A infertilidade é uma condição clínica que acomete até 15% dos casais em idade reprodutiva. Como forma de tratamento para essa parcela da população a Medicina Reprodutiva dispõe de várias técnicas de Reprodução Assistida que visam auxiliar o casal na obtenção da gestação. O primeiro passo para obtenção de sucesso na Medicina Reprodutiva é o correto diagnóstico da infertilidade e, do ponto de vista didático, as causas de infertilidade podem ser classificadas em: feminina, masculina, mista ou desconhecida. A causa feminina de infertilidade apresenta como importante fator o ovariano, representado, principalmente, por alterações no processo de maturação do oócito e/ou no processo de foliculogênese. Com relação à maturação do oócito, um dos possíveis tratamentos oferecidos pela Medicina Reprodutiva é a aplicação da técnica de maturação in vitro (MIV). Infelizmente a MIV não apresenta resultados animadores, e um dos motivos é a falta de um método adequado de seleção dos gametas de humanos que podem ser destinados à ela. No entanto, várias técnicas de seleção de oóticos já foram descritas para espécies animais; dentre elas destaca-se a coloração dos complexos cumuli-oócitos com o corante Azul Cresil Brilhante (BCB). A sua aplicação na espécie humana permanece com ressalvas, uma vez que a comunidade científica preocupa-se com os possíveis efeitos tóxicos dessa substância. Nesta Tese, conseguimos demonstrar, através da avaliação de ensaios de viabilidade e de proliferação celular, e da expressão gênica e proteica, a inocuidade dessa substância para o modelo de cultura primária de células foliculares ovarianas luteinizadas, indicando que o protocolo de coloração com BCB é seguro para a espécie humana. Adicionalmente, conseguimos caracterizar e padronizar o cultivo dessas células, que são amplamente utilizadas em estudos na área da Medicina Reprodutiva. Com relação ao outro fator ovariano de infertilidade (o processo de foliculogênese), sabe-se que a depleção acelerada dos folículos ovarianos pode provocar falência ovariana precoce (FOP), uma condição clínica que acomete até 1% das mulheres em idade reprodutiva e leva à infertilidade. Uma das causas da FOP é a alteração no gene Fragile X Mental Retardation 1 (FMR1) e consequentemente em sua proteína (FMRP). Muito do conhecimento do controle dessa proteína provem de experimentos em neurônios, onde o seu controle já foi elucidado. Nesta Tese, conseguimos demonstrar que o controle dessa proteína nas células ovarianas de humanos é similar ao controle que ocorre nos neurônios, envolvendo a via de sinalização S6K. / Infertility is a clinical condition that affects up to 15% of couples of reproductive age. Reproductive medicine applies many assisted reproductive technologies (ARTs) in order to help them to achieve pregnancy. The first step for infertility treatment success is the correct infertility diagnosis, which is divided into four categories: female, male, mixed or unknown. Female infertility is chiefly represented by ovarian dysfunctions, which are generally related to oocyte maturation and/or folliculogenesis. With regard to oocyte maturation, in vitro oocyte maturation (IVM) is one ART that can be applied but, unfortunately, nowadays it does not present suitable results, since we do not have an effective method of selecting competent human oocytes. On the other hand, in animal reproduction brilliant cresyl blue (BCB) staining has already been described as an appropriate method for oocyte selection. However its clinical applicability to humans is some away off, owing to concerns about its safety. In this thesis we have demonstrated (through many cellular viability and proliferation assays and gene and protein expression), that BCB staining, applying the correct protocol, seems to be safe for use in humans (using the primary culture of human ovarian follicular cells as an experimental model). Additionally, we have characterized and standardized the primary culture of human ovarian follicular cells, and this experimental model is widely applied in reproductive medicine experiments. With regard to folliculogenesis, it is well known that premature ovarian failure/insufficiency (POF/POI) is one condition that can be caused by follicle depletion (when folliculogenesis occurs too fast). This condition affects about 1% of females of reproductive age, causing infertility. Genetic alterations, such as in the fragile X mental retardation 1 (FMR1) gene and its protein FMRP, are considered as one cause of POF/POI. Most of our knowledge about FMRP cellular control comes from studies on neurons, and in these cells we have a clue about its control. In this thesis, we have shown that FMRP control on human granulosa cells is similar to its control on neurons, and this involves the S6K pathway.

A infertilidade é uma condição clínica que acomete até 15% dos casais em idade reprodutiva. Como forma de tratamento para essa parcela da população a Medicina Reprodutiva dispõe de várias técnicas de Reprodução Assistida que visam auxiliar o casal na obtenção da gestação. O primeiro passo para obtenção de sucesso na Medicina Reprodutiva é o correto diagnóstico da infertilidade e, do ponto de vista didático, as causas de infertilidade podem ser classificadas em: feminina, masculina, mista ou desconhecida. A causa feminina de infertilidade apresenta como importante fator o ovariano, representado, principalmente, por alterações no processo de maturação do oócito e/ou no processo de foliculogênese. Com relação à maturação do oócito, um dos possíveis tratamentos oferecidos pela Medicina Reprodutiva é a aplicação da técnica de maturação in vitro (MIV). Infelizmente a MIV não apresenta resultados animadores, e um dos motivos é a falta de um método adequado de seleção dos gametas de humanos que podem ser destinados à ela. No entanto, várias técnicas de seleção de oóticos já foram descritas para espécies animais; dentre elas destaca-se a coloração dos complexos cumuli-oócitos com o corante Azul Cresil Brilhante (BCB). A sua aplicação na espécie humana permanece com ressalvas, uma vez que a comunidade científica preocupa-se com os possíveis efeitos tóxicos dessa substância. Nesta Tese, conseguimos demonstrar, através da avaliação de ensaios de viabilidade e de proliferação celular, e da expressão gênica e proteica, a inocuidade dessa substância para o modelo de cultura primária de células foliculares ovarianas luteinizadas, indicando que o protocolo de coloração com BCB é seguro para a espécie humana. Adicionalmente, conseguimos caracterizar e padronizar o cultivo dessas células, que são amplamente utilizadas em estudos na área da Medicina Reprodutiva. Com relação ao outro fator ovariano de infertilidade (o processo de foliculogênese), sabe-se que a depleção acelerada dos folículos ovarianos pode provocar falência ovariana precoce (FOP), uma condição clínica que acomete até 1% das mulheres em idade reprodutiva e leva à infertilidade. Uma das causas da FOP é a alteração no gene Fragile X Mental Retardation 1 (FMR1) e consequentemente em sua proteína (FMRP). Muito do conhecimento do controle dessa proteína provem de experimentos em neurônios, onde o seu controle já foi elucidado. Nesta Tese, conseguimos demonstrar que o controle dessa proteína nas células ovarianas de humanos é similar ao controle que ocorre nos neurônios, envolvendo a via de sinalização S6K. / Infertility is a clinical condition that affects up to 15% of couples of reproductive age. Reproductive medicine applies many assisted reproductive technologies (ARTs) in order to help them to achieve pregnancy. The first step for infertility treatment success is the correct infertility diagnosis, which is divided into four categories: female, male, mixed or unknown. Female infertility is chiefly represented by ovarian dysfunctions, which are generally related to oocyte maturation and/or folliculogenesis. With regard to oocyte maturation, in vitro oocyte maturation (IVM) is one ART that can be applied but, unfortunately, nowadays it does not present suitable results, since we do not have an effective method of selecting competent human oocytes. On the other hand, in animal reproduction brilliant cresyl blue (BCB) staining has already been described as an appropriate method for oocyte selection. However its clinical applicability to humans is some away off, owing to concerns about its safety. In this thesis we have demonstrated (through many cellular viability and proliferation assays and gene and protein expression), that BCB staining, applying the correct protocol, seems to be safe for use in humans (using the primary culture of human ovarian follicular cells as an experimental model). Additionally, we have characterized and standardized the primary culture of human ovarian follicular cells, and this experimental model is widely applied in reproductive medicine experiments. With regard to folliculogenesis, it is well known that premature ovarian failure/insufficiency (POF/POI) is one condition that can be caused by follicle depletion (when folliculogenesis occurs too fast). This condition affects about 1% of females of reproductive age, causing infertility. Genetic alterations, such as in the fragile X mental retardation 1 (FMR1) gene and its protein FMRP, are considered as one cause of POF/POI. Most of our knowledge about FMRP cellular control comes from studies on neurons, and in these cells we have a clue about its control. In this thesis, we have shown that FMRP control on human granulosa cells is similar to its control on neurons, and this involves the S6K pathway.

Introdução: Aproximadamente 2% a 26% das mulheres submetidas à esterilização demonstram arrependimento em algum momento de sua vida. A reversão cirúrgica pode ser realizada por laparotomia, minilaparotomia ou laparoscopia. Para tanto, é necessário avaliarem-se as condições tubárias para prognosticar o procedimento cirúrgico. Para a avaliação anatômica da tuba procede-se à histerossalpingografia para a análise da porção proximal à cicatriz cirúrgica da laqueadura, e a laparoscopia para a porção distal. Neste estudo prospectivo transversal, avaliou-se a porção distal das tubas pela hidrolaparoscopia transvaginal (HLT) como alternativa à laparoscopia diagnóstica. Métodos: No período de agosto de 2001 a abril de 2004, 38 pacientes sem outra afecção pélvica, com idade inferior a 40 anos, índice de massa corpórea menor que 35 kg/m2, e cujos parceiros não apresentavam espermograma alterado com indicação de fertilização in vitro, foram submetidas à HLT, em ambulatório e sob anestesia local. A reversão cirúrgica foi efetuada em 30 pacientes por minilaparotomia, que foi considerada \"padrão-ouro\" para determinar a acurácia dos achados da HLT. Resultados: 1) Obteve-se acesso à cavidade pélvica em 36 (94,7%) pacientes; em duas (5,3%) houve falha de acesso. 2) Das 30 pacientes que se mantiveram no estudo, em duas (6,7%) não se obteve acesso à cavidade pélvi-ca, e das 28 (93,3%) pacientes avaliadas em um total de 56 tubas, o prognóstico foi correto em 25 (89,3%) e insatisfatório em três (10,7%). A falha prognóstica decorreu de hidrossalpinge e laqueadura em dois pontos em cada uma das tubas em uma paciente e de hidrossalpinge em outras duas pacientes. 3) Não houve qualquer complicação nos 38 casos estudados. Conclusões: A HTL é método que per-mite a visualização das fímbrias e do coto distal das tubas de pacientes laqueadas. Constitui método com alto índice de acerto na análise da possibilidade de recanalização cirúrgica pós-laqueadura, mas a presença de hidrossalpinge prejudica a avaliação do prognóstico da reversibilidade. / Background: The rate of post sterilization regret in women is about 2% to 26% de-pending on the moment of life they are living. Surgical reversibility can be carried out with the use of laparotomy, minilaparotomy or laparoscopy. However, tubal condi-tions must be assessed for the surgical prognosis. Hysterosalpingography is useful for assessing the proximal surgical scar of the ligated tube, and laparoscopy is used for evaluating the distal portion. Distal portion of ligated tubes were evaluated by transvaginal hydrolaparoscopy (THL) as an alternative to laparoscopy in this investi-gation. Method: Between August 2001 and April 2004, 38 female candidates for sterilization reversal without any other pelvic disease, aged up to 40 years old, pre-senting body mass index <35 kg/m2, whose partners did not present abnormal es-permogram, and without indication for in vitro fertilization were submitted to outpa-tient THL under local anesthesia. Surgical reversal was accomplished in 30 patients with minilaparotomy, considered the golden-pattern for analyzing the accuracy of THL findings. Results: 1) Pelvic cavity was achieved in 36 (94.7%) patients, and the access failed in the other two (5.3%). 2) Out of the 30 patients who were kept in the study, failure in achieving the pelvic cavity occurred in two (6.7%) of them. In the remaining 28 (93.3%) women or 56 tubes, THL diagnosis was correct in 25 (89.3%) and unsatisfactory in the other three (10.7%). Prognosis failure was result of hy-drosalpinge, and one of these three patients presented two points ligated in both tubes as well. 3) There were no THL complications in all cases. Conclusion: THL is a technique useful for allowing visualization of fimbriae and distal stump of ligated tubes, and for accurately previewing the possibility of surgical reversal, although the presence of hydrosalpinge can interfere in the THL prognosis for tubal reversibility.

FundaÃÃo de Amparo à Pesquisa do Estado do Cearà / A tese à composta por dois capÃtulos. O primeiro capÃtulo inclui o trabalho cujo objetivo foi investigar o potencial uso de pares de transcritos correlativos baseados em microarranjos como marcadores de fertilidade masculina usando a displasia da bainha fibrosa (DFS) como modelo afetado. Atualmente à bastante reconhecido que a tecnologia de microarranjos pode ser limitada pelos custos e que a qualidade dos transcritos permanece relativamente desconhecida. Para responder essas questÃes, nÃs analizamos pares de transcritos estÃveis por qPCR com um processo sistemÃtico de desenho de primers sistemÃtico. Nesse estudo experimental, nÃs utilizamos amostras de homens com fertilidade comprovada e de homens com diagnÃtico de DFS. Nossa abordagem foi baseada nas sequÃncias de primers dos seis genes de interesse, os quais foram desenhados utilizando os programas Oligo7 e Primer3Plus. A especificidade do primer foi inicialmente analisada in silico atravÃs de pesquisas nos bancos de dados ENSEMBL, University of California Santa Cruz (UCSC), e National Center for Biotechnology Information (NCBI) para uso de sequÃncias especÃficas aos genes alvos. A habilidade dos pares de transcritos em classificar as amostras de homens de fertilidade comprovada das amostras de DFS foi avaliada. Nossos resultados mostraram que em conjunÃÃo com a identificaÃÃo de quatro novos pares estÃveis, a comparaÃÃo dos coeficientes de correlaÃÃo dos valores de C(t) dos DSF revelou a interrupÃÃo de quatro pares estÃveis identificados nas amostras de homens normais. Esta seleÃÃo de pares estÃveis resolve a questÃo sobre a DSF. Em conclusÃo, os resultados mostram efetivamente que o desenho de primers e qPCR podem fornecer um ensaio molecular de baixo custo para avaliar a fertilidade masculina. O segundo capÃtulo divide-se em dois estudos e avalia em carneiros os efeitos de uma dieta suplementada com farelo de castanha de caju. No estudo 1, nosso objetivo foi detectar a presenÃa de transcritos para Heat Shock Protein (HSP70), clusterina (CLU), proteÃna semelhante à subunidade alfa do complexo T (TCP1) e proteÃna do complexo T subunidade 8 (CCT8) no espermatozÃide de ovinos, seguindo a mesma metodologia para qPCR utilizada no capitulo 1. As sequÃncias de primers foram desenhadas utilizando os programas Primer3Plus e Oligo Analyzer. Gene para protamina 2 (PRM2) foi usado como controle interno de reaÃÃo. O sÃmen foi coletado de machos pÃberes Morada Nova utlizando eletroejaculador. As amostras selecionadas para extraÃÃo de RNA espermÃtico seguiram as recomendaÃÃes do ColÃgio Brasileiro de ReproduÃÃo Animal quanto aos parÃmetros de motilidade, vigor e concentraÃÃo. Nossos resultados mostraram a presenÃa de mRNA para a HSP70 nos espermatozÃides de ovinos. Maiores estudos sÃo necessÃrios a fim de confirmar ou refutar a presenÃa das chaperonas TCP1 e CCT8 no espermatozÃide ovino. A presenÃa do transcrito da HSP70 no espermatozÃide de ovinos abre perspectivas para estudos futuros sobre os efeitos do mRNA HSP70 no desenvolvimento embrionÃrio, de modo a avaliar se essa expressÃo ocorre de modo espontÃneo, programado e seqÃencial, e se esses mecanismos se refletem na fertilidade e no desenvolvimento embrionÃrio. O segundo estudo tem como principal objetivo avaliar os efeitos de uma dieta contendo farelo de castanha de caju (FCC) na expressÃo de genes relacionados ao metabolismo dos lipÃdios no mÃsculo Longissimus dorsi de carneiros Morada Nova. Vinte carneiros maduros sexualmente foram divididos em dois grupos baseando-se no peso vivo. Os animais foram mantidos em baias individuais. Durante trÃs meses, o grupo castanha (GCA) foi alimentado com raÃÃo contendo FCC, enquanto o grupo controle (GCO) recebeu raÃÃo à base de milho e soja. As duas dietas eram isocalÃricas e isoprotÃicas, adicionadas de suplemento mineral. Os carneiros tambÃm receberam feno de Tifton e Ãgua à vontade. A quantidade de alimento ofertado (raÃÃo e feno) foi ajustada diariamente para sobra de 10%. Sete genes codificantes de proteÃnas envolvidas direta ou indiretamente foram selecionados como alvos, incluindo: GH, ACACA, CAST, CAPN3, LPL, SCD e FASN. Para normalizaÃÃo, foram selecionados cinco genes candidatos: ACTB, GAPDH, RPL4, RPS18 e TBP. Dentre os sete genes alvos selecionados anteriormente, os alvos GH, ACACA e CAST foram removidos. Os dois primeiros foram removidos devido amplificaÃÃo de alinhamento mÃltiplo (baixa especificidade do primers), enquanto CAST apresentou baixa eficiÃncia de amplificaÃÃo. Da lista de gene alvo final, a expressÃo de somente dois genes foi afetada pela dieta, SCD (p<0.01) e FASN (p<0.05), enquanto LPL (p=0,1022) e CAPN3 (p=0,0939) nÃo apresentaram diferenÃa significativa (p<0.05). Os genes SCD e FASN foram reprimidos no GCA comparada ao GCO. Este à o primeiro relato de que uma raÃÃo contendo FCC afetou a expressÃo gÃnica de proteÃnas envolvidas na deposiÃÃo de lipÃdios no mÃsculo em ovinos. Considerando que uma dieta contendo FCC altera a expressÃo de genes lipogÃnicos sem afetar o ganho de peso nem a eficiÃncia reprodutiva de ovinos, faz da castanha de caju uma importante alternativa para o sistema de produÃÃo de ovinos criados em regiÃes tropicais. / This thesis presents two chapters. In the first chapter, its objective was to investigate the potential use of correlative microarray-based transcript pairs as candidate markers for male fertility using dysplasia of the fibrous sheath (DFS) as an affected model. It is widely recognized that microarray technology may be limited by cost and that the quality of the transcript remains relatively unknown. To address these issues, we analyzed the stable transcript pairs by qPCR with a systematic primer design process. On this experimental study, we used men with proven fertility and men with a diagnosis of DFS. Our approach was based on primer sequences for six genes of interest were designed using Oligo7 and Primer3Plus. Primer specificity was initially assessed in silico by searching the ENSEMBL, University of California Santa Cruz, and National Center for Biotechnology Information databases for nontarget complementary sequences throughout the genome. The ability of transcript pairs to classify samples from males of proven fertility away from DFS was assessed. Our results showed that in conjunction with identifying four new stable transcript pairs, comparison of the DFS qPCR C(t) correlation coefficients revealed the disruption of four stable fertile sample transcript pairs. This suite of transcript pairs resolves DFS. In conclusion, the results show that with effectively designed primers, qPCR may provide an affordable molecular assay to assess male fertility status. Second chapter includes two studies regarding evaluations of ram feeded with supplemented diet with cashew nut. On the frist study, our goal was detect transcripts for Heat Shock Protein (HSP70), Clusterin (CLU), Ovis aries T-complex protein 1 alfa subunit-like protein (TCP1) e Ovis aries chaperonin containing TCP1, subunit 8 (theta) (CCT8) on ram sperm by. For primer designing we used published ESTs from NCBI and manually annotated by us using Primer3Plus and OligoAnalizer. PRM2 was used as internal qPCR control. Semen samples from mature Morada Nova ram were collected by eletroejaculator, washed in PBS and prepared for further RNA extraction. Selected samples followed quality recommendatios from ColÃgio Brasileiro de ReproduÃÃo Animal regarding motility, vigor and concentration. Our results showed presence of mRNA HSP70 on ram sperm and they can possible be envolved in early embryo development, oocyte activation and post fertilization events. Further analyses will be necessary to confirm presence of TCP1 and CCT8 on ram sperm. Our findings indicate new perpectives about the effects of these chaperones during embryo development mesuring if its expression reflects male fertility on the early embryo development. On the second study the the main goal is to evaluate the effects of a lipid-enriched diet containing cashew nut brain on the expression of genes related to lipid metabolism in the longissimus dorsi muscle of Morada Nova rams. Twenty sexually mature and reproductively sound rams were divided in two groups based on ram live weight, and each ram was kept on individual pens. During three months, group 1 (G1) rams were fed with a lipid-rich diet, containing cashew nut bran (CNB), while group 2 (G2) was fed with a meal based on corn and soy. Both diets were isocaloric and isoproteic, and had a mineral mix added-in. The rams also were offered Tifton grass hay and had free access to water. The amount of diet offered (ration plus hay) was adjusted everyday to a maximum waste of 10%. Seven genes coding for proteins directly or indirectly involved in lipid metabolism were initially selected as targets, incluiding GH, ACACA, CAST, CAPN3, LPL, SCD, and FASN. Also, five genes were selected as reference genes, ACTB, GAPDH, RPL4, RPS18 and TBP. From the seven genes originally selected as targets, GH, ACACA and CAST were removed, leaving the final list with four targets. The first two genes were removed due to alternative pairing of the primers (low specificity), while CAST showed low amplification efficiency during PCR reaction. From the final target list, the expression of only two genes was affected by diet, SCD (p<0.01) and FASN (p<0.05), while LPL (p=0,1022) and CAPN3 (p=0,0939) were not different at the p<0.05 level. Both SCD and FASN genes were down-regulated in G1 (lipid-rich diet containing CNB) compared to G2. These genes are involved in lipogenic pathways, related to tissue lipid deposition; therefore, these results were expected. This is the first time that a fat-rich diet based on CNB was shown to affect gene expression of proteins involved in fat deposition in carcass muscles of rams. Longissimus dorsi is one of the finest meat cuts. Considering that human diets rich in poli-unsaturated fatty acids (PUFA) can decrease the risk of heart and other chronic diseases, a change in the fatty acid profile of this muscle could contribute to a healthier diet, aggregating value to the end-product of the lamb meat market. The effects of CNB-based diet on the gene expression of SCD and FASN support the notion that such diet, as previously shown for other sources of lipid in ruminants, can potentially change the fatty acid composition of L. dorsi, but this hypothesis needs to be experimentally verified by profiling fatty acids in animals fed CNB versus carbohydrate-based diets. CNB use as an ingredient in animal feeding is environmentally-friendly, since it contributes to by-product recycling from the agroindustrial plants in Northeast Brazil. Also, considering that CNB-based diet changes lipogenic gene expression without affecting weight gain or reproductive status of the rams, as shown in another work from our team, makes CNB a very important alternative food in ram production systems in tropical regions.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:16:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao wyara biologia.pdf: 1287742 bytes, checksum: 4b2f592f2b219248664d4916820cd874 (MD5) Previous issue date: 2009-03-31 / Male idiopathic infertility is related to defects in normal spermatogenesis, due to genetic causes. The spermatogenesis is a dependent process on high levels of male sex hormones, the androgens. The androgen, in turn, perform its function when associated with the androgen receptor (AR), protein encoded by AR gene. Mutation in AR gene lead to a synthesis of non functional AR, which results in the failure of the process of spermatogenesis and, consequently, causes male infertility. This work has as its main objective the verification of the occurrence of mutation in the AR gene in patients with male idiopathic infertility who come from the HC-UFG Human Reproduction Center. Samples were analyzed from 206 patients. The result was that 95 patients were found to be normal while 111 with an altered result for the spermogram. The samples were amplified for exons 1, 4, 6, 7 and 8 of the AR gene and the results subjected to statistical analysis, Mann Whitney, logistic regression, and chi tests. The existence of the relationship between defects of sperm and AR gene mutation was verified. The analysis of the relationship between the spermogram and the AR gene mutation in five evaluated exons was significant only for exons 1 and 7. Patients with numerical unsettled spermogram had a higher frequency of mutations in exon 7, teratozoospermics in exon 1 and exon 7 in astenozoospermics patients. Exons 4, 6 and 8 showed no meaningful statistical relationship in reference to the alteration of the spermogram. Among results related to social custom, alcohol proved to be significant for mutation in the AR gene. This study has reaffirmed the relationship between the presence of mutation in AR genes as probable causes of defects in spermatogenesis. Consequently, male idiopathic infertility depends not only on the genetic factor, but also on the association between this factor and the environment where man inhabits / A infertilidade masculina idiopática está relacionada a defeitos na espermatogênese normal, devido a causas genéticas. A espermatogênese é um processo dependente de altos níveis de hormônios sexuais masculinos, os andrógenos. E os andrógenos, por sua vez, exercem sua função quando associados ao receptor androgênico (RA), proteína codificada pelo gene RA. Mutações no gene RA levam a síntese do RA não funcional, o que acarreta em falhas no processo de espermatogênese e consequentemente causam infertilidade masculina. O trabalho teve como principal objetivo verificar a ocorrência ou não de mutação no gene RA em pacientes com infertilidade masculina idiopática do Centro de Reprodução Humana do HCUFG. Foram analisadas 206 amostras de pacientes, sendo 95 normais e 111 alterados para o espermograma. As amostras foram amplificadas para os exons 1, 4, 6, 7 e 8 do gene RA e os resultados submetidos às análises estatísticas, teste U, quiquadrado e regressão logística. Foi verificada a existência de relação entre alteração no espermograma e mutação no gene RA. A análise da relação entre espermograma e mutação no gene RA dos cinco exons avaliados foi significativa somente para os exons 1 e 7. Os pacientes com alteração numérica para o espermograma apresentaram uma freqüência maior de mutações no exon 7, os pacientes teratozoospérmicos no exon 1 e os astenozoospérmicos no exon 7. Os exons 4, 6 e 8 não apresentaram relação estatística significativa para alterações no espermograma. Dentre os resultados referentes aos hábitos sociais, o etilismo mostrou-se significativo para mutações no gene RA. A realização desse estudo vem reafirmar a relação entre presença de mutações no gene RA como prováveis causas de defeitos na espermatogênese e, consequentemente, infertilidade masculina idiopática, não dependendo exclusivamente do fator gênico, mas da associação entre este fator e o meio ambiente onde o homem está inserido

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The first evaluated the embryo quality and the second risk factors capable of interfering with the success of pregnancy. information of 278 cycles of women were surveyed who submitted any Assisted Human Reproduction technique during the study period. In the first analysis were surveyed: cleavage of the embryo, the result of βHCG, embryo quality and microbiological contamination of the means of embryos crops. In the second, they evaluated the size of follicles per woman, amount of aspirated oocytes, raised, inseminated and injected, ovarian stimulation scheme, maternal infections, infertility period and sperm quality. The study design was a case control. Data were entered into Epi-Info 3.3.2 and analyzed in BioEstat 5.3 program. We evaluated the relationship between the groups and the factors and the success of pregnancy the odds ratio (OR) and chi-square test (p = 0.05). RESULTS: In the first analysis it was observed that the ISO 5/7 laboratory, there were successful in the formation of embryos and the conventional O , CI - 2: 0.24, p: 0.81). 5/7 96.6% ISO laboratory embryos were generated A or B, since the conventional laboratory, 90.4% were A or B. The pregnancy success in the laboratory I O was , and conventional laboratory O CI to 2: 2,24; p: 0.13). The second correlation was found with pregnancy failure female factors: having more than 40 years (OR 6.04, CI: 1.34 to 27.08; p: 0.010), higher infertility time 97 months (OR: 4.49, CI: 1.65 to 12, .21; p: 0.00) and have endometrial thickness of less than 10mm (OR: 5.42, CI: 2.44 to 12.05; p:0.001). The male factors with correlation were: oligozoospermia (OR:3,35; IC:1,41-7,92; p:0,010) e teratozoospermia (OR:4,14; IC:1,89-9,07; p:0,010).Microbiological contamination was found in 11.06% of semen samples. CONCLUSIONS: There was no statistical difference between the results of the two laboratories, however we observed a trend of better quality embryos in ISO 5/7 laboratory. It was concluded that the patients attended the LabRep/HC/UFG, present a great heterogeneity of clinical profiles and different reproductive characteristics. It shows how a major challenge that encourages the ongoing investment in cutting edge technology and processes, as well as constant improvement of the multidisciplinary team that make up the lab. / INTRODUÇÃO: A frequência de produção de embriões e sucesso na gravidez são os principais parâmetros usados para verificar a qualidade de laboratórios de reprodução humana. OBJETIVO: Comparar o sucesso na produção e qualidade de embriões, taxa de sucesso e fatores relacionados a gravidez no LabRep/HC/UFG, antes de profundas adequações estrututurais, quando era classificado como laboratório convencional e após as adequaçãos, quando passou a ser classificado como um laboratório ISO 5/7 e os fatores relacionados ao sucesso da fertilização. MÉTODO: O desenho do estudo foi do tipo caso controle. Os dados foram inseridos no programa Epi-Info 3.3.2 ® e analisados no programa BioEstat 5.3 ®. Foram avaliadas a relação entre os grupos e dos fatores e o sucesso da gravidez pelo odds ratio (OR) e qui-quadrado (p=0,05). O estudo se deu no Laboratório de Reprodução Humana do HC/UFG Goiânia-Goiás. Foram pesquisadas informações de 278 ciclos de mulheres que submeteram a uer técnica de FIV, ICSI E IIU, como tratamento de Reprodução Humana Assistida no período do estudo. O trabalho foi dividido em três artigos para melhor compreensão dos resultados. No primeiro artigo realizou-se uma revisão bibliográfica sobre relação entre alterações bioquímicas, ambientais e microbiológicas e o sucesso da técnica de fertilização in vitro. O segundo artigo avaliou a qualidade embrionária e o terceiro, os fatores de risco com capacidade de interferir no sucesso da gestação. Na primeira análise foram pesquisadas: clivagem do embrião, resultado do βHCG, qualidade embrionária e a contaminação microbiológica dos meios de cultivos de embriões. Na segunda, foram avaliados o tamanho dos folículos por mulher, quantidade de oócitos aspirados, captados, inseminados e injetados, esquema de estimulação ovariana, infecções maternas, período de infertilidade e qualidade espermática. RESULTADOS: No primeiro trabalho científico onde comparou-se o sucesso na produção e qualidade de embriões, taxa de sucesso e contaminação microbiológica nos meios de cultura onde os embriões foram cultivados antes das adequações estrututurais, quando era classificado como laboratório convencional e após as adequaçãos, quando passou a ser classificado como um laboratório ISO 5/7, foi observado que no laboratório ISO 5/7, houve 74,1% de sucesso na formação de embriões e no convencional 67,8% (OR:1,30; IC:0,47-3,61; אּ2:0,24; p:0,81). No laboratório ISO 5/7 96,6% dos embriões gerados eram A ou B, já no laboratório convencional, 90,4% eram A ou B. O sucesso de gravidez no laboratório ISO 5/7 foi de 22,8% e no laboratório convencional de 36,2% (OR:1,9; IC: 0,81-4,52; אּ 2: 2,24; p: 0,13). No segundo trabalho científico onde avaliou-se os fatores relacionados a gravidez no LabRep/HC/UFG, foi encontrado correlação do insucesso de gravidez com os fatores femininos: ter mais de 40 anos (OR: 6,04; IC: 1,34-27,08; p:0,010), tempo de infertilidade superior a 97 meses (OR: 4,49; IC: 1,65-12,.21; p:0,001) e possuir endométrio com espessura inferior a 10mm (OR: 5,42; IC: 2,44-12,05; p:0,001). Os fatores masculinos com correlação foram: oligozoospermia (OR: 3,35; IC: 1,41-7,92; p:0,010), teratozoospermia (OR: 4,14; IC: 1,89-9,07; p:0,010). Foi encontrado contaminação microbiológica em 6.11% das amostras de sêmen. CONCLUSÕES: No primeiro trabalho científico foi possível concluir que não houve diferença estatística entre os resultados dos entre os dois laboratórios. No segundo trabalho científico concluiu-se que os fatores relacionados ao insucesso do tratamento de reprodução assistida encontrados foram: idade superior a 40 anos, tempo de infertilidade superior a 96 meses e espessura endometrial inferior a 10mm e presença de sêmen de baixa qualidade.

A Fibrose Cística (FC) é a doença autossômica recessiva mais freqüente em caucasianos e está associada, em seu amplo espectro de apresentação clínica, a mais de 1500 mutações no gene CFTR (Cystic Fibrosis Transmembrane conductance regulator). O papel de CFTR é especialmente relevante no desenvolvimento da porção reprodutiva dos ductos mesonéfricos. Em 98% dos pacientes masculinos portadores da FC, mutações em CFTR são responsáveis pela ausência bilateral congênita dos ductos deferentes (CBAVD), associada à anomalias variáveis das vesículas seminais, ductos ejaculatórios e da porção distal dos epidídimos. A ausência uni ou bilateral congênita dos ductos deferentes (CAVD), na ausência de outros sinais clínicos de FC, é conhecida causa de infertilidade masculina, presente em 1%-2% de todos os homens inférteis, e em cerca de 10% dos azoospérmicos. A reprodução assistida utilizando a injeção intracitoplasmática de espermatozóides (ICSI) obtidos preferencialmente por aspiração microcirurgica de espermatozóides do epidídimo (MESA) permite a paternidade biológica a esses pacientes. Em função da alta morbi-mortalidade da FC e da alta freqüência de portadores assintomáticos, estimada em 1:25, é recomendável que seja realizado teste para identificação de mutações em CFTR em todos os pacientes com CAVD antes de serem submetidos à ICSI. Em populações de etnia homogênea, a mutação F508 é identificada em 90% dos pacientes com FC e em 70% a 85% dos pacientes com CAVD. No Brasil, onde diferenças étnicas refletem a heterogeneidade genética, a freqüência da mutação F508 varia entre 23% e 50% em paciente com FC indicando que outras mutações devam estar envolvidas. Este dado levou ao estudo completo do gene CFTR de 20 homens inférteis com CAVD visando a identificação das mutações mais prevalentes em nossa população. Foram identificadas mutações em 17 pacientes (85%): três DF508 representando 15% (3/20), uma G542X, uma 875+1G>A e 4 mutações ainda não descritas na literatura, a S753R, G149W identificada em dois irmãos, V580F e a 712-1G>T. A variação no trato polipirimidínico em IVS8 (alelo 5T), seja como segunda mutação ou presente em homozigose, está diretamente relacionada com a CAVD, com freqüências em população caucasiana masculina infértil variando entre 21% e 30%. No presente estudo, 15 (15/20=75%) pacientes apresentaram o alelo a variante alélica 5T sendo que em 8 pacientes essa variante alélica foi identificada em heterozigose composta com outra mutação. Anomalias renais foram identificadas em 6 pacientes, todos com CBAVD. O presente estudo pode correlacionar o fenótipo da CAVD a alterações no genótipo de CFTR em 100% dos pacientes investigados / Cystic Fibrosis (CF) is the most common autosomal recessive disorder in caucasians and is associated, in an wide variety of different clinical manifestatons. More than 1500 mutations in the CFTR gene (Cystic Fibrosis regulator Transmembrane conductance) have been described and an even growing number of mutations are being currently studied worldwide. The role of CFTR gene is especially important in reproductive tissues of the mesonephric tract sensitive to the expression of the CFTR gene. The great majority of infertile males with CF (98%) have clinical manifestations and mutations in CFTR are responsible for the congenital bilateral absence of the vas deferens (CBAVD), associated to the abnormalities of the seminal vesicles, ejaculatory ducts and/or the distal portion of the epididymis. The congenital absence, uni or bilateral, of the vas deferens (CAVD), in the absence of other clinical signals of CF is a known cause of male infertility present in 1%-2% of all men investigated and in about 10% of men with obstructive azoospermia. Serious considerations should be drawn about the lack of proper diagnosis of infetile males with CFTR that seek reproductive clinics for assisted reproductive techniques (ARTs), as well as the lack of proper consideratins of the existance of this disease as a potential cause of male infetility among male are takers, like urologistas, andrologistas and gynecologists that rush for the misuse of ARTs. The introduction of Intracytoplasmic Sperm Injection (ICSI), has given new reproductive potetntial for these couples, but again as in the majority of cases it is obstructive azoospermia, couples should be advised about proper microsurgical sperm retrieval, preferentialy microsurgical epydidymal sperm aspiration (MESA). As a consequence of the potential high mortality rate of the CF descendents and the high frequency of carriers, estimated in 1:25,it is highly recommended that tests for correct identification of mutations in CFTR gene are carried out for all patients with CAVD before considered being submitted to ICSI. In populations of homogeneous ethnic origin, the mutation F508 is identified in 90% of the patients with CF and between 70% and 85% of the patients with CAVD. In Brazil, where ethnic differences reflect the genetic heterogeneity, the frequency of the mutation in F508 varies between 23% and 50%, indicating that other mutations must have a role. Our data looked carefully in the CFTR gene of 20 infertile men with CAVD aiming at the identification of the most prevalent mutations in our population. Mutations had been identified in 17 patients (85%): three DF508 representing 15% (3/20), one G542X, one 875+1G>A and 4 mutations not yet described in literature, S753R, G149W identified in two brothers, V580F and 712-1G>T. In the literature the allelic variant in IVS8 (allele 5T), either as a second mutation or in homozygosis, is directly related with the CAVD, with reported frequencies in the infertile caucasian male population varying between 21% and 30%. In the present study, 15 (15/20=75%) patients presented the CFTR mutation in the IVS8/5T: eight of them in heterozygosis composed with another mutation. Regarding genitourinary tract malformations, kidney anomalies were identified in 6 patients, all with CBAVD. In the present study we could correlationate the phenotype of the CAVD with the genotype alterations of CFTR gene in 100% of the investigated patients