promising development of the ELISA-18/14 test, as been arbitrary in the studies of serology inquiry in the general population.

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2012-12-05T19:29:14Z No. of bitstreams: 1 Marco Antonio Araujo Silvany Avaliacao de antigenos... 2001.pdf: 74793034 bytes, checksum: af0b4fec858d7beea9f14722f79bec72 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-12-05T19:29:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Marco Antonio Araujo Silvany Avaliacao de antigenos... 2001.pdf: 74793034 bytes, checksum: af0b4fec858d7beea9f14722f79bec72 (MD5) Previous issue date: 2001 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, Bahia, Brasil / Como a leishmaniose visceral (LV) ocorre principalmente em áreas onde os serviços de saúde são pouco desenvolvidos, o seu diagnóstico baseia-se principalmente no exame clínico, podendo ela ser confundida com outras doenças. Este estudo tem como objetivo a avaliação de antígenos recombinantes (rAg) visando o desenvolvimento e a validação de um “kit” para imunodiagnóstico da leishmaniose visceral, que seja simples, barato e possa ser aplicado em condições precárias. O sistema a ser desenvolvido baseia-se no uso concomitante de múltiplas proteínas recombinantes. [MATERIAL E MÉTODOS] Vários rAg foram clonados e alguns deles foram analisados para o uso em sorodiagnóstico em 93 soros de pacientes com leishmaniose visceral, selecionados clinicamente e com diagnóstico confirmado parasitológicamente. [RESULTADOS] Um total de oito rAgs foi avaliado. Todos os soros de LV reconheceram pelo menos um dos rAgs, sendo portanto a sensibilidade do teste para o conjunto de antígenos, testados isoladamente, de 100%. A especificidade do teste para o conjunto de antígenos, avaliada bem preliminarmente em um total de 36 soros controle (de indivíduos sem leishmaniose), foi também de 100%. Nesta dissertação é descrita também uma maneira simples de identificar em bibliotecas de DNA exatamente rAgs que vão aumentar a sensibilidade de um ensaio imunodiagnóstico. / Since visceral leishmaniasis (VL) occurs in areas where health services are scarce, its diagnosis is based mainly on clinical examination, making possible it to be confounded with other diseases. The objective of this study is to evaluate recombinant antigens (rAg) aiming at developing and validating a kit for immunodiagnosis of the visceral leishmaniasis that were simple, cheap and could be put into practice under precarious CQnditions. The system to be developed is based on the concomitant use of multiple recombinant proteins. [MATERIAL AND METHODS] Several recombinant antigens have been cloned and analysed in order to be used in serodiagnosis with reference to the antibody detection in 93 sera of patients with visceral leishmaniasis, clinically selected and with diagnosis parasitologically confirmed. [RESULTS] A total of eight rAgs were evaluated. All sera of VL were recognized at least by one rAg, so that the sensitivity for the group of antigens, isolated tested, was 100%. The specificity, preliminarily evaluated in a total of 36 control sera (of individuals without leishmaniasis) was also 100%. This dissertation describes also a simple way to identify, in genetic libraries, exactly the rAgs that will increase immunoassay sensibility.

O diagnóstico sorológico da cisticercose vem se destacando como uma fonte alternativa seguramente eficaz ao estudo da doença. Com a proposta de acessibilidade, devido primordialmente a relação custo, os testes ELISA são promissores à pesquisa sorológica de campo. O problema iminente está na utilização de extratos antigênicos capazes de gerar ao teste, parâmetros compatíveis para a pesquisa de anticorpos na população de baixa prevalência. Nesse contexto, o presente trabalho objetivou a avaliação de um teste ELISA com alto valor preditivo positivo (VPP) para a pesquisa de anticorpos anti-cisticercos de Taenia solium em inquéritos sorológicos na população geral. Os antígenos ensaiados foram proteína 18/14 kDa de líquido vesicular de T. crassiceps (18/14-Tcra), liquido vesicular de T. crassiceps (LV-Tcra) e total de cisticercos de T. solium (T-Tso), respectivamente estes constituíram os testes ELISA-18/14, ELISA-Tcra e ELISA-Tso. Foram ensaiadas 610 amostras de soro de indivíduos supostamente saudáveis e 20 amostras de soro de indivíduos com neurocisticercose confirmados por critérios clínicos e laboratoriais. Após os ensaios, o teste ELISA-18/14 apresentou sensibilidade e especificidade de 100% e mesmo em diferentes prováveis prevalências (0,1; 0,5; 1,0 e 5,0%) o VPP e o valor preditivo negativo (VPN) foram fixados também em 100%. A repetitividade das leituras do teste expressa em coeficiente de variação apresentou-se entre 16 e 18%. O teste ELISA-Tcra não demonstrou o mesmo desempenho, a especificidade foi calculada em 96,3% e o VPP variou entre 2,6 a 59,3% para prevalências de 0,1 a 5,0%; quanto à sensibilidade e VPN houve similaridade entre os resultados. O ELISATso apresentou resultados ainda menos expressivos, a especificidade foi calculada em 95,7% e o VPP variou entre 2,3 a 55% para as prevalências de 0,1 a 5,0%; essa redução na especificidade se dá pelo aumento do número de resultados falso-positivos no teste em conseqüência da expressão de proteínas de alto peso molecular. Através dos parâmetros avaliados fica notório o desempenho promissor do teste ELISA-18/14 na pesquisa de anticorpos anti-cisticercos de Taenia solium em inquéritos sorológicos da população geral. / The serum diagnosis of cyticercosis has been highlighted as an efficient alternative source in the study of the disease. With an accessability proposal , due to the expense, the ELISA´s tests are promising to the serum´s field research. This problem makes necessary the use of antigens extracts able to give the test, trusted and compatible parameters to the research of antibodies in the population of low prevalence. In this context, this current work stablished the evaluation of the ELISA´s test with a high predictive value positive(PPV) to the anti-cysticerci of Taenia solium antibodies research in a serum inquiry of the general population. The antigens tested were the 18/14 kDa protein of the vesicular liquid of T. crassiceps (18/14-Tcra), the vesicular liquid of T. crassiceps (LV-Tcra) and the total of T.solium (T-Tso). That constituted in the ELISA 18/14, ELISATcra and ELISA-Tso test respectively. There were 610 sample of serum were tested of healthy people and 20 samples of serum with confirmed neurocysticercosis by clinical and laboratorial criterias. After these tests, the ELISA´s test showed sensibility and specificity in 100% of the cases, even in different prevalences (0,1; 0,5; 1,0 and 5,0%) the VPP and the predictive value negative (VPN) were also fixed in 100%. The repetition of the test expressed in variation coefficient occurred between 16 and 18% of the cases. The ELISATcra didn´t show the same development, the specificity were calculation in 96,3% and the VPP wanted between 2,6 and 59,3% to the prevalences of 0,1 to 5,0%; there were similarities of the results of sensibility and VPP. The ELISA-Tso showed less important results the specificity was calculated in 95,7% and the VPP between 2,3 and 55,0% to the prevalences of 0,1 to 5,0%, this reduction of specificity is due to the increase of the number of false-positive results in the test because of the expression of proteins of high molecular weight. Through these parameters it´s clear the promising development of the ELISA-18/14 test, as been arbitrary in the studies of serology inquiry in the general population.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-08-24T14:28:11Z No. of bitstreams: 1 Danillo de Souza Pimentel.pdf: 692533 bytes, checksum: d20efba95fdddaa64ca9fa446e842f98 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-24T14:28:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Danillo de Souza Pimentel.pdf: 692533 bytes, checksum: d20efba95fdddaa64ca9fa446e842f98 (MD5) Previous issue date: 2012-02-02 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / The goal of this study was to use geographical information system to demonstrate the spatial distribution of Canine Visceral Leishmaniasis and evaluate the clinical, serological and parasitological status of dogs with natural infection of L. infantum from Petrolina County, Pernambuco State, Brazil. Serum samples from 600 dogs were collected and were tested using commercial ELISA. The geographical coordinates of study area were acquired using a hand-held Global Position System apparatus and the geographical analysis was carried out using of ArcGIS and ArqMap software. The prevalence of canine infection was 19.20% and the disease was more prevalent in the urban than rural area. Although only 37.40% (43/115) of the seropositive dogs had clinical signs, particularly skin lesions, lymphadenopathy, weight loss and onychogryphosis. The parasitological results showed amastigotes forms of L. infantum in bone narrow, (39.53%), in lymph node (16.27%) and skin (11.62). In conclusion Canine Visceral Leishmaniasis is urbanized in Petrolina County, and human actions reflected in the endemicity of the disease canine. / O objetivo deste estudo foi de avaliar o uso do sistema de informação geográfica para verificar a distribuição espacial da leishmaniose visceral canina, além de se determinar os aspectos clínicos, sorológicos e o status parasitológico dos cães com infecção natural por Leishmania infantum procedentes do município de Petrolina, Estado de Pernambuco, Brasil. Para tanto, amostras do soro de 600 cães foram coletadas e analisadas através de um kit comercial para o teste ELISA. As coordenadas geográficas utilizadas no presente estudo referentes às áreas visitadas, foram obtidas com o auxilio de um sistema de posicionamento global manual, sendo posteriormente analisadas através dos softwares ArcGIS e ArqMap. Pode-se verificar que a prevalência da infecção canina foi de 19,20%, sendo a doença mais prevalente nas áreas urbanas do que nas áreas rurais. Contudo, vale ressaltar que apenas 37,40% (43/115) dos cães soropositivos tiveram sinais clínicos da doença, especificamente lesões de pele, linfadenopatia, perda de peso e onicogrifose. No que concerne aos resultados parasitológicos as formas amastigotas de L. infantum foram observadas em 39,53% na medula óssea, 16,27% nos linfonodos e 11,62% na pele. Sendo assim, pode-se concluir com os resultados do presente estudo que a leishmaniose visceral canina está urbanizada no município de Petrolina, e que as ações humanas refletem na endemicidade da doença no cão.

Submitted by Marlene Santos (marlene.bc.ufg@gmail.com) on 2016-08-04T19:05:43Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Émelin Alves dos Santos - 2016.pdf: 1617820 bytes, checksum: 16ea9a34990cb6d247fd464223a95256 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-08-05T12:41:27Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Émelin Alves dos Santos - 2016.pdf: 1617820 bytes, checksum: 16ea9a34990cb6d247fd464223a95256 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-05T12:41:27Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Émelin Alves dos Santos - 2016.pdf: 1617820 bytes, checksum: 16ea9a34990cb6d247fd464223a95256 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-04-04 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG / Strongyloidiasis is mainly predominant in regions of tropical and subtropical climates may present asymptomatic limited to the gastrointestinal tract. However, immunosuppression can cause hyperinfection and dissemination of larvae. Diabetes Mellitus (DM) causes immune dysregulation, became the individual more susceptible to secondary infections as strongyloidiasis. The chronicity of the disease in this group patients difficult the diagnosis, this fact conduct to research new methodologies such as circulating immune complex detections. Currently, there are few reports in literature on the evaluation immunological profile of strongyloidiasis in patients with DM and epidemiological research this disease important for monitoring the number of cases. In this context, this study had as objective determine serum levels of specific IgG antibodies and circulating immune complex in serum samples of infected patients and control individuals negative by ELISA. The survey was conducted with patients attended at the diabetes ambulatory in Jataí - GO and nondiabetic individuals residing in the city. The authorization for collect blood samples was obtained by signature Term of Informed Consent (TIC) it is characterized individuals in two groups: Group I patients with DM1 and 2, Group II individuals negative control for S. stercoralis and DM. Serum samples were tested by ELISA for detection of IgG and circulating immune complexes. We analyzed 50 serum samples from Group I and 50 in Group II, 30% were male and 70% female, for both groups. A total of 19 (38%) serum sample were positive for IgG in Group I and 2 (4%) for Group II, the majority were female age between 57 and 69 years. For detection circulating immune complexes only one sample was positive in Group I (2%) and Group II (0%). The seroprevalence of IgG anti-Strongyloides detection in diabetic patients was high when compared to the control group, detection of circulating immune complexes in Group I was low. In this context, we emphasize the importance the realization of immune complex research by ELISA as complementary tool in diagnosis of active infection S. stercoralis. / A estrongiloidíase é predominante principalmente em regiões de climas tropicais e subtropicais, podendo apresentar-se assintomática quando limitada ao trato gastrointestinal. No entanto, a imunodepressão pode levar a quadros de hiperinfecção e disseminação das larvas. O Diabetes Mellitus (DM) provoca disfunção do sistema imune, tornando o indivíduo mais susceptível a infecções secundárias, como a estrongiloidíase. A cronicidade da doença neste grupo de pacientes dificulta o seu diagnóstico, fato este que tem levado a pesquisa de novas metodologias, como a detecção de imuncomplexos circulantes. Atualmente, existem poucos relatos na literatura sobre a avaliação do perfil imunológico da estrongiloidíase em pacientes com DM, sendo a investigação epidemiológica desta doença importante para o acompanhamento do número de casos. Neste contexto, o presente estudo tem como objetivo determinar os níveis séricos de anticorpos IgG específicos e imunocomplexos circulantes em amostras de soros de pacientes infectados e de indivíduos controle negativo, por ELISA. A pesquisa foi realizada com pacientes atendidos no ambulatório de diabetes da prefeitura de Jataí - GO e indivíduos não diabéticos residentes no município. A autorização para coleta das amostras de sangue foi obtida pela assinatura do Termo de Consentimento Livre e Esclarecido (TCLE), sendo os indivíduos caracterizados em dois grupos: Grupo I pacientes portadores de DM1 e 2, Grupo II indivíduos controle negativo para S. stercoralis e DM. As amostras de soro foram testadas pela técnica imunoenzimática ELISA para detecção de IgG e imunocomplexos circulantes. Foram analisadas 50 amostras de soro do Grupo I e 50 do Grupo II, sendo que 30% eram do sexo masculino e 70% do sexo feminino, para ambos os grupos. Um total de 19 (38%) amostras de soro foram reagentes para IgG no Grupo I e 2 (4%) para o Grupo II, sendo a maioria do sexo feminino com faixa etária entre 57 e 69 anos. Para detecção de imunocomplexos circulantes, apenas uma amostra foi reagente no Grupo I (2%) e nenhuma no Grupo II (0%). A soroprevalência para detecção de IgG anti-Strongyloides em pacientes diabéticos foi elevada quando comparado ao grupo controle, enquanto que a detecção de imunocomplexos circulantes no Grupo I foi baixa. Neste contexto, ressalta-se a importância da realização da pesquisa de imunocomplexos por ELISA como ferramenta complementar para o diagnóstico da infecção ativa por S. stercoralis.

A produção de kits para diagnóstico in vitro deve ser feita seguindo-se a legislação vigente de Boas Práticas de Fabricação e Controle (BPF). O objetivo deste trabalho foi elaborar um procedimento para desenvolvimento, produção e validação de um produto para diagnóstico in vitro, de acordo com a legislação vigente. Adotamos como modelo um kit imunoenzimático para Doença de Chagas. Dentro dos requisitos de BPF, a validação é uma etapa importante, pois tem por objetivos, dentre outros: auxiliar no estabelecimento de procedimentos de produção e controle de qualidade, avaliar desvios e dimensionar possíveis erros, avaliar o desempenho quanto à utilidade médica dos resultados obtidos e estabelecer condições ideais de uso. No estabelecimento dos requisitos para validação devem-se considerar as características do método utilizado, a utilidade clínica e diagnóstica dos resultados e as condições de uso do kit. Os parâmetros para validação devem ser definidos considerando a finalidade do uso do produto. Os resultados obtidos em três lotes pilotos demonstraram que o kit pode ser utilizado tanto com soro como com plasma, as amostras podem ser congeladas e descongeladas antes do uso por até 5 ciclos, o índice de concordância com kit comercial é de 0,9 (ótimo) e o kit mantém-se estável por pelo menos 7 dias à 37ºC, o que neste trabalho foi equivalente a pelo menos um ano na sua condição ideal de armazenamento de 2 a 8ºC. Além disso, o kit apresentou 100% de sensibilidade, 99% de especificidade, com coeficiente de variação 15,2% tanto na repetitividade como na reprodutibilidade de amostras positivas. Quanto à análise de interferentes, amostras hemolisadas e a presença de fator reumatóide podem interferir nos resultados e anticorpos anti-Leishmania na amostra podem dar reação cruzada. Conclui-se que o procedimento elaborado e o kit desenvolvido e validado atenderam aos requisitos pré-estabelecidos, de acordo com as regras de BPF vigentes. / The production of an in vitro diagnostic kit should be done following current Good Manufacturing Practices (GMP). The objective of this work was to establish a procedure for the development, production and validation of an in vitro diagnostic product in accordance with current regulations governing Medical Devices. An enzyme-linked immunoassay kit for Chagas\' disease was used as a model. Validation is a very important step contained within GMP requirements. Validation provides documented evidence that processes and product batches are consistent, it aids in the establishment of production and quality control procedures, evaluate deviations and identify possible mistakes, evaluate the performance and medical usefulness of the product based on the obtained results, and establish ideal conditions of use and storage. In order to establish validation requirements for product development, it is necessary to consider the characteristics of the assay method, the clinical and diagnostic usefulness of the results and the conditions of use of the kit. The parameters for validation should be defined considering the purpose of the use of the product. In the case of this Chagas assay, results obtained in three pilot lots demonstrated that the kit could be used with both serum and plasma, samples could be frozen and thawed before use for up to 5 cycles. The agreement index when compared with a commercially licensed kit is 0,9 (optimum correlation). The kit remained stable for at least 7 days at 37ºC, which is equivalent to at least one year stability in its ideal storage condition of 2 to 8ºC. The kit presented 100% sensitivity and 99% specificity, with variation coefficient of 15,2% for both repeatability and reproducibility of the positive samples. Interference analysis indicated that: hemolyzed samples and the presence of reumathoid factor could interfere with test results. Antibodies anti-Leishmania in the test sample can cross react with T. cruzi proteins. In conclusion: the established procedure for development and validation of chagas kit, and the actual developed and validated kit are in accordance with pre-established current GMP requirements.