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Resposta inflamatória uterina em bovinos após inseminação artificial com sêmen avaliado por associações de sondas fluorescentes: efeitos sobre a fertilidade / Fertility and uterine inflammatory response in cattle after artificial insemination with semen evaluated by associations of fluorescent probes: effectos on fertility

Thomé, Helder Esteves 05 July 2013 (has links)
Do ponto de vista da produtividade, a fertilidade é um dos parâmetros de maior importância em um rebanho bovino comercial e esta é influenciada por vários fatores, entre eles estão as condições do trato reprodutivo das fêmeas e a qualidade do sêmen utilizado. O influxo de células inflamatórias no local da deposição do sêmen logo após a inseminação artificial (IA) pode ser intensificada na presença de maior número de espermatozoides lesados durante a IA, caracterizando uma endometrite. Este estudo foi conduzido em três experimentos. Com o objetivo de comparar os métodos de colheita de material endometrial por escova ginecológica (EU) e lavado uterino (LU), bem como a interferência destes procedimentos na hemodinâmica uterina, foi proposto o Experimento 01, onde pode-se constatar que ambas as técnicas permitem o recolhimento de amostras em quantidade e qualidade suficiente para contagem, e que a porcentagem de células polimorfonucleares obtidas pela técnica LU foi superior a EU. Maior fluxo sanguíneo das artérias uterinas foi encontrado no momento de 4 horas após a realização de LU, sugerindo que este influencia na resposta vascular inflamatória. Para avaliar o efeito da LU após a IA em Tempo Fixo (IATF) na fertilidade dos animais, executou-se o Experimento 02 e constatou-se que não há diferença no índice de prenhez entre os animais submetidos ou não à LU, demonstrando que a técnica não interfere na taxa de fertilidade. Com o intuito de investigar a interferência da qualidade do sêmen na fertilidade, resposta inflamatória e hemodinâmica uterina, foi proposto o Experimento 03, onde foi possível observar influência da qualidade do sêmen sobre a taxa de prenhez, verificou-se maior porcentagem de vacas prenhes quando inseminadas com sêmen com maiores percentuais de espermatozoides apresentando integridade das membranas plasmática e acrossomal e função mitocondrial (PIAIC). Notou-se ainda a ocorrência de endometrite em 65,3 % dos animais, os quais apresentaram taxa de prenhez inferior aos que não apresentaram inflamação. Pode-se concluir que a qualidade do sêmen e a endometrite interferem na taxa de fertilidade bovina. / When productivity is taking into account, fertility is one of the most important parameters in a commercial herd. It is influenced by several factors, especially by the conditions of the female reproductive tract and the quality of the semen used. The influx of inflammatory cells at the site of semen deposition after artificial insemination (AI) can be intensified by the deposition of a greater number of dead spermatozoa during AI, which characterized endometritis. This study was conducted in three different experiments. In order to compare the methods of collection of endometrial sampling by swab using a gynecological brush (GB) or uterine flushing (UF), as well as the interference of these procedures in uterine hemodynamics, we designed experiment 01. Our results reveal that both techniques allow collecting samples with good quality and sufficient quantity to be counted; moreover, the average percentage of polymorphonuclear cells obtained by UF was greater compared to those obtained by GB. It may be noted that the increased blood flow was observed in samples collected four hours after the UF procedure, suggesting that it may have an influence on the vascular inflammatory response. To evaluate the effect of uterine flushing after AIFT on animal fertility we designed the experiment 02. Our results revealed that there is no statistical difference in pregnancy rates between flushed and non flushed animals, showing that the UF does not interfere with fertility rate. Experiment 03 was designed in order to assess the inflammatory response induced by different qualities of semen and their interference on uterine hemodynamic and fertility. There was an influence of semen quality on pregnancy rates: higher percentage of pregnancy was found in the group of cows inseminated with semen with plasma and acrossome membrane integrity and mitochondrial function (PIAIC). Endometritis was noticed in 65.3% of the cows and these animals presented lower pregnancy rate compared to those that did not show an inflammatory response. We concluded that semen quality and endometritis interferes with fertility rate in bovine species.
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Resposta inflamatória uterina em bovinos após inseminação artificial com sêmen avaliado por associações de sondas fluorescentes: efeitos sobre a fertilidade / Fertility and uterine inflammatory response in cattle after artificial insemination with semen evaluated by associations of fluorescent probes: effectos on fertility

Helder Esteves Thomé 05 July 2013 (has links)
Do ponto de vista da produtividade, a fertilidade é um dos parâmetros de maior importância em um rebanho bovino comercial e esta é influenciada por vários fatores, entre eles estão as condições do trato reprodutivo das fêmeas e a qualidade do sêmen utilizado. O influxo de células inflamatórias no local da deposição do sêmen logo após a inseminação artificial (IA) pode ser intensificada na presença de maior número de espermatozoides lesados durante a IA, caracterizando uma endometrite. Este estudo foi conduzido em três experimentos. Com o objetivo de comparar os métodos de colheita de material endometrial por escova ginecológica (EU) e lavado uterino (LU), bem como a interferência destes procedimentos na hemodinâmica uterina, foi proposto o Experimento 01, onde pode-se constatar que ambas as técnicas permitem o recolhimento de amostras em quantidade e qualidade suficiente para contagem, e que a porcentagem de células polimorfonucleares obtidas pela técnica LU foi superior a EU. Maior fluxo sanguíneo das artérias uterinas foi encontrado no momento de 4 horas após a realização de LU, sugerindo que este influencia na resposta vascular inflamatória. Para avaliar o efeito da LU após a IA em Tempo Fixo (IATF) na fertilidade dos animais, executou-se o Experimento 02 e constatou-se que não há diferença no índice de prenhez entre os animais submetidos ou não à LU, demonstrando que a técnica não interfere na taxa de fertilidade. Com o intuito de investigar a interferência da qualidade do sêmen na fertilidade, resposta inflamatória e hemodinâmica uterina, foi proposto o Experimento 03, onde foi possível observar influência da qualidade do sêmen sobre a taxa de prenhez, verificou-se maior porcentagem de vacas prenhes quando inseminadas com sêmen com maiores percentuais de espermatozoides apresentando integridade das membranas plasmática e acrossomal e função mitocondrial (PIAIC). Notou-se ainda a ocorrência de endometrite em 65,3 % dos animais, os quais apresentaram taxa de prenhez inferior aos que não apresentaram inflamação. Pode-se concluir que a qualidade do sêmen e a endometrite interferem na taxa de fertilidade bovina. / When productivity is taking into account, fertility is one of the most important parameters in a commercial herd. It is influenced by several factors, especially by the conditions of the female reproductive tract and the quality of the semen used. The influx of inflammatory cells at the site of semen deposition after artificial insemination (AI) can be intensified by the deposition of a greater number of dead spermatozoa during AI, which characterized endometritis. This study was conducted in three different experiments. In order to compare the methods of collection of endometrial sampling by swab using a gynecological brush (GB) or uterine flushing (UF), as well as the interference of these procedures in uterine hemodynamics, we designed experiment 01. Our results reveal that both techniques allow collecting samples with good quality and sufficient quantity to be counted; moreover, the average percentage of polymorphonuclear cells obtained by UF was greater compared to those obtained by GB. It may be noted that the increased blood flow was observed in samples collected four hours after the UF procedure, suggesting that it may have an influence on the vascular inflammatory response. To evaluate the effect of uterine flushing after AIFT on animal fertility we designed the experiment 02. Our results revealed that there is no statistical difference in pregnancy rates between flushed and non flushed animals, showing that the UF does not interfere with fertility rate. Experiment 03 was designed in order to assess the inflammatory response induced by different qualities of semen and their interference on uterine hemodynamic and fertility. There was an influence of semen quality on pregnancy rates: higher percentage of pregnancy was found in the group of cows inseminated with semen with plasma and acrossome membrane integrity and mitochondrial function (PIAIC). Endometritis was noticed in 65.3% of the cows and these animals presented lower pregnancy rate compared to those that did not show an inflammatory response. We concluded that semen quality and endometritis interferes with fertility rate in bovine species.
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Proteômica do histotrofo durante o desenvolvimento embrionário inicial na égua / Proteomic profile of histotroph during early embryo development in mares

Bastos, Henrique Boll de Araujo January 2017 (has links)
Existe uma complexa cascata envolvendo proteínas durante o desenvolvimento embrionário inicial e reconhecimento materno, o que é muito importante para a manutenção do concepto. O objetivo deste estudo foi comparar o perfil proteômico do líquido uterino após ovulação em éguas prenhes e cíclicas. No primeiro ciclo, amostras de líquido uterino de 30 éguas cíclicas foram coletadas nos dias 7 (n=10), 10 (n=10) e 13 (n=10), constituíram o grupo Cíclica. No segundo ciclo as mesmas éguas foram cobertas por um garanhão fértil. Nos dias 7, 10 e 13 foram coletadas amostras do líquido intrauterino. Imediatamente após a coleta das amostras, o útero das éguas foi lavado, e aquelas que tiveram o embrião recuperado constituíram o grupo Prenhe. Dos 30 lavados uterinos realizados foram recuperados 6 embriões no dia 7, 6 embriões no dia 10 e 6 embriões no dia 13. Amostras das éguas que não tiveram recuperação embrionária foram descartadas de ambos os grupos. As amostras de líquido uterino foram processadas por eletroforese bidimensional seguida de matrix assisted laser desorption/ionization time-of-flight/time-of-flight (MALDI-TOF/TOF) espectrometria de massa para a identificação de relevantes spots proteicos. De um total de 677 spots detectados, 19 foram identificados, sendo 13 mais abundantes no grupo Prenhe e 6 no grupo Cíclica. Em conclusão éguas prenhes e cíclicas demonstraram diferenças na abundancia de proteínas. Foram identificadas proteínas relacionadas com os eventos essenciais para manutenção embrionária como: transporte de lipídios através da cápsula embrionária, mobilidade uterina, formação de ATP, angiogênese, tolerância imunológica materna, proliferação celular, processos celulares e metabolismo. As mudanças no perfil de proteínas do fluido uterino durante o desenvolvimento inicial em éguas foram relacionadas com a presença embrionária, sugerindo que estas alterações podem ser importantes para o desenvolvimento embrionário e reconhecimento materno da prenhez. / There is a complex cascade involving proteins during early embryo development and maternal recognition, which is very important for maintenance of a concept. The aim of this study was to compare proteomic profile of uterine fluid after ovulation in pregnant and cyclic mares. In the first cycle, samples of uterine fluid of 30 cyclic mares were collected on days 7 (n = 10), 10 (n = 10) and 13 (n = 10) and constituted the Cyclic group. In the second cycle, the same mares were bred to a fertile stallion. At days 7, 10 and 13 intrauterine samples were collected. Immediately after sample collection, the mares uterus were flushed, and those with embryo recovery were assigned to the Pregnant group. Of the 30 mares flushed, embryos were recovered in 6 mares from the 7th day, 6 from the 10th day and 6 from the 13th day. Samples from the mares without embryo recovery were excluded from both groups. The uterine fluid samples were processed by two-dimensional electrophoresis technique followed by matrix assisted laser desorption/ionization time-of-flight/time-of-flight (MALDI-TOF/TOF) mass spectrometry for the identification of relevant protein spots. From a total of 677 detected spots 19 were identified, 13 more abundant in Pregnant group and 6 in Cyclic group. In summary, pregnant and cyclic mares showed proteins with different abundance. Identified proteins were related to the transport of lipids through the embryo capsule, uterine motility, ATP generation, maternal immunological tolerance, cell proliferation, differentiation, metabolism and angiogenesis. Changes in the proteomic profile of uterine fluid during early embryo development in mares were related with the embryonic presence, suggesting that these alterations may be important for embryonic development and maternal recognition of pregnancy.
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Proteômica do histotrofo durante o desenvolvimento embrionário inicial na égua / Proteomic profile of histotroph during early embryo development in mares

Bastos, Henrique Boll de Araujo January 2017 (has links)
Existe uma complexa cascata envolvendo proteínas durante o desenvolvimento embrionário inicial e reconhecimento materno, o que é muito importante para a manutenção do concepto. O objetivo deste estudo foi comparar o perfil proteômico do líquido uterino após ovulação em éguas prenhes e cíclicas. No primeiro ciclo, amostras de líquido uterino de 30 éguas cíclicas foram coletadas nos dias 7 (n=10), 10 (n=10) e 13 (n=10), constituíram o grupo Cíclica. No segundo ciclo as mesmas éguas foram cobertas por um garanhão fértil. Nos dias 7, 10 e 13 foram coletadas amostras do líquido intrauterino. Imediatamente após a coleta das amostras, o útero das éguas foi lavado, e aquelas que tiveram o embrião recuperado constituíram o grupo Prenhe. Dos 30 lavados uterinos realizados foram recuperados 6 embriões no dia 7, 6 embriões no dia 10 e 6 embriões no dia 13. Amostras das éguas que não tiveram recuperação embrionária foram descartadas de ambos os grupos. As amostras de líquido uterino foram processadas por eletroforese bidimensional seguida de matrix assisted laser desorption/ionization time-of-flight/time-of-flight (MALDI-TOF/TOF) espectrometria de massa para a identificação de relevantes spots proteicos. De um total de 677 spots detectados, 19 foram identificados, sendo 13 mais abundantes no grupo Prenhe e 6 no grupo Cíclica. Em conclusão éguas prenhes e cíclicas demonstraram diferenças na abundancia de proteínas. Foram identificadas proteínas relacionadas com os eventos essenciais para manutenção embrionária como: transporte de lipídios através da cápsula embrionária, mobilidade uterina, formação de ATP, angiogênese, tolerância imunológica materna, proliferação celular, processos celulares e metabolismo. As mudanças no perfil de proteínas do fluido uterino durante o desenvolvimento inicial em éguas foram relacionadas com a presença embrionária, sugerindo que estas alterações podem ser importantes para o desenvolvimento embrionário e reconhecimento materno da prenhez. / There is a complex cascade involving proteins during early embryo development and maternal recognition, which is very important for maintenance of a concept. The aim of this study was to compare proteomic profile of uterine fluid after ovulation in pregnant and cyclic mares. In the first cycle, samples of uterine fluid of 30 cyclic mares were collected on days 7 (n = 10), 10 (n = 10) and 13 (n = 10) and constituted the Cyclic group. In the second cycle, the same mares were bred to a fertile stallion. At days 7, 10 and 13 intrauterine samples were collected. Immediately after sample collection, the mares uterus were flushed, and those with embryo recovery were assigned to the Pregnant group. Of the 30 mares flushed, embryos were recovered in 6 mares from the 7th day, 6 from the 10th day and 6 from the 13th day. Samples from the mares without embryo recovery were excluded from both groups. The uterine fluid samples were processed by two-dimensional electrophoresis technique followed by matrix assisted laser desorption/ionization time-of-flight/time-of-flight (MALDI-TOF/TOF) mass spectrometry for the identification of relevant protein spots. From a total of 677 detected spots 19 were identified, 13 more abundant in Pregnant group and 6 in Cyclic group. In summary, pregnant and cyclic mares showed proteins with different abundance. Identified proteins were related to the transport of lipids through the embryo capsule, uterine motility, ATP generation, maternal immunological tolerance, cell proliferation, differentiation, metabolism and angiogenesis. Changes in the proteomic profile of uterine fluid during early embryo development in mares were related with the embryonic presence, suggesting that these alterations may be important for embryonic development and maternal recognition of pregnancy.
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Proteômica do histotrofo durante o desenvolvimento embrionário inicial na égua / Proteomic profile of histotroph during early embryo development in mares

Bastos, Henrique Boll de Araujo January 2017 (has links)
Existe uma complexa cascata envolvendo proteínas durante o desenvolvimento embrionário inicial e reconhecimento materno, o que é muito importante para a manutenção do concepto. O objetivo deste estudo foi comparar o perfil proteômico do líquido uterino após ovulação em éguas prenhes e cíclicas. No primeiro ciclo, amostras de líquido uterino de 30 éguas cíclicas foram coletadas nos dias 7 (n=10), 10 (n=10) e 13 (n=10), constituíram o grupo Cíclica. No segundo ciclo as mesmas éguas foram cobertas por um garanhão fértil. Nos dias 7, 10 e 13 foram coletadas amostras do líquido intrauterino. Imediatamente após a coleta das amostras, o útero das éguas foi lavado, e aquelas que tiveram o embrião recuperado constituíram o grupo Prenhe. Dos 30 lavados uterinos realizados foram recuperados 6 embriões no dia 7, 6 embriões no dia 10 e 6 embriões no dia 13. Amostras das éguas que não tiveram recuperação embrionária foram descartadas de ambos os grupos. As amostras de líquido uterino foram processadas por eletroforese bidimensional seguida de matrix assisted laser desorption/ionization time-of-flight/time-of-flight (MALDI-TOF/TOF) espectrometria de massa para a identificação de relevantes spots proteicos. De um total de 677 spots detectados, 19 foram identificados, sendo 13 mais abundantes no grupo Prenhe e 6 no grupo Cíclica. Em conclusão éguas prenhes e cíclicas demonstraram diferenças na abundancia de proteínas. Foram identificadas proteínas relacionadas com os eventos essenciais para manutenção embrionária como: transporte de lipídios através da cápsula embrionária, mobilidade uterina, formação de ATP, angiogênese, tolerância imunológica materna, proliferação celular, processos celulares e metabolismo. As mudanças no perfil de proteínas do fluido uterino durante o desenvolvimento inicial em éguas foram relacionadas com a presença embrionária, sugerindo que estas alterações podem ser importantes para o desenvolvimento embrionário e reconhecimento materno da prenhez. / There is a complex cascade involving proteins during early embryo development and maternal recognition, which is very important for maintenance of a concept. The aim of this study was to compare proteomic profile of uterine fluid after ovulation in pregnant and cyclic mares. In the first cycle, samples of uterine fluid of 30 cyclic mares were collected on days 7 (n = 10), 10 (n = 10) and 13 (n = 10) and constituted the Cyclic group. In the second cycle, the same mares were bred to a fertile stallion. At days 7, 10 and 13 intrauterine samples were collected. Immediately after sample collection, the mares uterus were flushed, and those with embryo recovery were assigned to the Pregnant group. Of the 30 mares flushed, embryos were recovered in 6 mares from the 7th day, 6 from the 10th day and 6 from the 13th day. Samples from the mares without embryo recovery were excluded from both groups. The uterine fluid samples were processed by two-dimensional electrophoresis technique followed by matrix assisted laser desorption/ionization time-of-flight/time-of-flight (MALDI-TOF/TOF) mass spectrometry for the identification of relevant protein spots. From a total of 677 detected spots 19 were identified, 13 more abundant in Pregnant group and 6 in Cyclic group. In summary, pregnant and cyclic mares showed proteins with different abundance. Identified proteins were related to the transport of lipids through the embryo capsule, uterine motility, ATP generation, maternal immunological tolerance, cell proliferation, differentiation, metabolism and angiogenesis. Changes in the proteomic profile of uterine fluid during early embryo development in mares were related with the embryonic presence, suggesting that these alterations may be important for embryonic development and maternal recognition of pregnancy.

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