Made available in DSpace on 2015-12-06T23:47:49Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Colégio Doutoral Franco Brasileiro (CDFB) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A principal diferença entre Escherichia coli enteropatogênica (EPEC) típica (tEPEC) e atípica (aEPEC) é a presença do plasmídeo EAF (EPEC adherence factor) apenas em tEPEC. Apesar de os dois grupos promoverem uma lesão denominada attaching and effacing (lesão A/E) no epitélio intestinal, algumas diferenças em relação aos demais mecanismos de virulência podem existir. Neste estudo, duas amostras selvagens de aEPEC (1711-4, sorotipo O51:H40, e 3991-1, O não tipável, não móvel) foram analisadas quanto à capacidade de aderir, invadir, persistir e induzir a produção de IL-8 em células intestinais T84 e Caco-2, diferenciadas in vitro. Os resultados foram comparados com os obtidos com a amostra protótipo de tEPEC E2348/69. O papel do flagelo nos processos de adesão, invasão e indução da produção de IL-8 e de um sistema de secreção tipo III (SST3) na indução da produção de IL-8 foram também investigados com aEPEC 1711-4, utilizando-se mutantes isogênicos deficientes em flagelina ou EscN, respectivamente. As amostras aEPEC 3991-1 e 1711-4 aderiram significativamente mais às células T84 do que em Caco-2. Entretanto, aEPEC 1711-4 foi mais invasiva do que aEPEC 3991-1 e tEPEC E2348/69. Além disso, as amostras de aEPEC persistiram em ambas as linhagens celulares por um mínimo de 48 h, mas o índice de persistência foi maior para aEPEC 3991-1 em células Caco-2. Nesta linhagem celular, a produção de IL-8 foi significativamente maior nos tapetes celulares infectados com a amostra selvagem aEPEC 1711-4 em 3 h do que naqueles infectados com as demais amostras. Além disso, o mutante aEPEC 1711-4 ΔfliC induziu menor estimulação da produção de IL-8 em fase precoce (3 h), mas não no período tardio (24 h) após infecção. O mutante aEPEC 1711-4 ΔescN estimulou níveis de IL-8, em três horas, significativamente mais elevados do que a amostra selvagem, o que sugere um papel antiinflamatório dos efetores injetados pelo SST3 durante a fase inicial da interação bactéria-célula hospedeira. Nossos achados indicam que aEPEC é um patotipo heterogêneo quanto a sua habilidade de aderir, invadir, persistir e induzir a produção de IL-8, e sugerem que algumas aEPEC podem ser mais eficientes em induzir resposta inflamatória do que a tEPEC protótipo E2348/69. Na infecção de enterócitos in vitro, a integridade do flagelo da aEPEC 1711-4 é necessária para adesão e invasão eficientes e estimulação precoce, mas não tardia, da produção de IL-8. / The main difference between typical (tEPEC) and atypical (aEPEC) enteropathogenic Escherichia coli is the presence of EPEC adherence factor (EAF) plasmid in tEPEC. Although both groups can promote attaching and effacing lesions in the intestinal epithelium, some differences concerning virulence mechanisms may exist. In this study two wild type aEPEC strains (1711-4, serotype O51:H40 and 3991-1, O non typeable non motile) were analyzed concerning their capacity to adhere to, invade, persist and stimulate IL-8 production by differentiated epithelial intestinal cells Caco-2 and T84 in vitro. Results obtained with aEPEC strains were compared to those obtained with the tEPEC prototype strain E2348/69. The role of flagellum in adhesion, invasion and stimulation of IL-8 production and that of a type III secretion system (T3SS) were also investigated with aEPEC 1711-4, using isogenic mutants deficient in flagellin or EscN, respectively. aEPEC strains 3991-1 and 1711-4 adhered significantly more to T84 than to Caco-2 cells. On the other hand, aEPEC 1711-4 was more invasive than aEPEC 3991-1 and tEPEC E2348/69. Besides that, aEPEC strains persisted in both cell lineages for a minimum of 48 hours, although this index was higher for aEPEC 3991-1 in Caco-2 cells. In this cell lineage, IL-8 production was significantly higher in monolayers infected with the wild type aEPEC strain 1711-4 in 3 hours after infection than in those monolayers infected with other strains. Moreover, the aEPEC mutant 1711-4 ΔfliC induced lower IL-8 levels in early phase (3 h) but not at late phase (24 h). The aEPEC mutant 1711-4 ΔescN stimulated IL-8 levels, in early phase, significantly higher than that induced by the wild type strain, indicating an anti-inflammatory role for the effectors injected by the T3SS during the initial interaction between bacteria and host cell. Our findings indicate that aEPEC is a heterogeneous group of pathogens concerning their ability to adhere to, invade, persist and stimulate IL-8 production and suggests that some aEPEC are more prone to induce inflammatory response than the prototype tEPEC strain E2348/69. In the in vitro infection model of enterocytes, the integrity of flagella of aEPEC 1711-4 is necessary for efficient adhesion, invasion and early but not late stimulation of IL-8 production. / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Memoria para optar al título de Bioquímico / La periodontitis es una enfermedad inflamatoria crónica de las estructuras que soportan las piezas dentales, la cual está asociada a un proceso infeccioso causado por un cambio en la ecología local de la biopelícula bacteriana oral. Un 90% de la población chilena presenta signos clínicos de esta patología. Porphyromonas gingivalis (P. gingivalis) se ha propuesto como un agente etiológico clave en la periodontitis. En nuestro laboratorio, se obtuvieron aislados clínicos de P. gingivalis provenientes de individuos sanos, en los que se vio ausencia de la región del antígeno O (AgO) del lipopolisacárido (LPS). En cambio, en aislados clínicos provenientes de pacientes con periodontitis, el LPS está completo. Además, se ha observado anteriormente que cuando células de epitelio gingival (GECs, por sus siglas en inglés) eran infectadas con una cepa silvestre de P. gingivalis (W50) había un aumento del ARNm del Toll-like receptor 4 (TLR4), a diferencia de lo que ocurre cuando son infectadas con una mutante isogénica carente de AgO polimérico (cepa ΔPG1051), sugiriendo que el AgO sería importante para el reconocimiento de la bacteria. Una de las consecuencias de la activación de TLRs es el incremento en los niveles de citoquinas pro-inflamatorias. Esto se ha relacionado con un aumento en la capacidad migratoria en varios tipos celulares, incluyendo a GECs, donde la migración favorece la formación de saco periodontal / Periodontitis is a highly prevalent chronic inflammatory disease in Chile and worldwide that mainly affects the tissues supporting de teeth. This disease is associated with an infectious process caused by a change in the local ecology of the subgingival biofilm. It has been proposed that the bacterium Porphyromonas gingivalis (P. gingivalis) plays a key role in disease onset and progression because this bacterium induces dysbiosis that contributes to the inflammatory process. In a previous study from our group, we observed that the O antigen (OAg) region of the lipopolysaccharide contributes to the inhibition of apoptosis induced by P. gingivalis in epithelial cells, which correlates with an increase in the expression of TLR4. One of the consequences of the activation of TLRs is the increase in the levels of pro-inflammatory cytokines. This has been related to an increase in the migratory capacity of several cell types, including human oral epithelial cells, where enhanced migration is associated with formation of periodontal pockets. Considering this background, the objective was to determine if TLR4 activation mediated by AgO can increase the levels of pro-inflammatory cytokines and to promote migration an oral epithelial cell line OKF6 / TERT2. For this, the level of TLR4 (flow cytometry), TNF-α, IL-8 and IL-1β (multiplex) and migration (Boyden's chamber) were measured after infecting with the previously mentioned strains. Our results show that infection with P. gingivalis does not change the TLR4 levels on the surface of OKF6 / TERT2 cells, independent of the presence or absence of AgO. On the other hand, levels of IL-8 decreased only with the virulent strain of P. gingivalis W50, unlike the isogenic mutant in LPS that does not produce AgO, which does not change them. These changes are independent of TLR4. Finally, the strain with a complete LPS (W50) produces an increase in migration. However, in the absence of AgO there are not significant changes with respect to uninfected cells. In conclusion, in this work we found that the AgO of P. gingivalis participates in the modulation of pro-inflammatory marker levels (IL-8) and cell migration, which could contribute to the development of periodontitis / CONICYT-FONDAP 15130011; Fondecyt 1170925; FIOUCH 17/020

Orientador: Raquel Mantuaneli Scarel Caminags / Banca: Rui Barbosa de Brito junior / Banca: Karina Gonzales Silverio Ruiz / Banca: Daniela Leal Zandim Barcelos / Banca: Joni Augusto Cirelli / Resumo: / Abstract: / Doutor

MOTA, A. G. M. Avaliação dos níveis de interleucina-8 e ativação do fator de transcrição nuclear NF–KB em pacientes portadores de síndromes mielodisplásicas. 2016. 80 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Médicas) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016. / Submitted by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2016-09-20T16:02:06Z No. of bitstreams: 1 2016_dis_agmmota.pdf: 2291506 bytes, checksum: 85df5283bc0894a9480182650b0198db (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2016-09-20T16:02:15Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_dis_agmmota.pdf: 2291506 bytes, checksum: 85df5283bc0894a9480182650b0198db (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-20T16:02:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_dis_agmmota.pdf: 2291506 bytes, checksum: 85df5283bc0894a9480182650b0198db (MD5) Previous issue date: 2016-08-30 / The pathogenesis of myelodysplastic syndromes (MDS) is complex and multifactorial and depends on the interaction between hematopoietic cells and their microenvironment. The definite pathogenetic mechanisms are still not fully understood. Objectives: (a) To evaluate CXC chemokine ligand 8 (CXCL8 or IL-8) plasma levels and nuclear transcription factor kappa B activation (NF-kB) in patients with MDS and the possible associations with clinicopathologic variables. (b) To test possible correlation between IL-8 and NF-kB. Patients and methods: A total of 25 adults de novo MDS patients (4 RARS, 16 RCDM, 1 RAEB-I, 4 RAEB-II) were analyzed according to WHO classification and IPSS-R. Sex and age-matched healthy elderly volunteers were included as controls. IL-8 analysis was performed by Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay kit BD OptEIA and DNA binding activity of NF-kB p65 was measured using TransAM NF-kB p65 kits®. Results: MDS patients showed higher level of IL-8 when compared to controls(p=0,0068). Patients aged 75 and above also showed significant higher levels (p=0,0357). No significant associations were found between level of IL-8 and the variables analyzed. NF-kB activity was significantly elevated in MDS patients when compared to controls (p<0,0001) and higher in patients older than 75 years(p=0,0475). NF-kB activity was significantly associated with higher serum ferritin (p=0,042) and higher percentage of blasts (p=0,0282). The study of correlation between IL8 and NF-kB showed a significant positive correlation (r=0.480; p=0.015). Discussion and conclusions: Many unraveled specific pathways involved in the complex pathophysiology of MDS have been recently described, including aberrations in cytokines and their signaling pathways. In this study elevated levels of IL-8 and NF-kB were demonstrated and an elevated NF-kB activity was significantly associated with higher serum ferritin and with blast excess, two markers of bad prognosis. A significant positive correlation between IL-8 and NF-kB was detected, corroborating the emerging concept of the important role of the niche and deregulated inflammatory signaling in MDS phenotype. The best comprehension of these mechanisms favors defining new targets for therapy. / A patogênese da síndrome mielodisplásica (SMD) é complexa e multifatorial e depende da interação entre células hematopoéticas e seu microambiente. Os mecanismos patogênicos envolvidos ainda não são totalmente compreendidos. Objetivos: (a) Avaliar níveis plasmáticos de interleucina-8 (CXCL8 ou IL-8) e a ativação do Fator Nuclear de Transcrição kappa B (NF-kB) em pacientes com SMD e as possíveis associações com variáveis clínico-patológicas. (b) Analisar possível correlação entre a IL-8 e NF-kB. Pacientes e métodos: Um total de 25 pacientes adultos portadores de SMD de novo (4 ARSA, 16 CRDM, 1 AREB-I, 4 AREB-II) foram analisados de acordo com a classificação da OMS e IPSS-R. Voluntários idosos saudáveis pareados por sexo e idade foram incluídos como controles. A análise da IL-8 foi realizada por reação imunoenzimática de acordo com o kit BD OptEIA e a ativação do NF-kB foi medida por quimioluminescência utilizando kit TransAM NF-kB p65. Resultados: Os pacientes com SMD apresentaram maior nível de IL-8 quando comparados aos controles (p=0,0068) e, dentre os pacientes, aqueles com 75 anos ou mais apresentaram níveis significativamente maiores (p=0,0357). Não foram encontradas associações significativas entre o nível de IL-8 e as variáveis analisadas. Nos pacientes com SMD, a ativação do NF-kB foi significativamente maior quando comparada aos controles (p<0,0001) e maior em pacientes com 75 anos ou mais (p=0,0475). Foi encontrada associação significativa entre a atividade de NF-kB e níveis elevados de ferritina sérica (p=0,042) e maior percentual de blastos (p=0,0282). O estudo da correlação entre IL8 e NF-kB mostrou uma correlação moderada, positiva e significativa (r = 0,480; p = 0,015). Discussão e conclusões: Estudos recentes sobre a fisiopatologia complexa da SMD incluem a desregulação de citocinas e suas vias de sinalização. Neste estudo, níveis significantemente elevados de IL-8 e NF-kB foram demonstrados e uma associação de maior ativação de NF-kB foi detectada em pacientes com sobrecarga de ferro e excesso de blastos, dois marcadores de pior prognóstico na doença. Uma correlação positiva entre IL-8 e NF-kB foi observada, corroborando o conceito emergente do papel relevante do microambiente e da sinalização inflamatória aberrante na patogênese da doença. A melhor compreensão desses mecanismos favorece a identificação de novos alvos terapêuticos.

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:30Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-04-28 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Introdução: A infecção por Helicobacter pylori está associada ao câncer gástrico (CG) não localizado na região da cárdia, no entanto, apenas uma pequena proporção das pessoas infectadas desenvolvem esta neoplasia. Estudos sobre cepas específicas dessa bactéria demonstram que os fatores genéticos e ambientais estão associados a esta carcinogênese. A Interleucina-8 (IL-8) desempenha um papel importante na inflamação da mucosa do estômago após a infecção por H. pylori. Estudos têm demonstrado que o polimorfismo da IL-8 pode aumentar o risco de CG. Objetivo: Investigar a associação entre o polimorfismo da IL-8, infecção por H. pylori, hábitos de vida e risco de CG. Casuística e métodos: Estudo caso-controle feito em pacientes com CG não-cárdia em comparação com indivíduos saudáveis na proporção de 1:2, respectivamente. O DNA foi extraído de leucócitos, purificado e a análise do polimorfismo foi feita pela técnica de PCR-RFLP e visualizado por eletroforese em gel de agarose a 5%. Infecção por H. pylori foi investigada pelos níveis séricos de anticorpos anti-H.pylori. Aspectos ambientais como tabagismo, etilismo e dieta foram investigados por questionário. Resultados: Um total de 312 indivíduos foi estudado, sendo 208 controles e 104 pacientes com câncer. Não houve diferença significante entre sexo ou idade, entre o grupo controle e os pacientes com CG. A proporção de pacientes infectados pelo H. pylori foi semelhante (p=0,15) entre os grupos controle (53,8%) e caso (45,2%). Menor frequência do genótipo AA foi encontrada no grupo com câncer (p = 0,01), sem diferença entre os alelos A e T. O tabagismo (p=0,001), acentuada ingestão de gordura (p=0,003) e baixa ingestão de legumes (p=0,02), foram mais frequentes no grupo caso. A análise de regressão logística multivariada demonstrou maior risco de CG em indivíduos com o genótipo heterozigoto AT (OR: 2,28 95%IC 1,16-4,49; p=0,02) e consumo excessivo de gordura (OR: 1,77 95%IC 1,12-2,92; p=0,03). Fumantes e ex-fumantes também demonstraram maior risco de CG quando comparados ao grupo controle (OR: 1,89 95%IC 1,41-3,11; p=0,01). Conclusões: A presença do genótipo AT está associada à elevação do risco de CG em aproximadamente duas vezes. O percentual de pacientes com CG infectados pelo H. pylori, diagnosticado pelos níveis de anticorpos séricos, não foi diferente do grupo controle na população estudada. Não observamos correlação entre a frequência alélica e o risco de CG. Indivíduos que consomem gorduras em excesso, ex-fumantes e fumantes têm maior risco de CG. / Background: Helicobacter pylori infection is associated with gastric cancer (GC) non-cardia, however, only a small proportion of infected people develop this cancer. Studies on specific strains of bacteria showed that the genetic and environmental factors are associated with this carcinogenesis. Interleukin-8 (IL-8) plays an important role in inflammation of the stomach mucosa after infection with H. pylori. Studies have shown that the polymorphism of IL-8 may increase the risk of GC. Objective: To investigate the association between polymorphism of IL-8, infection with H. pylori, lifestyle and risk of GC. Patients and methods: Case-control study done in patients with non-cardia GC compared with healthy subjects in the ratio 1:2, respectively. DNA was extracted from white blood cells, purified and polymorphism analysis was performed by PCR-RFLP and visualized by agarose gel electrophoresis to 5%. Infection with H. pylori was investigated by serum antibodies to H. pylori. Environmental issues such as smoking, alcohol consumption and diet were investigated by questionnaire. Results: A total of 312 individuals was studied, and 208 controls and 104 cancer patients. No significant differences between sex or age between the control group and patients with CG. The proportion of patients infected by H. pylori was similar (p=0.15) between the control group (53.8%) and case (45.2%). Lower frequency of AA genotype was found in the cancer group (p=0.01), however, no difference between alleles A and T. Cigarette smoking (p=0.001), sharp intake of fat (p=0.003) and low intake of vegetables (p=0.02) were more frequent in case group. A multivariate logistic regression analysis demonstrated a higher risk of GC in subjects with the heterozygous genotype AT (OR: 2.28 95% IC 1,16-4,49, p=0.02) and excessive consumption of fat (OR: 1 77 95% CI 1,12-2,92, p = 0.03). Smokers and former smokers also showed increased risk of GC compared to the control group (OR: 1.89 95% CI 1,41-3,11, p=0.01). Conclusions: The presence of the AT genotype is associated with increased risk of GC in about two times. The percentage of patients with GC infected with H. pylori, diagnosed by serum antibody levels was not different from the control group in the population. No correlations between allele frequency and risk of GC. Individuals who consume too much fat, ex-smokers and smokers have a higher risk of GC. / FAPESP: 08/05763 / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

O quelóide é um tumor fibroso benigno que ocorre durante a cicatrização da pele em indivíduos geneticamente predispostos. A cicatrização é um processo biológico complexo e depende da interação de diferentes estruturas teciduais e de um grande número de tipos celulares residentes e infiltrativos, que produzem citocinas. A interleucina 8 (IL-8), citocina pró-inflamatória, é super-expressa pelos fibroblastos durante o desenvolvimento do tecido de granulação, acelerando o processo de cicatrização. Como o quelóide resulta de uma reparação tecidual anormal após lesão da pele, o presente estudo teve por objetivo determinar a expressão dos receptores da IL-8, CXCR1 e CXCR2, e a capacidade proliferativa, pelo ciclo celular, dos fibroblastos queloideanos cultivados e extraídos ex vivo, por citometria de fluxo. Fibroblastos de cicatriz queloideana e de pele normal foram obtidos de 21 pacientes da raça negra, com idade variando entre 10 e 40 anos, de lesões com até 2 anos de evolução. Em nosso estudo constatamos expressão reduzida dos receptores para a IL-8, CXCR1(35,7%±11,2) e CXCR2 (27,8%±11,3), em fibroblastos de cicatriz queloideana cultivados, comparando com a pele normal (44,1±16,2 e 46,3±27,1 respectivamente). Entretanto, essa diferença só foi significante para o receptor CXCR2. A baixa expressão desses receptores poderia ser decorrente da atividade de metaloproteinases, que regulam a expressão de proteínas da superfície celular, através de clivagem enzimática, ou a capacidade reduzida de internalização e a reciclagem de receptores, mantida por filamentos de actina do citoesqueleto, que nos fibroblastos do quelóide estão diminuídos. Em relação ao ciclo celular de fibroblastos cultivados do quelóide e da pele normal, verificamos diferenças não significantes da capacidade de replicação (fase S do ciclo celular) e de apoptose. No quelóide observamos significante aumento de células na fase G2/M, indicando aumento da velocidade de divisão celular. Para confirmar esses achados estudamos o ciclo celular de fibroblastos extraídos ex vivo, da porção periférica e central do quelóide e da pele normal. Os fibroblastos da porção periférica apresentaram porcentagem significantemente maior de células com capacidade replicativa, fase S do ciclo (22,9% ± 11,6), em relação à porção central (4,7% ± 2,9) e à pele normal (6,8% ± 4,9), e maior velocidade de divisão celular, fase G2/M (18,6 ± 12,0), em relação à porção central (35,6 ± 7,0) e pele normal (32,3 ± 6,9). Verificamos que a porção central apresentou maior porcentagem de células em apoptose (7,0% ± 2,1), comparado à porção periférica (4,9% ± 1,9) e pele normal (2,0% ± 0,86). Esses dados indicam que as células da porção periférica do quelóide parecem ser responsáveis pela elevada taxa de proliferação, justificando o crescimento expansivo a partir das margens da cicatriz queloideana, com desenvolvimento de lesão semelhante a tumor, bem como a porção central ser responsável pela fibrose, contendo células quiescentes e apoptóticas. Esses resultados sugerem modulação diferencial das reações celulares através das vias de sinalização para proliferação ou morte celular programada. Neste sentido, a baixa expressão dos receptores da IL-8, CXCR1 e principalmente de CXCR2, nos fibroblastos do quelóide sugere capacidade reduzida da IL-8 em promover cicatrização acelerada. A baixa atividade da IL-8 sobre os fibroblastos queloideanos estaria promovendo desregulação da resposta inflamatória e com isso atraindo novas células inflamatórias para o local e produzindo sinais alterados, como grande produção da citocina TGF&#946;. Essa desregulação do processo de cicatrização, com alteração de citocinas e da matriz extracelular, poderia ser responsável pelas duas populações de fibroblastos, uma proliferativa na periferia e outra quiescente e apoptótica na porção central. Finalizando, podemos concluir que nossos resultados correspondem às alterações histológicas e clínicas do quelóide que se expande nos limites da lesão. / A keloid is a benign fibrous tumor that occurs during wound healing in genetically predisposed individuals. Healing is a complex biological process and depends on the interaction of different tissue structures and a great number of resident and infiltrative cell types. The interleukin-8 (IL-8), a proinflammatory chemokine, showed higher expression in fibroblasts during the development of the granulation tissue, promoting more rapid tissue maturation. Since keloids result from abnormal wound healing, the objective of the present study was to determine the expression of CXCR1 and CXCR2, IL-8 receptors, and the proliferation capacity, throughout the cell cycle, of the keloid fibroblasts extracted ex vivo and those submitted to in vitro cultivation. Normal skin and keloid scar fibroblasts were obtained from 21 African-Brazilian patients, aged from 10 to 40 years, whose lesions had evolved for no longer than 2 years. Expression of receptors and the cell cycle was assessed by flow cytometry. We showed lower expression of the CXCR1 (35,7% ± 11,2) and CXCR2 (27,8%±11,3) in keloid fibroblasts, when compared with normal skin (44,1 ± 16,2 e 46,3 ± 27,1 respectively), but the difference was not significant for the CXCR1 receptor. This lower expression of IL-8 receptors in keloid fibroblasts could be due to the action of metalloproteinases, which regulate the surface protein enzymatically, or fibroblastic cytoskeleton conditions, which influence receptor internalization and recycling. The distribution assessment of cell cycle phases of fibroblasts cultivated from keloid scars and normal skin did not show significant difference in replication capacity and apoptosis. The keloid fibroblasts presented a significantly higher proportion of cells in the G2/M phase, suggesting higher rate of cell division. To confirm these results we studied the cell cycle of fibroblasts extracted ex vivo, now separated by central and peripheral portions of keloid and normal skin. The peripheral fibroblasts showed significant high cell proportions in phase S (22,9% ± 11,6), compared with the central portion (4,7% ± 2,9) and normal skin (6,8% ± 4,9), and higher cells in division phase G2/M (18,6% ± 12,0), compared with the central portion (35,6% ± 7,0) and normal skin (32,3% ± 6,9). The central portion showed higher proportion of apoptosis (7,0% ± 2,1), compared with the peripheral portion (4,9% ± 1,9) and normal skin (2,0% ± 0,86). These results suggest that the keloid peripheral cells could be responsible for the proliferation rate, justifying the expansive keloid growth at the borders of the keloid scar, in a similar fashion to tumor development and the central portion being responsible for fibrosis, with quiescent and apoptotic cells. These results suggest a differentiated modulation of cell reactions by signal pathways for programmed cellular proliferation or death. In this sense, the low expression of the IL-8 receptors CXCR1 and CXCR2 in keloid fibroblasts suggests a diminished capacity of IL-8 to promote accelerated healing. This low expression of IL-8 receptors in keloid fibroblasts could promote the dysregulation of the inflammatory response and thus attract more inflammatory cells to the site, producing different signals, such as a high production of the TGF&#946; cytokine. This dysregulation of the healing process, with changed cytokine and extracellular matrix expression, could be responsible for two different cell populations of fibroblasts, one proliferation at the periphery and the other fibrotic at the center of the lesion, with apoptotic and quiescent cells. Finally, we conclude that our results correspond to the histological and clinical changes of keloids that grow beyond the wound boundaries.

Orientador: Robson Francisco Carvalho / Resumo: A caquexia é uma síndrome metabólica complexa que frequentemente acomete pacientes portadores de neoplasia maligna em estádio clínico avançado. Caracteriza-se pela perda de massa muscular (com ou sem perda de tecido adiposo), a qual não pode ser completamente revertida por suporte nutricional. As vias moleculares responsáveis pela caquexia não estão completamente esclarecidas, entretanto, os avanços em estudos genômicos, transcriptômicos e proteômicos no câncer tem auxiliado na compreensão da importante relação entre o secretoma tumoral com alterações em órgãos e tecidos adjacentes ou distantes do tumor. Evidências têm demonstrado que componentes do secretoma do ambiente tumoral, incluindo citocinas pró-inflamatórias, possuem um papel fundamental no desenvolvimento de alterações metabólicas que resultam em sarcopenia (perda de função e massa muscular) em pacientes caquéticos. A perda de massa muscular é considerada um importante fator prognóstico de caquexia para pacientes com carcinomas de pulmão de células não pequenas (CPCNP) e, portanto, a avaliação de área muscular utilizando-se de tomografias computadorizadas (CTs) tem sido utilizada com grande eficácia para determinar a sobrevida e a presença de caquexia e sarcopenia nesses pacientes. Portanto, a hipótese desse trabalho é que a integração de dados clínicos e prognósticos, área dos músculos peitorais obtidas por CTs e perfil transcricional tumoral permitirá identificar potenciais biomarcadores de caquexia no secretoma d... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Cachexia is a metabolic syndrome characterized by an ongoing loss of skeletal muscle mass (with or without loss of adipose tissue) that cannot be fully reversed by conventional nutritional support, most found in patients with advanced cancer. The molecular pathways of cancer cachexia are not completely known. The advances in genomic, transcriptomic and proteomic studies in cancer have helped in understanding the relationship of the tumor's secretome with changes in organs and tissues adjacent to or distant from the tumor. Evidences show that components of the tumor secretome, including pro-inflammatory cytokines, play a key role in metabolic alterations that result in sarcopenia (loss of muscle mass and function) of cachectic patients. Loss of skeletal muscle mass is important prognostic factor for cachexia in patients with non-small cell lung cancer (NSCLC), thus the evaluation of muscular area using computed tomography (CT) has been effective in determine survival and the presence of cachexia and sarcopenia in these patients. Therefore, our hypothesis is that the integration of clinical and prognostic data, pectoralis muscle area obtained by CTs, and tumor transcriptional profile will allow the identification of potential biomarkers of cachexia in the secretome of non-small cell lung carcinomas. To do this, 89 CTs from patients with NSCLC, available on the TCIA (The Cancer Imaging Archive) platform were used to measure the pectoralis muscle area, and to select patients with... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

A Interleucina 8 (IL-8) é uma quimiocina CXC angiogênica que tem papel importante no desenvolvimento e progressão de vários tumores malignos, incluindo o câncer de próstata (CaP). O polimorfismo de nucleotídeo único (SNP) -251 T/A da região promotora do gene da IL-8, relativo ao local de início da transcrição deste gene, está associado com a produção desta citocina. O efeito da IL-8 é mediado através de dois receptores de alta afinidade, CXCR1 e CXCR2. O presente estudo investigou a influência da variação dos genes IL-8 e CXCR2 na susceptibilidade e nas características clinicopatológicas do CaP em um grupo de brasileiros. Duzentos e um pacientes e 185 controles saudáveis foram selecionados neste estudo casocontrole. Amostras de sangue foram coletadas para extração de DNA; a tipagem da IL-8 -251 T/A e CXCR2 +1208 C/T foi realizada através da reação em cadeia da polimerase com sequência específica de primers (PCR-SSP), seguida pela eletroforese em gel de agarose. O risco associado entre os genótipos, a susceptibilidade do CaP e as características do tumor, foi estimado pelo odds ratio (OR), com intervalo de confiança de 95%, usando análise de regressão logística e ajustando para idade ao diagnóstico. Encontramos uma associação estatisticamente significativa entre o genótipo heterozigoto CT do gene CXCR2 +1208 e CaP. Este genótipo foi significativamente menos frequente em pacientes com estádio clínico T3-T4 comparado com T1-T2 (56.7% versus 80.5%). Nossos achados sugerem que os portadores do genótipo CT CXCR2 +1208 tiveram um efeito protetor para estádio avançado de CaP (CT versus CC: OR ajustado = 0.25; P = 0.02). Não foi encontrada associação significativa entre o polimorfismo -251 T/A da IL-8 e os parâmetros clinicopatológicos do CaP. Estes resultados indicam que o genótipo CT do CXCR2 +1208 é menos frequente em estádios avançado de CaP, sugerindo que este receptor de quimiocina tenha um papel na patogênese desta doença. / Interleukin-8 (IL-8) is an angiogenic CXC chemokine that plays an important role in both the development and progression of several human malignancies including prostate cancer (PC). A single nucleotide polymorphism (SNP) at -251 upstream of the transcriptional start site of the IL-8 gene has been shown to influence its production. The effects of IL-8 are mediated by two highly related chemokine receptors, CXCR1 and CXCR2. The present study investigated the influence of the IL-8 and CXCR2 gene variation on susceptibility and clinicopathological characteristics of PC in a group of Brazilian subjects. Two hundred and one patients and 185 healthy controls were enrolled in a case-control study. Blood was collected for DNA extraction; typing of IL-8 -251 T/A and CXCR2 +1208 C/T genes was performed by polymerase chain reaction with sequence-specific primers (PCR-SSP), followed by agarose gel electrophoresis. Risk association between the genotypes, PC susceptibility and tumor characteristics was estimated by odds ratio (OR) and 95% confidence intervals (95% CI) using logistic regression analysis, after adjusting for age at diagnosis. A significant association was found between the heterozygous CXCR2 +1208 CT genotype and PC. The CXCR2 +1208 CT genotype was significantly less frequent in patients with clinical stage T3-T4 compared to T1-T2 (56.7 versus 80.5%). Our findings suggest that carriers of the CXCR2 +1208 CT genotype had a protective effect for advanced PC (CT versus CC: adjusted OR = 0.25; P = 0.02). No association was observed between the SNP for IL-8 -251 T/A and clinicopathological parameters of PC. These results indicated that the CXCR2 +1208 CT genotype is less frequent in advanced stages of PC, suggesting that this chemokine receptor plays a role in the pathogenesis of this disease.

Orientador: José Roberto Fioretto / Resumo: As dificuldades relacionadas ao diagnóstico de sepse particularmente em pediatria indicam a necessidade de se buscar biomarcadores capazes não somente de distinguir as diferentes causa de inflamação, mas também de indicar a gravidade dos pacientes. Objetivos: avaliar o comportamento da Interleucina-8 (IL-8) e Fator de Necrose Tumoral alfa (TNF-α) e sua utilidade em diferenciar crianças com sepse e quadros correlatos. Métodos: crianças sépticas foram incluídas prospectivamente e divididas em dois subgrupos: sepse (GS; n=24) e choque séptico (GCS; n=26). IL-8 e TNF-α foram medidas à admissão (T0) e 12 horas mais tarde (T12h). Resultados: Os níveis plasmáticos de IL-8 diferiram estatisticamente entre os momentos de coleta em ambos os grupos, com diminuição significante tanto no GCS, quanto no GS. No GS, em T0 [GS: 68,5 (4,8 – 412)] e em T12h [GS: 44,9 (4,6 – 229,7)] - p = 0,034. No GCS, em T0 [GCS: 268,8 (17,1 – 508,4)] e em T12h [GCS: 116 (17,5 – 508,4)] - p = 0,001. Também na comparação entre grupos, houve diferença, sendo níveis mais elevados no GCS; em T0: [GS - T0: 68,56 (412,04 – 4,9) vs. GCS - T0: 268,80 (508,36 – 17,1) p=0,008 ] ; em T12h [GS – T12h: 45 (229,72 – 4,6) vs. GCS – T12h: 116,6 (508,4 – 17,5); p=0,005]. Os níveis plasmáticos de TNF-α não diferiram estatisticamente entre os momentos de coleta e entre os grupos. Conclusões: IL-8 parece ser útil no diagnóstico precoce de sepse e choque séptico, sendo relacionada com a gravidade da doença. / Abstract: The difficulties related to the diagnosis of sepsis, particularly in pediatrics, indicate the need to look for biomarkers capable not only of distinguishing the different causes of inflammation, but also of indicating the severity of the patients. Objectives: To evaluate the behavior of Interleukin-8 (IL-8) and Tumor Necrosis Factor alpha (TNF-α) and its usefulness in differentiating children with sepsis and related conditions. Methods: septic children were prospectively included and divided into two subgroups: sepsis (GS; n = 24) and septic shock (GCS; n = 26). IL-8 and TNF-α were measured at admission (T0) and 12 hours later (T12h). Results: Plasma levels of IL-8 differed statistically between the collection times in both groups, with a significant decrease in both GCS and GS. At GS, at T0 [GS: 68.5 (4.8 - 412)] and at T12h [GS: 44.9 (4.6 - 229.7)] - p = 0.034. In the GCS, at T0 [GCS: 268.8 (17.1-508.4)] and at T12h [GCS: 116 (17.5-508.4)] - p = 0.001. Also in the comparison between groups, there was difference, being higher levels in the GCS; in T0: [GS - T0: 68.56 (412.04 - 4.9) vs. GCS-T0: 268.80 (508.36 - 17.1) p = 0.008]; in T12h [GS - T12h: 45 (229.72 - 4.6) vs. GCS-T12h: 116.6 (508.4-17.5); p = 0.005]. Plasma levels of TNF-α did not differ statistically between collection times and between groups. Conclusions: IL-8 seems to be useful in the early diagnosis of sepsis and septic shock, being related to the severity of the disease. / Mestre

A Interleucina 8 (IL-8) é uma quimiocina CXC angiogênica que tem papel importante no desenvolvimento e progressão de vários tumores malignos, incluindo o câncer de próstata (CaP). O polimorfismo de nucleotídeo único (SNP) -251 T/A da região promotora do gene da IL-8, relativo ao local de início da transcrição deste gene, está associado com a produção desta citocina. O efeito da IL-8 é mediado através de dois receptores de alta afinidade, CXCR1 e CXCR2. O presente estudo investigou a influência da variação dos genes IL-8 e CXCR2 na susceptibilidade e nas características clinicopatológicas do CaP em um grupo de brasileiros. Duzentos e um pacientes e 185 controles saudáveis foram selecionados neste estudo casocontrole. Amostras de sangue foram coletadas para extração de DNA; a tipagem da IL-8 -251 T/A e CXCR2 +1208 C/T foi realizada através da reação em cadeia da polimerase com sequência específica de primers (PCR-SSP), seguida pela eletroforese em gel de agarose. O risco associado entre os genótipos, a susceptibilidade do CaP e as características do tumor, foi estimado pelo odds ratio (OR), com intervalo de confiança de 95%, usando análise de regressão logística e ajustando para idade ao diagnóstico. Encontramos uma associação estatisticamente significativa entre o genótipo heterozigoto CT do gene CXCR2 +1208 e CaP. Este genótipo foi significativamente menos frequente em pacientes com estádio clínico T3-T4 comparado com T1-T2 (56.7% versus 80.5%). Nossos achados sugerem que os portadores do genótipo CT CXCR2 +1208 tiveram um efeito protetor para estádio avançado de CaP (CT versus CC: OR ajustado = 0.25; P = 0.02). Não foi encontrada associação significativa entre o polimorfismo -251 T/A da IL-8 e os parâmetros clinicopatológicos do CaP. Estes resultados indicam que o genótipo CT do CXCR2 +1208 é menos frequente em estádios avançado de CaP, sugerindo que este receptor de quimiocina tenha um papel na patogênese desta doença. / Interleukin-8 (IL-8) is an angiogenic CXC chemokine that plays an important role in both the development and progression of several human malignancies including prostate cancer (PC). A single nucleotide polymorphism (SNP) at -251 upstream of the transcriptional start site of the IL-8 gene has been shown to influence its production. The effects of IL-8 are mediated by two highly related chemokine receptors, CXCR1 and CXCR2. The present study investigated the influence of the IL-8 and CXCR2 gene variation on susceptibility and clinicopathological characteristics of PC in a group of Brazilian subjects. Two hundred and one patients and 185 healthy controls were enrolled in a case-control study. Blood was collected for DNA extraction; typing of IL-8 -251 T/A and CXCR2 +1208 C/T genes was performed by polymerase chain reaction with sequence-specific primers (PCR-SSP), followed by agarose gel electrophoresis. Risk association between the genotypes, PC susceptibility and tumor characteristics was estimated by odds ratio (OR) and 95% confidence intervals (95% CI) using logistic regression analysis, after adjusting for age at diagnosis. A significant association was found between the heterozygous CXCR2 +1208 CT genotype and PC. The CXCR2 +1208 CT genotype was significantly less frequent in patients with clinical stage T3-T4 compared to T1-T2 (56.7 versus 80.5%). Our findings suggest that carriers of the CXCR2 +1208 CT genotype had a protective effect for advanced PC (CT versus CC: adjusted OR = 0.25; P = 0.02). No association was observed between the SNP for IL-8 -251 T/A and clinicopathological parameters of PC. These results indicated that the CXCR2 +1208 CT genotype is less frequent in advanced stages of PC, suggesting that this chemokine receptor plays a role in the pathogenesis of this disease.