Este trabalho consiste em um estudo sobre os parâmetros para validação de metodologia para teste de esterilidade. As qualificações das instalações e dos operadores são consideradas etapas integrantes na validação analítica, cuja finalidade abrange minimizar a ocorrência de resultados falso-positivos e falso-negativos. Foram comparadas as eficiências de três métodos de teste de esterilidade empregando inoculação direta, inoculação indireta nos moldes convencionais e inoculação indireta em sistema fechado quanto à detecção do crescimento de diferentes tipos de microrganismos normalmente encontrados como contaminantes em produtos farmacêuticos Aspergillus niger, Bacillus subtilis, Candida albicans, Clostridium sporogenes, Escherichia coli, Micrococcus luteus, Pseudomonas aeruginosa, Saccharomyces cerevisiae e Staphylococcus aureus. Cada um deles foi inoculado em amostras constituídas de frascos plásticos de 10 mL de solução fisiológica em três diferentes níveis de contaminação: 5, 10 e 50 UFC/10 mL. Utilizou-se nos testes diferentes tipos de meios de cultura meio de caseína de soja, meio de tioglicolato, meio Sabouraud e meio Clausen bem como distintas temperaturas de incubação 12, 22, 32 e 42 ºC durante um período de incubação de 28 dias. Os resultados demonstraram que as metodologias aplicadas apresentam diferenças significativas na eficiência de detecção de contaminantes, mesmo quando atendidas condições de equivalência quanto ao número de amostras e volume unitário submetidos ao teste. Verificou-se que as condições preconizadas nos compêndios farmacopeicos quanto aos tipos de meio de cultura, meio de caseína de soja e meio de tioglicolato, as temperaturas de incubação, 22 e 32 ºC, bem como o período de incubação de 14 dias, apresentaram os melhores resultados na detecção de contaminantes microbiológicos. / This paper aims the study of parameters used for validation of methods for sterility tests. Installation and operators qualification are considered a step for analytical validation, in order to reduce the occurrence of false-positive and false-negative results. The efficiency of three methods for sterility tests with direct, conventional indirect and closed system indirect inoculation (Steritest®) was submitted to a comparative study concerning their capacity of growth detection of different types of microorganisms that are most frequently found as contaminants of pharmaceutical products Aspergillus niger, Bacillus subtilis, Candida albicans, Clostridium sporogenes, Escherichia coli, Micrococcus luteus, Pseudomonas aeruginosa, Saccharomyces cerevisiae and Staphylococcus Aureus. Each of them was inoculated in samples of plastic bottles of phisiological solution (10 mL) in three different levels of contamination: 5, 10 and 50 CFU/10 mL. Different types of culture media were used soybean casein, thioglycollate, Sabouraud and Clausen as well as different temperatures of incubation 12, 22, 32 and 42 ºC during an incubation period of 28 days. The results showed significant differences between the methodologies applied in what concerns the detection of contaminantion, even an equivalent number of samples and content of each unit submited to test. The best results for microbial contaminants detection were obtained as described in pharmacopeias in what concerns the types of culture medium, soybean casein media and thioglycollate media, the temperatures of incubation, 22 and 32 ºC, and the incubation period of 14 days.

O presente estudo teve por objetivo analisar os efeitos da inoculação de Acinetobacter sp. ICB117 no desenvolvimento da cana-de-açúcar variedade SP791011. As plantas foram cultivadas a partir de toletes com uma gema e fornecidas pelo Centro de Tecnologia Canavieira. Aos 30 dias de idade, foram submetidas aos seguintes tratamentos: controle (C) sem inoculação e solução de Hoagland sem nitrogênio; nitrato (N) sem inoculação e solução de Hoagland com nitrato (15 mM); bactéria (B) inoculação bacteriana e solução de Hoagland sem nitrogênio; bactéria + nitrato (BN) inoculação bacteriana e solução de Hoagland com nitrato (15 mM). Antes da realização da inoculação, foi inserido em ICB117 um plasmídio que contém um gene de expressão para o GFP. O material vegetal foi coletado mensalmente (2 coletas), sendo os seguintes parâmetros analisados: altura, nº de folhas, massa seca, composição de aminoácidos na seiva xilemática, razão C/N das raízes e folhas, atividade da nitrato redutase foliar, assimilação máxima de CO2 e estimativa da população endofítica de ICB117. / Acinetobacter sp. ICB117 is a nitrogen-fixing bacterium isolated from Brazilian sugarcane (Saccharum sp. variety SP791011) which releases amino acids, polyamines and indole-3-acetic acid (IAA) when grown in vitro. The present study aimed to evaluate the effects of Acinetobacter sp. ICB117 (a diazotrophic endophytic bacterium) inoculation on the growth of Saccharum sp. variety SP791011 (sugarcane). Sugarcane plants were obtained from stools with one bud, provided by CTC (Centro de Tecnologia Canavieira). Plants with 30 days old were submitted to the following treatments: control (C) - no bacterium inoculation and Hoagland solution without nitrogen; nitrate (N) - no bacterium inoculation and Hoagland solution with nitrate (15 mM); bacteria (B) - bacterium inoculation and Hoagland solution without nitrogen; Bacteria + nitrate (BN) - bacterial inoculation and Hoagland solution with nitrate (15 mM). Previously to the inoculation procedure, Acinetobacter sp. ICB117 was transformed with plasmid containing a gene that expresses the Green Fluorescent Protein (GFP). Plant material were sampled monthly (2 sampling times) in order to evaluate the following parameters: hight, number of leaves, dry mass, amino acids composition on xylem sap, leaf and root nitrogen and carbon content, leaf nitrate reductase activity, photosynthetic CO2 assimilation and ICB117 endophytic population estimative. The results showed a very similar pattern along experimental period: inoculation with bacterium increased plant total dry mass (evidenced by roots), number of leaves and the assimilation of CO2, but it did not influece significantly the shoot size of the plants and the leaf nitrate reductase activity. The endophytic ICB117 population was larger in plants treated without nitrate than in plants with nitrate inputs. Among the different treatments, alterations were not verified in the amino acids composition on xylem sap prevailing arginine in the sap of all the plants. In the roots, the carbon nitrogen (C/N) ratio was smaller in the plants treated with nitrate (N and BN); in the leaves, the C/N ratio was smaller only in the plants treated with nitrate without inoculation (N).

Cerca de 38% das árvores cítricas do Estado de São Paulo são afetadas pela Clorose Variegada dos Citros - CVC, causando perdas anuais de cerca de 100 milhões de dólares para as indústrias citrícolas. O agente causal da CVC é uma bactéria gram-negativa, fastidiosa e habitante dos vasos de xilema denominada Xylella fastidiosa, transmitida por cigarrinhas pertencentes à família Cicadellidae, subfamília Cicadellinae. Já foi observado que laranjas doces jovens, na faixa de 3 a 4 anos de idade, são mais sensíveis à CVC do que as plantas adultas. A doença é mais severa em regiões onde estresses adicionais ocorrem, como alta demanda atmosférica por água (decorrente do aumento da temperatura e do déficit de pressão de vapor) e déficit hídrico no solo. Os mecanismos fisiológicos e químicos que caracterizam o estabelecimento da CVC ainda não foram totalmente compreendidos, especialmente sob condições de estresse. Sendo assim, estudos que consideram a interação entre época do ano, regime hídrico e o estabelecimento da CVC em plantas jovens são necessários para auxiliar na elaboração de programas de manejo da doença. O presente trabalho avaliou a sobrevivência de infecções iniciais de X. fastidiosa em plantas cítricas jovens no campo, mantidas com e sem irrigação, 6, 12 e 18 meses após inoculações mecânicas realizadas no verão (mês de janeiro) e inverno (mês de julho). Visando analisar a influência do regime hídrico isoladamente foram realizadas, na época do outono (final de maio e início de junho), inoculações mecânicas e inoculações com as cigarrinhas vetoras Bucephalogonia xanthophis e Dilobopterus costalimai em plantas cítricas jovens mantidas em capacidade de campo e déficit hídrico em casa-de-vegetação; as plantas inoculadas mecanicamente foram avaliadas 5 meses após a data de inoculação, enquanto que as plantas inoculadas com insetos foram avaliadas 10 meses após a data de inoculação. Em condições naturais, foram observadas, 6 meses da data de inoculação, maiores taxas de sobrevivência de infecções iniciais de X. fastidiosa em plantas jovens inoculadas na época de inverno na ausência de estresse hídrico; no entanto, 12 meses da data de inoculação, as plantas inoculadas mantidas com e sem irrigação apresentavam médias populacionais bacterianas estatisticamente iguais. As plantas mantidas em casa-devegetação e inoculadas mecanicamente apresentaram resultados semelhantes àqueles obtidos 6 meses da data de inoculação em condições naturais; no caso da inoculação com cigarrinhas vetoras, foi detectada a presença da bactéria apenas em plantas em capacidade de campo. Estes resultados indicam que o déficit hídrico é um fator desfavorável para o estabelecimento de infecções primárias de X. fastidiosa em plantas cítricas jovens. Os resultados obtidos 12 meses após a inoculação mecânica em condições naturais, logo após a estação de chuva, indicam que, uma vez retirado o estresse hídrico, tal influência negativa deixa de existir e a bactéria readquire sua capacidade de infecção e colonização do hospedeiro. / In Brazil, about 38% of the citric trees of the São Paulo State are affected by the Citrus Variegated Chlorosis - CVC, causing annual losses of about 100 million dollars for the citrus industries. The causal agent of CVC is a gram-negative, fastidious bacterium inhabitant of the xylem vessels called Xylella fastidiosa. It is vectored by sharpshooter leafhoppers pertaining to family Cicadellidae and subfamily Cicadellinae. It was observed that young citrus plants, between 3 and 4 years of age, are more susceptible to CVC than adult plants. The disease is more severe in regions where additional stresses occur, such as high atmospheric demand (due to the increase of temperature and vapor pressure deficit) and water deficit in the soil. The physiological and chemical mechanisms that characterize the establishment of CVC within the host have not yet been totally understood, especially under conditions of stress. Therefore, studies that consider the interaction between seasons, water regime and the establishment of CVC in young plants are necessary in the elaboration of more efficient management programs. The survival of initial infections of X. fastidiosa in young citrus plants mechanically inoculated during the summer and winter, and kept in the field with and without irrigation, were evaluated 6, 12 and 18 months after mechanical inoculations. To analyze the influence of water regime separately, an experiment was carried through during the autumn (final of May and beginning of June) in a greenhouse. Young citrus plants kept in field capacity and water deficit were mechanically inoculated and inoculated with sharpshooter leafhoppers Bucephalogonia xanthophis and Dilobopterus costalimai. The mechanically inoculated plants were evaluated 5 months after the date of inoculation, whereas the plants inoculated with insect vectors were evaluated 10 months after the date of inoculation. In natural conditions, 6 months of the date of inoculation, higher survival rates of initial infections of of X. fastidiosa were detected in inoculated young plants during winter in the absence of water deficit; however, 12 months after inoculation, the young citrus plants kept with and without irrigation presented statistically equal bacterial population averages. The mechanically inoculated plants kept in the greenhouse presented similar results to those kept in natural conditions and analyzed 6 months after mechanical inoculation. In the case of inoculation with sharpshooter leafhoppers, the presence of the bacterium was detected only in plants kept in field capacity. The results demonstrate that the water deficit is unfavorable for the establishment of primary infections of X. fastidiosa in young citrus plants. The results obtained 12 months after mechanical inoculation in natural conditions, right after the rainy season, indicate that, once the water deficit is removed, its negative influence ceases to exist and the bacterium reacquires its capacity of infection and colonization of the host.

Orientador: Eleni Gomes / Coorientador: André Rodrigues / Banca: Ana Flávia Azevedo Carvalho / Banca: Eduardo Alves de Almeida / Resumo: A elevada migração da população remanescente da zona rural para os grandes centros urbanos, nas últimas décadas, ocasionou uma maior produção de lixo, principalmente, os orgânicos de origem doméstica, alcançando os 55,5mi de toneladas em 2011. Considerando que aproximadamente 50% do lixo urbano no Brasil é composto de matéria orgânica, este poderia ser reaproveitado pelo processo de compostagem. A compostagem é a transformação do lixo orgânico em um produto relativamente estável e com baixa quantidade de matéria orgânica, que pode ser reaproveitado como adubo orgânico na agricultura ou como corretivo de solos degradados. Com base nessa problemática, foi proposto o presente trabalho cujo objetivo foi conhecer a microbiota fúngica das diferentes fases da compostagem, isola-los e reintroduzi-los no processo, buscando uma aceleração da biodegradação da matéria orgânica presente no lixo urbano, a fim de reduzir os custos de produção do composto orgânico, aumentar a aceitação da técnica como alternativa ambientalmente correta aos lixões à céu aberto e gerar uma diminuição na quantidade de resíduos encaminhada aos aterros sanitários. Em testes laboratoriais, o inóculo fúngico demonstrou melhorar o processo de compostagem, pela redução mais acelerada da matéria orgânica e diminuição da toxicidade do produto acabado, porém em testes em escala de pilhas o inóculo não apresentou grande variação em relação à compostagem tradicional, não degradando a matéria orgânica mais rapidamente, porém gerando diminuição acelerada da toxicidade / Abstract: The high migration of the remaining population from rural to large urban centers in recent decades, has led to a greater production of waste, mainly organic, home-grown, reaching 55.5 mi tonnes in 2011. Whereas approximately 50% of urban waste in Brazil is composed of organic matter, this could be reused by the composting process. Composting is the transformation of organic waste into a relatively stable and low in organic matter product, which can be recycled as organic fertilizer in agriculture or as a corrective of degraded soils. Based on these problems, we proposed the present work aims to better understand the fungal microbiota of the different stages of composting, isolates them and reintroduce them in the process, seeking an accelerated biodegradation of organic matter in municipal waste in order to reduce production costs of organic compost, increase acceptance of the technique as an environmentally friendly alternative to open dumps and generate a decrease in the amount of waste sent to landfills. In laboratory tests, the fungal inoculum was shown to improve the composting process, the faster decline in organic matter and decrease in toxicity of the finished product, but in the pile sacale tests inoculum showed no great variation from the traditional composting, not degrading the organic matter faster, but generating accelerated decrease of toxicity / Mestre

Orientador: Ricardo Antonio Ferreira Rodrigues / Banca: Orivaldo Arf / Banca: Gisele Herbst Vazquez / Resumo: A produtividade média de feijão no Brasil é baixa. Alternativas que possam aumentar a produtividade de forma sustentável devem ser preconizadas, tais como a redução do uso de fertilizantes nitrogenados pela adoção da fixação biológica de nitrogênio. Neste cenário, uma técnica alternativa de co-inoculação ou também denominada de inoculação mista com bactérias simbióticas e assimbióticas tem sido estudada em leguminosas, no entanto existem poucos estudos em campo com feijoeiro e sobre a influência da quantidade de água irrigada. Dessa forma, o objetivo deste trabalho foi avaliar a eficiência da inoculação e co-inoculação de feijão com Rhizobium tropici e Azospirillum brasilense sob duas lâminas de irrigação na produção e qualidade fisiológica de sementes. O experimento foi desenvolvido no período de outono/inverno dos anos de 2012 e 2013, no município de Selvíria-MS. O delineamento experimental foi de blocos casualizados em esquema fatorial 5x2, com quatro repetições. Os tratamentos foram constituídos pela combinação de cinco formas de fornecimento de nitrogênio (testemunha sem inoculação com 40 kg ha-1 de nitrogênio em cobertura; testemunha sem inoculação com 80 kg ha-1 de N em cobertura; inoculação de A. brasilense com 40 kg ha-1 de N em cobertura; inoculação de R. tropici com 40 kg ha-1 de N em cobertura; e co-inoculação de A. brasilense e R. tropici com 40 kg ha-1 de N em cobertura) e duas lâminas irrigação (recomendada e 75% da recomendada). A aplicação de nitrogênio em cobertura foi realizada utilizando a ureia. Concluiu-se que a co-inoculação, a inoculação de R. tropici, a inoculação de A. brasilense associadas a 40 kg ha-1 de nitrogênio em cobertura e a testemunha sem inoculação com aplicação de 80 kg ha-1 de N em cobertura não proporcionam acréscimos de produtividade em relação a testemunha não inoculada com 40 kg ha-1 ... / Abstract: The average yield of beans in Brazil is low. Alternatives that can increase yield in a sustainable manner should be preconized, such as reducing the use of nitrogen fertilizers through the adoption of biological nitrogen fixation. In this scenario, an alternative technique of co-inoculation or also called the mixed inoculation with symbiotic and non-symbiotic bacteria has been studied in leguminous, however there are few studies in field with common bean under the influence of the amount of water irrigated. Thus the objetive of this study was to evaluate the efficiency of inoculation and co-inoculation of common bean with Rhizobium tropici and Azospirillum brasilense under two irrigation depths on production and physiological seed quality. The experiment was performed in the fall/winter of the years 2012 and 2013, in Selviria-MS. A randomized block design in a 5x2 factorial scheme with four repetitions was used. The treatments were constituted by the combination of five forms of nitrogen supply (control non-inoculated with 40 kg ha- 1 of nitrogen in topdressing; control non-inoculated with 80 kg ha- 1 of N in topdressing; A. brasilense inoculation with 40 kg ha-1 of N in topdressing; R. tropici inoculation with 40 kg ha-1 of N in topdressing; and co-inoculation of A. brasilense and R. tropici with 40 kg ha- 1 of N in topdressing) and two irrigation depths (recommended and 75% of the recommended). Was concluded that the co-inoculation, the inoculation of R. tropici, the inoculation of A. brasilense associated with 40 kg ha-1 of nitrogen in topdressing and the control non-inoculation with application of 80 kg ha-1 of N topdressing not increase of grain yield compared to control non-inoculation with 40 kg ha-1 of nitrogen in topdressing. Considering the development conditions of the experiment, the use of 75% of the recommended irrigation depth provides similar or greater grain yield than the ... / Mestre

Submitted by Jean Medeiros (jeanletras@uepb.edu.br) on 2016-03-02T12:31:51Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) PDF - Ciro Igor Torres Sizenando.pdf: 698810 bytes, checksum: 11df6396d3b2c6adbed9262dd3c696ea (MD5) / Approved for entry into archive by Secta BC (secta.csu.bc@uepb.edu.br) on 2016-06-13T20:28:28Z (GMT) No. of bitstreams: 2 PDF - Ciro Igor Torres Sizenando.pdf: 698810 bytes, checksum: 11df6396d3b2c6adbed9262dd3c696ea (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-13T20:29:50Z (GMT). No. of bitstreams: 2 PDF - Ciro Igor Torres Sizenando.pdf: 698810 bytes, checksum: 11df6396d3b2c6adbed9262dd3c696ea (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2015-02-12 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Peanut (Arachis hypogaea L.) is one of leading oilseeds grown worldwide and considered one of the most important oleaginous crops. Due to wide adaptability to tropical conditions and economic value, peanuts may have an important role in the generation of income to small farmers located at Northeast region. The adoption of new crop practices encompassing agroecological management should be encouraged among farmers in order to minimizing costs, such as biological fertilization by using Bradyrhizobium inoculants. The response inoculation, however, is genotype dependent thus it is necessary to identify peanut genotypes more responsive to BNF in order to promote better growth and development of plants. In this study, two peanut genotypes were submitted to management involving three Bradyrhizobium isolates aiming to estimate the pod and seed yield. The experiment was carried out in experimental field of UFRPE, Recife, PE, using two earliness genotypes, BR 1 and L7 bege. Seeds were planted in plots performed by five 3m-rows, using the spacing of 0.70 m x 0.20 m. The soil was previously fertilized with superphosphate and potassium chloride. The treatments were: fertilization with three different Bradyrhizobium isolates (1: 115-7, 2: 123-10 and 3: 1436 SEMIA 6144), fertilization with diammonium sulfate and absolut control (no nitrogen fertilization and inoculation). The experimental design adopted was randomized blocks with four replications. The variables evaluations were: plant height, number of nodules and pods per plant, pod weight and harvest index. It both genotypes had significant response to both Bradyrhizobium and diammonium sulfate fertilizations, mainly to pod pro. Cultivar BR 1 was better benefited with 1 and 2 isolates, revealing 56% and 43% increasing in pod productions, respectively, while L7 bege was responsive only to 2 with increase of 32% and same result to diammonium sulfate fertilization. Based on condition on this research, SEMIA 6144 did not show effectiveness to both genotypes used in this work. / O amendoim (Arachis hypogaea L.) é uma das principais oleaginosas cultivadas no Brasil e no mundo, considerada uma das mais importantes culturas entre as leguminosas. Em função da larga adaptabilidade às condições tropicais e por ser uma cultura de valor econômico, o amendoim tem um papel importante para a geração de renda de pequenos agricultores na região Nordeste, especialmente de base familiar. A adoção de práticas culturais de cunho agroecológico e de baixo custo devem ser estimuladas como forma de incentivar o cultivo de forma mais adaptada para as tendências da região, tais como, o uso de fertilizantes biológicos a base de Bradyrhizobium. A resposta à inoculação, contudo, é genótipo dependente. Desta forma torna-se necessário a identificação de genótipos de amendoim que sejam mais responsivos a FBN e que contribuam para promover o crescimento e desenvolvimento da cultura. Neste trabalho, dois genótipos de amendoim foram submetidos a um manejo envolvendo três isolados de Bradyrhizobium visando estimar a produtividade em função dos nódulos produzidos. O experimento foi instalado na área experimental da UFRPE, Recife, PE, utilizando-se dois genótipos eretos, de ciclo curto, BR 1 e L7 bege. A unidade experimental foi composta por cinco linhas de três metros de comprimento, onde as três centrais foram utilizadas como área útil. O solo foi previamente fertilizado com cloreto de potássio e superfosfato simples. O plantio foi feito utilizando o espaçamento de 0,70 m entre fileiras e 0,20 m entre plantas. Os tratamentos utilizados foram: fertilização com três inoculantes distintos a base de Bradyrhizobium (isolado 1: 115-7, isolado 2: 123-10A e isolado 3: 1436 SEMIA 6144), fertilização nitrogenada (sulfato de amônio) e controle (cultivo sem fertilização nitrogenada). O delineamento experimental adotado foi em blocos casualizados, com quatro repetições. As variáveis registradas foram: altura de planta, número de nódulos e de vagens/planta, peso de vagens e índice de colheita. Verificou-se que ambos os genótipos obtiveram resposta significativa para as duas fontes de N aplicadas, a linhagem L7 Bege obteve médias superiores a cultivar BR1 em todas as variáveis, com exceção da altura de plantas. Para a produção de vagens, os genótipos mostraram-se responsivos tanto a fonte química como para inoculação com Bradyrhizobium; os isolados 1 e 2 revelaram melhor afinidade com a cultivar BR1 proporcionando incremento de 56% e 43%, respectivamente. Por outro lado a linhagem L7 Bege mostrou-se responsiva apenas ao isolado 2 com incremento de 32%, mesmo resultado obtido com o tratamento químico. O isolado 3, recomendado para a cultura do amendoim, não apresentou efeito significativo.

Este trabalho consiste em um estudo sobre os parâmetros para validação de metodologia para teste de esterilidade. As qualificações das instalações e dos operadores são consideradas etapas integrantes na validação analítica, cuja finalidade abrange minimizar a ocorrência de resultados falso-positivos e falso-negativos. Foram comparadas as eficiências de três métodos de teste de esterilidade empregando inoculação direta, inoculação indireta nos moldes convencionais e inoculação indireta em sistema fechado quanto à detecção do crescimento de diferentes tipos de microrganismos normalmente encontrados como contaminantes em produtos farmacêuticos Aspergillus niger, Bacillus subtilis, Candida albicans, Clostridium sporogenes, Escherichia coli, Micrococcus luteus, Pseudomonas aeruginosa, Saccharomyces cerevisiae e Staphylococcus aureus. Cada um deles foi inoculado em amostras constituídas de frascos plásticos de 10 mL de solução fisiológica em três diferentes níveis de contaminação: 5, 10 e 50 UFC/10 mL. Utilizou-se nos testes diferentes tipos de meios de cultura meio de caseína de soja, meio de tioglicolato, meio Sabouraud e meio Clausen bem como distintas temperaturas de incubação 12, 22, 32 e 42 ºC durante um período de incubação de 28 dias. Os resultados demonstraram que as metodologias aplicadas apresentam diferenças significativas na eficiência de detecção de contaminantes, mesmo quando atendidas condições de equivalência quanto ao número de amostras e volume unitário submetidos ao teste. Verificou-se que as condições preconizadas nos compêndios farmacopeicos quanto aos tipos de meio de cultura, meio de caseína de soja e meio de tioglicolato, as temperaturas de incubação, 22 e 32 ºC, bem como o período de incubação de 14 dias, apresentaram os melhores resultados na detecção de contaminantes microbiológicos. / This paper aims the study of parameters used for validation of methods for sterility tests. Installation and operators qualification are considered a step for analytical validation, in order to reduce the occurrence of false-positive and false-negative results. The efficiency of three methods for sterility tests with direct, conventional indirect and closed system indirect inoculation (Steritest®) was submitted to a comparative study concerning their capacity of growth detection of different types of microorganisms that are most frequently found as contaminants of pharmaceutical products Aspergillus niger, Bacillus subtilis, Candida albicans, Clostridium sporogenes, Escherichia coli, Micrococcus luteus, Pseudomonas aeruginosa, Saccharomyces cerevisiae and Staphylococcus Aureus. Each of them was inoculated in samples of plastic bottles of phisiological solution (10 mL) in three different levels of contamination: 5, 10 and 50 CFU/10 mL. Different types of culture media were used soybean casein, thioglycollate, Sabouraud and Clausen as well as different temperatures of incubation 12, 22, 32 and 42 ºC during an incubation period of 28 days. The results showed significant differences between the methodologies applied in what concerns the detection of contaminantion, even an equivalent number of samples and content of each unit submited to test. The best results for microbial contaminants detection were obtained as described in pharmacopeias in what concerns the types of culture medium, soybean casein media and thioglycollate media, the temperatures of incubation, 22 and 32 ºC, and the incubation period of 14 days.

Em uma unidade produtora de matrizes pesadas, localizada no Estado de São Paulo, foram colhidas duas amostras de conteúdo intestinal de aves com duas semanas de idade, quatro amostras de fezes da cama do mesmo lote às 18 semanas e uma amostra da cama às 30 semanas para pesquisa de coronavirus por uma técnica de nested RT-PCR dirigida a um segmento do gene codificador da RNA–polimerase RNA-dependente (gene pol). Destas, foram positivas 6 amostras correspondentes às duas aves de duas semanas, 3 às aves com 18 semanas e 1 às aves com 30 semanas. A análise filogenética da seqüência do c-DNA correspondente a uma das amostras das aves de duas semanas agrupou este vírus entre os coronavirus do grupo 2. Quando inoculado pelas vias ocular e oral em aves White Leghorn SPF, evidenciou-se diarréia moderada, despigmentação e atraso no crescimento. Os exames anátomo e histopatológicos dos órgãos colhidos revelaram predominantemente enterite e atrofia de vilosidades no reto e duodeno, com infiltração de células mononucleares e exposição de lâmina própria. Aves sentinela SPF alocadas entre os grupos inoculados apresentaram os mesmos sinais clínicos e achados anátomo e histopatógicos. O coronavírus inoculado foi evidenciado em todos os grupos experimentais em intestino delgado, reto, pâncreas e pulmão, assim como em conteúdo entérico. Seqüenciamento e analise filogenética foram realizados com uma amostra positiva por PCR em cada um dos grupos experimentais, confirmando a identidade entres os vírus recuperados e o vírus inoculado e a proximidade deste vírus com os coronavirus do grupo 2, considerando-se o fragmento estudado. Estes resultados demonstram que o coronavirus encontrado, causa doença entérica nas aves, com tropismo predominante por reto e intestino delgado, transmitindo-se horizontalmente de modo eficiente poucas horas após a inoculação e que o segmento do gene pol estudado aproxima este vírus dos coronavirus do grupo 2. / In a broiler breeder farm located at São Paulo State two samples of intestinal contents of 2-week old birds, four fecal samples of the floor from the same flock at 18 weeks of age and one at 30 weeks of age were surveyed to coronavirus by a nested RT-PCR assay targeted to the RNA-dependent RNA-polymerase gene (pol gene). Six out of these samples were positive, two of which from the 2-week old birds, 3 from the 18-week old birds and 1 from the 30-week old birds. Phylogenetic analysis of the c-DNA sequence from one positive sample of a 2-week old bird showed that the virus clustered among group 2 coronaviruses. Oral and ocular inoculation of White Leghorn SPF birds with this coronavirus led to mild diarrhea, depigmentation and growth delay. Gross and histopatological examinations of collected tissues showed enteritis and atrophy of the villi on the small gut and rectum with mononuclear cells infiltration and exposition of the lamina propria. SPF sentinel birds placed between inoculated groups showed the same clinical signs and gross and histological findings. The inoculated coronavirus was evidenced in all experimental groups in the small gut, rectum, pancreas and lungs and also in intestinal contents. DNA sequencing and phylogenetic analysis was carried out with one positive sample per group, confirming the identity between the recovered viruses and the close relationship between this virus and group 2 coronaviruses taking into account the studied fragment. These results show that the coronavirus here found causes enteric disease in birds, with a predominant tropism by the rectum and the small gut, being horizontally transmitted in a few hours and that the pol gene studied segment bring this virus close to group 2 coronaviruses.

Made available in DSpace on 2017-07-10T17:37:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rafael_Hansen_Alves.pdf: 691556 bytes, checksum: 76623d639903f7b4404dca73bdfe4314 (MD5) Previous issue date: 2010-06-30 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Caused by several species of fungus, fusarium head blight (FHB) is a disease of great economic importance in wheat (Triticum aestivum L.), causing large losses in world grain production. In Brazil the main species of fungi responsible for disease is Gibberela zeae (Schwabe.), and its the anamorphic Fusarium graminearum (Schwabe). The control by chemical treatment of the disease with the use of fungicides has low efficiency due to the difficulty of identifying the exact time of application. Therefore, the use of resistant varieties is shown as a safe and economically viable alternative for the production of wheat scab-free. To contribute to the understanding of the behavior of some Brazilian wheat cultivars for FHB, the objectives were to assess the presence or absence of reaction to FHB resistance in wheat cultivars under inoculation in field conditions and greenhouse; and identify what kind of reaction that is acting (resistance type I or type II resistance). The proposed work was developed in the field, greenhouse and laboratory. Two methodologies inoculation were applied, depending on the type of resistance to be tested, and the targets of this work were to evaluate the resistance type I and type II resistance. Twenty eight genotypes with different responses to FHB resistance were used to both evaluations. The resistance of type I was measured by spraying the spikes with suspension. In the field, dispersal of inoculum in the area was used wheat grains colonized with perithecia previously inoculated. The assessment of disease severity in the 28 cultivars was made 21 days after inoculation (DAI), the green ear stage, taking on a note on a linear scale from zero to 100, based on the scale suggested by Stack and McMullen. The evaluation of resistance of type II was performed only in the greenhouse. Obtaining spore mass acquisition was performed by scraping the plates with PDA medium colonized by Fusarium graminearum. Conidia were washed with distilled water and received the inoculum. The concentration was adjusted to 5x104 spores per mL. The count was performed by an optical microscope with the aid of a Neubauer chamber. About 10μL of the suspension of spores (macroconidia) at a concentration of 5x104 mL-1 was injected between the lemma and palea of a spikelet located at the point of infection, on both sides of the ear, using a hypodermic syringe. Evaluations were performed at 7, 14 and 21 days after inoculation by counting the spikelets with symptoms of the disease, excluding the two infected spikelets. The FHB occurred in two periods in the field with greater variation among the 28 cultivars tested in the first season. For resistance type I, nine and nineteen cultivars had the lowest severity, respectively, in field and greenhouse conditions, showing that they are sources of resistance. In accessing the resistance of type II, BRS Umbu, CEP Nova Era, CEP Raizes, BRS 208 e Frontana not proved to be sources of resistance. Already BRS Guamirim, CD 120, Onix, Rubi, CEP 50, BRS 179, Pampeano, Abalone, CD 114, IPR 85, Safira, BRS Louro, CD 117, CDF 2002116, CD 115, BRS177, CD 0529 and BRS Camboim showed the lowest values for AUDPC thus demonstrating the potential for type II resistance to FHB / Causada por diversas espécies de fungo, a giberela e uma doença que possui grande importância econômica na cultura do trigo (Triticum aestivum L.), ocasionando perdas sensíveis na produção mundial de grãos. No Brasil a principal espécie de fungo responsável pela moléstia e Gibberela zeae (Schwabe.), sendo sua forma anamófica Fusarium graminearum (Schwabe). O controle através de tratamento químico da doença com o uso de fungicidas apresenta baixa eficiência devido a dificuldade de identificação do momento exato da aplicação. Portanto, a utilização de variedades resistentes mostra-se como uma alternativa segura e viável economicamente para a produção de trigo livre de giberela. Visando contribuir para o conhecimento do comportamento de algumas cultivares brasileiras de trigo em relação a giberela, os objetivos deste trabalho foram avaliar a presença ou ausência da reação de resistência a giberela em cultivares de trigo, sob inoculação em condições de campo e casa de vegetação; e identificar qual e o tipo de reação que esta atuando (resistência tipo I ou resistência tipo II). O trabalho proposto foi desenvolvido a campo, casa de vegetação e em laboratório. Foram utilizadas duas metodologias de inoculação, conforme o tipo de resistência a ser testada, sendo que, foram alvo do presente trabalho a avaliação da resistência tipo I e resistência tipo II. Para ambas as avaliações foram utilizadas 28 genótipos de trigo com diferentes reações de resistência a giberela. A resistência do tipo I foi medida através da inoculação de plantas em casa de vegetação, através de borrifamento das espigas, com suspensão de esporos. No campo, para dispersão do inoculo na área foi utilizado grãos de trigo colonizados com peritécios previamente inoculados. A avaliação da severidade da doença nos 28 cultivares foi feita 21 dias apos a inoculação (DAI), no estádio de espiga verde, atribuindo-se uma nota em uma escala linear de zero a 100, baseada na escala sugerida por Stack e McMullen. A avaliação da resistência do tipo II foi realizada somente em casa de vegetação. A obtenção de esporos em massa foi realizada através da raspagem de placas com meio BDA colonizadas por Fusarium graminearum. Os conídios foram lavados com água destilada e obtido o inoculo. A concentração foi ajustada para 5x104 esporos por mL. A contagem foi realizada em microscópio óptico com o auxilio da Câmara de Neubauer. Aproximadamente 10μL da suspensão de esporos (macrogonídios) na concentração de 5x104 mL-1 foi injetada entre a lema e a palea de uma espigueta localizada no ponto de infecção, nos dois lados da espiga, utilizando uma seringa hipodérmica. As avaliações foram realizadas aos 7, 14 e 21 dias apos a inoculação, contando-se as espiguetas com sintomas da doença, excluindo as duas espiguetas que foram inoculadas. A giberela ocorreu nas duas épocas a campo com maior variação entre as 28 cultivares testadas na primeira época. Para a resistência do tipo I nove e dezenove cultivares obtiveram os menores valores de severidade, respectivamente, em campo e em casa de vegetação, demonstrando serem fontes de resistência. Na avaliação da resistência do tipo II, as cultivares BRS Umbu, CEP Nova Era, CEP Raízes, BRS 208 e Frontana não demonstraram serem fontes de resistência. Já as cultivares BRS Guamirim, CD 120, Onix, Rubi, CEP 50, BRS 179, Pampeano, Abalone, CD 114, IPR 85, Safira, BRS Louro, CD 117, CDF 2002116, CD 115, BRS 177, CD 0529 e BRS Camboim apresentaram os menores valores para AACPD demonstrando assim, potencial para a resistência do tipo II a giberela

Em decorrência da importância da leptospirose nas criações zootécnicas pelos prejuízos econômicos, principalmente pelas infecções crônicas, forma mais importante na propagação e permanência da bactéria no ambiente, este trabalho pretendeu estudar o curso da leptospirose e a formação do portador pela infecção experimental de hamsters com Leptospira interrogans sorvar Canicola, estirpe LO4, autóctone, pelas vias conjuntiva-nasal (CN) e cérvico-vaginal (CV) comparadas a via controle, intraperitonial (IP) com duas concentrações de inóculo (20-30 e 100-200 leptospiras/campo microscópico) e ainda estabelecer a eficácia conferida por cinco vacinas experimentais formuladas com dois tipos de adjuvantes (saponina e hidróxido de alumínio), pelo desafio de hamster. No preparo das vacinas foi considerada a virulência da estirpe LO4 submetida a duas e cinco passagens in vitro, que foi comparada com duas vacinas controle produzidas com a estirpe de referência, Hond Utrecht IV, com indeterminado número de passagens in vitro. Foram também avaliadas a indução de anticorpos aglutinantes e neutralizantes e as lesões histopatológicas por HE e Warthin-Starry. A detecção das leptospiras nos órgãos de hamsters mortos pela leptospirose ou eutanasiados foi realizada pela visualização direta, cultivo e PCR, considerando qualquer um dos resultados positivo. A visualização direta foi o melhor método de detecção na suspensão de órgãos. A via CN mostrou-se tão letal quanto IP na maior concentração de inóculo (p<0,01) e também mais letal que CV nas duas concentrações (p<0,01). A via CV induziu o portador renal e genital, não havendo diferença entre as duas concentrações. Pela via CN, não houve diferença entre sexos na indução da letalidade e da formação do portador, para ambos os inóculos. Todos os hamsters que morreram pós-inoculação apresentaram grande quantidade de leptospiras nos rins e genitais com necrose e hemorragias. Os animais eutanasiados após 21 dias de infecção, apresentaram leptospiras em rins e genitais sem lesões aparentes, caracterizando o portador. Pela SAM, tanto os animais que vieram a óbito, quanto os sobreviventes à inoculação com ambas as concentrações de leptospiras pelas vias CN, CV e IP, mostraram-se não reagentes na SAM (<25) para as estirpes LO4 e Hond Utrecht IV. As vacinas com ambas as estirpes e adjuvantes induziram baixos títulos de anticorpos aglutinantes e neutralizantes. Os maiores títulos de anticorpos neutralizantes e aglutinantes foram observados nos animais vacinados com a estirpe referência, Hond Utrecht IV. Os anticorpos neutralizantes não tiveram correspondência com o teste desafio em hamsters. As vacinas produzidas com ambas as estirpes protegeram os animais contra a letalidade da leptospirose causada pela infecção com a estirpe LO4, e, portanto a virulência da estirpe não interferiu na eficácia, porém as bacterinas não foram capazes de proteger os hamsters contra a formação do portador renal e genital. / Leptospirosis is important in production systems due to its negative economic impact, and chronic infections are the most relevant type of propagation and permanence of the bacteria in the environment. The objectives of this study were to study the occurrence of leptospirosis, and the formation of carriers animals, by the experimental infection of hamsters with Leptospira interrogans serovar Canicola, LO4 autochthon strain through conjunctive-nasal (CN) and cervix-vaginal (CV) via versus control and intra-peritoneum (IP) via with two inoculum concentrations (20-30 and 100-200 leptospiras/microscopic area). In addition, the efficacy of five experimental vaccines formulated with two types of adjuvants (saponine and aluminum hydroxide) was evaluated. In the vaccine preparation, the virulence of LO4 autochthon strain manipulated in two and five in vitro passages was compared with two control vaccines produced with the reference strain, Hond Utrecht IV with undeterminated number of in vitro passages. It was also evaluated the induction of agglutinating and neutralizing antibody production and the histopathological lesions by HE and Warthin-Starry. The leptospira detection in the hamsters organs killed by the leptospira or euthanized was done by direct visualization or culture or PCR. The direct visualization was the best method of detection in the organs suspensions. The CN via has shown to be as lethal as IP in the highest inoculum concentration (p<0.01) and also more lethal than the CV in the two concentrations (p<0.01). The CV via has induced the occurrence of renal and genital carrier with no difference between the two concentrations. By the CN via, with the two inoculum, there has no difference detected between sex in the lethality induction as well as in the formation of carrier. All hamsters that died following inoculation presented a great amount of leptospiras in the kidneys and genitals with necrosis and hemorrhage. After 21 days of infection, the euthanized animals presented leptospiras in the kidneys and genitals without any apparent lesion, characterizing a carrier. By the SAM, the animals that died, as well as the ones that survived the inoculations by CN, CV and IP via with the two inoculum concentrations were not reactive to the SAM (<25) to the strain LO4 and Hond Utrecht IV. The two vaccines for the two strains and adjuvant have induced low agglutinating and neutralizing antibody titers. The highest agglutinating and neutralizing antibody titers were observed in animals vaccinated with the reference strain, Hond Utrecht IV. The neutralizing antibodies did not correspond to the hamster challenge test. The two vaccines produced with the two strains protected the animals against the leptospira lethality caused by the LO4 strain; therefore, the strain virulence did not affect the efficacy. However, the bacterines were not capable to protect the hamsters against the formation of renal and genital carrier.