Sete suínos com 2 meses de idade foram infectados experimentalmente com cerca de 200.000 ovos de T. solium administrados por via oral. Ao término do experimento (140 dias) os animais não apresentaram aspectos clínicos de cisticercose pelo exame de inspeção da língua; portanto eles poderiam ser classificados como animais saudáveis pelos exames usuais de inspeção utilizados em matadouros. Todos os animais foram sacrificados e a musculatura, cérebro e órgãos viscerais foram seccionados em finos pedaços para a procura de cistos. O número de cisticercos encontrados em cada animal variou de 1 a 85 (média 33,7 e desvio padrão 31,3), caracterizando-os como animais com infecção branda. Amostras de sangue dos animais infectados experimentalmente foram submetidas a imunoensaios para a pesquisa de anticorpos (ELISA Indireto, utilizando como antígeno o líquido vesicular de Taenia crassiceps; imunoblot 18/14, oriundo de antígeno de Taenia crassiceps purificado com anticorpos monoclonais e imunoblot LLGP, utilizando glicoproteínas de T. solium purificadas com lentil lectina) e para pesquisa de antígeno (ELISA Sanduíche e ELISA Direto, ambos utilizando o anticorpo monoclonal anti-ES-Tcra). O teste ELISA Direto não apresentou reatividade em qualquer amostra de soro dos diferentes animais infectados no momento do abate (t140). Foi encontrada positividade de 71% e 57%, respectivamente, para os testes ELISA Indireto para a pesquisa de anticorpos e ELISA Sanduíche para a pesquisa de antígenos nestes tempos. Pelo imunoblot (IB) 18/14 e IB LLGP, respectivamente 5 (71 %) e 6 (86%) dos animais infectados experimentalmente foram positivos no t140. O uso de ensaios imunoenzimáticos para a detecção de anticorpos específicos (IB) somados ao ELISA Sanduíche para pesquisa de antígeno permitiu que todos os animais com infecção branda fossem detectados. Dessa forma, o uso de ensaios imunoenzimáticos para detecção de anticorpos e/ou antígenos mostrou-se mais útil que o exame clínico e/ou post-mortem para a triagem de cisticercose suína em animais com infecção branda. / Seven 2-month-old swine were orally experimentally infected with approximately 200,000 eggs of Taenia solium. At the end of the experiment (140 days) the animals did not show clinical aspects of cysticercosis or parasites in tongue inspection; therefore they could be mistaken as healthy animals by usual inspection exams used in slaughterhouses. All of them were slaughtered and their whole muscles, brain and visceral organs were cut into thin slices searching for cysts. The number of cysts found in each animal varies from 1 to 85 (mean value 33.7 and standard deviation 31.3) characterizing them as slightly infected animals. Blood samples of experimentally infected animals were submitted to immunoassays for antibody detection (Indirect ELISA, using vesicular fluid antigen from Taenia crassiceps; immunoblot 18/14, from T.crassiceps antigen purified by monoclonal antibodies and immunoblot LLGP, using lentil lectin purified glycoproteins of T. solium) and for antigen detection (Sandwich ELISA and Direct ELISA, both using monoclonal antibodies anti-ES-Tcra). The Direct ELISA assay did not show any reactivity with all serum samples from the different animals at the slaughtered moment (t140). The positivity was 71% and 57% by the Indirect ELISA for searching antibodies and by the Sandwich ELISA for searching antigens, respectively. By immunoblot (IB) 18/14 and IB LLGP 5 (71 %) and 6 (86%) experimentally infected animals were positive at t140, respectively. The use of immunoassays for detecting specific antibodies (IB) together with Sandwich ELISA for antigen detection allow the detection of all slightly infected animals. Thus, the use of immunoassays for antibodies and/or antigen detection showed they are more useful than usual clinical examination and/or tongue palpation for screening cysticercosis in slightly infected pigs.

O consumo abusivo de substâncias psicoativas é um problema de saúde pública, sendo as análises toxicológicas uma importante ferramenta para seu controle. Atualmente, o cabelo está entre as mais utilizadas matrizes biológicas para análise de substâncias psicoativas, devido principalmente ao seu amplo período de deteção. As análises toxicológicas de drogas de abuso podem ser conduzidas através de técnicas de triagem seguidas por técnicas confirmatórias para os resultados positivos. No presente trabalho, foi avaliada a adaptação do método de triagem para substâncias psicoativas em cabelo a partir do kit para imunoensaio em sangue DOA I WB P com a tecnologia Biochip - Randox Laboratórios®. As análises foram realizadas para as classes das anfetaminas, benzodiazepínicos, barbitúricos, cocaína, opiáceos e canabinoides. Os ensaios imunológicos seguiram a partir da análise de amostras reais, adicionadas e artificiais sendo todas previamente confirmadas por técnica de cromatografia em fase gasosa acoplada à espectrometria de massas (GC-MS). Pelos resultados obtidos pôde-se observar que o kit não apresenta capacidade de analisar a classe de canabinoides. Já para os opiáceos, barbitúricos e anfetamina a aplicação do imunoensaio se mostrou promissora, entretanto a falta de amostras reais positivas impossibilitou a validação do método. Para cocaína, possíveis fontes de contaminação podem ter alterado os resultados impossibilitando a sua avaliação. Benzodiazepínicos, MDMA e metanfetamina apresentaram efeito matriz significativo, não havendo diferenciação entre amostras positivas e negativas. Desta forma, a validação e aplicação do método de imunoensaio para amostras de cabelo não foi possível devido ao elevado efeito de matriz apresentado pelo kit e a falta de amostras reais positivas impossibilitando a validação de parâmetros como sensibilidade, especificidade e exatidão. / The abuse of psychoactive substances is a public health problem and toxicological analysis is an important tool for its control. Currently, hair is among the most widely used biological matrices psychoactive substance analysis, mainly for its detection window. The toxicological analysis of drugs of abuse may be conduted by screening techniques followed by confirmation techniques for positive results. In the present work, an adaptation of a screening method for psychoactive substances in hair was evaluated from the DOA I WB P blood immunoassay kit with a Biochip - Randox Laboratories® technology. The analysis were performed for the drug classes of amphetamines, benzodiazepines, barbiturates, cocaine, opiates and cannabinoids. The immunological assays followed the analysis of real, spiked and artificial samples that have been previously confirmed by gas chromatography coupled to mass spectrometry (GC-MS) technique. From the results obtained it was observed that the kit does not sufficient capacity for analysis of cannabinoids. As for opiates, barbiturates and amphetamines, the immunoassay application proved to be promising. However, a lack of real samples made it impossible to validate the method. For cocaine, finding sources of contamination may have altered the results, making it impossible to evaluate. Benzodiazepines, MDMA and methamphetamine showed significant matrix effect, with no difference between positive and negative samples. Thus, a validation and application of the immunoassay method for hair samples was not possible due to the high matrix effect for the kit and a lack of actual samples making it extremely difficult to validate parameters such as sensitivity, specificity and accuracy.

A toxoplasmose é uma infecção que pode causar graves lesões fetais quando adquirida durante a gestação. O diagnóstico é sobretudo sorológico e deve ser feito por acompanhamento mensal em gestantes soronegativas, que tem aumentado nos últimos anos. A triagem sorológica para estas gestantes demanda metodologias de alto desempenho e eficiência, que permitam a introdução rápida do tratamento evitando a doença. Para este fim, desenvolvemos um ensaio sorológico fluorescente de fase sólida para a detecção conjunta de IgG, IgM e IgA contra Toxoplasma gondii (FISAt). Nosso grupo tem desenvolvido novos testes fluorimétricos de fase sólida com conjugados fluorescentes refinados sensíveis e específicos com possibilidade de detecções simultâneas numa mesma reação. Para a construção do FISAt, foram selecionados e produzidos conjugados marcados com fluorocromos de emissão não interferente, com alta eficiência e similares à reatividade de conjugados comerciais enzimáticos. Esta seleção de conjugados fluorescentes detectados com filtros de excitação e emissão adequados permitiram um aumento da intensidade do sinal de fluorescência e maior discriminação entre soros positivos e negativos. A reação foi realizada com extrato total de T. gondii adsorvido em fase sólida e para o controle positivo das reações, utilizamos a adsorção de classes de imunoglobulinas purificadas, evitando o uso de raros soros positivos controles. A validação do FISAt foi feita com 500 amostras de soro em sua maioria gestantes do HCFMUSP previamente analisadas por ensaios comerciais realizados em outro laboratório (Elecsys Toxo IgG/IgM, e IFAT IgM) ou ELISA IgG/IgM/IgA. Comparado com o Elecsys Toxo IgG/IgM, o FISAt IgG mostrou boa concordância (Kappa=0.77), com sensibilidade de 76.2% e especificidade de 96.8%, enquanto que o FISAt IgM mostrou boa concordância (Kappa=0.63), menor sensibilidade de 62.1% e especificidade de 97.6%. O FISAt foi mais concordante com o ELISA tanto na detecção de IgG, quanto de IgM anti-T. gondii (Kappa>70%), com maior sensibilidade de 82% e similar especificidade. E o FISAt IgA obteve excelente concordância com o ELISA (Kappa=0.77), com sensibilidade de 92.0% e especificidade de 98.3%. Em comparação com o método confirmatório IFAT IgM, o FISAt IgM mostrou sensibilidade de 100% e especificidade de 94.6%. Das 420 gestantes, 0.7% obtiveram resultado de baixa avidez de anticorpos IgG anti-T. gondii e foram identificadas na triagem como IgG, IgM e/ou IgA positivas em todos os testes avaliados, mostrando a eficiência discriminante do FISAt. O FISAt mostrou excelente reprodutibilidade (r2>0.82) e alto rendimento na triagem de grande número de amostras. Este novo teste múltiplo rápido e de detecção quantitativa pode ser usado em sistemas robóticos e tem uma aplicabilidade essencial para a triagem e tratamento de gestantes em risco de toxoplasmose congênita, ou para outras abordagens diagnosticas de alto volume de amostras. / Toxoplasmosis is an infection that can cause serious fetal damage when obtained during pregnancy. The diagnosis is mainly serological and should be done monthly monitoring seronegative pregnant women, which has increased in recent years. The serological screening for these pregnant women demands high performance and efficiency methodologies which allow the rapid introduction of the treatment avoiding the disease manifestation. With this in mind, our goal was to develop a solid phase fluorescent serological assay for IgG, IgM and IgA detection against Toxoplasma gondii (FISAt). Our group has been develop new solid phase fluorimetric assays with sensitive and specific refined fluorescent conjugates with the possibility of simultaneous detection in the same reaction. For the construction of the FISAt, conjugates labeled with non-interfering emission fluorochromes were designed and produced with high efficiency and similar reactivity of enzymatic commercial conjugates. This design of conjugates with suitable filters generated an increase in fluorescence intensity with a higher signal between positives and negatives sera. The reaction was made with total extract of T. gondii adsorbed solid phase. Also, for the positive control of the reactions, we have used the adsorption of purified classes of immunoglobulins, avoiding the use of rare positive control sera. FISAt validation was performed with 500 serum samples, mostly from HCFMUSP pregnant women previously analyzed by commercial tests (Elecsys Toxo IgG/IgM, and IFAT IgM) or ELISA IgG/IgM/IgA. In comparation to Elecsys Toxo IgG/IgM, FISAt IgG has shown excellent agreement (Kappa=0.77), with a sensitivity of 76.2% and specificity of 96.8%, whereas IgM FISAt has shown a good agreement (Kappa=0.63), with a lower sensitivity (62.1%) and similar specificity (97.6%). FISAt was more consistent with ELISA in both anti-T. gondii IgG and IgM detection (Kappa> 70%), with greater sensitivity (82%) and similar specificity. FISAt IgA obtained excellent agreement with the ELISA (Kappa = 0.77), showing 92.0% of sensitivity and 98.3% of specificity. In comparison with the IFAT IgM confirmatory method, FISAt IgM showed excellent sensitivity of 100% and specificity of 94.6%. Amongst 420 pregnant women, 0.7% had a low avidity anti-T. gondii IgG antibody result and were identified in the screening as IgG, IgM and/or IgA positive in all the evaluated tests, showing the discriminant efficiency of the FISAt. FISAt showed excellent reproducibility (r2>0.82) and a great income for high throughput screening. This new rapid and quantitative multiple detection assay can be used in robotic systems and has an essential applicability for screening and treatment of pregnant women at congenital toxoplasmosis risk, as well as for others diagnostic approaches of high volume samples.

O consumo abusivo de substâncias psicoativas é um problema de saúde pública, sendo as análises toxicológicas uma importante ferramenta para seu controle. Atualmente, o cabelo está entre as mais utilizadas matrizes biológicas para análise de substâncias psicoativas, devido principalmente ao seu amplo período de deteção. As análises toxicológicas de drogas de abuso podem ser conduzidas através de técnicas de triagem seguidas por técnicas confirmatórias para os resultados positivos. No presente trabalho, foi avaliada a adaptação do método de triagem para substâncias psicoativas em cabelo a partir do kit para imunoensaio em sangue DOA I WB P com a tecnologia Biochip - Randox Laboratórios®. As análises foram realizadas para as classes das anfetaminas, benzodiazepínicos, barbitúricos, cocaína, opiáceos e canabinoides. Os ensaios imunológicos seguiram a partir da análise de amostras reais, adicionadas e artificiais sendo todas previamente confirmadas por técnica de cromatografia em fase gasosa acoplada à espectrometria de massas (GC-MS). Pelos resultados obtidos pôde-se observar que o kit não apresenta capacidade de analisar a classe de canabinoides. Já para os opiáceos, barbitúricos e anfetamina a aplicação do imunoensaio se mostrou promissora, entretanto a falta de amostras reais positivas impossibilitou a validação do método. Para cocaína, possíveis fontes de contaminação podem ter alterado os resultados impossibilitando a sua avaliação. Benzodiazepínicos, MDMA e metanfetamina apresentaram efeito matriz significativo, não havendo diferenciação entre amostras positivas e negativas. Desta forma, a validação e aplicação do método de imunoensaio para amostras de cabelo não foi possível devido ao elevado efeito de matriz apresentado pelo kit e a falta de amostras reais positivas impossibilitando a validação de parâmetros como sensibilidade, especificidade e exatidão. / The abuse of psychoactive substances is a public health problem and toxicological analysis is an important tool for its control. Currently, hair is among the most widely used biological matrices psychoactive substance analysis, mainly for its detection window. The toxicological analysis of drugs of abuse may be conduted by screening techniques followed by confirmation techniques for positive results. In the present work, an adaptation of a screening method for psychoactive substances in hair was evaluated from the DOA I WB P blood immunoassay kit with a Biochip - Randox Laboratories® technology. The analysis were performed for the drug classes of amphetamines, benzodiazepines, barbiturates, cocaine, opiates and cannabinoids. The immunological assays followed the analysis of real, spiked and artificial samples that have been previously confirmed by gas chromatography coupled to mass spectrometry (GC-MS) technique. From the results obtained it was observed that the kit does not sufficient capacity for analysis of cannabinoids. As for opiates, barbiturates and amphetamines, the immunoassay application proved to be promising. However, a lack of real samples made it impossible to validate the method. For cocaine, finding sources of contamination may have altered the results, making it impossible to evaluate. Benzodiazepines, MDMA and methamphetamine showed significant matrix effect, with no difference between positive and negative samples. Thus, a validation and application of the immunoassay method for hair samples was not possible due to the high matrix effect for the kit and a lack of actual samples making it extremely difficult to validate parameters such as sensitivity, specificity and accuracy.

Sete suínos com 2 meses de idade foram infectados experimentalmente com cerca de 200.000 ovos de T. solium administrados por via oral. Ao término do experimento (140 dias) os animais não apresentaram aspectos clínicos de cisticercose pelo exame de inspeção da língua; portanto eles poderiam ser classificados como animais saudáveis pelos exames usuais de inspeção utilizados em matadouros. Todos os animais foram sacrificados e a musculatura, cérebro e órgãos viscerais foram seccionados em finos pedaços para a procura de cistos. O número de cisticercos encontrados em cada animal variou de 1 a 85 (média 33,7 e desvio padrão 31,3), caracterizando-os como animais com infecção branda. Amostras de sangue dos animais infectados experimentalmente foram submetidas a imunoensaios para a pesquisa de anticorpos (ELISA Indireto, utilizando como antígeno o líquido vesicular de Taenia crassiceps; imunoblot 18/14, oriundo de antígeno de Taenia crassiceps purificado com anticorpos monoclonais e imunoblot LLGP, utilizando glicoproteínas de T. solium purificadas com lentil lectina) e para pesquisa de antígeno (ELISA Sanduíche e ELISA Direto, ambos utilizando o anticorpo monoclonal anti-ES-Tcra). O teste ELISA Direto não apresentou reatividade em qualquer amostra de soro dos diferentes animais infectados no momento do abate (t140). Foi encontrada positividade de 71% e 57%, respectivamente, para os testes ELISA Indireto para a pesquisa de anticorpos e ELISA Sanduíche para a pesquisa de antígenos nestes tempos. Pelo imunoblot (IB) 18/14 e IB LLGP, respectivamente 5 (71 %) e 6 (86%) dos animais infectados experimentalmente foram positivos no t140. O uso de ensaios imunoenzimáticos para a detecção de anticorpos específicos (IB) somados ao ELISA Sanduíche para pesquisa de antígeno permitiu que todos os animais com infecção branda fossem detectados. Dessa forma, o uso de ensaios imunoenzimáticos para detecção de anticorpos e/ou antígenos mostrou-se mais útil que o exame clínico e/ou post-mortem para a triagem de cisticercose suína em animais com infecção branda. / Seven 2-month-old swine were orally experimentally infected with approximately 200,000 eggs of Taenia solium. At the end of the experiment (140 days) the animals did not show clinical aspects of cysticercosis or parasites in tongue inspection; therefore they could be mistaken as healthy animals by usual inspection exams used in slaughterhouses. All of them were slaughtered and their whole muscles, brain and visceral organs were cut into thin slices searching for cysts. The number of cysts found in each animal varies from 1 to 85 (mean value 33.7 and standard deviation 31.3) characterizing them as slightly infected animals. Blood samples of experimentally infected animals were submitted to immunoassays for antibody detection (Indirect ELISA, using vesicular fluid antigen from Taenia crassiceps; immunoblot 18/14, from T.crassiceps antigen purified by monoclonal antibodies and immunoblot LLGP, using lentil lectin purified glycoproteins of T. solium) and for antigen detection (Sandwich ELISA and Direct ELISA, both using monoclonal antibodies anti-ES-Tcra). The Direct ELISA assay did not show any reactivity with all serum samples from the different animals at the slaughtered moment (t140). The positivity was 71% and 57% by the Indirect ELISA for searching antibodies and by the Sandwich ELISA for searching antigens, respectively. By immunoblot (IB) 18/14 and IB LLGP 5 (71 %) and 6 (86%) experimentally infected animals were positive at t140, respectively. The use of immunoassays for detecting specific antibodies (IB) together with Sandwich ELISA for antigen detection allow the detection of all slightly infected animals. Thus, the use of immunoassays for antibodies and/or antigen detection showed they are more useful than usual clinical examination and/or tongue palpation for screening cysticercosis in slightly infected pigs.

O hormônio anti-Mülleriano (AMH) é um marcador de reserva ovariana e função testicular. A aplicação clínica desse hormônio requer padronização adequada de valores de referência, de acordo com o imunoensaio utilizado. Os objetivos deste estudo foram: validar o imunoensaio AMH Gen II (Beckman Coulter Company, TX, USA), estabelecer valores normais de AMH em homens e mulheres saudáveis, avaliar a influência do uso de contraceptivos hormonais, tabagismo e índice de massa corpórea (IMC) sobre os valores de AMH e verificar as concentrações séricas desse hormônio em pacientes com síndrome de Turner (ST), síndrome dos ovários policísticos (SOP) e em meninos com criptorquidismo submetidos ao teste de estímulo com rhCG (gonadotrofina coriônica humana recombinante). A validação do ensaio AMH Gen II foi realizada utilizando protocolo simplificado, conforme as recomendações do Clinical and Laboratory Standards Institute. Para estabelecer valores normais de AMH, 133 mulheres e 135 homens saudáveis foram selecionados prospectivamente. Além disso, 66 pacientes com ST, 29 com SOP e 31 com criptorquidismo foram estudados. A sensibilidade analítica e funcional do ensaio AMH Gen II foram 0,02 e 0,2 ng/mL, respectivamente. Os coeficientes de variação intra e interensaio variaram entre 5,2% - 9,0% e 4,6% - 7,8% em diferentes concentrações, respectivamente. A linearidade, paralelismo e estabilidade das amostras apresentaram percentual de recuperação entre 80% - 120%. O ensaio AMH Gen II correlacionou-se fortemente com o ensaio Immunotech anteriormente utilizado (r = 0,9; p < 0,001). No sexo feminino, os valores séricos de AMH demonstraram declínio progressivo com o aumento da idade (r = -0,4; p < 0,001). Por outro lado, os valores de AMH não diferiram entre usuárias e não usuárias de contraceptivos hormonais, entre tabagistas e não tabagistas, bem como entre mulheres obesas e não obesas. No sexo masculino, a idade não influenciou as concentrações séricas de AMH; no entanto, os valores de AMH foram significativamente reduzidos com o aumento do IMC (r = -0,3, p = 0,008), contudo, esses valores permaneceram dentro do intervalo observado no grupo de indivíduos com peso normal. Todas as pacientes com ST apresentaram valores indetectáveis de AMH. Em contraste, na SOP as concentrações de AMH foram significativamente maiores do que nos controles femininos, mas com 76% de sobreposição entre os dois grupos. Em meninos com criptorquidismo, a concordância entre os valores basais de AMH e a testosterona pósestímulo com rhCG foi de 74%, houve correlação positiva significativa entre os valores basais de AMH e a testosterona pós-estímulo (r = 0,5; p < 0,001). Em conclusão, o ensaio AMH Gen II é confiável para a determinação sérica do AMH. Valores normativos de AMH apresentaram ampla faixa de normalidade em ambos os sexos. Valores reduzidos de AMH em homens obesos encontraram-se dentro da faixa de indivíduos normais. Na ST, o potencial uso do AMH para avaliar a reserva ovariana exige estudos longitudinais. A utilização do AMH como um critério diagnóstico da SOP deve ser associada aos critérios já estabelecidos. Em meninos com criptorquidismo, um AMH normal provê informação útil sobre a função testicular, mas não exclui a necessidade do teste de estímulo com rhCG e pacientes com resultados discordantes necessitam de acompanhamento clínico / The anti-Müllerian hormone (AMH) is a marker of ovarian reserve and testicular function. The clinical application of this hormone requires proper standardization of reference values according to the immunoassay used. The aims of this study were: to validate the AMH Gen II immunoassay (Beckman Coulter Company, TX, USA), to establish reference AMH values in healthy men and women, the influence of hormonal contraceptive use, smoking and body mass index (BMI) on the values of AMH and to check serum concentrations of this hormone in patients with Turner syndrome (TS), polycystic ovary syndrome (PCOS) and in boys with cryptorchidism underwent stimulation test rhCG (recombinant human chorionic gonadotropin).The validation of the AMH Gen II assay was performed using simplified protocol following the recommendations of the Clinical and Laboratory Standards Institute. To establish reference AMH values, 133 healthy women and 135 men were prospectively selected. In addition, 66 patients with TS, 29 with PCOS and 31 with cryptorchidism were studied. The analytical and functional sensitivity of the AMH Gen II assay was 0.02 and 0.2 ng / mL, respectively. Intra and inter-assay coefficients of variation in different concentrations ranged between 5.2-9.0% and 4.6-7.8%, respectively. The linearity, parallelism and stability studies showed recovery % between 80 and 120%. The AMH Gen II assay strongly correlated with the previously used Immunotech assay (r = 0.9, p < 0.001). In females, serum AMH showed a progressive decline with increasing age (r = -0.4, p < 0.001). On the other hand, AMH values did not differ between users and nonusers of hormonal contraceptives, smokers and nonsmokers, obese and non-obese. In males, age did not influence the levels of serum AMH, however, AMH values were significantly reduced with increasing BMI (r = -0.3, p = 0.008), but, these values were within the range observed in the group of subjects with body weight. All TS patients showed undetectable AMH levels. In contrast, in PCOS AMH values were significantly higher than in women controls, but with overlap of 76% between the two groups. In boys with cryptorchidism, the concordance between baseline AMH and testosterone after stimulation with rhCG was 74%, there was a significant positive correlation between baseline AMH values and testosterone values after stimulation (r = 0.5, p < 0.001). In conclusion, AMH Gen II assay is reliable for determining the serum AMH. Reference AMH values showed a wide range in both sexes. Reduced values of AMH in obese men were within the range of normal individuals. In ST, the potential use of AMH to assess ovarian reserve requires longitudinal studies. The use of AMH as a diagnostic criterion of SOP must be based on the association with the criteria already established. In boys with cryptorchidism, a normal AMH provides useful information on testicular function, but does not exclude the need for stimulation test rhCG, patients with discordant results require follow-up

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O hormônio anti-Mülleriano (AMH) é um marcador de reserva ovariana e função testicular. A aplicação clínica desse hormônio requer padronização adequada de valores de referência, de acordo com o imunoensaio utilizado. Os objetivos deste estudo foram: validar o imunoensaio AMH Gen II (Beckman Coulter Company, TX, USA), estabelecer valores normais de AMH em homens e mulheres saudáveis, avaliar a influência do uso de contraceptivos hormonais, tabagismo e índice de massa corpórea (IMC) sobre os valores de AMH e verificar as concentrações séricas desse hormônio em pacientes com síndrome de Turner (ST), síndrome dos ovários policísticos (SOP) e em meninos com criptorquidismo submetidos ao teste de estímulo com rhCG (gonadotrofina coriônica humana recombinante). A validação do ensaio AMH Gen II foi realizada utilizando protocolo simplificado, conforme as recomendações do Clinical and Laboratory Standards Institute. Para estabelecer valores normais de AMH, 133 mulheres e 135 homens saudáveis foram selecionados prospectivamente. Além disso, 66 pacientes com ST, 29 com SOP e 31 com criptorquidismo foram estudados. A sensibilidade analítica e funcional do ensaio AMH Gen II foram 0,02 e 0,2 ng/mL, respectivamente. Os coeficientes de variação intra e interensaio variaram entre 5,2% - 9,0% e 4,6% - 7,8% em diferentes concentrações, respectivamente. A linearidade, paralelismo e estabilidade das amostras apresentaram percentual de recuperação entre 80% - 120%. O ensaio AMH Gen II correlacionou-se fortemente com o ensaio Immunotech anteriormente utilizado (r = 0,9; p < 0,001). No sexo feminino, os valores séricos de AMH demonstraram declínio progressivo com o aumento da idade (r = -0,4; p < 0,001). Por outro lado, os valores de AMH não diferiram entre usuárias e não usuárias de contraceptivos hormonais, entre tabagistas e não tabagistas, bem como entre mulheres obesas e não obesas. No sexo masculino, a idade não influenciou as concentrações séricas de AMH; no entanto, os valores de AMH foram significativamente reduzidos com o aumento do IMC (r = -0,3, p = 0,008), contudo, esses valores permaneceram dentro do intervalo observado no grupo de indivíduos com peso normal. Todas as pacientes com ST apresentaram valores indetectáveis de AMH. Em contraste, na SOP as concentrações de AMH foram significativamente maiores do que nos controles femininos, mas com 76% de sobreposição entre os dois grupos. Em meninos com criptorquidismo, a concordância entre os valores basais de AMH e a testosterona pósestímulo com rhCG foi de 74%, houve correlação positiva significativa entre os valores basais de AMH e a testosterona pós-estímulo (r = 0,5; p < 0,001). Em conclusão, o ensaio AMH Gen II é confiável para a determinação sérica do AMH. Valores normativos de AMH apresentaram ampla faixa de normalidade em ambos os sexos. Valores reduzidos de AMH em homens obesos encontraram-se dentro da faixa de indivíduos normais. Na ST, o potencial uso do AMH para avaliar a reserva ovariana exige estudos longitudinais. A utilização do AMH como um critério diagnóstico da SOP deve ser associada aos critérios já estabelecidos. Em meninos com criptorquidismo, um AMH normal provê informação útil sobre a função testicular, mas não exclui a necessidade do teste de estímulo com rhCG e pacientes com resultados discordantes necessitam de acompanhamento clínico / The anti-Müllerian hormone (AMH) is a marker of ovarian reserve and testicular function. The clinical application of this hormone requires proper standardization of reference values according to the immunoassay used. The aims of this study were: to validate the AMH Gen II immunoassay (Beckman Coulter Company, TX, USA), to establish reference AMH values in healthy men and women, the influence of hormonal contraceptive use, smoking and body mass index (BMI) on the values of AMH and to check serum concentrations of this hormone in patients with Turner syndrome (TS), polycystic ovary syndrome (PCOS) and in boys with cryptorchidism underwent stimulation test rhCG (recombinant human chorionic gonadotropin).The validation of the AMH Gen II assay was performed using simplified protocol following the recommendations of the Clinical and Laboratory Standards Institute. To establish reference AMH values, 133 healthy women and 135 men were prospectively selected. In addition, 66 patients with TS, 29 with PCOS and 31 with cryptorchidism were studied. The analytical and functional sensitivity of the AMH Gen II assay was 0.02 and 0.2 ng / mL, respectively. Intra and inter-assay coefficients of variation in different concentrations ranged between 5.2-9.0% and 4.6-7.8%, respectively. The linearity, parallelism and stability studies showed recovery % between 80 and 120%. The AMH Gen II assay strongly correlated with the previously used Immunotech assay (r = 0.9, p < 0.001). In females, serum AMH showed a progressive decline with increasing age (r = -0.4, p < 0.001). On the other hand, AMH values did not differ between users and nonusers of hormonal contraceptives, smokers and nonsmokers, obese and non-obese. In males, age did not influence the levels of serum AMH, however, AMH values were significantly reduced with increasing BMI (r = -0.3, p = 0.008), but, these values were within the range observed in the group of subjects with body weight. All TS patients showed undetectable AMH levels. In contrast, in PCOS AMH values were significantly higher than in women controls, but with overlap of 76% between the two groups. In boys with cryptorchidism, the concordance between baseline AMH and testosterone after stimulation with rhCG was 74%, there was a significant positive correlation between baseline AMH values and testosterone values after stimulation (r = 0.5, p < 0.001). In conclusion, AMH Gen II assay is reliable for determining the serum AMH. Reference AMH values showed a wide range in both sexes. Reduced values of AMH in obese men were within the range of normal individuals. In ST, the potential use of AMH to assess ovarian reserve requires longitudinal studies. The use of AMH as a diagnostic criterion of SOP must be based on the association with the criteria already established. In boys with cryptorchidism, a normal AMH provides useful information on testicular function, but does not exclude the need for stimulation test rhCG, patients with discordant results require follow-up

A Cannabis sativa L., conhecida popularmente no Brasil como maconha, tem sido apontada como a droga de uso ilícito de maior consumo no mundo contemporâneo. As análises toxicológicas utilizadas para verificar o seu uso vem ganhando cada vez maior importância em diversos ambientes de trabalho, desportivos, prisões, clínicas para tratamento de farmacodependência, centros de emergência toxicológica, enfermarias de psiquiatria, entre outros. A presença de canabinóides na urina indica o uso de produtos derivados da planta Cannabis. A maioria dos estudos encontrados na literatura especializada se refere ao perfil de eliminação do 11-nor-&#916 9-THC-COOH, principal produto de biotransformação do &#916 9-THC, que, dependendo da sensibilidade e especificidade da técnica analítica utilizada, poderá ser detectado a longo prazo na urina. Uma constante preocupação é determinar o período de detecção, ou seja, o tempo transcorrido desde a interrupção do uso da droga até a obtenção do primeiro resultado negativo na urina. Este trabalho teve como objetivo investigar o período de detecção de canabinóides urinários em uma população usuária de Cannabis, residentes em uma clínica de tratamento, pela técnica de imunofluorescência polarizada, considerando 50 ng/mL como valor de referência. Foi avaliada a influência do padrão de uso da droga no período de detecção de canabinóides. Entre os pacientes estudados, o período de detecção foi de grande variação: de 33 a 498 horas. Não houve correlação estatística relevante entre o período de detecção e as variáveis freqüência de uso, tempo total de utilização e quantidade de cigarros utilizada na última exposição. / The marijuana, one of the products originated from the Cannabis sativa L., is the illicit used drug of major consume in the world. The toxicological analysis to verify the use of the drug are increasing importance in several workplaces drug-testing programs, sportive, prisions, drug treatment and rehabilitation clinics, emergency toxicology departments and other. The cannabinoids in urine indicates the exposition of products originated from the Cannabis. An important concern is to determine the detection times of cannabinoids in urine i.e. the time from the use of the drug until the first negative result. Most of the studies in the speciallized literature report the elimination profile of the 11-nor-9-carboxy- &#916 9-tetrahydrocannabinol (THCCOOH), which the primary cannabinoid metabolite. According to those studies, the urinary cannabinoids detection times can be made for a long time depending on the sensibility and accuracy of the methods used. The purpose of this work was estudy the detection time of the urinary cannabinoids in the marijuana users population after drug abstaining, by FPIA, using a 50ng/mL cutoff. The pattern in drug use influence on the urinary cannabinoids detection times was evaluated. The detection time in the studied population ranged from 33 to 498 hours. The statistic correlation between the detection time and the drug use pattern was not significant (p&#8804 0,05).

A Cannabis sativa L., conhecida popularmente no Brasil como maconha, tem sido apontada como a droga de uso ilícito de maior consumo no mundo contemporâneo. As análises toxicológicas utilizadas para verificar o seu uso vem ganhando cada vez maior importância em diversos ambientes de trabalho, desportivos, prisões, clínicas para tratamento de farmacodependência, centros de emergência toxicológica, enfermarias de psiquiatria, entre outros. A presença de canabinóides na urina indica o uso de produtos derivados da planta Cannabis. A maioria dos estudos encontrados na literatura especializada se refere ao perfil de eliminação do 11-nor-&#916 9-THC-COOH, principal produto de biotransformação do &#916 9-THC, que, dependendo da sensibilidade e especificidade da técnica analítica utilizada, poderá ser detectado a longo prazo na urina. Uma constante preocupação é determinar o período de detecção, ou seja, o tempo transcorrido desde a interrupção do uso da droga até a obtenção do primeiro resultado negativo na urina. Este trabalho teve como objetivo investigar o período de detecção de canabinóides urinários em uma população usuária de Cannabis, residentes em uma clínica de tratamento, pela técnica de imunofluorescência polarizada, considerando 50 ng/mL como valor de referência. Foi avaliada a influência do padrão de uso da droga no período de detecção de canabinóides. Entre os pacientes estudados, o período de detecção foi de grande variação: de 33 a 498 horas. Não houve correlação estatística relevante entre o período de detecção e as variáveis freqüência de uso, tempo total de utilização e quantidade de cigarros utilizada na última exposição. / The marijuana, one of the products originated from the Cannabis sativa L., is the illicit used drug of major consume in the world. The toxicological analysis to verify the use of the drug are increasing importance in several workplaces drug-testing programs, sportive, prisions, drug treatment and rehabilitation clinics, emergency toxicology departments and other. The cannabinoids in urine indicates the exposition of products originated from the Cannabis. An important concern is to determine the detection times of cannabinoids in urine i.e. the time from the use of the drug until the first negative result. Most of the studies in the speciallized literature report the elimination profile of the 11-nor-9-carboxy- &#916 9-tetrahydrocannabinol (THCCOOH), which the primary cannabinoid metabolite. According to those studies, the urinary cannabinoids detection times can be made for a long time depending on the sensibility and accuracy of the methods used. The purpose of this work was estudy the detection time of the urinary cannabinoids in the marijuana users population after drug abstaining, by FPIA, using a 50ng/mL cutoff. The pattern in drug use influence on the urinary cannabinoids detection times was evaluated. The detection time in the studied population ranged from 33 to 498 hours. The statistic correlation between the detection time and the drug use pattern was not significant (p&#8804 0,05).