Orientador: Elenice Deffune / Banca: Rosana Rossi Ferreira / Banca: Ana Paula Costa Nunes da Cunha Cozac / Resumo: A tecnologia de produção de anticorpos monoclonais revolucionou a investigação diagnóstica, especialmente a análise dos grupos sanguíneos em imuno-hematologia. O polimorfismo das hemácias humanas torna a produção de novos insumos extremamente necessária. Dentre os sistemas de grupos sanguíneos descritos, o sistema Rh tem se mostrado um dos mais complexos pela vasta composição de antígenos. Analisando aspectos estruturais do antígeno D associado às técnicas de biologia molecular, identificam-se numerosas variantes deste antígeno por trocas de DNA entre genes similares levando a alteração de epítopos e consequentemente de padrão de expressão fenotípica na superfície das hemácias. Desvendar e identificar estas variantes com insumos biotecnológicos desenvolvidos no país foi o desafio desta pesquisa, onde anticorpos monoclonais contra antígenos eritrocitários foram produzidos através de fusão celular, utilizando-se células de baço de camundongos BALB/c imunizados com hemácias fenótipo D categoria IVa. Nove fusões foram realizadas e os sobrenadantes de cultura foram triados por teste de hemaglutinação em microplacas. Foram congelados e mantidos em nitrogêncio líquido 41 híbridos. Estes híbridos foram clonados e mantidos em meio de cultura para a obtenção dos anticorpos monoclonais, resultando em 12 clones IgG1, 5 IgG2a e 10 IgM. Os clones foram selecionados para produção de líquido ascítico, através da injeção dos clones em camundongos BALB/c. Os anticorpos monoclonais produzidos, inicialmente não demonstraram a especificidade foco do presente trabalho que foi a produção de anticorpos anti-D, no entanto, os hibridomas podem ter secretado diferentes especificidades de anticorpos monoclonais, de acordo com os antígenos presentes na membrana das hemácias utilizadas para a imunização dos camundongos. Uma segunda fase da pesquisa está sendo ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The blood groups analyses in immunohematology have been highly benefited based on the advance of the monoclonal antibody technology improvement on diagnostics investigation. The human red blood cell polymorphism increases the need for new alternatives. The Rh system blood group is the most complex of all, due to the vast antigenic composition. When analyzing the structural aspects of the D antigen in combination with the molecular techniques, based upon DNA exchange between similar genes it is possible to identify a huge number of partial D variants, this situation leads to a change of epitopes and hence the red blood cell phenotypic expression pattern. Unveil and identify these variables through the use of local biotechnology was the challenge of this research. Monoclonal antibodies against human red blood cell were produced by cell fusion, using spleen cells from immunized BALB/c mice and DIVa red blood cells. Nine fusions had been made and the culture supernatants were selected to the hemaglutination test using microplates. Forty-one hybrids had been frozen and kept in liquid nitrogen. These hybrids had been cloned and kept in the culture to collect monoclonal antibodies, resulting in 12 IgG1, 5 IgG2a e 10 IgM. The clones had been selected for ascitic fluid production, by injection in BALB/c mice. The monoclonal antibodies produced initially had not produced the anti-D as expected by the research. However, the hibrydomas could have created different specificities of monoclonal antibodies, according to the antigen located in the donor red blood cells membrane used in the mice's immunization. The second phase of the research is being done to confirm the monoclonal antibodies specificities produced through the deployment of new tests to immunoglobulin identification / Mestre

Orientador: Lilian Maria de Castilho / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-04T11:27:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rodrigues_ArtemisSocorrodoNascimento_D.pdf: 9543028 bytes, checksum: 5774a3716484ea2212070f20c266a89f (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: Considerando a imunogenicidade e importância clínica do antígeno RhD bem como o grande número de variantes RhD identificadas, estudos que possam esclarecer sua expressão e mecanismos moleculares envolvidos são importantes para a padronização de técnicas moleculares e sorológicas em diferentes populações. Assim foram nossos objetivos: padronizar técnicas moleculares para realização da genotipagem RHD fraco e determinar sua ocorrência na população brasileira; associar os tipos de RhD fracos encontrados com os haplótipos Rh presentes; e avaliar a aplicação da determinação do antígeno RhD na prática transfusional. Estudamos 503 amostras de DNA de doadores voluntários de sangue fenotipados como RhD ftaco. Destas amostras de DNA estudadas, 415 (82,5%) foram caracterizadas como RhD ftaco, 65 (12,9%) como RhD parcial, 15 (3%) apresentaram associações de RhD parcial e RhD ftaco e 8 (1,6%) foram RhD normal. I Os antígenos RhD fraco tipos 1, 3 e 4 foram os mais fteqüentes em nossa população. Como estes três tipos de RhD fraco não apresentam risco de aloimunização anti-D, pacientes assim classificadospodem ser transfundidos com sangue RhD-positivo. Nossos resultados demonstraram que 12,~A>das amostras fenotipadas como RhD fraco eram na verdade RhD parcial. Os antígenos RhD parciais encontrados em nosso estudo foram D~ DHMi e DVI. Quarenta (7,9%) amostras de DNA foram caracterizadas como D~ 16 (3,2%) como DHMi e 9 (1,8%) como DVI. A caracterização dos antígenos RhD parciais que reagem sorologicamente como RhD ftaco, tais como D DHMi e RhD categoria VI pode ser de grande auxilio na prevenção da aloimunização anti-D em pacientes politransfundidos e gestantes. A freqüência dos antígenos RhD parciais D~ DHMi e DVI encontrada em nossas amostras sugere um elevado risco de aloimunização ao antígeno RhD em pacientes fenotipados como RhD ftaco. - Das 503 amostras estudadas, 15 apresentaram mutações responsáveis pela expressão do antígeno RhD fraco e ao mesmo tempo mutações características de antígenos RhD parciais, ou seja, estas amostras possuíam os antígenos RhD fraco e RhD parcial associados. Estudamos quatro amostras de DNA de pacientes fenotipados como RhD :fraco que apresentavam anti-D. Nosso estudo demonstrou que a aloimunização anti-D nestes pacientes estava relacionada à presença de um antígeno RhD parcial e não a um antígeno RhD :fraco como diagnosticado sorologicamente. Duas amostras foram classificadascomo RhD parcial DAR, 1 como RhD parcial DHMi e 1 como DVI. Os resuhados demonstraram que os tipos de RhD fraco 1, 2, 3 e 4 que foram detectados à TA ou à 3'te e apresentaram grau de aglutinação superior a 1+ na AGH podem ser considerados como RhD positivo, pois não foram associados ao antígeno RhD parcial. Apesar deste trabalho ter sido o único que relacionou os tipos de RhD ftaco com o grau de aglutinação, a literatura revela que ainda não foi demonstrada aloimunização anti-D em pacientes portadores dos antígenos RhD fraco tipos 1,2 e 3. De acordo com os nossos resultados pode-se concluir que: 1. A transfusão com sangue RhD-positivo pode ser recomendada para todos os pacientes que apresentam os tipos do antígeno RhD :ftaco 1, 3 e 4 identificados por técnicas moleculares e para aqueles que apresentarem grau de aglutinação superior a 1+ na fenotipagem RhD. 2. A utilização de métodos de fenotipagem mais sensíveis em combinação com reagentes anti-D de alta afinidade é recomendada na detecção de antígenos RhD ftaco com baixa densidade antigênica em doadores de sangue; 3. Há necessidade da utilização de dois anti-soros monoc1onais (IgM e IgG) na determinação do antígeno RhD :ftacoem pacientes; 4. As genotipagens RHD, RHD ftaco e RHD parcial devem ser rea1i73dasquando os resuhados sorológicos não forem claros ou quando o paciente for politransfundido. 5. A biologia molecular associada à hemaglutinação pode aumentar consideravelmente a segurança transfusional pela mellior caracterização dos antígenos RhD em nossa população / Abstract: The purpose of this study was to characterize by molecular studies theRhD antigens (weak D and partial D) in Brazilian blood donors. DNA samples ftom 503 blood donors phenotyped as weak D were tested by two different sequence-specific primers (pCR-SSP) assays to determine the presence or absence of RHD gene (PCR-SSP intron 4 and exon 10) and to detect the common weak D types. Ofthe 503 weak D samples studied, 415 (82,5%) were identified as weak D, 65 (12,9%) as partial D, 15 (3%) showed association ofweak D and partial D and 8 (1,6%) were normal D. Weak D types 1, 3 and 4 contributed more than 85% of alI molecular weak D types. For these 3 types, D-positive transfusion can be considered safe because no immunization events have been documented yet. These findings show for the first time the frequency of weak D types in Brazilians. Molecular analysis showed that 12,9% of the weak D phenotype samples studied carried a partia! D alIele. The partial Ds found in our study were DAR, DVI and DHMi. Forty (7,9%) DNA samples were characterized as DAR, 16 (3,8%) as DHMi and 9 (1,8%) as DVI. The characterization of the partia! D antigens DAR, DHMi and DVI may avoid alIoimmunization in patients phenotyped as weak D. Fiffeteen patients showed mutations to weak D and partia! D showing that these samples had the weak D and partia! D antigens associated. We also studied 4 DNA samples of patients phenotyped as weak D who had developed anti-D. Our study showed that anti-D alIoimmunization in these patients was associated with the presence of partia! D antigens. Two samples were classified as partia!, D DAR, 1 as DHMi and 1 was DVI.AlI the weak D types identified in our study were associated with the intensity of agglutination obtained at room temperature (RT), 3'fC and AGH. The sensitivity of detecting weak D depends on the anti-D reagent and on the exact conditions of the methods. Our results showed that the weak D types 1, 2, 3 and 4 were frequently detected at RT and 3'fC and therefore could be considered as D-positive for transfusion. According to our results we could recommend the use ofmonoclonal anti-DIgM with high avidity to detect weak D antigen with low antigen density in blood donors and two monoclonals, one IgM and one IgG in combination with AGT to detect the weak D antigen in patients / Doutorado / Ciencias Basicas / Doutor em Clínica Médica

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:06Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-02-25Bitstream added on 2014-06-13T20:50:03Z : No. of bitstreams: 1 cardoso_ra_me_botfm.pdf: 896730 bytes, checksum: 97ac1a0ea8e45d9861c31c7feaac2ecb (MD5) / Fundação para o Desenvolvimento Médico e Hospitalar (Famesp) / A tecnologia de produção de anticorpos monoclonais revolucionou a investigação diagnóstica, especialmente a análise dos grupos sanguíneos em imuno-hematologia. O polimorfismo das hemácias humanas torna a produção de novos insumos extremamente necessária. Dentre os sistemas de grupos sanguíneos descritos, o sistema Rh tem se mostrado um dos mais complexos pela vasta composição de antígenos. Analisando aspectos estruturais do antígeno D associado às técnicas de biologia molecular, identificam-se numerosas variantes deste antígeno por trocas de DNA entre genes similares levando a alteração de epítopos e consequentemente de padrão de expressão fenotípica na superfície das hemácias. Desvendar e identificar estas variantes com insumos biotecnológicos desenvolvidos no país foi o desafio desta pesquisa, onde anticorpos monoclonais contra antígenos eritrocitários foram produzidos através de fusão celular, utilizando-se células de baço de camundongos BALB/c imunizados com hemácias fenótipo D categoria IVa. Nove fusões foram realizadas e os sobrenadantes de cultura foram triados por teste de hemaglutinação em microplacas. Foram congelados e mantidos em nitrogêncio líquido 41 híbridos. Estes híbridos foram clonados e mantidos em meio de cultura para a obtenção dos anticorpos monoclonais, resultando em 12 clones IgG1, 5 IgG2a e 10 IgM. Os clones foram selecionados para produção de líquido ascítico, através da injeção dos clones em camundongos BALB/c. Os anticorpos monoclonais produzidos, inicialmente não demonstraram a especificidade foco do presente trabalho que foi a produção de anticorpos anti-D, no entanto, os hibridomas podem ter secretado diferentes especificidades de anticorpos monoclonais, de acordo com os antígenos presentes na membrana das hemácias utilizadas para a imunização dos camundongos. Uma segunda fase da pesquisa está sendo... / The blood groups analyses in immunohematology have been highly benefited based on the advance of the monoclonal antibody technology improvement on diagnostics investigation. The human red blood cell polymorphism increases the need for new alternatives. The Rh system blood group is the most complex of all, due to the vast antigenic composition. When analyzing the structural aspects of the D antigen in combination with the molecular techniques, based upon DNA exchange between similar genes it is possible to identify a huge number of partial D variants, this situation leads to a change of epitopes and hence the red blood cell phenotypic expression pattern. Unveil and identify these variables through the use of local biotechnology was the challenge of this research. Monoclonal antibodies against human red blood cell were produced by cell fusion, using spleen cells from immunized BALB/c mice and DIVa red blood cells. Nine fusions had been made and the culture supernatants were selected to the hemaglutination test using microplates. Forty-one hybrids had been frozen and kept in liquid nitrogen. These hybrids had been cloned and kept in the culture to collect monoclonal antibodies, resulting in 12 IgG1, 5 IgG2a e 10 IgM. The clones had been selected for ascitic fluid production, by injection in BALB/c mice. The monoclonal antibodies produced initially had not produced the anti-D as expected by the research. However, the hibrydomas could have created different specificities of monoclonal antibodies, according to the antigen located in the donor red blood cells membrane used in the mice’s immunization. The second phase of the research is being done to confirm the monoclonal antibodies specificities produced through the deployment of new tests to immunoglobulin identification

Submitted by Heitor Rapela Medeiros (heitor.rapela@ufpe.br) on 2015-03-03T18:07:38Z No. of bitstreams: 2 DISSERTAÇÃO DE ANTONIO_VERSÃO_FINAL.pdf: 2621194 bytes, checksum: 63f0412f30f9e4e90794017db0616113 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-03T18:07:38Z (GMT). No. of bitstreams: 2 DISSERTAÇÃO DE ANTONIO_VERSÃO_FINAL.pdf: 2621194 bytes, checksum: 63f0412f30f9e4e90794017db0616113 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2012-02-28 / CAPES / Os Quantum dots (QDs) ou ponto quânticos vem sendo cada vez mais aplicados na área de diagnóstico por fluorescência como uma alternativa mais estável em comparação com os corantes orgânicos usualmente aplicados. Em comparação a estes, os QDs têm características ópticas peculiares que os dão vantagens como: resistência ao fotoescurecimento, possuírem um estreito espectro de emissão e uma larga banda de absorção. Uma vez recobertos, estas nanoestruturas podem ser bioconjugadas a alvos biológicos ou mesmo a anticorpos tornando-se fluoroimunoensaios com grande especificidade. Este foi o objetivo deste manuscrito, onde CdS/Cd(OH)2 - emissão no verde - tendo como agente estabilizante o polifosfato de sódio ([(NaPO3)]n) e CdTe sintetizados com telúrio metálico, Cd(ClO4)2, ácido mercaptosuccínico (AMS) - emissão no laranja - e ácido mercaptopropiônico (AMP) - emissão no verde - como agentes estabilizantes, foram bioconjugados por formação de bases de Shiff e por adsorção a anticorpos do sistema sanguíneo ABO e, posteriormente, usados na marcação simples (A e B) e dupla (AB) de eritrócitos previamente fenotipados sendo o tipo O foi usado como controle negativo. Os QDs foram caracterizados opticamente através de espectroscopias de absorção e emissão e estruturalmente através de técnicas de microscopias eletrônica de transmissão, pela qual pode ser confirmada a sua cristalinidade, e também a difração de raio-X, revelando diâmetros médios de ~3 nm para o QD-AMS, ~2 nm para o QD-AMP e ~7,5 nm para o CdS/Cd(OH)2. Através da Citometria de Fluxo, os sistemas QDs-anitocorpos demonstraram especificidade obtendo-se valores de 28,4% para os bioconjugados com CdS/Cd(OH)2-anti-A, 70,64% para o tipo A com o sistema CdTe/CdS-anti-A em FL2 (canal laranja), 37,73% para o tipo B com o sistema CdTe/CdS-anti-B em FL1 (canal verde) e 58,24% de dupla marcação detectada em ambos os canais. Os resultados dos QDs CdS/Cd(OH)2, QD-AMS e QD-AMP bioconjugados a anticorpos do sistema ABO mostram especificidade da técnica e abrem a possibilidade de determinação de fenótipos fracos desse sistema. Além disso, serve de modelo para a bioconjugação com outros anticorpos e consequentemente, para o diagnóstico de várias doenças.

Orientador: Lucilene Silva Ruiz e Resende / Resumo: Realizaram-se estudos imuno-hematológicos em 19 macacos sul- americanos, sendo 9 Sapajus sp. (macacos-prego) e 10 Alouatta sp. (macacos bugios). O Teste de Antiglobulina Direta (TAD) não revelou moléculas IgG de imunoglobulina e C3d do complemento, semelhantes às humanas, nas membranas dos eritrócitos dos animais. A Pesquisa de Anticorpos Irregulares (PAI) mostrou-se positiva nos soros de 18 animais adultos sendo negativa no soro do único filhote do estudo, um Sapajus sp. de 2 meses de idade. A Prova de Compatibilidade (PC) foi negativa dentro de cada gênero, revelando-se positiva entre os 2 gêneros de macacos e, destes, com humanos. O filhote de macaco-prego, entretanto, mostrou PC compatível, tanto com o gênero Alouatta sp., quanto com humanos. / Abstract: An immunohematological study was carried out in 19 South-American monkeys corresponding to 9 Sapajus sp. (Capuchin monkeys) and 10 Alouatta sp. (Howler monkeys). The Direct Antiglobulin Test (DAT) didn’t show humanlike molecules of IgG-type immunoglobulin and C3d complement fraction on the animal’s erythrocyte membranes. Serum Irregular Antibodies Screening (IAS) was found in 18 adult animals but not in the only studied cub, which was a 2 month-old Capuchin monkey. The Compatibility Test (CT) was negative among members of a same genre of animals being positive among Sapajus sp. and Alouatta sp., and among the monkey’s genres and humans. The Capuchin monkey cub, however, showed a negative CT with both, Howler monkeys and humans. / Mestre

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias. Programa de Pós-Graduação em Aquicultura / Made available in DSpace on 2012-10-25T21:08:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 301628.pdf: 1238740 bytes, checksum: 980fbbc682989128db56aeaaad846547 (MD5) / Florações da microalga nociva Dinophysis acuminata vêm se tornando recorrentes na costa de Santa Catarina. No presente estudo avaliou-se a modulação de alguns parâmetros imunológicos em ostras C. gigas e mexilhões P. perna cultivados, durante florações naturais de D. acuminata que produzem toxinas diarréicas (ácido ocadáico e compostos relacionados). Os bivalves foram coletados durante duas florações, uma na Praia Alegre (PA: 2.950 algas/L) no município de Penha/SC e outra na Praia de Zimbros (PZ: 4.150 algas/L) no município de Bombinhas/SC e 30 dias após o término das florações (grupo referencia). Na PA foram coletados apenas mexilhões. Os parâmetros analisados a partir da hemolinfa foram: os hemogramas ou contagem total (THC) e diferencial de hemócitos (DHC), o índice de hemócitos apoptóticos (IA) (coloração de Hoechst), a atividade da enzima fenoloxidase ou PO (produção de DOPAcromo), a concentração de proteínas totais (CP - método de Bradford) e o título aglutinante (TA - eritrócitos de cão) da hemolinfa. Foram ainda realizadas análises histológicas convencionais com coloração HE nas ostras da PZ. Dentre os parâmetros imunológicos analisados, alguns apresentaram alterações significativas em relação aos grupos referencia. A THC dos mexilhões variou durante ambas as florações, porém de forma contrastante. Na PA houve uma diminuição do número de hemócitos (54%) e na PZ um aumento (64%) da THC. A atividade da PO aumentou (50%) nos mexilhões da PA e declinou (40%) nas ostras da PZ. A CP aumentou (66%) apenas nos mexilhões da PZ. Os outros parâmetros imunológicos não se alteraram em relação às florações em ambos bivalves. Não foram observados danos teciduais nas ostras analisadas. Os resultados obtidos não mostraram um comportamento uniforme da modulação dos parâmetros imunológicos em relação às florações de D. acuminata. Contudo, ficou evidente que alguns parâmetros são de fato afetados durante as florações em ambos bivalves, em especial nos mexilhões que parecem ser os mais sensíveis e que acumulam uma maior concentração de ácido ocadáico (10 vezes superior) em seus tecidos. Estas alterações poderiam tornar estes animais menos resistentes e mais propensos a contrair infecções, impactando desta forma seu cultivo.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:07Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-02-20Bitstream added on 2014-06-13T20:29:57Z : No. of bitstreams: 1 felix_mc_me_botfm.pdf: 826136 bytes, checksum: 72fc2c810c332854ebb2731816d7b138 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação para o Desenvolvimento Médico e Hospitalar (Famesp) / As doenças crônico-degenerativas são caracterizadas por uma evolução lenta e progressiva, muitas vezes irreversível e por um longo período de latência. Resultam em alterações celulares que são importantes fatores de risco para a disfunção endotelial facilitando o desenvolvimento de úlceras venosas e/ou isquêmicas e “pé diabético”. O antígeno K do sistema eritrocitário Kell constitui um potente peptídeo bioativo com várias funções biológicas, dentre elas a vasoconstrição que influenciam diretamente nas doenças vasculares. As plaquetas, quando ativadas, liberam fatores de crescimento que aceleram o processo de cicatrização. Na membrana plaquetária são expressos antígenos como os eritrocitários, o polimórfico HLA-classe I e antígenos específicos das plaquetas (HPA), e alguns deles possuem importante significância clínica. O conhecimento e a compreensão dos fatores de crescimento existentes nas plaquetas levaram o setor de Biotecnologia do Hemocentro de Botucatu ao desenvolvimento de produtos que utilizam plaquetas e plasma homólogos excedentes da rotina transfusional como princípios ativos na composição de um gel empregado na forma de curativos com o objetivo de acelerar o processo de reparo tecidual. Sabendo os efeitos benéficos dos curativos bioativos no processo de cicatrização e da variabilidade genética dos antígenos plaquetários, qualquer situação em que ocorra exposição a esses antígenos poderia levar a uma resposta imune humoral. Diante dessa assertiva o presente estudo teve por finalidade avaliar o potencial imunogênico desses curativos em pacientes submetidos a essa terapêutica. Foi realizado um estudo multicêntrico, onde um total de 198 pacientes que receberam os curativos bioativos foram fenotipados para presença do antígeno Kell. Dentre esses pacientes, 100 foram selecionados para avaliar a relação dos antígenos... / The chronic-degenerative diseases are characterized by a slow and gradual evolution, often irreversible, and with a long period of latency. Resulting in cellular changes that are important risk factors for endothelial dysfunction facilitating the development of venous ulcers and/or ischemic and diabetic foot. The antigens of the erythrocyte Kell is a potent bioactive peptide with various biological functions among which vasoconstriction that directly influence the vascular diseases. Platelets, when activated, release growth factors that accelerate the healing process. Platelet membrane express antigens as the erythrocyte, the polymorphic HLA class I-specific antigens and of platelets (HPA), and some have important clinical significance. Knowledge and understanding of the growth factors present in platelets led the biotechnology sector from the Bloodbank of Botucatu to develop products using platelets and plasma counterparts surplus of routine transfusion as active ingredients in the composition of a gel used as a dressing with the objective to accelerate the process of tissue repair. Given the beneficial effects of bioactive dressings in the process of healing and the genetic variability of platelet antigens, a situation occurs where exposure to these antigens could lead to a immune response. Given this assertion this study was to evaluate the potential immunogenic effect of these dressings in patients undergoing such therapy. This was a multicenter study, where a total of 198 patients who received the bioactive dressings were phenotyped for the presence of Kell antigen. Among these patients, 100 were selected to assess the relationship of erythrocyte antigens of the ABO and Rh in the process of healing and alloimmunization anti-erythrocyte. Also, 38 were selected to evaluate the immunogenic potential of bioactive dressings through the search of anti-HLA and -HPA alloimmunization... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Rosana Rossi Ferreira / Banca: Rejane Tommazini Grotto / Banca: Vânia Nieto Brito de Souza / Resumo: As doenças crônico-degenerativas são caracterizadas por uma evolução lenta e progressiva, muitas vezes irreversível e por um longo período de latência. Resultam em alterações celulares que são importantes fatores de risco para a disfunção endotelial facilitando o desenvolvimento de úlceras venosas e/ou isquêmicas e "pé diabético". O antígeno K do sistema eritrocitário Kell constitui um potente peptídeo bioativo com várias funções biológicas, dentre elas a vasoconstrição que influenciam diretamente nas doenças vasculares. As plaquetas, quando ativadas, liberam fatores de crescimento que aceleram o processo de cicatrização. Na membrana plaquetária são expressos antígenos como os eritrocitários, o polimórfico HLA-classe I e antígenos específicos das plaquetas (HPA), e alguns deles possuem importante significância clínica. O conhecimento e a compreensão dos fatores de crescimento existentes nas plaquetas levaram o setor de Biotecnologia do Hemocentro de Botucatu ao desenvolvimento de produtos que utilizam plaquetas e plasma homólogos excedentes da rotina transfusional como princípios ativos na composição de um gel empregado na forma de curativos com o objetivo de acelerar o processo de reparo tecidual. Sabendo os efeitos benéficos dos curativos bioativos no processo de cicatrização e da variabilidade genética dos antígenos plaquetários, qualquer situação em que ocorra exposição a esses antígenos poderia levar a uma resposta imune humoral. Diante dessa assertiva o presente estudo teve por finalidade avaliar o potencial imunogênico desses curativos em pacientes submetidos a essa terapêutica. Foi realizado um estudo multicêntrico, onde um total de 198 pacientes que receberam os curativos bioativos foram fenotipados para presença do antígeno Kell. Dentre esses pacientes, 100 foram selecionados para avaliar a relação dos antígenos... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The chronic-degenerative diseases are characterized by a slow and gradual evolution, often irreversible, and with a long period of latency. Resulting in cellular changes that are important risk factors for endothelial dysfunction facilitating the development of venous ulcers and/or ischemic and "diabetic foot." The antigens of the erythrocyte Kell is a potent bioactive peptide with various biological functions among which vasoconstriction that directly influence the vascular diseases. Platelets, when activated, release growth factors that accelerate the healing process. Platelet membrane express antigens as the erythrocyte, the polymorphic HLA class I-specific antigens and of platelets (HPA), and some have important clinical significance. Knowledge and understanding of the growth factors present in platelets led the biotechnology sector from the Bloodbank of Botucatu to develop products using platelets and plasma counterparts surplus of routine transfusion as active ingredients in the composition of a gel used as a dressing with the objective to accelerate the process of tissue repair. Given the beneficial effects of bioactive dressings in the process of healing and the genetic variability of platelet antigens, a situation occurs where exposure to these antigens could lead to a immune response. Given this assertion this study was to evaluate the potential immunogenic effect of these dressings in patients undergoing such therapy. This was a multicenter study, where a total of 198 patients who received the bioactive dressings were phenotyped for the presence of Kell antigen. Among these patients, 100 were selected to assess the relationship of erythrocyte antigens of the ABO and Rh in the process of healing and alloimmunization anti-erythrocyte. Also, 38 were selected to evaluate the immunogenic potential of bioactive dressings through the search of anti-HLA and -HPA alloimmunization... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Lilian Maria de Castilho / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-16T17:52:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Credidio_DeboraCastilho_M.pdf: 2805791 bytes, checksum: d7fa60ce846ffb7baee62f0493fdd327 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: Discrepâncias na tipagem Rh ocorrem devido à presença de variantes do antígeno RhD, em especial D fraco e D parcial. Diferentes reagentes anti-D monoclonais tem sido desenvolvidos para identificar estas variantes, mas a caracterização molecular pode garantir um resultado mais específico com melhor definição do tipo de variante presente. O fenótipo D fraco ocorre por alterações de nucleotídeos que levam a substituição de aminoácidos na região transmembranar e intracelular da proteína Rh enquanto que o fenótipo D parcial ocorre por alterações de nucleotídeos ou rearranjos gênicos que levam a substituição de aminoácidos na região extracelular da proteína Rh, resultando em fenótipos sorológicos distintos e aloimunização anti-D. Nossos objetivos foram avaliar reagentes anti-D e métodos sorológicos e moleculares na detecção e identificação destas variantes. Foram estudadas 335 amostras de sangue e DNA de doadores e pacientes fenotipados previamente como RhD fraco, ou que apresentaram resultados discrepantes na tipagem RhD. Das 335 amostras estudadas, 215 (64,1%) foram identificadas como D fraco, 89 (26,5%) como D parcial, 3 (1%) como DEL, 11 como RhD-positivo e 17 como RhD-negativo. Entre as amostras D fraco, 76 eram DF1 (35,3%); 75 DF2 (34,9%); 13 DF3 (6,1%); 49 DF4 (22,8%) e 2 DF5 (0,9%). Entre as amostras D parcial, 9 (10,1%) eram DAR, 25 (28,1%) DFR, 6 (6,7%) DBT, 1 (1,1%) DHMi, 1(1,1%) RoHAR, 26 (29,2%) DVI, 14 (15,8%) DVa, 5 DIVb (6,6%) e 2 (2,3%) DVII . Nas amostras DEL, duas foram identificadas molecularmente como RHD(IVS5-38DEL4) e uma como RHD(K409K). Nossos resultados demonstram que a utilização de diferentes reagentes anti-D e métodos na rotina sorológica pode indicar a presença de uma variante do antígeno RhD que deve ser investigada por análise molecular. Esta estratégia pode auxiliar na diferenciação entre D fraco e D parcial e caracterizar as variantes que levam a aloimunização anti-D. Esta distinção é importante na seleção de sangue para pacientes e na prevenção da doença hemolítica do feto e recém-nascido / Abstract: Rh discrepancies are becoming a problem during routine testing due to partial D or weak D phenotypes. Panels of monoclonal antibodies (MoAb) are being developed in order to identify D variants such as partial D and weak D when there are anomalous RhD typing results but molecular characterization offers a more specific grouping of weak and partial D. The weak D phenotype is caused by many different RHD alleles encoding aberrant RhD proteins, resulting in distinct serologic phenotypes and anti-D immunizations. We evaluated currently used serologic methods and reagents to detect and identify D variants and correlated the results with molecular analyses. A total of 335 blood samples from Brazilian blood donors and patients with discrepant results of D typing in routine were analyzed. In total, 215 (64.1%) weak D, 89 (26.5%) partial D, 3 (1%) DEL, 11 RhD-positive and 17 RhD-negative were identified. Among weak D samples, 76 weak D Type 1 (35.3%); 75 weak D Type 2 (34.9%); 13 weak D Type 3 (6.1%); 49 weak D Type 4 (22.8%) and 2 weak D Type 5 (0.9%) alleles were found. Among the partial D samples, 9 (10.1%) DAR, 25 (28.1%) DFR, 6 (6.7%) DBT, 1 (1.1%) DHMi, 1(1.1%) RoHAR, 26 (29.2%) DVI, 14 (15.8%) DVa, 5 DIVb (6.6%) and 2 (2.3%) DVII were observed. Two samples identified as DEL by adsorption/elution were characterized by molecular analyses as RHD(IVS5-38DEL4) and one sample as RHD(K409K). Our results showed that the use of different methods and anti-D reagents in the serologic routine reveal some D variants that can be further investigated. Molecular methods can help to differentiate between partial D and weak D and characterize the weak D types providing additional information of value in the RhD typing. This distinction is important for selection of blood products and to prevent anti-D hemolytic disease of the fetus and newborn / Mestrado / Ciencias Basicas / Mestre em Clinica Medica

Orientador: Lilian Maria de Castilho / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-21T01:20:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mota_MarizaAparecida_D.pdf: 4935868 bytes, checksum: e4f0e5bb4b8dde3d39725064ffee9de2 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: Alelos RHD que levam à redução da expressão do antígeno D na superfície dos eritrócitos podem levar à tipagem errônea como D- por técnica sorológica e podem causar imunização anti-D quando transfundidos em pacientes. A fim de determinar a ocorrência de tais alelos em doadores de sangue aparentemente D-, foi implementada técnica molecular de rotina utilizando um pool de DNAs de doadores de sangue. Um total de 2450 amostras previamente tipadas como D- foram testadas em pools de 10 amostras para o polimorfismo RHD específico, intron 4 e éxon 7. Nos pools que apresentaram resultado de PCR positivo, as amostras foram reavaliadas individualmente utilizando PCR exon-específico, métodos sorológicos e sequenciamento genético. Dentre as 2.450 amostras de doadores D- testadas, 101 (4,1%) carreavam o gene RHD. Foi identificada a presença de RHD não funcional (RHD'psi', RHD*CE(2-9)-D e RHD*CE(3-7)-D), diferentes alelos de D fraco tais como RHD*weak D type 1, RHD*weak D type 4.3, RHD*weak D type 5, RHD*weak D type 38 e RHD*DEL. Uma metodologia utilizando a técnica de PCR foi empregada como teste de rotina para o gene RHD utilizando pools de 10 amostras de DNA de doadores de sangue. Foi possível a integração da genotipagem RHD em programas de triagem de rotina utilizando pools de DNA. Como resultado, 19 (0,8%) dos doadores de sangue que carreavam fenótipos D fraco ou Del, com potencial de causar imunização anti-D em receptores, foram reclassificados como D+. Entretanto, seria necessário adaptar a estratégia de genotipagem RHD ao espectro de alelos prevalente em cada população / Abstract: RHD alleles leading to a reduced expression of D antigen of the red blood cell (RBC) surface may be erroneously typed as D negative by serology and may cause anti-D immunizations when transfused to recipients. We have therefore investigated the occurrence of such alleles among apparent D negative blood donors, molecular typing was implemented as a routine test using a pool of DNA. A total of 2,450 pretyped D negative samples was tested in pools of 10 for the RHD-specific polymorphism in intron 4 and exon 7. Samples in PCR positive pools were individually reevaluated by exon-specific PCRs, sequencing and serologic methods. Our results showed that among 2,450 serologically D negative blood donor samples tested, 101 (4.1%) carried the RHD gene. Nonfunctional RHD (RHD*'psi', RHD*CE(2-9)-D and RHD*CE(3- 7)-D), different weak D alleles such as RHD*weak D type 1, RHD*weak D type 4.3, RHD*weak D type 5, RHD*weak D type 38 and RHD*DEL were identified. We employed a PCR-based assay for RHD as a routine test using pools of 10 DNA blood donor samples. The integration of RHD genotyping into the routine screening program using pools of DNA samples was straightforward. As a consequence, 19 (0.8%) blood donors carrying a weak D and Del phenotypes with the potential of causing anti-D immunizations in recipients were reclassified as RhD positive. For each population, it would be necessary to adapt the RHD genotyping strategy to the spectrum of prevalent alleles / Doutorado / Clinica Medica / Doutora em Ciências