S100B é uma citocina produzida e secretada por astrócitos, que está envolvida no ciclo de citocinas desencadeado pela IL-1β na doença de Alzheimer. Entretanto, a secreção de S100B seguida de estímulo pela IL-1β não tem sido demonstrado diretamente. Nós investigamos a secreção de S100B em culturas gliais e fatias hipocampais expostas a IL-1β. Culturas corticais primárias de astrócitos, células de glioma C6 e fatias hipocampais agudas de ratos Wistar expostas a IL-1β (de 1 pg a 10ng/mL) foram utilizadas.S100B extracelular foi medida por ELISA. Migração nuclear de NF-κB foi investigada por imunocitoquímica e immunoblotting. A secreção de S100B também foi avaliada na presença de inibidores de NF-κB e MAPK. A análise estatística foi realizada utilizando teste t de Student ou ANOVA de uma via, assumindo p< 0.05. A secreção de S100B foi estimulada por IL-1β em todas as preparações. Migração nuclear de NF-κB também foi observada nessas condições experimentais. PDTC (inibidor de NF-κB) e PD98059 (inibidor da via ERK) foram hábeis em inibir o aumento da secreção do S100B. Níveis micromolares de S100B, assim como IL-1β, induziram a produção de óxido nítrico. Nossos dados demonstram que a IL-1β induz um aumento da secreção basal de S100B nos três diferentes modelos in vitro utilizados: astrócitos corticais primários, células C6 e fatias hipocampais de ratos, e que esse aumento na secreção foi mediado pela via de sinalização MAPK-ERK/NFκB. Astrócitos primários e glioma C6 exibiram diferente sensibilidade a IL-1β na modulação tanto da secreção, quanto da expressão de S100B. Esses resultados sugerem que S100B extracelular pode contribuir para respostas reparativas em lesões cerebrais agudas, bem como para desordens neurodegenerativas em lesões crônicas. O mecanismo de indução de secreção de S100B por IL-1β suporta a hipótese de um "ciclo de citocinas", proposto na gênese da doença de Alzheimer. / S100B is an astrocyte-derived cytokine, which has been implicated in the IL-1β- triggered cytokine cycle in Alzheimer’s disease. However, the secretion of S100B following stimulation by IL-1β has not been directly demonstrated. We investigated S100B secretion in glial preparations and hippocampal slices exposed to IL-1β. Cortical primary astrocyte cultures, C6 glioma cells and acute hippocampal slices from the brain of Wistar rats exposed to IL-1β (from 1pg to 10ng/mL) were utilized. Extracellular S100B was measured by ELISA. Nuclear migration of NF-κB was investigated by immunocytochemistry and immunoblotting. S100B secretion was also evaluated in the presence of specific inhibitors for NF-κB and MAPK. Statistical analyses were carried out by Student t test or one-way ANOVA, assuming p < 0.05. IL-1β-stimulated S100B secretion was observed in all preparations. Nuclear migration NF-κB was also observed under these experimental conditions. PDTC (an inhibitor of NF-κB) and PD 98059 (an inhibitor of ERK) inhibited S100B secretion stimulated by IL-1β. S100B, at micromolar levels, like IL-1β, was able to induce NO production. Our data demonstrate IL-1β-induced S100B secretion in three different in vitro preparations: cortical primary astrocytes, C6 glioma cells and hippocampal slices of rats; this secretion was mediated by MAPK-ERK/NF-κB signalling. Primary astrocytes and C6 cells exhibited different sensitivities to IL-1β concerning S100B expression and secretion. These results suggest that extracellular S100B could contribute to a reparative response in acute brain injury, as well as in neurodegenerative disorders due to chronic injury. The mechanism of IL-1β-induced S100B secretion supports the hypothesis for a “cytokine cycle”, proposed in the genesis of Alzheimer disease.

S100B é uma citocina produzida e secretada por astrócitos, que está envolvida no ciclo de citocinas desencadeado pela IL-1β na doença de Alzheimer. Entretanto, a secreção de S100B seguida de estímulo pela IL-1β não tem sido demonstrado diretamente. Nós investigamos a secreção de S100B em culturas gliais e fatias hipocampais expostas a IL-1β. Culturas corticais primárias de astrócitos, células de glioma C6 e fatias hipocampais agudas de ratos Wistar expostas a IL-1β (de 1 pg a 10ng/mL) foram utilizadas.S100B extracelular foi medida por ELISA. Migração nuclear de NF-κB foi investigada por imunocitoquímica e immunoblotting. A secreção de S100B também foi avaliada na presença de inibidores de NF-κB e MAPK. A análise estatística foi realizada utilizando teste t de Student ou ANOVA de uma via, assumindo p< 0.05. A secreção de S100B foi estimulada por IL-1β em todas as preparações. Migração nuclear de NF-κB também foi observada nessas condições experimentais. PDTC (inibidor de NF-κB) e PD98059 (inibidor da via ERK) foram hábeis em inibir o aumento da secreção do S100B. Níveis micromolares de S100B, assim como IL-1β, induziram a produção de óxido nítrico. Nossos dados demonstram que a IL-1β induz um aumento da secreção basal de S100B nos três diferentes modelos in vitro utilizados: astrócitos corticais primários, células C6 e fatias hipocampais de ratos, e que esse aumento na secreção foi mediado pela via de sinalização MAPK-ERK/NFκB. Astrócitos primários e glioma C6 exibiram diferente sensibilidade a IL-1β na modulação tanto da secreção, quanto da expressão de S100B. Esses resultados sugerem que S100B extracelular pode contribuir para respostas reparativas em lesões cerebrais agudas, bem como para desordens neurodegenerativas em lesões crônicas. O mecanismo de indução de secreção de S100B por IL-1β suporta a hipótese de um "ciclo de citocinas", proposto na gênese da doença de Alzheimer. / S100B is an astrocyte-derived cytokine, which has been implicated in the IL-1β- triggered cytokine cycle in Alzheimer’s disease. However, the secretion of S100B following stimulation by IL-1β has not been directly demonstrated. We investigated S100B secretion in glial preparations and hippocampal slices exposed to IL-1β. Cortical primary astrocyte cultures, C6 glioma cells and acute hippocampal slices from the brain of Wistar rats exposed to IL-1β (from 1pg to 10ng/mL) were utilized. Extracellular S100B was measured by ELISA. Nuclear migration of NF-κB was investigated by immunocytochemistry and immunoblotting. S100B secretion was also evaluated in the presence of specific inhibitors for NF-κB and MAPK. Statistical analyses were carried out by Student t test or one-way ANOVA, assuming p < 0.05. IL-1β-stimulated S100B secretion was observed in all preparations. Nuclear migration NF-κB was also observed under these experimental conditions. PDTC (an inhibitor of NF-κB) and PD 98059 (an inhibitor of ERK) inhibited S100B secretion stimulated by IL-1β. S100B, at micromolar levels, like IL-1β, was able to induce NO production. Our data demonstrate IL-1β-induced S100B secretion in three different in vitro preparations: cortical primary astrocytes, C6 glioma cells and hippocampal slices of rats; this secretion was mediated by MAPK-ERK/NF-κB signalling. Primary astrocytes and C6 cells exhibited different sensitivities to IL-1β concerning S100B expression and secretion. These results suggest that extracellular S100B could contribute to a reparative response in acute brain injury, as well as in neurodegenerative disorders due to chronic injury. The mechanism of IL-1β-induced S100B secretion supports the hypothesis for a “cytokine cycle”, proposed in the genesis of Alzheimer disease.

S100B é uma citocina produzida e secretada por astrócitos, que está envolvida no ciclo de citocinas desencadeado pela IL-1β na doença de Alzheimer. Entretanto, a secreção de S100B seguida de estímulo pela IL-1β não tem sido demonstrado diretamente. Nós investigamos a secreção de S100B em culturas gliais e fatias hipocampais expostas a IL-1β. Culturas corticais primárias de astrócitos, células de glioma C6 e fatias hipocampais agudas de ratos Wistar expostas a IL-1β (de 1 pg a 10ng/mL) foram utilizadas.S100B extracelular foi medida por ELISA. Migração nuclear de NF-κB foi investigada por imunocitoquímica e immunoblotting. A secreção de S100B também foi avaliada na presença de inibidores de NF-κB e MAPK. A análise estatística foi realizada utilizando teste t de Student ou ANOVA de uma via, assumindo p< 0.05. A secreção de S100B foi estimulada por IL-1β em todas as preparações. Migração nuclear de NF-κB também foi observada nessas condições experimentais. PDTC (inibidor de NF-κB) e PD98059 (inibidor da via ERK) foram hábeis em inibir o aumento da secreção do S100B. Níveis micromolares de S100B, assim como IL-1β, induziram a produção de óxido nítrico. Nossos dados demonstram que a IL-1β induz um aumento da secreção basal de S100B nos três diferentes modelos in vitro utilizados: astrócitos corticais primários, células C6 e fatias hipocampais de ratos, e que esse aumento na secreção foi mediado pela via de sinalização MAPK-ERK/NFκB. Astrócitos primários e glioma C6 exibiram diferente sensibilidade a IL-1β na modulação tanto da secreção, quanto da expressão de S100B. Esses resultados sugerem que S100B extracelular pode contribuir para respostas reparativas em lesões cerebrais agudas, bem como para desordens neurodegenerativas em lesões crônicas. O mecanismo de indução de secreção de S100B por IL-1β suporta a hipótese de um "ciclo de citocinas", proposto na gênese da doença de Alzheimer. / S100B is an astrocyte-derived cytokine, which has been implicated in the IL-1β- triggered cytokine cycle in Alzheimer’s disease. However, the secretion of S100B following stimulation by IL-1β has not been directly demonstrated. We investigated S100B secretion in glial preparations and hippocampal slices exposed to IL-1β. Cortical primary astrocyte cultures, C6 glioma cells and acute hippocampal slices from the brain of Wistar rats exposed to IL-1β (from 1pg to 10ng/mL) were utilized. Extracellular S100B was measured by ELISA. Nuclear migration of NF-κB was investigated by immunocytochemistry and immunoblotting. S100B secretion was also evaluated in the presence of specific inhibitors for NF-κB and MAPK. Statistical analyses were carried out by Student t test or one-way ANOVA, assuming p < 0.05. IL-1β-stimulated S100B secretion was observed in all preparations. Nuclear migration NF-κB was also observed under these experimental conditions. PDTC (an inhibitor of NF-κB) and PD 98059 (an inhibitor of ERK) inhibited S100B secretion stimulated by IL-1β. S100B, at micromolar levels, like IL-1β, was able to induce NO production. Our data demonstrate IL-1β-induced S100B secretion in three different in vitro preparations: cortical primary astrocytes, C6 glioma cells and hippocampal slices of rats; this secretion was mediated by MAPK-ERK/NF-κB signalling. Primary astrocytes and C6 cells exhibited different sensitivities to IL-1β concerning S100B expression and secretion. These results suggest that extracellular S100B could contribute to a reparative response in acute brain injury, as well as in neurodegenerative disorders due to chronic injury. The mechanism of IL-1β-induced S100B secretion supports the hypothesis for a “cytokine cycle”, proposed in the genesis of Alzheimer disease.

PASSOS, J.R.S. Expressão do sistema interleucina 1 (il-1) em folículos ovarianos bovinos e efeitos in vitro da il-1β na ativação de folículos primordiais. 2015. 95 f. Dissertação (DISSERTAÇÃO EM BIOTECNOLOGIA) - Campus de Sobral, Universidade Federal do Ceará, Sobral, 2015. / Submitted by Djeanne Costa (djeannecosta@gmail.com) on 2017-08-23T13:25:03Z No. of bitstreams: 1 2015_dis_jrdspassos.pdf: 2733592 bytes, checksum: c3aee8f721ab539ee80cb2a9ae2c6aa4 (MD5) / Approved for entry into archive by Djeanne Costa (djeannecosta@gmail.com) on 2017-09-26T16:00:45Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_dis_jrdspassos.pdf: 2733592 bytes, checksum: c3aee8f721ab539ee80cb2a9ae2c6aa4 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-26T16:00:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_dis_jrdspassos.pdf: 2733592 bytes, checksum: c3aee8f721ab539ee80cb2a9ae2c6aa4 (MD5) Previous issue date: 2015 / This study aims to investigate the expression of interleukin 1 system (proteins and mRNA of ligands and receptors) and its distribution in ovaries of cyclic cows, as well as to evaluate the effects of IL-1β on the survival and activation of primordial follicles in vitro. The ovaries were processed for localization of interleukin 1 system in preantral and antral follicles by immunohistochemical, qPCR and western blot analysis. For in vitro studies, ovarian fragments were cultured in α-MEM+ supplemented with IL-1β (0, 1, 10, 50 or 100 ng/mL), and aftes 6 days the tissues cultured were processed for histological analysis. Immunohistochemical results showed that the proteins for interleukin 1 system (IL-1β, IL-1RA, IL-1RI and IL-1RII) were detected in the various follicular compartments. Unfortunately, IL-1α antibodies tested did not react in bovine ovaries. All the proteins tested were observed in the cytoplasm of oocytes and granulosa cells from all follicular categories, and theca cells of antral follicles, with the exception that IL-1α has not been found in any analyzed cell. Variable levels of mRNA for the interleukin 1 system in the follicular size and classes analysed. After 6 days of culture, the presence of IL-1β (10 or 50 ng/mL) was effective in maintaining the percentage of normal follicles and in promoting primordial follicle activation. In conclusion, interleukin 1 system is differentially expressed in the ovarian cells according to the stage of follicular development. Moreover, IL-1β promotes the development of primordial follicles. These results suggest an important role of the interleukin 1 system in the regulation of folliculogenesis in bovine species. / O objetivo deste estudo foi investigar a expressão do sistema interleucina 1 (proteínas e RNAm de ligantes e receptores) e sua distribuição nos ovários de vacas cíclicas, bem como avaliar os efeitos da IL-1β na sobrevivência e ativação de folículos primordiais in vitro. Os ovários foram processados para a localização do sistema interleucina 1 em folículos pré-antrais e antrais utilizando as técnicas de imunohistoquímica, qPCR e análise de Western blot. Para os estudos in vitro, fragmentos ovarianos foram cultivados em α-MEM+ suplementado com IL-1β (0, 1, 10, 50 ou 100 ng/mL), e após 6 dias foram processados para análise histológica. Os resultados de imunohistoquímica mostraram que a proteína para os integrantes do sistema interleucina I (IL-1β, IL-1RA, IL-1RI e IL-1RII) foram detectados em diferentes compartimentos foliculares. Infelizmente, o anticorpo testado para localização de IL-1α não reagiu em ovários bovinos. Todas as proteínas testadas foram observados no citoplasma dos oócitos e nas células da granulosa de todas as categorias foliculares, e nas células da teca de folículos antrais, com a exceção da IL-1α, que não foi encontrada em nenhuma das célula analisados. Foram observados níveis variáveis de RNAm para o sistema interleucina 1 nas diferentes categorias foliculares analisadas. Após 6 dias de cultivo, a presença de IL-1β (10 ou 50 ng/mL) foi capaz de manter a percentagem de folículos normais e de promover a ativação dos folículos primordiais. Em conclusão, os componentes do sistema de interleucina 1 são expressos diferencialmente em células ovarianas de acordo com a fase do desenvolvimento folicular. Além disso, a IL-1β promove o desenvolvimento de folículos primordiais in vitro. Estes resultados sugerem um importante papel do sistema interleucina 1 na regulação da foliculogênese em bovinos.

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:47:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Objetivos: este trabalho objetivou estudar a expressão gênica da família das interleucinas-1 em células células-tronco embrionárias indiferenciadas de camundongos e avaliar se ela se altera após a diferenciação celular. Métodos: Pesquisou-se a expressão gênica dessas substâncias em células-tronco (CT) indiferenciadas e durante a diferenciação celular em cardiomiócitos de camundongos. Colônias na 5a , 10a , 15a , 20a e 25a passagens em meios de cultivo foram removidas para a pesquisa de RT-PCR utilizando-se o kit SuperScript™ III CellsDirect cDNA Synthesis System. A amplificação do DNAc através do PCR foi realizada com a enzima Platinum® Taq DNA Polymerase. Foram utilizados os primers da interleucina-1β (IL- 1F2), antagonista do receptor de IL-1 (IL-1F3) e receptor tipo 1 de IL-1 (IL-1RI). Para estudo da IL-1 em estado diferenciado, foram utilizados corpos embrionários de três e cinco dias de cultivo e cardiomiócitos derivados de CT. Resultados: todas as 45 colônias indiferenciadas de CT mostraram-se negativas para IL-1F2; uma entre 45 (2,2%) foi positiva para IL-1F3 e também para marcadores de ectoderma (FGF5) e endoderma (Gata6) primitivos; uma entre 45 (2,2%) foi positiva para IL-1RI e também para ectoderma e mesoderma. Nenhum dos quatro corpos embrionários estudados foram positivos para IL-1F2. Um deles foi positivo para IL-1F3 e dois positivos para IL-1RI. Todas as quatro biópsias de cardiomiócitos mostraram-se positivas para IL- 1F2 e também para IL-1F3. Duas delas foram positivas para IL-1RI. Pelo que se pôde observar, este é o primeiro estudo que descreve a expressão genética da família da IL-1 em colônias individuais de células-tronco embrionárias de camundongos. Conclusão: as células-tronco indiferenciadas de camundongos estudadas não produziram genes da família da IL-1. / Purpose: this work objectived to study the IL-1 family gene expression in undifferentiated mouse embryonic stem (ES) cells and during diferentiation into cardiomyocytes. Methods: Colonies at 5, 10, 15, 20 and 25th passages were taken to perform RT-PCR using SuperScript™ III CellsDirect cDNA Synthesis System. PCR amplification of cDNA was done with Platinum® Taq DNA Polymerase. We used Interleukin-1β (IL-1F2), IL-1 receptor antagonist (IL-1F3) and IL-1 receptor type I (IL-1RI) primers. Results: all 45 undifferentiated ES cells were negative for IL-1F2; one out of 45 (2,2%) was positive for IL-1F3 and also for primitive ectoderm (FGF5) and endoderm (Gata6) markers; one out of 45 (2,2%) was positive for IL-1RI and also for ectoderm and mesoderm. To further study IL-1 at a late stage of cell differentiation, we used embroyd bodies (EB) at day 3 and 5 and ES cell derived cardiomyocytes. None of four embroid bodies studied were positive for IL-1F2. One out of four EB was positive for IL-1F3 and two out of four EB were positive for IL- 1RI. Four out of 4 ES cells derived cardiomyocytes were positive for IL-1F2 and also for IL-1F3. Two out of 4 ES cells derived cardiomyocytes were positive for IL-1RI. Two out of 4 ES cells derived cardiomyocytes were positive for IL-1RI. To our knowledge this is the first time to describe an IL-1 family gene expression study in undifferentiated single mouse ES cells. Conclusion: undifferentiated mouse ES cells studied didn’t produce major components of IL-1 family. / CAPES: BEX 1475/03-7 / BV UNIFESP: Teses e dissertações

LEITE, C. A. V. G. Bloqueio do receptor da interleucina-1 com Anakinra Inibe a cistite hemorrágica induzida por ifosfamida. 2014. 117 f. Faculdade de Medicina, Departamento de Fisiologia e Farmacologia, Universidade Federal do Ceará, 2014. / Submitted by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2016-03-28T13:12:59Z No. of bitstreams: 1 2014_dis_cavgleite.pdf: 15500726 bytes, checksum: 5778b5236486c0be61c59f733cd9532e (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes(erikaleitefernandes@gmail.com) on 2016-03-28T13:13:10Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_dis_cavgleite.pdf: 15500726 bytes, checksum: 5778b5236486c0be61c59f733cd9532e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-28T13:13:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_dis_cavgleite.pdf: 15500726 bytes, checksum: 5778b5236486c0be61c59f733cd9532e (MD5) Previous issue date: 2014-04-11 / Hemorrhagic cystitis (HC) induced by ifosfamide (IFO) is an important clinical complication in patients with cancer. Despite prophylaxis, HC is observed. The role of interleukin-1 (IL-1) and tumor necrosis factor (TNF) in the pathogenesis of HC provides targets for treatment. Thus, this study aimed to evaluate the protective effect of the IL-1 receptor antagonist (anakinra) and anti-TNF-alpha antibody (infliximab) in experimental HC-induced by IFO in mice. Swiss , C57BL6 , IL -1R-/-, CASP1-/-, TNFR1-/-, TNFR1/R2-/- mice were used. Animals were submitted to pre- treatment with anakinra 100 mg/ kg, ip or infliximab 5 mg/ Kg, ip, or saline ip, 1h after, they were treated with IFO 400 mg/ kg ip, and 12 h after IFO injection they were killed. Then, it was performed resection of the bladder for macroscopic and histopathological evaluation, vascular permeability assay, myeloperoxidase assay, muscle contractility, cistometrogram and flow cytometry to neutrophils and macrophages. Some animals prior to death, were subjected to evaluation of visceral nociception. Anakinra was able to attenuate hemorrhage, edema, neutrophil infiltration, visceral hypernociception and bladder dysfunction. In addition, it was observed reduction of inflammatory parameters and bladder infiltration of neutrophils and macrophages in IL -1R-/- mice, when compared to wild type animals. In contrast, caspase-1-/- mice did not change the inflammatory pattern when compared to wild type animals. Conversely, infliximab inhibited bladder edema and visceral hypernociception, but did not inhibit hemorrhage, infiltration of neutrophils and macrophages and bladder dysfunction. A reduction in bladder edema was also observed in TNFR1-/- mice, when compared with wild type animals, although TNFR1-/- mice did not block infiltration of neutrophils and macrophages. In other hand, TNFR1/R2-/- mice treated with IFO showed a deterioration of HC. Thus, this study shows the efficacy of anakinra in preventing the HC syndrome induced by IFO, and efficacy of infliximab in inhibiting hypernociception. In addition, the pathogenesis of HC appears to be independent of IL- 1β produced by caspase-1 or IL-1α dependent. Furthermore, HC appears to be partially dependent of TNFR1, but possibly arising from a physiological protection TNFR2. / Cistite hemorrágica (CH) induzida por ifosfamida (IFO) é uma importante complicação clínica em pacientes com câncer. Atualmente, mesna e hiper- hidratação são utilizadas como profilaxia, a despeito de ainda ser observada CH através de cistoscopia e histopatologia mesmo com essas medidas. A participação de interleucina-1 (IL-1) e fator de necrose tumoral (TNF) na patogênese da CH provê alvos para o tratamento dessa doença. Assim, esse trabalho objetivou avaliar o efeito protetor do antagonista do receptor da IL-1 (anakinra) e do anticorpo anti-TNF- alfa (infliximabe) nas respostas inflamatórias, nociceptivas e funcionais da CH experimental induzida por IFO em camundongos. Foram utilizados camundongos Swiss, C57BL6, IL-1R-/-, CASP1-/-, TNFR1-/-, TNFR1/R2-/-. Os animais WT foram submetidos ao tratamento com anakinra 100 mg/kg i.p. ou infliximabe 5 mg/kgi.p. ou salina i.p., foram tratados 1h após com IFO 400 mg/kg i.p., e 12 h após a IFO foi realizado o sacrifício, com excisão das bexigas para avaliação macroscópica, histopatológica, permeabilidade vascular, mieloperoxidase, contratilidade, cistometrografia e citometria de fluxo para neutrófilos e macrófagos. Alguns animais, antes do sacrifício, foram submetidos a avaliação de nocicepção visceral. Anakinra foi capaz de atenuar hemorragia, edema, infiltrado neutrofílico, hipernocicepção visceral e disfunção vesical. Além disso, foi observada redução dos parâmetros inflamatórios e no infiltrado vesical de neutrófilos e macrófagos em animais IL-1R-/-em comparação a animais selvagens. Por outro lado, com animais caspase-1-/-, não houve mudança no padrão inflamatório. O infliximabe, por sua vez, inibiu o edema vesical e a hipernocicepção visceral, sem interferir na hemorragia, no infiltrado de neutrófilos e macrófagos e na disfunção vesical. Foi observada também uma melhora do edema vesical em animais TNFR1-/-, sem melhora no infiltrado de neutrófilos e macrófagos, e observou-se uma piora da CH em animais TNFR1/R2-/-. Com isso, o presente trabalho demonstra a eficácia de anakinra em prevenir a síndrome da CH induzida por IFO, e a eficácia do infliximabe em inibir a hipernocicepção. Adicionalmente, a patogênese da CH parece ser independente de IL-1β produzido por caspase-1, ou dependente de IL-1α. Além disso, a CH parece ser dependente parcialmente do receptor TNFR1, e possivelmente possui uma proteção fisiológica advinda do receptor TNFR2.

Submitted by Isaac Francisco de Souza Dias (isaac.souzadias@ufpe.br) on 2016-01-25T16:57:05Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação - Formato Digital2.pdf: 1376666 bytes, checksum: 9522835840997f24e4c9a259f0bf5fab (MD5) / Made available in DSpace on 2016-01-25T16:57:05Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação - Formato Digital2.pdf: 1376666 bytes, checksum: 9522835840997f24e4c9a259f0bf5fab (MD5) Previous issue date: 2014-08-26 / REUNI / Objetiva-se verificar, através de um estudo tipo série de casos, a associação do polimorfismo do gene IL-1β [região +3954(T\C)] e do gene IL-6 [região -174(G\C)] ao insucesso de implantes dentários. Noventa e quatro pacientes, de ambos os sexos, reabilitados com cento e noventa e quatro implantes dentários Straumann® (Waldenburg, Switzerland) foram avaliados clínica e radiograficamente para os seguintes parâmetros: mobilidade, queixas subjetivas persistentes, infecção peri-implantar recorrente com supuração, radiolucência contínua ao redor do implante, profundidade de sondagem ≥ 5mm e sangramento à sondagem. Se o implante apresentasse algum destes parâmetros, era considerado como insucesso ou falha e os que não apresentaram foram considerados como sucesso. Células da mucosa jugal foram coletadas para a análise do polimorfismo dos genes IL-1β e IL-6 através da reação em cadeia da polimerase pela técnica do comprimento do fragmento de restrição (PCR-RFLP). Dentre os implantes avaliados, 28,35% apresentaram insucesso. Não foi encontrada diferença estatisticamente significante entre o grupo de falha\insucesso dos implantes em relação ao genótipo dos genes IL-1β e IL-6. Dentro dos limites desta pesquisa, pode-se concluir que não existe associação entre o polimorfismo genético específico e falha do implante dentário em termos de complicações biológicas na população estudada. Estudos longitudinais adequadamente alimentados são necessários para fornecer mais informações. / To verify, through a case series study, the association of the polymorphism of the IL-1β gene [+3954 region (T \ C)] and the IL-6 gene [-174 region (G \ C)] to the failure of dental implants. Ninety-four patients of both genders, rehabilitated with one hundred ninety-four dental implants Straumann® (Waldenburg, Switzerland) were evaluated clinically and radiographically for the following parameters: mobility, persistent subjective complaints, recurrent peri-implant infection with suppuration, the continuous radiolucent around the implant, probing depth ≥ 5 mm and bleeding on probing. If the implant submit any of the parameters was considered as failures or crashes, and those who had not were considered successful. Cells from the oral mucosa for analysis of polymorphism of IL-1β and IL-6 genes by polymerase chain reaction technique for the length of the restriction fragment was collected (PCR-RFLP). Among the implants reviews, 28,35% were unsuccessful. No statistically significant difference was found between the failure group \ failure of implants in relation to the genotype of IL-1β and IL-6 genes. Within the limits of this research, it can be concluded that there is no association between specific genetic polymorphisms and dental implant failure in terms of biological complications in this population. Adequately powered longitudinal studies are needed to provide more information.

Trabajo de Investigación Requisito para optar al Título de Cirujano Dentista / Introducción: El blanqueamiento intracoronario de dientes no vitales es ampliamente utilizado en la actualidad como alternativa de tratamiento estético y conservador en pacientes con cambio de coloración en uno o más dientes. El peróxido de hidrógeno, molécula activa responsable de lograr el efecto aclarante en la estructura dentaria, ha sido catalogado por diversos autores como una sustancia potencialmente tóxica para los tejidos periodontales, con una gran capacidad oxidativa y poder de difusión debido a su bajo peso molecular. En el presente estudio se evaluó la respuesta tisular frente al uso de dos agentes blanqueadores utilizados en la actualidad, mediante la medición de los niveles de la citoquina IL-1β, implicada en todos los procesos inflamatorios, donde no existen estudios clínicos ni registro en la literatura. Material y Métodos: Se incluyeron 50 dientes tratados endodónticamente con cambio de coloración. Fueron conformados dos grupos de estudio de forma randomizada según el agente blanqueador utilizado, G1: peróxido de hidrógeno al 35% (n=25), G2: peróxido de carbamida al 37% (n=25). El blanqueamiento intracoronario se realizó mediante la técnica walking bleach con un protocolo de 4 sesiones de blanqueamiento. Las muestras de fluido gingival crevicular (FGC) para determinar los niveles de IL-1β se tomaron con papel absorbente Periopaper® en 6 sitios por diente en los siguientes tiempos: antes del inicio del tratamiento (inicial), al finalizar cada sesión de blanqueamiento, a la semana y al primer mes de finalizado el tratamiento. Se cuantificaron los niveles de proteínas totales usando el sistema Bradford® y a partir de 100 μl de muestra eluída se midieron los niveles de IL-1β mediante ELISA (Quantikine ® ; R&D Systems Inc.). Resultados: Los niveles de IL-1β aumentaron significativamente respecto a los valores iniciales en todos los tiempos evaluados, en ambos grupos (p<0,05). No hay diferencia estadísticamente significativa entre los niveles de IL-1β al comparar los grupos entre sí (p>0,05). Conclusiones: Los niveles de IL-1β aumentan gradualmente luego de cada sesión de blanqueamiento y hasta el mes post-blanqueamiento. Los niveles alcanzados en el presente estudio son compatibles con inflamación. / Adscrito a Proyecto PRI-ODO No. 03/016.

Orientador: Ibsen Bellini Coimbra / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-07T22:55:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Andrade_AndreLuisLugnanide_M.pdf: 2450375 bytes, checksum: f33edb219ba25e56f663f1256a99bbeb (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: Introdução: Os condrócitos da cartilagem articular vivem em um ambiente com baixa concentração de oxigênio. Nestas condições, a proteína do fator induzido por hipóxia (HIF-1a) mantém-se estável e ativa genes que são fundamentais na homeostase do oxigênio. A expressão do HIF-1a aumenta, em joelhos com osteoartrite (OA), principalmente nas áreas mais afetadas pela degeneração. Os condrócitos são capazes de produzir mediadores inflamatórios, como a interleucina-1 (IL-1) e o fator de necrose tumoral a (TNF-a), que estimulam a produção de prostaglandinas, metaloproteinases e óxido nítrico e relacionam-se com o início e com a progressão da osteoartrite. Os antiinflamatórios são drogas freqüentemente utilizadas no tratamento sintomático da OA. Material e Método: condrócitos humanos de joelhos osteoartríticos cultivados em suspensão e em condições normais de oxigênio foram divididos em quatro grupos: 1) controle, 2) estimulados com IL-1 ou TNF-a, 3) estimulados com meloxicam ou parecoxibe e 4) estimulados com meloxicam ou parecoxibe associados a IL-1 ou TNF-a. Os grupos foram submetidos à extração de RNA (ácido ribonucléico) e de proteína nuclear. O RNA foi convertido em cDNA, sendo então realizada a reação de PCR em tempo real para verificar a expressão do HIF-1a. As proteínas nucleares foram extraídas, quantificadas e analisadas pela técnica de Western Blotting. Resultados: Foi detectada a expressão de HIF-1a e cDNA de HIF-1a em todos os grupos de condrócitos cultivados em suspensão em tensões normais de oxigênio, não havendo diferenças significativas entre os grupos. Discussão: a meia-vida do HIF-1a é extremamente curta em normóxia e marcadamente prolongada em hipóxia, por isso muitos pesquisadores acreditam não ser possível a detecção da proteína do HIF-1a em condrócitos cultivados em condições normais de oxigênio. Neste estudo foi possível constatar a expressão do HIF-1a em normóxia, possivelmente devido ao modelo de cultura utilizado. O estímulo com IL-1, TNF-a e inibidores da COX-2 não alterou a expressão de HIF-1a. Condrócitos oriundos de articulações osteoartríticas avançadas poderiam apresentar resistência à ação das citocinas / Abstract: Introduction: The chondrocytes of joint surface live in low concentration of oxygen environment. In this condition, the hypoxia inducible factor 1 a (HIF-1a) becomes stable and regulates the expression of genes that are important for oxygen homeostasis. The expression of HIF-1a mRNA is augmented in chondrocytes from osteoarthritic knees, especially in more degenerated areas. Chondrocytes are capable of producing inflammatory mediators, such as interleukin 1 (IL-1) and tumoral necrosis factor a (TNF-a), that stimulate the production of prostaglandin, metalloproteinases and nitric oxide, correlated with the onset and progression of osteoarthritis. Antiinflammatory drugs are frequently used in the treatment of symptoms of osteoarthritis. Material e Methods: human chondrocytes from osteoarthritic knees were cultivated in suspension and in normal tension of oxygen. The cells were divided in 4 groups: control, stimulated with IL-1 or TNF-a, stimulated with meloxicam or parecoxib and the last one stimulated with meloxicam or parecoxib and IL-1 or TNF-a. Nuclear protein and RNA were extracted from these cells. cDNA was synthesized from RNA and real time PCR was performed with this product in order to determine HIF-1a expression. Nuclear protein was analyzed using the Western-Blotting method. Results: HIF-1a and HIF-1a mRNA was detectable in all cell groups, and there was not a statistic significant difference between them. Discussion: As half live of HIF-1a is extremely short when in normoxic and greater in hypoxic conditions, many researchers believe it is not possible to detect this protein in chondrocytes cultivated in normoxic environment. Our results presented expression of HIF-1a in normal oxygen tensions, probably due to the fact that chondrocytes were cultivated in suspension. As chondrocytes were obtained from advanced osteoarthritic knees and in such conditions the cells can be more resistant to the action of cytokines, this could explain why IL-1, TNF-a and antiinflamatory did not result in modification of HIF-1a / Mestrado / Clinica Medica / Mestre em Clinica Medica

A periodontite é um processo inflamatório crônico de origem bacteriana mediado por citocinas, em especial, interleucina-1 (IL1) e fator de necrose tumoral (TNF&#945;). Polimorfismos genéticos de IL1 e TNFA têm sido associados com a variação de expressão dessas proteínas, o que poderia justificar as diferenças interindividuais de manifestação da doença. O objetivo do presente estudo foi investigar possíveis associações entre os genes IL1B, IL1RN e TNFA e a suscetibilidade à periodontite agressiva e à periodontite crônica severa. Foram selecionados 145 pacientes do Estado do Rio de Janeiro, 43 com periodontite agressiva (PAgr) (33,1 4,8 anos), 52 com periodontite crônica severa (PCr) (50,6 5,8 anos) e 50 controles (40,1 7,8 anos). Os DNAs genômicos dos integrantes dos grupos PAgr, PCr e controle foram obtidos através da coleta de células epiteliais bucais raspadas da parte interna da bochecha com cotonete. Os SNPs IL1B -511C>T, IL1B +3954C>T e TNFA -1031T>C foram analisados pela técnica de PCR-RFLP, utilizando as enzimas de restrição Ava I Taq I e Bpi I, respectivamente. O polimorfismo de número variável de repetições in tandem (VNTR) no intron 2 do gene IL1RN foi feita pela análise direta dos amplicons. Todos os polimorfismos foram analisados por eletroforese em gel de poliacrilamida 8%. As frequências alélica e genotípica do polimorfismo IL1B +3954C>T no grupo PCr foram significativamente diferentes das observadas no grupo controle (p=0,003 e p=0,041, respectivamente). A freqüência do alelo A2 do polimorfismo IL1RN VNTR intron2 no grupo PAgr foi significativamente maior do que no grupo controle (p=0,035). Não houve associação entre os polimorfismos IL1B -511C>T e TNFA -1031T>C e as periodontites agressiva e crônica. A presença dos alelos 2 nos genótipos combinados de IL1RN VNTR intron2 e IL1B +3954C>T no grupo PCr foi significativamente maior quando comparada ao grupo controle (p=0,045). Entretanto, não se observou associação entre as combinações genotípicas IL1B -511C>T / IL1B +3954C>T e IL1RN VNTR / IL1B -511C>T e a predisposição à doença periodontal. De acordo com os nossos resultados podemos sugerir que, para a população estudada, o polimorfismo IL1B +3954C>T interfere no desenvolvimento da periodontite crônica, enquanto a presença do alelo A2 do polimorfismo IL1RN VNTR intron2 pode ser considerado como indicador de risco para a periodontite agressiva. O presente estudo também nos permite sugerir que a ausência de homozigose dos alelos 1 nos genótipos combinados de IL1RN VNTR intron2 e IL1B +3954C>T pode representar maior suscetibilidade à periodontite crônica severa. / Periodontitis is a chronic inflammatory disease of bacterial origin mediated by cytokines, especially interleukin 1 (IL1) and tumor necrosis factor (TNF&#945;). Genetic polymorphisms of IL1 and TNF&#945; have been associated with expression variation of these proteins, what could justify interindividual differences in the disease forms. The aim of this study was to investigate possible associations between IL1B, IL1RN and TNFA genes and the susceptibility to aggressive periodontitis and severe chronic periodontitis. We selected 145 patients from Rio de Janeiro state, 43 with aggressive periodontitis (PAgr) (33.1 4.8 years old), 52 with severe chronic periodontitis (PCr) (50.6 5.8 years old), and 50 controls (40.1 7.8 years old). Genomic DNAs of patients of PAgr, PCr and control groups were obtained through the collection of oral epithelial cells scraped from the inside cheek with a swab. The SNPs IL1B -511C>(p<0,05) T, IL1B +3954C>T, and TNFA -1031T>C were analyzed by PCR-RFLP technique using the restriction enzymes Ava I, Taq I and Bpi I, respectively. The polymorphism of variable number of tandem repeats (VNTR) in intron2 of the IL1RN gene was done by direct analysis of amplicons. All polymorphisms were analyzed by 8% polyacrylamide gel electrophoresis. Allelic and genotypic frequencies of the IL1B +3954C>T polymorphism in the PCr group were significantly different as compared to those observed in the control group (p=0.003 and p=0.041, respectively). The frequency of A2 allele of IL1RN intron 2 VNTR polymorphism in the PAgr group was significantly higher than in the control group (p=0.035). There was no association between the polymorphisms IL1B -511C>T and TNFA -1031T>C and aggressive and chronic periodontitis. The presence of alleles 2 in combined genotypes of IL1RN intron 2VNTR and IL1B +3954 C>T in the PCr group was significantly higher as compared to the control group (p=0.045). However no associations between the genotypic combinations IL1B -511C>T IL1B +3954C>T and IL1RN VNTR / IL1B -511C>T and predisposition to periodontal disease were observed. According to our results one can suggest that for the studied population the IL1B +3954C>T polymorphism interferes in the development of chronic periodontitis, whereas the presence of the A2 allele of IL1RN intron 2 VNTR polymorphism may be considered as an indicator of risk for aggressive periodontitis. The present study also allows us to suggest that the absence of homozygous for alleles 1 in the combined genotypes of IL1RN intron 2 VNTR and IL1B +3954C>T may increase the susceptibility to severe chronic periodontitis.