Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:59Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-11-23Bitstream added on 2014-06-13T20:24:31Z : No. of bitstreams: 1 borgesjunior_e_dr_botfm.pdf: 275485 bytes, checksum: 68fdbf94b0908ce788462bae7d5d1161 (MD5) / Cpdp - Centro Paulista de Pesquisa e Diagnostico / Desde o primeiro relato de sucesso em humanos, a Injeção Intracitoplasmática de Espermatozóide (ICSI) tem sido particularmente indicada para casos de alterações seminais graves, sendo já demonstrada uma relação diretamente proporcional entre os resultados deste procedimento e a qualidade seminal. Tem sido sugerido que a incapacidade de o espermatozóide iniciar a ativação oocitária seja uma das principais causas de falha de fertilização após a ICSI. Estudos prévios identificaram o cálcio como um importante segundo mensageiro durante a ativação oocitária e que o tratamento com ionoforo do calcio e capaz de favorecer a ativação oocitária, resultando em fertilização, desenvolvimento embrionário e gestações normais. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da Ativação Oocitária Artificial (AOA) com ionoforo do calcio A23187 em ciclos de ICSI quando utilizados espermatozóides de diferentes origens. Foram avaliados 314 ciclos de ICSI divididos em tres Grupos: EJACULADO (n = 92), EPIDIDIMARIO (n = 82) e TESTICULAR (n = 140), sendo cada um deles dividido em subgrupos, dependendo da realizacao (Subgrupo AOA) ou nao de AOA (Subgrupo Controle . CT). Foram avaliados tambem separadamente os ciclos de mulheres com idade inferior a 36 anos, objetivando minimizar o efeito da idade sobre os resultados dos tratamentos. Para a ativação oocitária, os oócitos foram mantidos por 30 minutos apos a ICSI em meio de cultivo para AOA, contendo 5ÊM de ionoforo de calcio A23187 e em aproximadamente 20 horas a fertilizacao foi confirmada pela presenca de 2 Pro-Nucleos. Para cada grupo experimental foram comparados, entre os Subgrupos AOA e CT, os seguintes parametros: taxa de fertilizacao normal, taxa de falha parcial de fertilizacao, porcentagem de bons embrioes no dia da transferencia, taxa de gestacao clinica, taxa de implantacao e taxa de abortamento... / Since the first report of a birth after ICSI, it has been specially used for severe male factor of infertility and it was demonstrated that the semen quality influences the ICSI outcomes. Previous studies suggested that failure of fertilization after ICSI may be due to a spermatozoa inability in trigger the oocyte activation. Calcium has long been identified as a universally important second messenger during oocyte activation and many studies demonstrated that treatment with calcium ionophore may increase the free intracellular calcium, promoting oocyte activation, resulting in fertilization, embryo development and pregnancies. The aim of this study was to evaluate the effect of artificial oocyte activation (AOA) with calcium ionophore A23187 in ICSI cycles using sperm from different origins. It was evaluated 314 ICSI cycles divided in groups according to the origin of spermatozoa: EJACULATED group (n = 92), EPIDIDYMAL group (n = 82) and TESTICULAR group (n = 140). Each group was split into sub-groups depending on the AOA treatment: sub-group AOA, when it was performed AOA and sub-group Control-CT, when it was not performed AOA. Furthermore, it was evaluated separately only cycles in each woman were younger then 36 years old. After ICSI, oocytes were incubated in culture medium containing calcium ionophore A23187 (5ìM concentration) for 30 minutes and in approximately 20 hours oocytes were checked for normal fertilization, defined as observation of two distinct pronucleous. For each experimental group the following parameters were compared between the sub-groups AOA and CT: normal fertilization rate; partial fertilization fail rate; percentage of high quality embryos on the transfer day; implantation rate; pregnancy rate and miscarriage rate. For all the evaluated parameters, it was not observed any significant difference between the subgroups for the three spermatozoa origin groups.... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-02-23Bitstream added on 2014-06-13T20:46:13Z : No. of bitstreams: 1 barretto_lss_dr_jabo.pdf: 796760 bytes, checksum: 1b897563a911eb0bb996aa629ab300d1 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos da suplementação do meio de maturação com roscovitina, butirolactona I, cisteamina e b-mercaptoetanol na maturação oocitária e suas conseqüências na fecundação e desenvolvimento embrionário bovino in vitro, além da variabilidade da freqüência de danos ao DNA embrionário. Oócitos foram maturados a 38,8oC em atmosfera de 5% CO2 em ar em meio TCM-199 suplementado com 0,6% BSA, 0,5 mg FSH, 100 UI hCG e 1 mg estradiol/mL (controle - C), adicionado de 50 æM de cisteamina (CC) ou 50 æM de bmercaptoetanol (CM). O grupo padrão do laboratório (S) foi suplementado com 10% de SFB como fonte protéica. Os oócitos em meio suplementado com butirolactona I ou roscovitina foram pré-maturados por 24 horas em meio TCM-199 suplementado com 0,3% BSA, antibiótico e piruvato, de acordo com os grupos: 100 æM de butirolactona I (CB), 100 æM de butirolactona I + 50 æM de cisteamina (CBC), 100 æM de butirolactona I + 50 æM de b-mercaptoetanol (CBM), 25 æM de roscovitina (CR), 25 æM de roscovitina + 50 æM de cisteamina (CRC) e 25 æM de roscovitina + 50 æM de b-mercaptoetanol (CRM). Após o cultivo de pré-maturação, foram transferidos para gotas com meio controle para maturação por 8, 16 e 24 horas, para avaliação da maturação nuclear e citoplasmática, e dosagem da [GSHi]. A fecundação foi realizada após 24 horas do início do cultivo de maturação (grupos sem inibidores), e 20 horas (grupos com inibidores). O cultivo de desenvolvimento foi realizado em meio SOF-Modificado suplementado com 0,5% de BSA e 2,5% de SFB à temperatura de 38,8ºC por 192 horas. Observou-se que a butirolactona I é capaz de bloquear a maturação meiótica de maneira reversível e mais eficiente que a roscovitina, e que os antioxidantes não interferiram na retomada da maturação nuclear... / The aim of this work was to evaluate the effects of maturation media supplementation with roscovitine, butyrolactone I, cysteamine and - mercaptoethanol on oocyte maturation and the consequences on fertilization and bovine embryo development in vitro, and also DNA damage frequency in embryos. Oocytes were matured at 38.8°C under a 5% CO2 in air environment, in TCM-199 medium supplemented with 0.6% BSA, 0.5 mg FSH, 100 IU hCG and 1 mg estradiol/mL (control group - C) and with either 50 æM cysteamine (CC group) or 50 æM b-mercaptoethanol (CM group). The standard group of the laboratory (S group) was supplemented with 10% FCS as protein source. The oocytes in which groups were pre-incubated for 24 hours with butyrolactone I and roscovitine in TCM-199 medium supplemented with 0.3% BSA, antibiotic and pyruvate were culturedaccording to the groups: 100 æM butyrolactone I (CB), 100 æM butyrolactone I + 50 æM cysteamine (CBC), 100 æM butyrolactone I + 50 æM b-mercaptoethanol (CBM), 25 æM roscovitine (CR), 25 æM roscovitine + 50 æM cysteamine (CRC) and 25 æM roscovitine + 50 æM bmercaptoethanol (CRM). After the pre-incubation, the oocytes were transferred to the control maturation medium for 8, 16 and 24 hours for evaluation of nuclear and cytoplasmic maturation and [GSHi] dosage. For IVF, the oocytes were fertilized at 24 hours after the beginning of maturation (groups without inhibition), or 20 hours (groups with inhibition). Embryo culture was in SOF-Modified medium supplemented with 0.5% BSA and 2.5% FCS at 38.8ºC for 192 hours. We observed that butyrolactone I is capable of reversibly blocking meiotic maturation more effectively than roscovitine, and that addition of antioxidants did not interferewith resumption of nuclear maturation...(Complete abstract, acess undermentioned eletronic address)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-06-30Bitstream added on 2014-06-13T20:46:12Z : No. of bitstreams: 1 gioso_mm_dr_botfmvz.pdf: 475750 bytes, checksum: 62611c7cad05a1587e0b6368d179605c (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Vários produtos à base de GnRH são efetivos em protocolos de Inseminação Artificial em Tempo Fixo (IATF). Entretanto, o Acetato de Fertirelina é um análogo deste hormônio cujas informações sobre sua ação na dinâmica folicular dos bovinos são poucas, principalmente nas condições brasileiras. Este trabalho teve como objetivo comparar a eficiência de duas doses de Acetato de Fertirelina para sincronização da emergência da onda de desenvolvimento folicular e ovulação, em vacas leiteiras submetidas ao protocolo Ovsynch. Utilizaram-se 77 vacas, a partir dos 60 dias pós-parto e escore corporal entre 2,5-4,0. Os animais apresentavam população folicular e corpo lúteo (CL) característico (Classe 1) ou ausência de CL, porém presença de pelo menos um folículo com diâmetro >10mm (Classe 2). As fêmeas foram distribuídas aleatoriamente em quatro tratamentos. Em conclusão, as concentrações séricas de progesterona e estradiol, taxas de sincronização, ovulação e prenhez demonstraram que o Acetato de Fertirelina foi eficiente em provocar a emergência da onda folicular e induzir a ovulação, nas doses de 50 ou 100mg, sugerindo que doses de 50mg de Fertirelina podem ser indicadas sem comprometimento nos resultados finais do programa. / Many similar products to GnRH are effective in protocols of fixed timed artificial insemination (FTAI). However, Fertirelin Acetate is an analog of this hormone whose information about action in the bovine follicular dynamics is inconsistent, mainly in brazilian conditions. Therefore, the objective of this work was to compare the efficiency of two doses of Fertirelin used for synchronization of follicular wave emergence and ovulation, in dairy cows submitted to Ovsynch protocol. Seventy seven lactating dairy cows, on over of 60 days postpartum and body score of 2.5 to 4.0. The animals presenting a reasonable number of follicles either a presence of CL (group 1) or without CL but at last =10 mm follicles (group 2). The females were randomly distributed in four treatments. The pregnancy rates were also similar (P>0.05) with mean of 28.37%. In conclusion, Progesterone and Estradiol concentrations, follicular wave synchronization, induction of ovulation and pregnant rates demonstrate that Fertirelin was efficient in inducing a new follicular wave emergency, as well as the induction of the ovulation at the end of the protocol, using the dose of either 50mg or 100 mg, suggesting that 50mg of Fertirelin can be useful without compromising the final results.

Resumo: Está sendo amplamente difundida no Brasil e no mundo a sexagem de sêmen bovino através de citometria de fluxo. Considerando que não só o processo de criopreservação como também o processo de separação causam danos às células, esses danos têm sido amplamente estudados buscando-se alcançar maior proteção para o sêmen sexado durante a congelação. O objetivo deste trabalho foi desenvolver uma metodologia de congelação de sêmen sexado bovino com a utilização de dois diferentes diluentes. Para isso, 2 ejaculados de 10 touros em idade reprodutiva foram coletados em vagina artificial, avaliados e preparados para a separação por citometria de fluxo. Após a passagem pelo citômetro, as amostras foram divididas em 3 grupos (diferentes metodologias). Todos os grupos foram divididos em 2 subgrupos (diferentes diluentes: TRIS meio extensor padronizado pelo laboratório em questão e o diluente Botu- Bov®, meio extensor comercializado no Brasil Biotech Botucatu). Para o grupo 1 (GI) a medotologia utilizada foi a mesma padronizada pelo protocolo Sexing Technologies do Brasil; para o grupo 2 (GII), foi utilizado glicerol para o inicio da refrigeração; e para o grupo 3 (GIII) a glicerilização foi realizada a 18ºC e não a 5ºC como no controle (GI). A avaliação do sêmen foi realizada através de análise computadorizada (CASA) e por sondas fluorescentes para função mitocondrial e integridade da membrana plasmática e acrossomal. Para análise estatística utilizou-se o método Tukey com nível de significância p<0,05...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The sexed semen using flow citometry has been widely spread in Brazil and all over the world. The damage caused by the process of cryopreservation and separation is well known. Therefore, the sexed semen needs a higher protection during freezing process. The aim of the present study was to develop a bovine sexed semen freezing methodology with two different extenders. Thus 2 ejaculates of 10 bulls in reproductive age were collected with artificial vagina, analyzed and than prepared for the separation with flow citometry. After this procedure the samples were divided in 2 groups (different methodologies) and both groups were divided in 2 subgroups (different extenders: TRIS and Botu- Bov®). For group 1 (GI) the methodology applied was the same standardized by the protocol of Sexing Technologies of Brazil; for group 2 (GII) it was used glycerol for the beginning of the freezing and for group 3 (GIII) addition of glycerol was made at 18°C. The semen evaluation was made through CASA and fluorescent probes for the plasmatic and acrossomic membrane integrity and mitochondrial function. The statistic analysis was achieved using the Tukey method with significant level p < 0,05. There was no significant statistic difference for the analyzed parameters in regard to the methodology used; only the percentual of intact plasmatic membrane from GII with TRIS presented a smaller value compared to the other groups, also using TRIS. A significant difference between the extenders occurred in the main parameters evaluated, and Botu-bov® presented better results. The Botu-Bov® extender presented higher motility and higher number of cells after percoll...(Complete abstract, click electronic address below) / Orientador: Fernanda da Cruz Landim e Alvarenga / Coorientador: José Antonio Dell'Aqua Junior / Banca: Rubens Paes de Arruda / Banca: Frederico Ozanam Papa / Mestre

Orientador: Sony Dimas Bicudo / Banca: Eunice Oba / Banca: Paulo Henrique Franceschini / Banca: Valquíria Hypólito Barnabé / Banca: Maria Madalena Pessoa Guerra / Resumo: O Objetivo deste estudo foi determinar o efeito da adição do surfactante lauril sulfato de sódio (Orvus es Paste OEP) e dos antioxidantes Trolox-C (6- hidroxi-2, 5,7,8-tetrametilcroman-2-acido carboxílico) e catalase ao meio diluidor, na motilidade espermática, integridade de membrana plasmática, acrossomal e mitocondrial, estádio de capacitação e geração de radicais livres no espermatozóide ovino pós-descongelação. Para isso, foram realizados dois experimentos. No Experimento 1, avaliou-se o efeito da adição do surfactante ao diluidor. O sêmen de 10 carneiros foi coletado por meio de vagina artificial e diluído para uma concentração final de 400x106 espermatozóides/mL no meio Tris-gema contendo OEP (0; 0,5 e 1%) ou no diluidor glicina-gema-leite (controle). A motilidade foi determinada pelo sistema computadorizado de análise de sêmen (CASA), a integridade de membrana pela combinação dos corantes fluorescente iodeto de propídio e diacetato de carboxifluoresceína (IP+DIC) e o estádio de capacitação pela técnica da CTC. Houve efeito significativo do tratamento em todos os parâmetros da motilidade, na integridade de membranas e na capacitação espermática. A adição de 0,5% ou 1% de OEP ao diluidor TRIS-gema aumentou significativamente (P<0,05) a motilidade, a integridade de membranas e o percentual de espermatozóides não capacitados, comparado ao controle. O diluidor TRIS 1 foi selecionado para utilização como meio base para o experimento 2. No Experimento 2, foi determinado o efeito da adição dos antioxidantes ao diluidor. O sêmen foi coletado e os seguintes tratamentos foram aplicados: T1- TRIS (controle), T2- TRO+ (diluidor T1 + Trolox, 50mM/108 espermatozóides), T3-CAT+ (diluidor T1 + catalase, 50mg/mL), T4- TRO/CAT+ (diluidor T1 + Trolox e Catalase, nas mesmas concentrações utilizadas no T2 e T3)...(Rsumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of this study was to determine the effect of addition of surfactant sodium lauryl sulfate (Orvus es Paste OEP), and antioxidants, Trolox-C (6- hydroxy-2,5,7,8-tetramethylchroman-2-carboxilic acid) and catalase to an extender on the motility, plasmatic and acrosomal and mitochondrial membrane integrity, capacitation status and free radicals generation of post thaw ram spermatozoa. Two experiments were performed. In Experiment 1, the effect of addition of surfactant was evaluated. The semen was collected from ten rams by artificial vagina and it was diluted to a final concentration of 400x 106 sperm/mL in egg yolk-Tris extender containing OEP (0, 0.5 and 1%) or glycinegg yolk-milk extender (control). The sperm motility was evaluated using a computer-assisted sperm analysis (CASA); the membrane integrity was verified using the fluorescent stains (propidium iodide and carboxyfluorescein diacetate) and the capacitation status determined by CTC technique. There was a significant treatment effect in all parameters involving sperm motility, membrane integrity and spermatic capacitation. The addition of OEP 0.5% or 1% to the egg yolk-Tris extender improved (P<0.05) the motility and membrane integrity and the percentage of uncapacited spermatozoa compared to the control. Then, the TRIS 1 extender was selected to be used at experiment 2. Experiment 2: the Exp 2 aimmed to determine the effect of antioxidants addition to the extender. Semen was collected and these treatments were applied: T1 - egg yolk-Tris extender (control), T2- TRO+ (T1 extender +Trolox, 50mM/108 spermatozoa), T3- CAT+ (T1 extender + catalase, 50mg/mL) and T4 TRO/CAT+ (T1 extender + trolox and catalase on the concentrations used in T2 and T3). Motility was determined by CASA system, plasmatic and acrosomal 4 membrane integrity and mitochondrial function were evaluated with PI, FITCPSA and JC-1 association...(Complete abstract, click electronic address below) / Doutor

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:22Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-02-07Bitstream added on 2014-06-13T20:57:57Z : No. of bitstreams: 1 aono_fhs_me_botfmvz.pdf: 369733 bytes, checksum: 9c1273e6b7251a105aef760ce4a3a576 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / O objetivo deste estudo foi determinar a incidência de perdas gestacionais em vacas de corte e avaliar o efeito da vacina contra IBR/BVD/Leptospirose (5,0 mL, Cattle Master® 4 + L5) na taxa de prenhez e perdas de gestação de vacas submetidas à Inseminação Artificial em Tempo Fixo [IATF, Protocolo; D0: benzoato de estradiol (2mg, Estrogin) e inserção do dispositivo intravaginal de P4 (CIDR, P4,1,9g); D7: dinoprost trometamina (PGF2α, 12,5mg, Lutalyse); D9: retirada do dispositivo intravaginal de P4, administração cipionato de estradiol (0,5mg, ECP) e remoção temporária de bezerros (RTB) por 48 horas; D11: IATF]. A avaliação de gestação foi realizada aos 30 e 120 dias pós IATF, para identificação de vacas prenhas e identificação de perdas gestacionais. No EXP1, foram avaliadas 8725 vacas para determinar a taxa de perda de gestação entre 30 e 120 dias. Foram usadas vacas pertencentes a dezenove propriedades com programas sanitários diferentes: sem imunização para doenças da reprodução (Grupo Sem, n = 7.311); com imunização semestral para Leptospirose (Grupo Leptospirose, n = 738); ou com imunização semestral para leptospirose e anual para Rinotraqueíte Infecciosa Bovina e Diarréia Viral Bovina (Grupo IBR/BVD/Leptospirose, n = 676). No EXP2 (n=1968) e EXP3 (n=2793), as vacas foram divididas aleatoriamente dentro do mesmo lote para receberem ou não a vacina contra IBR/BVD/Leptospirose (5,0 mL, Cattle Master®4 + L5): a primeira dose foi aplicada no início do protocolo de IATF e a segunda dose no momento do primeiro diagnóstico gestacional (US1/30d). No EXP2 as fazendas não utilizavam nenhum tipo de vacina preventiva para as doenças da reprodução, já no EXP3 as fazendas utilizavam vacinação contra Leptospirose. No EXP 4 foram utilizadas 367 vacas da raça Nelore... / The aim of this study was to determine the incidence of pregnancy loss in beef cows, and evaluate the effect of the vaccine against IBR/BVD/Leptospirosis (5.0 mL, Cattle Master ® 4 + L5) in pregnancy rate and pregnancy loss of cows subjected to fixed-time artificial insemination [TAI, Protocol; D0: estradiol benzoate (2mg, Estrogin) and insertion of intravaginal P4 device (CIDR, P4, 1.9 g); D7: dinoprost tromethamine (PGF2, 5mg Lutalyse), D9: withdrawal of intravaginal P4 device, administration of estradiol cypionate (0.5 mg, ECP®) and temporary calf removal for 48 hours; D11: TAI]. The pregnancy diagnosis was performed at 30 and 120 days after TAI for identify cows pregnant and pregnancy loss respectively. In EXP1 8725 cows were evaluated to determine the rate of pregnancy loss between 30 and 120 days. The cows were from nineteen farms with different health programs. Cows without immunization reproductive diseases (Group No, n = 7311), with immunization semester to leptospirosis (Leptospirosis Group, n = 738) or semester immunization against leptospirosis and annual against infectious rhinotracheitis bovine and bovine viral diarrhea (Group IBR/BVD/Leptospirosis, n = 676). In EXP2 (n = 1968) and EXP3 (n = 2793) cows were randomly assigned within the same batch to receive or not vaccine against IBR/BVD/Leptospirosis (5.0 ml, 4 Cattle Master® L5 +): the first dose was administered at the beginning of the TAI protocol and the second dose at the time of first diagnosis of pregnancy (US1/30d). In EXP2 farms did not use any kind of preventive vaccine for diseases of reproduction, as in exp3 farms used vaccination against Leptospirosis. In EXP 4 367 nelore cows were submitted to TAI, the animals were randomly assigned to receive the vaccine at different times. Animals from groups:...(Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:54:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 623344 bytes, checksum: de668a26b7ad9c15ba60b0aa57bee538 (MD5) Previous issue date: 2010-02-23 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The cryopreservation of donkey semen has shown limitations on fertility that discourages their use as routine for professionals working with this species. Incorporation of cholesterol-loaded cyclodextrin (CLC) has proved a promising alternative to improve the resistance of spermatozoa cryopreservation in several species. The aim of this study was to determine the effects of adding different CLC concentrations on in vitro viability of frozen-thawed Pêga donkey spermatozoa. Twenty-five ejaculates from five donkeys (five ejaculates per animal) were submitted to different concentrations of CLC: 0 mg (control), 1 mg (T1), 2 mg (T2) and 3 mg (T3) / 120 x 106 total spermatozoa for 15 minutes before freezing. Samples were thawed and evaluated for physical integrity of sperm plasma membrane (eosin-nigrosin), functional integrity (HOST), sperm morphology, longevity (TTR), and viability of sperm plasma membrane and acrosome (tested with fluorescent probes - IP/FITC-PNA). Physical parameters were measured by subjective and objective (CASA) evaluation. Treated groups had higher physical and functional integrity plasma membrane (P<0.05) than control. Inclusion of CLC resulted either in higher total and progressive motile (CASA) (P<0,05). There were no differences in the amount of cells with plasmas membrane and acrossome intact by epifluorescence test (P>0.05). No difference was observed for total motility and vigor between treatments during TTR (P>0,05). The use of cholesterol- loaded cyclodextrin increases the resistance of frozen-thawed process, number of cells with motility and viable membranes (P<0,05). Futher studies should be conducted to evaluate the influence of CLC cryopreserved donkey spermatozoa fertility. / A criopreservação de sêmen asinino vem apresentando limitações na fertilidade que desestimulam sua utilização como rotina para profissionais que trabalham com a espécie. A incorporação de colesterol associado à ciclodextrina (CLC) tem se mostrado uma alternativa promissora por melhorar a resistência espermática ao processo de criopreservação em diversas espécies. Objetivou-se verificar os efeitos in vitro da adição de diferentes concentrações de CLC na viabilidade de espermatozóides criopreservados de jumentos da raça Pêga. Vinte e cinco ejaculados de cinco jumentos (cinco ejaculados por jumento) foram incubados a temperatura de laboratório por 15 minutos com diferentes concentrações de CLC: 0 mg (controle - CT), 1 mg (T1), 2 mg (T2) e 3 mg (T3) / 120 x 106 espermatozóides totais, antes do congelamento. As amostras foram descongeladas e avaliadas quanto à integridade física da membrana plasmática (SV), integridade funcional (HOST), morfologia espermática, longevidade (TTR) e viabilidade da membrana plasmática e do acrossoma (teste com sondas fluorescentes - IP/FITC-PNA). Os parâmetros físicos foram avaliador de forma subjetiva e objetiva (CASA). As amostras tratadas com CLC apresentaram maior integridade funcional e física (P<0,05) da membrana plasmática que as amostras do tratamento CT. A inclusão de CLC resultou em um aumento (P<0,05) nos valores de motilidade total e progressiva (CASA) para os três tratamentos quando comparado ao CT. Não foram observadas diferenças (P>0,05) na quantidade de células com a membrana plasmática e acrossoma intactos pelo testes de epifluorescência. Também não foi observada diferença entre os tratamentos durante o TTR para os parâmetros motilidade total e vigor espermático (P>0,05). A xv utilização de colesterol incorporado a ciclodextrina aumenta a resistência espermática aos processos de criopreservação, aumentando o número de células com motilidade e membrana íntegra. Novos estudos devem ser realizados para avaliar o efeito do CLC na fertilidade do sêmen asinino.

Made available in DSpace on 2016-12-08T16:24:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Dennys Eduardo Werlichl.pdf: 510119 bytes, checksum: aac5246620094e985b2b81198a4a18fb (MD5) Previous issue date: 2005-12-19 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The aim of this study was to determine the viability of bovine IVP expanded blastocysts (Bx) submitted to four different cryoprotectant solutions (Experiment 1) and two cooling rate speeds (Experiment 2), and vitrified in OPS. Hatching rate was considered as viability parameter. In the first experiment (12 replications), IVP Bx (n=720) were randomly allocated in to groups: Group I (20% EG + 20% DMSO), Group II (25% EG + 25% GLY), Group III (7,0M EG), Group IV (20% EG + 20% PRO) and Group V (control not vitrified). After 72 hours of culture, the hatching rate of control group (84.0%) was higher (P<0.05) than that observed with the vitrified experimental groups. There were no differences among hatching rates observed in Groups I (53.5%), and IV (52.8%), and both were higher than Groups II (38.9%) and III (38.9%). In the second experiment (5 replications) 244 Bx were randomly exposed to EG+DMSO (GI and GII) or EG+PRO (GIII and GIV) solutions in order to evaluate the use of super-cooled liquid nitrogen by vacuum submission. There were no differences among the hatching rates of embryos vitrified with super-cooled (GII = 50.2%; GIV = 54.0%) or normal nitrogen (GI = 50.1%; GIII = 56.0%), independently of the solutions. In conclusion, the EG+DMSO and EG+PRO solution are similar in promoting IVP Bx survival, after vitrification, and they are more efficient than the EG+GLY and EG solutions. The use of super cooled liquid nitrogen does not improve embryo survival after vitrification. / Com o objetivo de determinar a viabilidade de blastocistos expandidos (Bx) bovinos produzidos in vitro (PIV) e vitrificados em OPS, dois experimentos avaliaram o efeito de quatro soluções crioprotetoras e duas velocidades de resfriamento. A taxa de eclosão foi utilizada como parâmetro de viabilidade. No primeiro experimento, 720 Bx (12 repetições) foram aleatoriamente distribuídos em 5 grupos: Grupo I (20% EG + 20% DMSO), Grupo II (25% de EG + 25% de GLI), Grupo III (7,0M EG), Grupo IV (20% de EG + 20% de PRO) e Grupo V (controle não vitrificado). A taxa de eclosão do grupo controle (84%) foi superior (P<0,05) aos grupos vitrificados. Não houve diferença nas taxas de eclosão dos grupos I (53,5%) e IV (52,8%), que foram superiores aos grupos II (38,9%) e III (38,9%). No segundo experimento avaliou-se o uso de nitrogênio líquido super-resfriado por ação de vácuo. Utilizou-se 244 Bx (5 repetições), aleatoriamente distribuídos, usando as soluções EG+DMSO (GI e GII) e EG+PRO (GIII e GIV). Não foram observadas diferenças entre as taxas de eclosão dos embriões vitrificados com nitrogênio super-resfriado (GII = 50,2%; GIV = 54,0%) ou nitrogênio normal (GI = 50,1%; GIII = 56,0%), independente da solução empregada. Conclui-se que a solução EG+DMSO e EG+PRO possibilitam taxas de eclosão similares e são mais eficientes que as soluções EG+GLI e EG. O emprego do nitrogênio superresfriado pelo vácuo não proporciona aumento da viabilidade de blastocistos bovinos PIV vitrificados em OPS.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-02-23Bitstream added on 2014-06-13T20:38:44Z : No. of bitstreams: 1 freitas_cp_me_botfmvz.pdf: 357251 bytes, checksum: 6d07b31986079df6a989f919c5fd3069 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Está sendo amplamente difundida no Brasil e no mundo a sexagem de sêmen bovino através de citometria de fluxo. Considerando que não só o processo de criopreservação como também o processo de separação causam danos às células, esses danos têm sido amplamente estudados buscando-se alcançar maior proteção para o sêmen sexado durante a congelação. O objetivo deste trabalho foi desenvolver uma metodologia de congelação de sêmen sexado bovino com a utilização de dois diferentes diluentes. Para isso, 2 ejaculados de 10 touros em idade reprodutiva foram coletados em vagina artificial, avaliados e preparados para a separação por citometria de fluxo. Após a passagem pelo citômetro, as amostras foram divididas em 3 grupos (diferentes metodologias). Todos os grupos foram divididos em 2 subgrupos (diferentes diluentes: TRIS meio extensor padronizado pelo laboratório em questão e o diluente Botu- Bov®, meio extensor comercializado no Brasil Biotech Botucatu). Para o grupo 1 (GI) a medotologia utilizada foi a mesma padronizada pelo protocolo Sexing Technologies do Brasil; para o grupo 2 (GII), foi utilizado glicerol para o inicio da refrigeração; e para o grupo 3 (GIII) a glicerilização foi realizada a 18ºC e não a 5ºC como no controle (GI). A avaliação do sêmen foi realizada através de análise computadorizada (CASA) e por sondas fluorescentes para função mitocondrial e integridade da membrana plasmática e acrossomal. Para análise estatística utilizou-se o método Tukey com nível de significância p<0,05... / The sexed semen using flow citometry has been widely spread in Brazil and all over the world. The damage caused by the process of cryopreservation and separation is well known. Therefore, the sexed semen needs a higher protection during freezing process. The aim of the present study was to develop a bovine sexed semen freezing methodology with two different extenders. Thus 2 ejaculates of 10 bulls in reproductive age were collected with artificial vagina, analyzed and than prepared for the separation with flow citometry. After this procedure the samples were divided in 2 groups (different methodologies) and both groups were divided in 2 subgroups (different extenders: TRIS and Botu- Bov®). For group 1 (GI) the methodology applied was the same standardized by the protocol of Sexing Technologies of Brazil; for group 2 (GII) it was used glycerol for the beginning of the freezing and for group 3 (GIII) addition of glycerol was made at 18°C. The semen evaluation was made through CASA and fluorescent probes for the plasmatic and acrossomic membrane integrity and mitochondrial function. The statistic analysis was achieved using the Tukey method with significant level p < 0,05. There was no significant statistic difference for the analyzed parameters in regard to the methodology used; only the percentual of intact plasmatic membrane from GII with TRIS presented a smaller value compared to the other groups, also using TRIS. A significant difference between the extenders occurred in the main parameters evaluated, and Botu-bov® presented better results. The Botu-Bov® extender presented higher motility and higher number of cells after percoll...(Complete abstract, click electronic address below)

Orientador: Ciro Moraes Barbosa / Banca: Marcelo Marcondes Seneda / Banca: Pietro Sampaio Baruselli / Banca: Roberto Sartori / Banca: Sony Dimas Bicudo / Resumo: Alguns estudos indicam que altos níveis de progesterona (P4) plasmática diminuem a pulsatilidade de LH e, conseqüentemente, o crescimento folicular. Isto pode diminuir a eficiência de protocolos para inseminação artificial em tempo fixo (IATF) que se baseiam na utilização de dispositivos intravaginais contendo P4. Objetiva-se com o presente trabalho avaliar a influência de diferentes concentrações de P4, associadas ou não à aplicação de eCG, nas taxas de ovulação e prenhez de novilhas da raça Nelore submetidas a protocolos para IATF. No experimento (exp.) 1, novilhas Nelore (n=15), cíclicas e pré-sincronizadas com tratamento hormonal, foram distribuídas aleatoriamente em quatro grupos experimentais. No dia da inserção do dispositivo intravaginal (D0) todos os animais receberam 2 mg de benzoato de estradiol (BE) e um dispositivo intravaginal contendo 0,558g de P4 (Triu B®, grupo 0,5G, n = 4) ou 1g de P4 (Cronipress®, grupo 1G, n = 4), ou 0,558g de P4 e PGF2α (150 μg d-cloprostenol, grupo 0,5G/PGF , n = 4) ou 1 g de P4 e PGF2α (grupo 1G/PGF, n = 3). Oito dias mais tarde (D8) administrou-se PGF2α em todos os animais e o dispositivo foi removido. Vinte e quatro horas após a remoção do dispositivo intravaginal, as novilhas foram tratadas com BE (1 mg, IM). Entre os dias D0 e D12 foram realizados, diariamente, exames ultrassonográficos dos ovários e mensurado o diâmetro folicular. Foram colhidas amostras de sangue para dosagem da P4 nos dias 0,1,2,4,8 e 10. No exp. 2, novilhas cíclicas da raça Nelore (n=292) foram tratadas com os mesmos protocolos do primeiro experimento. Entretanto, 30 a 36h após a aplicação do BE todos animais foram submetidos a IATF (D10). Em uma amostragem de novilhas de cada grupo os ovários foram examinados, por meio de ultrassonografia, nos dias 9 e 12, para determinar a taxa de ovulação após cada tratamento. No exp. 3, novilhas... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Previous reports indicate that high concentration of plasmatic progesterone (P4) decreases LH pulse frequency, and consequently follicular growth. This may reduce the efficiency of fixed-time artificial insemination (FTAI) protocols that utilize P4 in Bos indicus heifers. The objective of the present work was to evaluate the influence of different P4 concentrations associated or not with eCG in the ovulation and pregnancy rates of Nellore heifers submitted to hormonal protocols for FTAI. In experiment (exp.) 1, heifers (n=15) pre-synchronized with a hormonal treatment were randomly allocated in four experimental groups. At the time of intravaginal device insertion (D0) all animals received 2 mg of estradiol benzoate (EB) and an intravaginal progesterone-releasing device containing 0.558g of P4 (TRIU®, group 0.5G, n=4) or 1g of P4 (Cronipress®, group 1G, n = 4), or 0.558g of P4 and PGF2α (150 μg d-cloprostenol, group TRIU/PGF, n = 4), or 1g of P4 and PGF2α (group 1G/PGF, n = 3). Eight days later (D8), PGF2α (150 μg d-cloprostenol) was administered to all heifers, the P4 source was removed. Twenty four hours after removing the intravaginal device, the heifers were treated with EB (1 mg, i.m.). Ovarian ultrasonographic examinations were performed daily, from the day D0 to D12 to measure follicles diameter. Blood samples were collected during the days 0, 1, 2, 4, 8 and 10 to evaluate plasma P4 concentration. In exp. 2, cyclic Nellore heifers (n=292) were treated with the same protocols as in the exp. 1. However, 30 to 36 h later all animals were fixed-time inseminated on D10. In exp. 3, heifers (n=459) received the treatments described to groups 0.5G/PGF and 1G/PGF associated with 300 IU of eCG (i.m., groups 0.5G/PGF/eCG and 1G/PGF/eCG) at the time of intravaginal device removal (D8). In a subset of heifers from each group blood samples were collected on D8 and ovarian ultrasonography... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre