Thesis (Ed. D.)--West Virginia University, 1999. / Title from document title page. Document formatted into pages; contains vi, 70 p. Includes abstract. Includes bibliographical references (p. 65-70).

Thesis (Ph.D.) - University of Queensland, 2003. / Includes bibliography.

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A seqüência de nucleotídeos codificante do peptídeo derivado da hidrólise da canatoxina (jaburetox-2Ec), foi clonada e expressa nos sistema pET101/E. coli BL 21. Neste trabalho, estudamos a estabilidade dos plasmídeos da série pET contendo a seqüência codificante do jaburetox-2Ec no sistema de expressão E. coli BL 21 (Mulinari, 2004), e as condições para aumentar produção do peptídeo recombinante, avaliando a velocidade de transferência de oxigênio, o controle do pH, e a utilização da lactose como indutor em substituição ao IPTG. O cultivo da bactéria recombinante em incubadora orbital contendo 10 g/l de lactose como indutor produziu 1,26 μg de jaburetox-2Ec/mg de proteína total após oito horas de cultivo. A estabilidade do plasmídeo e a expressão do peptídeo recombinante foram estudadas em biorreatores. A expressão do jaburetox-2Ec foi fortemente afetada pelo pH da cultura, com a diminuição de mais de 50 % da concentração desse peptídeo quando ocorre acidificação do meio de cultura. Da mesma forma, o aumento da aeração e agitação tem efeito negativo sobre a produção do peptídeo, diminuindo em sete vezes a produção do jaburetox-2Ec Apesar do aumento da biomassa devido ao cultivo da E. coli recombinante em meio mínimo, contendo como fonte de carbono a glicose, isto não representou aumento da concentração do peptídeo recombinante. Contudo, sob a melhor condição de cultivo em biorreator estudada (pH controlado e menor transferência de oxigênio), obteve-se uma produção de 7,14 μg de jaburetox-2Ec/mg de proteína total, representando em torno de 2 % da proteína total da célula. Em todas as bateladas, após atingir a máxima expressão do peptídeo, essa concentração diminui provavelmente devido à atividade das proteases da célula causando a degradação do peptídeo recombinante. A carga metabólica imposta à célula devido à expressão do jaburetox-2Ec, é uma das possíveis causas da instabilidade do plasmídeo observada em todas as bateladas.

LÓSSIO, Cláudia Figueirêdo. Purificação e caracterização parcial de uma lectina lactose-específica com ação pro-inflamatória de sementes de Dioclea reflexa. 2016. 60 f. Dissertação (Mestrado em Biotecnologia de Recursos Naturais)-Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016. / Submitted by Anderson Silva Pereira (anderson.pereiraaa@gmail.com) on 2017-01-18T21:33:57Z No. of bitstreams: 1 2016_dis_cflóssio.pdf: 981683 bytes, checksum: c1e6a8a162f87ba8b8a4df93a7c4bbf4 (MD5) / Approved for entry into archive by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2017-01-19T11:55:16Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_dis_cflóssio.pdf: 981683 bytes, checksum: c1e6a8a162f87ba8b8a4df93a7c4bbf4 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-19T11:55:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_dis_cflóssio.pdf: 981683 bytes, checksum: c1e6a8a162f87ba8b8a4df93a7c4bbf4 (MD5) Previous issue date: 2016 / Lectins with lactose binding specificity isolated from seeds of phylogenetically close plant species of Diocleinae sub-tribe present different characteristics when compared to the extensively studied mannose/glucose-specific lectins. In this study, a new lactose-specific lectin from Dioclea reflexa seeds (DrfL II) was isolated by a two-step chromatography in Sephadex® G-50 and lactose-Sepharose columns. The SDS-PAGE showed that the pure lectin is composed of a single band, slightly lower than 30 kDa, presenting a different profile from ConA-like mannose/glucose specific lectins. Partial sequence of the protein was obtained by electrospray ionization mass spectrometry covering 30% of the total sequence. DrfL II presented sugar specificity to α-lactose, and high stability at wide range of pH. DrfL II showed no toxicity against Artemia nauplii and induced acute inflammation (paw edema and hipernociception) in mice with the participation of the lectin domain and nitric oxide. Thus, it is important to further determine the complete sequence and tridimensional structure of this new type of lactose-binding lectin in order to be able to compare it with mannose/glucose lectins and their biotechnological applications. / Lectinas específicas a lactose isoladas de sementes de espécies filogeneticamente próximas da sub-tribo Diocleinae apresentam diferentes características das extensivamente estudadas lectinas específicas a glicose-manose. Nesse estudo, uma nova lectina específica a lactose extraída a partir de sementes de Dioclea reflexa (DrfL II) foi isolada por dois passos cromatográficos em colunas de Sephadex G-50 e sepharose-lactose. A SDS-PAGE apresentou a lectina como uma banda única em torno de 29 kDa, resultado que difere do perfil já conhecido de lectinas ConA-like específicas a glicose/manose. A sequencia parcial da lectina foi obtida por espectrometria de massa com fonte ionizadora eletrospray cobrindo cerca de 30% da sequencia total da proteína. DrfL II apresentou especificidade à L-lactose e alta estabilidade a um vasto intervalo de pH. DrfL II mostrou não ser toxica em teste de toxicidade contra Artemia nauplii e induziu inflamação aguda (edema de pata e hipernocicepção) em camundongos com a participação do domínio da lectina e oxido nítrico. Poucas informações, no entanto, foram publicadas a respeito de lectinas lactose específicas de Diocleinae, se fazendo necessário, portanto, que o estudo seja continuado com a determinação completa da estrutura primaria e tridimensional da lectina, visando sua comparação com os dados existentes de lectinas ConA-like e lactose específicas.

A seqüência de nucleotídeos codificante do peptídeo derivado da hidrólise da canatoxina (jaburetox-2Ec), foi clonada e expressa nos sistema pET101/E. coli BL 21. Neste trabalho, estudamos a estabilidade dos plasmídeos da série pET contendo a seqüência codificante do jaburetox-2Ec no sistema de expressão E. coli BL 21 (Mulinari, 2004), e as condições para aumentar produção do peptídeo recombinante, avaliando a velocidade de transferência de oxigênio, o controle do pH, e a utilização da lactose como indutor em substituição ao IPTG. O cultivo da bactéria recombinante em incubadora orbital contendo 10 g/l de lactose como indutor produziu 1,26 μg de jaburetox-2Ec/mg de proteína total após oito horas de cultivo. A estabilidade do plasmídeo e a expressão do peptídeo recombinante foram estudadas em biorreatores. A expressão do jaburetox-2Ec foi fortemente afetada pelo pH da cultura, com a diminuição de mais de 50 % da concentração desse peptídeo quando ocorre acidificação do meio de cultura. Da mesma forma, o aumento da aeração e agitação tem efeito negativo sobre a produção do peptídeo, diminuindo em sete vezes a produção do jaburetox-2Ec Apesar do aumento da biomassa devido ao cultivo da E. coli recombinante em meio mínimo, contendo como fonte de carbono a glicose, isto não representou aumento da concentração do peptídeo recombinante. Contudo, sob a melhor condição de cultivo em biorreator estudada (pH controlado e menor transferência de oxigênio), obteve-se uma produção de 7,14 μg de jaburetox-2Ec/mg de proteína total, representando em torno de 2 % da proteína total da célula. Em todas as bateladas, após atingir a máxima expressão do peptídeo, essa concentração diminui provavelmente devido à atividade das proteases da célula causando a degradação do peptídeo recombinante. A carga metabólica imposta à célula devido à expressão do jaburetox-2Ec, é uma das possíveis causas da instabilidade do plasmídeo observada em todas as bateladas.

A seqüência de nucleotídeos codificante do peptídeo derivado da hidrólise da canatoxina (jaburetox-2Ec), foi clonada e expressa nos sistema pET101/E. coli BL 21. Neste trabalho, estudamos a estabilidade dos plasmídeos da série pET contendo a seqüência codificante do jaburetox-2Ec no sistema de expressão E. coli BL 21 (Mulinari, 2004), e as condições para aumentar produção do peptídeo recombinante, avaliando a velocidade de transferência de oxigênio, o controle do pH, e a utilização da lactose como indutor em substituição ao IPTG. O cultivo da bactéria recombinante em incubadora orbital contendo 10 g/l de lactose como indutor produziu 1,26 μg de jaburetox-2Ec/mg de proteína total após oito horas de cultivo. A estabilidade do plasmídeo e a expressão do peptídeo recombinante foram estudadas em biorreatores. A expressão do jaburetox-2Ec foi fortemente afetada pelo pH da cultura, com a diminuição de mais de 50 % da concentração desse peptídeo quando ocorre acidificação do meio de cultura. Da mesma forma, o aumento da aeração e agitação tem efeito negativo sobre a produção do peptídeo, diminuindo em sete vezes a produção do jaburetox-2Ec Apesar do aumento da biomassa devido ao cultivo da E. coli recombinante em meio mínimo, contendo como fonte de carbono a glicose, isto não representou aumento da concentração do peptídeo recombinante. Contudo, sob a melhor condição de cultivo em biorreator estudada (pH controlado e menor transferência de oxigênio), obteve-se uma produção de 7,14 μg de jaburetox-2Ec/mg de proteína total, representando em torno de 2 % da proteína total da célula. Em todas as bateladas, após atingir a máxima expressão do peptídeo, essa concentração diminui provavelmente devido à atividade das proteases da célula causando a degradação do peptídeo recombinante. A carga metabólica imposta à célula devido à expressão do jaburetox-2Ec, é uma das possíveis causas da instabilidade do plasmídeo observada em todas as bateladas.

Orientador: Mirna Lucia Gigante / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-02T04:51:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pereira_MarinaAlessandraGimenez_M.pdf: 21672596 bytes, checksum: c2a7e6c482e48eafe4f281784ae5f51e (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: Atualmente, especial atenção tem sido dada ao uso de culturas probióticas, por promoverem efeitos benéficos à saúde do hospedeiro, e a produtos contendo baixo teor de lactose visando atender consumidores que apresentam má absorção ou intolerância à lactose, além dos indivíduos imunossuprimidos, como os portadores do vírus HIV. Os objetivos deste trabalho foram avaliar o efeito do teor de lactose do leite e do tipo de cultura no tempo de fermentação, nas características de pós-acidificação e nas características sensoriais do iogurte e, avaliar o efeito do teor de lactose do leite e do tempo de estocagem na manutenção do número de células viáveis das bactérias lácticas durante estocagem. Leite integral foi ultrafiltrado (Fc= 1,25), para obtenção de concentrado (MP1= 4,5% de lactose) e diafiltrado para obtenção de concentrado com teor de lactose reduzido (MP2= 1,7% de lactose). As matérias-primas 1 e 2 foram pasteurizadas (95°C/5minutos), resfriadas (45°C) e divididas em duas porções iguais que foram inoculadas com cultura tradicional (L. bu/garicus e S. thermophi/us),ou com cultura probiótica (S. thermophi/us, L. acidophi/us e B./actis Bb12). Para avaliar o tempo de fermentação, que foi definido como o tempo necessário para que o produto atingisse pH 4,90 :I: 0,05, urna sub-porção de cada matéria-prima, inoculada com cultura tradicional ou cultura probiótica, foi acondicionada em tubos que foram incubados em banho-maria (45°C), de onde amostras foram randomicamente escolhidas a cada 20 minutos para determinação de pH e acidez. A outra sub-porção de cada matéria-prima foi acondicionada em béquer e incubada em estufa a 45°C. Após resfriamento os produtos foram estocados a 4°C e randomicamente escolhidos após 1,7, 14,21,28 e 35 dias de fabricação e avaliados quanto ao pH, acidez, lactose e contagem de bactérias lácticas ¿Observação: O resumo, na íntegra poderá ser visualizado no texto completo da tese digital. / Abstract: Nowadays,special attention has been given to the utilization of probiotic cultures, as Bifidobaceriumsp. and Lactobacil/ussp., because they promete benefic effects to the health of the host and to roducts containing low lactose contentaiming the consumers that present factose malabsorption or lactose intolerance, as well as the immuno suppressed individuals,as the HIV infected people.The objectives of this study were the evaluation of the effect of lactose contentand the type of culture on fermentation time, on post-acidification characteristics and on yogurt sensorial characteristics,and the evaluation of the effect of actose contentand storage time on the maintenance of viable cells of lactic bacteria.Whole milk was ultrafiltrated(Fc = 1.25) to obtain concentrate (MP1= 4.5% of lactosa) and diafiltrated to obtain concentrate with reduced lactose content (MP2= 1.7%of lactosa).The raw materiais1 and 2 were pasteurized(95°C/5 min.), cooled (45°C) and divided into 2 portions inoculated with traditional cultura (Lactobacil/us de/brueckii sbsp. bu/garicus and Streptococcus Thermophi/lus) or probiotic culture (Streptococcus ThermophHus, Lactobacillus acidophi/us and Bifidobacteriumlactis Bb12).To evaluate the fermentationtime, which was defined as the necessary time for the productto reach pH 4.90%0.05, a sub-portionof each raw material,inoculated with either tradicional or probioticcultura,was placed in tubes which were incubated in water bath (45°C) and randomly chosen every 20 minutes and analyzedfor pH and acidity.The other sub-portionof each raw material was placed in beckerand incubated in na ovenat 45°C.After cooling,the products were storedat 4°C and randomly chosen after 1, 7,14,21,28 e 35 days of manufactureand analyzed for pH, acidity, lactose content and counting of lactic bacteria ...Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations. / Mestrado / Mestre em Tecnologia de Alimentos

Orientador: Adriana Seva-Pereira / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-14T01:47:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Sparvoli_AntonioCardoso_D.pdf: 2483442 bytes, checksum: 557646058e7d68cd786d24e96a225f93 (MD5) Previous issue date: 1990 / Resumo: A prevalência da malabsorcão de lactose do adulto na Região Sul do Brasil permanecia desconhecida. Este trabalho objetivou a sua determinação e o estabelecimento das associações desta condição com o consumo de leite, a história de intolerância ao leite e a intolerância à lactose. Para tal setenta indivíduos adultos, sadios, nascidos na Região Sul do Brasil (48 caucasóides e 22 negróides), sem deficiência secundária de lactase, submeteram-se ao teste de sobrecarga com lactose. A distribuição de frequência dos caucasóides de acordo com o aumento máximo da glicemia em relação ao jejum apresentou aspecto trimodal, com uma antimoda no intervalo entre 14 e 17mg% e outra entre 33 e 36mg%. A trimodalidade desta distribuição sugere que a primeira antimoda divide os mal absorvedores dos absorvedores e a segunda separa os absorvedores heterozigotos dos absorvedores homozigotos. Desse modo, a malabsorcão de lactose do adulto <MLA) foi diagnosticada em 37,5%, dos caucasoides e 68,18% dos negróides. Essa condição foi intimamente associada com a intolerância à lactose e não teve associação com o consumo de leite e com a história de intolerância ao leite. As várias implicações diagnósticas e clínicas foram discutidas. A trimodalidade da distribuição de freqüência foi comparada com os dados esperados segundo a lei de Hardy-Weinberg da Genétic a de Populações e os resultados não diferiram significativamente, o que abre novas perspectivas para o estudo dessa característica. A evolução do polimorfismo da atividade da lactase permanece controversa. A análise crítica das hipóteses histórico-cultural e da absorção de cálcio as mais aceitas atualmente, confirmou esta impressão. Foram assinalados diversos pontos falhos e idêntico equivoco original nas duas hipóteses a crença na vantagem seletiva do indivíduo com persistência da atividade da lactase na vida adulta. Foi formulada uma hipótese a partir da concepção oposta da vantagem seletiva das primitivas populações com MLA. A hipótese integradora, como foi denominada, contempla a possível atuação de outras forcas evolutivas complexamente inter-relacionadas: a mutação, a deriva genética, o efeito do fundador, o efeito do "gargalo de garrafa" e a migração família-estruturada. Estas forcas evolutivas permitiram, ao longo de milênios, a instalação de alguns povos com predomínio de absorvedores alterando a prévia ubiqüidade da MLA em nossos ancestrais / Abstract: A lactose loading test was applied to seventy healthy adults, well nourished, from Southern Brazil (48 caucasoids and 22 negroids) with no secondary lactase deficiency. The distribution of the examined individuals according to race and to maximum blood glucose rise after the lactose loading test showed an antimode at the interval bet ween 14 and 17 mg% and another antimode between 33 and 36 mg%. It seems, therefore, that a maximum blood glucose rise of less than 17 mg% after the lactose loading test should indicate lactose malabsorption. On the basis of this criterion, adult type lactose malabsorption was manifested by 18 caucasoids (37,5%) and 15 negroids (6B,l8Ji). It was not demonstrated significant association among adult type lactase malabsorption and milk consumption or history of milk intolerance. However, lactose malabsorption was associated with lactose intolerance. Moreover, it seems attractive to suppose that a maximum blood glucose rise between 17 and 36 mg% would indicate heterozygous lactose absorbers, while a maximum blood glucose rise of 36 mg% or more would indicate homozygous lactose absorbers. There is an indication drawn from population genetics which favors this hypothesis. The variability of adult lactase activity represents a genetic polymorph ism. The mechanism by which this polymorphism evolved from the ubiquity of lactose malabsorption in early human populations is controversial. The two most accepted hypothesis, the culture historical and the calcium absorption, were critically analysed and refuted. I propose an alternative hypothesis which seems better suited to explain the evolution of this polymorphism / Doutorado / Doutor em Medicina