The semen cryopreservation in cryotubes reduces the time needed for filling, freezing and thawing of the samples, while optimizing the procedures for artificial fertilization. However, no study has yet been performed with tambaqui semen in this container. The aim of this study was to evaluate the influence of cryotubes (1.6 and 4.5 mL) and thawing time (60ºC/70s and 60ºC/90 s) on the quality and fertility of tambaqui cryopreserved semen. For that, semen samples were diluted in freezing solution (1:9) composed with 75% glucose 290 mOsm , 10% methylglycol and 5% egg yolk, and frozen in liquid nitrogen vapor (in a dry shipper), and stored in liquid nitrogen (-196 °C). The semen samples was thawed at 60ºC in bath water during 70s or 90s and the semen quality was evaluated (Total motility - MT; Progressive motility - MP; Curvilinear velocity - VCL; Straight-line velocity - VSL and Average path velocity - VAP). In this study was also determined the time viability of spermatozoa thawed, maintained under refrigeration at 5°C, and assessed over 24 hours. Besides the kinetic parameters were evaluated sperm morphology and membrane integrity of spermatozoa. The fertilizing capacity of semen was evaluated from the samples thawed in the best time. All parameters of sperm kinetic showed higher values when the semen samples were thawed in 90 s compared to 70 s, independently of cryotube type. No significant differences were observed in sperm kinetic parameters after thawing between samples frozen in 1.6 ml and 4.5 mL cryotubes, except for total motility that was higher in 1.6 mL (47 ± 14% ) compared with 4.5 mL cryotubes (40 ± 11%), independently of thawing time. After activation, the spermatozoa significantly reduced the values of kinetic parameters within 37 seconds, except the MT which remained constant during this period. Relying on the sperm parameters evaluated (VCL, VSL, VAP and membrane integrity for both cryotubes and MT, MP and morphology only for 1.6 mL cryotube) the frozen semen maintained the quality during 3h after thawing. The fertilization rate obtained with fresh semen (74±6%) was higher than cryopreserved semen (1.6 mL - 45±9% and 4.5 mL - 41±12%). The two cryotubes did not differ in this parameter. A high correlation (p <0.05) was observed between fertility and sperm kinetics parameters (MT - 89%, MP - 86%; VCL - 79%; VSL - APV and 69% - 78%). It is concluded that 1.6 and 4.5 mL cryotubes can be used in the cryopreservation of tambaqui semen being recommended to be thawed at 60°C for 90s and their use in fertilization procedures within 3 hours after thawing since kept at 5°C. / A criopreservação de sêmen em criotubos reduz o tempo necessário para o envase, congelamento e descongelamento das amostras, além de otimizar os procedimentos de fertilização artificial. No entanto, nenhum estudo ainda foi realizado com o sêmen de tambaqui neste recipiente. Assim, o objetivo do presente trabalho foi avaliar a influência do tipo de criotubo (1,6 e 4,5 mL) e do tempo de descongelamento (60ºC/70s e 60ºC/90s) sobre a qualidade e fertilidade do sêmen de tambaqui criopreservado. Para isso, amostras de sêmen foram diluídas em solução de congelamento (1:9 v/v) composta por 75% de glicose 290 mOsm, 10% de metilglicol e 5% de gema de ovo, sendo envasadas em criotubos de 1,6 e 4,5 mL, congeladas em vapor de nitrogênio líquido no botijão dry-shipper (-175ºC) e armazenadas em botijão criogênico a -196°C. Para avaliação do tempo de descongelamento do sêmen, os criotubos foram imersas em água a 60°C durante 70 s ou 90 s e a qualidade espermática imediatamente avaliada (Motilidade total - MT; Motilidade progressiva - MP; Velocidade curvilinear - VCL; Velocidade em linha reta - VSL e Velocidade média da trajetória - VAP). Neste estudo foi determinado também o tempo de viabilidade dos espermatozoides descongelados, mantidos sob refrigeração a 5°C e avaliados durante 24 horas. Além dos parâmetros de cinética espermática foram avaliadas a morfologia e a integridade da membrana plasmática dos espermatozoides. A capacidade de fertilização do sêmen foi avaliada a partir das amostras descongeladas no melhor tempo. Todos os parâmetros de cinética espermática apresentaram valores superiores quando as amostras de sêmen foram descongeladas por 90s em relação ao tempo de 70s, independentemente do tipo de criotubo. Não foram observadas diferenças significativas nos parâmetros de cinética espermática pós-descongelamento entre as amostras congeladas nos criotubos de 1,6 e 4,5 mL, com exceção da MT que foi superior nos criotubos de 1,6 mL (47±14%) em comparação com os criotubos de 4,5 mL (40±11%), independentemente do tempo de descongelamento. Após ativação, os espermatozoides reduziram significativamente os valores dos parâmetros de cinética dentro de 37 segundos, exceto a MT que se manteve constante neste período. Baseando-se na maior parte dos parâmetros espermáticos avaliados (VCL, VSL, VAP e Integridade da membrana plásmatica para ambos os criotubos e MT, MP e Morfologia espermática somente para o criotubo de 1,6 mL) o sêmen congelado manteve sua qualidade durante 3h após o descongelamento. A taxa de fertilização obtida com o sêmen in natura (74±6%) foi superior ao sêmen criopreservado (1,6 mL - 45±9% e 4,5 mL - 41±12%). Os dois criotubos não diferiram entre si neste parâmetro. Uma alta correlação significativa (p<0,05) foi observada entre a fertilização e a cinética espermática (MT - 89%; MP - 86%; VCL - 79%; VSL - 69% e VAP - 78%). Conclui-se que os criotubos de 1,6 e 4,5 mL podem ser utilizados na criopreservação do sêmen de tambaqui, sendo recomendado seu descongelamento a 60°C por 90s e seu uso em procedimentos de fertilização dentro de 3 horas após o descongelamento desde que mantido a 5°C.

Made available in DSpace on 2017-07-10T18:13:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Elexio Vidal.pdf: 493644 bytes, checksum: 4341c5aa354b0f3d92a326ffb2cccd46 (MD5) Previous issue date: 2012-02-22 / The aim study it had as objective to evaluate the effect of different ammonia levels, on the parameters of sperm motility, the artificial fertilization and the early development of jundia (Rhamdia quelen; Siluriformes, Heptapteridae). The semen was activated using the dilution of 1:70 (semen:water) and evaluated by the CASA method. It was considered as treatment water contending 0,06; 0,28; 0,50; 0,77 and 0,84 mg of total ammonia.water-1 L, so for sperm activation as for fertilization and incubation of the oocytes. The incubation was composed for a recirculation system of 250L for each treatment, with four incubators, being that each incubator approximately had useful volume of 2,5L with 3,800 eggs. Had been evaluated the parameters of sperm motility, fertilization rate, thermal unit accumulated for beginning and ending of the hatching, hatching rate, embryonic and percentile development of normal larvae. The results had been submitted the analysis of variance and the analysis of regression to a 5% of probability level. The ammonia levels gifts in the water did not interfere on the evaluated parameters (p> 0,05), except about to the early embryonic development, where the embryos displayed to the biggest levels of contamination for ammonia had presented greaters (p>0,05) closing of the blastopore rates. In general way, the presence of until 0,84mg of total ammonia. Water-1 L speeds up the embryonic early development but they do not interfere with the fertilization and hatching rates. / O presente estudo teve como objetivo avaliar os efeitos de diferentes níveis de amônia, sobre os parâmetros de motilidade espermática, a fertilização artificial e o desenvolvimento inicial do jundiá cinza (Rhamdia quelen; Siluriformes, Heptapteridae). O sêmen foi ativado utilizando a diluição de 1:70 (sêmen:água) e avaliado pelo método CASA. Foi considerado como tratamento água contendo 0,06; 0,28; 0,50; 0,77 e 0,84 mg de amônia total.L de água-1, tanto para ativação espermática quanto para fertilização e incubação dos ovócitos. A incubação era composta por um sistema de recirculação de 250L para cada tratamento, com quatro incubadoras, sendo que cada incubadora tinha volume útil de 2,5L com aproximadamente 3.800 ovos. Foram avaliados os parâmetros de motilidade espermática, de taxa de fertilização, unidade térmica acumulada para início e término da eclosão, taxa de eclosão, desenvolvimento embrionário e percentual de larvas normais. Os resultados foram submetidos a análise de variância e a análise de regressão a um nível de 5% de probabilidade. Os níveis de amônia presentes na água não interferiram sobre os parâmetros avaliados (p>0,05), exceto quanto ao desenvolvimento embrionário inicial, onde os embriões expostos aos maiores níveis de contaminação por amônia apresentaram maiores (p<0,05) taxas de fechamento do blastóporo. De modo geral, a presença de até 0,84mg de amônia total.L de água-1 acelera o desenvolvimento inicial embrionário mas não interferem nas taxas de fertilização e eclosão.

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No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_ProducaoInvitroEmbrioes.PDF: 1935608 bytes, checksum: 2cd63044454d30a88b39d3bc30f867e4 (MD5) Previous issue date: 2014-06-13 / Trata-se da aplicação de biotecnicas de reprodução na espécie Pecari tajacu para melhorar seu potencial para a criação em cativeiro visando sua produção, conservação e multiplicação de recursos genéticos. Para determinar o tempo de maturação in vitro foram utilizados 48 fêmeas, foram selecionados 69 CCOs e divididos em 4 grupos por idade e tempo de MIV, e então submetidos a ativação partenogenética em Ionomicina e 6-DMAP. Para análise da progressão meiótica 165 oócitos foram divididos em 4 grupos conforme a suplementação de hormônios na MIV e tempo de maturação. Na criopreservação foram utilizados espermatozoides epididimários de 9 machos, diluídos em Tris-frutose e ACP-120 e divididos em grupos de refrigeração a 4ºC e congelamento a -196ºC e presença da glutationa (GSH), foram avaliados os parâmetros motilidade, vigor e viabilidade após a diluição a fresco e criopreservação. Para a produção de embriões, 97 oócitos após MIV de 36 horas foram divididos grupos de ativação partenogenética, FIV e ICSI. Através da ativação partenogenética obteve-se taxas de clivagens (47%) para os oócitos de fêmeas com menos de 2 anos submetidos a MIV em 36 horas, em todos os grupos observaram-se clivagens porém não houve diferenças significativas (P>0,05) entre os grupos analisados, observou-se taxa de blastocisto (15,4%) somente no grupo de oócitos ativados após MIV de 44 horas. Na analise da progressão meiótica, em todos os tempos analisados foram encontrados oócitos em MII. Na criopreservação dos espermatozoides observaram-se queda nos parâmetros analisados nos dois diluidores em todos os grupos, a presença da glutationa não interferiu significativamente nos parâmetros analisados. No resfriamento, as taxas de motilidade e viabilidade foram superiores no ACP-120 (> 50%) e no congelamento em tris-frutose (33% e 18%). A produção de embriões in vitro foi bem sucedida na ativação partenogenética (62,9%) e na ICSI (52,6%), na FIV as taxas foram baixas (7%), a produção de blastocisto ocorreu somente nos embriões partenotos (4,5%). Os resultados mostraram a viabilidade de biotecnicas reprodutivas como conservação de gametas, e produção in vitro de embriões na espécie Pecari tajacu. / This work considers the application of reproduction biotechniques on species Pecari tajacu designed to improve its potential for upbringing in captivity and aiming its production, conservation and the multiplication of genetical resources. To determine the maturation time in vitro, 48 females were utilized. An amount of 69 CCOs were selected and divided in 4 groups, per age and per time of MIV. They were then submitted to parthenogenetic activation in ionomycin and 6-DMAP. For the meiotic progression analysis, 165 oocytes were divided in 4 groups according to supplementation of hormones in MIV and time of maturation. For the cryopreservation, epididymal sperm of 9 males were utilized, diluted in Tris-fructose and ACP-120 and divided in groups of refrigeration at 4°C and freezing at -196 °C in the presence of glutathione (GSH), where the parameters of motility, vigor and viable sperm were evaluated, after fresh dilution and cryopreservation. For the embryo production, 97 oocytes after MIV of 36 hours were divided in groups of parthenogenetic activation, IVF and ICSI. Through parthenogenetic activation the rates of cleavages were obtained (47%) for the oocytes of females with less than 2 years of age, submitted to MIV in 36 hours. In all groups cleavages were observed, but with no significant difference (P>0,05) among the groups analysed. One blastocyst rate of 15,4% was observed only in the group of oocytes activated after MIV of 44 hours. In the meiotic progression analysis, in all times analyzed oocytes were found in MII. In the cryopreservation of the spermatozoa it was observed a drop of the parameters analyzed in the two extenders in all groups. The presence of glutathione did not interfere significantly in the parameters analyzed. In the freezing, the rates of motility and viable sperm were superior in ACP-120 (> 50%) and in the freezing in tris-fructose, 33% and 18%. The production of embryos in vitro was well succeeded in the parthenogenetic activation (62,9%) and in ICSI (52,6%). In IVF the rates were low (7%). The production of blastocyst occurred only in the partenotes embryos (4,5%). The results of this work showed the feasibility of reproductives biotechniques, such gametes conservation and in vitro production of embryos of the species Pecari tajacu.